KR102469406B1 - 재발된 및/또는 난치성 고형 종양 및 비-호지킨 림프종의 치료 - Google Patents

재발된 및/또는 난치성 고형 종양 및 비-호지킨 림프종의 치료 Download PDF

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Abstract

라이신 특이적 탈메틸화효소(demethylase)-1(LSD-1)의 억제에 유용한 치환된 헤테로환형 유도체 화합물 및 이 화합물을 포함하는 약학 조성물을 사용하여 재발된 및/또는 난치성 고형 종양(신경내분비 암종(NEC)) 및 비-호지킨 림프종(NHL) 등을 포함함)을 치료하는 방법이 제공된다.

Description

재발된 및/또는 난치성 고형 종양 및 비-호지킨 림프종의 치료
관련 출원
본원은 2016년 8월 10일자로 출원된 미국 가특허출원 제62/373,263호, 및 2017년 3월 8일자로 출원된 미국 가특허출원 제62/468,424호를 우선권으로 주장하며, 이들 가특허출원은 모두 그 전체가 모든 목적상 본원에 참고로 인용된다.
분야
본원에 기재된 실시양태는 암 및 신생물성 질환을 치료하는 조성물, 제제 및 방법을 제공하는데; 이때 이러한 치료는 라이신 특이적 탈메틸화효소(demethylase)-1(LSD-1) 억제제의 투여를 포함하는 요법을 포함한다.
암, 예컨대, 기저 세포 암종, 재발된 또는 난치성 비-호지킨 림프종(NHL), 다형성 교모세포종, 역형성 성상세포종, 또는 다른 진행된 고형 종양을 가진 피험자를 치료하는 조성물, 제제 및 방법에 대한 필요성이 남아 있다.
예를 들면, 기저 세포 암종(BCC)은 전세계에 걸쳐 흔한 암이고, 이의 발병률은 증가한다. 미국에서만, 해마다 3백 5십만 초과의 새로운 환자들이 비-흑색종 피부암으로 진단받는다. 대다수의 BCC는 국소 요법, 수술, 방사선요법 또는 이들의 조합에 의해 치유될 수 있다. 그러나, BCC가 태양에 노출된 영역, 예컨대, 안면에서 흔히 발생하기 때문에, 진행된 BCC는 관련된 신체적 및 정신적 후유증과 함께 상당한 미관손상 및 이환율을 종종 야기한다. 또한, 이 암들 중 극히 일부는 전이성을 띠고 전형적인 요법에 잘 반응하지 않는다. 거의 모든 BCC들이 조절되지 않는 세포 생장을 자극하는 비정상적인 헤지호그(hedgehog)(Hh) 신호전달과 관련되어 있고, 여러 치료 Hh 억제제들이 BCC를 치료하는 데 유용한 것으로 입증되었다. 불행하게도, 약 20%의 BCC들은 통상적으로 약물 결합 포켓을 방해하거나, Hh 신호전달 활성을 증가시키거나 억제제 유전자들의 동시적 카피 수 변화를 통해 작용하는 돌연변이에 의한 Hh 경로 재활성화를 통해 현재의 Hh 억제제들에 대한 내성을 발생시킨다. 환자들은 예를 들면, 관련 신호전달 경로의 다운스트림에서 단백질을 표적화함으로써 이 내성 경로들을 극복하는, 내약성이 우수한 물질의 개발로부터 이익을 얻을 것이다.
본 개시의 양태 및 실시양태는 암 및 신생물성 질환을 가진 피험자, 예컨대, 진행된 고형 종양, 재발된 또는 난치성 고형 종양(신경내분비 암종(NEC) 및 비-호지킨 림프종을 포함함), 다형성 교모세포종, 역형성 성상세포종, 기저 세포 암종 또는 다른 암을 가진 피험자를 치료하는 방법 및 약학 조성물을 제공한다. 적어도 하나의 실시양태는 암 및 신생물성 질환을 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 적어도 하나의 LSD-1 억제제를, 이러한 치료를 필요로 하는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
한 실시양태는 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 사용하는 치료 방법을 제공한다:
Figure 112019023638871-pct00001
상기 식에서,
W는 N, C-H 또는 C-F이고;
X는 수소, 할로겐, -CN, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴알키닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
Y는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 사이클로알킬알킬이고;
Z는 알킬, 카르보사이클릴, C-부착된 헤테로사이클릴, N-부착된 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로사이클릴알케닐, -O-헤테로사이클릴, -N(R)-헤테로사이클릴, -O-헤테로사이클릴알킬, -N(R)-헤테로사이클릴알킬, -N(R)(C1-C4알킬렌)-NR2, -O(C1-C4알킬렌)-NR2로부터 선택된 임의로 치환된 기이고, R은 수소 또는 C1-C4알킬이다.
한 실시양태는 화학식 (Ia)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 사용하는 치료 방법을 제공한다:
Figure 112019023638871-pct00002
상기 식에서,
W는 N, C-H 또는 C-F이고;
X는 수소, 할로겐, -CN, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴알키닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
Y는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 사이클로알킬알킬이고;
Z는 N-부착된 헤테로사이클릴, -O-헤테로사이클릴알킬, -N(H)-헤테로사이클릴, -N(Me)-헤테로사이클릴, -N(H)-헤테로사이클릴알킬 또는 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이다.
한 실시양태는 화학식 (Ib)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 사용하는 치료 방법을 제공한다:
Figure 112019023638871-pct00003
상기 식에서,
W는 N, C-H 또는 C-F이고;
X는 수소, 할로겐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴알키닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
Y는 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 임의로 치환된 사이클로알킬이고;
Z는 N-헤테로사이클릴, -O-헤테로사이클릴알킬, -N(H)-헤테로사이클릴알킬 또는 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이다
한 실시양태는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 사용하는 치료 방법을 제공한다. 한 실시양태는 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 사용하는 치료 방법을 제공한다. 한 실시양태는 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 사용하는 치료 방법을 제공한다.
한 실시양태는 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 효소를 화학식 (I)의 화합물에 노출시킴으로써 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 활성을 억제하는 단계를 포함하는, 세포에서 유전자 전사의 조절을 이용하는 치료 방법을 제공한다. 한 실시양태는 라 이신 특이적 탈메틸화효소 1 효소를 화학식 (Ia)의 화합물에 노출시킴으로써 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 활성을 억제하는 단계를 포함하는, 세포에서 유전자 전사의 조절을 이용하는 치료 방법을 제공한다. 한 실시양태는 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 효소를 화학식 (Ib)의 화합물에 노출시킴으로써 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 활성을 억제하는 단계를 포함하는, 세포에서 유전자 전사의 조절을 이용하는 치료 방법을 제공한다.
한 실시양태는 암의 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태는 암의 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태는 암의 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
도 1은 NCI-H1417, NCI-H209 및 NCI-H69 세포에서 가스트린 방출 펩타이드 메신저 리보핵산 발현에 대한 화합물 A의 효과를 보여준다. DMSO = 디메틸설폭사이드; GRP = 가스트린 방출 펩타이드; IC50 = 절반 최대 억제 농도; mRNAb = 메신저 리보핵산; RNA = 리보핵산. 데이터는 NCI-H1417 및 NCI-H209에 대한 3회의 독립적인 실험들, 및 NCI-H69에 대한 2회의 독립적인 실험들에 대한 평균 퍼센트 활성으로서 제시되고, 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
도 2는 NCI-H69 및 NCI-H209 세포의 데옥시리보핵산에 결합하는 라이신 특이적 탈메틸화효소 1의 염색질 면역침전 및 시퀀싱 분석을 보여준다. Chr = 염색체; GRP = 가스트린 방출 펩타이드; H3K4me1 = 모노메틸 히스톤 H3 라이신 4; LSD1 = 라이신 특이적 탈메틸화효소 1; SCLC = 소세포 폐암; 2종의 LSD1 항체들(항-KDM1/LSD1 항체[abcam®, 매사추세츠주 캠브리지 소재, 카탈로그 번호 ab17721] 및 항-BHC110/LSD1 항체[Bethyl Laboratories, 텍사스주 몬트고메리 소재, 카탈로그 번호 A300-215A]) 및 H3K4me1 항체(abcam®, 매사추세츠주 캠브리지 소재, 카탈로그 번호 ab8895)로부터의 결과는 표준화된 백만당 판독정보(reads per million)로서 브라우저 트랙에 표시되어 있다. 각각의 트랙 아래의 흑색 막대는 배경보다 더 진한(즉, 결합된) 영역을 표시한다. 적색 타원은 LSD1 및 H3K4me1에 의해 동시점유된 조절 영역을 표시한다. 인간 18번 염색체 상의 GRP 유전자의 위치가 표시되어 있다. 상자는 좌측에서 첫 번째 엑손으로 전사의 방향을 표시하는 화살표로 선에 의해 연결된 엑손들을 표시한다. GRP에 인접한 유전자는 회색으로 표시되어 있다. 투입 대조군으로부터의 판독정보는 각각의 세포주에 대해 표시되어 있다(배경).
도 3은 NCI-H1417 소세포 폐암 이종이식편 모델에서 인간 가스트린 방출 펩타이드 메신저 리보핵산 발현에 대한 화합물 A의 효과를 보여준다. ANOVA = 분산 분석; ns = 통계학적으로 유의미하지 않음. 도표는 평균 ± 표준 편차에서 수평선으로, 기재된 바와 같이 계산된 개별 2-ΔΔCt 값을 보여주는데; 이때 p-값은 일원 ANOVA에 이은 던넷 다중 비교 검정(화합물 A 대 대조군)을 이용함으로써 계산되었다.
도 4는 화합물 A 또는 비히클 대조군의 투여에 의한 SCLC 이종이식편의 종양 성장 억제를 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 작도되었다.
도 5는 화합물 A 또는 비히클 대조군의 투여에 의한 SCLC 이종이식편의 종양 성장 억제를 보여주는 그래프이다. BID는 매일 2회이고; PO는 경구 투약이고; QDX28은 28일 동안 매일 1회이고; 종양 부피는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 작도되었다.
도 6은 LU2514 연구로부터 종양 조직의 헤마톡실린 및 에오신 염색 영상이다.
도 7은 화합물 A 또는 비히클 대조군의 투여에 의한 SCLC 이종이식편의 종양 성장 억제를 보여주는 그래프이다. BID는 매일 2회이고; PO는 경구 투약이고; QDX21은 21일 동안 매일 1회이고; 종양 부피는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 작도되었다.
도 8은 화합물 A 또는 비히클 대조군의 투여에 의한 SCLC 이종이식편의 종양 성장 억제를 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 작도되었다.
도 9는 화합물 A 또는 비히클 대조군의 투여에 의한 SCLC 이종이식편의 종양 성장 억제를 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 작도되었다.
도 10은 화합물 A 또는 비히클 대조군의 투여에 의한 SCLC 이종이식편의 종양 성장 억제를 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 작도되었다.
도 11은 LU2527 연구 동안 46일째 날 평균 순 종양 부피 차이를 보여주는 그래프이다. 개방된 부호는 좋지 않은 종양 생착으로 인해 검열된 데이터를 나타내고; 21일째 날 연구에서 빠진 또 다른 대조군 동물에 대한 데이터(제시되지 않음)는 아마도 경구 위관영양법 오류로 인한 우발적인 사망으로서 검열되었다.
도 12는 LU2527에 대한 평균 종양 성장을 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 46일째 날 수직선은 TGI 분석일을 표시한다.
도 13은 LU2527에 대한 퍼센트 평균 체중 변화를 보여주는 그래프이다. 체중은 % 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 46일째 날 수직선은 TGI 분석일을 표시하고, 0% 및 -10%에서의 수평선은 평균 체중 변화를 표시한다.
도 14는 GA0087 연구 동안 53일째 날 평균 순 종양 부피 차이를 보여주는 그래프이다. 개방된 부호는 좋지 않은 종양 생착으로 인해 검열된 데이터를 나타낸다.
도 15는 GA0087에 대한 평균 종양 성장을 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 53일째 날 수직선은 TGI 분석일을 표시한다.
도 16은 GA0087에 대한 퍼센트 평균 체중 변화를 보여주는 그래프이다. 체중은 % 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 53일째 날 수직선은 TGI 분석일을 표시하고, 0% 및 -10%에서의 수평선은 평균 체중 변화를 표시한다.
도 17은 화합물 A를 사용한 hMCC 세포주에 대한 증식 억제를 보여주는 그래프이다. 대조군의 퍼센트 = 데이터 분석 단락에 기재된 바와 같이, 퍼센트로서 표현된, 생존 가능한 음성 대조군 세포의 평균 수로 표준화된 생존 가능한 화합물 A 처리 세포의 수; 각각의 그래프의 경우, 데이터는 대조군의 평균 퍼센트 ± 생물학적 반복실험에 대한 표준 편차로서 제공된다.
도 18은 15일째 날 MKL-1 순 종양 부피를 보여주는 그래프이다. 부호는 순 종양 부피를 나타낸다. 점선으로 표시된 바와 같이, 화합물 A 처리군과 비히클 대조군 사이의 평균 순 종양 부피의 차이에 대한 퍼센트(%) TGI 및 통계학적 결과가 제시되어 있다.
도 19는 MKL-1 평균 종양 성장을 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 수직 점선은 TGI 분석일인 15일째 날에 표시되어 있다.
도 20은 MKL-1에 대한 퍼센트 평균 체중 변화를 보여주는 그래프이다. 체중은 % 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 수직 점선은 TGI 분석일인 15일째 날에 표시되어 있고, 0%에서의 수평 점선은 평균 체중 변화를 표시한다.
도 21은 36일째 날 MS-1 순 종양 부피를 보여주는 그래프이다. 부호는 0 mm3 순 종양 부피에서 수평 파선으로 순 종양 부피를 나타낸다. 점선에 의해 표시된 바와 같이, 화합물 A 처리군과 비히클 대조군 군 사이의 평균 순 종양 부피의 차이에 대한 퍼센트(%) TGI 및 통계학적 결과가 제시되어 있다.
도 22는 MS-1 평균 종양 성장을 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 수직선은 TGI 분석일인 36일째 날에 표시되어 있다.
도 23은 MS-1에 대한 퍼센트 평균 체중 변화를 보여주는 그래프이다. 체중은 % 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 수직 점선은 TGI 분석일인 36일째 날에 표시되어 있고, 0%에서의 수평 점선은 평균 체중 변화를 표시한다.
도 24는 RNA-seq에 의해 확인된 유전자 발현의 화합물 A 조절을 보여주는 그래프이다. 벤 도표는 2종의 hMCC 세포주 MKL-1 및 MS-1에서 10 nM 및/또는 100 nM 화합물 A에 반응하여 상향조절되었거나(상부) 하향조절된(하부) 유전자를 보여준다.
도 25는 시험관내 및 생체내에서 약력학적 바이오마커 유전자 발현의 화합물 A 용량 반응을 보여주는 그래프이다. 적정 곡선은 시험관내 세포 배양물에 대한 용량 반응 및 EC50 값을 보여주고, 이때 "x"를 가진 개방된 원형 부호는 검열된 데이터 점이다(좌측). 상응하는 상자수염도는 이종이식편 연구에서 생체내 용량 반응을 보여준다(우측). 점선은 최대 평균 반응을 표시한다.
도 26은 LSD1 점유 및 H3K4me2 상태의 ChIP-seq 분석을 보여주는 그래프이다. hMCC 세포주 MKL-1 및 MS-1 내의 ST18 및 FREM2 유전자에서 LSD1 및 H3K4me2의 풍부함을 보여주는 게놈 브라우저 뷰. LSD1 피크 트랙(녹색)은 배경에 비해 LSD1이 풍부한 영역의 위치를 나타낸다. H3K4me2 ChIP-seq 트랙(청색)은 비히클 또는 화합물 A 처리 샘플에서 H3K4me2 결합을 보여준다. 투입 트랙은 대조군으로서 표시되어 있다. RefSeq 트랙은 유전자의 위치 및 방향을 표시한다.
도 27은 카플란-메이에르(Kaplan-Meier) 도표를 보여주는 그래프이다. *가 없는 p-값은 대조군과의 Log 순위 비교에 대한 것이고, *가 있는 p-값은 에토포사이드 단일요법과의 Log 순위 비교에 대한 것이다. 15회 비교를 수행하여 p≤0.003(알파 = [0.05/15])의 유의성 수준을 수득하였다.
도 28은 평균 종양 성장을 보여주는 그래프이다. 종양 부피는 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 한 군 내의 평가 가능한 동물들 중 50% 초과의 동물들이 연구에서 빠졌을 때 도표의 끝이 잘려졌다.
도 29는 퍼센트 평균 체중 변화를 보여주는 그래프이다. 체중은 % 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 0%에서의 수평선은 평균 체중 변화를 표시한다. 한 군 내의 평가 가능한 동물들 중 50% 초과의 동물들이 연구에서 빠졌을 때 도표의 끝이 잘려졌다.
도 30은 평균 종양 성장을 보여주는 그래프이다. QD x 3 = 3일 동안 매일 1회 투약; 5일 투약/2일 중단 = 5일 동안 투약에 이은 투약 없는 2일. 종양 부피는 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 한 군 내의 평가 가능한 동물들 중 50% 초과의 동물들이 연구에서 빠졌을 때 도표의 끝이 잘려졌다.
도 31은 카플란-메이에르 도표를 보여주는 그래프이다. QD x 3 = 3일 동안 매일 1회 투약; 5일 투약/2일 중단 = 5일 동안 투약에 이은 투약 없는 2일. *가 없는 p-값은 대조군과의 Log 순위 비교에 대한 것이고, *가 있는 p-값은 에토포사이드 단일요법과의 비교에 대한 것이고, **가 있는 p-값은 화합물 A 단일요법과의 비교에 대한 것이다. 6회의 비교를 수행하여, p≤0.008(알파 = [0.05/6])의 유의성 수준을 수득하였다.
도 32는 퍼센트 평균 체중 변화를 보여주는 그래프이다. QD x 3 = 3일 동안 매일 1회 투약; 5일 투약/2일 중단 = 5일 동안 투약에 이은 투약 없는 2일. 체중은 % 평균 ± 표준 오차(SEM)로서 작도되었다. 0% 및 -10%에서의 수평선은 평균 체중 변화를 표시한다. 한 군 내의 평가 가능한 동물들 중 50% 초과의 동물들이 연구에서 빠졌을 때 도표의 끝이 잘려졌다.
도 33은 10 nM DHT, 10 nM DHT와 2Gy 방사선조사, 10 nM DHT와 100 nM 화합물 A, 및 10 nM DHT와 100 nM 화합물 A 및 2Gy 방사선조사의 처리 시 시간의 경과에 따른 LNCaP 세포 증식 어세이의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 34는 10 nM DHT, 10 nM DHT와 2Gy 방사선조사, 10 nM DHT와 100 nM 화합물 A, 및 10 nM DHT와 100 nM 화합물 A 및 2Gy 방사선조사의 처리 시 LNCaP 세포 증식 어세이의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 35는 임의의 처리의 부재 시, 또는 EtOH, DMSO, 100 nM 라파마이신(Rapamycin), 100 nM 화합물 A, 또는 100 nM 라파마이신과 100 nM 화합물 A의 조합의 처리 시 시간의 경과에 따른 LNCaP 세포 증식 어세이의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 36은 임의의 처리의 부재 시, 또는 EtOH, DMSO, 100 nM 라파마이신, 100 nM 화합물 A, 또는 100 nM 라파마이신과 100 nM 화합물 A의 조합의 처리 시 시간의 경과에 따른 LNCaP 세포 증식 어세이의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 37은 약학 조성물의 안전성 또는 효능을 입증하는 데 유용한 전체 연구 디자인의 윤곽을 보여주는 개략도이다.
도 38은 연구 프로토콜과 일치하도록 변형된, 치료 유도 설사의 관리를 위한 공개된 권고(Benson et al., 22 J. Clin. Oncol. 2918 (2004))를 보여주는 개략도이다.
참고인용
본 명세서에서 언급된 모든 공개문헌들, 특허들 및 특허출원들은 본원에서 확인된 특정 목적을 위해 본원에 참고로 인용된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명시하지 않은 한, 단수형 용어는 복수형 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "물질"의 언급은 복수의 이러한 물질들을 포함하고, "세포"의 언급은 하나 이상의 세포(또는 복수의 세포들) 및 당분야에서 숙련된 자에게 공지되어 있는 이들의 균등물 등의 언급을 포함한다. 물리적 성질, 예컨대, 분자량, 또는 화학적 성질, 예컨대, 화학식에 대한 범위가 본원에서 사용될 때, 범위의 모든 조합들 및 하위조합들, 및 이들 내의 특정 실시양태가 포함된다. 숫자 또는 수치 범위를 언급할 때 용어 "약"은 언급된 숫자 또는 수치 범위가 실험 가변성(또는 통계학적 실험 오차) 내의 근사치이므로, 일부 경우, 상기 숫자 또는 수치 범위가 언급된 숫자 또는 수치 범위의 1%와 15% 사이에서 달라질 것임을 의미한다. 용어 "포함하는"(및 관련 용어, 예컨대, "포함한다" 또는 "포함하고" 또는 "가진" 또는 "비롯한")은 다른 특정 실시양태에서, 예를 들면, 본원에 기재된 임의의 물질 조성물, 조성물, 방법 또는 과정 등의 실시양태가 기재된 특징으로 "구성되거나" "본질적으로 구성된다"는 것을 배제하기 위한 것이 아니다.
정의
반대로 특정되어 있지 않은 한, 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 하기 용어들은 하기 표시된 의미를 가진다.
"아미노"는 -NH2 라디칼을 지칭한다.
"시아노"는 -CN 라디칼을 지칭한다.
"니트로"는 -NO2 라디칼을 지칭한다.
"옥사"는 -O- 라디칼을 지칭한다.
"옥소"는 =O 라디칼을 지칭한다.
"티옥소"는 =S 라디칼을 지칭한다.
"이미노"는 =N-H 라디칼을 지칭한다.
"옥시모"는 =N-OH 라디칼을 지칭한다.
"하이드라지노"는 =N-NH2 라디칼을 지칭한다.
"알킬"은 탄소 및 수소 원자로만 구성되고 불포화를 함유하지 않고 1개 내지 15개의 탄소 원자들을 가진 직선형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼(예를 들면, C1-C15 알킬)을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 알킬은 1개 내지 13개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C13 알킬). 특정 실시양태에서, 알킬은 1개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C8 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 1개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C5 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 1개 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C4 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 1개 내지 3개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C3 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 1개 또는 2개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C2 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 1개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 5개 내지 15개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C5-C15 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 5개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C5-C8 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 2개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C2-C5 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬은 3개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C3-C5 알킬). 다른 실시양태에서, 알킬 기는 메틸, 에틸, 1-프로필(n-프로필), 1-메틸에틸(이소-프로필), 1-부틸(n-부틸), 1-메틸프로필(sec-부틸), 2-메틸프로필(이소-부틸), 1,1-디메틸에틸(tert-부틸), 1-펜틸(n-펜틸)로부터 선택된다. 알킬은 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 부착된다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 알킬 기는 하기 치환기들 중 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다: 할로, 시아노, 니트로, 옥소, 티옥소, 이미노, 옥시모, 트리메틸실라닐, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -OC(O)-N(Ra)2, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임), 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이다.
"알콕시"는 식 -O-알킬의 산소 원자를 통해 결합된 라디칼을 지칭하고, 이때 알킬은 상기 정의된 알킬 쇄이다.
"알케닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 구성되고 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하고 2개 내지 12개의 탄소 원자를 가진 직선형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 알케닐은 2개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다. 다른 실시양태에서, 알케닐은 2개 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 알케닐은 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 부착되고, 예로는 에테닐(즉, 비닐), 프로프-1-에닐(즉, 알릴), 부트-1-에닐, 펜트-1-에닐, 펜타-1,4-디에닐 등이 있다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 알케닐 기는 하기 치환기들 중 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다: 할로, 시아노, 니트로, 옥소, 티옥소, 이미노, 옥시모, 트리메틸실라닐, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -OC(O)-N(Ra)2, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임), 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이다.
"알키닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 구성되고 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하고 2개 내지 12개의 탄소 원자를 가진 직선형 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 알키닐은 2개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다. 다른 실시양태에서, 알키닐은 2개 내지 6개의 탄소 원자를 포함한다. 다른 실시양태에서, 알키닐은 2개 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 알키닐은 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 부착되고, 그 예로는 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐 등이 있다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 알키닐 기는 하기 치환기들 중 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다: 할로, 시아노, 니트로, 옥소, 티옥소, 이미노, 옥시모, 트리메틸실라닐, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -OC(O)-N(Ra)2, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임), 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이다.
"알킬렌" 또는 "알킬렌 쇄"는 탄소 및 수소로만 구성되고 불포화를 함유하지 않고 1개 내지 12개의 탄소 원자를 가진, 분자의 나머지 부분을 라디칼 기에 연결하는 직선형 또는 분지형 2가 탄화수소 쇄, 예를 들면, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, n-부틸렌 등을 지칭한다. 알킬렌 쇄는 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 부착되고 단일 결합을 통해 라디칼 기에 부착된다. 알킬렌 쇄와 분자의 나머지 부분 및 라디칼 기의 부착점(들)은 알킬렌 쇄 내의 1개 탄소 또는 상기 쇄 내의 임의의 2개 탄소이다. 특정 실시양태에서, 알킬렌은 1개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C8 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 1개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C5 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 1개 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C4 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 1개 내지 3개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C3 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 1개 또는 2개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1-C2 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 1개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C1 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 5개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C5-C8 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 2개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C2-C5 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알킬렌은 3개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C3-C5 알킬렌). 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 알킬렌 쇄는 하기 치환기들 중 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다: 할로, 시아노, 니트로, 옥소, 티옥소, 이미노, 옥시모, 트리메틸실라닐, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -OC(O)-N(Ra)2, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임), 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이다.
"알키닐렌" 또는 "알키닐렌 쇄"는 탄소 및 수소로만 구성되고 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하고 2개 내지 12개의 탄소 원자를 가진, 분자의 나머지 부분을 라디칼 기에 연결하는 직선형 또는 분지형 2가 탄화수소 쇄를 지칭한다. 알키닐렌 쇄는 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 부착되고 단일 결합을 통해 라디칼 기에 부착된다. 특정 실시양태에서, 알키닐렌은 2개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C2-C8 알키닐렌). 다른 실시양태에서, 알키닐렌은 2개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C2-C5 알키닐렌). 다른 실시양태에서, 알키닐렌은 2개 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C2-C4 알키닐렌). 다른 실시양태에서, 알키닐렌은 2개 또는 3개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C2-C3 알키닐렌). 다른 실시양태에서, 알키닐렌은 2개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C2 알킬렌). 다른 실시양태에서, 알키닐렌은 5개 내지 8개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C5-C8 알키닐렌). 다른 실시양태에서, 알키닐렌은 3개 내지 5개의 탄소 원자를 포함한다(예를 들면, C3-C5 알키닐렌). 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 알키닐렌 쇄는 하기 치환기들 중 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다: 할로, 시아노, 니트로, 옥소, 티옥소, 이미노, 옥시모, 트리메틸실라닐, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -OC(O)-N(Ra)2, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임), -S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임), 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 카르보사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이다.
