KR102501602B1 - 항체 제제 - Google Patents

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크리스틴 오'베리
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조지 에이취. 크로츠
마나시 퓨리
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Abstract

본 발명은 제약 활성의 항원 결합 단백질, 예를 들어 모노클로날 항체의 제약 제제에 관한 것이다. 이러한 제제는 항원 결합 단백질 이외에도, 완충제 및 장성 작용제도 포함한다.

Description

항체 제제 {ANTIBODY FORMULATION}
본 발명은 제약 활성의 항원 결합 단백질, 예를 들어 모노클로날 항체의 제약 제제에 관한 것이다. 이러한 제제는 항원 결합 단백질 이외에도, 완충제 및 장성 작용제도 포함한다.
항체의 제약적 사용은 지난 수년에 걸쳐 증가되어 왔다. 많은 경우에서, 이러한 항체는 정맥내 (IV) 경로를 통하여 주사된다. 불행히도, 정맥내 경로를 통하여 주사될 수 있는 항체의 양은 항체의 물리-화학적인 특성, 특히 적합한 액체 제제 중에서의 그의 용해도 및 안정성, 그리고 주입 유체의 부피에 의해 제한된다. 대안적인 투여 경로는 피하 또는 근육내 주사로서, 환자 순응도 및 투여 용이성 면에서 잠재적인 장점을 제공한다. 이들 주사 경로는 주사될 최종 용액에서의 높은 단백질 농도를 필요로 한다.
따라서, 피하 주사를 위한 항체와 같은 치료 활성 항원 결합 단백질의 고도로 농축된 안정한 제약 제제를 제공하는 것에 대한 요구가 존재한다. 피하 주사의 장점은 그것이 환자에 대한 상당히 짧은 개입하에 개업의가 그것을 수행하는 것을 가능케 한다는 것이다. 또한, 스스로 피하 주사를 수행하도록 환자가 훈련될 수도 있다. 이러한 자가-투여는 유지 투여 시 특히 유용한데, 병원 관리를 필요로 하지 않기 때문이다 (의료 자원 이용 감소). 통상적으로, 피하 경로를 통한 주사는 대략 2 mL로 제한된다. 다수 투여를 필요로 하는 환자의 경우, 수개의 단위 투여 제제가 신체 표면의 다수의 부위에 주사될 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 완충제 및 장성 작용제를 포함하는 항원 결합 단백질에 대한 제약 제제를 제공한다. 보다 특히, 본 발명은 약 150 내지 250 mg/mL 항원 결합 단백질; 약 5.0 내지 약 7.0의 pH를 제공하는 약 1 내지 100 mM의 완충제; 및 약 70 내지 170 mM의 장성 작용제를 제공한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 항-BLyS 항체이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 완충제, 안정화제, 장성 작용제 및 비이온계 계면활성제를 포함하는 항원 결합 단백질에 대한 제약 제제를 제공한다. 더 구체적으로, 본 발명은 항원 결합 단백질, 히스티딘, 아르기닌, NaCl 및 폴리소르베이트 80을 포함하는 제약 제제를 제공한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 항-BLyS 항체이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 질환 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양으로 본 발명에 따른 제제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 항-BLyS 항체를 사용한 치료에 순응하는 질환 또는 상태의 치료 방법을 제공한다. 한 측면에서, 질환 또는 상태는 자가면역 질환 또는 장애이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 제제가 들어 있는 하나 이상의 바이알, 및 환자에게의 상기 제제의 피하 투여를 위한 지침을 포함하는 키트를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 안정한 항-BLyS 항체 제제를 포함하는 주사 장치를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 전신 홍반성 루푸스, 항-중성구 세포질 항체 ("ANCA") 혈관염, 루푸스 신장염, 원발성 쇼그렌 증후군, 만성 면역 혈소판감소증, 중증 근무력증, 증후성 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 신장 이식을 기다리는 환자의 면역 탈감작, 막성 신장병증, 전신 경화증, 류마티스 관절염, 다발성 골수종, 다발성 경화증 및 신부전으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 제제를 제공한다.
도 1은 제제 1의 응집 속도에 대한 단백질 농도의 효과를 나타낸다.
도 2는 2-8℃에서의 5¼개월 후 제제 1 및 5의 혼탁도를 나타낸다.
도 3은 벨리무맙 점도 대 농도의 관계를 나타낸다.
도 4는 다양한 제제에 있어서의 2-8℃에서의 3개월 저장 후 % 응집물의 변화를 나타낸다.
도 5는 다양한 온도 및 제제에서의 3개월 저장 후 % 응집물의 변화를 나타낸다.
도 6은 25℃ 이하에서의 5¼개월 후 응집 속도에 대한 온도의 효과를 나타내며, 아르기닌 제제 (그래프 상의 개방된 사각형)가 제제 1 (채워진 사각형)과 비교하였을 때 응집을 유의하게 둔화시킨다는 것을 나타낸다.
도 7은 5¼개월 저장 후 125 및 200 mg/mL 사이 및 -80℃ 내지 40℃의 제제 1 (채워진 사각형: 06-C) 및 제제 5 (빈 사각형: 06-D)의 응집 속도, 그리고 제제 5 (파선)가 어떻게 일관성 있게 제제 1 (짙은 선)에 비해 더 낮은 응집 속도를 보이는지를 나타낸다.
도 8은 5¼개월 저장 후 125 및 200 mg/mL 사이 및 -80℃ 내지 40℃의 제제 1 (06-C) 및 5 (06-D)의 환원 CGE 분해 속도를 나타낸다.
도 9는 5¼개월 저장 후 125 및 200 mg/mL 사이 및 -80℃ 내지 40℃의 제제 1 (채워진 사각형: 06-C) 및 제제 5 (빈 사각형: 06-D)의 산성 속도를 나타낸다.
도 10은 5¼개월 저장 후 125 및 200 mg/mL 사이 및 -80℃ 내지 40℃의 제제 1 및 5에서의 벨리무맙 중쇄 산화 수준을 나타낸다.
도 11은 5¼개월 저장 후 200 mg/mL에서의 제제 1 벨리무맙의 펩티드 맵을 나타낸다.
도 12는 5¼개월 저장 후 200 mg/mL에서의 제제 5 벨리무맙의 펩티드 맵을 나타낸다.
도 13은 상이한 아르기닌 수준을 가지는 벨리무맙 샘플의 펩티드 맵을 나타낸다.
도 14는 HTF pH-완충제 스크리닝을 나타낸다.
도 15는 2 인자 상호작용 - pH × 완충제 - SEC 단량체를 나타낸다.
도 16은 2 인자 상호작용 - pH × 완충제 - cIEF 주요를 나타낸다.
도 17은 다양한 농도에서의 항-IL13 항체의 점도를 나타낸다.
도 18은 진탕 연구로부터의 항-IL13 T=0 샘플의 점도 (cP) 대 농도 (mg/mL) 결과를 나타낸다.
도 19는 7일 아세테이트 샘플이 겔화되었다는 것 (좌측)을 나타낸다. 숙시네이트 또는 히스티딘 샘플 (중앙 및 우측)에서는 겔이 관찰되지 않았다. 10일 숙시네이트 바이알은 반-겔 상태인 것으로 관찰되었다.
도 20은 3개월 화학적 안정성 샘플의 근-UV 원형 이색성 스펙트럼 비교를 나타낸다.
본 발명이 특정한 방법, 반응물, 화합물, 조성물 또는 생물학적 시스템으로 제한되는 것은 아니며, 당연히 가변적일 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 본원에서 사용되는 용어법은 특정한 실시양태만을 기재하기 위한 것으로, 제한하고자 하는 것이 아니라는 것도 또한 이해되어야 한다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용될 때, 단수 형태는 내용상 분명하게 달리 지정되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "폴리펩티드"라는 언급은 2종 이상 폴리펩티드의 조합을 포함하는 등이다.
양, 시간 기간 등과 같은 측정가능한 값을 언급할 때 본원에서 사용되는 바와 같은 "약"은 특정 값으로부터 ±5%, ±1% 및 ±0.1%를 포함한 ±20% 또는 ±10%의 변이를 포괄하여 의미하는데, 이러한 변이는 개시되는 방법을 수행하는데 적절하기 때문이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술분야 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 가진다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 등가인 어떠한 방법 및 물질도 본 발명의 시험을 위한 실시에 사용될 수 있기는 하지만, 본원에서는 바람직한 물질 및 방법이 기재된다. 본 발명을 기재하고 청구함에 있어서, 하기의 용어법이 사용될 것이다.
한 측면에서, 본 발명은 완충제 및 장성 작용제를 포함하는 항원 결합 단백질에 대한 제약 제제를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 완충제, 안정화제, 장성 작용제 및 비이온계 계면활성제를 포함하는 항원 결합 단백질에 대한 제약 제제를 제공한다. 한 실시양태에서, 제제는 동결건조되거나 분무 건조된다. 특정 실시양태에서, 제제는 동결건조되거나 분무 건조된 다음, 나중에 분산제와 재구성된다. 한 실시양태에서, 분산제는 멸균수 또는 "주사용수" (WFI)이다. 항원 결합 단백질은 투여 전에 바람직한 농도를 생성시키기 위하여 등장성 식염수 또는 다른 부형제를 사용하여 추가로 희석될 수 있다. 한 실시양태에서, 제제는 재구성된 제제이다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 액체 제약 제제이다.
"제약 제제" 또는 "제제"라는 용어는 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이 되는 것을 가능케 하는 형태와 같은 것으로 존재하며, 제제가 투여되게 되는 대상체에 대하여 허용되지 않는 독성의 추가적인 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 제제는 멸균성이다.
"멸균" 제제는 무균성이거나, 또는 살아있는 모든 미생물 및 그의 포자가 없다.
본 발명의 대표적인 실시양태에서, 액체 제제는 바람직한 점도 및 표면 장력 특징과 같은 바람직한 특징을 나타낸다.
"표면 장력"이라는 용어는 기체의 낮은 분자 농도에 비해 높은 액체의 분자 농도에 기인하는, 표면/공기 경계면에 있는 것들에 대하여 표면 아래의 분자에 의해 발휘되는 인력을 지칭한다. 비극성 액체와 같이 낮은 표면 장력 값을 가지는 액체는 물에 비해 더 용이하게 유동한다. 통상적으로, 표면 장력 값은 뉴턴/미터 또는 다인/센티미터로 표현된다.
본원에서 지칭될 때의 "동적 표면 장력"은 표면/표면 경계면에 대한 표면/공기 경계면 및 동적 경계면 장력이다. 수많은 대안적인 동적 표면 장력 측정 방법이 존재하는데, 예를 들어 포획 기포 표면 장력측정법 또는 맥동성 기포 표면 장력측정법이다.
"점도"라는 용어는 특정 온도에서 유체가 나타내는 유동에 대한 내부 저항; 전단 속도에 대한 전단 스트레스의 비를 지칭한다. 1 다인/제곱 센티미터의 힘이 면적이 1 제곱 센티미터이며 1 제곱 센티미터 이격되어 있는 2개의 평행한 액체 표면이 1 cm/초의 속도로 서로를 지나 움직이도록 하는 경우, 액체는 1 포아즈의 점도를 가진다. 1 포아즈는 100 센티포아즈와 동일하다.
한 실시양태에서, 완충제 및 안정화제를 포함하는 제제의 점도는 완충제 및 안정화제 부재하에서의 제제의 점도에 비해 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25% 또는 적어도 약 30% 감소된다. 한 실시양태에서, 완충제 및 안정화제를 포함하는 제제의 점도는 약 50 cP 미만, 약 45 cP 미만, 약 40 cP 미만, 약 35 cP 미만, 약 30 cP 미만, 약 25 cP 미만, 약 20 cP 미만, 약 15 cP 미만 또는 약 10 cP 미만이다.
겉보기 점도를 언급하는 경우, 점도 값은 측정이 이루어진 조건, 예컨대 사용된 온도, 전단 속도 및 전단 스트레스에 따라 달라지는 것으로 이해된다. 겉보기 점도는 적용된 전단 속도에 대한 전단 스트레스의 비로 정의된다. 겉보기 점도를 측정하기 위한 수많은 대안적인 방법이 존재한다. 예를 들어, 점도는 적합한 원추 및 플레이트, 평행 플레이트 또는 기타 유형의 점도측정기 또는 유변물성측정기에 의해 시험될 수 있다.
"겔화"는 중합되는 MAb 또는 필라멘트 간의 구조형태적 중복의 개시는 물론 가교-결합, 그리고 이러한 필라멘트의 다발화에 의해 야기될 가능성이 있는 경직성 네트워크의 형성 과정으로 정의된다. 이와 같은 경직성 네트워크는 용액 탄성 모듈러스 (G')는 물론, 그의 고유 점성 모듈러스 (G")의 증가로도 드러난다.
한 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제제를 이용하는 것을 포함하는, 용액의 겔화 감소 또는 억제 방법에 관한 것이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 치료용 단백질을 포함하는 용액의 겔화 감소 또는 억제 방법에 관한 것으로, 방법은 히스티딘 및 나트륨 클로라이드를 용액에 투여하는 것을 포함한다.
"폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하는데 호환가능하게 사용된다. 폴리펩티드는 자연 (조직-유래) 기원, 원핵 또는 진핵 세포 조제물로부터의 재조합 또는 자연 발현의 것일 수 있거나, 또는 합성 방법을 통하여 화학적으로 제조될 수 있다. 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공적인 화학적 모방체인 아미노산 중합체는 물론, 자연 발생 아미노산 중합체 및 비-자연 발생 아미노산 중합체에도 적용된다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 가지지만 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 지칭한다. 비-자연 잔기에 대해서는 과학 및 특허 문헌에 충분히 기재되어 있는 바; 자연 아미노산 잔기의 모방체 및 지침으로 유용한 몇 가지 대표적인 비-자연 성분이 하기 기재된다. 방향족 아미노산의 모방체는 예를 들어 D- 또는 L-나필알라닌; D- 또는 L-페닐글리신; D- 또는 L-2 티에네일알라닌; D- 또는 L-1, -2,3-, 또는 4-피레네일알라닌; D- 또는 L-3 티에네일알라닌; D- 또는 L-(2-피리디닐)-알라닌; D- 또는 L-(3-피리디닐)-알라닌; D- 또는 L-(2-피라지닐)-알라닌; D- 또는 L-(4-이소프로필)-페닐글리신; D-(트리플루오로메틸)-페닐글리신; D-(트리플루오로메틸)-페닐알라닌; D-p-플루오로-페닐알라닌; D- 또는 L-p-비페닐페닐알라닌; K- 또는 L-p-메톡시-비페닐페닐알라닌; D- 또는 L-2-인돌(알킬)알라닌; 및 D- 또는 L-알킬알라닌으로 대체되는 것에 의해 생성될 수 있는데, 여기서 알킬은 치환 또는 비치환의 메틸, 에틸, 프로필, 헥실, 부틸, 펜틸, 이소프로필, 이소-부틸, sec-이소틸, 이소-펜틸 또는 비-산성 아미노산일 수 있다. 비-자연 아미노산의 방향족 고리에는 예를 들어 티아졸릴, 티오페닐, 피라졸릴, 벤즈이미다졸릴, 나프틸, 퓨라닐, 피롤릴 및 피리딜 방향족 고리가 포함된다.
본원에서 사용될 때의 "펩티드"에는 본원에서 구체적으로 예시되는 펩티드의 보존성 변이인 펩티드가 포함된다. 본원에서 사용될 때의 "보존성 변이"는 또 다른 생물학적으로 유사한 잔기에 의한 아미노산 잔기의 대체를 나타낸다. 보존성 변이의 예에는 이소류신, 발린, 류신, 알라닌, 시스테인, 글리신, 페닐알라닌, 프롤린, 트립토판, 티로신, 노르류신 또는 메티오닌과 같은 일 소수성 잔기의 또 다른 것을 대신한 치환, 또는 일 극성 잔기의 또 다른 것을 대신한 치환, 예컨대 리신을 대신한 아르기닌의 치환, 아스파르트산을 대신한 글루탐산의 치환, 또는 아스파라긴을 대신한 글루타민의 치환 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 서로를 대신하여 치환될 수 있는 중성 친수성 아미노산에는 아스파라긴, 글루타민, 세린 및 트레오닌이 포함된다. "보존성 변이"에는 또한 치환된 폴리펩티드에 대하여 야기되는 항체가 비치환 폴리펩티드와도 면역반응한다는 전제하에, 비치환 모체 아미노산을 대신한 치환된 아미노산의 사용이 포함된다. 이러한 보존성 치환은 본 발명 펩티드 클래스의 정의에 속한다. 펩티드의 생물학적 활성은 통상의 기술자에게 알려져 있는 표준 방법에 의해 결정될 수 있으며, 본원에 기재된다.
단백질과 관련하여 사용될 때의 "재조합"은 이종유래 핵산 또는 단백질의 도입, 또는 고유 핵산 또는 단백질의 변경에 의해 단백질이 변형되어 있다는 것을 나타낸다.
본원에서 사용될 때, "치료용 단백질"은 예를 들어 연구자 또는 임상의가 구하고자 하는 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하기 위하여 포유동물에 투여될 수 있는 임의의 단백질 및/또는 폴리펩티드를 지칭한다. 치료용 단백질은 1종 초과의 생물학적 또는 의학적 반응을 도출할 수도 있다. 또한, "치료적 유효량"이라는 용어는 이러한 양을 투여받지 않은 상응하는 대상체와 비교하였을 때 비제한적으로 질환, 장애 또는 부작용의 치유, 예방 또는 개선, 또는 질환 또는 장애의 진행 속도 감소를 초래하는 임의의 양을 의미한다. 용어는 정상적인 생리학적 기능을 강화하는데 효과적인 양은 물론, 제2 제약 작용제의 치료 효과를 강화하거나 돕는 환자의 생리학적 기능을 야기하는데 효과적인 양도 그의 영역 내에 포함한다.
본원에 관여되는 모든 "아미노산" 잔기는 자연 L-배열구조로 존재한다. 표준 폴리펩티드 명명법을 유지하여, 아미노산 잔기의 약어는 하기 표에 나타낸 바와 같다.
<표 1> 아미노산 약어
Figure 112022111865167-pat00001
본원에서 모든 아미노산 잔기 서열은 그의 좌측에서 우측으로의 방향이 통상적인 아미노-말단에서 카르복시-말단의 방향이 되는 방식으로 표현된다는 것에 유의해야 한다.
또 다른 실시양태에서, 폴리펩티드는 항원 결합 단백질이다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 가용성 수용체, 항체, 항체 단편, 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인, Fab, F(ab')2, Fv, 디술피드 연결 Fv, scFv, 폐쇄된 입체형태의 다중특이성 항체, 디술피드-연결 scFv 또는 이분절체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에서 사용될 때의 "항원 결합 단백질"이라는 용어는 항원에 결합할 수 있는 항체, 항체 단편 및 기타 단백질 구축물을 지칭한다.
Fv, Fc, Fd, Fab 또는 F(ab)2라는 용어는 그들의 표준 의미로 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)] 참조).
"키메라 항체"는 수용자 항체로부터 유래하는 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 결합된 공여자 항체로부터 유래하는 자연-발생 가변 영역 (경쇄 및 중쇄)을 포함하는 유형의 조작된 항체를 지칭한다.
"인간화 항체"는 비-인간 공여자 이뮤노글로불린으로부터 유래하는 CDR을 가지며 분자의 나머지 이뮤노글로불린-유래 부분은 1종 (또는 그 초과)의 인간 이뮤노글로불린(들)으로부터 유래하는 유형의 조작된 항체를 지칭한다. 더하여, 결합 친화성을 보존하도록, 프레임워크 지지 잔기가 변경될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Queen et al., Proc. Natl. Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989)], [Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)] 참조). 적합한 인간 수용자 항체는 통상적인 데이터베이스, 예를 들어, 카바트(KABAT)™ 데이터베이스, 로스 알라모스(Los Alamos) 데이터베이스 및 스위스 프로테인(Swiss Protein) 데이터베이스로부터 공여자 항체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대한 상동성에 의해 선택된 하나일 수 있다. 공여자 항체의 프레임워크 영역에 대한 상동성 (아미노산 기준)을 특징으로 하는 인간 항체는 공여자 CDR의 삽입을 위한 중쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 가변 프레임워크 영역을 제공하는데 적합할 수 있다. 경쇄 불변 또는 가변 프레임워크 영역을 공여할 수 있는 적합한 수용자 항체도 유사한 방식으로 선택될 수 있다. 수용자 항체 중쇄 및 경쇄가 동일한 수용자 항체로부터 기원할 필요는 없다는 것에 유의해야 한다. 선행 기술에 이러한 인간화 항체를 생성시키는 몇 가지 방식이 기재되어 있다--예를 들어 EP-A-0239400 및 EP-A-054951을 참조한다.
"공여자 항체"라는 용어는 공여자 항체의 항원 특이성 및 중화 활성 특징을 가지는 변경된 이뮤노글로불린 코딩 영역 및 생성 발현되는 변경된 항체를 제공하기 위하여 그의 가변 영역, CDR, 또는 이들의 기타 기능성 단편 또는 유사체의 아미노산 서열을 제1 이뮤노글로불린 상대물에 제공하는 항체 (모노클로날 및/또는 재조합)를 지칭한다.
"수용자 항체"라는 용어는 그의 중쇄 및/또는 경쇄 프레임워크 영역, 및/또는 그의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 코딩하는 아미노산 서열 전체 (또는 임의의 일부, 그러나 일부 실시양태에서는 전체)를 제1 이뮤노글로불린 상대물에 제공하는, 공여자 항체에 대하여 이종유래인 항체 (모노클로날 및/또는 재조합)를 지칭한다. 특정 실시양태에서는, 인간 항체가 수용자 항체이다.
"CDR"은 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역인 항체의 상보성 결정 영역 아미노산 서열로 정의된다. 예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)]을 참조한다. 이뮤노글로불린의 가변 부분에는 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR (또는 CDR 영역)이 존재한다. 따라서, 본원에서 사용될 때의 "CDR"은 3개 전체의 중쇄 CDR 또는 3개 전체의 경쇄 CDR (또는 경우에 따라 전체 중쇄 및 전체 경쇄 CDR 둘 다)을 지칭한다. 항체의 구조 및 단백질 접힘은 다른 잔기가 항원 결합 영역의 일부로 간주되며 통상의 기술자에 의해 그렇게 이해될 수 있음을 의미할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable regions; Nature 342, p 877-883]을 참조한다.
본원에서 사용될 때, "도메인"이라는 용어는 단백질의 나머지와 무관한 3차 구조를 가지는 접힌 단백질 구조를 지칭한다. 일반적으로, 도메인은 단백질의 개별적인 기능적 특성을 담당하는데, 많은 경우에서 단백질의 나머지 및/또는 도메인의 기능 상실 없이 첨가되거나, 제거되거나, 또는 다른 단백질로 전달될 수 있다. "항체 단일 가변 도메인"은 항체 가변 도메인의 서열 특징을 포함하는 접힌 폴리펩티드 도메인이다. 따라서, 여기에는 완전한 항체 가변 도메인, 그리고 예를 들어 항체 가변 도메인의 특징이 아닌 서열에 의해 하나 이상의 루프가 대체되어 있는 변형된 가변 도메인, 또는 환원되어 있거나 N- 또는 C-말단 연장체를 포함하는 항체 가변 도메인은 물론, 적어도 전체-길이 도메인의 결합 활성 및 특이성을 유지하는 가변 도메인의 접힌 단편이 포함된다.
"이뮤노글로불린 단일 가변 도메인"이라는 구는 다른 V 영역 또는 도메인과 무관하게 항원 또는 항원결정인자에 특이적으로 결합하는 항체 가변 도메인 (VH, VHH, VL)을 지칭한다. 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인은 다른 상이한 가변 영역 또는 가변 도메인과 체재 (예를 들어, 동종- 또는 이종-다량체)로서 존재할 수 있는데, 이 경우 다른 영역 또는 도메인이 단일 이뮤노글로불린 가변 도메인에 의한 항원 결합에 필요한 것은 아니다 (즉 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인은 추가적인 가변 도메인과 무관하게 항원에 결합함). 본원에서 용어가 사용될 때, "도메인 항체" 또는 "dAb"는 항원에 결합할 수 있는 "이뮤노글로불린 단일 가변 도메인"과 동일하다. 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인은 인간 항체 가변 도메인일 수 있으나, 설치류 (예컨대 WO 00/29004호에 개시되어 있는 바와 같음), 대서양 수염상어 및 낙타류 VHH dAb (나노체)와 같은 다른 종 유래의 단일 항체 가변 도메인도 포함한다. 낙타류 VHH는 자연적으로 경쇄가 없는 중쇄 항체를 생성시키는 낙타, 라마, 알파카, 단봉낙타 및 과나코를 포함한 종으로부터 유래하는 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인 폴리펩티드이다. 이러한 VHH 도메인은 관련 기술분야에 가용한 표준 기술에 따라 인간화될 수 있는데, 이러한 도메인 역시 본 발명에 따른 "도메인 항체"인 것으로 간주된다. 본원에서 사용될 때, "VH"에는 낙타류 VHH 도메인이 포함된다. NARV는 대서양 수염상어를 포함한 연골 어류에서 식별되었던 또 다른 유형의 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인이다. 이와 같은 도메인은 신규 항원 수용체 가변 영역(Novel Antigen Receptor variable region) (통상적으로 V(NAR) 또는 NARV로 약칭됨)으로도 알려져 있다. 추가적인 세부사항에 대해서는 문헌 [Mol. Immunol. 44, 656-665 (2006)] 및 US20050043519A를 참조한다.
"항원결정인자-결합 도메인"이라는 용어는 다른 V 영역 또는 도메인과 무관하게 항원 또는 항원결정인자에 특이적으로 결합하는 도메인을 지칭하는데, 이는 도메인 항체 (dAb), 예를 들어 인간, 낙타류 또는 상어 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인일 수 있다.
본원에서 사용될 때, "항원-결합 부위"라는 용어는 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 상의 부위를 지칭하는데, 이는 단일 도메인, 예를 들어 항원결정인자-결합 도메인일 수 있거나, 또는 표준 항체에서 볼 수 있는 바와 같은 쌍을 이룬 VH/VL 도메인일 수 있다. 본 발명의 일부 측면에서는, 단일-사슬 Fv (ScFv) 도메인이 항원-결합 부위를 제공할 수 있다.
