ES2927990T3 - Formulación de belimumab - Google Patents

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Angela Blake-Haskins
Tristan Marshall
Kristen O'berry
Melissa D Perkins
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Abstract

La presente invención se refiere a formulaciones farmacéuticas de una proteína de unión a antígeno farmacéuticamente activa, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal. Dichas formulaciones comprenden, además de la proteína de unión al antígeno, un agente tamponador y un agente de tonicidad. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Formulación de belimumab
Campo de la invención
La presente invención se refiere a formulaciones farmacéuticas de una proteína de unión a antígeno farmacéuticamente activa, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal. Tales formulaciones comprenden, además de la proteína de unión a antígeno, un agente amortiguador y un agente de tonicidad.
Antecedentes de la invención
El uso farmacéutico de anticuerpos ha au+-mentado en los últimos años. En muchos casos, dichos anticuerpos se inyectan por vía intravenosa (IV). Desafortunadamente, la cantidad de anticuerpo que se puede inyectar por vía intravenosa está limitada por las propiedades fisicoquímicas del anticuerpo, en particular por su solubilidad y estabilidad en una formulación líquida adecuada y por el volumen del líquido de infusión. Las vías de administración alternativas son la inyección subcutánea o intramuscular, que ofrecen posibles ventajas en términos de cumplimiento del paciente y facilidad de administración. Estas vías de inyección requieren una alta concentración de proteínas en la solución final que se va a inyectar.
En consecuencia, existe un deseo de proporcionar formulaciones farmacéuticas estables y altamente concentradas, de proteínas de unión a antígeno terapéuticamente activas tales como anticuerpos para inyección subcutánea. La ventaja de las inyecciones subcutáneas es que permiten al médico especialista realizarlas en una intervención bastante corta con el paciente. Además, el paciente puede capacitarse para realizar la inyección subcutánea por sí mismo. Dicha administración a sí mismo es particularmente útil durante la dosificación de mantenimiento porque no precisa de atención hospitalaria (utilización reducida de recursos médicos). Por lo general, las inyecciones por vía subcutánea se limitan a aproximadamente 2 ml. Para pacientes que requieren múltiples dosis, se pueden inyectar varias formulaciones de dosis unitarias en múltiples sitios de la superficie corporal.
El documento D2 (April ET AL: "product monograph BENLYSTA TM", 16 de abril de 2014 (2014-04-16), XPO55203701) divulga la monografía del producto para Benlysta en polvo liofilizado para suministro intravenoso.
Sumario de la invención
En un aspecto, la presente divulgación proporciona una formulación farmacéutica para una proteína de unión a antígeno que comprende un agente amortiguador y un agente de tonicidad. Más particularmente, la presente divulgación proporciona de aproximadamente 150 a 250 mg/ml de proteína de unión a antígeno; de aproximadamente 1 a 100 mM de un agente amortiguador que proporciona un pH de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 7,0; y de aproximadamente 70 a 170 mM de un agente de tonicidad. En una realización, la proteína de unión a antígeno es un anticuerpo anti-BLyS.
En un aspecto, la presente invención proporciona una formulación farmacéutica para un anticuerpo monoclonal que comprende 200 mg/ml de anticuerpo monoclonal; 10 mM de un agente amortiguador de histidina; 115 mM de NaCl; 25 mM de arginina; y 0,01 % (p/v) de polisorbato 80; a un pH de 6,0; y en donde el anticuerpo monoclonal comprende cadenas pesadas y ligeras que comprenden las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 6 y 7.
La divulgación proporciona una formulación farmacéutica para una proteína de unión a antígeno que comprende un agente amortiguador, un estabilizante, un agente de tonicidad y un tensioactivo no iónico. Más particularmente, la presente divulgación proporciona una formulación farmacéutica que comprende la proteína de unión a antígeno, histidina, arginina, NaCl y polisorbato 80. En una realización, la proteína de unión a antígeno es un anticuerpo anti-BLyS.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar una enfermedad o afección que es susceptible de tratamiento con un anticuerpo anti-BLyS en un sujeto que comprende administrar una formulación según la presente invención en un sujeto en una cantidad eficaz para tratar la enfermedad o afección. En un aspecto, la enfermedad o afección es una enfermedad o trastorno autoinmunitarios.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un kit que comprende uno o más viales que contienen la formulación según la presente invención e instrucciones para la administración subcutánea de la formulación a un paciente.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un dispositivo de inyección que comprende una formulación de anticuerpo anti-BLyS estable descrita en el presente documento.
Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia
En otro aspecto, la presente invención proporciona una formulación según la presente invención para su uso en el tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, vasculitis por anticuerpos contra el citoplasma de neutrófilos (ANCA), nefritis lúpica, síndrome de Sjogren primario, trombocitopenia inmunitaria crónica, miastenia grave, macroglobulinemia de Waldenstrom sintomática, desensibilización inmunitaria de pacientes que esperan un trasplante de riñón, nefropatía membranosa, esclerosis sistémica, artritis reumatoide, mieloma múltiple, esclerosis múltiple e insuficiencia renal.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 muestra el efecto de la concentración de proteína en la tasa de agregación para la formulación 1. La figura 2 muestra la turbidez de las formulaciones 1 y 5 después de 5% meses a 2-8 °C.
La figura 3 muestra la relación entre la viscosidad de belimumab y la concentración.
La figura 4 muestra el cambio en el % de agregado después de 3 meses de almacenamiento a 2-8 °C para varias formulaciones.
La figura 5 muestra el cambio en el % de agregado después de 3 meses de almacenamiento a varias temperaturas y formulaciones.
La figura 6 muestra el efecto de la temperatura en las tasas de agregación después de 5% meses a una temperatura de hasta 25 °C, y muestra que la formulación de arginina (recuadros blancos en el gráfico) amortigua significativamente la agregación en comparación con la formulación 1 (recuadros rellenos).
La figura 7 muestra las tasas de agregación de la formulación 1 (recuadros completos; 06-C) y la formulación 5 (recuadros huecos; 06-D) entre 125 y 200 mg/ml y -80 °C a 40 °C después de 5% meses de almacenamiento y con qué consistencia la formulación 5 (líneas discontinuas) muestra una tasa de agregación inferior que la formulación 1 (líneas continuas).
La figura 8 muestra la reducción de las tasas de degradación de CGE de las formulaciones 1 (06-C) y 5 (06-D) entre 125 y 200 mg/ml y -80 °C a 40 °C después de 5% meses de almacenamiento.
La figura 9 muestra las tasas de acidez de las formulaciones 1 (recuadros completos; 06-C) y 5 (recuadros huecos; 06-D) entre 125 y 200 mg/ml y -80 °C a 40 °C después de 5% meses de almacenamiento.
La figura 10 muestra los niveles de oxidación de la cadena pesada de belimumab en las formulaciones 1 y 5 entre 125 y 200 mg/ml y -80 °C a 40 °C después de 5% meses de almacenamiento.
La figura 11 muestra el mapa de péptidos de belimumab en la formulación 1 a 200 mg/ml después de 5% meses de almacenamiento.
La figura 12 muestra el mapa de péptidos de belimumab en la formulación 5 a 200 mg/ml después de 5% meses de almacenamiento.
La figura 13 muestra el mapa de péptidos de muestras de belimumab con diferentes niveles de arginina.
La figura 14 muestra la selección de pH-amortiguador para HTF.
La figura 15 muestra la interacción de dos factores - pH x amortiguador - monómero por SEC.
La figura 16 muestra la interacción de dos factores - pH x amortiguador - clEF principal.
La figura 17 muestra la viscosidad del anticuerpo anti-IL13 a varias concentraciones.
La figura 18 muestra los resultados de viscosidad (mPa s (cP)) frente a concentración (mg/ml) para muestras anti-IL13 T=0 del estudio de agitación.
La figura 19 muestra que se gelificaron muestras de acetato de 7 días (izquierda). No se observó gel en las muestras de succinato o histidina (centro y derecha). Se observó que el vial de succinato de 10 días estaba en un estado de semigel.
La figura 20 muestra una comparación de espectros de dicroísmo circular de UV cercano para muestras de estabilidad química de 3 meses.
Descripción detallada de la invención
Debe entenderse que la presente divulgación no se limita a métodos, reactivos, compuestos, composiciones, o sistemas biológicos particulares, que pueden, por supuesto, variar. También debe entenderse que la terminología utilizada en el presente documento es únicamente con el fin de describir realizaciones particulares, y no se pretende que sea limitante. Como se usan en la presente memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "una/o", "el" y "la" incluyen las referencias en plural a menos que el contenido indique claramente lo contrario. Por lo tanto, por ejemplo, la referencia a "un polipéptido" incluye una combinación de dos o más células, y similares.
"Aproximadamente", como se usa en el presente documento, cuando se refiere a un valor medible tal como una cantidad, una duración temporal y similares, pretende abarcar variaciones del ± 20 % o ± 10 %, incluyendo ± 5 %, ±1 % y ±0,1 % del valor especificado, ya que dichas variaciones son apropiadas para realizar los métodos divulgados.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que el que entiende habitualmente un experto en la materia a la que pertenece la invención. Aunque pueden utilizarse en la práctica ara las pruebas de la presente invención cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento, los materiales y métodos preferidos se describen en el presente documento. En la descripción y la reivindicación de la presente invención, se utilizará la siguiente abreviatura.
En un aspecto, la presente divulgación proporciona una formulación farmacéutica para una proteína de unión a antígeno que comprende un agente amortiguador y un agente de tonicidad. También se divulga una formulación farmacéutica para una proteína de unión a antígeno que comprende un agente amortiguador, un estabilizante, un agente de tonicidad y un tensioactivo no iónico. En una realización, la formulación se liofiliza o se seca por pulverización. En determinadas realizaciones, la formulación se liofiliza o se seca por pulverización y luego se reconstituye posteriormente con un agente de dispersión. En una realización, el agente de dispersión es agua estéril 0 "agua para inyección" (WFI, por sus siglas en inglés). La proteína de unión al antígeno se puede diluir adicionalmente con solución salina isotónica u otros excipientes para producir una concentración deseable antes de la administración. En una realización, la formulación es una formulación reconstituida. En otra realización, la formulación es una formulación farmacéutica líquida.