"아릴"은 고리 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 방향족 단환형 또는 다환형 탄화수소 고리 시스템으로부터 유도된 라디칼을 지칭한다. 방향족 단환형 또는 다환형 탄화수소 고리 시스템은 수소 및 탄소만을 함유하고 5개 내지 18개의 탄소 원자를 갖고, 이때 고리 시스템의 고리들 중 적어도 하나의 고리는 전체적으로 불포화되어 있다. 즉, 상기 고리는 훅켈(Huckel) 이론에 따라 환형 비편재화된 (4n+2) π-전자 시스템을 함유한다. 아릴 기의 기원이 되는 고리 시스템은 벤젠, 플루오렌, 인단, 인덴, 테트랄린 및 나프탈렌을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 용어 "아릴" 또는 (예컨대, "아르알킬"에서) 접두어 "아르"는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로, 플루오로알킬, 시아노, 니트로, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아르알킬, 임의로 치환된 아르알케닐, 임의로 치환된 아르알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴, 임의로 치환된 카르보사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -Rb-S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 아릴 라디칼을 포함하기 위한 것이고, 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이고, Rb는 각각 독립적으로 직접 결합 또는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, Rc는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, 달리 표시되어 있지 않은 한, 상기 치환기들 각각은 비치환된다.
"아르알킬"은 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄, 예를 들면, 메틸렌, 에틸렌 등인 식 -Rc-아릴의 라디칼을 지칭한다. 아르알킬 라디칼의 알킬렌 쇄 부분은 알킬렌 쇄에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 아르알킬 라디칼의 아릴 부분은 아릴 기에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다.
"아르알케닐"은 Rd가 상기 정의된 알케닐렌 쇄인 식 -Rd-아릴의 라디칼을 지칭한다. 아르알케닐 라디칼의 아릴 부분은 아릴 기에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 아르알케닐 라디칼의 알케닐렌 쇄 부분은 알케닐렌 기에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"아르알키닐"은 Re가 상기 정의된 알키닐렌 쇄인 식 -Re-아릴의 라디칼을 지칭한다. 아르알키닐 라디칼의 아릴 부분은 아릴 기에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 아르알키닐 라디칼의 알키닐렌 쇄 부분은 알키닐렌 쇄에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"아르알콕시"는 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄, 예를 들면, 메틸렌, 에틸렌 등인 식 -O-Rc-아릴의 산소 원자를 통해 결합된 라디칼을 지칭한다. 아르알킬 라디칼의 알킬렌 쇄 부분은 알킬렌 쇄에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 아르알킬 라디칼의 아릴 부분은 아릴 기에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다.
"카르보사이클릴"은 3개 내지 15개의 탄소 원자를 가진, 융합된 또는 가교된 고리 시스템을 포함하는, 탄소 및 수소 원자만으로 구성된 안정한 비방향족 단환형 또는 다환형 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 카르보사이클릴은 3개 내지 10개의 탄소 원자를 포함한다. 다른 실시양태에서, 카르보사이클릴은 5개 내지 7개의 탄소 원자를 포함한다. 카르보사이클릴은 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 부착된다. 카르보사이클릴은 포화되거나(즉, 단일 C-C 결합만을 함유함) 불포화된다(즉, 하나 이상의 이중 결합 또는 삼중 결합을 함유함). 전체적으로 포화된 카르보사이클릴 라디칼은 "사이클로알킬"로서도 지칭된다. 단환형 사이클로알킬의 예로는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 및 사이클로옥틸이 있다. 불포화된 카르보사이클릴은 "사이클로알케닐"로서도 지칭된다. 단환형 사이클로알케닐의 예로는 사이클로펜테닐, 사이클로헥세닐, 사이클로헵테닐 및 사이클로옥테닐이 있다. 다환형 카르보사이클릴 라디칼은 예를 들면, 아다만틸, 노르보르닐(즉, 비사이클로[2.2.1]헵타닐), 노르보르네닐, 데칼리닐, 7,7-디메틸-비사이클로[2.2.1]헵타닐 등을 포함한다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 용어 "카르보사이클릴"은 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로, 플루오로알킬, 옥소, 티옥소, 시아노, 니트로, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아르알킬, 임의로 치환된 아르알케닐, 임의로 치환된 아르알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴, 임의로 치환된 카르보사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -Rb-S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 카르보사이클릴 라디칼을 포함하기 위한 것이고, Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이고, Rb는 각각 독립적으로 직접 결합 또는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, Rc는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, 달리 표시되어 있지 않은 한, 상기 치환기들 각각은 비치환된다.
"카르보사이클릴알킬"은 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄인 식 -Rc-카르보사이클릴의 라디칼을 지칭한다. 알킬렌 쇄 및 카르보사이클릴 라디칼은 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"카르보사이클릴알키닐"은 Rc가 상기 정의된 알키닐렌 쇄인 식 -Rc-카르보사이클릴의 라디칼을 지칭한다. 알키닐렌 쇄 및 카르보사이클릴 라디칼은 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"카르보사이클릴알콕시"는 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄인 식 -O-Rc-카르보사이클릴의 산소 원자를 통해 결합된 라디칼을 지칭한다. 알킬렌 쇄 및 카르보사이클릴 라디칼은 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "카복실산 생등배전자체"는 카복실산 모이어티와 유사한 물리적, 생물학적 및/또는 화학적 성질을 나타내는 작용기 또는 모이어티를 지칭한다. 카복실산 생등배전자체의 예로는 하기 기들 등이 있으나 이들로 한정되지 않는다:
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"할로" 또는 "할로겐"은 브로모, 클로로, 플루오로 또는 요오도 치환기를 지칭한다.
"플루오로알킬"은 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 플루오로 라디칼, 예를 들면, 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1-플루오로메틸-2-플루오로에틸 등으로 치환된 상기 정의된 알킬 라디칼을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 플루오로알킬 라디칼의 알킬 부분은 알킬 기에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"헤테로사이클릴"은 2개 내지 12개의 탄소 원자, 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1개 내지 6개의 헤테로원자를 포함하는 안정한 3원 내지 18원 비방향족 고리 라디칼을 지칭한다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 헤테로사이클릴 라디칼은 융합된 또는 가교된 고리 시스템을 임의로 포함하는 단환형, 이환형, 삼환형 또는 사환형 고리 시스템이다. 헤테로원자는 임의로 산화된다. 존재하는 경우, 하나 이상의 질소 원자는 임의로 사차화된다. 헤테로사이클릴 라디칼은 부분적으로 또는 전체적으로 포화된다. 헤테로사이클릴은 고리(들)의 임의의 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 부착된다. 이러한 헤테로사이클릴 라디칼의 예로는 디옥솔라닐, 티에닐[1,3]디티아닐, 데카하이드로이소퀴놀릴, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 옥타하이드로인돌릴, 옥타하이드로이소인돌릴, 2-옥소피페라지닐, 2-옥소피페리디닐, 2-옥소피롤리디닐, 옥사졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 퀴누클리디닐, 티아졸리디닐, 테트라하이드로푸릴, 트리티아닐, 테트라하이드로피라닐, 티오모르폴리닐, 티아모르폴리닐, 1-옥소-티오모르폴리닐 및 1,1-디옥소-티오모르폴리닐이 있으나 이들로 한정되지 않는다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 용어 "헤테로사이클릴"은 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로, 플루오로알킬, 옥소, 티옥소, 시아노, 니트로, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아르알킬, 임의로 치환된 아르알케닐, 임의로 치환된 아르알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴, 임의로 치환된 카르보사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -Rb-S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임)로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된 상기 정의된 헤테로사이클릴 라디칼을 포함하기 위한 것이고, 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이고, Rb는 각각 독립적으로 직접 결합, 또는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, Rc는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, 달리 표시되지 않은 한, 상기 치환기들 각각은 비치환된다.
"N-헤테로사이클릴" 또는 "N-부착된 헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 질소를 함유하고 분자의 나머지 부분에의 헤테로사이클릴 라디칼의 부착점이 헤테로사이클릴 라디칼의 질소 원자인 상기 정의된 헤테로사이클릴 라디칼을 지칭한다. N-헤테로사이클릴 라디칼은 헤테로사이클릴 라디칼에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 이러한 N-헤테로사이클릴 라디칼의 예로는 1-모르폴리닐, 1-피페리디닐, 1-피페라지닐, 1-피롤리디닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐 및 이미다졸리디닐이 있으나 이들로 한정되지 않는다.
"C-헤테로사이클릴" 또는 "C-부착된 헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하고 분자의 나머지 부분에의 헤테로사이클릴 라디칼의 부착점이 헤테로사이클릴 라디칼의 탄소 원자인 상기 정의된 헤테로사이클릴 라디칼을 지칭한다. C-헤테로사이클릴 라디칼은 헤테로사이클릴 라디칼에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다. 이러한 C-헤테로사이클릴 라디칼의 예로는 2-모르폴리닐, 2-피페리디닐, 3-피페리디닐, 4-피페리디닐, 2-피페라지닐, 2-피롤리디닐, 3-피롤리디닐 등이 있으나 이들로 한정되지 않는다.
"헤테로사이클릴알킬"은 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄인 식 -Rc-헤테로사이클릴의 라디칼을 지칭한다. 헤테로사이클릴이 질소 함유 헤테로사이클릴인 경우, 헤테로사이클릴은 질소 원자에서 알킬 라디칼에 임의로 부착된다. 헤테로사이클릴알킬 라디칼의 알킬렌 쇄는 알킬렌 쇄에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다. 헤테로사이클릴알킬 라디칼의 헤테로사이클릴 부분은 헤테로사이클릴 기에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"헤테로사이클릴알콕시"는 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄인 식 -O-Rc-헤테로사이클릴의 산소 원자를 통해 결합된 라디칼을 지칭한다. 헤테로사이클릴이 질소 함유 헤테로사이클릴인 경우, 헤테로사이클릴은 질소 원자에서 알킬 라디칼에 임의로 부착된다. 헤테로사이클릴알콕시 라디칼의 알킬렌 쇄는 알킬렌 쇄에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다. 헤테로사이클릴알콕시 라디칼의 헤테로사이클릴 부분은 헤테로사이클릴 기에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"헤테로아릴"은 2개 내지 17개의 탄소 원자, 및 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1개 내지 6개의 헤테로원자를 포함하는 3원 내지 18원 방향족 고리 라디칼로부터 유도된 라디칼을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 헤테로아릴 라디칼은 고리 시스템의 고리들 중 적어도 하나의 고리가 전체적으로 불포화된, 즉 훅켈 이론에 따라 환형 비편재화된 (4n+2) π-전자 시스템을 함유하는 단환형, 이환형, 삼환형 또는 사환형 고리 시스템이다. 헤테로아릴은 융합된 또는 가교된 고리 시스템을 포함한다. 헤테로아릴 라디칼의 헤테로원자(들)는 임의로 산화된다. 존재하는 경우, 하나 이상의 질소 원자는 임의로 사차화된다. 헤테로아릴은 고리(들)의 임의의 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 부착된다. 헤테로아릴의 예로는 아제피닐, 아크리디닐, 벤즈이미다졸릴, 벤즈인돌릴, 1,3-벤조디옥솔릴, 벤조푸라닐, 벤조옥사졸릴, 벤조[d]티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조[b][1,4]디옥세피닐, 벤조[b][1,4]옥사지닐, 1,4-벤조디옥사닐, 벤조나프토푸라닐, 벤즈옥사졸릴, 벤조디옥솔릴, 벤조디옥시닐, 벤조피라닐, 벤조피라노닐, 벤조푸라닐, 벤조푸라노닐, 벤조티에닐(벤조티오페닐), 벤조티에노[3,2-d]피리미디닐, 벤조트리아졸릴, 벤조[4,6]이미다조[1,2-a]피리디닐, 카바졸릴, 신놀리닐, 사이클로펜타[d]피리미디닐, 6,7-디하이드로-5H-사이클로펜타[4,5]티에노[2,3-d]피리미디닐, 5,6-디하이드로벤조[h]퀴나졸리닐, 5,6-디하이드로벤조[h]신놀리닐, 6,7-디하이드로-5H-벤조[6,7]사이클로헵타[1,2-c]피리다지닐, 디벤조푸라닐, 디벤조티오페닐, 푸라닐, 푸라노닐, 푸로[3,2-c]피리디닐, 5,6,7,8,9,10-헥사하이드로사이클로옥타[d]피리미딜, 5,6,7,8,9,10-헥사하이드로사이클로옥타[d]피리다지닐, 5,6,7,8,9,10-헥사하이드로사이클로옥타[d]피리디닐, 이소티아졸릴, 이미다졸릴, 인다졸릴, 인돌릴, 인다졸릴, 이소인돌릴, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 이소퀴놀릴, 인돌리지닐, 이속사졸릴, 5,8-메타노-5,6,7,8-테트라-하이드로퀴나졸리닐, 나프티리디닐, 1,6-나프티리디노닐, 옥사디아졸릴, 2-옥소아제피닐, 옥사졸릴, 옥시라닐, 5,6,6a,7,8,9,10,10a-옥타하이드로벤조[h]퀴나졸리닐, 1-페닐-1H-피롤릴, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 프탈라지닐, 프테리디닐, 푸리닐, 피롤릴, 피라졸릴, 피라졸로[3,4-d]-피리미디닐, 피리디닐, 피리도[3,2-d]피리미디닐, 피리도[3,4-d]피리미디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 5,6,7,8-테트라하이드로퀴나졸리닐, 5,6,7,8-테트라하이드로벤조[4,5]티에노[2,3-d]피리미디닐, 6,7,8,9-테트라하이드로-5H-사이클로헵타[4,5]티에노[2,3-d]피리미디닐, 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[4,5-c]피리다지닐, 티아졸릴, 티아디아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 트리아지닐, 티에노[2,3-d]피리미디닐, 티에노[3,2-d]피리미디닐, 티에노[2,3-c]피리디닐 및 티오페닐(즉, 티에닐)이 있으나 이들로 한정되지 않는다. 본 명세서에서 구체적으로 달리 언급되어 있지 않은 한, 용어 "헤테로아릴"은 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로, 플루오로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 옥소, 티옥소, 시아노, 니트로, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아르알킬, 임의로 치환된 아르알케닐, 임의로 치환된 아르알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴, 임의로 치환된 카르보사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tRa(이때, t는 1 또는 2임), -Rb-S(O)tORa(이때, t는 1 또는 2임) 및 -Rb-S(O)tN(Ra)2(이때, t는 1 또는 2임)로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된, 상기 정의된 헤테로아릴 라디칼을 포함하기 위한 것이고, 이때 Ra는 각각 독립적으로 수소, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 알킬, 플루오로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 사이클로알킬알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 아르알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로사이클릴알킬, (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴, 또는 (할로겐, 하이드록시, 메톡시 또는 트리플루오로메틸로 임의로 치환된) 헤테로아릴알킬이고, Rb는 각각 독립적으로 직접 결합, 또는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, Rc는 직선형 또는 분지형 알킬렌 또는 알케닐렌 쇄이고, 달리 표시되지 않은 한, 상기 치환기들 각각은 비치환된다.
"N-헤테로아릴"은 적어도 하나의 질소를 함유하고 분자의 나머지 부분에의 헤테로아릴 라디칼의 부착점이 헤테로아릴 라디칼의 질소 원자인 상기 정의된 헤테로아릴 라디칼을 지칭한다. N-헤테로아릴 라디칼은 헤테로아릴 라디칼에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다.
"C-헤테로아릴"은 분자의 나머지 부분에의 헤테로아릴 라디칼의 부착점이 헤테로아릴 라디칼의 탄소 원자인 상기 정의된 헤테로아릴 라디칼을 지칭한다. C-헤테로아릴 라디칼은 헤테로아릴 라디칼에 대해 상기 기재된 바와 같이 임의로 치환된다.
"헤테로아릴알킬"은 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄인 식 -Rc-헤테로아릴의 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴이 질소 함유 헤테로아릴인 경우, 헤테로아릴은 질소 원자에서 알킬 라디칼에 임의로 부착된다. 헤테로아릴알킬 라디칼의 알킬렌 쇄는 알킬렌 쇄에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다. 헤테로아릴알킬 라디칼의 헤테로아릴 부분은 헤테로아릴 기에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
"헤테로아릴알콕시"는 Rc가 상기 정의된 알킬렌 쇄인 식 -O-Rc-헤테로아릴의 산소 원자를 통해 결합된 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴이 질소 함유 헤테로아릴인 경우, 헤테로아릴은 질소 원자에서 알킬 라디칼에 임의로 부착된다. 헤테로아릴알콕시 라디칼의 알킬렌 쇄는 알킬렌 쇄에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다. 헤테로아릴알콕시 라디칼의 헤테로아릴 부분은 헤테로아릴 기에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 함유함으로써, 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-로서 정의된 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 다른 입체이성질체 형태를 생성한다. 달리 언급되어 있지 않은 한, 본원에 개시된 화합물의 모든 입체이성질체 형태들은 본 개시에 의해 예상된다. 본원에 기재된 화합물이 알켄 이중 결합을 함유할 때, 달리 특정되어 있지 않은 한, 본 개시는 E 및 Z 기하 이성질체(예를 들면, 시스 또는 트랜스) 둘 다를 포함한다. 마찬가지로, 모든 가능한 이성질체들뿐만 아니라, 이들의 라세미체 및 광학적으로 순수한 형태들, 및 모든 호변이성질체 형태들도 포함된다. 용어 "기하 이성질체"는 알켄 이중 결합의 E 또는 Z 기하 이성질체(예를 들면, 시스 또는 트랜스)를 지칭한다. 용어 "위치 이성질체"는 중심 고리 주위의 구조 이성질체, 예컨대, 벤젠 고리 주위의 오르토 이성질체, 메타 이성질체 및 파라 이성질체를 지칭한다.
"호변이성질체"는 분자의 한 원자로부터 동일한 분자의 또 다른 원자로의 양성자 이동이 가능한 분자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제시된 화합물은 호변이성질체로서 존재한다. 호변이성질체화가 가능한 환경에서, 호변이성질체의 화학적 평형이 존재할 것이다. 호변이성질체의 정확한 비는 물리적 상태, 온도, 용매 및 pH를 비롯한 여러 요인들에 의존한다. 호변이성질체 평형의 일부 예로는 하기 평형들이 있다:
Figure 112019023638871-pct00005
"약학적으로 허용 가능한 염"은 산 부가 염 및 염기 부가 염 둘 다를 포함한다. 본원에 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물들 중 어느 한 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 임의의 모든 약학적으로 적합한 염 형태들을 포괄한다. 본원에 기재된 화합물의 바람직한 약학적으로 허용 가능한 염은 약학적으로 허용 가능한 산 부가 염 및 약학적으로 허용 가능한 염기 부가 염이다.
"약학적으로 허용 가능한 산 부가 염"은 유리 염기의 생물학적 효능 및 성질을 보유하고 생물학적으로 또는 다른 방식으로 바람직하지 않지 않고 무기 산, 예컨대, 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 요오드화수소산, 불화수소산, 아인산 등을 사용을 통해 형성된 염을 지칭한다. 유기 산, 예컨대, 지방족 모노카복실산 및 디카복실산, 페닐 치환된 알칸산, 하이드록시 알칸산, 알칸디오산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 설폰산 등, 예를 들면, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 말론산, 석신산, 푸마르산, 주석산, 구연산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산 등의 사용을 통해 형성된 염도 포함된다. 따라서, 예시적 염은 황산염, 피로황산염, 중황산염, 아황산염, 중아황산염, 질산염, 인산염, 인산일수소염, 인산이수소염, 메타인산염, 피로인산염, 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 아세트산염, 트리플루오로아세트산염, 프로피온산염, 카프릴산염, 이소부티르산염, 옥살산염, 말론산염, 석신산염, 수베르산염, 세박산염, 푸마르산염, 말레산염, 만델산염, 벤조산염, 클로로벤조산염, 메틸벤조산염, 디니트로벤조산염, 프탈산염, 벤젠설폰산염, 툴루엔설폰산염, 페닐아세트산염, 구연산염, 젖산염, 말산염, 주석산염, 메탄설폰산염 등을 포함한다. 아미노산의 염, 예컨대, 아르긴산염, 글루콘산염 및 갈락투론산염도 고려된다(예를 들면, 문헌(Berge S.M. et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharma. Sci. 66:1-19 (1997)) 참조). 일부 실시양태에서, 염기성 화합물의 산 부가 염은 숙련된 당업자에게 익숙한 방법 및 기법에 따라 유리 염기 형태를 충분한 양의 원하는 산과 접촉시켜 염을 생성함으로써 제조된다.
"약학적으로 허용 가능한 염기 부가 염"은 유리 산의 생물학적 효능 및 성질을 보유하고 생물학적으로 또는 다른 방식으로 바람직하지 않지 않은 염을 지칭한다. 이 염은 무기 염기 또는 유기 염기를 유리 산에 첨가함으로써 제조된다. 일부 실시양태에서, 약학적으로 허용 가능한 염기 부가 염은 금속 또는 아민, 예컨대, 알칼리 및 알칼리성 토금속 또는 유기 아민의 사용을 통해 형성된다. 무기 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간, 알루미늄 염 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 유기 염기로부터 유도된 염은 일차 아민, 이차 아민 및 삼차 아민, 천연 생성 치환된 아민을 포함하는 치환된 아민, 환형 아민 및 염기성 이온 교환 수지, 예를 들면, 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 2-디메틸아미노에탄올, 2-디에틸아미노에탄올, 디사이클로헥실아민, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, N,N-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 하이드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌디아민, 에틸렌디아닐린, N-메틸글루카민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브로마인, 푸린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘, 폴리아민 수지 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 상기 문헌(Berge et al.)을 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는" 또는 "경감시키는" 또는 "완화하는"은 상호교환 가능하게 사용된다. 이 용어들은 치료적 이익 및/또는 예방적 이익을 포함하나 이들로 한정되지 않는 유리한 또는 원하는 결과를 수득하는 방법을 지칭한다. "치료적 이익"은 치료되는 기저 장애의 박멸 또는 완화를 의미한다. 또한, 치료적 이익은 환자가 여전히 기저 장애로 고통 받고 있음에도 불구하고 환자에서 개선이 관찰되도록 기저 장애와 관련된 생리학적 증상들 중 하나 이상의 생리학적 증상의 박멸 또는 완화에 의해 달성된다. 일부 실시양태에서, 예방적 이익을 위해, 특정 질환의 진단이 내려지지 않았지만, 조성물은 이 질환을 발생시킬 위험에 있는 환자, 또는 이 질환의 생리학적 증상들 중 하나 이상의 생리학적 증상을 호소하는 환자에게 투여된다.
일부 실시양태에서, "프로드러그"는 생리학적 조건 하에서 또는 가용매분해에 의해 본원에 기재된 생물학적 활성 화합물로 전환되는 화합물을 표시하기 위한 것이다. 따라서, 용어 "프로드러그"는 약학적으로 허용 가능한 생물학적 활성 화합물의 전구체를 지칭한다. 프로드러그는 피험자에게 투여될 때 전형적으로 불활성 상태이나, 예를 들면, 가수분해에 의해 생체내에서 활성 화합물로 전환된다. 프로드러그 화합물은 포유동물 유기체에서 가용성, 조직 적합성 또는 지연된 방출이라는 장점을 종종 제공한다(예를 들면, 문헌(Bundgard, H., DESIGN OF PRODRUGS (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam)) 참조).
프로드러그의 논의는 문헌(Higuchi, T., et al., Pro-drugs as Novel Delivery Systems, A.C.S. Symposium Series, Vol. 14) 및 문헌(Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987)에 제공되어 있다.
용어 "프로드러그"는 이러한 프로드러그가 포유동물 피험자에게 투여될 때 생체내에서 활성 화합물을 방출하는 임의의 공유결합된 담체도 포함하기 위한 것이다. 본원에 기재된 바와 같이, 활성 화합물의 프로드러그는 변형물이 통상적인 조작에 의해, 또는 생체내에서 절단되어 모 활성 화합물을 제공하는 방식으로 활성 화합물에 존재하는 작용기를 변형시킴으로써 제조된다. 프로드러그는 활성 화합물의 프로드러그가 포유동물 피험자에게 투여될 때 절단되어 유리 하이드록시, 유리 아미노 또는 유리 머캡토 기를 형성하는 임의의 기에 각각 하이드록시, 아미노 또는 머캡토 기가 결합되어 있는 화합물을 포함한다. 프로드러그의 예로는 활성 화합물의 알코올 또는 아민 작용기 등의 아세트산염, 포름산염 및 벤조산염 유도체가 있으나 이들로 한정되지 않는다.
치환된 헤테로환형 유도체 화합물
본원은 라이신 특이적 탈메틸화효소-1(LSD-1)의 억제에 유용한 치환된 헤테로환형 유도체 화합물, 및 이 화합물을 포함하는 약학 조성물을 사용하여 재발된 및/또는 난치성 고형 종양(신경내분비 암종(NEC)을 포함함) 및 비-호지킨 림프종(NHL) 등을 치료하는 방법을 제공한다. LSD-1의 억제에 유용한 적합한 치환된 헤테로환형 유도체 화합물은 2015년 4월 30일자로 출원된 미국 특허출원 제14/701,304호(현재 미국 특허 제9,255,097호), 2016년 1월 5일자로 출원된 미국 특허출원 제14/988,022호, 2016년 2월 8일자로 출원된 미국 특허출원 제15/018,814호 및 국제 특허출원 제PCT/US2015/028635호(이들 모두가 2014년 5월 1일자로 출원된 미국 특허출원 제61/987,354호의 우선권 이익을 주장함)에 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물들뿐만 아니라; 2015년 11월 5일자로 출원된 미국 특허출원 제62/251,507호에 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물도 포함한다. 이 출원들 각각 및 모두의 내용은 모든 목적을 위해 전체로서 본원에 참고로 인용된다.
한 실시양태는 하기 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure 112019023638871-pct00006
상기 식에서,
W는 N, C-H 또는 C-F이고;
X는 수소, 할로겐, -CN, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴알키닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
Y는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 사이클로알킬알킬이고;
Z는 알킬, 카르보사이클릴, C-부착된 헤테로사이클릴, N-부착된 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로사이클릴알케닐, -O-헤테로사이클릴, -N(R)-헤테로사이클릴, -O-헤테로사이클릴알킬, -N(R)-헤테로사이클릴알킬, -N(R)(C1-C4알킬렌)-NR2, -O(C1-C4알킬렌)-NR2로부터 선택된 임의로 치환된 기이고, R은 수소 또는 C1-C4알킬이다.
한 실시양태는 하기 화학식 (Ia)의 구조를 갖는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure 112019023638871-pct00007
상기 식에서,
W는 N, C-H 또는 C-F이고;
X는 수소, 할로겐, -CN, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴알키닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
Y는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 사이클로알킬알킬이고;
Z는 N-부착된 헤테로사이클릴, -O-헤테로사이클릴알킬, -N(H)-헤테로사이클릴, -N(Me)-헤테로사이클릴, -N(H)-헤테로사이클릴알킬 또는 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이다.