"mAbdAb" 및 "dAbmAb"라는 용어는 본원에서 본 발명의 항원-결합 단백질을 지칭하는데 사용된다. 두 가지 용어는 호환가능하게 사용될 수 있어서, 본원에서 사용될 때에는 동일한 의미를 가지고자 하는 것이다.
본 발명의 제약 제제는 약 150 내지 250 mg/mL 항원 결합 단백질; 약 5.0 내지 약 7.0의 pH를 제공하는 약 1 내지 100 mM의 완충제; 및 약 70 내지 170 mM의 장성 작용제를 제공한다. 대안적으로, 본 발명의 제약 제제는 약 150 내지 250 mg/mL 항원 결합 단백질; 6.0±0.5의 pH를 제공하는 약 1 내지 100 mM의 완충제; 약 1 내지 100 mM의 안정화제; 약 90 내지 150 mM의 장성 작용제; 및 약 0.005 내지 0.015% (w/v)의 비이온계 계면활성제를 제공한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 항-B 림프구 자극인자 (항-BLyS) 단백질 항체이다.
약 150 내지 250 mg/mL 항원 결합 단백질; pH 6.0±0.5의 약 1 내지 100 mM의 히스티딘; 약 70 내지 170 mM의 NaCl을 포함하는 제약 제제가 또한 기재된다. 한 실시양태에서, 제제는 약 0.005 내지 0.03% (w/v)의 비이온계 계면활성제를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 0.01 내지 약 0.1 mM의 금속 킬레이팅제를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 항-IL-13 항체이다.
본 발명의 제약 제제는 액체 형태로 제공될 수 있거나, 또는 동결건조된 형태로 제공될 수 있다.
본 발명에 따른 제약 제제는 완충제를 포함한다. 완충제에는 시트르산, 헤페스(HEPES), 히스티딘, 칼륨 아세테이트, 칼륨 시트레이트, 칼륨 포스페이트 (KH2PO4), 나트륨 아세테이트, 나트륨 비카르보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 포스페이트 (NaH2PO4), 트리스(Tris) 염기 및 트리스-HCl이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 한 실시양태에서, 완충제는 히스티딘이다. 특정 실시양태에서, 히스티딘 농도는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100 mM이다. 한 실시양태에서, 히스티딘 농도는 10±5 mM이다. 한 실시양태에서, 히스티딘 농도는 10±2 mM이다. 한 실시양태에서, 히스티딘 농도는 약 10 mM이다. 한 실시양태에서, 히스티딘 농도는 약 15 mM이다.
본원에서 사용될 때, "약 5.0 내지 약 7.0의 pH를 제공하는 완충제"라는 용어는 그것을 포함하는 용액이 그의 산/염기 짝 성분의 작용에 의해 pH의 변화에 저항하도록 하는 작용제를 지칭한다. 본 발명에 따른 제제에서 사용되는 완충제는 약 5.5 내지 약 6.5 또는 약 5.8 내지 약 6.2 범위의 pH를 가질 수 있다. 한 실시양태에서, pH는 약 6.0이다. 한 실시양태에서, pH는 약 6.250이다. 이와 같은 범위의 pH를 조절하게 되는 완충제의 예에는 아세테이트, 숙시네이트, 글루코네이트, 히스티딘, 시트레이트, 글리실글리신 및 기타 유기 산 완충제가 포함된다. 본 발명에 있어서 가장 적합한 완충제는 예를 들어 L-히스티딘과 같은 히스티딘 완충제이다.
"히스티딘 완충제"는 아미노산 히스티딘을 포함하는 완충제이다. 히스티딘 완충제의 예에는 히스티딘 클로라이드, 히스티딘 아세테이트, 히스티딘 포스페이트, 히스티딘 술페이트가 포함된다. 실시예에서 가장 적합한 것으로 식별된 히스티딘 제제는 0.65 mg/mL L-히스티딘, 1.2 mg/mL L-히스티딘 모노히드로클로라이드로 구성되는 히스티딘 완충제이다.
본 발명에 따른 제약 제제는 장성 작용제를 포함한다. 장성 작용제에는 덱스트로스, 글리세린, 만니톨, 칼륨 클로라이드 및 나트륨 클로라이드가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 한 실시양태에서, 장성 작용제는 나트륨 클로라이드이다. 한 실시양태에서, 나트륨 클로라이드 농도는 약 70 내지 170 mM; 약 90-150 mM; 또는 약 115±10 mM이다. 특정 실시양태에서, 나트륨 클로라이드 농도는 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170 또는 175 mM이다. 한 실시양태에서, 나트륨 클로라이드 농도는 약 115 mM이다. 또 다른 실시양태에서, 나트륨 클로라이드 농도는 150±10 mM이다. 한 실시양태에서, 나트륨 클로라이드 농도는 약 150 mM이다.
"등장성"은 제제가 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 가진다는 것을 의미한다. 등장성 제제는 일반적으로 약 250 내지 350 mOsm의 삼투압을 가지게 된다. 등장성은 증기압 또는 동결점 강하 유형의 삼투압측정기를 사용하여 측정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 제제는 안정화제를 포함한다. 안정화제에는 인간 혈청 알부민 (hsa), 소 혈청 알부민 (bsa), α-카세인, 글로불린, α-락트알부민, LDH, 리소자임, 미오글로빈, 오발부민 및 RNase A가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 안정화제에는 또한 아미노산 및 그의 대사물, 예컨대 글리신, 알라닌 (α-알라닌, β-알라닌), 아르기닌, 베타인, 류신, 리신, 글루탐산, 아스파르트산, 프롤린, 4-히드록시프롤린, 사르코신, γ-아미노부티르산 (GABA), 오핀 (알라노핀, 옥토핀, 스트롬빈) 및 트리메틸아민 N-옥시드 (TMAO)가 포함된다. 한 실시양태에서, 안정화제는 아미노산이다. 한 실시양태에서, 아미노산은 아르기닌이다. 한 실시양태에서, 아르기닌 농도는 약 20 내지 30 mM이다. 한 실시양태에서, 아르기닌 농도는 약 25±2 mM이다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 제제는 비이온계 계면활성제를 포함한다. 비이온계 계면활성제에는 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르 (예컨대 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80), 폴리에틸렌-폴리프로필렌 공중합체, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌-스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 모노라우릴 에테르, 알킬페닐폴리옥시에틸렌 에테르 (트리톤(Triton)-X), 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 (폴록사머(Poloxamer), 플루로닉(Pluronic)), 나트륨 도데실 술페이트 (SDS)가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 한 실시양태에서, 비이온계 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 한 실시양태에서, 폴리소르베이트 80 농도는 약 0.005 내지 0.02% (w/v)이다. 한 실시양태에서, 폴리소르베이트 80 농도는 약 0.01% (w/v)이다. 한 실시양태에서, 폴리소르베이트 80 농도는 약 0.02% (w/v)이다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 제제는 금속 킬레이팅제를 포함한다. 금속 킬레이팅제에는 EDTA 및 EGTA가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 한 실시양태에서, 금속 킬레이팅제는 EDTA이다. 한 실시양태에서, EDTA 농도는 약 0.01 내지 약 0.02 mM이다. 한 실시양태에서, EDTA 농도는 약 0.05 mM이다.
한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 모노클로날 항체 또는 그의 단편이다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체 또는 그의 단편은 마우스, 키메라, 인간화 또는 완전 인간의 것이다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체 또는 그의 단편은 BLyS 또는 IL-13에 결합한다.
한 측면에서, 제제는 항원 결합 단백질, 히스티딘, 아르기닌, NaCl 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 약 pH 6.0에서 약 200 mg/mL 항원 결합 단백질, 약 10 mM 히스티딘, 약 25 mM 아르기닌, 약 115 mM NaCl 및 약 0.01% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 BLyS에 결합한다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 제제는 약 200 mg/mL 항원 결합 단백질; pH 약 6.25에서의 약 15 mM 히스티딘; 약 150 mM NaCl; 약 0.02% (w/v)의 폴리소르베이트 80; 및 약 0.05 mM EDTA를 제공한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 IL-13에 결합한다.
한 측면에서, 본 발명의 제약 제제는 동결 및 해동 시 안정하다. "안정한" 제제는 예정된 저장 온도, 예를 들어 2-8℃에서의 저장 시 그 안의 모든 단백질이 그의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 본질적으로 유지하는 것이다. 제제는 저장 시 그의 물리적 및 화학적 안정성은 물론, 그의 생물학적 활성도 본질적으로 유지하는 것이 바람직하다. 저장 기간은 일반적으로 제제의 예정 저장-수명을 기반으로 하여 선택된다. 또한, 제제는 제제의 동결 (예를 들어, -70℃로) 및 해동 후, 예를 들어 1, 2 또는 3주기의 동결 및 해동 후 안정해야 한다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 관련 기술분야에 가용한데, 예를 들어 문헌 [Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)] 및 [Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)]에 고찰되어 있다. 안정성은 선택된 온도에서 선택된 시간 기간 동안 측정될 수 있다. 안정성은 응집물 형성의 평가 (예를 들어 크기 배제 크로마토그래피 사용, 혼탁도를 측정하는 것에 의해, 및/또는 시각적 검사에 의해); 양이온 교환 크로마토그래피 또는 모세관 구역 전기영동을 사용하여 전하 비균질성을 산정하는 것; 아미노-말단 또는 카르복시-말단 서열 분석; 질량 분광측정 분석; 환원 및 무손상 항체를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩티드 맵 (예를 들어 트립틱 또는 LYS-C) 분석; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능을 평가하는 것 등을 포함하여, 다양한 상이한 방식으로 질적 및/또는 양적으로 평가될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 제약 제제는 피하 또는 근육내 투여에 적합하다.
의문의 아미노산 서열과 대상 아미노산 서열 사이의 "퍼센트 동일성"은 쌍-방식 BLASTP 정렬이 수행된 후 대상 아미노산 서열이 의문의 아미노산 서열과 100%의 의문 적용범위를 가질 때 BLASTP 알고리즘에 의해 계산되는, 백분율로 표현되는 "동일성" 값이다. 의문 아미노산 서열과 대상 아미노산 서열 사이의 이러한 쌍-방식 BLASTP 정렬은 저복잡도 영역의 필터를 가동중지한 채 국립 생물공학 연구 센터(National Center for Biotechnology Institute)의 웹사이트에서 입수가능한 BLASTP 알고리즘의 디폴트 설정을 사용하여 수행된다. 중요한 것은 의문 아미노산 서열이 본원의 하나 이상의 청구항에 식별되어 있는 아미노산 서열에 의해 기재될 수 있다는 것이다.
질의 서열은 대상 서열과 100% 동일할 수 있거나, 또는 대상 서열과 비교하였을 때 그것이 특정 정수 이하의 아미노산 변경을 포함함으로써, % 동일성이 100% 미만이 될 수 있다. 예를 들어, 질의 서열은 대상 서열과 적어도 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일하다. 이러한 변경에는 적어도 하나의 아미노산 결실, 치환 (보존성 및 비-보존성 치환 포함) 또는 삽입이 포함되는데, 여기서 상기 변경은 질의 서열의 아미노- 또는 카르복시-말단 위치, 또는 질의 서열의 개별적인 아미노산 사이 또는 질의 서열 내의 하나 이상의 연속 군 중 어느 하나에 산재하는 말단 위치 사이의 어느 곳에서 이루어질 수 있다.
% 동일성은 CDR(들)을 포함하여 질의 서열의 전체 길이에 걸쳐 결정될 수 있다. 대안적으로, % 동일성은 CDR(들)을 배제할 수 있는데, 예를 들어 CDR(들)은 대성 서열과 100% 동일하고 질의 서열의 나머지 부분에 % 동일성 변이가 존재하면, CDR 서열은 고정/무손상이 된다.
한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 모노클로날 항체 또는 그의 단편이다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체 또는 그의 단편은 마우스, 키메라, 인간화 또는 완전 인간의 것이다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체 또는 그의 단편은 BLyS (서열식별번호(SEQ ID NO): 1) 또는 BLyS의 이종- 또는 동종-삼량체 형태에 결합하는데, 예를 들어 모노클로날 항체 또는 그의 단편은 BLyS의 가용성 형태 (서열식별번호: 10)에 결합한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 2와 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일하며, 서열식별번호: 3과 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일한 아미노산 서열, 또는 각각 서열식별번호: 4와 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일하며, 서열식별번호: 5와 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 2 및 3과 95% 동일한 아미노산 서열, 또는 각각 서열식별번호: 4 및 5와 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 2 및 3과 90% 동일한 아미노산 서열, 또는 각각 서열식별번호: 4 및 5와 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 2 및 3에, 또는 각각 서열식별번호: 4 및 5에 제시되어 있는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 6과 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일하며, 서열식별번호: 7과 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일한 아미노산 서열, 또는 각각 서열식별번호: 8과 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일하며, 서열식별번호: 9와 90% 동일하거나, 91% 동일하거나, 92% 동일하거나, 93% 동일하거나, 94% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98 % 동일하거나, 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 6 및 7과 95% 동일한 아미노산 서열, 또는 각각 서열식별번호: 8 및 9와 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 6 및 7과 90% 동일한 아미노산 서열, 또는 각각 서열식별번호: 8 및 9와 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 각각 서열식별번호: 6 및 7에, 또는 각각 서열식별번호: 8 및 9에 제시되어 있는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 한 실시양태에서, 모노클로날 항체는 서열식별번호: 11, 12, 13, 14, 15 및 16에 제시되어 있는 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-BLyS 항체는 벨리무맙, 타발루맙 및 이들의 혼합물의 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 항-BLyS 항체는 각각 서열식별번호: 6 및 7에 제시되어 있는 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 제제는 200±20 mg/mL의 모노클로날 항체 농도를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 농도는 약 200 mg/mL이다. 한 실시양태에서, 항-BLyS 항체는 코르티코스테로이드와 동시에 또는 순차적으로 공동-투여된다. 한 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 프레드니손, 프레드니솔론, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론 및 덱사메타손으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 프레드니손이다.