La expresión "formulación farmacéutica" o "formulación" se refiere a una preparación que se encuentra en una forma que permite que sea eficaz la actividad biológica del principio activo y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxicos para un sujeto al que se administraría la formulación. Dichas formulaciones son estériles.
Una formulación "estéril" es aséptica o está exenta de todos los microorganismos vivos y sus esporas.
En realizaciones ilustrativas de la presente invención, las formulaciones líquidas presentan características deseables, tales como características deseables de viscosidad y tensión superficial.
La expresión "tensión superficial" se refiere a la fuerza de atracción ejercida por las moléculas debajo de la superficie sobre las que se encuentran en la interfaz superficie/aire, resultante de la alta concentración molecular de un líquido en comparación con la baja concentración molecular del gas. Líquidos con bajos valores de tensión superficial, tal como líquidos no polares, fluye más fácilmente que el agua. Normalmente, los valores de las tensiones superficiales se expresan en newtons/metros o dinas/centímetros.
"Tensión superficial dinámica", tal como se hace referencia en el presente documento, es la interfaz superficie/aire y la tensión interfacial dinámica a la interfaz superficie/superficie. Hay una serie de métodos alternativos para medir la tensión superficial dinámica, por ejemplo, tensometría de superficie de burbuja cautiva o tensometría de superficie de burbuja pulsante.
El término "viscosidad" se refiere a la resistencia interna al flujo presentada por un fluido a una temperatura específica; la relación entre la tensión de cizalla y la tasa de cizalla. Un líquido tiene una viscosidad de un poise si una fuerza de 1 dina/centímetro cuadrado hace que dos superficies líquidas paralelas de un centímetro cuadrado de área y separadas por un centímetro cuadrado se muevan una al lado de la otra a una velocidad de 1 cm/segundo. Un poise equivale a cien centipoises.
En el presente documento se divulga, la viscosidad de la formulación que comprende el agente amortiguador y el estabilizante se reduce en al menos aproximadamente un 5 %, al menos aproximadamente un 10 %, al menos aproximadamente un 15 %, al menos aproximadamente un 20 %, al menos aproximadamente un 25 %, o al menos aproximadamente un 30 % en comparación con la viscosidad de la formulación en ausencia de agente amortiguador y estabilizante. En el presente documento se divulga, la viscosidad de la formulación que comprende el agente amortiguador y el estabilizante es inferior a aproximadamente 50 mPa s (cP), inferior a aproximadamente 45 mPa s (cP), inferior a aproximadamente 40 mPa s (cP), inferior a aproximadamente 35 mPa s (cP), inferior a aproximadamente 30 mPa s (cP), inferior a aproximadamente 25 mPa s (cP), inferior a aproximadamente 20 mPa s (cP), inferior a aproximadamente 15 mPa s (cP) o inferior a aproximadamente 10 mPa s (cP).
Al referirse a la viscosidad aparente, se entiende que el valor de la viscosidad depende de las condiciones en las que se realizó la medición, tales como temperatura, tasa de cizalla y tensión de cizalla empleados. La viscosidad aparente se define como la relación entre la tensión de cizalla y la tasa de cizalla aplicadas. Hay varios métodos alternativos para medir la viscosidad aparente. Por ejemplo, la viscosidad se puede someter a prueba con un cono y una placa adecuados, placa paralela u otro tipo de viscosímetro o reómetro.
"La gelificación se define como el proceso de formación de una red rígida presumiblemente causada por el inicio de superposiciones topológicas entre mAb o filamentos polimerizados, así como por la reticulación y agrupación de estos filamentos. Esta red rígida se manifiesta como un módulo elástico (G') de solución así como un aumento en su módulo viscoso inherente (G' ')".
Se divulga un método para reducir o inhibir la gelificación de una solución que comprende utilizar una formulación de la presente invención. Se divulga un método para reducir o inhibir la gelificación de una solución que comprende una proteína terapéutica, comprendiendo el método administrar histidina y cloruro de sodio a la solución.
"Polipéptido", "péptido" y "proteína" se utilizan indistintamente en el presente documento para referirse a un polímero de restos de aminoácidos. Un polipéptido puede ser de origen natural (derivado de tejido), de expresión recombinante o natural a partir de preparaciones celulares procariotas o eucariotas, o producirse químicamente a través de métodos sintéticos. Las expresiones se aplican a polímeros de aminoácidos en los que uno o más restos de aminoácidos son un mimético químico artificial de un aminoácido correspondiente de origen natural, así como a polímeros de aminoácidos de origen natural y polímeros de aminoácidos de origen no natural. Miméticos de aminoácidos se refiere a compuestos químicos que tienen una estructura que es diferente de la estructura química general de un aminoácido, pero que funcionan de manera similar a un aminoácido de origen natural. Los restos no naturales están bien descritos en la bibliografía científica y de patentes; a continuación se describen algunas composiciones no naturales ilustrativas útiles como miméticos de restos de aminoácidos naturales y pautas. Los miméticos de aminoácidos aromáticos se pueden generar reemplazando por, p. ej., D- o L-nafilalanina; D- o L-fenilglicina; D- o L-2 tieneilalanina; D- o L-1, -2,3 o 4-pireneilalanina; D- o L-3 tieneilalanina; D- o L-(2-piridinil)-alanina; D- o L-(3-piridinil)-alanina; D- o L-(2-pirazinil)-alanina; D- o L-(4-isopropil)-fenilglicina: D-(trifluorometil)-fenilalanina; D-(trifluorometil)-fenilalanina: D-p-fluorofenilalanina; D- o L-p-bifenilfenilalanina; K- o L-p-metoxi-bifenilfenilalanina: D- o L-2-indol(alquil)alaninas; y, D- o L-alquilaininas, donde alquilo puede ser metilo, etilo, propilo, hexilo, butilo, pentilo, isopropilo, iso-butilo, sec-isotilo, isopentilo sustituido o no sustituido, o aminoácidos no ácidos. Los anillos aromáticos de un aminoácido no natural incluyen, p. ej., tiazolilo, tiofenilo, pirazolilo, bencimidazolilo, naftilo, furanilo, anillos aromáticos de pirrolilo y piridilo.
"Péptido", como se usa en el presente documento, incluye péptidos que son variaciones conservativas de los péptidos ejemplificados específicamente en el presente documento. "Variación conservativa", como se usa en el presente documento, indica la sustitución de un resto de aminoácido por otro resto biológicamente similar. Los ejemplos de variaciones conservativas incluyen, pero sin limitación, la sustitución de un resto hidrófobo tal como isoleucina, valina, leucina, alanina, cisteína, glicina, fenilalanina, prolina, triptófano, tirosina, norleucina o metionina por otro, o la sustitución de un resto polar por otro, como la sustitución de arginina por lisina, ácido glutámico por ácido aspártico, o glutamina por asparagina, y similares. Los aminoácidos hidrófilos neutros que pueden sustituirse entre sí incluyen asparagina, glutamina, serina y treonina. "Variación conservativa" también incluye el uso de un aminoácido sustituido en lugar de un aminoácido original no sustituido siempre que los anticuerpos producidos contra el polipéptido sustituido también inmunorreaccionen con el polipéptido no sustituido. Dichas sustituciones conservativas están dentro de la definición de las clases de péptidos divulgadas. La actividad biológica de los péptidos puede determinarse mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia y descritos en el presente documento.
"Recombinante", cuando se usa con referencia a una proteína, indica que la proteína se ha modificado mediante la introducción de un ácido nucleico o una proteína heterólogos o la alteración de un ácido nucleico o una proteína naturales.
Como se usa en el presente documento, una "proteína terapéutica" se refiere a cualquier proteína y/o polipéptido que se puede administrar a un mamífero para provocar una respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que se busca, por ejemplo, por un investigador o médico. Una proteína terapéutica puede provocar más de una respuesta biológica o médica. Asimismo, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, da como resultado, pero sin limitación, curación, prevención o mejora de una enfermedad, trastorno o efecto secundario o una disminución en la velocidad de avance de una enfermedad o trastorno. La expresión también incluye dentro de su alcance cantidades eficaces para potenciar la función fisiológica normal así como cantidades eficaces para provocar una función fisiológica en un paciente que potencia o ayuda al efecto terapéutico de un segundo agente farmacéutico.
Todos los restos de "aminoácidos" identificados en el presente documento están en la configuración L natural. Según la nomenclatura de polipéptidos convencional, las abreviaturas para los restos de aminoácidos se muestran en la siguiente tabla.
Tabla 1. Abreviaturas de aminoácidos.
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Cabe señalar que todas las secuencias de restos de aminoácidos están representadas en el presente documento por fórmulas cuya orientación de izquierda a derecha está en la dirección convencional del extremo amino al extremo carboxilo.
El polipéptido divulgado en el presente documento es una proteína de unión a antígeno. La proteína de unión a antígeno divulgada en el presente documento se selecciona del grupo que consiste en un receptor soluble, anticuerpo, fragmento de anticuerpo, dominio variable de inmunoglobulina único, Fab, F(ab')2, Fv, Fv unido a disulfuro, scFv, anticuerpo multiespecífico de conformación cerrada, scFv unido a disulfuro o diacuerpo.
La expresión "proteína de unión a antígeno" como se usa en el presente documento se refiere a anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y otras construcciones de proteínas que son capaces de unirse a un antígeno.
Los términos Fv, Fc, Fd, Fab, o F(ab)2 se usan con sus significados convencionales (véase, p. ej., Harlow et al,, Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)).