한 실시양태는 하기 화학식 (Ib)의 구조를 갖는 화학식 (I) 또는 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure 112019023638871-pct00008
상기 식에서,
W는 N, C-H 또는 C-F이고;
X는 수소, 할로겐, 임의로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 카르보사이클릴알키닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
Y는 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 임의로 치환된 사이클로알킬이고;
Z는 -N-헤테로사이클릴, -O-헤테로사이클릴알킬, -N(H)-헤테로사이클릴알킬 또는 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬로부터 선택된 임의로 치환된 기이다.
또 다른 실시양태는 W가 C-H인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 W가 C-F인 화학식 (Ib)의 화합물또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 W가 N인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 X가 수소인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 X가 할로겐인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 X가 임의로 치환된 알키닐인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 X가 임의로 치환된 카르보사이클릴알키닐인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 X가 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 X가 임의로 치환된 아릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 X가 임의로 치환된 페닐인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 X가 임의로 치환된 헤테로아릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 X가 임의로 치환된 피리디닐, 임의로 치환된 피라졸릴 또는 임의로 치환된 인다졸릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Y가 수소인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Y가 임의로 치환된 사이클로알킬인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Y가 임의로 치환된 알킬인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Y가 임의로 치환된 C1-C3 알킬인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Y가 임의로 치환된 C1 알킬인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Y가 메틸 기인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -O-헤테로사이클릴알킬인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(H)-헤테로사이클릴알킬인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -O-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 Rc가 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌 쇄인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -O-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 Rc가 임의로 치환된 C1 알킬렌 쇄인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -O-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 헤테로사이클릴이 임의로 치환된 질소 함유 4원, 5원, 6원 또는 7원의 헤테로사이클릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(H)-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 Rc가 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌 쇄인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(H)-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 Rc가 임의로 치환된 C1 알킬렌 쇄인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(H)-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 헤테로사이클릴이 임의로 치환된 질소 함유 4원, 5원, 6원 또는 7원의 헤테로사이클릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 Rc가 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌 쇄인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 Rc가 임의로 치환된 C1 알킬렌 쇄인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 -N(Me)-헤테로사이클릴알킬이고 헤테로사이클릴알킬 기가 식 -Rc-헤테로사이클릴을 갖고 헤테로사이클릴이 임의로 치환된 질소 함유 4원, 5원, 6원 또는 7원 헤테로사이클릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 N-헤테로사이클릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 4원, 5원, 6원 또는 7원 N-헤테로사이클릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 6원의 N-헤테로사이클릴인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 피페리딘인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 또 다른 실시양태는 Z가 임의로 치환된 4-아미노피페리딘인 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (Ia) 또는 (Ib)로 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물은 표 1에 제공된 구조를 갖는다.
[표 1]
Figure 112019023638871-pct00009
Figure 112019023638871-pct00010
Figure 112019023638871-pct00011
Figure 112019023638871-pct00012
Figure 112019023638871-pct00013
Figure 112019023638871-pct00014
Figure 112019023638871-pct00015
Figure 112019023638871-pct00016
Figure 112019023638871-pct00017
Figure 112019023638871-pct00018
Figure 112019023638871-pct00019
Figure 112019023638871-pct00020
Figure 112019023638871-pct00021
Figure 112019023638871-pct00022
Figure 112019023638871-pct00023
Figure 112019023638871-pct00024
Figure 112019023638871-pct00025
Figure 112019023638871-pct00026
Figure 112019023638871-pct00027
Figure 112019023638871-pct00028
Figure 112019023638871-pct00029
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물은 표 2에 제공된 구조를 갖는다.
[표 2]
Figure 112019023638871-pct00030
Figure 112019023638871-pct00031
Figure 112019023638871-pct00032
Figure 112019023638871-pct00033
Figure 112019023638871-pct00034
Figure 112019023638871-pct00035
Figure 112019023638871-pct00036
Figure 112019023638871-pct00037
Figure 112019023638871-pct00038
Figure 112019023638871-pct00039
Figure 112019023638871-pct00040
Figure 112019023638871-pct00041
Figure 112019023638871-pct00042
Figure 112019023638871-pct00043
치환된 헤테로환형 유도체 화합물의 제조
본원에 기재된 반응에서 사용된 화합물은 상업적으로 입수 가능한 화학물질 및/또는 화학 문헌에 기재된 화합물로부터 출발하여 당분야에서 숙련된 자에게 공지되어 있는 유기 합성 기법에 따라 제조된다. "상업적으로 입수 가능한 화학물질"은 아크로스 오가닉스(Acros Organics)(펜실베니아주 피츠버그 소재), 알드리치 케미칼(Aldrich Chemical)(워싱톤주 밀워키 소재, 시그마 케미칼 앤드 플루카(Sigma Chemical and Fluka)를 포함함), 아핀 케미칼스 리미티드(Apin Chemicals Ltd.)(영국 밀톤 파크 소재), 아보카도 리서치(Avocado Research)(영국 랭커셔 소재), 비디에이치 인코포레이티드(BDH Inc.)(캐나다 토론토 소재), 바이오넷(Bionet)(영국 콘웰 소재), 켐서비스 인코포레이티드(Chemservice Inc.)(펜실베니아주 웨스터 체스터 소재), 크레센트 케미칼 컴파니(Crescent Chemical Co.)(뉴욕주 하우포지 소재), 이스트만 오가닉 케미칼스(Eastman Organic Chemicals), 이스트만 코닥 컴파니(Eastman Kodak Company)(뉴욕주 로체스터 소재), 피셔 사이언티픽 컴파니(Fisher Scientific Co.)(펜실베니아주 피츠버그 소재), 피손스 케미칼스(Fisons Chemicals)(영국 레이세스터셔 소재), 프론티어 사이언티픽(Frontier Scientific)(유타주 로간 소재), 아이씨엔 바이오메디칼스 인코포레이티드(ICN Biomedicals, Inc.)(캘리포니아주 코스타 메사 소재), 키 오가닉스(Key Organics)(영국 콘웰 소재), 란캐스터 신테시스(Lancaster Synthesis)(뉴햄프셔주 윈드햄 소재), 메이브리지 케미칼 컴파니 리미티드(Maybridge Chemical Co. Ltd.)(영국 콘웰 소재), 파리쉬 케미칼 컴파니(Parish Chemical Co.)(유타주 오렘 소재), 팔츠 앤드 바우어 인코포레이티드(Pfaltz & Bauer, Inc.)(코넥티컷주 워터버리 소재), 폴리오가닉스(Polyorganix)(텍사스주 휴스톤 소재), 피어스 케미칼 컴파니(Pierce Chemical Co.)(일리노이주 록포드 소재), 리델 드 하엔 아게(Riedel de Haen AG)(독일 하노버 소재), 스펙트럼 퀄리티 프로덕트 인코포레이티드(Spectrum Quality Product, Inc.)(뉴저지주 뉴 브런스윅 소재), 티씨아이 아메리카(TCI America)(오레곤주 포틀랜드 소재), 트랜스 월드 케미칼스 인코포레이티드(Trans World Chemicals, Inc.)(메릴랜드주 록빌 소재) 및 와코 케미칼스 유에스에이 인코포레이티드(Wako Chemicals USA, Inc.)(버지니아주 리치몬드 소재)를 포함하는 표준 상업적 공급원으로부터 입수된다.
본원에 기재된 화합물의 제조에 유용한 반응물의 합성을 상세히 기술하거나 상기 제조를 기술하는 논문의 언급을 제공하는 적합한 참고 교재 및 논문은 예를 들면, 문헌(SYNTHETIC ORGANIC CHEMISTRY, John Wiley & Sons, Inc., New York); 문헌(S. R. Sandler et al., ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS, 2nd Ed., Academic Press, New York, 1983); 문헌(H. O. House, MODERN SYNTHETIC REACTIONS, 2nd Ed., W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif. 1972); 문헌(T. L. Gilchrist, HETEROCYCLIC CHEMISTRY, 2nd Ed., John Wiley & Sons, New York, 1992); 문헌(J. March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY: REACTIONS, MECHANISMS & STRUCTURE, 4th Ed., Wiley Interscience, New York, 1992)을 포함한다. 본원에 기재된 화합물의 제조에 유용한 반응물의 합성을 상세히 기술하거나 상기 제조를 기술하는 논문의 언급을 제공하는 추가 적합한 참고 교재 및 논문은 예를 들면, 문헌(Fuhrhop, J. and Penzlin G., ORGANIC SYNTHESIS: CONCEPTS, METHODS, STARTING MATERIALS, SECOND, REVISED & ENLARGED EDITION (1994) John Wiley & Sons ISBN: 3-527-29074-5); 문헌(Hoffman, R.V., ORGANIC CHEMISTRY, AN INTERMEDIATE TEXT (1996) Oxford University Press, ISBN 0-19-509618-5); 문헌(Larock, R. C. COMPREHENSIVE ORGANIC TRANSFORMATIONS: A GUIDE TO FUNCTIONAL GROUP PREPARATION, 2nd Ed. (1999) Wiley-VCH, ISBN: 0-471-19031-4); 문헌(March, J. ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY: REACTIONS, MECHANISMS, & STRUCTURE, 4th Ed. (1992) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-60180-2); 문헌(Otera, J. (ed.), MODERN CARBONYL CHEMISTRY, (2000) Wiley-VCH, ISBN: 3-527-29871-1); 문헌(Patai, S., PATAI'S 1992 GUIDE TO THE CHEMISTRY OF FUNCTIONAL GROUPS, (1992) Interscience ISBN: 0-471-93022-9); 문헌(Solomons, T.W.G., ORGANIC CHEMISTRY, 7th Ed. (2000) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-19095-0); 문헌(Stowell, J.C., INTERMEDIATE Organic Chemistry, 2nd Ed. (1993) Wiley-Interscience, ISBN: 0-471-57456-2); 문헌(INDUSTRIAL ORGANIC CHEMICALS: STARTING MATERIALS & INTERMEDIATES: AN ULLMANN'S ENCYCLOPEDIA, (1999) John Wiley & Sons, ISBN: 3-527-29645-X, in 8 volumes); 문헌(ORGANIC REACTIONS (1942-2000) John Wiley & Sons, in over 55 volumes); 및 문헌(CHEMISTRY OF FUNCTIONAL GROUPS, John Wiley & Sons, in 73 volumes)을 포함한다.
구체적인 반응물 및 유사한 반응물은 대다수의 공용 도서관 및 대학 도서관에서 입수될 수 있는, 미국 화학 협회의 화학 초록 서비스에 의해 제조된 공지된 화합물의 색인을 통해 임의로 확인될 뿐만 아니라, 온라인 데이터베이스(보다 더 상세한 내용에 대해서는 워싱톤 디씨에 소재하는 미국 화학 협회와 접촉)를 통해서도 임의로 확인된다. 공지되어 있으나 카탈로그에서 상업적으로 입수될 수 없는 화학물질은 주문제작 화학 합성 회사에 의해 임의로 제조되고, 이때 대다수의 표준 화학 공급 회사들(예를 들면, 상기 나열된 회사들)은 주문제작 합성 서비스를 제공한다. 본원에 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물의 약학적 염의 제조 및 선택에 대한 참고문헌은 문헌(P. H. Stahl & C. G. Wermuth, HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS, Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, 2002)이다.
치환된 헤테로환형 유도체 화합물은 하기 반응식 1에 기재된 일반적인 합성 경로에 의해 제조된다.
Figure 112019023638871-pct00044
반응식 1을 참조하건대, 분자 A를 선택적으로 가수분해하여 분자 B를 제공한다. 분자 B를 다양한 할로겐화알킬 R1-X로 N-알킬화하여 분자 C를 수득한다. 염기성 조건 하에서 다양한 아민 HN(R2)(R2')을 사용하여 삼염화물 분자 C의 선택적 치환을 수행하여 분자 D를 형성한다. 보론산, 예를 들면, R3-B(OH)2, 또는 보론산 에스테르를 사용하여 팔라듐 매개 교차커플링 조건 하에서 분자 D로부터 분자 E를 제조한다. 보론산, 예를 들면, R3-B(OH)2, 또는 보론산 에스테르를 사용하여 팔라듐 매개 교차커플링 조건 하에서 화합물 E로부터 분자 F를 제조한다.
치환된 헤테로환형 유도체 화합물의 약학 조성물
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물은 순수한 화학물질로서 투여된다. 다른 실시양태에서, 예를 들면, 본원에 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물은 문헌(REMINGTON: THE SCIENCE & PRACTICE OF PHARMACY (Gennaro, 21st Ed. Mack Pub. Co., Easton, PA (2005)))에 기재된 바와 같이 선택된 투여 경로 및 표준 약학 관행을 기반으로 선택된 약학적으로 적합한 또는 허용 가능한 담체(본원에서 약학적으로 적합한(또는 허용 가능한) 부형제, 생리학적으로 적합한(또는 허용 가능한) 부형제, 또는 생리학적으로 적합한(또는 허용 가능한) 담체로서도 지칭됨)와 조합된다.
본원은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 적어도 하나의 치환된 헤테로환형 유도체 화합물, 또는 이의 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 N-산화물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 담체가 조성물의 다른 성분과 상용 가능하고 조성물의 수용자(즉, 피험자)에게 유해하지 않은 경우, 담체(들)(또는 부형제(들))는 허용 가능하거나 적합하다.
한 실시양태는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 한 실시양태는 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 한 실시양태는 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)로 기재된 치환된 헤테로환형 유도체 화합물은 약 5% 미만, 또는 약 1% 미만, 또는 약 0.1% 미만의 다른 유기 소분자, 예컨대, 합성 방법의 단계들 중 하나 이상의 단계에서 생성된 미반응된 중간체 또는 합성 부산물을 함유한다는 점에서 실질적으로 순수하다.
적합한 경구 제형은 예를 들면, 정제, 환제, 사세(sachet), 또는 경질 또는 연질 젤라틴, 메틸셀룰로스 또는 소화관에서 용이하게 분해되는 또 다른 적합한 물질의 캡슐을 포함한다. 일부 실시양태에서, 예를 들면, 약학 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 활석, 셀룰로스, 글루코스, 수크로스, 탄산마그네슘 등을 포함하는 적합한 무독성 고체 담체가 사용된다(예를 들면, 문헌(REMINGTON: THE SCIENCE & PRACTICE OF PHARMACY (Gennaro, 21st Ed. Mack Pub. Co., Easton, PA (2005))) 참조).
본원에 기재된 적어도 하나의 치환된 헤테로환형 유도체 화합물을 포함하는 조성물의 용량은 환자(예를 들면, 인간) 상태, 즉 질환의 단계, 일반적인 건강 상태, 연령 및 다른 요인에 따라 상이하다.
약학 조성물은 치료되는(또는 예방되는) 질환에 적절한 방식으로 투여된다. 적절한 용량, 및 투여에 적합한 지속시간 및 빈도는 환자의 상태, 환자 질환의 유형 및 중증도, 활성 성분의 구체적인 형태, 및 투여 방법과 같은 요인에 의해 결정될 것이다. 일반적으로, 적절한 용량 및 치료 섭생법은 치료적 및/또는 예방적 이익(예를 들면, 개선된 임상 결과, 예컨대, 보다 더 빈번한 완전한 또는 부분적 관해, 또는 보다 더 긴 질환 부재 및/또는 전체 생존, 또는 증상 중증도의 경감)을 제공하기에 충분한 양으로 조성물(들)을 제공한다. 일반적으로 실험 모델 및/또는 임상시험을 이용하여 최적 용량을 결정한다. 최적 용량은 환자의 체질량, 체중 또는 혈액 부피에 의존한다.
경구 용량은 전형적으로 하루에 1회 내지 4회 이상 약 1.0 mg 내지 약 1000 mg이다.
치환된 헤테로환형 유도체 화합물의 사용
후성유전학은 기저 DNA 서열 이외의 기작에 의해 야기된 유전자 발현의 유전 가능한 변화의 연구이다. 후성유전학 조절에 있어서 역할을 하는 분자 기작은 DNA 메틸화 및 염색질/히스톤 변형을 포함한다.
진핵 유기체의 게놈은 세포의 핵 내에서 고도로 조직화되어 있다. 3십억 개의 뉴클레오타이드의 인간 게놈을 세포의 핵 내로 포장하기 위해 엄청난 압축이 요구된다. 염색질은 염색체를 구성하는, DNA와 단백질의 복합체이다. 히스톤은 DNA를 감는 실패로서 작용하는, 염색질의 주요 단백질 성분이다. 염색질 구조의 변화는 히스톤 단백질 및 비-히스톤 결합 단백질의 공유 변형에 의해 영향을 받는다. 다양한 부위들에서 히스톤을 변형시키는 여러 클래스의 효소들이 공지되어 있다.
2개의 군들로 조직화된 총 6개 클래스의 히스톤들(HI, H2A, H2B, H3, H4 및 H5)이 있다: 코어 히스톤(H2A, H2B, H3 및 H4) 및 링커 히스톤(HI 및 H5). 염색질의 기본 유닛은 각각 2 카피의 코어 히스톤 H2A, H2B, H3 및 H4로 구성된, 코어 히스톤 팔량체 주변을 감은 약 147개 염기쌍의 DNA로 구성된 뉴클레오좀이다.
그 다음, 기본 뉴클레오좀 유닛은 뉴클레오좀의 응집 및 폴딩에 의해 더 조직화되고 응축되어 고도로 응축된 염색질 구조를 형성한다. 다양한 상이한 상태의 응축이 가능하고, 세포 분열의 과정 동안 가장 압축되는 염색질 구조의 조밀도는 세포 주기 동안 변경된다.
염색질 구조는 고도로 응축된 염색질로부터 효율적으로 일어날 수 없는 유전자 전사를 조절하는 데 결정적인 역할을 한다. 염색질 구조는 히스톤 단백질, 특히 히스톤 H3 및 H4, 가장 통상적으로 코어 뉴클레오좀 구조를 넘어 확장되는 히스톤 꼬리 내에서의 일어나는 일련의 번역 후 변형에 의해 조절된다. 이 변형은 아세틸화, 메틸화, 인산화, 리보실화 수모일화, 유비퀴틴화, 시트룰린화, 탈이민화 및 바이오티닐화이다. 히스톤 H2A 및 H3의 코어도 변형될 수 있다. 히스톤 변형은 다양한 생물학적 과정들, 예컨대, 유전자 조절, DNA 회복 및 염색체 응축에 필수적이다.
히스톤 메틸화는 가장 중요한 염색질 마크들 중 하나이고; 이들은 전사 조절, DNA 손상 반응, 헤테로염색질 형성 및 유지, 및 X-염색체 불활성화에 있어서 중요한 역할을 한다. 최근의 발견은 히스톤 메틸화가 스플라이싱 조절제의 집결에 영향을 미침으로써 전구-mRNA의 스플라이싱 결과에 영향을 미친다는 것도 보여주었다. 히스톤 메틸화는 라이신의 모노메틸화, 디메틸화 및 트리메틸화, 및 아르기닌의 모노메틸화, 대칭 디메틸화 및 비대칭 디메틸화를 포함한다. 이 변형은 메틸화의 부위 및 정도에 따라 활성화 또는 억제 마크일 수 있다.
히스톤 탈메틸화효소
본원에서 언급된 "탈메틸화효소" 또는 "단백질 탈메틸화효소"는 폴리펩타이드로부터 적어도 하나의 메틸 기를 제거하는 효소를 지칭한다. 탈메틸화효소는 JmjC 도메인을 포함하고, 메틸-라이신 또는 메틸-아르기닌 탈메틸화효소일 수 있다. 일부 탈메틸화효소는 히스톤에 작용하고, 예를 들면, 히스톤 H3 또는 H4 탈메틸화효소로서 작용한다. 예를 들면, H3 탈메틸화효소는 H3K4, H3K9, H3K27, H3K36 및/또는 H3K79 중 하나 이상을 탈메틸화시킬 수 있다. 대안적으로, H4 탈메틸화효소는 히스톤 H4K20을 탈메틸화시킬 수 있다. 모노메틸화된 기질, 디메틸화된 기질 및/또는 트리메틸화된 기질을 탈메틸화시킬 수 있는 탈메틸화효소는 공지되어 있다. 추가로, 히스톤 탈메틸화효소는 (예를 들면, 세포 기반 어세이에서) 메틸화된 코어 히스톤 기질, 모노뉴클레오좀 기질, 디뉴클레오좀 기질 및/또는 올리고뉴클레오좀 기질, 펩타이드 기질 및/또는 염색질에 작용할 수 있다.
발견된 제1 라이신 탈메틸화효소는 보조인자로서 플라빈을 사용하여 모노메틸화된 H3K4 또는 H3K9, 및 디메틸화된 H3K4 또는 H3K9 둘 다를 탈메틸화시키는 라이신 특이적 탈메틸화효소 1(LSD-1/KDM1)이었다. JmjC 도메인 함유 히스톤 탈메틸화효소 1(JHDM1/KDM2A)로서 명명된 H3K36 탈메틸화효소가 포름알데하이드 방출 어세이에서 사용되는 것으로 발견되었을 때, 제2 클래스의 Jumonji C(JmjC) 도메인 함유 히스톤 탈메틸화효소가 예측되었고 확인되었다.
그 후 더 많은 JmjC 도메인 함유 단백질들이 확인되었고, 이들은 7개의 서브패밀리들로 계통발생학적으로 클러스터링될 수 있다: JHDM1, JHDM2, JHDM3, JMJD2, JARID, PHF2/PHF8, UTX/UTY, 및 JmjC 도메인 단독.
LSD-1
라이신 특이적 탈메틸화효소 1(LSD-1)은 K4에서 모노메틸화된 히스톤 H3 및 디메틸화된 히스톤 H3을 특이적으로 탈메틸화시키고 K9에서 디메틸화된 히스톤 H3도 탈메틸화시키는 히스톤 라이신 탈메틸화효소이다. LSD-1의 주 표적이 모노메틸화된 히스톤 라이신 및 디메틸화된 히스톤 라이신, 구체적으로 H3K4 및 H3K9인 것으로 보이지만, LSD-1이 p53, E2F1, Dnmt1 및 STAT3과 같은 비-히스톤 단백질 상의 메틸화된 라이신을 탈메틸화시킬 수 있다는 증거가 문헌에 있다.
LSD-1은 폴리아민 산화효소 및 모노아민 산화효소에 대한 꽤 높은 정도의 구조적 유사성 및 아미노산 동일성/상동성을 갖고, 이들 모두(즉, MAO-A, MAO-B 및 LSD-1)가 질소-수소 결합 및/또는 질소-탄소 결합의 산화를 촉진하는 플라빈 의존성 아민 산화효소이다. LSD-1은 N-말단 SWRIM 도메인도 포함한다. 대안적 스플라이싱에 의해 생성된 LSD-1의 2개의 전사체 변이체들이 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 화합물은 생물학적 샘플을 본원에 개시된 치환된 헤테로환형 화합물과 접촉시킴으로써 생물학적 샘플에서 LSD-1 활성을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 치환된 헤테로환형 화합물은 생물학적 샘플에서 히스톤-4 라이신-3 메틸화의 수준을 조절할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 치환된 헤테로환형 화합물은 생물학적 샘플에서 히스톤-3 라이신-9 메틸화 수준을 조절할 수 있다.
본원에 개시된 치환된 헤테로환형 화합물은 상당한 MAO-A 또는 MAO-B 억제 활성을 결여한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 치환된 헤테로환형 화합물은 MAO-A 및/또는 MAO-B 억제 활성보다 더 큰 정도로 LSD-1 억제 활성을 억제한다.
한 실시양태는 세포에서 유전자 전사를 조절하는 방법으로서, 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 효소를 화학식 (I)의 화합물에 노출시킴으로써 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 활성을 억제하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태는 세포에서 유전자 전사를 조절하는 방법으로서, 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 효소를 화학식 (Ia)의 화합물에 노출시킴으로써 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 활성을 억제하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태는 세포에서 유전자 전사를 조절하는 방법으로서, 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 효소를 화학식 (Ib)의 화합물에 노출시킴으로써 라이신 특이적 탈메틸화효소 1 활성을 억제하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
치료 방법
본원은 일반적으로 또는 하나 이상의 특정 표적 유전자에 대하여 세포 또는 피험자에서 탈메틸화를 조절하는 방법을 개시한다. 탈메틸화는 분화; 증식; 아폽토시스; 종양발생; 백혈병유발 또는 다른 발암성 형질전환 사건; 모발 손실; 또는 성적 분화를 포함하나 이들로 한정되지 않는 다양한 세포 기능들을 제어하도록 조절된다.
한 실시양태는 암의 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태는 암의 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태는 암의 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 화학식 (Ib)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
추가 실시양태에서, 라이신 특이적 탈메틸화효소-1 (LSD-1)의 억제에 유용한 치환된 헤테로환형 유도체 화합물 및 이 화합물을 포함하는 약학 조성물을 사용하여 재발된 및/또는 난치성 고형 종양(신경내분비 암종(NEC)을 포함함) 및 비-호지킨 림프종(NHL) 등을 치료하는 방법이 제공된다. 재발은 개선의 기간 후 질환, 또는 질환의 징후 및 증상의 복귀를 의미한다. 난치성은 치료에 반응하지 않는 질환 또는 상태를 의미한다. 난치성 암은 치료에 반응하지 않는 암을 지칭하고, 암이 치료 초기에 내성을 가질 수 있거나, 암이 치료 동안 내성을 갖게 되는 상황을 포함한다.
신경내분비 종양은 전통적인 호르몬 생성 내분비 세포와 신경 세포 사이의 절충물인 세포들로 구성된, 신체의 신경내분비계의 호르몬 생성 세포에서 시작한다. 신경내분비 세포는 장기, 예컨대, 폐, 및 위 및 소장을 포함하는 위장관에서 신체 전체에 걸쳐 발견된다. 이 세포는 특정 기능, 예컨대, 폐를 통한 공기 및 혈액 유동의 조절, 및 음식물이 위장관을 통해 이동하는 속도의 제어를 수행한다. 3종의 특정 유형들, 즉 크롬친화성세포종, 메르켈(Merkel) 세포 암 및 신경내분비 암종을 포함하는 많은 유형의 신경내분비 종양들이 존재한다.
크롬친화성세포종은 부신의 크롬친화성 세포에서 시작하는 희귀 종양이다. 이 전문화된 세포는 스트레스의 시간 동안 호르몬 아드레날린을 방출한다. 크롬친화성세포종은 부신 내부의 영역인 부신 수질에서 가장 흔히 발생한다. 이 유형의 종양은 혈압 및 심장 박동을 증가시키는 호르몬 아드레날린 및 노르아드레날린의 생성을 증가시킨다. 종양이 손상 후 다량의 아드레날린을 혈류 내로 방출할 수 있기 때문에, 크롬친화성세포종은 통상적으로 양성을 나타낼지라도 여전히 생명을 위협할 수 있다. 크롬친화성세포종을 가진 사람들 중 팔십 퍼센트(80%)의 사람들은 단지 1개의 부신에서 종양을 갖고, 10%의 사람들은 양쪽 부신들에서 종양을 갖고, 10%의 사람들은 부신 외부에서 종양을 가진다.