한 측면에서, 본 발명은 항-BLyS 항체를 사용한 치료에 순응하는 질환 또는 장애의 치료를 위한 임의의 선행 청구항에 따른 제약 제제를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 질환 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양으로 본 발명에 따른 제제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 항-BLyS 항체를 사용한 치료에 순응하는 질환 또는 상태의 치료 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 전신 홍반성 루푸스, 항-중성구 세포질 항체 ("ANCA") 혈관염, 루푸스 신장염, 원발성 쇼그렌 증후군, 만성 면역 혈소판감소증, 중증 근무력증, 증후성 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 신장 이식을 기다리는 환자의 면역 탈감작, 막성 신장병증, 전신 경화증, 류마티스 관절염, 다발성 골수종, 다발성 경화증 및 신부전으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 질환 또는 상태는 전신 홍반성 루푸스이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 전신 홍반성 루푸스, 항-중성구 세포질 항체 ("ANCA") 혈관염, 루푸스 신장염, 원발성 쇼그렌 증후군, 만성 면역 혈소판감소증, 중증 근무력증, 증후성 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 신장 이식을 기다리는 환자의 면역 탈감작, 막성 신장병증, 전신 경화증, 류마티스 관절염, 다발성 골수종, 다발성 경화증 및 신부전으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 제제를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 전신 홍반성 루푸스의 치료에 사용하기 위한 제제를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 전신 홍반성 루푸스, 항-중성구 세포질 항체 ("ANCA") 혈관염, 루푸스 신장염, 원발성 쇼그렌 증후군, 만성 면역 혈소판감소증, 중증 근무력증, 증후성 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 신장 이식을 기다리는 환자의 면역 탈감작, 막성 신장병증, 전신 경화증, 류마티스 관절염, 다발성 골수종, 다발성 경화증 및 신부전으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환의 치료를 위한 제약의 제조에서의 제제의 용도를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 전신 홍반성 루푸스의 치료를 위한 제약의 제조에서의 제제의 용도를 제공한다.
한 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제제가 들어 있는 하나 이상의 바이알, 및 환자에게의 상기 제제의 피하 투여를 위한 지침을 포함하는 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 키트는 환자에게의 제제의 피하 투여를 위한 주사 장치를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 안정한 항-BLyS 항체 제제를 포함하는 주사 장치에 관한 것이다. 피하 전달을 위하여, 제제는 (비제한적으로) 시린지; 주사 장치 (예를 들어 인젝트-이즈(INJECT-EASE)™ 및 젠젝트(GENJECT)™ 장치); 주입 펌프 (예를 들어 아큐-체크(Accu-Chek)™); 시린지 펜 (예를 들어 젠펜(GENPEN)™); 또는 무바늘 장치 (예를 들어 메드덱터(MEDDECTOR)™ 및 바이오젝터(BIOJECTOR)™)와 같은 적합한 장치를 통하여 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 제약 제제에는 가시적인 (인간 육안 검사) 입자가 본질적으로 없다. 가시-이하 입자 (광 차폐에 의해 측정되었을 때)는 하기의 기준을 충족해야 한다: 바이알당 ≥ 10 μm인 입자의 최대 수 > 6000: 바이알당 ≥ 25 μm인 입자의 최대 수 > 600.
본 발명에 따른 제약 활성 항-BLyS 항체의 제약 제제는 피하 주사로 투여될 수 있어서, 1, 2, 3 또는 4주 시간 간격으로 투여가 수회 반복될 수 있다. 한 실시양태에서, 제약 활성 항-BLyS 항체의 제약 제제는 매주 1회 또는 2주마다 1회 투여된다. 주사 유체의 전체 부피는 대부분의 경우 1 내지 10분, 바람직하게는 2 내지 6분, 가장 바람직하게는 3±1 분의 시간 기간 이내에 투여된다.
질환의 예방 또는 치료를 위한 항체의 적절한 투약량은 상기에서 정의된 바와 같은 치료될 질환의 유형, 항체가 예방 목적으로 투여되는지 또는 치료 목적으로 투여되는지에 관계없이 질환의 중증도 및 경과, 이전의 치료법, 환자의 임상 이력, 및 항체에 대한 그의 반응, 그리고 주치의의 재량에 따라 달라지게 된다. 항체는 적합하게는 한번에, 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 예를 들어 1회 이상의 별도 투여에 의한 것인지 또는 연속 주입에 의한 것인지에 관계없이 약 1 μg/kg 체중 내지 50 mg/kg 체중 (또는 더 구체적으로는 약 0.1 mg/kg 체중 내지 20 mg/kg 체중 사이)의 항체가 환자에게의 투여를 위한 후보 최초 투약량이다. 더 구체적으로, 항체의 투약량은 약 0.05 mg 항체/kg 체중 내지 약 10 mg 항체/kg 체중의 범위에 있게 된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서는, 본 발명의 제약 제제를 포함하며, 그의 사용을 위한 지침을 제공하는 제조 물품이 제공된다. 이와 같은 제조 물품은 용기를 포함한다. 적합한 용기에는 예를 들어 병, 바이알 (예를 들어 다중 또는 이중 챔버 바이알), 시린지 (예컨대 다중 또는 이중 챔버 시린지) 및 시험관이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 용기는 제제를 수용하며, 용기상의, 또는 용기에 결합되어 있는 라벨은 사용 지침을 표시할 수 있다. 제제를 수용하는 용기는 재구성된 제제의 반복 투여 (예를 들어 2 내지 6회 투여)를 가능케 하는 다중-사용 바이알일 수 있다. 제조 물품은 다른 완충제, 희석제, 충전재, 바늘, 시린지, 및 사용 지침을 포함하는 포장 삽입물을 포함하여 시장 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 재료를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따라 제제화되는 항체는 바람직하게는 본질적으로 순수하며, 바람직하게는 본질적으로 균질하다. "본질적으로 순수한" 항체는 조성물의 총 중량을 기준으로 적어도 약 90 중량%, 바람직하게는 적어도 약 95 중량%의 항체를 포함하는 조성물을 의미한다. "본질적으로 균질한" 항체는 조성물의 총 중량을 기준으로 적어도 약 99 중량%의 항체를 포함하는 조성물을 의미한다.
하기의 실시예를 참조하면, 본 발명이 더 완전하게 이해될 것이다. 이는 단순히 예시적인 것으로, 본 발명의 영역을 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다. 사소한 절차의 변화, 예를 들어 시간, 온도, 양, 농도, 규모 등의 사소한 변화가 실험 결과에 영향을 줄 것으로 예상되지는 않는다. 모든 문헌 및 특허 인용은 본원에 참조로 포함된다.
첨부된 도 1-20에 의해 실시예를 추가 예시한다.
실시예
실시예 1: 벨리무맙 제제
용기 클로저
달리 언급되지 않는 한, 모든 연구에서 다이쿄(Daikyo) D21-7S 플루로텍(Flurotec)® 마개 및 뒤집어 따는 알루미늄 밀봉이 구비된 쇼트(Schott) 유형 I 바이알을 사용하였다. 이와 같은 바이알 및 마개 조합은 단계 1 배열구조로 권장된다. >2-8℃로 저장된 장기 안정성 샘플은 스텔미(Stelmi) 4800 바늘 쉴드 및 다이쿄 W4023 플루로텍® 플런저가 구비된 게레샤이머(Gerresheimer) 1.0 mL 긴 29G 얇은 벽 고정식 사전-충전 시린지를 사용하였으며, 질소 충전에 의한 진공으로 설정하였다. <2-8℃의 샘플을 극저온 바이알에 충전하였다.
생성물 취급 절차
모든 실험에 앞서, 0.22 μm 필터를 사용하여 벨리무맙을 멸균 여과하고, 선택된 용기 클로저에 무균으로 충전하였다. 저장 동안에는, 모든 안정성 샘플을 광으로부터 보호하였다.
부형제 선택
스크리닝 연구에서는 가능할 경우에 GMP BDS 및 FDP 제조에 필수인 멀티-컴펜디엄 부형제를 사용하였으며, 장기 안정성 연구에서는 모든 제제에 사용하였다.
표 2는 시험된 제제의 목록을 제공한다.
<표 2>
Figure 112022111865167-pat00002
장기 안정성
제제 1에서의 농도-의존성 응집
예상대로, 응집은 단백질 농도에 따라 증가하였다 (표 3, 도 1). 100 mg/mL와 260 mg/mL 사이에서 응집 속도는 대략 2배가 되었으나, 200 mg/mL 벨리무맙으로 2-8℃에서의 3년 동안의 응집에서는, 260 mg/mL에서도 대략 1%의 증가로만 이어질 수 있었다. 대략 0.1% (표 3의 0개월 행)만큼에 불과하지만, SEC-HPLC에 의해 관찰된 개시 응집량이 단백질 농도가 증가함에 따라 증가한다는 것에 유의한다.
<표 3> % 응집물에 대한 단백질 농도의 효과
Figure 112022111865167-pat00003
장기 제제 후보 스크린
3개월 데이터 평가 후, 하기의 결과를 기반으로 하여 제제 후보를 제제 1 내지 5로 좁힌 다음, 5¼개월 후 최종 제제로서 제제 5를 선택하였다.
외관, pH 및 오스몰랄농도
모든 샘플은 5¼개월까지의 모든 시점에서 유백색이었으며, 연황색이었고, 가시적인 미립자 물질이 없었다. 3종 전체 농도의 8개 전체 제제에서의 마감된 약물 생성물은 최초 시점에 비색법에 의해 시험하였을 때 Y5 색상 표준에 가장 가깝게 일치하였다. 히스티딘/NaCl (본원에서는 제제 1로 지칭됨) 및 히스티딘/NaCl/아르기닌 (본원에서는 제제 5로 지칭됨) 제제의 모든 FDP 샘플은 또한 2-8℃에서의 3 및 5¼개월 저장 후 Y5 표준에 일치하였다. 당 안정화제 (수크로스 및 소르비톨)에 의한 샘플의 혼탁도는 최초 및 3개월 시점에서 29-38 NTU 범위였던 모든 다른 샘플에 비해 상당히 더 낮았다. 혼탁도는 또한 NaCl 함유 샘플에서 단백질 농도가 감소함에 따라 증가하였다. 2-8℃에서 5¼개월 후에는 제제 1 및 5만을 시험하였는데, 제제, 농도 또는 시간에 대하여 반응을 나타내지 않았다 (도 2).
<표 4> 2-8℃에서 3개월 저장 후의 장기 안정성 샘플의 혼탁도
Figure 112022111865167-pat00004
모든 샘플의 pH는 최초 시점에 6.1 내지 6.3의 범위였으며, 제제 1 및 5에서는 5¼개월 후 이동되지 않았다 (표 13에 나타낸 제제 5 데이터). 오스몰랄농도는 최초 시점에만 시험하였는데; 모든 샘플이 299 +/- 17 mOsm/kg이었다.
점도 및 주사능
당 함유 제제 (수크로스, 소르비톨)가 가장 높은 점도를 나타내었으며, 숙시네이트/나트륨 클로라이드 제제가 뒤를 이었다 (표 5). 나머지 염 함유 샘플은 유사하였다. 제제 1 및 5에서는 단백질 농도가 증가함에 따라 점도가 지수적으로 증가하였다 (도 3).
<표 5> T0에서의 장기 안정성 샘플의 점도
Figure 112022111865167-pat00005
10초 이내에 얇은 벽 29G 바늘을 통하여 1 mL를 전달하는데 요구되는 힘으로 측정되는 주사능은 최초 시점에는 유사한 경향을 나타내었다. 5¼개월 후, 제제 1 및 5만을 시험하였는데, 2-8℃에서 시간이 지나면서 관찰된 주사능에 유의성 있는 증가는 존재하지 않았다. 5¼개월 시점에 각 시린지 중 하나에서 20초 동안의 주사능도 시험하였는데, 전달 시간을 배가할 경우 40%까지 전달력이 감소되는 것으로 나타났다. 시험하지는 않았지만, 전달력은 바늘 게이지를 증가시키는 것에 의해 감소될 수도 있다.