Un "anticuerpo quimérico" se refiere a un tipo de anticuerpo modificado por ingeniería que contiene una región variable natural (cadena ligera y cadenas pesadas) procedente de un anticuerpo donante en asociación con regiones constantes de cadena ligera y pesada procedente de un anticuerpo aceptor.
Un "anticuerpo humanizado" se refiere a un tipo de anticuerpo modificado por ingeniería que tiene sus CDR procedentes de una inmunoglobulina no humana donante, siendo las restantes partes procedentes de la inmunoglobulina de la molécula procedentes de una o más inmunoglobulinas humanas. Además, los restos de soporte del marco pueden alterarse para conservar la afinidad de unión (véanse, p. ej., Queen et al,, Proc Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al,, Bio/Technology, 9:421 (1991)). Un anticuerpo aceptor humano adecuado puede ser uno seleccionado de una base de datos convencional, p. ej., la base de datos KABAT™, base de datos Los Alamos y base de datos Swiss Protein, por homología con las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del anticuerpo donante. Un anticuerpo humano caracterizado por una homología con las regiones marco del anticuerpo donante (basándose en los aminoácidos) puede ser adecuado para proporcionar una región constante de cadena pesada y/o una región marco variable de cadena pesada para la inserción de las CDR donantes. Un anticuerpo aceptor adecuado capaz de donar regiones marco variables o constantes de cadena ligera puede seleccionarse de manera similar. Cabe señalar que no es necesario que las cadenas pesada y ligera del anticuerpo aceptor se originen a partir del mismo anticuerpo aceptor. El estado de la técnica describe varias formas de producir dichos anticuerpos humanizados; véanse, por ejemplo, los documentos EP-A-0239400 y EP-A-054951.
La expresión "anticuerpo donante" se refiere a un anticuerpo (monoclonal y/o recombinante) que aporta las secuencias de aminoácidos de sus regiones variables, CDR u otros fragmentos funcionales o análogos de los mismos a un primer compañero de inmunoglobulina, para proporcionar a la región codificante de inmunoglobulina alterada y al anticuerpo alterado expresado resultante la especificidad antigénica y la actividad neutralizante características del anticuerpo donante.
La expresión "anticuerpo aceptor" se refiere a un anticuerpo (monoclonal y/o recombinante) heterólogo al anticuerpo donante, que aporta todas (o cualquier porción, pero en algunas realizaciones la totalidad) las secuencias de aminoácidos que codifican sus regiones marco de cadena pesada y/o ligera y/o sus regiones constantes de cadena pesada y/o ligera al primer compañero de inmunoglobulina asociado. En determinadas realizaciones, un anticuerpo humano es el anticuerpo aceptor.
Las "CDR" se definen como secuencias de aminoácidos de las regiones determinantes de la complementariedad de un anticuerpo que son las regiones hipervariables de las cadenas pesada y ligera de la inmunoglobulina. Véase, p. ej., Kabat et al,, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4a Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987). Hay tres CDR (o regiones CDR) de cadena pesada y tres de cadena ligera en la porción variable de una inmunoglobulina. Por lo tanto, "CDR", como se usa en el presente documento, se refiere a las tres CDR de cadena pesada, o las tres CDR de cadena ligera (o todas las CDR de cadena pesada y todas las de cadena ligera, si corresponde). La estructura y el plegamiento de la proteína del anticuerpo puede hacer que otros restos se consideren parte de la región de unión al antígeno y así lo debe entender un experto en la materia. Véase, por ejemplo, Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable regions; Nature 342, págs. 877­ 883.
Como se usa en el presente documento, el término "dominio" se refiere a una estructura de proteína plegada que tiene una estructura terciaria independiente del resto de la proteína. En general, los dominios son responsables de las propiedades funcionales individuales de las proteínas y, en muchos casos, pueden añadirse, retirarse o transferirse a otras proteínas sin pérdida de función del resto de la proteína y/o del dominio. Un "dominio variable único de anticuerpo" es un dominio de polipéptido plegado que comprende secuencias características de dominios variables de anticuerpo. Por tanto, incluye dominios variables de anticuerpo completos y dominios variables modificados, por ejemplo, en los que uno o más bucles se han reemplazado por secuencias que no son características de los dominios variables de anticuerpo, o dominios variables de anticuerpo que se han truncado o comprenden extensiones amino o carboxiterminales, así como fragmentos plegados de dominios variables que conservan al menos la actividad de unión y la especificidad del dominio de longitud completa.
La expresión "dominio variable de inmunoglobulina único" se refiere a un dominio variable de anticuerpo (VH, VHH, VL) que se une específicamente a un antígeno o epítopo independientemente de una región o dominio V diferente. Un dominio variable de inmunoglobulina único puede estar presente en un formato (p. ej., homo o heteromultímero) con otras regiones variables o dominios variables diferentes donde las otras regiones o dominios no son necesarios para la unión al antígeno por el dominio variable de inmunoglobulina único (es decir, donde el dominio variable de inmunoglobulina único se une al antígeno independientemente de los dominios variables adicionales). Un "anticuerpo de dominio" o "dAb" es lo mismo que un "dominio variable de inmunoglobulina único" que es capaz de unirse a un antígeno como se usa el término en el presente documento. Un dominio variable de inmunoglobulina único puede ser un dominio variable de anticuerpo humano, pero también incluye dominios variables de anticuerpo únicos de otras especies tales como roedores (por ejemplo, como se divulga en el documento WO 00/29004), dAb Vhh de tiburón nodriza y camélidos. Los VHH de camélidos son polipéptidos de dominio variable de inmunoglobulina único que proceden de especies que incluyen camello, llama, alpaca, dromedario y guanaco, que producen anticuerpos de cadena pesada desprovistos de forma natural de cadenas ligeras. Dichos dominios Vhh pueden humanizarse según técnicas convencionales disponibles en la técnica y dichos dominios se consideran "anticuerpos de dominio" según la divulgación. Como se usa en el presente documento, "Vh" incluye dominios Vhh de camélidos. Los NARV son otro tipo de dominio variable de inmunoglobulina único que se identificaron en peces cartilaginosos, incluido el tiburón nodriza. Estos dominios también se conocen como región variable de receptor de antígeno nuevo (comúnmente abreviada como V(NAR) o NARV). Para detalles adicionales, véase Mol. Immunol. 44, 656-665 (2006) y el documento US20050043519A.
La expresión "dominio de unión a epítopo" se refiere a un dominio que se une específicamente a un antígeno o epítopo independientemente de una región o dominio V diferente, esto puede ser un anticuerpo de dominio (dAb), por ejemplo, un dominio variable de inmunoglobulina único humano, de camélido o tiburón.
Como se utiliza en el presente documento, la expresión "sitio de unión a antígeno" se refiere a un sitio en una proteína que es capaz de unirse específicamente al antígeno, este puede ser un dominio único, por ejemplo, un dominio de unión a epítopo, o puede ser dominios Vh/Vl emparejados que se pueden encontrar en un anticuerpo convencional. Los dominios Fv de cadena sencilla (ScFv) divulgados en el presente documento, pueden proporcionar sitios de unión a antígeno.
Los términos "mAbdAb" y dAbmAb" se utilizan en el presente documento para referirse a las proteínas de unión a antígeno divulgadas en el presente documento. Los dos términos se pueden usar indistintamente y se pretende que tengan el mismo significado que se usa en el presente documento.
La formulación farmacéutica divulgada proporciona aproximadamente de 150 a 250 mg/ml de proteína de unión a antígeno; de aproximadamente 1 a 100 mM de un agente amortiguador que proporciona un pH de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 7,0; y de aproximadamente 70 a 170 mM de un agente de tonicidad. Como alternativa, la formulación farmacéutica divulgada proporciona aproximadamente de 150 a 250 mg/ml de proteína de unión a antígeno; aproximadamente de 1 a 100 mM de un agente amortiguador que proporciona un pH de 6,0 ± 0,5; aproximadamente de 1 a 100 mM de un estabilizante; aproximadamente de 90 a 150 mM de un agente de tonicidad; y aproximadamente del 0,005 al 0,015 % (p/v) de un tensioactivo no iónico. En una realización, la proteína de unión a antígeno es un anticuerpo anti-proteína estimuladora de linfocitos B (anti-BLyS).
T ambién se describe una formulación farmacéutica que comprende aproximadamente de 150 a 250 mg/ml de proteína de unión a antígeno; aproximadamente de 1 a 100 mM de histidina a un pH de 6,0 ± 0,5; NaCl de aproximadamente 70 a 170 mM. La formulación divulgada en el presente documento comprende además aproximadamente de 0,005 a 0,03 % (p/v) de un tensioactivo no iónico. La formulación divulgada en el presente documento comprende además de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,1 mM de un quelante de metales.
En un aspecto, la presente invención proporciona una formulación farmacéutica para un anticuerpo monoclonal que comprende aproximadamente 200 mg/ml de anticuerpo monoclonal; aproximadamente 10 mM de un agente amortiguador de histidina; aproximadamente 115 mM de NaCl; aproximadamente 25 mM de arginina; y aproximadamente 0,01 % (p/v) de polisorbato 80, a aproximadamente un pH de 6,0; y en donde el anticuerpo monoclonal comprende cadenas pesadas y ligeras que comprenden las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 6 y 7.
La formulación farmacéutica de la presente invención se puede proporcionar en forma líquida o se puede proporcionar en forma liofilizada.