피부의 신경내분비 암종 또는 트라불라(trabular) 암으로서도 지칭되는 메르켈 세포 암은 고도 공격성(신속히 성장하는) 희귀 암이다. 상기 암은 피부 바로 아래 및 모낭 내의 호르몬 생성 세포에서 시작하고, 두경부 영역에서 발견된다.
대략 60%의 신경내분비 종양은 신경내분비 암종 이외의 특정 유형의 암으로서 기재될 수 없다. 신경내분비 암종은 폐, 뇌 및 위장관을 포함하는, 신체 내의 다수의 장소들에서 시작할 수 있다.
신경내분비 암종의 증상은 하기 증상들을 포함할 수 있다: 고혈당증(너무 많은 혈당); 저혈당증(너무 적은 혈당); 설사; 특정 영역 내에서의 지속적인 통증; 식욕의 손실/체중 손실; 지속적인 기침 또는 쉰소리; 신체의 임의의 부분 내의 비후화 또는 덩어리; 대변 또는 소변 습관의 변화; 설명되지 않는 체중 획득 또는 손실; 황달(피부의 황변화); 비정상적인 출혈 또는 배출; 지속적인 열 또는 식은땀; 두통; 불안증; 및 위 궤양 질환.
비-호지킨 림프종(NHL)은 악성(암) 세포가 림프 시스템에서 형성되는 질환이다. 상이한 유형의 백혈 세포들(B 세포, T 세포, NK 세포)로부터 형성되는 많은 상이한 유형의 NHL이 존재한다. 대다수의 유형의 NHL은 B 세포로부터 형성된다. NHL은 무통성(느린 성장) 또는 공격성(신속 성장)을 나타낼 수 있다. 성인에서 대다수의 흔한 유형의 NHL은 통상적으로 공격성을 나타내는 미만성 B 대세포 림프종 및 통상적으로 무통성을 나타내는 여포성 림프종이다. 균상식육종 및 세자리 증후군은 피부의 백혈 세포에서 시작하는 유형의 NHL이다. 일차 중추신경계 림프종은 뇌, 척수 또는 눈의 백혈 세포에서 시작하는 희귀 유형의 NHL이다.
비-호지킨 림프종은 상이한 속도로 성장하고 퍼지고, 무통성 또는 공격성을 나타낼 수 있다. 무통성 림프종은 느리게 성장하고 퍼지는 경향을 갖고, 징후 및 증상을 거의 갖지 않는다. 공격성 림프종은 신속히 성장하고 퍼지고, 심각할 수 있는 징후 및 증상을 가진다.
무통성 NHL은 여포성 림프종, 림프형질세포성 림프종, 변연부 림프종, 단핵구성 B 세포 림프종, 위 점막 관련 림프 조직(MALT) 림프종, 위외 MALT 림프종, 지중해 복부 림프종, 비장 변연부 림프종 및 일차 피부 역형성 대세포 림프종을 포함할 수 있다. 공격성 NHL은 미만성 B 대세포 림프종, 일차 종격 B 대세포 림프종, 여포성 대세포 림프종, III 기 역형성 대세포 림프종(피부 역형성 대세포 림프종 및 전신 역형성 대세포 림프종을 포함함), 결절외 NK -/T 세포 림프종, 림프종모양 육아종증, 혈관면역모세포성 T 세포 림프종, 말초 T 세포 림프종, 간비장 T 세포 림프종, 피하 지방층염 유사 T 세포 림프종, 장병증 유형 장 T 세포 림프종, 혈관내 B 대세포 림프종, 버킷 림프종, 림프모구성 림프종, 성인 T 세포 백혈병/림프종, 맨틀 세포 림프종, 이식 후 림프증식성 장애, 진성 조직구성 림프종, 일차 삼출 림프종, 및 형질모세포성 림프종을 포함할 수 있다.
다른 실시양태 및 용도는 본 개시에 비추어 볼 때 당분야에서 숙련된 자에게 자명할 것이다. 하기 실시예는 단지 다양한 실시양태들의 예시로서 제공되고, 본 발명을 임의의 방식으로 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예
I. 화학적 합성
달리 표시되어 있지 않은 한, 시약 및 용매는 상업적 공급원으로부터 받은 상태로 사용되었다. 수분 및/또는 산소에 민감한 합성 변환을 위해 무수 용매 및 오븐 건조된 유리제품을 사용하였다. 수율은 최적화되지 않았다. 반응 시간은 근사치이고 최적화되지 않았다. 달리 표시되어 있지 않은 한, 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피 및 박층 크로마토그래피(TLC)를 수행하였다. 스펙트럼은 ppm(δ)으로 제공되고, 커플링 상수인 J는 헤르츠(Hertz)로 보고된다. 양성자 스펙트럼의 경우, 용매 피크를 기준 피크로서 사용하였다.
제조 1A: 2,5,6-트리클로로피리미딘-4-올
Figure 112019023638871-pct00045
1 N NaOH(31 ㎖, 31.2 mmol)을 THF(50 ㎖) 중의 2,4,5,6-테트라클로로피리미딘(5 g, 22.9 mmol)의 용액에 적가하였고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 용액을 1 N HCl으로 산성화하고 DCM(3회)으로 추출하였다. 유기물을 모으고 건조하고 진공에서 농축하였다. 고체를 실온에서 30분 동안 Et2O에 슬러리화하고 여과하고 Et2O로 세척하고 건조하여 3.0 g(66%)의 표제 화합물을 제공하였다. C4HCl3N2O에 대한 [M+H] 계산치, 201; 실측치, 201.
제조 1B: 2,5,6-트리클로로-3-메틸-3-하이드로피리미딘-4-온
Figure 112019023638871-pct00046
0℃에서 요오도메탄(714 mg, 5.0 mmol)을 THF(50 ㎖) 중의 2,5,6-트리클로로피리미딘-4-올(1 g, 5.0 mmol) 및 K2CO3(759 mg, 5.5 mmol)의 혼합물에 적가하였고, 반응물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(EA)로 희석하였다. 유기 층을 염수로 세척하고 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(10:1, PE:EA)로 정제하여 760 mg(71%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.74 (s, 3H). C5H3Cl3N2O에 대한 [M+H] 계산치, 213; 실측치, 213.
제조 1C: N-[1-(5,6-디클로로-3-메틸-4-옥소(3-하이드로피리미딘-2-일))-(4-피페리딜)](tert-부톡시)카복스아마이드
Figure 112019023638871-pct00047
DMF(10 ㎖) 중의 2,5,6-트리클로로-3-메틸-3-하이드로피리미딘-4-온(426 mg, 2.0 mmol), DIEA(536 mg, 4.0 mmol) 및 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트(400 mg, 2 mmol)의 용액을 120℃에서 1시간 동안 가열하였다. 용매를 진공에서 제거하였고, 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피(1:1, PE:EA)로 정제하여 550 mg(73%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.45 (s, 9H), 1.50-1.58 (m, 2H), 2.06-2.10 (m, 2H), 2.98-3.05 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 3.53-3.56 (m, 2H), 3.70 (s, 1H), 4.52 (s, 1H). C15H22Cl2N4O3에 대한 [M+H] 계산치, 213; 실측치, 213.
제조 1D: tert-부틸 1-(5-클로로-4-(4-시아노페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-2-일)피페리딘-4-일카바메이트
Figure 112019023638871-pct00048
DMF(10 ㎖) 중의 N-[1-(5,6-디클로로-3-메틸-4-옥소(3-하이드로피리미딘-2-일))(4-피페리딜)](tert-부톡시)카복스아마이드(500 mg, 1.3 mmol), 4-시아노페닐보론산(195 mg, 1.3 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(81 mg, 0.13 mmol) 및 K2CO3(359 mg, 2.6 mmol)의 혼합물을 질소로 씻어 내고 2시간 동안 85℃에서 교반하였다. 물을 첨가하였고, 혼합물을 EA(3회)로 추출하였다. 유기물을 모으고 물로 세척하고 염수로 세척하고 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:1, EA:PE)로 정제하여 250 mg(40%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.45 (s, 9H), 1.54-1.61 (m, 2H), 2.05-2.10 (m, 2H), 2.99-3.05 (m, 2H), 3.48-3.56 (s, 5H), 3.70 (s, 1H), 4.56 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.0 Hz, 2H). C22H26ClN5O3에 대한 [M+H] 계산치, 444; 실측치, 444.
제조 1E: tert-부틸 1-(4-(4-시아노페닐)-1-메틸-6-옥소-5-p-톨릴-1,6-디하이드로피리미딘-2-일)피페리딘-4-일카바메이트
Figure 112019023638871-pct00049
DMF(10 ㎖) 중의 tert-부틸 1-(5-클로로-4-(4-시아노페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-2-일)피페리딘-4-일카바메이트(200 mg, 0.45 mmol), p-톨릴보론산(123 mg, 0.90 mmol), [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(28 mg, 0.045 mol) 및 K2CO3(124 mg, 0.90 mmol)의 혼합물을 질소로 씻어 내리고 2시간 동안 85℃에서 교반하였다. 물을 첨가하였고, 혼합물을 EA(3회)로 추출하였다. 유기물을 모으고 물로 세척하고 염수로 세척하고 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:1, EA:PE)로 정제하여 50 mg(22%)의 표제 화합물을 제공하였다. C29H33N5O3에 대한 [M+H] 계산치, 500; 실측치, 500.
실시예 1: 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-1-메틸-6-옥소-5-p-톨릴-1,6-디하이드로피리미딘-4-일)벤조니트릴, HCl 염
Figure 112019023638871-pct00050
EA(5 ㎖) 중의 4 N HCl 용액을 EA(10 ㎖) 중의 tert-부틸 1-(4-(4-시아노페닐)-1-메틸-6-옥소-5-p-톨릴-1,6-디하이드로피리미딘-2-일)피페리딘-4-일카바메이트(50 mg, 0.1 mmol)의 용액에 첨가하였고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축하였고, 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 염산염으로서 20 mg(46%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.74-1.79 (m, 2H), 2.00-2.04 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.96-3.03 (m, 2H), 3.29-3.03 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.71-3.74 (m, 2H), 6.89 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H). C24H25N5O에 대한 [M+H] 계산치, 400; 실측치, 400.
실시예 2: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00051
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 5% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.74-1.78 (m, 2H), 2.00-2.03 (m, 2H), 2.98-3.02 (m, 2H), 3.26-3.00 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.70-3.73 (m, 2H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H). C24H25N5O2에 대한 [M+H] 계산치, 416; 실측치, 416.
실시예 3: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(6-메톡시-피리딘-3-일)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00052
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 11% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.87-1.95 (m, 2H), 2.14-2.17 (m, 2H), 3.15-3.24 (m, 2H), 3.43-3.48 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.93-3.98 (m, 2H), 4.23 (s, 3H), 7.46 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.12 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H). C23H24N6O2에 대한 [M+H] 계산치, 417; 실측치, 417.
실시예 4: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-1-메틸-5-(6-메틸-피리딘-3-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00053
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 4% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.79-1.80 (m, 2H), 2.03-2.05 (m, 2H), 2.66 (s, 3H), 3.04-3.09 (m, 2H), 3.30-3.34 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.83-3.88 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H). C23H24N6O에 대한 [M+H] 계산치, 401; 실측치, 401.
실시예 5: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00054
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 7% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.89-1.95 (m, 2H), 2.15-2.18 (m, 2H), 3.14-3.18 (m, 2H), 3.44-3.46 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.88-3.90 (m, 5H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.96-7.02 (m, 2H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 2H). C24H24FN5O2에 대한 [M+H] 계산치, 434; 실측치, 434.
실시예 6: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00055
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 5% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.83-1.89 (m, 2H), 2.10-2.13 (m, 2H), 3.05-3.11 (m, 2H), 3.35-3.38 (m, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.77-3.82 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H)， 7.53-7.56 (m, 1H). C24H24FN5O2에 대한 [M+H] 계산치, 434; 실측치, 434.
제조 7A: tert-부틸 1-(5-클로로-4-(3-플루오로-4-시아노페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-2-일)피페리딘-4-일카바메이트
Figure 112019023638871-pct00056
ACN(4 ℓ) 중의 N-[1-(5,6-디클로로-3-메틸-4-옥소(3-하이드로피리미딘-2-일))(4-피페리딜)](tert-부톡시)카복스아마이드(150 g, 0.40 mol), 3-플루오로-4-시아노페닐보론산(65.8 g, 0.40 mol), Pd(Ph3P)4(9.3 g, 8 mmol) 및 0.4 N Na2CO3(2 ℓ, 0.80 mol)의 혼합물을 질소로 씻어 내리고 2시간 동안 85℃에서 교반하였다. 물을 첨가하였고, 혼합물을 EA(3회)로 추출하였다. 유기물을 모으고 물로 세척하고 염수로 세척하고 건조하고 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:1, EA:PE)로 정제하여 95 g(57%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.45 (s, 9H), 1.54-1.61 (m, 2H), 2.05-2.13 (m, 2H), 2.99-3.08 (m, 2H), 3.53-3.58 (s, 5H), 3.70 (s, 1H), 4.54 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.68-7.80 (m, 3H).
제조 7B: tert-부틸 N-[1-[4-(4-시아노-3-플루오로페닐)-5-(3-플루오로-4-메톡시페닐)-1-메틸-6-옥소피리미딘-2-일]피페리딘-4-일]카바메이트
Figure 112019023638871-pct00057
디옥산:H2O(3:1, 15 ㎖) 중의 (tert-부톡시)-N-{1-[5-클로로-6-(4-시아노-3-플루오로페닐)-3-메틸-4-옥소(3-하이드로피리미딘-2-일)](4-피페리딜)}카복스아마이드(1 g, 2.169 mmol), 3-플루오로-4-메톡시 벤젠보론산(740 mg, 4.338 mmol), Pd(dppf)Cl2(480 mg, 0.651 mmol) 및 Na2CO3(690 mg, 6.51 mmol)의 혼합물을 질소로 씻어 내리고, 마개를 닫고 마이크로파 하에서 2시간 동안 145℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하였고, 잔사를 FC(1:1, EA:PE)로 정제하여 800 mg(71%)의 표제 화합물을 제공하였다. C29H31F2N5O4에 대한 [M+H] 계산치, 552; 실측치, 552. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 1.46 (s, 9H), 1.60 (d, J = 10.11 Hz, 2H), 2.11 (d, J = 11.62 Hz, 2H), 3.06 (t, J = 12.00 Hz, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.60 (d, J = 13.64 Hz, 2H), 3.72 (br. s., 1H), 3.88 (s, 3H), 4.52 (br. s., 1H), 6.79-6.89 (m, 2H), 6.97 (d, J = 12.38 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.34 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 9.85 Hz, 1H), 7.42 (br. s., 1H).
실시예 7: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(화합물 A)
Figure 112019023638871-pct00058
EA(30 ㎖) 중의 1 N HCl을 EA(20 ㎖) 중의 tert-부틸 N-[1-[4-(4-시아노-3-플루오로페닐)-5-(3-플루오로-4-메톡시페닐)-1-메틸-6-옥소피리미딘-2-일]피페리딘-4-일]카바메이트(5.2 g, 9.44 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축하여 HCl 염으로서 표제 생성물(4.05 g, 88%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.77-1.79 (m, 2H), 2.02-2.04 (m, 2H), 2.99-3.04 (m, 2H), 3.26-3.00 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.73-3.75 (m, 2H), 6.67-6.68 (m, 1H), 6.84-6.95 (m, 2H), 7.12-7.14 (m, 1H), 7.24-7.36 (m, 1H), 7.46-7.50 (m, 1H). C24H23F2N5O2에 대한 [M+H] 계산치, 452; 실측치, 452.
실시예 8: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(6-메톡시-피리딘-3-일)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00059
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 6% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.79-1.83 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.04-3.11 (m, 2H), 3.21-3.22 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.81-3.85 (m, 2H), 4.12 (s, 3H), 7.22-7.24 (m, 1H), 7.38 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.57-7.61 (m, 1H), 8.04-8.07 (m, 1H), 8.21 (s, 1H). C23H23FN6O2에 대한 [M+H] 계산치, 435; 실측치, 435.
실시예 9: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(6-메톡시-피리딘-3-일)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00060
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 8% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.92-1.96 (m, 2H), 2.16-2.19 (m, 2H), 2.80 (s, 3H), 3.19-3.25 (m, 2H), 3.45-3.49 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.96-3.99 (m, 2H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H). C23H23FN6O에 대한 [M+H] 계산치, 419; 실측치, 419.
실시예 10: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(6-에틸-피리딘-3-일)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00061
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 7% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.30 (t, J = 4.0 Hz, 3H), 1.83-1.88 (m, 2H), 2.06-2.09 (m, 2H), 2.96-2.99 (m, 2H), 3.09-3.16 (m, 2H), 3.26-3.31 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.86-3.89 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H). C24H26N6O에 대한 [M+H] 계산치, 415; 실측치, 415.
실시예 11: 2-플루오로-4-[5-(4-메톡시-페닐)-1-메틸-2-(4-메틸아미노-피페리딘-1-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00062
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 7% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.80-1.90 (m, 2H), 2.19-2.23 (m, 2H), 2.75 (s, 3H)，3.06-3.12 (m, 2H), 3.32-3.36 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.84-3.87 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 8.54-7.58 (m, 1H). C25H26FN5O2에 대한 [M+H] 계산치, 448; 실측치, 448.
실시예 12: 2-플루오로-4-[5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-2-(4-메틸아미노-피페리딘-1-일)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00063
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 7% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.78-1.88 (m, 2H), 2.17-2.20 (m, 2H), 2.73 (s, 3H)，3.05-3.11 (m, 2H), 3.30-3.35 (m, 1H), 3.54 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.83-3.86 (m, 2H), 6.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.93-6.99 (m, 2H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 8.55-7.589 (m, 1H). C25H25F2N5O2에 대한 [M+H] 계산치, 466; 실측치, 466.
제조 13A: 2,6-디클로로-3-에틸-3H-피리미딘-4-온
Figure 112019023638871-pct00064
DMF(10 ㎖) 중의 2,6-디클로로-피리미딘-4-올(1.0 g, 6.1 mmol) 및 K2CO3(1.1 g, 7.9 mmol)의 용액을 15분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시켰고, 요오도에탄(1.1 ㎖, 6.7 mmol)을 적가하였다. 실온에서 하룻밤 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 EA로 희석하고 염수로 세척하고 건조하고(Na2SO4) 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(20:1, EA:PE)로 정제하여 330 mg(28%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.37 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 4.76 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 6.67 (s, 1H). C6H6Cl2N2O에 대한 [M+H] 계산치, 193, 195, 197; 실측치, 193, 195, 197.
제조 13B: [1-(4-클로로-1-에틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일)-피페리딘-4-일]-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00065
DMF(10 ㎖) 중의 2,6-디클로로-3-에틸-3H-피리미딘-4-온(320 mg, 1.64 mmol), DIEA(423 mg, 3.28 mmol) 및 (tert-부톡시)-N-(4-피페리딜)카복스아마이드(328 mg, 1.64 mmol)의 용액을 1시간 동안 120℃까지 가열하였다. 용매를 진공에서 농축하였고, 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:5, EA:PE)로 정제하여 황색 고체로서 210 mg(36%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.25-1.32 (m 2H), 1.35 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.96-2.02 (m, 2H), 2.98-3.06 (m, 2H), 3.70 (br, 1H), 4.30 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 4.44 (br, 1H), 4.57-4.61 (m, 2H), 5.95 (s, 1H). C16H25ClN4O3에 대한 [M+H] 계산치, 357, 359; 실측치, 357, 359.
제조 13C: {1-[4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-에틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00066
CH3CN(10 ㎖) 중의 [1-(4-클로로-1-에틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일)-피페리딘-4-일]-카밤산 tert-부틸 에스테르(210 mg, 0.59 mmol), 3-플루오로-4-시아노페닐보론산(126 mg, 0.77 mmol), Pd(PPh)4(14 mg, 0.012 mmol) 및 0.4 M Na2CO3(4.5 ㎖, 1.77 mmol)의 혼합물을 N2 대기 하에서 90℃에서 하룻밤 동안 교반하였다. 유기물을 진공에서 농축하였고, DCM(2회)으로 수성 추출하였다. 모은 유기물을 염수로 세척하고 건조하고(Na2SO4) 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:2, EA:PE)로 정제하여 황색 고체로서 185 mg(64%)의 표제 화합물을 제공하였다. C23H28FN5O3에 대한 [M+H] 계산치, 442; 실측치, 442.
실시예 13: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-1-에틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00067
EA(3 ㎖) 중의 4 M HCl 용액을 EA(5 ㎖) 중의 {1-[4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-에틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(180 mg, 0.41 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시켜 황색 고체(HCl 염)로서 150 mg의 표제 화합물(97%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 1.48-1.52 (m, 2H), 1.99-2.02 (m, 2H), 2.94-3.01 (m, 2H), 3.33-3.38 (m, 1H), 6.81 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 4.85-4.88 (m, 2H), 6.95 (s, 1H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90-7.95 (m, 2H). C18H20FN5O에 대한 [M+H] 계산치, 342; 실측치, 342.
제조 14A: {1-[4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-사이클로펜틸에티닐-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00068
ACN(15 ㎖) 중의 tert-부틸 1-(5-클로로-4-(3-플루오로-4-시아노페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-2-일)피페리딘-4-일카바메이트(200 mg, 0.43 mmol), 에티닐-사이클로펜탄(82 mg, 0.87 mmol), Pd(MeCN)2Cl2(4.5 mg, 0.017 mmol), X-Phos(10 mg, 0.022 mmol) 및 K2CO3(120 mg, 0.87 mmol)의 혼합물을 95℃의 밀봉된 튜브 내에서 하룻밤 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰고, 용매를 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:2, EA:PE)로 정제하여 100 mg(45%)의 표제 화합물을 제공하였다. C29H34FN5O3에 대한 [M+H] 계산치, 519; 실측치, 519.
실시예 14: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-사이클로펜틸에티닐-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00069
실시예 1의 일반 제조 절차에 따라 표제 화합물을 70% 전체 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.50-1.74 (m, 8H), 1.94-1.99 (m, 4H), 2.88-3.01 (m, 4H), 3.51 (s, 3H), 3.60 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 7.63-7.67 (m, 1H), 8.07-8.11 (m, 2H). C24H26FN5O에 대한 [M+H] 계산치, 419; 실측치, 419.
제조 15A: (2,4,5-트리클로로-6-옥소-6H-피리미딘-1-일)-아세트산 메틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00070
NaH(광유 중의 60%, 6.0 g, 0.12 mol)을 0℃에서 DMF(150 ㎖) 중의 2,5,6-트리클로로-3H-피리미딘-4-온(20.0 g, 0.1 mol)의 용액에 나누어 첨가하였고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 그 다음, 브로모아세트산 메틸 에스테르(18.3 g, 0.12 mol)를 첨가하였고, 반응 혼합물을 하룻밤 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 물(800 ㎖)로 희석하고 EA(200 ㎖, 3회)로 추출하였다. 모은 유기물을 물(800 ㎖, 3회)로 세척하고 염수(500 ㎖)로 세척하고 건조하고(Na2SO4) 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:50, EA:PE)로 정제하여 6.0 g의 표제 생성물(22%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.80 (s, 3H), 5.04 (s, 2H). C7H5Cl3N2O3에 대한 [M+H] 계산치, 271; 실측치, 271.
제조 15B: [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-4,5-디클로로-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산 메틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00071
DIPEA(5.7 g, 44.3 mmol)를 실온에서 DMF(50 ㎖) 중의 (2,4,5-트리클로로-6-옥소-6H-피리미딘-1-일)-아세트산 메틸 에스테르(6.0 g, 22.4 mmol) 및 피페리딘-4-일-카밤산 tert-부틸 에스테르(4.9 g, 24.4 mmol)의 용액에 적가하였고, 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(500 ㎖)로 희석하였고, 고체를 여과로 수집하였다. 그 다음, 고체를 DCM(100 ㎖)에 용해시키고 물(100 ㎖, 3회)로 세척하고 염수(100 ㎖)로 세척하고 건조하고(Na2SO4) 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:2 내지 1:1, DCM:PE)로 정제하여 6.3 g의 표제 생성물(64%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.22-1.34 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.97-2.03 (m, 2H), 2.96-3.09 (m, 2H), 3.68-3.69 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 4.42-4.44 (m, 3H), 4.84 (s, 2H). C17H24Cl2N4O5에 대한 [M+H] 계산치, 435; 실측치, 435.
제조 15C: [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-5-클로로-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산 메틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00072
DMF:H2O(50 ㎖:10 ㎖) 중의 [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-4,5-디클로로-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산 메틸 에스테르(5.76 g, 13.2 mmol), 4-시아노-3-플루오로-벤젠보론산(2.24 g, 16.1 mmol), Pd(PPh3)4(306 mmol, 0.26 mmol) 및 Na2CO3(2.8 g, 26.5 mmol)의 혼합물을 질소 대기 하에서 하룻밤 동안 65℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하였고, 잔사를 실리카 크로마토그래피(1:20 내지 1:0, EA:PE)로 정제하여 2.4 g의 표제 생성물(43%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.27-1.37 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.99-2.02 (m, 2H), 2.99-3.06 (m, 2H), 3.68-3.76 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 4.42-4.52 (m, 3H), 4.90 (s, 2H), 7.63-7.66 (m, 1H), 7.67-7.71 (m, 2H). C24H27ClFN5O5에 대한 [M+H] 계산치, 520; 실측치, 520.
제조 15D: [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산 메틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00073
DMF(50 ㎖) 중의 [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-5-클로로-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산 메틸 에스테르(2.2 g, 4.2 mmol), p-메톡시보론산(1.9 g, 12.7 mmol), Pd-118(274 mg, 0.42 mmol) 및 K2CO3(1.2 g, 8.4 mmol)의 용액을 질소 대기 하에서 6시간 동안 145℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(3회)로 추출하였다. 모은 유기물을 물로 세척하고 염수로 세척하고 건조하고(Na2SO4) 농축하였다. 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 600 mg의 표제 생성물(24%)을 제공하였다. C31H34FN5O6에 대한 [M+H] 계산치, 592; 실측치, 592.
제조 15E: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-1-사이클로프로필메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00074
2 N NaOH 용액(5 ㎖)을 MeOH(10 ㎖) 중의 [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산 메틸 에스테르(600 mg, 1.02 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응의 완료 후, 용액을 1 N HCl로 산성화하고 EA(3회)로 추출하였다. 모은 유기물을 염수로 세척하고 건조하고(Na2SO4) 농축하였다. 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체로서 240 mg의 표제 생성물(41%)을 제공하였다. C30H32FN5O6에 대한 [M+H] 계산치, 578; 실측치, 578.
실시예 15: [2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산
Figure 112019023638871-pct00075
EA(5 ㎖) 중의 5 N HCl 용액을 EA(10 ㎖) 중의 [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산(100 mg, 0.15 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였고, 용매를 진공에서 농축하였다. 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 HCl 염으로서 25 mg의 표제 생성물(32%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.53-1.56 (m, 2H), 2.00-2.03 (m, 2H), 3.00-3.07 (m, 2H), 3.35-3.39 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 4.70 (s, 2H), 4.76-4.77 (m, 2H), 6.74 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 7.2, 8.0 Hz, 1H). C25H24FN5O4에 대한 [M+H] 계산치, 478; 실측치, 478.