<표 6> T0 및 5¼개월에서의 장기 안정성 샘플의 주사능
Figure 112022111865167-pat00006
수동의 구동력을 그것이 필요로 하기 때문에 사전-충전 시린지에 더 가까운 7개의 시중 펜 시린지를 통하여 약물을 투여하는데 요구되는 힘은 200 mg/mL 벨리무맙에서의 힘과 유사하다 (표 7). 서로 다른 부피 및 용기 직경으로 인하여 주사 시간은 가변적이었는데, 비교를 위하여 표 7에 열거하였다. 마지막으로, 영국 통상 산업국에 의해 위임된 노팅햄 대학교의 연구는 앉아 있는 동안 16 내지 90세 사이의 59명의 여성이 엉덩이 높이에서 그의 엄지를 사용하여 53.7 내지 237.7 N의 하향하는 정적인 힘을 적용할 수 있다는 것을 보인 바 있다. 펜 시린지 데이터는 물론 상기 힘 연구 중 어느 것도 사전-충전된 시린지를 사용함에 있어서 완벽한 상관인자는 아니지만, 양쪽 데이터는 200 mg/mL 벨리무맙의 점도 및 주사능이 수동 투여를 금지하지는 않는다는 믿음을 구축하고 있다. 그러나, 29G 얇은 벽 바늘을 통하여 1 mL의 긴 사전-충전 시린지로부터 200 mg/mL 벨리무맙을 전달하는데 요구되는 힘은 수동 주사의 바람직한 한계 또는 그 부근이어서, 더 넓은 바늘이 바람직할 수는 있다.
<표 7> 80 mm/분에서의 시중에서 구입가능한 펜의 주사력
Figure 112022111865167-pat00007
크기 변이형
3개월 SEC-HPLC 데이터
SEC-HPLC로 본 응집은 벨리무맙의 경우 모든 제제에서 두드러진 농도-의존성 경로였다. 퍼센트 단편화 (백 숄더로 관찰됨)는 0.1 내지 0.2% 사이로 가변적이었으나, 시간 경과에 따른 변화가 없었다 (5¼개월 데이터로 확인).
2-8℃에서 3개월 후, 8개 제제로 제제화된 벨리무맙 간에 응집 속도 (도 4)의 눈에 띄는 차이가 관찰되었다. 제제 5 (히스티딘/NaCl/아르기닌)는 특히 200 mg/mL (도 4의 청색)에서는 3개월에 걸쳐 최저 속도를 나타내었다. 이는 200 mg/mL에서 가속되는 경향으로 확인되었다 (도 5). 숙시네이트는 저온에서는 가장 좋지 않은 안정화제였으나, 승온에서는 최고였다. 제제 1 (히스티딘/NaCl)을 포함하여 다른 염 및 당 제제 중 많은 것이 유사한 응집물 백분율 절대값 및 응집 속도를 나타내었다.
5¼개월 SEC-HPLC 데이터
5¼개월에 제제 1 및 5의 벨리무맙을 평가하였다. 3개월에 관찰되었던 경향이 계속되었는데, 아르기닌 함유 제제는 특히 200 mg/mL의 최고 농도에서 더 낮은 응집 속도를 나타내었다. 도 6은 25℃ 이하에서 5¼개월 후의 응집 속도를 나타내는데, 아르기닌 제제 (그래프 상의 개방된 사각형)가 제제 1 (채워진 사각형)과 비교하였을 때 응집을 상당히 둔화시킨다는 것을 나타낸다. 도 7에서의 다양한 온도에서의 응집 속도의 추가적인 분석은 제제 5 (파선)가 어떻게 일관성 있게 제제 1 (짙은 선)에 비해 더 낮은 응집 속도를 나타내는지를 나타낸다. 5¼개월까지 관찰된 2-8℃ 응집 속도가 3년 내내 유지될 경우, FDP는 겨우 대략 1.2% 증가하게 된다.
CGE
제제 1 및 5의 환원 모세관 겔 전기영동은 다양한 온도에서의 5¼개월 저장 후 경향을 나타내지 않았다 (도 8에 나타낸 속도). 따라서, 가교-결합 및 클리핑은 농도 또는 제제 의존성이 아니었다.
전하 비균질성
이온 교환은 히스티딘 완충된 염 제제의 농도는 물론, 그에 대한 아르기닌의 첨가 어느 것도 전하 변이형에 영향을 주지 않는다는 것을 나타내었다 (도 9). 산성 변이형이 시간이 지나면서 승온에서 증가하기는 하지만, 5¼개월 후 변이형의 변화는 적게 관찰되거나, 관찰되지 않았다.
산화
2-8℃에서 3개월 저장 후, 8개 제제 중 어느 것 사이에서 유의한 산화의 변화는 관찰되지 않았다 (데이터는 나타내지 않음). 5¼개월 후, -80℃와 15℃ 데이터를 비교하였을 때, 제제 1과 5 사이, 또는 어느 한쪽 제제의 3종 농도 간에 산화의 차이는 관찰되지 않았다 (도 10). 25℃에서 5¼개월 저장 후에는 모든 샘플에서 대략 1.0%의 추가적인 산화가 관찰되었으며, 40℃에서는 대략 4.5%의 추가적인 산화가 관찰되었다.
펩티드 맵핑
5¼개월 후, 200 mg/mL 제제 1 -80℃ 및 2-8℃ 샘플 또는 참조 표준 간에 차이는 관찰되지 않았다 (도 11). 25℃ 샘플은 가속된 온도에서 예상된 바와 같이 T4 탈아미드화의 약간의 증가를 나타내었다. 유사하게, 제제 5 샘플은 25℃에서만 T4 탈아미드화를 나타내었으나, 수많은 다른 펩티드 피크 (도 12에서 중쇄의 T33, T34 및 T5, 경쇄의 T3)에서 일치하지 않는 피크 높이를 나타내기도 하였다. 이러한 피크 높이가 온도에 따른 경향은 아니었으며, 그에 따라 아르기닌에 의한 분해 방해가 의심되었다.
아르기닌 방해가 가변성의 원인인지를 결정하기 위하여, 0, 25 및 50 mM 아르기닌을 제제 1 샘플에 첨가하였는데, 방법 중 탈염 단계를 통하였다. 다음에, 모든 3종 샘플을 트립신 분해를 포함한 나머지 단계를 통하여 전개하였다. 안정성 샘플에 있어서의 가변성을 나타낸 동일한 펩티드 피크는 아르기닌 농도와 상관되는 반응을 나타내었다 (도 13). 이는 아르기닌이 탈염 단계에 의해 항상 완전히 청소될 수 있는 것은 아님을 표시함으로써, 제제 5로 제제화되는 샘플의 펩티드 맵에서 관찰되는 온도 의존성 변이를 설명한다. 펩티드 맵에 있어서의 다른 변형은 관찰되지 않았기 때문에, 맵의 차이에도 불구하고 제제 1 및 5가 2-8℃에서의 5¼개월 후 관찰가능한 분해가 없었으며, 25℃에서의 5¼개월 후 최소한의 분해만이 있었음을 추측할 수 있다.
효력
벨리무맙은 125 내지 200 mg/mL 사이의 제제 1 또는 제제 5 중 어느 하나에서 2-8℃로 3개월 저장 후, 또는 200 mg/mL의 제제 5에서 5¼개월 후에, 생물학적 활성을 유지하였다 (표 8).
<표 8> 2-8℃에서의 안정성 후 상대적 효력
Figure 112022111865167-pat00008
동결/해동의 평가
-40℃ 및 2-8℃ 사이에서의 5회의 급속 동결/해동 주기에 노출된 샘플은 -40℃ 대조 샘플과 유사한 응집량을 나타냄으로써, 급속 동결/해동이 제제 1 또는 제제 5 중 어느 하나에서 우려가 아님을 표시하였다 (표 9).
<표 9> 급속 동결/해동에 노출된 벨리무맙으로부터의 SEC-HPLC 결과
Figure 112022111865167-pat00009
3회의 저속 동결/해동 주기에 노출된 샘플은 액체 대조에 비해 응집체 농도의 0.2% 증가를 나타내었다 (표 10).
<표 10> 저속 동결/해동에 노출된 벨리무맙으로부터의 SEC-HPLC 결과
Figure 112022111865167-pat00010
DSC
열량측정법을 사용하여 각 제제의 동결점-미만 유리 전이 (Tg')를 평가하고, 동결점-미만 공융이 형성되었는지를 결정하였다. 나트륨 클로라이드 - 물 공융은 대략 -21℃ 미만에서 형성될 수 있는데, 부형제의 공융 결정화는 결정질 표면 상호작용을 도입하는 것 및 단백질을 함유하는 동결 농축물에서의 국소 화학적 환경을 변화시키는 것에 의해 생성물 품질에 영향을 줄 수 있다. Tg' 미만에서의 저장은 이완 시간을 증가시키는 것 및 관련 분해를 감소시키는 것에 의해 안정성을 향상시킬 수 있다.
고농도 벨리무맙의 제제 1 및 5는 동결점-미만 전이와 관련하여 유사한 거동을 나타내었다 (표 11). 제제 1의 경우, Tg'는 -23℃ (최고속 동결) 내지 -33℃ (최저속 동결)의 범위였다. 제제 5의 경우, Tg'는 -22℃ (최고속 동결) 내지 -32℃ (최저속 동결)의 범위였다. 양쪽 제제에 있어서, -23℃에서의 다중 어닐링 단계를 사용한 열적 주기 후에만 공융 흡열이 관찰되었다. 공융은 나트륨 클로라이드-물일 가능성이 가장 컸다.
이러한 결과는 이들 제제의 동결점-미만 열 전이가 샘플의 열적 이력에 민감하다는 것을 표시한다. 이는 단백질/비정질 상에서 Tg'에 영향을 줄 수 있는 높은 용해 고체 함량 및 나트륨 클로라이드의 존재에 기인할 가능성이 있다. 부문 5.2에서의 -80℃ 및 -40℃ 안정성 데이터와 함께, 결과는 제제 5에서는 < -40℃에서의 BDS 저장 그리고 광으로부터의 보호이면, 벨리무맙에 충분하다는 것도 표시한다.
<표 11> 제제 5 및 제제 1에서의 벨리무맙의 DSC 결과
Figure 112022111865167-pat00011
진탕의 평가
250 rpm에서의 48시간 진탕 후, 연구된 폴리소르베이트 농도 범위에 걸쳐 바이알 또는 시린지 중 어느 하나에서 SEC-HPLC 또는 혼탁도에 의한 순도의 유의한 변화는 존재하지 않았다 (표 12). 0.01% 폴리소르베이트 80이 제제 5에서 바이알 및 시린지 둘 다에서 진탕에 대한 보호제로서 효과적이며 강력한 것으로 나타났다.
<표 12> 250 rpm에서의 진탕 후 제제 5에서의 벨리무맙의 SEC-HPLC 및 혼탁도
Figure 112022111865167-pat00012
결론
200 mg/mL에서의 벨리무맙의 피하 투여를 위한 제제는 일차적인 분해 경로 속도를 최소화하는 그의 능력을 기준으로 선택된다 (제제 5; 0.65 mg/mL L-히스티딘, 1.2 mg/mL L-히스티딘 모노히드로클로라이드, 6.7-7.3 mg/mL 나트륨 클로라이드, 5.3 mg/mL L-아르기닌 히드로클로라이드, 0.1 mg/mL 폴리소르베이트 80, pH 6.0; 또는 대안적으로는 10 mM 히스티딘, 115 mM 나트륨 클로라이드, 25 mM L-아르기닌 히드로클로라이드, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 6.0). 응집 속도 (2-8℃에서 ~0.03%/개월)는 벨리무맙 농도에 따라 증가하는 것으로 나타났으나, 25 mM 아르기닌의 사용에 의해 억제되었다. 탈아미드화 속도는 2-8℃에서 대략 0.2%/개월이었다. 200 mg/mL 제제는 1 mL 긴 시린지 및 29G 얇은 벽 또는 더 넓은 바늘을 사용하는 수동 또는 자동시린지 전달을 위한 허용가능한 전달력을 나타낸다. 동결/해동 프로파일 및 -80℃ 및 -40℃에서의 저장은 허용가능한 것으로 나타났으며, 생성물이 진탕 스트레스에 대하여 민감하지도 않았다.
제제 5의 200 mg/mL 벨리무맙 최종 약물 생성물 상에서 (1.0 mL 긴 BD 시린지에 충전된 1.0 mL) 장기 GMP 안정성 연구를 수행하였다. 지금까지, 2-8℃의 예정 저장 온도에서의 42개월 GMP 안정성 데이터가 존재한다 (표 14). 결과는 제제 5가 2-8℃의 예정 저장 온도에서 허용가능한 분해 프로파일이 관찰되는 벨리무맙에 적정한 안정성을 제공한다는 것을 표시하고 있다 (표 14).