La formulación farmacéutica según la presente invención comprende un agente amortiguador. Los agentes amortiguadores incluyen, pero sin limitación, ácido cítrico, HEPES, histidina, acetato de potasio, citrato de potasio, fosfato de potasio (KH2PO4), acetato sódico, bicarbonato de sodio, citrato de sodio, fosfato de sodio (NAH2PO4), base Tris y Tris-HCl. En una realización, el agente amortiguador es histidina. La concentración de histidina divulgada es de aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 o 100 mM. La concentración de histidina divulgada en el presente documento es de aproximadamente 10±5 mM. La concentración de histidina divulgada en el presente documento es de aproximadamente 10±2 mM. En una realización, la concentración de histidina es de aproximadamente 10 mM. La concentración de histidina divulgada en el presente documento es de aproximadamente 15 mM
Como se usa en el presente documento, la expresión "agente amortiguador que proporciona un pH de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 7,0" se refiere a un agente que proporciona que la solución que lo comprende resista los cambios de pH por la acción de sus componentes conjugados ácido/base. El amortiguador utilizado en las formulaciones según la divulgación puede tener un pH en el intervalo de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 6,5, o de aproximadamente 5,8 a aproximadamente 6,2. En una realización el pH es de aproximadamente 6,0. El pH divulgado en el presente documento es de aproximadamente 6,250. Los ejemplos de agentes amortiguadores que controlarán el pH en este intervalo incluyen acetato, succinato, gluconato, histidina, citrato, glicilglicina y otros amortiguadores ácidos orgánicos. El amortiguador más adecuado según la presente invención es un amortiguador de histidina, como por ej. L-histidina.
Un "amortiguador de histidina" es un amortiguador que comprende el aminoácido histidina. Los ejemplos de amortiguadores de histidina incluyen cloruro de histidina, acetato de histidina, fosfato de histidina, sulfato de histidina. La formulación de histidina identificada en los ejemplos como la más adecuada es un amortiguador de histidina elaborado a partir de 0,65 mg/ml de L-histidina, 1,2 mg/ml de monoclorhidrato de L-histidina.
La formulación farmacéutica según la presente invención comprende un agente de tonicidad. Los agentes de tonicidad incluyen, pero sin limitación, dextrosa, glicerina, manitol, cloruro de potasio y cloruro de sodio. En otra realización el agente de tonicidad es cloruro de sodio. En el presente documento se divulga, la concentración de cloruro de sodio es de aproximadamente 70 a 170 mM; de aproximadamente 90-150 mM; o de aproximadamente 115±10 mM. La concentración cloruro de sodio divulgada en el presente documento es de aproximadamente 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170 o 175 mM. En una realización, la concentración de cloruro de sodio es de aproximadamente 115 mM. La concentración de cloruro de sodio divulgada en el presente documento es de aproximadamente 150±10 mM. En el presente documento se divulga, la concentración de cloruro de sodio es de aproximadamente 150 mM.
Por "isotónico" se entiende que la formulación tiene esencialmente la misma presión osmótica que la sangre humana. Las formulaciones isotónicas generalmente tendrán una presión osmótica de aproximadamente 250 a 350 mOsm. La isotonicidad se puede medir usando un osmómetro de tipo presión de vapor o de congelación en hielo.
En determinadas realizaciones, la formulación farmacéutica según la presente invención comprende un estabilizante. Los estabilizantes incluyen, pero sin limitación, seroalbúmina humana (hsa), seroalbúmina bovina (BSA), a-caseína, globulinas, a-lactoalbúmina, LDH, lisozima, mioglobina, ovoalbúmina y RNasa A. Los estabilizantes también incluyen aminoácidos y sus metabolitos, tales como, glicina, alanina (a-alanina, p-alanina), arginina, betaína, leucina, lisina, ácido glutámico, ácido aspártico, prolina, 4-hidroxiprolina, sarcosina, ácido Y-aminobutírico (GABA), opinas (alanopina, octopina, estrombina) y N-óxido de trimetilamina (TMAO). En una realización, el estabilizante es un aminoácido. En una realización, el aminoácido es arginina. La concentración de arginina divulgada en el presente documento es de aproximadamente 20 a 30 mM. La concentración de arginina divulgada en el presente documento es de aproximadamente 25±2 mM.
En determinadas realizaciones, la formulación farmacéutica según la presente invención comprende un tensioactivo no iónico. Los tensioactivos no iónicos incluyen, pero sin limitación, ásteres de ácidos grasos de polioxietilensorbitán (tales como polisorbato 20 y polisorbato 80), copolímeros de polietileno y polipropileno, polietilen polipropilenglicol, estearatos de polioxietileno, poli(alquiláteres de oxietileno), p. ej. poli (monolauriláter de polioxietileno, éteres de alquilfenilpolioxietileno (Triton-X), copolímero de polioxietileno-polioxipropileno (Poloxamer, Pluronic), dodecilsulfato de sodio (SDS). En una realización, el tensioactivo no iónico es polisorbato 80. La concentración de polisorbato 80 divulgada en el presente documento es de aproximadamente 0,005 a 0,02 % (p/v). En una realización, la concentración de polisorbato 80 es de aproximadamente 0,01 % (p/v). La concentración de polisorbato 80 divulgada en el presente documento es de aproximadamente 0,02 % (p/v).
La formulación farmacáutica divulgada en el presente documento comprende un quelante de metales. Los quelantes de metales incluyen, pero sin limitación EDTA y EGTA. El quelante de metales descrito en el presente documento es EDTA. La concentración de EDTA divulgada en el presente documento es de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,02 mM. La concentración de EDTA divulgada en el presente documento es de aproximadamente 0,05 mM.
En una realización, la proteína de unión a antígeno es un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo. En una realización, el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo es de ratón, quimérico, humanizado o completamente humano. El anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo divulgados en el presente documento se une a BLyS o IL-13.
La formulación divulgada comprende la proteína de unión a antígeno, histidina, arginina, NaCl y polisorbato 80. En un aspecto, la formulación comprende aproximadamente 200 mg/ml de proteína de unión a antígeno, aproximadamente histidina 10 mM, aproximadamente arginina 25 mM, aproximadamente NaCl 115 mM y aproximadamente polisorbato 80 al 0,01 %, a aproximadamente pH 6,0. En una realización, la proteína de unión al antígeno se une a BLyS.
La formulación farmacéutica divulgada proporciona aproximadamente 200 mg/ml de proteína de unión a antígeno; histidina aproximadamente 15 mM a un pH de aproximadamente 6,25; NaCl aproximadamente 150 mM; polisorbato 80 al 0,02 % (p/v); y EDTA aproximadamente 0,05 mM.
En un aspecto, la formulación farmacéutica de la presente invención es estable tras la congelación y descongelación. Una formulación "estable" es aquella en la que todas las proteínas en la misma conservan esencialmente su estabilidad física y/o estabilidad química y/o actividad biológica durante el almacenamiento a la temperatura de almacenamiento prevista, p. ej. 2-8 °C. Se desea que la formulación conserve esencialmente su estabilidad física y química, así como su actividad biológica durante el almacenamiento. El período de almacenamiento generalmente se selecciona en función de la vida útil prevista de la formulación. Asimismo, la formulación debe ser estable después de la congelación (a, p. ej., -70 °C.) y descongelación de la formulación, por ejemplo después de 1, 2 o 3 ciclos de congelación y descongelación. Diversas técnicas analíticas para medir la estabilidad de las proteínas están disponibles en la técnica y se revisan en Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N.Y., Pubs. (1991) y Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por ejemplo. La estabilidad puede medirse a una temperatura seleccionada durante un periodo de tiempo seleccionado. La estabilidad se puede evaluar cualitativa y/o cuantitativamente en una variedad de formas diferentes, incluida la evaluación de la formación de agregados (por ejemplo, utilizando cromatografía de exclusión por tamaño, midiendo la turbidez y/o mediante inspección visual); evaluando la heterogeneidad de la carga usando cromatografía de intercambio catiónico o electroforesis de zona capilar; análisis de secuencia aminoterminal o carboxiterminal; análisis por espectrometría de masas; análisis SDS-PAGE para comparar anticuerpos reducidos e intactos; análisis de mapas peptídicos (por ejemplo, tríptico o LYS-C); evaluación de la actividad biológica o la función de unión a antígeno del anticuerpo; etc.
En una realización, la formulación farmacéutica de la presente invención es adecuada para administración subcutánea o intramuscular.
El "porcentaje de identidad" entre una secuencia de aminoácidos de consulta y una secuencia de aminoácidos objeto es el valor de "identidades", expresadas como un porcentaje, que se calcula mediante el algoritmo BLASTP cuando una secuencia de aminoácidos objeto tiene una cobertura de consulta del 100 % con una secuencia de aminoácidos de consulta después de realizar una alineación BLASTP por pares. Dichas alineaciones BLASTP por pares entre una secuencia de aminoácidos de consulta y una secuencia de aminoácido objeto se realizan utilizando la configuración predeterminada del algoritmo BLASTP disponible en el sitio web del National Center for Biotechnology Institute con el filtro para regiones de baja complejidad desactivado. Es importante destacar que, una secuencia de aminoácidos de consulta puede describirse mediante una secuencia de aminoácidos identificada en una o más reivindicaciones en el presente documento.
La secuencia de consulta puede ser 100 % idéntica a la secuencia objeto, o puede incluir hasta un cierto número entero de alteraciones de aminoácidos en comparación con la secuencia objeto, de modo que el % de identidad sea inferior al 100 %. Por ejemplo, la secuencia de consulta es al menos un 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 o 99 % idéntica a la secuencia objeto. Dichas alteraciones incluyen al menos una eliminación, sustitución incluyendo sustitución conservativa y no conservativa), o inserción, de un aminoácido y en donde dichas alteraciones pueden darse en las posiciones amino o carboxiterminal de la secuencia de consulta o en cualquier parte entre estas posiciones terminales, intercaladas ya sea individualmente entre los aminoácidos en la secuencia de consulta o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de consulta.
El % de identidad puede determinarse a lo largo de longitud de la secuencia de consulta, incluyendo una o más CDR. Como alternativa, el % de identidad puede excluir una o más CDR, por ejemplo, las CDR son 100 % idénticas a la secuencia objeto y el % de variación de identidad está en la parte restante de la secuencia de consulta, para que la secuencia de CDR sea fija/intacta.