제조 16A: {1-[1-카바모일메틸-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00076
NH4Cl(17 mg, 0.3 mmol), HATU(95 mg, 0.25 mmol) 및 DIEA(25 mg, 0.4 mmol)를 DMF(5 ㎖) 중의 [2-(4-tert-부톡시카보닐아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트산(120 mg, 0.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응의 완료 후, 용액을 H2O로 희석하고 DCM(3회)으로 추출하였다. 모은 유기물을 건조하고(Na2SO4) 농축하였다. 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 황핵 고체로서 50 mg의 표제 생성물(43%)을 제공하였다. C30H33FN6O5에 대한 [M+H] 계산치, 577; 실측치, 577.
실시예 16: 2-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-6H-피리미딘-1-일]-아세트아마이드
Figure 112019023638871-pct00077
실시예 15의 제조 절차에 따라 표제 화합물을 96% 수율로 염산염으로서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.49-1.53 (m, 2H), 1.98-2.01 (m, 2H), 2.97-3.04 (m, 2H), 3.33-3.36 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 4.69 (s, 2H), 4.75-4.78 (m, 2H), 6.75 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.16 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 0.8, 10.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 7.2, 8.0 Hz, 1H). C25H25FN6O3에 대한 [M+H] 계산치, 477; 실측치, 477.
제조 17A: 2,6-디클로로-3-(3-메톡시-프로필)-3H-피리미딘-4-온
Figure 112019023638871-pct00078
K2CO3(1.0 g, 7.3 mmol)을 DMF(10 ㎖) 중의 2,6-디클로로-3H-피리미딘-4-온(600 mg, 3.65 mmol)의 용액에 첨가하였고, 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음, 1-브로모-3-메톡시-프로판(101 mg, 7.3 mmol)을 0℃에서 적가하였고, 혼합물을 하룻밤 동안 실온에서 교반하였다. DMF를 진공에서 농축하였고, 잔사를 실리카 크로마토그래피로 정제하여 400 mg의 표제 화합물(47%)을 제공하였다. C8H10Cl2N2O2에 대한 [M+H] 계산치, 237; 실측치, 237.
제조 17B: {1-[4-클로로-1-(3-메톡시-프로필)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00079
DMF(20 ㎖) 중의 2,6-디클로로-3-(3-메톡시-프로필)-3H-피리미딘-4-온(400 mg, 1.68 mmol), 피페리딘-4-일-카밤산 tert-부틸 에스테르(405 mg, 2 mmol) 및 DIEA(260 mg, 2.0 mmol)의 용액을 2시간 동안 85℃에서 교반하였다. 용매를 농축하였고, 잔사를 실리카 크로마토그래피로 정제하여 500 mg의 표제 화합물(75%)을 제공하였다. C18H29ClN4O4에 대한 [M+H] 계산치, 400; 실측치, 400.
제조 17C: {1-[4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-(3-메톡시-프로필)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00080
ACN 중의 {1-[4-클로로-1-(3-하이드록시-프로필)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(200 mg, 0.5 mmol), 4-시아노-3-플루오로페닐 붕산(107 mg, 0.65 mmol), Pd(PPh3)4(12 mg, 0.01 mmol) 및 0.4 M Na2CO3 용액(4 ㎖)의 혼합물을 하룻밤 동안 85℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(3회)로 추출하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였고, 용매를 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피로 정제하여 240 mg의 표제 생성물(99%)을 제공하였다. C25H32FN5O4에 대한 [M+H] 계산치, 485; 실측치, 485.
실시예 17: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-1-(3-하이드록시-프로필)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00081
1 M BBr3(4 ㎖)을 -78℃에서 DCM 중의 {1-[4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-(3-메톡시-프로필)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(200 mg, 0.41 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였고 MeOH로 0℃에서 켄칭하였다. 용액을 수성 포화된 NaHCO3으로 세척하였다. 유기 층을 건조하고 농축하였다. 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 염산염으로서 35 mg의 표제 생성물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): 1.65-1.69 (m, 2H), 1.97-2.19 (m, 4H), 3.13-3.22 (m, 2H), 3.48-3.55 (m, 1H), 3.73 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 4.55 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 4.94-4.95 (m, 2H), 6.71 (s, 1H), 7.88-8.05 (m, 3H). C19H22FN5O2에 대한 [M+H] 계산치, 371; 실측치, 371.
제조 18A: {1-[5-벤조푸란-5-일-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00082
1,4-디옥산(200 ㎖) 중의 {1-[5-클로로-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(200 mg, 0.45 mmol), 벤조푸란-5-보론산(120 mg, 0.68 mmol), Pd(PPh3)4(26 mg, 0.05 mmol) 및 2 M Na2CO3(0.9 ㎖)의 혼합물을 N2 대기 하에서 하룻밤 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(3회)로 추출하였다. 모은 유기물을 염수로 세척하고 건조하고(Na2SO4) 농축하였다. 잔사를 실리카 크로마토그래피로 정제하여 100 mg의 표제 생성물(42%)을 제공하였다. C30H30FN5O4에 대한 [M+H] 계산치, 543; 실측치, 543.
실시예 18: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-벤조푸란-5-일-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00083
EA(10 ㎖) 중의 4 M HCl 용액을 EA(20 ㎖) 중의 제조 18A(60 mg, 0.11 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축하여 염산염으로서 43 mg의 표제 생성물(53%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): 1.85-1.92 (m, 2H), 2.13-2.18 (m, 2H), 3.10 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 3.31-3.33 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.87 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 6.65-7.21 (m, 3H), 7.38-7.76 (m, 4H), 7.76 (s, 1H). C25H22FN5O2에 대한 [M+H] 계산치, 443; 실측치, 443.
제조 19A: {1-[5-시아노-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00084
DMF(5 ㎖) 중의 {1-[5-클로로-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(460 mg, 1 mmol), Zn(CN)2(175 mg, 1.5 mmol) 및 Pd(PPh3)4(116 mg, 0.0.1 mmol)의 혼합물을 N2 대기 하에서 150℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하였고, 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체로서 150 mg의 표제 생성물(33%)을 제공하였다. C23H25FN6O3에 대한 [M+H] 계산치, 453; 실측치, 453.
실시예 19: 2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-5-카보니트릴
Figure 112019023638871-pct00085
EA(5 ㎖) 중의 5 N HCl 용액을 EA(5 ㎖) 중의 {1-[5-시아노-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(150 mg, 0.33 mmol) 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였고, 용매를 진공에서 농축하여 HCl 염으로서 120 mg의 표제 생성물(94%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.67-1.72 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.13-3.16 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.98-4.02 (m, 2H), 7.82-7.90 (m, 3H). C18H17FN6O에 대한 [M+H] 계산치, 353; 실측치, 353.
실시예 20: 4-[2-(4-아미노피페리딘-1-일)-5-클로로-1-메틸-6-옥소피리미딘-4-일]-2-플루오로벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00086
EA(5 ㎖) 중의 5 N HCl 용액을 EA(5 ㎖) 중의 {1-[5-클로로-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(150 mg, 0.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였고, 용매를 진공에서 농축하여 HCl 염으로서 120 mg의 표제 생성물(94%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.67-1.72 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.13-3.16 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.98-4.02 (m, 2H), 7.82-7.90 (m, 3H). C18H17FN6O에 대한 [M+H] 계산치, 353; 실측치, 353. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4): δ ppm 1.73-1.91 (m, 2H), 2.18 (d, J = 12.13 Hz, 2H), 3.06 (t, J = 12.76 Hz, 2H), 3.33-3.40 (m, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.83 (d, J = 13.14 Hz, 2H), 7.75-7.93 (m, 3H).
[표 3]
Figure 112019023638871-pct00087
Figure 112019023638871-pct00088
Figure 112019023638871-pct00089
Figure 112019023638871-pct00090
Figure 112019023638871-pct00091
Figure 112019023638871-pct00092
Figure 112019023638871-pct00093
Figure 112019023638871-pct00094
Figure 112019023638871-pct00095
Figure 112019023638871-pct00096
Figure 112019023638871-pct00097
Figure 112019023638871-pct00098
Figure 112019023638871-pct00099
Figure 112019023638871-pct00100
Figure 112019023638871-pct00101
Figure 112019023638871-pct00102
Figure 112019023638871-pct00103
Figure 112019023638871-pct00104
Figure 112019023638871-pct00105
Figure 112019023638871-pct00106
Figure 112019023638871-pct00107
제조 120A: [1-(5-클로로-4-시아노-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일)-피페리딘-4-일]-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00108
DMF(20 ㎖) 중의 N-[1-(5,6-디클로로-3-메틸-4-옥소(3-하이드로피리미딘-2-일))(4-피페리딜)](tert-부톡시)카복스아마이드(2.4 g, 6.38 mmol), Zn(CN)2(388 mg, 3.32 mmol) 및 Pd(PPh3)4(740 mg, 0.64 mmol)의 혼합물을 N2 대기 하에서 5시간 동안 130℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하였고, 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 200 mg의 표제 생성물(9%)을 제공하였다. C16H22ClN5O3에 대한 [M+H] 계산치, 368; 실측치, 368.
제조 120B: {1-[4-시아노-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00109
디옥산(5 ㎖) 및 H2O(1 ㎖) 중의 [1-(5-클로로-4-시아노-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일)-피페리딘-4-일]-카밤산 tert-부틸 에스테르(200 mg, 0.54 mmol), 3-플루오로-4-메톡시벤젠보론산(278 mg, 1.63 mmol), Pd(dppf)2Cl2(119 mg, 0.16 mmol) 및 Na2CO3(173 mg, 1.63 mmol)의 혼합물을 N2로 탈기하고 2시간 동안 마이크로파 하에서 145℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하였고 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 110 mg의 원하는 생성물(45%)을 제공하였다. C23H28FN5O4에 대한 [M+H] 계산치, 458; 실측치, 458.
실시예 120: 2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-카보니트릴
Figure 112019023638871-pct00110
EA(5 ㎖) 중의 5 N HCl 용액을 EA(5 ㎖) 중의 {1-[4-시아노-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(100 mg, 0.23 mmol)의 혼합물에 첨가하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축하여 HCl 염으로서 85 mg의 표제 생성물(93%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.71-1.75 (m, 2H), 1.89-2.03 (m, 2H), 2.96-3.02 (m, 2H), 3.27-3.31 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.69-3.73 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 7.06 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17-2.01 (m, 2H). C18H20FN5O2에 대한 [M+H] 계산치, 358; 실측치, 358.
제조 121A: {1-[5-시아노-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00111
DMF(5 ㎖) 중의 {1-[5-클로로-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(460 mg, 1 mmol), Zn(CN)2(175 mg, 1.5 mmol) 및 Pd(PPh3)4(116 mg, 0.0.1 mmol)의 혼합물을 N2 대기 하에서 150℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과하였다. 여과액을 진공에서 농축하였고, 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 황색 고체로서 150 mg의 표제 생성물(33%)을 제공하였다. C23H25FN6O3에 대한 [M+H] 계산치, 453; 실측치, 453.
실시예 121: 2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-5-카보니트릴
Figure 112019023638871-pct00112
EA(5 ㎖) 중의 5 N HCl 용액을 EA(5 ㎖) 중의 {1-[5-시아노-4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(150 mg, 0.33 mmol)의 혼합물에 첨가하였고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공에서 농축하여 HCl 염으로서 120 mg의 표제 생성물(94%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.67-1.72 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.13-3.16 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.98-4.02 (m, 2H), 7.82-7.90 (m, 3H). C18H17FN6O에 대한 [M+H] 계산치, 353; 실측치, 353.
제조 122A: 4-시아노-3-플루오로-벤조일 클로라이드
Figure 112019023638871-pct00113
SOCl2(20 ㎖) 중의 4-시아노-3-플루오로-벤조산(2.0 g, 12.12 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 환류하였고, SOCl2를 진공에서 제거하여 4-시아노-3-플루오로-벤조일 클로라이드(2.2 g, 99%)를 제공하였다. 미정제 물질을 추가 정제 없이 다음 단계로 넘겼다.
제조 122B: 3-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-2-(4-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피온산 메틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00114
LiHMDS(18.2 ㎖, 18.18 mmol)을 -78℃에서 THF(20 ㎖) 중의 (4-메톡시-페닐)-아세트산(2.18 g, 12.12 mmol)의 용액에 첨가하였고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. THF 중의 4-시아노-3-플루오로-벤조일 클로라이드(2.2 g, 12 mmol)의 용액을 -78℃에서 적가하였고, 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 하룻밤 동안 교반하였다. 수성 NH4Cl을 첨가하였고, 수성 층을 EA(3회)로 추출하였다. 모은 유기물을 진공에서 농축하였고 잔사를 실리카 컬럼 크로마토그래피(1:5, EA:PE)로 정제하여 1.8 g(45%)의 표제 화합물을 제공하였다. C18H14FNO4에 대한 [M+H] 계산치, 328; 실측치, 328.
제조 122C: {1-[4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르
Figure 112019023638871-pct00115
톨루엔(50 ㎖) 중의 3-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-2-(4-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피온산 메틸 에스테르(1.8 g, 5.5 mmol), (1-카밤이미도일l-피페리딘-4-일)-카밤산 tert-부틸 에스테르(2.6 g, 9.2 mmol) 및 DIEA(2.4 g, 18.3 mmol)의 혼합물을 하룻밤 동안 환류하였다. 용매를 진공에서 농축하였다. 잔사를 MeOH에 현탁하였고, 고체를 여과하여 100 mg(4%)의 표제 화합물을 제공하였다. C28H30FN5O4에 대한 [M+H] 계산치, 520; 실측치, 520.
실시예 122: 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴
Figure 112019023638871-pct00116
EA 중의 5 M HCl 용액을 EA(10 ㎖) 중의 {1-[4-(4-시아노-3-플루오로-페닐)-5-(4-메톡시-페닐)-6-옥소-1,6-디하이드로-피리미딘-2-일]-피페리딘-4-일}-카밤산 tert-부틸 에스테르(50 mg, 0.096 mmol)의 용액에 첨가하였고, 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였고, 잔사를 분취 HPLC로 정제하여 염산염으로서 18 mg(40%)의 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.81-1.87 (m, 2H), 2.22-2.25 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 2H), 3.56-3.60 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 4.61-4.64 (m, 2H), 6.86 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.37-7.38 (m, 1H), 7.51-7.53 (m, 1H), 7.74 (s, 1H). C23H22FN5O2에 대한 [M+H] 계산치, 420; 실측치, 420.
II. 생물학적 평가
실시예 1a: 시험관내 효소 억제 어세이 - LSD-1
이 어세이는 LSD-1 탈메틸화효소 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 측정한다. 이. 콜라이로부터 발현된 전체 길이 인간 LSD-1(수탁번호 O60341)을 액티브 모티프(Active Motif)(카탈로그 #31334)로부터 구입하였다.
LSD-1 활성의 효소 어세이는 시간 해상 형광 공명 에너지 전달(TR-FRET) 검출에 기반을 둔다. LSD-1에 대한 화합물의 억제 성질을 하기 반응 조건 하에서 384웰 플레이트 포맷으로 측정하였다: 0.1 내지 0.5 nM LSD-1, 50 nM H3K4me1-바이오틴 표지된 펩타이드(Anaspec 카탈로그 #64355), 50 mM HEPES 어세이 완충제 중의 2 μM FAD, pH 7.3, 10 mM NaCl, 0.005% Brij35, 0.5 mM TCEP, 0.2 mg/㎖ BSA. LANCE 검출 완충제(PerkinElmer) 중의 LSD-1 억제제, 예컨대, 1.8 mM의 트래닐사이프로마인 하이드로클로라이드(2-PCPA)의 존재 하에서 검출 시약 파이코링크(Phycolink) 스트렙타비딘-알로파이코시아닌(Prozyme) 및 유로퓸-항-비변형된 히스톤 H3 라이신 4(H3K4) 항체(PerkinElmer)를 각각 12.5 nM 및 0.25 nM의 최종 농도로 첨가한 후 TR-FRET로 반응 생성물을 정량적으로 측정하였다.
하기 절차에 따라 어세이 반응을 수행하였다: 3% DMSO 중의 150 nM H3K4me1-바이오틴 표지된 펩타이드와 2 ㎕ 11-점 연속 희석된 시험 화합물의 혼합물 2 ㎕를 플레이트의 각각의 웰에 첨가한 후, 2 ㎕의 0.3 nM LSD-1 및 6 μM의 FAD를 첨가하여 반응을 시작하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 항온처리하였고, 25 nM 파이코링크 스트렙타비딘-알로파이코시아닌 및 0.5 nM 유로퓸-항-비변형된 H3K4 항체를 함유하는 LANCE 검출 완충제 중의 6 ㎕ 1.8 mM 2-PCPA를 첨가하여 종결하였다. 0.5 LSD-1 효소가 플레이트에서 사용된 경우 효소 반응을 15분 이내에 종결시켰다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 항온처리한 후 TR-FRET 모드(320 nm에서 여기, 615 nm 및 665 nm에서 방사)로 엔비전 멀티라벨(EnVision Multilabel) 판독기로 판독하였다. 각각의 웰에 대해 비(665/615)를 계산하고 피팅하여 억제 상수(IC50)를 측정하였다.
LSD-1 활성을 억제하는 본원에 개시된 화합물의 능력을 정량하였고, 각각의 IC50 값을 측정하였다. 표 4는 본원에 개시된 다양한 치환된 헤테로환형 화합물들의 IC50 값을 제공한다.
[표 4]
Figure 112019023638871-pct00117
Figure 112019023638871-pct00118
Figure 112019023638871-pct00119
Figure 112019023638871-pct00120
Figure 112019023638871-pct00121
Figure 112019023638871-pct00122
Figure 112019023638871-pct00123
LSD1 또는 LSD1-CoREST 복합체(보고 QC6688 Pharm 1001)를 사용하여 화합물 A에 의한 라이신 특이적 탈메틸화효소 1A 효소 억제를 평가하였다. 적절한 기질을 사용하여 연속 희석 방법으로 LSD1 및 LSD1-CoREST에 의해 유도된 H3K4me1/2의 탈메틸화의 억제에 대한 화합물 A의 IC50을 측정하였다. 화합물 A는 각각 0.25 ± 0.04 nM 및 3.5 ± 0.55 nM의 평균 IC50 ± SD 값을 제공하는, LSD1 단독 또는 CoREST와 복합체를 형성한 LSD1의 강력한 선택적 억제제이었다. LSD-1 단백질과의 예비항온처리는 관찰된 IC50에 영향을 미치지 않았는데, 이것은 화합물 A와 LSD1의 결합이 가역적이라는 것을 시사한다. LSD1-CoREST 복합체에 대한 평균 IC50 값이 어세이 방법의 검출 하한에 있었기 때문에, IC50의 명확한 차이가 유리 형태의 LSD1와 복합체 형태의 LSD1 사이의 실제 억제 차이를 나타내는 지를 확인할 수 없었다(표 5).
[표 5]
Figure 112019023638871-pct00124
다양한 농도에서 H3K4me1 기질을 사용하여 LSD1에 대한 화합물 A의 억제 기작을 연구하였다. IC50 값과 기질 농도 사이의 선형 상관관계는 화합물 A가 0.12 nM의 Ki를 가진 경쟁적 LSD1 억제제라는 것을 시사한다.
실시예 2: 시험관내 효소 억제 어세이 - MAO 선택성
인간 재조합 모노아민 산화효소 단백질 MAO-A 및 MAO-B를 수득한다. MAO는 일차 아민, 이차 아민 및 삼차 아민의 산화적 탈아민화를 촉진한다. MAO 효소 활성 및/또는 관심 있는 억제제(들)에 의한 그의 억제율을 모니터링하기 위해, 형광 기반 (억제제) 스크리닝 어세이를 수행한다. 비형광 화합물인 3-(2-아미노페닐)-3-옥소프로판아민(키누라민 이브롬화수소(kynuramine dihydrobromide), Sigma Aldrich)을 기질로서 선택한다. 키누라민은 두 MAO 활성에 대한 비특이적 기질이다. 키누라민은 MAO 활성에 의한 산화적 탈아민화를 겪는 동안 4-하이드록시퀴놀린(4-HQ)(생성된 형광 생성물)으로 전환된다.
키누라민이 4-하이드록시퀴놀린으로 전환되는 것을 측정함으로써 모노아민 산화효소 활성을 평가하였다. 어세이를 100 ㎕의 최종 부피로 투명 바닥을 가진 96웰 흑색 플레이트(Corning)에서 수행하였다. 어세이 완충제는 100 mM HEPES(pH 7.5)이었다. 동일한 실험 내에서 각각의 실험을 삼중으로 수행하였다.
요약하건대, 고정된 양의 MAO(MAO-A의 경우 0.25 ㎍, 그리고 AO-B의 경우 0.5 ㎍)를 다양한 농도의 본원에 개시된 화합물(예를 들면, 억제제 강도에 따라 0 내지 50 μΜ)의 부재 및/또는 존재 하에서 반응 완충제에서 15분 동안 얼음 위에서 항온처리하였다. 트래닐사이프로마인(Biomol International)을 억제에 대한 대조군으로서 사용하였다.
효소(들)가 시험 화합물과 상호작용하게 놓아둔 후, MAO-B 및 MAO-A 어세이 각각을 위해 60 내지 90 μΜ의 키누라민을 각각의 반응물에 첨가하였고, 반응물을 37℃의 암실 내에서 1시간 동안 놓아두었다. 50 ㎕의 2 N NaOH을 첨가함으로써 기질의 산화적 탈아민화를 중단시켰다. 마이크로플레이트 판독기(Infinite 200, Tecan)를 이용하여 형광(320 nm에서 여기, 360 nm에서 방사)으로 4-하이드록시퀴놀린으로의 키누라민의 전환을 모니터링하였다. 임의 유닛을 사용하여, 시험 화합물의 부재 및/또는 존재 하에서 생성된 형광의 수준을 측정하였다.
시험 화합물의 부재 하에서 키누라민 탈아민화로부터 형성된 4-하이드록시퀴놀린의 양을 측정함으로써 산화적 탈아민화 활성의 최대치를 수득하였고 배경 형광에 대해 보정하였다. 각각의 억제제의 Ki(IC50)를 Vmax/2에서 측정하였다. 화학적 합성예 1-94, 101-106, 108-117 및 120-122를 전술된 어세이에서 시험하였고 이들이 2 마이크로몰 초과의 IC50을 가진다는 것을 확인하였다.
밀접하게 관련된 FAD 함유 효소들인 LSD2, MAO-A 및 MAO-B를 사용하여 스크리닝 어세이에서 LSD1 억제에 대한 화합물 A의 선택성을 더 확립하였다. 화합물 A에 의한 LSD2의 억제에 대한 실험적으로 측정된 평균 IC50 값은 16,550 ± 6,378 nM이었다. 화합물 A에 의한 MAO-A 및 MAO-B의 억제에 대한 평균 IC50 값은 20,000 nM을 초과하였다. 이 결과는 화합물 A가 LSD2, MAO-A 또는 MAO-B에 비해 LSD1에 대해 60,000배 이상 더 선택적이라는 것을 입증한다(표 6).
[표 6]
Figure 112019023638871-pct00125
실시예 3: LSD-1 CD11b 세포 어세이
세포에서 LSD-1 억제제 효능을 분석하기 위해, CD11b 유세포분석 어세이를 수행하였다. LSD-1 억제는 유세포분석에 의해 측정되는 CD11b 발현을 THP-1(AML) 세포에서 유도한다. THP-1 세포를 웰당 500 ㎕의 최종 부피로 24웰 플레이트 내의 10% 태아 소 혈청 함유 RPMI 1640 배지에 100,000개 세포/웰의 밀도로 시딩하였다. LSD-1 시험 화합물을 DMSO로 연속적으로 희석하였다. 희석물을 0.2% DMSO의 최종 농도로 그에 맞춰 각각의 웰에 첨가하였다. 세포를 4일 동안 5% CO2 하에서 37℃에서 항온처리하였다. 각각의 웰의 250 ㎕를 96웰 환저 플레이트의 웰로 옮겼다. 플레이트를 5분 동안 벡크만 코울터 알레그라(Beckman Coulter Alegra) 6KR 원심분리기 내에서 4℃에서 120 rpm으로 원심분리하였다. 세포를 웰의 바닥에 남기면서 배지를 제거하였다. 세포를 100 ㎕의 냉각된 HBSS(행크의 균형잡힌 염 용액) 플러스 2% BSA(소 혈청 알부민) 용액으로 세척하고 5분 동안 4℃에서 1200 rpm으로 원심분리하였다. 세척을 제거하였다. 세포를, APC 접합된 마우스 항-CD11b 항체(BD Pharmingen 카탈로그 # 555751)의 1:15 희석물을 함유하는 100 ㎕ HBSS 플러스 2% BSA에 재현탁하고 25분 동안 얼음 위에서 항온처리하였다. 세포를 원심분리하고 100 ㎕ HBSS 플러스 2% BSA로 2회 세척하였다. 최종 회전 후, 세포를 1 ㎍/㎖ DAPI(4',6-디아미디노-2-페닐인돌)를 함유하는 100 ㎕ HBSS 플러스 2% BSA에 재현탁하였다. 그 다음, 세포를 BD FACSAria 기계에서 유세포분석으로 분석하였다. CD11b 발현에 대해 세포를 분석하였다. 각각의 억제제 농도에 대한 CD11b 발현 세포의 퍼센트를 사용하여, 분석된 각각의 화합물에 대한 IC50 곡선을 결정하였다.
표 7은 본원에 개시된 다양한 치환된 헤테로환형 화합물들의 세포 IC50 값을 제공한다.
[표 7]
Figure 112019023638871-pct00126
Figure 112019023638871-pct00127
Figure 112019023638871-pct00128
Figure 112019023638871-pct00129
Figure 112019023638871-pct00130
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실시예 4: Kasumi-1 AML 세포주 증식 어세이(세포-MTS 어세이)
확립된 AML 암 세포주 Kasumi-1의 증식에 영향을 미치는 LSD-1 소분자 억제제의 능력을 평가하기 위한 비색 세포 어세이
어세이 배경
LSD-1 단백질은 SCLC 및 AML을 비롯한 다양한 유형의 암들의 생물학에 있어서 핵심 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. 잠재적인 항암 요법으로서 LSD-1의 소분자 억제를 입증하기 위해, AML의 확립된 암 세포주에서 증식 억제의 정도를 측정하기 위한 어세이를 실시하였다.
어세이 원리
이 세포-MTS 어세이는 시험 화합물의 존재 및 부재 하에서 새로 생성된 NADH의 양을 정량하는 7일 플레이트 기반 비색 어세이이다. 이 NADH 수준은 암 세포 증식의 정량을 위한 대용물로서 사용된다.