<표 13> 200 mg/mL의 제제 5에서의 벨리무맙의 장기 안정성
Figure 112022111865167-pat00013
<표 14> 2-8℃의 예정 저장 온도에서의 제제 5에서의 200 mg/mL 벨리무맙의 GMP 안정성 데이터 (1.0 mL 긴 BD 시린지 중 1.0 mL)
Figure 112022111865167-pat00014
Figure 112022111865167-pat00015
실시예 2: 항-IL13은 고농도-고투여량 mAb임
항-IL13은 인간 인터류킨-13 (IL13)에 대하여 유도되는 글리코실화된 인간화 mAb (IgG1)이다. PK/PD 모델링을 기반으로 하여 피하 전달을 위한 매우 높은 임상 투여량 (10 mg/kg)을 달성하기 위해서는, 약물 물질 및 약물 생성물이 200 mg/mL 농도의 바이알 제공용으로 개발될 필요가 있다. 바이알에서의 훨씬 더 높은 mAb 농도를 달성하는 것의 직접적인 결과로서, 하기와 같이 다양한 항-IL13 제제 문제가 제시되었다: (i) 피하 전달을 통한 높은 임상 투여량에서의 전달용으로 예정되는 고농도 모노클로날 항체의 안정성, 제조성, 분석 및 전달 문제를 뒷받침할 수 있는 고유 제제를 식별하는 것, (ii) 더 높은 농도에서 모노클로날 항체의 겔화로 인하여 발생하는 분석 및 안정성 문제를 방지하는 것, (iii) 특히 1.5 mL 이하 주사 부피에서의 모노클로날 항체의 전달 동안 발생할 수 있는 다양한 관련 문제를 방지하는 것. 제제 개발 작업 동안 밝혀진 직접적인 발견으로서, 이와 같은 모노클로날 항체가 승온의 특정 완충제 시스템에서 비가역적인 겔 유사 매트릭스를 형성하는 경향을 가지며, 그에 따라 유의한 단백질의 안정성 위험을 야기한다는 것이 결정되었다. 점도는 농도에 따라 지수적으로 증가하는데, 여과 과정을 복잡하게 할 수 있다. 더 높은 농도의 모노클로날 항체는 응집에 대한 더 큰 민감성을 가짐으로써, 미립자 형성 및 비가역적인 자가 결합의 위험성이 증가한다. 이에 따라, 높은 임상 투여량을 제공하도록 설계되는 고농도 모노클로날 항체를 뒷받침하기 위한 새로운 제제의 최적 완충제 및 pH를 식별하기 위하여, 고-처리량 제제 (HTF) 개발 연구를 수행하였다. 다른 벤치 탑 연구와 함께, 이로써 승온에서의 겔화 현상을 방지하는 최적의 제제를 식별하였다. 추가적인 제제 개발 연구는 선택되는 완충제 시스템에 포함될 다양한 부형제를 식별하였다. 이들은 물리적 안정성을 평가하기 위한 진탕, 동결-해동 및 승온 연구 후 이어지는 항-IL13 mAb의 화학적 안정성을 평가하기 위한 단기 및 장기 안정성 연구였다. 임상 전달 고려사항이 충족되도록 보장하기 위하여, 다양한 다른 연구도 수행하였다.
실시예 3: HTF pH-완충제 스크리닝: (목표 pH 및 완충제의 식별)
이전에 시험된 50 mg/mL에서의 항-IL13 모노클로날 항체용 아세테이트 기재 제제는 이미 pH가 최적이 아닌 것으로 밝혀졌다. 최적이하 제제 완충제 pH는 단백질상 전하를 변경하여 정전기적 상호작용에 영향을 줌으로써, 더 높은 농도의 항-IL13 모노클로날 항체 용액의 불안정성을 증가시킬 수 있었다. 최적 pH의 식별은 물론 최고 완충제 종의 결정과 함께, 고농도 제제 개발에 착수하였다.
연구는 13 mg/mL의 mAb 농도로 수행하였다. 완충제 스크리닝은 96 웰 플레이트에서의 HTF 과정에 의해 수행하였다. 연구는 광범위한 완충제 유형 및 pH 수준으로 구성되었다. 각 플레이트는 무작위 순서 2 반복의 48종 샘플로 구성되었다. 샘플을 50℃/주변 RH에서 3일 동안 스트레스적용하였다. 시험은 일반적인 외관 (GA), A280 및 A260 nm에서의 농도, pH, 크기 배제 크로마토그래피 (SEC), 모세관 등전 포커싱 (cIEF) 및 동적 광 산란 (DLS)를 포함하였다. 시험된 인자를 표 15에 제시하였다.
<표 15> HTF 완충제 스크린 연구
Figure 112022111865167-pat00016
플레이트의 일반적인 외관 시험 결과는 일부 샘플, 특히 아세테이트, 시트레이트 및 포스페이트 완충제에서 높은 수준의 침전을 나타내었다. 숙시네이트 완충제가 침전을 나타내지 않은 유일한 완충제 종이었다.
각각 cIEF 및 SEC를 통하여, 모든 샘플에 대하여 탈아미드화 및 응집 프로파일을 생성시켰다. 도 14는 cIEF와 SEC 데이터의 중복을 사용한 플롯을 나타낸다. 플롯은 SEC에서 최고 %단량체를 가지는 제제가 또한 cIEF에서 더 낮은 %주요를 가진다는 것을 보여줌으로써, 항-IL13이 더 낮은 pH에서는 응집하며 더 높은 pH에서는 탈아미드화된다는 것을 표시하였다. 완충제 종에 관계없이 pH 4-5.5에 비해 pH가 6-7인 경우 %단량체가 더 높다는 것이 관찰될 수 있었다.
전체적으로, HTF pH-완충제 스크리닝은 하기의 결론으로 이어졌다: (i) 시트레이트 및 아세테이트 완충제는 GA에 의해 결정하였을 때 최고의 흐린 웰 수 (침전의 표시)로 이어졌음, 및 (ii) 포스페이트 완충제는 cIEF 및 SEC 결과를 기준으로 응집 및 탈아미드화의 증가와 함께 침전을 촉진하였음, 및 (iii) 항-IL13이 더 낮은 pH에서는 응집하였으며, 더 높은 pH에서는 탈아미드화되었음.
실시예 4: HTF pH-완충제 스크리닝: (최적 pH의 결정)
총 90종 샘플로 구성되는 3 X 3 계승 (3종 완충제, 3 pH) DOE 설계를 기반으로 하여 두 번째 HTF 연구를 수행하였다. 평가용으로 선택된 완충제에는 5.5 내지 6.5 사이인 최종 pH 범위의 아세테이트, 히스티딘 및 숙시네이트가 포함되었다. 완충제는 25 mM의 고정된 농도가 되도록 선택되었다. 설계는 비교 목적의 대조로 사용되는 스트레스 플레이트상의 아세테이트 제제 6 반복과 함께, 각 제제당 6 반복을 가능케 하였다.
각 플레이트를 50℃/주변 RH에서 3일 동안 스트레스적용하였다. 시험에는 선택된 샘플에서의 일반적인 외관 (GA), A280 및 A260 nm에서의 농도, pH, SEC, cIEF, DLS 및 DSC (시차 주사 열량법)가 포함되었다.
디자인 엑스퍼트(Design Expert)로 알려져 있는 통계 소프트웨어에 의해 연구 결과를 분석하였다. 흥미로운 경향은 동일한 소프트웨어를 사용하여 모든 검정 결과를 분산 분석 (ANOVA) 시험에 적용하였을 때 드러났다. 완충제 종 및 pH가 농도, 보정 농도, DLS, SEC 및 cIEF에 의한 결과에 중요한 인자인 것으로 밝혀졌다.
도 15는 SEC %단량체에 대한 pH와 완충제 종 사이의 상호작용을 나타낸다. 아세테이트 및 히스티딘 완충제 둘 다에 있어서, pH가 증가함에 따라 %단량체가 증가하였다. 도 16은 cIEF에서의 %주요에 대한 pH와 완충제의 상호작용을 나타낸다. pH 및 완충제 모두가 중요한 것으로 밝혀졌다. 이와 같은 플롯에서, 5.5-6.5 범위의 pH는 아세테이트 또는 숙시네이트 중 어느 하나에서는 %주요에 영향을 주지 않는 것으로 나타났으나, 히스티딘에서는 영향을 주었다.
전체적으로, HTF pH-완충제 스크리닝은 6.25의 최종 최적 pH 선택으로 이어졌다.
실시예 5: DSC에 의한 열 안정성 프로파일을 기반으로 하여 최적 열 스트레스 조건의 결정
농도, pH, 염 함량과 같이 잠재적으로 단백질의 겔화에 영향을 줄 수 있는 다양한 인자에는, 이와 같은 현상을 좌우하는 한가지 중요한 인자 - 온도가 존재한다. HTF 및 다른 개발 연구에 의해 시험된 항-IL13용으로 선택된 열 안정성 조건을 DSC에 의해 평가하였다. 일반적으로, 중간 크기의 구형 단백질은 대략 25℃에서 접힘해제되기 시작하는데, 모노클로날 항체의 경우, 그것은 대략 60℃에서이다. 모든 시험된 완충제 (아세테이트, 히스티딘 및 숙시네이트)하에서의 이와 같은 mAb의 접힘해제 개시는 열적으로 안정한 분자임을 표시하는 대략 61℃로, 50℃의 가속 저장 온도가 접힌 항-IL13 모노클로날 항체를 허용하게 된다는 것을 확인해 주었다. 접힘해제 개시와 50℃ 가속 저장 조건 사이에는 10℃를 초과하는 차이가 존재하기 때문에, 스크리닝을 위한 저장 온도로는 50℃를 이용하기로 결정하였다.
표 16은 미가공 스캔으로부터 결정되었을 때의 Tm 값을 열거하고 있다. Tm1 값은 71.3-71.6 C의 범위에 달하며, Tm2 값은 더 크게 83.5-84.1 C 범위에 달한다. 상이한 pH 값에서의 동일한 완충제의 유의한 Tm의 변화는 존재하지 않았다. 모든 조건에 대하여 측정되었을 때의 Tm1 및 Tm2의 변이는 1℃ 미만이어서, 시험된 단백질 용액이 유사한 열역학적 안정성을 가지고 있었다.
<표 16> 미가공 스캔으로부터 결정하였을 때의 Tm 값
Figure 112022111865167-pat00017
실시예 6: 고농도 제제 실현가능성의 평가
> 100 mg/mL 고투여량 단백질-기재 약물의 피하 (SC) 투여에 대한 임상적 필요성은 종종 제조, 분석 시험, 안정성 및 전달에 대한 추가적인 기술적 개발 문제를 야기한다. 고농도 단백질 제제의 통상적인 속성은 단백질의 비가역적 자가-결합에 직접적으로 기인하는 높은 점도이다. 높은 점도는 높은 주사력, 주사 부위에서의 통증의 증가로 인한 추가적인 임상 개발 문제를 야기할 수도 있으며, 약물 약동학 프로파일을 변경시킬 수도 있다. 따라서, 생성물 개발 노력의 중요한 요소로서 낮은 점도를 가지는 제제를 식별하고자 한다. 점도에 대한 효과는 pH의 변화 또는 부형제의 첨가에 의해 완화될 수 있다.
200 mg/mL까지의 mAb 농도 증가의 결과로서 예상되는 지수적인 점도 증가로 인하여, 최초 실현가능성 연구는 고농도 항-IL13 용액의 점도 및 주사능을 조사하는 것으로 수행하였다. 이전에 확인되었던 아세테이트 기재 제제에서 ~150 mg/mL 용액을 ~210 mg/mL로 농축하였다. 점도 측정은 원추 및 플레이트 유변물성측정기를 사용하여 하기의 mAb 농도에서 수행하였다: 50, 150 및 200 mg/mL.
도 17은 상기 언급된 농도에 대하여 플로팅된 다양한 점도 수준을 나타내는데, 농도가 증가함에 따른 점도의 지수적인 증가가 관찰되었다. 207.7 mg/mL에서의 농축 용액의 점도 결과는 28.6 cP이었다.
최대 주사력은 인스트론(Instron) 전기기계 시험 시스템을 사용하여 결정된 3 mm/분으로 설정된 시린지 속도에서의 27 게이지 바늘이 구비된 1 mL 유리 시린지에 207.7 mg/mL 항-IL13을 위치시키는 것에 의해 측정되었다. 표 17은 207.7 mg/mL의 최대 농도에서 점도 및 주사능 둘 다에 대하여 수득된 숫자 결과를 나타낸다.
207.7 mg/mL 농도에서의 점도 (28.6 센티포아즈) 및 30.3 뉴턴의 최대 주사력의 결정은 고농도 항-IL13 제시를 위한 제조 및 투여 실현가능성을 가능케 하고 달성하기 위하여 추가적인 제제 개발 노력이 필요하다는 것을 촉구하였다.
<표 17> 고농도 실현가능성 결정의 요약
Figure 112022111865167-pat00018
실시예 7: 진탕 연구를 통한 물리적 특성의 평가
pH 6.25에서의 히스티딘 및 숙시네이트 완충제를 최적 완충제 시스템으로 식별하였으나, 높은 농도 및 온도의 함수로서의 겔화에 따라 높은 점도에 민감성인 고농도 mAb 용액에 적합한 제제를 식별하기 위해서는 추가적인 제제 개발 연구가 필요하였다.