En una realización, la proteína de unión a antígeno es un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo. En una realización, el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo es de ratón, quimérico, humanizado o completamente humano. En una realización, el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo se une a BLyS (SEQ ID NO: 1) o una forma hetero u homotrimérica de BLyS, por ejemplo, el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo se une a la forma soluble de BLyS (SEQ ID NO: 10). El anticuerpo monoclonal divulgado en el presente documento comprende regiones variables de cadena ligera y pesada que comprenden secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 2 y un 90 %idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 3, respectivamente, o secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 4 y un 90 % idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 5, respectivamente. En una realización, el anticuerpo monoclonal comprende regiones variables de cadena ligera y pesada que comprenden secuencias de aminoácidos que son un 95 % idénticas a las SEQ ID NO: 2 y 3, respectivamente, o secuencias de aminoácidos que son un 95 % idénticas a las SEQ ID NO: 4 y 5, respectivamente. En una realización, el anticuerpo monoclonal comprende regiones variables de cadena ligera y pesada que comprenden secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a las SEQ ID NO: 2 y 3, respectivamente, o secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a las SEQ ID NO: 4 y 5, respectivamente. En una realización, el anticuerpo comprende regiones variables de cadena pesada y ligera que comprenden las secuencias de aminoácidos expuestas en las SEQ ID NO: 2 y 3, respectivamente, o en las SEQ ID NO: 4 y 5, respectivamente. El anticuerpo monoclonal divulgado en el presente documento comprende cadenas ligeras y pesadas que comprenden secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 6 y un 90 % idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 7, respectivamente, o secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 8 y un 90 % idénticas a, o un 91 % idénticas a, o un 92 % idénticas a, o un 93 % idénticas a, o un 94 % idénticas a, o un 95 % idénticas a, o un 96 % idénticas a, o un 97 % idénticas a, o un 98 % idénticas a, o un 99 % idénticas a la SEQ ID NO: 9, respectivamente. El anticuerpo monoclonal divulgado adicionalmente comprende cadenas pesadas y ligeras que comprenden secuencias de aminoácidos que son un 95 % idénticas a las SEQ ID NO: 6 y 7, respectivamente, o secuencias de aminoácidos que son un 95 % idénticas a las SEQ ID NO: 8 y 9, respectivamente. El anticuerpo monoclonal divulgado en el presente documento comprende cadenas pesadas y ligeras que comprenden secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a las SEQ ID NO: 6 y 7, respectivamente, o secuencias de aminoácidos que son un 90 % idénticas a las SEQ ID NO: 8 y 9, respectivamente. El anticuerpo monoclonal divulgado en el presente documento comprende cadenas pesadas y ligeras que comprenden secuencias de aminoácidos establecidas en las
SEQ ID NO: 6 y 7, respectivamente, o en las SEQ ID NO: 8 y 9, respectivamente. El anticuerpo monoclonal divulgado en el presente documento comprende CDR que comprenden secuencias de aminoácidos establecidas en las SEQ ID NO: 11, 12, 13, 14, 15 y 16. El anticuerpo anti-BLyS divulgado en el presente documento se selecciona del grupo de belimumab, tabalumab, y una mezcla de los mismos. En una realización, el anticuerpo anti-BLyS comprende las secuencias de cadena pesada y ligera establecidas en las SEQ ID NO: 6 y 7, respectivamente.
En una realización, la formulación farmacéutica según la presente invención comprende una concentración de anticuerpo monoclonal de 200±20 mg/ml. En una realización, la concentración de anticuerpo es de aproximadamente 200 mg/ml. En una realización, el anticuerpo anti-BLyS se coadministra de forma concomitante o secuencial con un corticosteroide. En una realización, el corticoesteroide se selecciona del grupo que consiste en prednisona, prednisolona, hidrocortisona, metilprednisolona y dexametasona. En una realización, el corticosteroide es prednisona.
En un aspecto, la presente invención proporciona una formulación farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad o trastorno susceptible de tratamiento con un anticuerpo anti-BLyS. En una realización, la presente invención se refiere a un método para tratar una enfermedad o afección que es susceptible de tratamiento con un anticuerpo anti-BLyS en un sujeto que comprende administrar una formulación según la presente invención a un sujeto en una cantidad eficaz para tratar la enfermedad o afección. En una realización, la enfermedad o afección se selecciona del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, vasculitis por anticuerpos contra el citoplasma de neutrófilos (ANCA), nefritis lúpica, síndrome de Sjogren primario, trombocitopenia inmunitaria crónica, miastenia grave, macroglobulinemia de Waldenstrom sintomática, desensibilización inmunitaria de pacientes que esperan un trasplante de riñón, nefropatía membranosa, esclerosis sistémica, artritis reumatoide, mieloma múltiple, esclerosis múltiple e insuficiencia renal. En otra realización, la enfermedad o afección es lupus eritematoso sistémico. En otro aspecto, la presente invención proporciona una formulación para su uso en el tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, vasculitis por anticuerpos contra el citoplasma de neutrófilos (ANCA), nefritis lúpica, síndrome de Sjogren primario, trombocitopenia inmunitaria crónica, miastenia grave, macroglobulinemia de Waldenstrom sintomática, desensibilización inmunitaria de pacientes que esperan un trasplante de riñón, nefropatía membranosa, esclerosis sistémica, artritis reumatoide, mieloma múltiple, esclerosis múltiple e insuficiencia renal. En otro aspecto, la presente invención proporciona una formulación para su uso en el tratamiento del lupus eritematoso sistémico. En el presente documento se divulga el uso de una formulación en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, vasculitis por anticuerpos contra el citoplasma de neutrófilos (ANCA), nefritis lúpica, síndrome de Sjogren primario, trombocitopenia inmunitaria crónica, miastenia grave, macroglobulinemia de Waldenstrom sintomática, desensibilización inmunitaria de pacientes que esperan un trasplante de riñón, nefropatía membranosa, esclerosis sistémica, artritis reumatoide, mieloma múltiple, esclerosis múltiple e insuficiencia renal. En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de una formulación en la preparación de un medicamento para el tratamiento del lupus eritematoso sistémico.
En un aspecto, la presente invención proporciona un kit que comprende uno o más viales que contienen la formulación de la presente invención divulgada e instrucciones para la administración subcutánea de la formulación a un paciente. En una realización, el kit comprende además un dispositivo de inyección para la administración subcutánea de la formulación a un paciente.
En una realización, la presente invención se refiere a un dispositivo de inyección que comprende una formulación de anticuerpo anti-BLyS estable descrita en el presente documento. Para suministro subcutáneo, la formulación puede administrarse a través de un dispositivo adecuado, tal como (pero sin limitación) una jeringa; un dispositivo de inyección (por ejemplo, el dispositivo INJECT-EASE™ y GENJECT™); una bomba de infusión (tal como, por ejemplo, Accu-Chek™); una plumas inyectora (tal como la GENPEN™); o un dispositivo sin aguja (p. ej., MED-DECTOR™ y BIOJECTOR™).
La formulación farmacéutica según la invención está esencialmente exenta de partículas visibles (inspección por el ojo humano). Las partículas subvisibles (medidas por oscurecimiento de la luz) deben cumplir los siguientes criterios: número máximo de partículas >10 pm por vial-> 6000; número máximo de partículas >25 pm por vial-> 600.
La formulación farmacéutica del anticuerpo anti-BLyS farmacéuticamente activo según la invención se puede administrar como inyección subcutánea, por lo que la administración se repite varias veces con intervalos de tiempo de 1, 2, 3 o 4 semanas. En una realización, la formulación farmacéutica del anticuerpo anti-BLyS farmacéuticamente activo se administra una vez por semana o una vez cada dos semanas. En la mayoría de los casos, el volumen total del líquido de inyección se administra en un período de tiempo de 1 a 10 minutos, preferentemente 2 a 6 minutos, lo más preferentemente 3±1 minutos.
Para la prevención o el tratamiento de la enfermedad, la dosificación apropiada del anticuerpo dependerá del tipo de enfermedad a tratar, como se ha definido anteriormente, de la gravedad y de la evolución de la enfermedad, de si el anticuerpo se administra con fines preventivos o terapéuticos, en la terapia anterior, de la historia clínica del paciente y de la respuesta al anticuerpo y del criterio del médico responsable. El anticuerpo se administra adecuadamente al paciente una vez o en una serie de tratamientos. Dependiendo del tipo y de la gravedad de la enfermedad, de aproximadamente 1 pg/kg a 50 mg/kg de peso corporal o más específicamente entre aproximadamente 0,1 mg/kg a 20 mg/kg de peso corporal) del anticuerpo es una dosis inicial con potencial terapéutico para la administración al paciente, ya sea, por ejemplo, mediante una o más administraciones distintas o mediante infusión continua. Más específicamente, la dosificación del anticuerpo estará en el intervalo de aproximadamente 0,05 mg de anticuerpo/kg de peso corporal a aproximadamente de 10 mg de anticuerpo/kg de peso corporal.
En el presente documento se divulga un artículo de fabricación que contiene la formulación farmacéutica divulgada y proporciona instrucciones para su uso. Este artículo de fabricación comprende un recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, frascos, viales (por ejemplo, viales de dos o múltiples cámaras), jeringas (como jeringas de dos o múltiples cámaras) y tubos de ensayo. Los recipientes pueden conformarse a partir de diversos materiales, tales como vidrio o plástico. El recipiente contiene la formulación y la etiqueta sobre, o asociada con, el recipiente puede indicar instrucciones de uso. El recipiente que contiene la formulación puede ser un vial de usos múltiples, lo que permite administraciones repetidas (por ejemplo, de 2 a 6 administraciones) de la formulación reconstituida. El artículo de fabricación puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, incluyendo otros amortiguadores, diluyentes, filtros, agujas, jeringas y prospectos con instrucciones de uso.