어세이 방법
검증된 p53 돌연변이를 가진 확립된 암 세포주 Kasumi-1을 어메리칸 타입 컬처 콜렉션(ATCC)으로부터 구입하였고 ATCC 공개된 프로토콜에 따라 통상적으로 계대배양하였다. 통상적인 어세이를 위해, 이 세포들을 96웰당 20,000개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이팅한 지 24시간 후, 100 μM 내지 2.0 nM의 최종 농도 범위로 11점 희석의 시험 화합물을 세포에게 제공하였다. 세포를 37℃ 및 5% CO2에서 168시간 동안 화합물의 존재 하에서 항온처리한다. 이 화합물 항온처리 기간의 종료일에, 80 ㎕의 배지를 제거하고 20 ㎕의 CellTiter 96® AQueous 비방사성 세포 증식 어세이 용액(Promega)을 첨가한다. OD490이 0.6을 초과할 때까지 세포를 항온처리한다. IC50 값은 IDBS XLfit 소프트웨어 팩키지의 사용을 통해 계산되고 배경 차감된 OD490 값 및 DMSO 대조군으로의 표준화를 포함한다.
표 8은 본원에 개시된 다양한 치환된 헤테로환형 화합물들의 Kasumi-1 세포 IC50 값을 제공한다.
[표 8]
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실시예 5: 생체내 제노그래프 연구 - MCF-7 제노그래프
0.72 mg 17-β 에스트라디올을 함유하는 시간 방출 펠렛을 nu/nu 마우스 내로 피하 이식한다. MCF-7 세포를 5% CO2 및 37℃에서 10% FBS 함유 RPMI에서 생장시킨다. 세포를 회전시켜 침전시키고 50% RPMI(무혈청) 및 50% Matrigel에 1X107개 세포/㎖로 재현탁한다. MCF-7 세포를 펠렛 이식 후 2일째 날 또는 3일째 날에 우측 옆구리에서 피하 주사하고(100 ㎕/동물) 종양 부피(길이x폭2/2)를 2주마다 모니터링한다. 종양이 약 200 mm3의 평균 부피에 도달할 때, 동물을 무작위로 배정하고 처리를 시작한다. 동물을 4주 동안 비히클 또는 화합물로 매일 처리한다. 종양 부피 및 체중을 연구 전체에 걸쳐 2주마다 모니터링한다. 처리 기간의 종료일에, 약동학적 및 약력학적 분석을 위해 각각 혈장 및 종양 샘플을 채취한다.
실시예 6: 생체내 제노그래프 연구 - LNCaP 제노그래프
LSD-1의 안정한 넉다운을 가진 LNCaP 세포(shLSD-1 세포) 또는 대조군 세포(예컨대, shNTC 세포)를 피하 주사(예컨대, 100 ㎕의 50% RPMI 1640/BD Matrigel 중의 3 x 106개 세포)로 누드 마우스의 등 옆구리에 접종한다. 마우스 체중 및 종양 크기를 주당 1회 측정하고, 식 (7i/6)(LxW)을 이용하여 종양 부피를 추정하는데, 상기 식에서 L은 종양의 길이이고 W는 종양의 폭이다. 2 샘플 t-검정을 수행하여 2개의 군들 사이의 평균 종양 부피의 통계학적 차이를 측정한다.
비변형된 LNCaP 세포를 누드 마우스의 등쪽 옆구리 내로 피하 주사하여 접종한다(예컨대, 100 ㎕ 중의 50% RPMI 1640/BD Matrigel 중의 3 x 106개 세포). 3주 후, 물(대조군), 파길린(70% 생체이용률을 가정할 때, 0.53 mg 또는 1.59 mg; 1 또는 3 mM 최종 농도) 또는 XB154(70% 생체이용률을 가정할 때, 4 또는 20 ㎍; 1 또는 5 μΜ 최종 농도)를 하루에 1회 복강내로 마우스에게 주사하거나, 마우스를 시험 화합물(매주 5 mg/kg 또는 매주 10 mg/kg)로 처리한다. 처리를 3주 동안 계속하고, 이 기간 동안 마우스 체중 및 종양 부피를 전술된 바와 같이 측정한다.
shLSD-1 LNCaP 세포 또는 대조군 세포를 전술된 바와 같이 누드 마우스에게 주사한다. 3주 후, 마우스를 2.6 ㎍ 미토마이신 C(40% 생체이용률을 가정할 때, 1 μΜ의 예상된 최종 농도), 올라파립(예를 들면, 약 0.5 mg/kg 내지 25 mg/kg) 또는 비히클로 3주 동안 하루에 1회 복강내로 처리한다. 다른 예에서, 비변형된 LNCaP 세포를 전술된 바와 같이 누드 마우스 내로 주사한다.
3주 후, MMC 또는 올라파립과 함께 상기 시험 화합물 또는 비히클을 사용하여 마우스를 처리한다. 처리를 3주 동안 계속하고, 이 기간 동안 마우스 체중 및 종양 부피를 전술된 바와 같이 측정한다.
대조군에 비해, shLSD-1 세포를 주사받은 마우스에서의 종양 부피의 감소는 LSD-1 억제가 생체내에서 종양 성장을 감소시킨다는 것을 시사한다.
유사하게, 대조군에 비해, LNCaP 세포를 주사받고 본원에 개시된 화합물로 처리된 마우스의 종양 부피의 감소는 LSD-1 억제가 생체내에서 종양 성장을 감소시킨다는 것을 시사한다. 최종적으로, 본원에 개시된 화합물만으로 처리된 마우스에 비해, LNCaP 세포를 주사받고 본원에 개시된 화합물 및 올라파립으로 처리된 마우스의 종양 부피의 감소는 LSD-1의 억제 및 PARP의 억제가 생체내에서 종양 성장을 감소시킨다는 것을 시사한다.
채취된 이종이식편 조직을 LSD-1 억제의 증거에 대해 조사한다. 이것을 웨스턴 블롯으로 평가하여, shRNA 세포의 경우에서 2MK4 및 2MK9 히스톤 마크의 전체적인 수준, FA/BRCA 유전자의 발현, FANCD2 유비퀴틴화 및 LSD-1 단백질 수준을 조사한다. 이 파라미터들 중 하나 이상의 파라미터의 감소는 LSD-1의 효과적인 억제를 시사한다. 추가로, DNA 손상 복구에 대한 효과를 H2AX 초점에 대한 염색으로 평가한다.
실시예 7: 정상 인간 섬유모세포 및 소세포 폐암 세포에서 항증식 활성
다양한 확립된 NCI SCLC 세포주들(보고 QC6688-Pharm-1002)에서 세포 생존율에 대한 화합물 A의 효과를 조사하였다. 화합물 A에 대해 0.17 내지 10,000 nM 및 0.7 내지 500 nM의 각각의 농도 범위에 걸쳐 정상 인간 섬유모세포 세포주인 IMR-90 및 일군의 6개 SCLC 세포주들에 대한 절반 최대 억제 농도 값을 측정하였다. 화합물 A는 시험된 6개 SCLC 세포주들 중 5개 SCLC 세포주들에서 강력한 항증식 활성을 나타내었다. NCI-H69, NCI-H146, NCI-H209, NCI-H526 및 NCI-H1417 세포주에서, 화합물 A는 7.0 ± 2.5 nM, 9.9 ± 9.6 nM, 3.9 ± 0.2 nM, 36.4 ± 28.8 nM, 및 14.6 ± 12.6 nM의 각각의 평균 IC50 ± SD 값을 나타내었다. 화합물 A는 NCI-H841 SCLC 세포주에서 세포 증식에 대한 제한된 효과를 나타냄으로써, 500 nM 초과의 IC50 값을 제공하였다. 화합물 A는 시험된 농도에서 IMR-90 정상 인간 섬유모세포 세포주에서 세포 증식에 대한 효과를 보이지 않았다(IC50 값 > 10,000 nM)(표 9).
[표 9]
Figure 112019023638871-pct00134
실시예 8: 소세포 폐암 세포에서 약력학적 바이오마커 가스트린 방출 펩타이드에 대한 효과
라이신 특이적 탈메틸화효소 1A 억제는 SCLC 세포주에서 신경내분비 종양 관련 유전자, 예컨대, 인간 GRP의 발현을 조절하는 것으로 확인되었다. 정량 역전사 중합효소 연쇄 반응(qRT-PCR)을 이용하여, 인간 SCLC 세포주인 NCI-H1417, NCI-H209 및 NCI-H69에서 GRP의 발현에 대한 LSD1의 화합물 A 매개 억제의 효과를 평가하였다. 항온처리 기간 후, 총 RNA를 추출하였고, qRT-PCR을 이용하여 GRP mRNA 수준의 배수 변화를 측정하였다. (DMSO 대조군에 비해) GRP mRNA 발현 대 각각의 화합물 A 농도의 퍼센트 변화를 계산함으로써 GRP 발현의 화합물 A 억제에 대한 IC50을 측정하였다. 대조군의 퍼센트 = 100 x 2-ΔΔCt, 하우스킵핑 유전자 전사체로 표준화된 처리 후 GRP mRNA 수준. 화합물 A를 사용한 처리는 NCI-H1417, NCI-H209 및 NCI-H69 세포에서 GRP 메신저 리보핵산(mRNA) 수준을 농도 의존적으로 하향조절하여, 각각 8.9 ± 4.6 nM, 7.2 ± 4.7 nM 및 6.0 ± 3.8 nM의 IC50 ± SD 값을 제공하였다(도 1).
ChIP-seq를 이용하여 SCLC 세포주 NCI-H69 및 NCI-H209에서 LSD1과 GRP 유전자 좌위의 결합을 조사하였다. 염색질 면역침전 및 시퀀싱 결과는 LSD1이 GRP 유전자 좌위의 100 킬로염기 내에 있는, H3K4me1 양성 영역으로서 확인된 인핸서 요소를 공-점유한다는 것을 보여주었다. 이 결과는 LDS1이 GRP 좌위에 대한 가능한 조절 부위에 결합하고 LSD1이 GRP 유전자 발현을 직접적으로 조절할 수 있다는 것을 암시함으로써, GRP가 SCLC에서 LSD1 억제에 대한 약력학적(PD) 바이오마커임을 뒷받침한다(도 2).
실시예 9: NCI-H1417 소세포 폐암 이종이식편 모델에서 인간 가스트린 방출 펩타이드 메신저 리보핵산 발현에 대한 화합물 A에 의한 라이신 특이적 탈메틸화효소 1A 억제의 효과
시험관내에서 관찰된 화합물 A 매개 LSD1 억제의 효과를 생체내 환경으로 해석하기 위해, 여러 SCLC 생체내 모델들에서 화합물 A 처리 후 TGI 및 표적 유전자 발현 변화를 측정하였다. 화합물 A에 의한 LSD1 억제 후, 인간 GRP 발현의 조절을 무흉선 누드 마우스에서 인간 NCI-H1417 SCLC 이종이식편 모델에서 평가하였다. 피하 이식된 NCI-H1417 SCLC 종양을 보유하는 암컷 마우스를 4일 동안 2.5, 5 또는 10 mg 염기/kg QD의 화합물 A로 경구 처리하였고, GRP 발현 수준을 측정하였다. qRT-PCR로 확인하였을 때, 화합물 A를 사용한 처리는 비히클로 처리된 대조군 동물에 비해 처리된 종양 보유 마우스에서 GRP mRNA 수준의 용량 관련 하향조절을 야기하였다. 평균 발현 값을 비교할 때, 2.5, 5 또는 10 mg 염기/kg의 화합물 A는 대조군 동물에 비해 각각 44%, 53% 및 56%까지 GRP 유전자 발현을 감소시켰다. GRP 유전자 발현의 감소는 5 mg 염기/kg 이상의 화합물 A의 용량에 대해 통계학적으로 유의미하였다(p ≤ 0.05)(도 3).
실시예 10. NCI-H1417 소세포 폐암 이종이식편 모델에서 화합물 A의 효능
암컷 무흉선 누드 마우스에서 인간 NCI-H1417 SCLC 이종이식편 SC 모델에서 화합물 A의 효능 및 내약성을 평가하였다. NCI-H1417 SCLC 종양을 보유하는 암컷 마우스에게 2.5 또는 5 mg 염기/kg 화합물 A, 또는 대조군으로서 10 ㎖/kg 0.5% 메틸 셀룰로스 비히클을 연속 65일 동안 QD(QDx65)로 경구 투약하였다. 65일째 날 종양 성장 억제 분석은 화합물 A 처리가 2.5 mg 염기/kg 용량에서 159%의 TGI(p ≤ 0.001) 및 5 mg 염기/kg 용량에서 178%의 TGI(p ≤ 0.0001)를 야기할 정도로 NCI-H1417 모델에서 효과적이었다는 것을 입증하였다(표 10). 7마리의 대조군 동물들 중 6마리의 대조군 동물들은 연구의 종료일에 순 종양 부피의 증가를 나타내었다. 대조적으로, 화합물 A로 처리된 동물들로부터의 1개 종양을 제외한 모든 종양들(15개 중 14개)은 순 부피의 감소를 보였다. 대조군 동물들에서의 평균 종양 성장은 연구 과정 전체에 걸쳐 진행된 반면, 2개의 화합물 A 처리군들에서의 종양은 14일째 날 후 감소되었다(도 4). 화합물 A의 내약성은 우수한 듯하였고, 2.5 또는 5 mg 염기/kg 용량을 제공받은 동물은 연구의 종료일까지 각각 1% 및 7.5%의 평균 체중 획득을 나타내었다. 모든 동물들은 연구의 지속시간 동안 생존하였다.
[표 10]
Figure 112019023638871-pct00135
실시예 11: LU2514 및 LU1480 HuPrime® 소세포 폐암 환자 유래의 이종이식편 모델에서 화합물 A의 효능
암컷 BALB/c 누드 마우스에 피하 이식된 환자 유래의 HuPrime SCLC 모델 LU2514 및 LU1480에서 화합물 A를 평가하였다.
LU2514 연구에서, 처리된 암컷 마우스는 10 mg 염기/kg(n = 10) 또는 5 mg 염기/kg(n = 8)의 화합물 A를 28일 동안 QD(QDx28) 경구로 제공받았다. 마지막 투약일인 처리 후 28일째 날, 종양 성장 억제 분석을 수행하였다. 화합물 A는 10 mg 염기/kg 및 5 mg 염기/kg에서 각각 61% 및 43%의 TGI(p ≤ 0.01)를 야기할 정도로 효과적이었다(표 11). 종양 성장은 대조군 동물에 비해 두 화합물 A 처리군들에서 감소되었다(도 5).
[표 11]
Figure 112019023638871-pct00136
LU2514 연구에서, 22일 동안 10 mg 염기/kg으로 경구 투약된 화합물 A는 62%의 TGI라는 결과를 가져왔다. 화합물 A 처리군에서의 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 감소되었다. 조직학적 분석은 대조군 동물로부터의 종양이 고전적인 잘 분화되지 않은 둥근 세포 형태 및 과립형 염색질을 보인다는 것을 보여주었다. 화합물 A로 처리된 동물로부터의 종양은 "보다 더 느슨한" 구조를 갖는 세포, 감소된 핵 대 세포질 비, 및 보다 더 많은 수의 아폽토시스체를 나타내었다(도 6). LU2514 동물 모델을 사용한 두 연구에서, 화합물 A는 10% 미만의 평균 체중 손실과 함께 우수한 내약성을 갖는 것으로 보였다.
LU1480 연구에서, 21일 동안 화합물 A의 경구 투여는 10 mg 염기/kg 용량에서 72%의 TGI(p ≤ 0.001) 및 5 mg 염기/kg 용량에서 53%의 TGI(p ≤ 0.01)를 달성할 정도로 효과적이었다(표 12). 화합물 A 처리군에서의 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 감소되었다(도 7). LU1480 실험에서, 15일 동안 10 mg 염기/kg으로 경구 투약된 화합물 A는 46%의 TGI라는 결과를 가져왔다. 이 LU1480 연구에서, 아마도 LU1480 모델의 고유 악액질 성질로 인해 일반화되고 지속된 체중 손실이 보고되었다.
[표 12]
Figure 112019023638871-pct00137
요약하건대, 5 또는 10 mg 염기/kg으로 경구 투약되었을 때, 화합물 A는 SCLC의 LU2514 및 LU1480 PDX 모델에서 효과적인 것으로 밝혀졌다. 대조군 동물에 비해 화합물 A로 처리된 동물에 대한 용량 관련 TGI(43% 내지 72%)는 샘플 크기가 작은 LU2514를 제외한 모든 연구들에서 통계학적으로 유의미하였다.
실시예 12: LXFS 573, LXFS 615, LXFS 1129 및 LXFS 2156 소세포 폐암 환자 유래의 이종이식편 모델에서의 화합물 A의 효능
암컷 면역결핍 NMRI-Foxn1nu 마우스 내로 피하 이식된 4개의 상이한 SCLC PDX 모델들인 LXFS 573, LXFS 615, LXFS 1129 및 LXFS 2156에서도 경구 투여된 화합물 A의 항종양 효과를 평가하였다. 화합물 A를 사용한 치료는 연구의 종료일(28일째 날)에 5 mg 염기/kg 용량에서 78%의 TGI(p ≤ 0.001), 7.5 mg 염기/kg 용량에서 58%의 TGI(p ≤ 0.01) 및 10 mg/kg 용량에서 71%의 TGI(p ≤ 0.001)를 달성할 정도로 SCLC의 LXFS 573 PDX 모델에서 효과적이었다(표 13). 10일째 날 후, 화합물 A 처리군에서의 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 감소되었다(도 8). 화합물 A는 3% 이하의 평균 체중 손실과 함께 우수한 내약성을 갖는 것으로 보였다.
[표 13]
Figure 112019023638871-pct00138
LXFS 615 PDX 모델에서, 30일 동안 5 mg 염기/kg의 화합물 A의 경구 투여는 78%의 TGI를 야기하였다(p ≤ 0.001). 화합물 A 처리군의 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 감소되었다(도 9). 화합물 A는 1% 미만의 평균 체중 손실과 함께 우수한 내약성을 갖는 것으로 보였다. 마지막 용량 후 채취된 혈장 샘플에 대해 수행된 약동학적 분석은 5 mg 염기/kg에서 화합물 A의 AUC0-24가 1,617 ng·hr/㎖라는 것을 입증하였다.
30일 동안 QD로 화합물 A의 투여는 연구 종료일에 5 mg 염기/kg 용량에서 89%의 TGI(p ≤ 0.001) 및 1.5 mg 염기/kg 용량에서 55%의 TGI(p ≤ 0.05)를 달성할 정도로 SCLC의 LXFS 1129 PDX 모델에서 효과적이었다. 12일째 날 후, 두 화합물 A 처리군들에서의 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 감소되었다(도 10). 화합물 A는 6% 미만의 평균 체중 손실과 함께 우수한 내약성을 갖는 것으로 보였다. 1.5 및 5 mg 염기/kg에서 화합물 A의 AUC0-24는 각각 243 및 1,262 ng·hr/㎖이었으므로, 1.5 mg 염기/kg 용량에 비해 5 mg 염기/kg 용량에서 노출의 비례적 증가보다 더 큰 증가가 관찰되었다.
5 mg 염기/kg으로 QDx23 경구 투약되었을 때, 화합물 A는 -7%의 TGI라는 결과를 가져올 정도로 LXFS 2156 PDX 모델에서 효과적이지 않았다.
요약하건대, 화합물 A의 경구 투여는 SCLC의 LXFS 573, LXFS 615 및 LXFS 1129 PDX 모델들에서 효과적이었다. 대조군 동물에 비해 화합물 A로 처리된 동물에 대한 TGI의 수준(55% 내지 89%)은 유의미하였다. 화합물 A는 6% 미만의 체중 손실과 함께, 시험된 모든 4종의 모델들에서 우수한 내약성을 갖는 듯하였다.
실시예 13. 암컷 BALB/c 누드 마우스에서 각각의 HuPrime® 피하 폐 및 위 신경내분비 암종 환자 유래의 이종이식편 모델 LU2527 및 GA0087에서의 화합물 A의 생체내 효능
암컷 면역결핍 BALB/c 누드 마우스에서 확립된 각각의 HuPrime® 피하 폐 및 위 신경내분비 암종(NEC) 환자 유래의 이종이식편(PDX) 모델 LU2527 및 GA0087을 사용하여 매일 1회(QD) 투약 일정으로 화합물 A의 생체내 효능 및 내약성을 임상 전에 평가하였다. LU2527 및 GA0087을 각각 폐의 비정형적 카르시노이드 및 위 분문의 카르시노이드로서 특징규명하였다. TGI 분석일 퍼센트 종양 성장 억제(% TGI) 및 처리된 동물과 대조군 동물 사이의 평균 순 종양 부피의 차이, 및 연구 과정 전체에 걸쳐 평균 종양 성장을 기반으로 효능을 결정하였다. 처리된 동물과 대조군 동물 사이의 평균 체중의 차이를 기반으로 내약성을 평가하였다.
스톡(stock) 마우스에서의 일련의 계대배양(R3P6)에서 이종이식편으로부터 LU2527 종양 단편을 수득하였다. 종양을 공여자 마우스로부터 제거한 후 단편(직경 2 내지 3 mm)으로 절단하고 수용자 암컷 면역결핍 BALB/c 마우스의 우측 옆구리에 피하 접종하였다. 종양이 약 159 mm3에 도달할 때까지 종양을 50일 동안 성장시켰다. 그 다음, 종양 보유 마우스(11주령 또는 12주령)를, 159.7±13.6 mm3, 159.7±13.9 mm3 및 159.7±13.5 mm3의 평균 종양 부피를 가진 8마리 마우스들의 3개 군들로 무작위로 배정하였다. 이 날을 0일째 날로서 표시하였고, 표 14에 나타낸 소정의 섭생법에 따라 투약을 시작하였다.
[표 14]
Figure 112019023638871-pct00139
스톡 마우스에서의 일련의 계대배양(R15P7)에서 이종이식편으로부터 GA0087 종양 단편을 수득하였다. 종양을 공여자 마우스로부터 제거한 후 단편(직경 2 내지 3 mm)으로 절단하고 수용자 암컷 면역결핍 BALB/c 마우스의 우측 옆구리에 피하 접종하였다. 종양이 약 133 mm3에 도달할 때까지 종양을 24일 동안 성장시켰다. 그 다음, 종양 보유 마우스(13주령 또는 14주령)를, 133.2±7.6 mm3, 133.0±7.8 mm3 및 133.1±8.5 mm3의 평균 종양 부피를 가진 8마리 마우스들의 3개 군들로 무작위로 배정하였다. 이 날을 0일째 날로서 표시하였고, 표 15에 나타낸 소정의 섭생법에 따라 투약을 시작하였다.
[표 15]
Figure 112019023638871-pct00140
칼리퍼를 이용하여 개별 종양을 2차원으로 매주 2회 측정하였고, 하기 식을 이용하여 종양 부피(TV)(mm3)를 계산하였다: TV = 0.5 a X b2, 이때 a 및 b는 각각 밀리미터 단위의 긴 직경 및 짧은 직경이다. 동물의 체중을 매주 2회 측정하였다. 0일째 날부터 퍼센트 변화로서 평균 종양 성장 곡선 및 평균 체중 도표를 구축하였다.
하기 식에 따라 중간 종양 부피를 이용하여 퍼센트 TGI를 계산하였다:
Figure 112019023638871-pct00141
상기 식에서, T0 및 C0은 투약 시작 전 화합물 A 처리군 및 대조군 각각의 중간 종양 부피이었고, Tx 및 Cx는 TGI 분석일인 "x"일째 날 상응하는 중간 종양 부피이었다.
화합물 A로 처리된 모든 동물들에 대한 종양 부피 측정이 이용 가능한 마지막 날인 각각 46일째 날 및 53일째 날에 LU2527 및 GA0087 연구에서 TGI를 계산하였다. 상기 두 연구에서, 각각의 대조군 내의 한 마리 동물은 좋지 않은 종양 생착으로 인해 검열되었고, LU2527 연구에서 21일째 날 연구에서 빠진 제2 대조군 동물은 아마도 경구 위관영양법 오류로 인해 우발적인 사망으로서 검열되었다. GA0087 연구에서, 1.5 mg/kg 화합물 A를 제공받은 한 마리 동물은 53일째 날에 종양 부피 종점(≥3000 mm3)에 도달하였으나, 57일째 날까지 희생되지 않았다. 그 결과, 56일째 날 측정치를 검열하여, 53일째 날을 TGI 분석일로서 확립하였다.
표는 LU2527 및 GA0087 연구에 대한 각각의 처리 계획을 요약한다. 각각의 유형의 종양에 대해, 시험 동물들을 군당 8마리 마우스들의 3개 군들로 분류하였고, 평균 종양 크기가 무작위배정 기준을 충족시켰을 때인 0일째 날에 처리를 시작하였다. 대조군 마우스는 표시된 바와 같이 매일 1회(QD) 일정으로 경구 위관영양법(PO)에 의해 투여된 10 ㎖/kg(체중)의 0.5% 메틸 셀룰로스 비히클을 제공받았다. 처리된 마우스는 표시된 바와 같이 QD 일정으로 mg/kg 유리 염기 균등물로서 PO 투약된 10 ㎖/kg의 화합물 A를 제공받았다. 각각의 연구에서 2마리의 동물들은 결과에 영향을 미치지 않는 휴약기를 제공받았다. 시험 제품인 화합물 A는 비히클에 현탁된 염(74% 활성 화합물)으로서 매일 제조되었다.
LU2527 연구에 대한 결과는 표 16에 표시되어 있다. 폐암의 LU2527 PDX 모델에서 화합물 A는 46일 동안 QD로 경구 투약되었을 때 1.5 mg/kg에서 51%의 용량 의존적 TGI 및 5 mg/kg에서 84%의 용량 의존적 TGI라는 결과를 가져왔다. 도 11에 나타낸 바와 같이, 5 mg/kg 화합물 A로 처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 TGI 분석일 평균 순 종양 부피의 차이는 유의미하였다(p = 0.0001). 도 12에 나타낸 바와 같이, 5 mg/kg 화합물 A로 처리된 군에서의 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 상당히 감소되었다. 도 13에 나타낸 바와 같이, 화합물 A는 비히클 대조군의 평균 체중 변화와 실질적으로 상이하지 않은 평균 체중 변화를 나타내면서 허용 가능한 내약성을 갖는 듯하였다. TGI 분석일 후, 비히클 대조군을 포함하는 모든 군들에서 점진적인 평균 체중 손실이 일어났는데, 이것은 체중 손실이 종양 존재량과 관련될 수 있다는 것을 암시한다.
[표 16]
Figure 112019023638871-pct00142
GA0087 연구에 대한 결과는 표 17에 제시되어 있다. 위암의 GA0087 PDX 모델에서, 화합물 A는 53일 동안 QD로 경구 투약되었을 때 1.5 mg/kg에서 53%의 TGI 및 5 mg/kg에서 56%의 TGI라는 결과를 가져왔다. 도 14에 나타낸 바와 같이, 화합물 A로 처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 TGI 분석일 평균 순 종양 부피의 차이는 유의미하지 않았다(p > 0.05). 도 15에 나타낸 바와 같이, 화합물 A 처리군에서의 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 감소되었다. 도 16에 나타낸 바와 같이, 화합물 A는 비히클 대조군의 평균 체중 변화와 실질적으로 상이하지 않은 평균 체중 변화를 나타내면서 허용 가능한 내약성을 갖는 듯하였다. 약 49일째 날부터 비히클 대조군을 비롯한 모든 군들에서 점진적인 평균 체중 손실이 일어났는데, 이것은 체중 손실이 종양 존재량과 관련될 수 있다는 것을 암시한다. 1.5 mg/kg 화합물 A를 제공받은 한 마리 동물은 53일째 날에 종양 부피 종점(≥3000 mm3)에 도달하였으나 57일째 날까지 희생되지 않았다. 그 결과, 56일째 날 측정치는 평균 종양 성장 및 평균 체중 분석을 위해 검열되었다.