진탕 연구에 사용된 제제는 HTF 스크리닝 연구로부터 연원하였다. HTF 연구는 우수한 안정성을 제공하는 2종의 완충제 시스템 (pH 6.25에서의 히스티딘 및 숙시네이트)을 식별하였었다. 대조로서, 세 번째 완충제 시스템 (50 mM 아세테이트 pH 5.5)도 포함시켰다. 히스티딘 및 숙시네이트 pH 6.25 완충제 시스템 샘플은 소규모 완충제 교환 및 농축 기술을 사용하여 제조하였다. 다음에, 하기의 부형제를 첨가하였다: 전단 스트레스로부터 단백질을 보호하기 위한 0.02%의 폴리소르베이트 80 (PS80), 및 잠재적 점도 저하제로서의 150 mM 나트륨 클로라이드.
샘플을 1 mL 충전 부피의 3 mL 유리 바이알에 1.2 mL 부피로 충전하고, 광으로부터 보호되는 수평 진탕기에서 2-8℃의 250 rpm으로 72시간 동안 진탕하였다. 다음에, 다양한 분석 기술에 의해 샘플을 시험하였다. 하기 표 18은 전단 스트레스/진탕 연구에 사용된 제제를 열거하고 있다. 50 mg/mL를 사용한 이전의 진탕 연구가 시도된 바 없기 때문에, 더 낮은 농도의 제제를 포함시켰다. PS80과 같은 부형제가 없는 대조 제제도 포함시켰다. 아세테이트 샘플의 경우, NaCl 대조를 포함시켰다.
<표 18> 진탕 연구 설계 및 샘플
Figure 112022111865167-pat00019
NaCl 및 폴리소르베이트 80을 사용하에 제제화된 모든 샘플에서, 일반적인 외관, SEC, DLS 및 MFI에 있어서의 유의한 변화는 관찰되지 않았다. SEC-HPLC 결과로 볼 때, 아세테이트 (대조) 제제에서 고농도 단백질 제제는 안정하지 않았다.
모든 시험된 항-IL13 mAb의 목표 농도는 200 mg/mL이었으나, 점도 측정의 과정 수율 및 고유 가변성의 한계로 인하여, 200 mg/mL에서의 히스티딘 및 숙시네이트에서의 제제의 공칭 농도는 ±10% 범위 이내였다. 진탕 연구에 사용된 샘플의 점도 측정은 완충제 시스템에 관계없이 공칭 농도 200 mg/mL에서의 150 mM 나트륨 클로라이드를 함유하는 제제에서 6배 더 낮은 점도가 달성가능하다는 것을 밝혔다 (도 18). 완충제 단독을 함유하는 제제는 히스티딘에서 나트륨 아세테이트 및 나트륨 숙시네이트에 비해 상당히 더 높은 점도를 나타내었다. 이는 후자 완충제의 나트륨 이온이 점도의 감소에 기여할 수 있다는 것을 암시하는 것으로, 그에 따라 나트륨 클로라이드의 나트륨 이온이 점도 저하 효과의 원인이 될 수 있다는 것도 설명하고 있다. 그러나, 히스티딘이 150 mM 나트륨 클로라이드와 조합되면, 다른 완충제 시스템에서와 동일한 정도까지 점도가 저하된다. 이는 점도를 효과적을 저하시키는 히스티딘 완충제와 NaCl 사이의 상승 효과가 존재한다는 것을 암시할 수도 있다.
이와 같은 연구에는 50 mg/mL인 더 낮은 농도의 제제 1, 2 및 3이 또한 포함되었으나; 제제 간에 차이가 관찰되지 않음으로써, 목표 농도에서 고농도 제제에 대하여 생성된 안정성 데이터 (데이터는 나타내지 않음)의 중요성을 표시해주었다.
샘플의 단백질 농도 및 나트륨 함량에 대한 점도의 의존성을 도 18에 요약하였다. 50 mg/mL (더 낮은 농도) 샘플의 점도 해독치는 모두 2 cp 미만이었다. 150 mM NaCl을 함유하는 공칭 농도 200 mg/mL의 아세테이트 샘플의 점도는 상응하는 히스티딘 및 숙시네이트 샘플에 비해 약 3 cp 더 낮았는데, 주로 저조한 과정 수율로 인하여 200 mg/mL의 공칭 농도보다 더 낮은 것에 기인하였다. 도 18에 나타낸 바와 같이, 농축 샘플 제조 동안의 손실로 인하여, 전체적인 농도는 200 mg/mL 미만이었다.
연구 결과는 150 mM NaCl의 포함이 시험된 완충제 시스템 전체에 걸쳐 점도를 실질적으로 감소시켰음을 분명하게 표시하였다. 히스티딘 완충제와 NaCl 사이의 상승적인 관계에 대한 독특한 인식도 관찰되었다.
유의: 모든 시험된 항-IL13 mAb의 목표 농도는 200 mg/mL이었으나, 점도 측정의 과정 수율 및 고유 가변성의 한계로 인하여, 200 mg/mL에서의 히스티딘 및 숙시네이트에서의 제제의 공칭 농도는 ±10% 범위 이내였음.
실시예 8: 승온에서의 물리적 특성의 평가
적합하게 식별된 승온에서의 열 스트레스에의 노출 시 공칭 농도 200 mg/mL에서의 고농도 항-IL13의 물리적 안정성을 평가하기 위하여, 하기의 연구를 설계하였다.
50℃/60%RH의 승온에서 7 또는 10일 동안 샘플을 인큐베이팅하였다. 분석 시험에는 일반적인 외관 (GA), 점도, A280 nm에 의한 농도, SEC-HPLC, MFI 및 DLS가 포함되었다. 표 19에, 승온 연구에 사용된 샘플 제제를 요약하였다.
<표 19> 승온 연구에 사용된 제제
Figure 112022111865167-pat00020
표 20 및 도 19에 요약되어 있는 바와 같이, 일반적인 외관 결과는 7일 후 제제 1 (아세테이트)의 겔화를 나타내었다. 제제 2 (숙시네이트)는 10일 저장 후 반-겔화를 나타낸 반면, 제제 3 (히스티딘)은 10일 저장 후 샘플의 겔화를 나타내지 않았다. 겔화되지 않은 어떠한 샘플에서도 입는 관찰되지 않았다. 7일 및 10일 숙시네이트 및 히스티딘 샘플을 "우윳빛 무지개색"으로 분류하였다. 우윳빛 무지개색은 더 높은 농도의 육안으로 보이지 않는 입자 및 응집을 표시할 수 있는 투명도의 감소와 일치한다. MFI 결과 (나타내지 않음)는 제제 1 (아세테이트)의 t=0이 다른 제제에 비해 ~50% 더 많은 입자를 가지고 있음을 밝히고 있다.
<표 20> 50℃/60%RH에서 2주로 계획된 승온 연구에서의 GA 결과
Figure 112022111865167-pat00021
연구 결과는 pH 6.25에서의 150 mM NaCl의 히스티딘 완충제와의 조합이 겔화 현상을 방지한다는 것을 분명하게 표시하고 있다. 결과는 또한 완충제 유형이 물리적 안정성에 대하여 유의한 영향을 준다는 것을 표시하고 있다 (히스티딘>숙시네이트>아세테이트). 이러한 결과는 고농도 mAb 제제의 물리적 안정성을 강화하는데 있어서의 히스티딘 완충제와 NaCl 사이에 존재하는 상승적 관계를 암시할 수 있다.
실시예 9: 200 mg/mL 동결-해동 연구
본 연구의 목적은 공칭 농도 200 mg/mL에서의 항-IL13 mAb의 물리적 및 화학적 안정성 프로파일에 대한 2-8℃와 -70℃ 사이 범위의 3회 동결-해동 주기의 영향을 평가하기 위한 것이었다. 동결-해동 연구는 100 또는 150 mM NaCl 중 어느 하나, 0.05 mM의 EDTA, 0.02%의 폴리소르베이트 80을 함유하는 15 mM 히스티딘 완충제 pH 6.25에서의 안정성을 조사하였다. 아세테이트 기재 제제를 pH 5.5에서 대조로서 포함시켰다. 샘플을 3 mL 유리 바이알에 1.2 mL의 충전 부피로 충전한 후, 광으로부터 보호한 채 3회의 2-8℃와 -70℃ 사이 동결-주기에 적용하였다. 표 21은 이와 같은 연구를 위한 샘플을 나타낸다.
<표 21> 동결-해동 연구용으로 시험된 샘플 제제
Figure 112022111865167-pat00022
샘플은 하기의 분석 기술을 사용하여 분석하였다: GA, pH, 점도, A280 nm에 의한 농도, SPR에 의한 효력, SDS-PAGE, SEC-HPLC, cIEF 및 MFI.
동결 해동 (F/T). 모든 제제에서, 일반적인 외관, pH, SPR에 의한 효력, 농도, SEC, SDS-PAGE 또는 점도에 의한 F/T 및 대조 샘플의 결과 사이에 유의한 차이는 존재하지 않았다. 히스티딘 제제의 경우, 최초로부터의 cIEF %주요의 감소는 존재하지 않았다. 표 22는 모든 일반적인 외관, pH, 효력, 농도 및 점도 데이터를 열거하고 있다. 표 23은 모든 SDS-PAGE 데이터를 열거한다. 표 24는 모든 SEC 및 cIEF 데이터를 열거한다.
전체적인 연구 결과는 pH 6.25에서의 150 mM NaCl과 히스티딘 완충제와의 조합이 최고의 제제로서, 동결-해동 스트레스에 적용된 후에도 안정하다는 것을 분명하게 표시하고 있다.
<표 22> GA, pH, 효력, 농도 및 점도에 의한 동결-해동 분석 시험 결과
Figure 112022111865167-pat00023
<표 23> 동결-해동 연구 결과 (SDS-PAGE)
Figure 112022111865167-pat00024
<표 24> 동결-해동 연구 결과 (SEC, cIEF)
Figure 112022111865167-pat00025
실시예 10: 공칭 농도 200 mg/mL에서의 mAb 기재 약물 생성물의 단기 화학적 안정성 연구 및 생물물리학적 특성화
NaCl, PS80 및 EDTA를 함유하는 200 mg/mL mAb 제제의 단기 화학적 안정성을 평가하기 위하여, 개발 안정성 연구를 수행하였다. 단기 화학적 안정성 연구는 100 또는 150 mM NaCl 중 어느 하나, 0.05 mM EDTA, 0.02% 폴리소르베이트 80을 함유하는 15 mM 히스티딘 완충제 pH 6.25에서의 안정성을 조사하였다. 아세테이트 기재 제제를 대조로서 포함시켰다. 샘플을 3 mL 유리 바이알에 1.2 mL의 충전 부피로 충전한 후, 5℃, 25℃ 및 40℃의 저장 조건에 따라 위치시켰다. 하기 표 25는 이와 같은 연구를 위한 샘플을 나타낸다.
<표 25> 단기 화학적 안정성 샘플 및 최초 오스몰랄농도 결과
Figure 112022111865167-pat00026
하기의 분석 기술을 사용하여 샘플을 분석하였다: GA, pH, 점도, A280 nm에 의한 농도, SPR에 의한 효력, SDS-PAGE, SEC-HPLC 및 cIEF. 연구는 총 3개월의 기간 동안이었으며, DSC, DLS, CD 및 MFI를 사용하여 최초 및 최종 시점에서 다양한 생물물리학적 특성화 시험도 수행하였다.
분석 (농도, 효력, SEC, SDS-PAGE, cIEF) 및 생물물리학적 특성화 (DSC, 형광, CD) 시험의 결과는 제제 B (15 mM 히스티딘, pH 6.25, 150 mM NaCl, 0.05 mM EDTA, 0.02% 폴리소르베이트 80 중 200 mg/mL 항-IL13)가 단기 화학적 안정성에 있어서 3종 제제 중 최고라는 것을 표시하였다.
분석 시험 결과 요약 및 논의:
표 26은 모든 분석 기술에 의한 3개월까지의 5℃ 데이터를 요약하고 있으며, 표 27은 3개월까지의 25℃ 및 40℃에서의 스트레스적용 및 가속 데이터를 요약하고 있다.
cIEF에 의해 결정된 바와 같이, 히스티딘 제제의 샘플 (A 및 B)은 5℃ 및 25℃에서 3개월 후 아세테이트 대조 샘플에 비해 더 높은 %주요를 나타내었다. SDS-PAGE에 의해 결정된 순도는 25℃에서 3개월 후 양쪽 히스티딘 제제 (A 및 B)의 샘플에서 아세테이트 대조 샘플에 비해 더 높은 % 중쇄 및 경쇄 함량을 나타내었다. 40℃/75%RH 저장 조건에서는, 1개월 후 3종 전체 제제가 최초에 비해 더 낮은 %H+L 함량을 나타내었으나, 제제 A 및 B가 제제 C를 능가하였다 (90.6 및 91.8 대 88.2%). 모든 1개월 40℃ 샘플에서 유의한 %주요의 감소가 존재하였으나, 아세테이트 제제 (9.9%)에서의 변화에 비해 히스티딘 제제 (8.8 또는 7.5%)에서 감소가 더 작았으며, 제제 B가 최저 % 감소를 나타내었다. 최고 효력 결과는 150 mM NaCl을 함유하는 히스티딘 기재 제제 B에서 25℃/60%RH의 3개월 시점 및 40℃/75%RH의 1개월 시점에 관찰되었다. 최저 효력은 대조, 및 고농도 mAb를 위한 적합한 안정성이 제공되지 않은 이전의 아세테이트 기재 제제 C에서 관찰되었다. 제제 A 및 B (각각 100 및 150 mM NaCl)에서의 더 높은 NaCl 농도로 인하여 예상되었던 바와 같이, 제제 A 및 B 최초 시험의 점도 결과 (18.0 및 16.3 cp)는 제제 C (18.7 cp)에 비해 더 낮았다. 제제 B 점도 결과는 모든 조건 및 시점에 최저였다.