El anticuerpo que se formula según la presente invención se prefiere que sea esencialmente puro y se desea esencialmente homogéneo. Un anticuerpo "esencialmente puro" significa una composición que comprende al menos aproximadamente un 90 % en peso del anticuerpo, basándose en el peso total de la composición, preferentemente al menos aproximadamente un 95 % en peso. Un anticuerpo "esencialmente homogéneo" significa una composición que comprende al menos un 99 % en peso de anticuerpo, basándose en el peso total de la composición.
La invención se entenderá de forma más completa con referencia a los siguientes ejemplos. Son meramente ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes del alcance de la invención. No se prevé que pequeñas variaciones en el procedimiento, p. ej. pequeños cambios en el tiempo, temperatura, cantidad, concentración, escala, etc., afecten al resultado de los experimentos. Todas las citas de bibliografía y patentes se incorporan en el presente documento como referencia.
Los Ejemplos se ilustran adicionalmente mediante las figuras 1-20.
Ejemplos
Ejemplo 1: formulaciones de belimumab
Cierre de recipientes
En todos los estudios se utilizaron viales Schott tipo I con tapones Daikyo D21-7S Flurotec® y sellos de aluminio de tipo flip off, a menos que se indique lo contrario. Esta combinación de vial y tapón se recomienda como configuración de fase 1. Las muestras de estabilidad a largo plazo que se almacenaron a > 2-8 °C utilizaron jeringas Gerresheimer de 1,0 ml de largo, 29G, de pared delgada, de aguja fina, precargadas con protectores de aguja Stelmi 4800 y émbolos Daikyo W4023 Flurotec®, y se ajustaron al vacío con una capa de nitrógeno. Las muestras a < 2-8 °C se introdujeron en viales criogénicos. Procedimientos de manipulación de productos
Antes de todos los experimentos, belimumab se filtró de forma estéril con un filtro de 0,22 pm y se introdujo de manera aséptica en los cierres de los recipientes elegidos. Todas las muestras de estabilidad se protegieron de la luz durante el almacenamiento.
Selección de excipientes
Se utilizaron excipientes multifarmacopeicos, obligatorios para la fabricación GMP BDS y FDP, cuando fue posible en los estudios de selección y se usaron para todas las formulaciones en el estudio de estabilidad a largo plazo.
La tabla 2 proporciona una lista de las formulaciones sometidas a prueba.
Tabla 2
Figure imgf000012_0001
Estabilidad a largo plazo
Agregación dependiente de la concentración en la formulación 1
Como se esperaba, la agregación aumentó con la concentración de proteína (tabla 3, figura 1). La tasa de agregación se duplica aproximadamente entre 100 mg/ml y 260 mg/ml, pero incluso a 260 mg/ml solo daría lugar a un aumento de aproximadamente el 1 % en la agregación durante 3 años a 2-8 °C a 200 mg/ml de belimumab. Obsérvese que la cantidad inicial de agregación observada por SEC-HPLC aumenta a medida que aumenta la concentración de proteína, aunque solamente en aproximadamente un 0,1 % (fila de 0 meses de la tabla 3).
Tabla 3 Efecto de la concentración de proteína sobre el % de agregado Mes 100 mg/ml 140 mg/ml 180 mg/ml 220 mg/ml 260 mg/ml
0 0,47 % 0,50 % 0,54 % 0,58 % 0,60 %
1 0,47 % 0,51 % 0,52 % 0,58 % 0,62 %
2 0,54 % 0,61 % 0,64 % 0,75 % 0,78 %
4 0,53 % 0,59 % 0,63 % 0,72 % 0,77 %
6 0,58 %
Figure imgf000013_0001
0,63 % 0,70 % 0,76 % 0,84 %
Ta
Figure imgf000013_0002
0,018 % 0,021 %
Figure imgf000013_0005
0,027 %
Figure imgf000013_0003
0,030 %
Figure imgf000013_0004
0,040 %
Selección de candidatos de formulación a largo plazo
Basándose en los siguientes resultados, las formulaciones con potencial terapéutico se redujeron a las formulaciones 1 y 5 después de la evaluación de los datos de 3 meses, y después se eligió la formulación 5 como la formulación final después de 5% meses.
Aspecto, pH y osmolalidad
Todas las muestras eran de color amarillo pálido, opalescente, y estaban exentas de partículas visibles en todo momento hasta los 5% meses. El producto farmacéutico terminado en las ocho formulaciones en las tres concentraciones coincidió más estrechamente con el patrón de color Y5 cuando se sometió a prueba por colorimetría en el punto de tiempo inicial. Todas las muestras de FDP en las formulaciones de histidina/NaCl (en lo sucesivo en el presente documento, formulación 1) e histidina/NaCl/arginina (en lo sucesivo en el presente documento, formulación 5) también coincidieron con el patrón Y5 después de 3 y 5% meses de almacenamiento a 2-8 °C. La turbidez de las muestras con estabilizantes de azúcar (sacarosa y sorbitol) fue significativamente menor que todas las demás muestras, que osciló entre 29 y 38 NTU en el punto de tiempo inicial y de 3 meses. La turbidez también aumentó en las muestras que contenían NaCl a medida que disminuía la concentración de proteína. Solamente se sometieron a prueba las formulaciones 1 y 5 después de 5% meses a 2-8 °C y no mostraron ninguna respuesta a la formulación, concentración o tiempo (figura 2).
Tabla 4 Turbidez de muestras de estabilidad a largo plazo después de 3 meses de almacenamiento a 2-8 °C Turbidez (NTU)
Concentración alta (~200 Concentración media (~165 Concentración baja (~125 m /ml m /ml m /ml
Figure imgf000013_0006
s 3
El pH de todas las muestras osciló entre 6,1 y 6,3 en el punto de tiempo inicial y no cambió en las formulaciones 1 y 5 después de 5% meses (los datos de la formulación 5 se muestran en la tabla 13). La osmolalidad se sometió a prueba solamente en el punto de tiempo inicial; todas las muestras fueron 299 /- 17 mOsm/kg.
Viscosidad y jeringabilidad
Las formulaciones que contienen azúcar (sacarosa, sorbitol) mostraron las viscosidades más altas, seguidas de la formulación de succinato/cloruro de sodio (tabla 5). El resto de las muestras que contenían sal eran comparables. La viscosidad aumentó exponencialmente a medida que aumentaba la concentración de proteína en las formulaciones 1 y 5 (figura 3).
Tabla 5 Viscosidad de muestras de estabilidad a largo plazo en T0
Viscosidad (mm2/s)
Concentración alta (~200 Concentración media (~ 165 Concentración baja Muestra mg/ml) mg/ml) (~125 mg/ml) Hist/NaCl (formulación 1) 10,2 5,8 3,6
Hist/sacarosa 17,4 7,7 4,9 Hist/sacarosa/Na 13,4 7,9 3,9
Hist/NaCl/MgCl2 12,8 5,6 3,4
Hist/Nacl/Arg
(formulación 5) 13,0 5,8 3,8
Hist/sorbitol 21,0 7,6 4,3
Hist/N aCl/Arg/Mg 12,8 5,6 3,5
Succinato/NaCl
Figure imgf000014_0001
15,3
Figure imgf000014_0002
6,6
Figure imgf000014_0003
3,8
La jeringabilidad, medida como la fuerza necesaria para suministrar 1 ml a través de la aguja de pared delgada 29G en 10 segundos, mostró tendencias similares en el punto de tiempo inicial. Después de un 5 % de los meses, solo se sometieron a prueba las formulaciones 1 y 5, y no se observó un aumento significativo en la jeringabilidad a lo largo del tiempo a 2-8 °C. También se sometió a prueba la jeringabilidad durante 20 segundos en una de cada jeringa en el punto de tiempo del 5 % mensual, y se demostró que la fuerza de suministro disminuía hasta en un 40 % cuando el tiempo de suministro se duplicaba. Aunque no se ha sometido a prueba, la fuerza de suministro también se puede disminuir aumentando el calibre de la aguja.
__________ Tabla 6 Jeringabilidad de muestras de estabilidad a largo plazo en T0 y un 5 % de los meses__________
Jerin abilidad N
Figure imgf000014_0004
n baja
Las fuerzas necesarias para administrar los fármacos a través de siete inyectores de pluma comercializados, que son más similares a las jeringas precargadas porque requieren una fuerza de accionamiento manual, son similares a la fuerza para belimumab a 200 mg/ml (tabla 7). Los tiempos de inyección variaron debido a los diferentes volúmenes y diámetros de los recipientes, que se enumeran en la tabla 7 para comparación. Para finalizar, un estudio de la Universidad de Nottingham encargado por el Departamento de Comercio e Industria del Reino Unido ha demostrado que estando sentadas, 59 mujeres entre las edades de 16 y 90 eran capaces de aplicar 53,7 a 237,7 N de fuerza estática hacia abajo a nivel de la cadera con el pulgar. Aunque ni los datos del inyector de pluma ni el estudio de fuerza son correlaciones perfectas para usar una jeringa precargada, ambos conjuntos de datos generan confianza en que la viscosidad y la jeringabilidad de 200 mg/ml de belimumab no son prohibitivas para la administración manual. Sin embargo, la fuerza necesaria para administrar 200 mg/ml de belimumab desde una jeringa precargada de 1 ml de largo a través de una aguja de pared delgada 29G está cerca del límite deseable para la inyección manual, y se preferiría una aguja más ancha.