[표 17]
Figure 112019023638871-pct00143
매일 투약된 경구 화합물 A는 폐암의 LU2527 PDX 모델에서 효과적이었다. 반응은 1.5 mg/kg에서 51%의 TGI 및 5 mg/kg에서 84%의 TGI라는 결과를 가져올 정도로 용량 의존적이었다. 5 mg/kg 화합물 A로 처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 TGI 분석일 평균 순 종양 부피의 차이는 유의미하였고, 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 상당히 감소되었다.
매일 투약된 경구 화합물 A는 위암의 GA0087 PDX 모델에서 적당히 효과적이었다. 반응은 1.5 mg/kg에서 53%의 TGI 및 5 mg/kg에서 56%의 TGI라는 결과를 가져왔고, 처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 TGI 분석일 평균 순 종양 부피의 차이는 유의미하지 않았다. 처리된 동물에 대한 평균 종양 성장은 대조군 동물에 비해 적당히 감소되었다.
화합물 A는 두 연구에서 허용 가능한 내약성을 갖는 듯하였다. 모든 군들은 늦은 점진적인 평균 체중 손실을 나타내었는데, 이것은 체중 손실이 치료와 관련되지 않았다는 것을 내포한다.
실시예 14: 2종의 인간 메르켈 세포 암종 모델 MKL-1 및 MS-1에서의 화합물 A의 시험관내 및 생체내 효능
인간 메르켈 세포 암종은 LSD1을 발현하는 공격성 피부 신경내분비 종양으로서 분류된다. 이 종양은 SCLC 종양보다 더 접근 가능하고 인간 연구에서 약력학적 노력에 유용한 것으로 입증될 수 있다. 효과적인 hMCC 치료는 화합물 A에 대한 추가 적응증을 제공할 수 있는, 매우 충족되지 않은 필요성이다. 본 비-임상시험 실시기준(GLP) 임상 전 연구에서, 시험관내 세포 증식 억제 어세이를 수행하여 화합물 A로 처리된, 배양된 MKL-1 및 MS-1 세포주에 대한 IC50 값을 측정하였다. 추가로, 암컷 NSG 마우스에서 확립된 2종의 hMCC 이종이식편 모델 MKL-1 및 MS-1에서 단일요법으로서 생체내 효능 및 내약성에 대해 화합물 A를 평가하였다.
이 연구의 목적은 시험관내 세포 증식 억제 어세이를 이용하여 화합물 A로 처리된, 배양된 MKL-1 및 MS-1 세포에 대한 IC50 값을 측정하고, 암컷 NSG 마우스에서 확립된 MKL-1 및 MS-1 이종이식편 모델에서 간헐적 일정으로 5 mg/kg의 단일요법으로서 경구 투약된 화합물 A의 생체내 효능 및 내약성을 측정하는 것이었다.
암컷 NSG 마우스(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, The Jackson Laboratory, 메인주 바하버 소재)를 이 연구에 사용하였다. 시험 마우스는 종양 이식 당일 7주령 내지 9주령이었다. 종양 이식 전에 1주 동안 동물을 순화시켰다.
물(역삼투, 산성화됨), 및 20% 미정제 단백질, 5.6% 지방(산 가수분해) 및 4.7% 미정제 섬유로 구성된 PicoLab® 설치류 정규식을 동물에게 무제한으로 공급하였다. 마우스를 72 ± 2℉ 및 30% 내지 70% 습도에서 12시간 광 주기로 ALPHA-dri®의 장벽 시설에 수용하였다.
셀진 콴티셀 리서치(Celgene Quanticel Research)는 구체적으로 통제, 축산, 수술적 절차, 사료 및 유체 규정, 및 수의학적 관리에 대한 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침의 권고(국립 과학 아카데미)를 준수하였다. CQR의 동물 관리 및 사용 프로그램은 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 허용된 표준 준수를 보장하는, 셀진 콴티셀 리서치 동물 관리 및 사용 운영 위원회에 의해 승인된 관련 규제 표준에 일치한다.
10% 태아 소 혈청(FBS)으로 보충된 100 유닛/㎖ 페니실린 G 나트륨 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 설페이트 함유 RPMI-1640 배양 배지(cRPMI)(Life Technologies, 캘리포니아주 칼스바드 소재)에서 MKL-1 hMCC 세포를 시험관내에서 배양하였다. 20% FBS로 보충된 cRPMI에서 MS-1 hMCC 세포를 시험관내에서 배양하였다. 상기 두 세포주들을 5% 이산화탄소 및 95% 공기의 대기 하에서 37℃의 가습 항온처리기에서 배양하였다.
시험관내 증식 억제 연구를 위해, 화합물 A 스톡 용액을 디메틸설폭사이드(DMSO)로 제조하고 배양 배지로 연속적으로 희석하였다. 생체내 이종이식편 연구를 위해, 화합물 A를 10 ㎖/kg의 투약 부피로 물 중의 0.5% 메틸셀룰로스에 현탁하고 투여하였다.
MKL-1 및 MS-1 hMCC 세포를 2차원(2D) 어세이 포맷으로 생장 배지를 함유하는 멀티웰 플레이트 내에 시딩하였다. 그 다음, 세포를 소정의 일수 동안 화합물 A로 처리하였다. 각각의 세포주에 대한 세포 생존율을 정량하였고 IC50 값을 계산하였다.
촉진 가능한 hMCC MKL-1 및 MS-1 종양(각각 약 63 mm3 및 약 45 mm3의 평균 종양 부피)을 보유하는 암컷 NSG 마우스를 각각 2개의 군들로 무작위로 배정하였다. 간헐적 일정(5일 투약에 이은 투약 없는 2일[5일 투약(on)/2일 중단(off)])으로 단일요법으로서 5 mg/kg 화합물 A를 한 군에게 경구 투여하였고, 동일한 일정으로 대조군으로서 비히클을 다른 군에게 경구 투여하였다.
처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 TGI 및 평균 종양 성장의 차이의 통계학적 평가를 기반으로 효능을 결정하였다. 각각의 개별 동물의 건강 상태를 모니터링함으로써 내약성을 평가하였다.
흑색 벽을 가진 96웰 멀티웰 플레이트에서 수행된 2D 어세이 포맷을 이용하여 MKL-1 및 MS-1 세포주의 생존율을 평가하였다. 10% FBS로 보충된 100 ㎕ RPMI 1640에 현탁된 5,000개의 MKL-1 세포 또는 20% FBS로 보충된 100 ㎕ RPMI 1640에 현탁된 7,500개의 MS-1 세포를 각각의 시험 웰에 제공하였다. 화합물 A를 DMSO로 연속적으로 희석한 후 RPMI 1640으로 희석하여(1:1000), 일련의 50배 스톡을 만들었다. 0.0, 0.7, 2.1, 6.2, 18.5, 55.5, 166.7 및 500 nM의 화합물 A의 최종 농도를 제공하기 위해 음성 대조군으로서 RPMI 1640 중의 2 ㎕ 1개 스톡 또는 2 ㎕ DMSO를 각각의 시험 웰에 제공하였다. 각각의 농도에서 4회 내지 6회 반복실험을 수행하였다. 멀티웰 플레이트를 7일 동안 항온처리하였고, 제조자의 지시에 따라 CellTiter-Glo® 발광 세포 생존율 어세이를 이용하여 각각의 시험 웰에서 생존 세포의 수를 평가하였고 발광측정기(FilterMax F3, Molecular Devices)로 판독하였다. CellTiter-Glo® 발광 세포 생존율 어세이는 ATP의 정량을 기반으로 생존 세포의 수를 측정하였다.
종양 세포 접종일에, MKL-1 및 MS-1 세포를 대수기 생장 동안 수거하고 2 x 108개 세포/㎖의 농도로 100% Matrigel®(BD Biosciences, 캘리포니아주 산 호세 소재)에 재현탁하였다. 각각의 시험 마우스는 우측 옆구리에 피하 이식된 0.1 ㎖ 세포 현탁액(2 x 107개 세포)을 제공받았다. MKL-1 및 MS-1 종양이 각각 약 63 mm3 및 약 45 mm3의 평균 종양 부피에 도달할 때까지 이들을 14일 동안 성장시켰다. 그 다음, MKL-1 종양 보유 마우스를, 각각 63.0±12.4 mm3 및 62.9±12.4 mm3의 평균 종양 부피를 가진 8마리 마우스의 2개 군들로 무작위로 배정하였다. MS-1 종양 보유 마우스를, 각각 43.4±9.7 mm3 및 48.1±15.9 mm3의 평균 종양 부피를 가진 8마리 마우스의 2개 군들로 무작위로 배정하였다. 무작위 배정일을 -3일째 날로서 표시하였고, 표 18에 제시된 소정의 섭생법에 따라 1일째 날에 투약을 시작하였다.
[표 18]
Figure 112019023638871-pct00144
표 18에 표시된 바와 같이, 대조군 마우스는 연구 종료일까지 반복된 5일 투약/2일 중단 일정으로 경구(PO) 투여된 수성 0.5% 메틸셀룰로스 비히클을 제공받았다. 화합물 A 단일요법 군은 5일 투약/2일 중단 일정으로 5 mg/kg 화합물 A를 PO로 제공받았다. 시험 제품인 화합물 A를 비히클에 현탁된 벤젠설폰산염(74% 활성 화합물)으로서 매일 제조하였고 mg/kg 유리 염기 균등물로서 투약하였다. 모든 군들에서, 10 ㎖/kg의 투약 부피를 개별 동물의 체중에 맞게 조정하였다.
칼리퍼를 이용하여 개별 종양을 3차원으로 매주 2회 측정하였고, 식 TV = 0.5 x l x w x h를 이용하여 mm3으로 종양 부피(TV)를 계산하였는데, 상기 식에서 l, w 및 h는 각각 밀리미터 단위의 길이, 폭 및 높이이다. 이 연구들을 위한 종양 부피 종점은 2000 mm3이었다. 동시에, 동물의 체중을 측정하였고, 신체검사를 통해 각각의 개별 동물의 건강 상태를 체중 손실 및 무기력의 징후에 대해 모니터링하였다.
종양 부피 종점에 도달한 동물이 연구에서 빠졌을 때, 그 동물에 대해 기록된 최종 종양 부피는 후속 시점에서 평균 부피를 계산하는 데 사용된 데이터와 함께 포함되었다. 시간의 함수로서 군 평균 종양 부피(± 평균의 표준 오차[SEM])를 보여주는 종양 성장 곡선을 작도하였고, 1일째 날부터 평균 체중을 퍼센트 변화로서 작도하였다.
각각의 시험 웰에서의 각각의 판독정보를 이용하여, 생존 세포의 수를 DMSO로 처리된 웰에서의 생존 세포의 평균 수로 표준화하였고 퍼센트로서 표현하였다. 상응하는 화합물 A 농도에 대한 퍼센트 생존 세포를 작도하였고, 방정식 251을 이용하는 마이크로소프트 엑셀용 IDBS XLfit 프로그램 애드-인(add-in)(ID Business Solutions Ltd., 영국 소재)에 의해 생성된 4 파라미터 로지스틱(4PL) 비선형 회귀 곡선으로부터 IC50 값을 측정하였다. IC50 값은 억제가 절반 최대인 농도로서 산출되었다. 각각의 세포주에 대한 억제 어세이를 4회 내지 6회 생물학적 반복실험으로서 수행하였고, IC50 ± 표준 편차(SD)를 보고하였다.
MKL-1 및 MS-1 연구에서, 한 마리 이상의 대조군 동물이 종점에 도달한 첫날인 15일째 날 및 36일째 날에 각각의 TGI 분석을 수행하였다. 하기 식에 따라 중간 종양 부피를 사용하여 퍼센트 TGI를 계산하였다:
Figure 112019023638871-pct00145
상기 식에서, TO 및 CO는 투약 시작 전(-3일째 날) 각각 처리군 및 대조군에서의 중간 종양 부피이고, Tx 및 Cx는 TGI 분석일인 "x"일째 날 상응하는 중간 종양 부피이다.
TGI 분석일 개별 종양 부피를 투약의 시작 전 그의 부피에 대해 보정하였고, 각각의 군에 대한 수득된 순 종양 부피를 상자수염도로 그래프화하였다. t-검정을 이용하여 처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 순 종양 부피 분포의 차이를 통계학적으로 평가하였다. 0.05 이하의 계산된 확률(p)은 통계학적으로 유의미한 것으로서 간주되었다. t-검정은 통계학적 유의성의 검정이고, 군들 사이의 차이의 크기의 추정치, 또는 임상적 또는 생물학적 유의성의 척도를 제공하지 않는다.
2D 세포 증식 억제 어세이에 대한 실험적으로 측정된 IC50 값은 표 19에 요약되어 있다. 0.0 내지 500 nM 화합물 A의 농도 범위에 걸쳐 MKL-1 및 MS-1 hMCC 세포주에 대한 IC50 값을 측정하였고 4PL 비선형 회귀를 이용하여 수득된 적정 곡선으로부터 확인하였다. 어세이는 100% 세포 증식에 대한 기준을 확립한 DMSO 음성 대조군을 포함하였다. 표 18 및 도 17에 표시된 바와 같이, 화합물 A는 2D 포맷으로 분석된 배양된 MKL-1 및 MS-1 세포주에 대해 각각 18.4 ± 4.8 nM 및 19.7 ± 0.7 nM의 IC50 ± SD 값이라는 결과를 가져왔다.
[표 19]
Figure 112019023638871-pct00146
이 연구에서 시험 동물을 표 18의 프로토콜에 따라 처리하였고, 한 마리 이상의 대조군 동물이 종점에 도달한 첫날인 각각 15일째 날 및 36일째 날에 MKL-1 및 MS-1 연구를 위한 TGI 분석을 수행하였다.
표 20에 표시된 바와 같이, 화합물 A 단일요법은 15일째 날에 52%의 종양 성장 억제를 야기할 정도로 MKL-1 hMCC 모델에서 생체내에서 효과적이었다. 도 18에 나타낸 바와 같이, 처리된 동물 대 비히클 대조군 동물에 대한 15일째 날 평균 순 종양 부피의 차이는 유의미하였다(p=0.0002). 도 19에서 알 수 있는 바와 같이, 평균 종양 성장은 대조군에서 꾸준히 진행되었다. 화합물 A 단일요법 군에서의 평균 종양 진행은 대조군에서 관찰된 평균 종양 진행에 비해 다소 더 느렸다. 도 20에 표시된 바와 같이, 비히클 또는 화합물 A 단일요법을 제공받은 군은 연구 15일째 날까지 점진적인 평균 체중 획득을 나타내었고, 15일째 날 후 두 군들은 순 체중 획득의 유사한 감소를 보였다.
[표 20]
Figure 112019023638871-pct00147
표 21에 표시된 바와같이, 화합물 A 단일요법은 36일째 날에 95%의 종양 성장 억제를 야기할 정도로 MS-1 hMCC 모델에서 생체내에서 효과적이었다. 도 21에 나타낸 바와 같이, 처리된 동물 대 비히클 대조군 동물에 대한 36일째 날 평균 순 종양 부피의 차이는 유의미하였다(p<0.0001). 도 6에서 알 수 있는 바와 같이, 평균 종양 성장은 대조군에서 신속히 진행되었다. 화합물 A 단일요법 군에서, 평균 종양 진행은 18일째 날까지 거의 정적이었고, 그 후 점진적으로 증가하였다. 도 22의 삽도에 예시된 바와 같이, 화합물 A로 처리된 3종의 종양들은 초기에 퇴행하였고 2종의 종양들은 25일째 날에 되돌아왔다. 도 23에 표시된 바와 같이, 비히클 또는 화합물 A 단일요법을 제공받은 군은 연구의 과정에 걸쳐 평균 체중 획득을 나타내었다.
[표 21]
Figure 112019023638871-pct00148
시험관내에서 수행된 세포 증식 억제 어세이에서, 화합물 A는 배양된 MKL-1 및 MS-1 세포주에서 각각 18.4 ± 4.8 nM 및 19.7 ± 0.7 nM의 IC50 ± SD 값이라는 결과를 가져올 정도로 강력한 활성을 나타내었다.
화합물 A 단일요법은 처리된 동물 대 비히클 대조군 동물에 대해 15일째 날에 52%의 종양 성장 억제 및 평균 순 종양 부피의 유의미한 차이(p=0.0002)라는 결과를 가져올 정도로 MKL-1 hMCC 모델에서 생체내에서 효과적이었다. 화합물 A 단일요법 군에서의 평균 종양 진행은 대조군에서 관찰된 평균 종양 진행에 비해 다소 더 느렸다.
화합물 A 단일요법은 처리된 동물 대 비히클 대조군 동물에 대해 36일째 날에 95%의 종양 성장 억제 및 평균 순 종양 부피의 유의미한 차이(p<0.0001)라는 결과를 가져올 정도로 MS-1 hMCC 모델에서 생체내에서 효과적이었다. 화합물 A 단일요법 군에서, 평균 종양 진행은 18일째 날까지 거의 정적이었고, 그 후 점진적으로 증가하였다.
비히클 또는 화합물 A 단일요법을 제공받은 군은 이 연구의 과정 전체에 걸쳐 평균 체중 획득을 나타내었다. 화합물 A는 MKL-1 및 MS-1 이종이식편 연구에서 허용 가능한 내약성을 보이는 것으로 간주되었다.
실시예 15. 메르켈 세포 암종에서 약력학적 바이오마커에 대한 화합물 A의 시험관내 및 생체내 효과
인간 메르켈 세포 암종은 LSD1을 발현하는 공격성 피부 신경내분비 종양으로서 분류된다. 이 종양은 SCLC 종양보다 더 접근 가능하고 인간 연구에서 PD 노력에 유용한 것으로 입증될 수 있다. 효과적인 hMCC 치료는 화합물 A에 대한 추가 적응증을 제공할 수 있는, 매우 충족되지 않은 필요성이다.
본 비-임상시험 실시기준(GLP) 임상 전 연구에서, RNA-seq 및 qRT-PCR을 이용하여 시험관내에서 세포 배양물로서 및 생체내에서 이종이식편으로서 2개의 hMCC 모델 MKL-1 및 MS-1에서 화합물 A에 의한 LSD1 억제 후 인간 mRNA 발현의 조절을 평가하였다. 추가로, ChIP-seq를 이용하여 MKL-1 및 MS-1 세포주에서 LSD1과 ST18 및 FREM2 유전자 좌위의 직접 결합 및 화합물 A 처리 시 H3K4me2 상태의 변화를 조사하였다.
이 연구의 목적은 인간 hMCC 세포주 MKL-1 및 MS-1에서 시험관내 및 생체내에서 유전자 발현에 대한 LSD1의 화합물 A 매개 억제의 효과를 측정하는 것이었다. 추가로, ChIP-seq를 이용하여 MKL-1 및 MS-1 세포주에서 LSD1과 ST18 및 FREM2 유전자 좌위의 직접 결합 및 화합물 A 처리 시 H3K4me2 상태의 변화를 조사하였다.
시험관내 세포 배양 연구를 위해, 화합물 A 스톡 용액을 디메틸설폭사이드(DMSO)로 제조하고 배양 배지로 연속적으로 희석하였다. 생체내 이종이식편 연구를 위해, 화합물 A를 물 중의 0.5% 메틸셀룰로스에 현탁하고 10 ㎖/kg의 투약 부피로 투여하였다.
10% 태아 소 혈청(FBS)으로 보충된 100 유닛/㎖ 페니실린 G 나트륨 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 설페이트 함유 RPMI-1640 배양 배지(cRPMI)(Life Technologies, 캘리포니아주 칼스바드 소재)에서 MKL-1 hMCC 세포를 배양하였다. MS-1 hMCC 세포를 20% FBS로 보충된 cRPMI에서 시험관내에서 배양하였다. 두 세포주들을 5% 이산화탄소 및 95% 공기의 대기 하에서 37℃의 가습된 항온처리기 내에서 배양하였다.
0, 10 또는 100 nM 화합물 A의 존재 하에서 3일 동안 MKL-1 또는 MS-1 세포(Sigma-Aldrich, 미조리주 세인트 루이스 소재)를 배양하고 RNA-seq에 의한 평가를 위해 총 RNA를 추출함으로써 일군의 인간 유전자들에 대한 화합물 A에 의한 유전자 발현의 조절을 확인하였다. 두 농도에서 두 hMCC 세포주들에서 하향조절되었거나 상향조절된 유전자를 더 평가하였다. 그 다음, 두 농도에서 두 hMCC 세포주들에서 적어도 2배의 용량 의존적 유전자 발현 변화를 나타낸 유전자를 후보 PD 바이오마커 유전자로서 확인하였다.
다음으로, 후보 PD 바이오마커 유전자를 후속 연구에서 더 평가하였다. 시험관내 연구에서, qRT-PCR을 이용하여 배양된 MKL-1 또는 MS-1 세포주에서 후보 PD 바이오마커 유전자에 대하여 유전자 발현의 화합물 A 조절에 대한 EC50 값을 측정하였다. 생체내 이종이식편 용량-반응 연구에서, 5일 동안 1, 2.5 또는 5 mg/kg의 비히클 또는 화합물 A 단일요법을, 촉진 가능한 MKL-1 또는 MS-1 종양을 보유하는 암컷 비-비만 당뇨병성 중증 복합 면역결핍(NOD-SCID) 감마(NSG) 마우스에게 매일 2회(BID) 경구 투여하였다. 마지막 용량을 제공받은 지 4시간 후, 종양을 채취하였고, 후보 PD 바이오마커에 대한 유전자 발현의 변화의 qRT-PCR 평가를 위해 총 RNA를 추출하였다. 최종 연구에서, 화합물 A의 존재 하에서 LSD1 점유 및 H3K4me2 상태의 변화에 대해 후보 PD 바이오마커를 ChIP-seq로 분석하였다.
이 분석들로부터, 세포 증식의 화합물 A 억제에 대한 IC50 값과 상호관련된 EC50 값, 시험관내 용량 반응과 생체내 용량 반응 사이의 강한 상관관계, 및 화합물 A의 존재 하에서의 LSD1 점유 및 H3K4me2 조절을 나타내는 유전자를 hMCC 모델에서 LSD1의 화합물 A 억제에 대한 잠재적 PD 바이오마커로서 확인하였다.
RNA-seq 및 qRT-PCR 어세이를 각각 10% 또는 20% FBS로 보충된 cRPMI에 현탁된 MKL-1 또는 MS-1 세포로 시딩된 멀티웰 배양 플레이트에서 삼중으로 수행하였다. 화합물 A를 DMSO로 희석한 후 보충된 cRPMI로 다시 희석하여 스톡 용액을 제조하였다. RNA-seq 분석을 위해 0, 10 또는 100 nM, 또는 qRT-PCR 분석을 위해 0, 2.5, 7.4, 22, 66 또는 200 nM의 최종 화합물 A 농도를 제공하기 위해 비히클 대조군으로서의 DMSO 또는 화합물 A의 분취물을 각각의 시험 웰에 제공하였다. 배양 플레이트를 5% CO2 및 95% 공기의 대기 하에서 37℃의 가습된 항온처리기 내에서 3일 동안 배양하였다. 항온처리 기간 후, 배양된 MKL-1 또는 MS-1 세포를 수거하였고, 제조자의 지시에 따라 RNeasy Mini 키트(QIAGEN, 캘리포니아주 발렌시아 소재)를 사용하여 총 RNA를 정제하였다.
촉진 가능한 hMCC MKL-1 및 MS-1 종양을 보유하는 암컷 NSG 마우스를 각각 3마리 마우스들의 4개 군들로 무작위로 배정하였다. 9회 용량을 위해 매일 2회 투약 일정(BID x4.5)으로 단일요법으로서 1, 2.5 또는 5 mg/kg의 화합물 A를 3개의 군들에게 경구 투여하였다. BID 일정으로 대조군으로서 비히클을 4번째 군에게 경구 투여하였다. 마지막 투약으로부터 4시간 후, 종양을 RNAlater 내로 채취한 후 냉동 저장하였다.
종양 샘플을 해동시켰고, 제조자의 지시에 따라 RNeasy Mini 키트를 사용하여 총 RNA를 정제하였다. 제조자의 지시에 따라 RNase 무함유 DNase 세트(QIAGEN, 캘리포니아주 발렌시아 소재)를 사용한 온-컬럼(on-column) DNase 처리를 이용하여 잔류 데옥시리보핵산(DNA)을 제거하였다. 총 RNA를 RNase 무함유 물로 용출하고 qRT-PCR로 분석하였다.
제조자의 지시에 따라 Illumina® 플랫폼(Kapa Biosystems, 매사추세츠주 윌밍톤 소재)을 위한 KAPA 스트랜디드 mRNA-Seq 키트를 사용하여, 처리된 MKL-1 또는 MS-1 배양된 세포 및 대조군 MKL-1 또는 MS-1 배양된 세포로부터 추출된 정제된 총 RNA(1 ㎍)를 시퀀싱 라이브러리로 전환시켰다. 75 염기 페어링된-말단 RNA 시퀀싱을 이용하여 Illumina NextSeq® 500 시스템(Illumina, 캘리포니아주 샌 디에고 소재)에서 라이브러리를 시퀀싱하였다. 시퀀싱된 판독물(read)을 hg19 인간 게놈 구축물에 맵핑하였고, 모든 반복실험들 전체에 걸친 분산 분석으로 차등 발현을 비히클 대조군과 비교하여 확인하였다.
제조자의 지시에 따라 고성능 cDNA 역전사 키트(Life Technologies, 뉴욕주 그랜드 아일랜드 소재)를 사용하여 역전사 반응에서 처리된 MKL-1 또는 MS-1 배양된 세포 또는 종양 샘플 및 대조군 MKL-1 또는 MS-1 배양된 세포 또는 종양 샘플로부터 추출된 정제된 총 RNA로부터 상보적(c) DNA를 생성하였다. 데옥시리보뉴클레오타이드, 무작위 프라이머, 역전사효소, RNase 억제제 및 역전사 완충제를 함유하는 1.5배 역전사 마스터 혼합물을 제조하였고 20 ㎕를 96웰 멀티웰 플레이트의 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 그 다음, 10 ㎕의 총 RNA를 각각의 시험 웰에 제공하였고, 멀티웰 플레이트를 밀봉하여 증발을 방지하였다. 키트 제조자에 의해 제공된 최적화된 파라미터를 사용하여 프로그래밍된 T100™ 열순환기(Bio-Rad, 캘리포니아주 허큘레스 소재)에서 역전사를 수행하였다.