<표 26> 단기 화학적 안정성의 5℃ 데이터
Figure 112022111865167-pat00027
Figure 112022111865167-pat00028
<표 27> 단기 화학적 안정성의 스트레스적용 및 가속 데이터
Figure 112022111865167-pat00029
생물물리학적 특성화 결과 요약 및 논의:
표 28은 최초 DLS 데이터, 및 최초 및 3개월 형광 데이터를 나타낸다. MFI 결과는 3개월 동안 모든 샘플에서 가시적인 입자가 관찰되지 않았음을 나타내고 있다. mAb의 유체역학적 반경을 측정하는 DLS에 있어서, 3종 제제 간에 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 3개월 저장 후, 형광 및 원형 이색성 데이터는 히스티딘 제제의 이차 및 삼차 구조의 교란을 표시하지 않았다. 도 20은 스펙트럼의 CD 비교 플롯을 나타낸다. 제제 C 샘플에서의 더 낮은 신호는 삼차 구조의 변화를 표시할 수 있다. 제제 C에서의 %켄치에서 보이는 차이는 또한 이 제제에서의 삼차 구조의 변화를 표시한다. 최초 및 3개월 샘플의 DSC 데이터는 표 29에 나타내었다. 양쪽 히스티딘/NaCl 제제에서의 더 높은 Tm 및 총 kcal/mol 결과의 경향은 추가적인 염이 아세테이트 제제에 비해 더 큰 열역학적 안정성을 가능케 한다는 것을 암시하고 있다.
<표 28> 단기 화학적 안정성의 DLS 및 형광 데이터
Figure 112022111865167-pat00030
<표 29> 단기 화학적 안정성의 DSC 데이터
Figure 112022111865167-pat00031
실시예 11: 공칭 농도 200 mg/mL에서의 mAb 기재 약물 생성물의 장기 화학적 안정성 연구 및 생물물리학적 특성화
16-개월 시점에 모든 샘플에 대하여 표 26에서 열거된 바와 같은 안정성을 시험하였다. 이와 같은 시점의 결과를 사용하여, His, NaCl, PS80 및 EDTA에서 제제화된 공칭 농도 200 mg/mL에서의 mAb 약물 생성물의 장기 화학적 안정성을 평가하였다. 제한된 시험을 수행하여 장기 안정성을 확인하였다.
하기의 분석 기술을 사용하여 샘플을 분석하였다: GA, pH, 점도, A280 nm에 의한 농도, SDS-PAGE, SEC-HPLC 및 cIEF. 형광, DSC 및 CD를 포함하여, 생물물리학적 특성화 시험도 수행하였다.
표 26은 모든 분석 기술에 의한 16개월 시점에서의 5℃ 데이터를 포함한다.
분석 시험 결과 요약 및 논의: 히스티딘 제제 (A 및 B)의 샘플은 5℃에서 16개월 후 더 높은 %단량체 함량을 나타내었다. 제제 C는 히스티딘 제제 중 어느 하나에 비해 0.9% 더 높았다.
생물물리학적 특성화 결과 요약 및 논의: 전체적으로, 생물물리학적 특성화 결과는 3개월과 16개월 시점 사이에 유사하였다. 형광 및 원형 이색성 데이터는 16개월 저장 후 히스티딘 제제에서 이차 및 삼차 구조의 교란을 표시하지 않았다. 5℃에서의 16개월 제제 A 및 B 샘플의 결과는 유의한 변화를 나타내지 않았다. 양쪽 제제 C 샘플에서 유의한 강도 증가가 존재하였는데, 이는 분자가 접힘해제되어 더 많은 형광 기를 노출한다는 것을 표시한다. 제제 A 및 B의 경우, MFI 결과에 의한 분석을 기준으로, 16개월 시점에 가시적인 입자의 증가는 존재하지 않았다. 16개월 시점에서의 샘플의 DSC 데이터. 양쪽 히스티딘/NaCl 제제에 있어서의 더 높은 Tm 및 총 kcal/몰 결과의 경향은 추가적인 염이 아세테이트 제제에 비해 더 큰 열역학적 안정성을 가능케 한다는 것을 암시하고 있다.
표 28은 16개월 시점의 형광 데이터를 나타낸다. 표 29는 16개월 시점의 DSC 결과를 나타낸다.
분석 (농도, 효력, SEC, SDS-PAGE, cIEF) 및 생물물리학적 특성화 (DSC, 형광, CD) 시험의 결과는 제제 A (15 mM 히스티딘, pH 6.25, 150 mM NaCl, 0.05 mM EDTA, 0.02% 폴리소르베이트 80 중 200 mg/mL 항-IL13)가 장기 화학적 안정성에 있어서 3종의 제제 중 최고라는 것을 표시하고 있다.
Figure 112022111865167-pat00032
Figure 112022111865167-pat00033
SEQUENCE LISTING <110> BLAKE-HASKINS, Angela MARSHALL, Tristan PERKINS, Melissa D. O'BERRY, Kristen CROTTS, George H. PURI, Manasi DUNLEAVY, Donna M. <120> ANTIBODY FORMULATION <130> PU65703 <140> Not Yet Assigned <141> 2015-05-15 <150> 61/994427 <151> 2014-05-16 <150> 62/093734 <151> 2014-12-18 <150> 62/095181 <151> 2014-12-22 <160> 16 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 285 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BLyS <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 1 Met Asp Asp Ser Thr Glu Arg Glu Gln Ser Arg Leu Thr Ser Cys Leu 1 5 10 15 Lys Lys Arg Glu Glu Met Lys Leu Lys Glu Cys Val Ser Ile Leu Pro 20 25 30 Arg Lys Glu Ser Pro Ser Val Arg Ser Ser Lys Asp Gly Lys Leu Leu 35 40 45 Ala Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Cys Leu Thr Val Val 50 55 60 Ser Phe Tyr Gln Val Ala Ala Leu Gln Gly Asp Leu Ala Ser Leu Arg 65 70 75 80 Ala Glu Leu Gln Gly His His Ala Glu Lys Leu Pro Ala Gly Ala Gly 85 90 95 Ala Pro Lys Ala Gly Leu Glu Glu Ala Pro Ala Val Thr Ala Gly Leu 100 105 110 Lys Ile Phe Glu Pro Pro Ala Pro Gly Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn 115 120 125 Ser Arg Asn Lys Arg Ala Val Gln Gly Pro Glu Glu Thr Val Thr Gln 130 135 140 Asp Cys Leu Gln Leu Ile Ala Asp Ser Glu Thr Pro Thr Ile Gln Lys 145 150 155 160 Gly Ser Tyr Thr Phe Val Pro Trp Leu Leu Ser Phe Lys Arg Gly Ser 165 170 175 Ala Leu Glu Glu Lys Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Glu Thr Gly Tyr 180 185 190 Phe Phe Ile Tyr Gly Gln Val Leu Tyr Thr Asp Lys Thr Tyr Ala Met 195 200 205 Gly His Leu Ile Gln Arg Lys Lys Val His Val Phe Gly Asp Glu Leu 210 215 220 Ser Leu Val Thr Leu Phe Arg Cys Ile Gln Asn Met Pro Glu Thr Leu 225 230 235 240 Pro Asn Asn Ser Cys Tyr Ser Ala Gly Ile Ala Lys Leu Glu Glu Gly 245 250 255 Asp Glu Leu Gln Leu Ala Ile Pro Arg Glu Asn Ala Gln Ile Ser Leu 260 265 270 Asp Gly Asp Val Thr Phe Phe Gly Ala Leu Lys Leu Leu 275 280 285 <210> 2 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 2 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asn Asn 20 25 30 Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Ala Lys Tyr Ser Gln Asn Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ala Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Gly Thr Ala Ser 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Asp Leu Leu Leu Phe Pro His His Ala Leu Ser Pro 100 105 110 Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 3 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Val Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu Gly 100 105 <210> 4 <211> 142 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 4 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys 20 25 30 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe 35 40 45 Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro 65 70 75 80 Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln 85 90 95 Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Tyr Tyr 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135 140 <210> 5 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 5 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ser Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 <210> 6 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 6 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asn Asn 20 25 30 Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Ala Lys Tyr Ser Gln Asn Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ala Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Gly Thr Ala Ser 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Asp Leu Leu Leu Phe Pro His His Ala Leu Ser Pro 100 105 110 Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 7 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 7 Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Val Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His 85 90 95 Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 8 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 8 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 Asp His Lys Pro Ser Gln Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 210 215 220 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 9 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 9 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Ser Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 10 <211> 152 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 10 Ala Val Gln Gly Pro Glu Glu Thr Val Thr Gln Asp Cys Leu Gln Leu 1 5 10 15 Ile Ala Asp Ser Glu Thr Pro Thr Ile Gln Lys Gly Ser Tyr Thr Phe 20 25 30 Val Pro Trp Leu Leu Ser Phe Lys Arg Gly Ser Ala Leu Glu Glu Lys 35 40 45 Glu Asn Lys Ile Leu Val Lys Glu Thr Gly Tyr Phe Phe Ile Tyr Gly 50 55 60 Gln Val Leu Tyr Thr Asp Lys Thr Tyr Ala Met Gly His Leu Ile Gln 65 70 75 80 Arg Lys Lys Val His Val Phe Gly Asp Glu Leu Ser Leu Val Thr Leu 85 90 95 Phe Arg Cys Ile Gln Asn Met Pro Glu Thr Leu Pro Asn Asn Ser Cys 100 105 110 Tyr Ser Ala Gly Ile Ala Lys Leu Glu Glu Gly Asp Glu Leu Gln Leu 115 120 125 Ala Ile Pro Arg Glu Asn Ala Gln Ile Ser Leu Asp Gly Asp Val Thr 130 135 140 Phe Phe Gly Ala Leu Lys Leu Leu 145 150 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 11 Gly Gly Thr Phe Asn Asn Asn Ala Ile Asn 1 5 10 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 12 Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Ala Lys Tyr Ser Gln Asn Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 13 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 13 Ser Arg Asp Leu Leu Leu Phe Pro His His Ala Leu Ser Pro 1 5 10 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 14 Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 15 Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino Acid Sequence identified using molecular biology techniques. <400> 16 Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Trp Val 1 5 10

Claims (16)

  1. pH 6.0에서
    a. 200 mg/mL 모노클로날 항체;
    b. 10 mM의 히스티딘 완충제;
    c. 115 mM의 NaCl;
    d. 25 mM의 아르기닌; 및
    e. 0.01% (w/v)의 폴리소르베이트 80
    을 포함하는, 모노클로날 항체에 대한 제약 제제이며,
    상기 모노클로날 항체는 서열식별번호: 6 및 7과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 것인 제약 제제.
  2. 제1항에 있어서,
    pH 6.0에서
    a. 200 mg/mL 모노클로날 항체;
    b. 0.65 mg/mL의 L-히스티딘;
    c. 1.2 mg/mL L-히스티딘 모노히드로클로라이드;
    d. 6.7-7.3 mg/mL의 NaCl;
    e. 5.3 mg/mL의 L-아르기닌 히드로클로라이드; 및
    f. 0.1 mg/mL의 폴리소르베이트 80
    을 포함하는 제약 제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 동결 및 해동 시 안정한 제약 제제.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 피하 또는 근육내 투여용인 제약 제제.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 피하 투여용인 제약 제제.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 액체, 재구성된 형태, 동결건조 또는 분무 건조된 형태인 제약 제제.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 액체 형태인 제약 제제.
  8. 제1항 또는 제2항에 따른 제약 제제를 포함하는 주사 장치.
  9. 제1항 또는 제2항에 따른 제약 제제를 함유하는 하나 이상의 바이알, 및
    환자에게의 상기 제약 제제의 피하 투여를 위한 지침
    을 포함하는 키트.
  10. 제9항에 있어서,
    제약 제제의 피하 투여를 위한 주사 장치
    를 추가로 포함하는 키트.
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항-BLyS 항체를 사용한 치료에 순응하는 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 제약 제제.
  12. 제11항에 있어서, 매주 1회 투여되는 것인 제약 제제.
  13. 제11항에 있어서, 코르티코스테로이드와 동시에 또는 순차적으로 공동-투여되는 것인 제약 제제.
  14. 제11항에 있어서, 전신 홍반성 루푸스, 항-중성구 세포질 항체 ("ANCA") 혈관염, 루푸스 신장염, 원발성 쇼그렌 증후군, 만성 면역 혈소판감소증, 중증 근무력증, 증후성 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 신장 이식을 기다리는 환자의 면역 탈감작, 막성 신장병증, 전신 경화증, 류마티스 관절염, 다발성 골수종, 다발성 경화증 및 신부전으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 제약 제제.
  15. 제11항에 있어서, 전신 홍반성 루푸스의 치료에 사용하기 위한 제약 제제.
  16. 제11항에 있어서, 쇼그렌 증후군의 치료에 사용하기 위한 제약 제제.
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