Tabla 7 Fuerzas de inyección de plumas comercialmente disponibles a 80 mm/min
Tiempo de Fuerza de suministro Aguja provista Empresa Indicación inyección (N) (segundos) Ypsomed Penfine
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29Gx1/2"
Figure imgf000015_0002
EMD Ser Infecundidad 22,3 5,3
diabetes de
Lantus Ninguna (se recomienda tipo 2 o de tipo
SoloStar BD) Sanofi-A I 6,4* 11,3 Lantus hepatitis
SoloStar BD Microfine 30Gx8mm Schering crónica 21,1 7,1
Lantus Ninguna (se recomienda
SoloStar BD) Eli Lilly
Figure imgf000015_0003
diabetes 24,9* 7,1
Ninguna (se
Lantus recomiendan 29, 30, Amylin Pharmaceuticals diabetes d
SoloStar 31G) Eli Lilly tipo 2 13,4* 4,1
Lantus Ninguna (se recomienda Tratamient
SoloStar Novofine) Novo Nordisk
Figure imgf000015_0006
con GH
Figure imgf000015_0005
13,8* 9,4
Lantus Ninguna (se recomienda
SoloStar BD) Eli Lilly osteoporosis 24,1*
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5,3
* Suministrada usando una aguja Ypsomed Penfine 29Gx12.7mm
Variantes de tamaño
Datos de SEC-HPLC de 3 meses
La agregación, observada mediante SEC-HPLC, fue la vía dependiente de la concentración predominante para belimumab en todas las formulaciones. El porcentaje de fragmentación (observado como un hombro posterior) fue variable entre un 0,1 y 0,2 %, pero no cambió a lo largo del tiempo (respaldado por datos del 5 % de los meses).
Después de 3 meses a 2-8 °C, se observaron claras diferencias en la tasa de agregación (figura 4) entre belimumab formulado en las ocho formulaciones. La formulación 5 (histidina/NaCl/arginina) mostró la tasa más baja durante tres meses, particularmente a 200 mg/ml (azul en la figura 4). Esto se vio respaldado por las tendencias aceleradas a 200 mg/ml (figura 5). El succinato fue el peor estabilizante a bajas temperaturas, pero el mejor a temperaturas elevadas. Muchas de las otras formulaciones de sal y azúcar, incluyendo la formulación 1 (histidina/NaCl), mostraron porcentajes de agregados absolutos y tasas de agregación similares.
Datos de SEC-HPLC a los 5% meses
Se evaluó belimumab en las formulaciones 1 y 5 al 5 % de los meses. Las tendencias observadas a los 3 meses continuaron, con la formulación que contiene arginina que muestra una menor tasa de agregación, especialmente a la concentración más alta de 200 mg/ml. La figura 6 muestra las tasas de agregación después del 5 % de los meses a una temperatura hasta 25 °C, y muestra que la formulación de arginina (recuadros blancos en el gráfico) amortigua significativamente la agregación en comparación con la formulación 1 (recuadros rellenos). Un análisis más detallado de las tasas de agregación a varias temperaturas en la figura 7 muestra como de consistente muestra la formulación 5 (líneas discontinuas) una tasa de agregación más baja que la formulación 1 (líneas continuas). Si la tasa de agregación a 2-8 °C observada hasta el 5 % de los meses se mantiene durante 3 años, FDP solo aumentaría aproximadamente un 1,2 %.
CGE
La electroforesis en gel capilar reductor de las formulaciones 1 y 5 no mostró tendencias después del 5 % de los meses de almacenamiento a diversas temperaturas (tasas mostradas en la figura 8). Por lo tanto, la reticulación y el corte no dependen de la concentración o la formulación.
Heterogeneidad de carga
El intercambio de iones indica que ni la concentración ni la adición de arginina a una formulación de sal amortiguada con histidina afecta a las variantes de carga (figura 9). Aunque las variantes ácidas aumentan a lo largo del tiempo a temperaturas elevadas, se observó poco o ningún cambio en las variantes después del 5 % de los meses.
Oxidación
No se observaron cambios significativos en la oxidación entre ninguna de las 8 formulaciones después de 3 meses de almacenamiento a 2-8 °C (datos no mostrados). Después del 5 % de los meses, al comparar datos de -80 °C y 15 °C, no se observaron diferencias en la oxidación entre las formulaciones 1 y 5 o entre las tres concentraciones en cualquiera de las formulaciones (figura 10). Se observó aproximadamente un 1,0 % de oxidación adicional en todas las muestras después del 5 % de los meses de almacenamiento a 25 °C, y aproximadamente un 4,5 % de oxidación adicional a 40 °C.
Mapeo de péptidos
No se observaron diferencias entre las muestras de 200 mg/ml de la formulación 1 a -80 °C y 2-8 °C o el patrón de referencia después del 5 % de los meses (figura 11). La muestra a 25 °C mostró un pequeño aumento en la desamidación de T4, como se esperaba a temperaturas aceleradas. De manera similar, la muestra de la formulación 5 mostró desamidación de T4 solamente a 25 °C, pero también mostró alturas de pico inconsistentes en otros picos de péptidos diferentes (T33, T34 y T5 de la cadena pesada, T3 de la cadena ligera de la figura 12). Estas alturas de pico no mostraron tendencia con la temperatura, por lo que se sospechó que la arginina interfería en la digestión.
Para determinar si la interferencia de la arginina era la causa de la variabilidad, se añadió arginina 0, 25 y 50 mM a una muestra de la formulación 1 que había pasado por el paso de desalinización del método. A continuación, las tres muestras se analizaron a través de las etapas restantes, que incluyen la digestión con tripsina. Los mismos picos peptídicos que mostraron variabilidad en las muestras de estabilidad mostraron respuestas que se correlacionaron con la concentración de arginina (figura 13). Esto indica que es posible que la arginina no siempre se elimine por completo en la etapa de desalinización y explica la variación independiente de la temperatura observada en los mapas de péptidos de las muestras formuladas en la formulación 5. Debido a que no se observaron otras modificaciones en los mapas de péptidos, se puede suponer que a pesar de las diferencias en los mapas, las formulaciones 1 y 5 no tuvieron ninguna degradación observable después del 5 % de los meses a 2-8 °C, y solamente una degradación mínima después del 5 % de los meses a 25 °C.
Potencia
Belimumab permanece biológicamente activo después del almacenamiento a 2-8 °C durante 3 meses en la formulación 1 o la formulación 5 entre 125 y 200 mg/ml, o después del 5 % de los meses en la formulación 5 a 200 mg/ml (tabla 8).
Tabla 8 Potencia relativa después de la estabilidad a 2-8 °C
% de potencia relativa
3 meses 5 Va meses
200 mg/ml de formulación
5 102 %
125 mg/ml de formulación
5 106 %
200 mg/ml de formulación
1 90 %
125 mg/ml de formulación
1 102 %
Figure imgf000016_0001
Evaluación de congelación/descongelación
Las muestras expuestas a 5 ciclos rápidos de congelación/descongelación entre -40 °C y 2-8 °C tuvieron una cantidad similar de agregación que las muestras de control de -40 °C, lo que indica que la congelación/descongelación rápida no es una preocupación ni en la formulación 1 ni en la formulación 5 (tabla 9).
Tabla 9 Resultados de SEC-HPLC de belimumab expuesto a congelación/descongelación rápida
% de agregado
Formulación 1 Formulación 5
ctrl a 2-8 °C 0,6 0,6
ctrl a -20 °C 0,8 0,8
ctrl a -40 °C 0,6 0,7
control a -80 ° 0,6 0,6
5X ciclo a -40
Figure imgf000016_0002
0,7
Figure imgf000016_0003
0,7
Las muestras expuestas a 3 ciclos lentos de congelación/descongelación mostraron un aumento del 0,2 % en el nivel de agregado en comparación con los controles líquidos (tabla 10).
Tabla 10 Resultados de SEC-HPLC de belimumab expuesto a congelación/descongelación lenta
Muestra % de agregado % de pico
principal % de recorte
Control líquido de la formulación
1 0,7 99,1 0,2
Congelación/descongelación
lenta de la formulación 1 0,9 98,9 0,2
Control líquido de la formulación
5 0,6 99,2 0,1
Congelación/descongelación
lenta de la formulación 5
Figure imgf000017_0003
0,8
Figure imgf000017_0001
99,1
Figure imgf000017_0002
0,2
DSC
Se usó calorimetría para evaluar la transición vítrea (Tg') por debajo del punto de congelación de cada formulación y para determinar si se formó un eutéctico por debajo del punto de congelación. El eutéctico de cloruro de sodio: agua puede formarse por debajo de aproximadamente -21 °C, y la cristalización eutéctica de los excipientes puede afectar la calidad del producto al introducir interacciones en la superficie cristalina y cambiar el entorno químico local en el concentrado congelado que contiene proteína. El almacenamiento por debajo de Tg' puede mejorar la estabilidad aumentando el tiempo de relajación y reduciendo la degradación asociada.
Las formulaciones 1 y 5 de alta concentración de belimumab tuvieron un comportamiento similar con respecto a las transiciones por debajo del punto de congelación (tabla 11). Para la formulación 1, Tg' osciló entre -23 °C (congelación más rápida) y -33 °C (congelación más lenta). Para la formulación 5, Tg' osciló entre -22 °C (congelación más rápida) y -32 °C (congelación más lenta). Para ambas formulaciones, se observó una endotermia eutéctica solo después del ciclo térmico con múltiples etapas de recocido a -23 °C. El eutéctico probablemente era cloruro de sodio - agua.
Estos resultados indican que las transiciones térmicas por debajo del punto de congelación de estas formulaciones son sensibles al historial térmico de la muestra. Esto probablemente se deba al alto contenido de sólidos disueltos y a la presencia de cloruro de sodio, que puede afectar a la Tg' en la fase proteica/amorfa. Los resultados, junto con los datos de estabilidad a -80 °C y -40 °C de la Sección 5.2, también indican que el almacenamiento de BDS a < -40 °C y protegido de la luz es suficiente para belimumab en la formulación 5.
Tabla 11 Resultados de DSC para belimumab en la formulación 5 y la formulación 1 Muestra Formulación 1: Formulación 5:
Masa de
muestra (mg) 16,5 16,5
Tg' -22 °C
Endotermia
Figure imgf000017_0004
eutéctica No se No se observó eutéctico
Masa de
muestra (mg) 15,7 16,7
Recocido de congelación
media a -40 °C Tg'
Endotermia
eutéctica No se No se observó eutéctico Masa de
muestra (mg) 16,9 16,3
Recocido de congelación
media a -23 °C Tg'
Endotermia
eutéctica No se No se observó eutéctico Masa de
muestra (mg) 17,7 16,3
Tg' Débil Débil -32 °C
Endotermia
Figure imgf000017_0006
eutéctica No se No se observó eutéctico
Masa de
muestra (mg) 15,3
Figure imgf000017_0005
18,6
Ciclo térmico (-80/-23oC con Después del ciclo, débil -28 °C y recocido) Tg' Después del ciclo, débil -31 °C -18 °C
Endotermia
eutéctica Entre -16 °C y -12 °C (0,6 J/g) Entre -16 °C y -12 °C (0,7 J/g) Evaluación de la agitación
Después de 48 horas de agitación a 250 rpm, no hubo cambios significativos en la pureza por SEC-HPLC ni en la turbidez ni en el vial ni en la jeringa en el intervalo de concentraciones de polisorbato estudiado (tabla 12). Se demostró que el polisorbato 80 al 0,01 % es eficaz y fuerte en la formulación 5 como protector contra la agitación tanto en un vial como en una jeringa.
Tabla 12 SEC-HPLC y turbidez de belimumab en la formulación 5 después de agitar a 250 rpm
% pico principal por SEC Turbidez (NTU) Cierre de recipientes Muestra 0 h. 24 h. 48 h. 0 h. 48 h.
Control (sin agitación) 99,4 99,3 99,3 37 38
PS80 bajo (0,005 %) 99,4 99,3 99,3 35 35
PS80 objetivo (0,01 %) 99,4 99,3 99,3 33 37
Vial PS80 alto (0,02 %) 99,4 99,4 99,4 30 33
Control (sin agitación) 99,4 99,3 99,3 37 38
PS80 bajo (0,005 %) 99,4 99,3 99,3 35 35
PS80 objetivo (0,01 %) 99,4 99,3 99,3 33 34
Jerin
Figure imgf000018_0004
PS80 alto (0,02 %) 99,4 99,3
Figure imgf000018_0002
99,4
Figure imgf000018_0001
30
Figure imgf000018_0003
32
Conclusiones
Se eligió una formulación para la administración subcutánea de belimumab a 200 mg/ml en función de su capacidad para minimizar las tasas de la vía de degradación primaria (formulación 5; 0,65 mg/ml de L-histidina, 1,2 mg/ml de monoclorhidrato de L-histidina, 6,7-7,3 mg/ml de cloruro de sodio, 5,3 mg/ml de clorhidrato de L-arginina, 0,1 mg/ml de polisorbato 80, pH 6,0; o, como alternativa, histidina 10 mM, cloruro de sodio 115 mM, monoclorhidrato de L-arginina 25 mM, polisorbato 80 al 0,01 % (p/v), pH 6,0). Se demostró que la tasa de agregación (~0,03 %/mes a 2­ 8 °C) aumentaba con la concentración de belimumab, pero se inhibió con el uso de arginina 25 mM. La tasa de desamidación fue de aproximadamente 0,2 %/mes a 2-8 °C. La formulación de 200 mg/ml tiene una fuerza de suministro aceptable para suministro manual o con autoinyector utilizando una jeringa larga de 1 ml y una aguja de pared delgada 29G o más ancha. Se demostró que los perfiles de congelación/descongelación y el almacenamiento a -80 °C y -40 °C son aceptables, y el producto no es susceptible a la agitación.
Se realizaron estudios de estabilidad de GMP a largo plazo en 200 mg/ml del producto farmacéutico final de belimumab en la formulación 5 (1,0 ml introducido en una jeringa BD larga de 1,0 ml). Hasta la fecha, hay 42 meses de datos de estabilidad de GMP a la temperatura de almacenamiento prevista de 2-8 °C (tabla 14). Los resultados indican que la formulación 5 proporciona una estabilidad adecuada a belimumab con perfiles de degradación aceptables observados a la temperatura de almacenamiento prevista de 2-8 °C (tabla 14).
Figure imgf000019_0001
Ċ
Figure imgf000020_0001
20
Figure imgf000021_0001
Listado de secuencias
SEQ ID NO: 1 BLyS
MDDSTEREQS RLTSCLKKRE EMKLKECVSI LPRKESPSVR SSKDGKLLAA TLLLALLSCC LTVVSFYQVA ALQGDLASLR AELQGHHAEK LPAGAGA PKA GLEEAPAVTA GLKIFEPPAP GEGNSSQNSR NKRAVQGPEE TVTQDCLQLI ADSETPTIQK GSYTFVPWLL SFKRGSALEE KENKILVKET GYFFIYGQVL YTDKTYAMGH LIQRKKVHVF GDELSLVTLF RCIQNMPETL PNNSCYSAGI AKLEEGDELQ LAIPRENAQI SLDGDVTFFG ALKLL
SEQ ID NO: 2 VH de belimumab
QVQLQQSGAE VKKPGSSVRV SCKASGGTFN NNAINWVRQA PGQGLEWMGG IIPMFGTAKY
SQNFQGRVAI TADESTGTAS MELSSLRSED TAVYYCARSR DLLLFPHHAL SPWGRGTMVT
VSS
SEQ ID NO: 3 VL de belimumab
SSELTQDPAV SVALGQTVRV TCQGDSLRSY YASWYQQKPG QAPVLVIYGK NNRPSGIPDR FSGSSSGNTA SLTITGAQAE DEADYYCSSR DSSGNHWVFG GGTELTVLG
SEQ ID NO: 4 VH de tabalumab
MKHLWFFLLL VAAPRWVLSQ VQLQQWGAGL LKPSETLSLT CAVYGGSFSG YYWSWIRQPP GKGLEWIGEI NHSGSTNYNP SLKSRVTISV DTSKNQFSLK LSSVTAADTA VYYCARGYYD ILTGYYYYFD YWGQGTLVTV SS
SEQ ID NO: 5 VL de tabalumab
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS RYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGSGTD STLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPRTFGQ GTKVEIKRT
SEQ ID NO: 6 Cadena pesada de belimumab
QVQLQQSGAE VKKPGSSVRV SCKASGGTFN NNAINWVRQA PGQGLEWMGG IIPMFGTAKY SQNFQGRVAI TADESTGTAS MELSSLRSED TAVYYCARSR DLLLFPHHAL SPWGRGTMVT VSSASTKGPS VFPLAPSSKS TSGGTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS VVTVPSSSLG TQTYICNVNH KPSNTKVDKK VEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK
SEQ ID NO: 7 Cadena ligera de belimumab
SSELTQDPAV SVALGQTVRV TCQGDSLRSY YASWYQQKPG QAPVLVIYGK NNRPSGIPDR FSGSSSGNTA SLTITGAQAE DEADYYCSSR DSSGNHWVFG GGTELTVLGQ PKAAPSVTLF PPSSEELQAN KATLVCLISD FYPGAVTVAW KADSSPVKAG VETTTPSKQS NNKYAASSYL SLTPEQWKSH RSYSCQVTHE GSTVEKTVAP TECS
SEQ ID NO: 8 Cadena pesada de tabalumab

Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Una formulación farmacéutica para un anticuerpo monoclonal que comprende:
a. 200 mg/ml de anticuerpo monoclonal;
b. 10 mM de un agente amortiguador de histidina;
c. 115 mM de NaCl;
d. 25 mM de arginina; y
e. 0,01 % (p/v) de polisorbato 80; a pH 6,0; y
en donde el anticuerpo monoclonal comprende cadenas pesadas y ligeras que comprenden las secuencias de aminoácidos de las s Eq ID NO: 6 y 7.
2. La formulación farmacéutica según la reivindicación 1, en donde la formulación comprende:
a. 200 mg/ml de anticuerpo monoclonal;
b. 0,65 mg/ml de L-histidina;
c. 1,2 mg/ml de monoclorhidrato de L-histidina
d. 6,7 - 7,3 mg/ml de NaCl;
d. 5,3 mg/ml de clorhidrato de L-arginina; y
e. 0,1 mg/ml de polisorbato 80;
a pH 6,0.
3. La formulación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es estable al congelarse y descongelarse.
4. La formulación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para administración subcutánea o intramuscular.
5. La formulación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para administración subcutánea.
6. La formulación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en forma líquida, reconstituida, liofilizada o secada por aspersión.
7. La formulación farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en forma líquida.
8. Un dispositivo de inyección que comprende la formulación farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
9. Un kit que comprende uno o más viales que contienen la formulación farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -7 e instrucciones para la administración subcutánea de la formulación farmacéutica a un paciente.
10. Un kit según la reivindicación 9 y que comprende además un dispositivo de inyección que comprende la formulación farmacéutica.
11. La formulación farmacéutica, el dispositivo de inyección o el kit según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno susceptible de tratamiento con un anticuerpo anti-BLyS.
12. La formulación farmacéutica para su uso según la reivindicación 11, en donde la formulación se administra una vez por semana.
13. La formulación farmacéutica, el dispositivo de inyección o el kit para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11-12, en donde la formulación farmacéutica se coadministra de forma concomitante o secuencial con un corticosteroide.
14. La formulación farmacéutica, el dispositivo de inyección o el kit para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11-13 para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, vasculitis por anticuerpos contra el citoplasma de neutrófilos (ANCA), nefritis lúpica, síndrome de Sjogren primario, trombocitopenia inmunitaria crónica, miastenia grave, macroglobulinemia de Waldenstrom sintomática, desensibilización inmunitaria de pacientes que esperan un trasplante de riñón, nefropatía membranosa, esclerosis sistémica, artritis reumatoide, mieloma múltiple, esclerosis múltiple e insuficiencia renal.
15. La formulación farmacéutica, el dispositivo de inyección o el kit para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11-14 para su uso en el tratamiento de lupus eritematoso sistémico.
16. La formulación farmacéutica, el dispositivo de inyección o el kit para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 11-14 para su uso en el tratamiento del síndrome de Sjogren.
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