화합물 A 처리에 반응하여 mRNA의 발현 수준을 qPCR로 이중으로 측정하였다. 표적 유전자에 대한 절대 판독정보를 표준화하기 위한 기준 서열로서 인간 유전자 ST18, FREM2 및 액틴 베타(ACTB)에 대한 프라이머 세트를 사용하여 처리된 MKL-1 또는 MS-1 배양된 세포 또는 종양 샘플 및 대조군 MKL-1 또는 MS-1 배양된 세포 또는 종양 샘플로부터 추출된 총 RNA로부터 제조된 cDNA에 대한 TaqMan® qPCR을 수행하였다. mRNA 전사체의 총 수준을 ACTB 기준 전사체로 표준화하였다. 비히클로 처리된 대조군에 비해 화합물 A 처리 후 유전자 발현의 배수 변화를 계산함으로써 mRNA 발현의 변화를 정량하였다.
각각 10% 또는 20% FBS로 보충된 cRPMI 중의 현탁액에서 생장된 MKL-1 또는 MS-1 세포를 사용하여 ChIP-seq 어세이를 수행하였다. 화합물 A를 DMSO로 희석한 후 보충된 cRPMI로 다시 희석하여 스톡 용액을 제조하였다. 0 또는 100 nM의 최종 화합물 A 농도를 제공하기 위해 비히클 대조군으로서의 DMSO 또는 화합물 A의 분취물을 각각의 시험 웰에 제공하였다. 배양 플레이트를 5% CO2 및 95% 공기의 대기 하에서 37℃의 가습된 항온처리기 내에서 3일 동안 배양하였다. 항온처리 기간 후, 배양된 MKL-1 또는 MS-1 세포를 수거하였고, 10분의 1 부피의 새로운 11% 포름알데하이드 용액을 각각의 웰에 첨가한 후 20분 동안 항온처리함으로써 주위 온도에서 가교결합시켰다. 1/20 부피의 2.5 M 글리신을 첨가하여 가교결합 반응을 켄칭하였다. 그 다음, 가교결합된 세포를 수거하고 빙냉 인산염 완충 식염수(PBS)로 2회 세정하였다. 세포를 원심분리로 펠렛화하였고, 6 x 106개의 MS-1 세포 또는 4.5 x 106개의 MKL-1 세포를 함유하는 분취물을 액체 질소에서 급속 냉동시키고 -80℃에서 저장하였다.
포름알데하이드에 의해 고정된 세포를 함유하는 냉동된 세포 펠렛을 용해시키고 초음파처리하여, 가교결합된 염색질을 가용화시키고 전단하였다(Bioruptor®, Diagenode, 뉴저지주 덴빌 소재). 제조자의 지시에 따라 전사 인자용 iDeal ChIP-seq 키트(Diagenode, 뉴저지주 덴빌 소재)를 사용하여 염색질을 준비하였다. 전사 인자용 iDeal ChIP-seq 키트를 사용하여 LSD1 관련 염색질을 항-LSD1 항체(Abcam, 매사추세츠주 캠브리지 소재)로 면역침전시켰다. 히스톤용 iDeal ChIP-seq 키트(Diagenode, 뉴저지주 덴빌 소재)를 사용하여 H3K4me2 관련 염색질을 H3K4me2 다중클론 항체(Millipore, 매사추세츠주 빌러리카 소재)로 면역침전시켰다. 각각의 샘플로부터 준비되었으나 임의의 면역침전으로 처리되지 않은 염색질을 투입 대조군으로서 사용하였고 ChIPed 샘플과 동시에 프로세싱하였다. 가교결합을 복원시키도록 각각의 샘플을 처리하였고, RNAse A, 단백질분해효소 K 및 페놀:클로로포름:이소아밀 알코올 추출로 처리한 후 에탄올로 침전시켜 DNA를 정제하였다. 제조자의 지시에 따라 MicroPlex 라이브러리 제조 키트 v2(Diagenode, 뉴저지주 덴빌 소재)를 사용하여 ChIP 라이브러리를 제조하였다. 75개 염기의 단일 말단 판독물 길이를 사용하여 Illumina NextSeq® 500 시스템에서 시퀀싱하기 전에, 제조자의 지시에 따라 AMpure XP 비드(Beckman Coulter, 인디애나주 인디애나폴리스 소재)를 사용하여 ChIP 라이브러리를 크기별로 선택하였다.
기준물에의 스플라이싱된 전사체 정렬(STAR) 소프트웨어 수단(ⓒAlexander Dobin, 2009-2016)을 이용하여 시퀀싱된 판독물을 hg19 인간 게놈 구축물에 맵핑하였고, R에서의 디지털 유전자 발현 데이터의 경험적 분석(edgeR) 및 음성 이항 분포에 기반을 둔 차등 유전자 발현 분석(DESeq2) 소프트웨어 수단(ⓒBioconductor, 2003 - 2017)을 이용하여 전사체 카운트를 표준화하였다. 모든 반복실험들 전체에 걸친 분산 분석으로 차등 발현을 비히클 대조군과 비교하여 확인하였다.
qPCR 발현 분석에서, 주기 역치(Ct)는 PCR 신호가 배경을 초과하는 데 필요한 주기의 수로서 정의된다. 델타 Ct(ΔCt)는 ACTB 기준 서열의 Ct 값으로 표준화된 ST18 또는 FREM2 표적 유전자의 Ct 값에 상응하고, 이때 다음과 같다:
ΔCt표적 = Ct표적 - CtACTB
상대적 표적 발현의 정량을 비교 Ct 방법으로 수행하였다. 비교 Ct 방법은 하기 제시된 바와 같이 각각의 처리된 샘플과 대조군 샘플에 대한 ΔCt표적과 대조군 샘플에 대한 평균 ΔCt표적 사이의 차이를 계산하는 단계를 포함한다:
ΔΔCt표적 = ΔCt표적, 처리군 또는 대조군 - 평균 ΔCt표적, 대조군
(대조군에 비해) 표적 mRNA 발현 대 화합물 A 농도의 배수 변화(2-ΔΔCt로서 계산됨)를 시험된 각각의 화합물 A 농도에 대해 계산하였다. 그 다음, 마이크로소프트 엑셀용 IDBS XLfit 프로그램 애드-인 및 방정식 251(ID Business Solutions Ltd., 영국 소재)을 이용하여 그 데이터에 피팅된 4PL 비선형 회귀 곡선으로부터 EC50을 측정하였다.
Bowtie 2 짧은 판독물 정렬 소프트웨어(Langmead, 2012)를 이용하여 ChIP 라이브러리 서열을 hg19 인간 게놈 구축물에 정렬시켰다. MKL-1 또는 MS-1 세포에서 LSD1 또는 H3K4me2에 대한 풍부한 또는 "결합된" 영역을 전체 세포 추출물 샘플로부터의 배경 판독물과 비교하여 확인하였다. 적어도 20의 점수를 가진 Illumina 맵핑 품질(MAPQ) 필터를 통과한 판독물만을 후속 분석에 사용하였다. 피카드 마크듀플리케이트(Picard MarkDuplicates) 수단(http://broadinstitute.github.io/picard, Broad Institute, 매사추세츠주 캠브리지 소재)을 이용하여 PCR 이중실험으로부터 유래한 판독물을 제거하였다. 최소 수의 판독물을 가진 샘플로부터의 판독물의 총 수까지 무작위 다운샘플링함으로써 대조군 샘플과 처리된 샘플 사이에 ChIP-seq당 판독물의 수를 표준화하였다. ChIP-seq의 모델 기반 분석(MACS) (http://liulab.dfci.harvard.edu/MACS/; Zhang, 2008)을 이용하여 ChIP 피크를 판정하였다. deepTools bamCoverage 수단(http://deeptools.readthedocs.io/en/latest/content/tools/bamCoverage.html; Ramirez, 2016)을 이용하여 게놈 범위 트랙을 생성하였다. 통합 게노믹스 뷰어(Integrative genomics viewer) IGV(http://software.broadinstitute.org/software/igv/; Robinson, 2011; Thorvaldsdottir, 2013)를 이용하여 ChIP-seq 트랙을 가시화하였다.
0, 10 또는 100 nM 화합물 A의 존재 하에서 3일 동안 MKL-1 또는 MS-1 세포를 배양하고 RNA-seq에 의한 평가를 위해 총 RNA를 추출함으로써 일군의 인간 유전자들에 대한 화합물 A에 의한 유전자 발현의 조절을 확인하였다. 도 24에 나타낸 바와 같이, 4303개의 하향조절된 유전자들 중 17개의 하향조절된 유전자들(표 22) 및 3803개의 상향조절된 유전자들 중 172개의 상향조절된 유전자들(표 23)은 두 농도에서 두 hMCC 세포주들에서 유전자 발현 변화를 나타내었다.
[표 22]
Figure 112019023638871-pct00149
[표 23]
Figure 112019023638871-pct00150
추가 평가를 위해, 표 24에 나타낸 바와 같이, 두 농도에서 두 hMCC 세포주들에서 적어도 2배의 용량 의존적 유전자 발현 변화를 나타낸 2개의 상향조절된 유전자들인 ST18 및 FREM2를 후보 PD 바이오마커 유전자로서 확인하였다. ST18은 유방암에서 종양 억제제로서 작용하고(Jandrig, 2004) 섬유모세포에서 전구아폽토시스 및 전구염증 유전자 발현을 조절하는(Yang, 2008) 것으로 확인되었다. 원위 전이는 폐 선암종을 가진 것으로 진단된 환자에서 흔히 일어난다. 최근 연구는 FREM2가 초점 부착 키나제 신호전달의 하향조절을 통해 비소세포 폐암 A549 세포주의 증식보다는 오히려 이동 및 침습을 조절한다는 것을 입증하였다(Zhan, 2014).
[표 24]
Figure 112019023638871-pct00151
도 25에 나타낸 바와 같이, 0, 2.5, 7.4, 22, 66 또는 200 nM 화합물 A의 존재 하에서 3일 동안 배양된 MKL-1 또는 MS-1 세포주에서 후보 PD 바이오마커 유전자에 대한 qRT-PCR로 유전자 발현의 화합물 A 조절에 대한 EC50 값을 측정하였다. ST18 및 FREM2는 이 세포주들에서 세포 증식의 화합물 A 억제에 대한 IC50 값과 상호관련되어 있는 EC50 값을 나타내었다(< 20 nM, 데이터는 제시되지 않음)
생체내 이종이식편 용량-반응 연구에서, 1, 2.5 또는 5 mg/kg의 비히클 또는 화합물 A를, 3마리의 종양 보유 암컷 NSG 마우스들의 군에게 BIDx4.5 일정으로 PO 투여하였다. 마지막 용량을 제공한 지 4시간 후, 종양을 채취하였고, 후보 PD 바이오마커에 대한 유전자 발현의 변화를 qRT-PCR로 평가하기 위해 총 RNA를 추출하였다. 도 25에 나타낸 바와 같이, ST18 및 FREM2는 유전자 발현의 2배 이상의 변화를 보였고 두 모델들에서 생체내에서 용량 의존적 반응을 나타내었다.
도 26에 표시된 바와 같이, ChIP-seq 분석은 LSD1이 배양된 MKL-1 및 MS-1 세포에서 ST18 및 FREM2 유전자에 결합한다는 것을 입증하였다. ST18 유전자의 LSD1 의존적 H3K4 메틸화 조절과 일치하게, 화합물 A 처리는 MKL-1 및 MS-1 모델들 둘 다에서 LSD1 결합 부위에서 증가된 H3K4me2를 유발하였다. 추가로, 화합물 A 처리는 MKL-1 모델에서 FREM2 유전자 내의 LSD1 결합 부위에서 증가된 H3K4me2를 유발하였으나 MS-1 모델에서는 유발하지 않았다. 이 결과는 ST18 및 잠재적으로 FREM2가 LSD1의 직접적인 표적 유전자라는 것과 일치하는데, 이것은 이들이 hMCC에서 화합물 A에 의한 LSD1의 억제에 대한 잠재적 PD 바이오마커라는 것을 뒷받침한다.
2개의 hMCC 모델인 MKL-1 및 MS-1에서 일군의 유전자들에 대하여 화합물 A에 의한 LSD1의 억제 후 mRNA 발현의 조절을 평가하였다. 2개의 유전자 ST18 및 FREM2를 선택하여, MKL-1 및 MS-1 모델에서 시험관내 및 생체내 유전자 발현에 대한 LSD1의 화합물 A 매개 억제의 효과, 및 이들의 유전자 좌위에서의 LSD1의 직접 결합 및 H3K4 메틸화의 LSD1 의존적 조절을 더 평가하였다.
배양된 MKL-1 또는 MS-1 세포에서 RNA-seq에 의해 평가된 일군의 인간 유전자들에 대한 화합물 A에 의한 유전자 발현의 조절은 4303개의 하향조절된 유전자들 중 17개의 하향조절된 유전자들 및 3803개의 상향조절된 유전자들 중 172개의 상향조절된 유전자들이 두 농도에서 두 hMCC 세포주들에서 발현 변화를 나타내었다는 것을 확인하였다. 추가 평가 시, 적어도 2배의 용량 의존적 유전자 발현 변화를 나타낸 2개의 상향조절된 유전자들인 ST18 및 FREM2는 후보 PD 바이오마커 유전자로서 확인되었다.
qRT-PCR을 이용하여 배양된 MKL-1 또는 MS-1 세포주에서 ST18 및 FREM2 유전자 발현의 화합물 A 조절에 대한 EC50 값을 측정하였다. 두 유전자들은 이 세포주들에서 화합물 A에 의한 세포 증식의 억제에 대한 IC50 값과 상호관련되어 있는 EC50 값을 나타내었다(< 20 nM, 데이터는 제시되지 않음).
생체내 이종이식편 용량-반응 연구에서, ST18 및 FREM2 유전자는 두 hMCC 모델들에서 2배 이상의 발현 변화를 보였고 용량 의존적 반응을 나타내었다.
ChIP-seq 분석은 LSD1이 배양된 MKL-1 및 MS-1 세포에서 ST18 및 FREM2 유전자 좌위에 결합한다는 것을 입증하였다. ST18 유전자 좌위에서의 H3K4 메틸화의 LSD1 의존적 조절과 일치하여, 화합물 A 처리는 두 모델들에서 LSD1 결합 부위에서 증가된 H3K4me2를 유발하였다. 또한, 화합물 A 처리는 MKL-1 모델에서 FREM2 유전자의 LSD1 결합 부위에서 증가된 H3K4me2를 유발하였으나 MS-1 모델에서는 유발하지 않았다. 이 결과는 ST18 및 잠재적으로 FREM2가 LSD1의 직접적인 표적 유전자라는 것과 일치하고, 이것은 이들이 hMCC에서 화합물 A에 의한 LSD1의 억제에 대한 잠재적 PD 바이오마커라는 것을 뒷받침한다.
실시예 16. 암컷 누드 마우스에서 피하 소세포 폐암 환자 유래의 이종이식편 모델 LXFS 573에서 단독으로 사용되거나 에토포사이드와 함께 사용된 화합물 A의 생체내 효능
암컷 면역결핍 Foxn1nu 마우스에서 확립된 피하 소세포 폐암(SCLC) 환자 유래의 이종이식편(PDX) 모델 LXFS 573을 사용하여, 단독으로 또는 에토포사이드와 함께 사용된 화합물 A의 생체내 효능 및 내약성을 임상 전에 평가하였다. 연구의 과정 전체에 걸쳐 처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 종양 성장 지연(TGD), 연구 생존 및 평균 종양 성장의 차이를 기반으로 효능을 결정하였다. 처리된 동물과 대조군 동물 사이의 평균 체중의 차이를 기반으로 내약성을 평가하였다.
누드 마우스에서 일련의 계대배양을 통해 이종이식편으로부터 LXFS 573 종양 단편을 수득하였다. 공여자 마우스로부터 종양을 제거한 후 단편(3 내지 4 mm 가장자리 길이)으로 절단하였고, 10% 페니실린 및 스트렙토마이신 용액을 함유하는 인산염 완충 식염수(PBS)에 넣었다. 수용자 암컷 면역결핍 Foxn1nu 마우스를 이소플루란의 흡입으로 마취시키고 종양을 한쪽 옆구리에 피하 이식하였다. 종양이 약 132 mm3에 도달할 때까지 종양을 35일 동안 성장시켰다. 그 다음, 종양 보유 마우스들을, 134.3 ± 68.2 mm3, 130.7 ± 68.9 mm3, 132.4 ± 66.3 mm3, 133.1 ± 64.9 mm3, 132.1 ± 62.6 mm3 및 132.4 ± 63.2 mm3의 평균 종양 부피를 가진 8마리 마우스들의 6개 군들로 무작위로 배정하였다. 이 날을 0일째 날로서 표시하였고, 표 25에 표시된 소정의 섭생법에 따라 투약을 시작하였다.
[표 25]
Figure 112019023638871-pct00152
칼리퍼를 이용하여 개별 종양을 2차원으로 매주 2회 측정하였고, 식 TV = 0.5 a x b2를 이용하여 mm3로 종양 부피(TV)를 계산하였는데, 상기 식에서 a 및 b는 각각 밀리미터 단위의 긴 직경 및 짧은 직경이다. 시간의 함수로서 군 평균 종양 부피(± 평균의 표준 오차[SEM])에 대하여 종양 성장 곡선을 작도하였다. 비교의 수에 대해 보정된 다중 t-검정은 단일요법으로서 투여되었거나 에토포사이드와 함께 투여된 5 mg/kg 화합물 A에 대한 각각의 시점에서의 평균 종양 부피 차이의 유의성을 평가하였다. 종양 부피 종점(2000 mm3)에 도달하였거나 빈사 상태로 인해 안락사된 동물이 연구에서 빠졌을 때, 그 동물에 대해 기록된 최종 종양 부피는 후속 시점에서 평균 부피를 계산하는 데 사용된 데이터와 함께 포함되었다. 동물의 체중을 매주 2회 측정하였고, 0일째 날부터 퍼센트 변화로서 평균 체중 도표를 구축하였다. 군 내의 평가 가능한 동물들 중 50% 초과의 동물들이 연구에서 빠졌을 때 두 도표의 끝이 잘려졌다. 평균 체중 손실이 시험 동안 20% 미만이었고 1마리 이하의 동물이 치료 관련 원인으로 인해 연구에서 빠진 경우 섭생법은 허용 가능한 내약성을 가진 것으로 간주되었다.
각각의 시험 동물의 종양이 2000 mm3의 종점 부피에 도달하였을 때 또는 연구의 최종일(133일째 날)(이들 중 이른 때) 각각의 시험 동물을 안락사시켰다. 각각의 마우스에 대한 종점까지의 시간(TTE)을 하기 식으로부터 계산하였다:
Figure 112019023638871-pct00153
상기 식에서, b는 절편이고, m은 2000 mm3를 초과한 첫 번째 관측치 및 3개의 이전 측정치로 구성된 log10-변환된 종양 부피의 선형 회귀에 의해 수득된 선의 기울기이다. 종점에 도달하지 않은 동물은 연구의 마지막 날과 동등한 TTE 값을 배정받았다. 빈사 상태로서 안락사된 동물은 그의 희생일과 동등한 TTE 값을 배정받았다.
치료 결과는 비히클 대조군에 비해 처리군의 중간 TTE의 변화로서 정의된 종양 성장 지연(TGD), 즉 TGD = T-C로부터 확인되었고, 날짜 수로 표현되었거나, 비히클 대조군의 중간 TTE의 퍼센트로서 표현되었다:
Figure 112019023638871-pct00154
상기 식에서,
T는 처리군에 대한 중간 TTE이고,
C는 비히클 대조군에 대한 중간 TTE이다.
표시된 중간 종양 부피(MTV)를 가진 종양을 보유하는 133일째 날 연구 생존자(SS)의 수로서 정의된 SS(MTV)로부터도 치료 효능을 확인하였다.
시간의 경과에 따라 연구에 남아 있는 동물의 퍼센트를 보여주는 카플란-메이에르(Kaplan-Meier) 도표를 구축하였다. Log 순위(맨텔-콕스(Mantel-Cox)) 검정을 이용하여, 카플란-메이에르 도표에서 군들 사이의 차이의 유의성을 평가하였다. 다중 비교를 위해 조절된 (0.05/비교의 수) 이하의 계산된 p-값은 통계학적으로 유의미한 것으로 간주되었다. Log 순위 검정은 통계학적 유의성의 검정이고 군들 사이의 차이의 크기의 추정치, 또는 임상적 또는 생물학적 유의성의 척도를 제공하지 않는다.
표 24는 P380E4_R400_LXFS 573 연구를 위한 치료 계획을 요약한다. 시험 동물들을 군당 8마리 마우스들의 6개 군들로 분류하였고, 평균 종양 크기가 무작위배정 기준을 충족시켰을 때인 0일째 날에 치료를 시작하였다. 대조군 마우스는 표시된 매일 1회 일정으로 경구 위관영양법(PO)에 의해 투여된 0.5% 메틸 셀룰로스 비히클을 제공받았다. 처리된 마우스는 표시된 매일 1회 일정으로 단독으로 또는 함께 사용된 경구 화합물 A 또는 피하(SC) 에토포사이드를 제공받았다. 시험 제품 화합물 A를 비히클에 현탁된 벤젠설폰산염(74% 활성 화합물)으로서 매일 제조하였고 mg/kg 유리 염기 균등물로서 투약하였다. 모든 군들에서, 10 ㎖/kg의 투약 부피를 개별 동물의 체중에 맞게 조정하였고, 동물이 연구에서 빠질 때까지 계획된 투약을 계속하였다. 2마리의 동물들은 결과에 영향을 미치지 않는 휴약기를 제공받았다.
시험 동물을 표 19의 프로토콜에 따라 처리하였고, 연구를 133일째 날에 종결하였다. 표 26은 TGD 반응을 요약하고, 도 27은 모든 군들에 대한 카플란-메이에르 도표를 보여준다. Log 순위 검정을 이용하여, 카플란-메이에르 도표에서 군들 사이의 차이의 유의성을 평가하였다. 다중 비교를 위해 조절된 0.003(0.05/15) 이하의 계산된 p-값은 통계학적으로 유의미한 것으로 간주되었다. 도 28은 시험 동물의 6개 군들에 대한 평균 종양 성장 곡선을 제공한다. 도 29는 0일째 날부터 퍼센트 군 평균 체중 변화를 제공한다. 섭생법이 시험 동안 20% 초과의 평균 체중 손실을 야기하지 않았고 처리 관련 사망이 보고되지 않았기 때문에, 모든 섭생법들은 허용 가능한 내약성을 가진 것으로 간주되었다.
[표 26]
Figure 112019023638871-pct00155
표 26 및 도 27에 나타낸 바와 같이, 대조군 마우스의 8개 종양들은 21.2일 내지 55.3일에 2000 mm3 종점까지 성장하였다. 표 26에 보고된 바와 같이, 대조군 마우스에 대한 중간 TTE는 42일이었므로, 이 연구에 대한 91일의 최대 가능한 TGD(217% TGD)를 확립하였다. 도 28에서 알 수 있는 바와 같이, 평균 종양 성장은 신속히 진행하였다. 도 29에 표시된 바와 같이, 비히클 대조군은 적어도 절반의 동물들이 연구에 남아 있는 마지막 날인 45일째 날에 4%의 평균 체중 획득을 나타내었다.
표 26에 보고된 바와 같이, 5 mg/kg의 화합물 A 단일요법은 최대 가능한 TGD(91일, 217%)에 상응하는 133일의 중간 TTE라는 결과를 가져왔다. 표 26 및 도 27에 표시된 바와 같이, 1마리 동물은 117일째 날 종점에 도달하였고, 7마리의 동물들은 1064 mm3의 MTV를 가진 종양을 보유하면서 연구 동안 생존하였다. 도 27에서 주석으로 표시된 바와 같이, Log 순위 검정은 대조군과 비교될 때 전체 생존의 유의미한 차이를 확인하였다(p < 0.0001). 도 28에서 알 수 있는 바와 같이, 평균 종양 진행은 대조군에서 관찰된 평균 종양 진행에 비해 현저히 지연되었다. 도 29에 표시된 바와 같이, 화합물 A 단일요법 군은 연구의 종료일에 0.4%의 평균 체중 손실을 나타내었다.
24 mg/kg의 에토포사이드 단일요법은 21일 또는 50% TGD에 상응하는 63일의 중간 TTE라는 결과를 가져왔다. 8마리의 시험 동물들에서 종양은 45.1일 내지 72.5일에 종점까지 성장하였다. Log 순위 검정은 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p = 0.0007) 및 5 mg/kg 화합물 A 단일요법 군에 비해 유의미하게 더 낮은 효능(p < 0.0001)을 발견하였다. 평균 종양 부피는 대조군 동물에서의 종양의 성장률과 유사한 성장률로 되돌아가기 전에 약 17일 동안 감소하였다. 에토포사이드 단일요법 군은 절반의 동물들이 연구에 남아 있는 마지막 날인 66일째 날에 6.3%의 평균 체중 획득을 나타내었다.
에토포사이드와 함께 투여된 1, 2.5 또는 5 mg/kg의 화합물 A는 16일(38%), 79일(188%) 및 91일(217%, 가능한 최대치)의 TGD에 상응하는 각각 59일, 121일 및 133일의 용량 의존적 중간 TTE라는 결과를 가져왔다.
1 mg/kg 화합물 A 조합 요법을 제공받은 군에서, 7마리 시험 동물들에서 종양은 45.3일 내지 79.8일에 종점까지 성장하였고, 1마리 동물은 1430 mm3의 부피를 가진 종양을 보유하면서 연구 동안 생존하였다. Log 순위 검정은 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p = 0.0015), 에토포사이드 단일요법 군에 비해 차이 없음(p = 0.4408) 및 5 mg/kg 화합물 A 단일요법 군에 비해 유의미하게 더 낮은 효능(p = 0.0008)을 발견하였다. 평균 종양 부피는 대조군 동물에서의 종양의 성장률과 유사한 성장률로 되돌아가기 전에 약 17일 동안 감소하였다. 평균 종양 진행은 에토포사이드 단일요법의 사용 시 관찰된 평균 종양 진행과 유사하였다. 1 mg/kg 화합물 A 조합 요법 군은 적어도 절반의 동물들이 연구에 남아 있는 마지막 날인 59일째 날에 5.5%의 평균 체중 획득을 나타내었다.
2.5 mg/kg 화합물 A 조합 요법을 제공받은 군에서, 5마리 시험 동물들의 종양은 89.6일 내지 125.6일에 종점까지 성장하였고, 3마리 동물들은 1121 mm3의 MTV를 가진 종양을 보유하면서 연구 동안 생존하였다. Log 순위 검정은 대조군 및 에토포사이드 단일요법 군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p < 0.0001) 및 5 mg/kg 화합물 A 단일요법(p = 0.0351) 또는 1 mg/kg 화합물 A 조합 요법(p = 0.0132) 군에 비해 효능의 차이 없음을 발견하였다. 평균 종양 부피는 대조군 동물에서 종양에 대해 관찰된 성장률보다 더 느린 성장률로 점진적으로 되돌아가기 전에 약 17일 동안 감소하였다. 2.5 mg/kg 화합물 A 조합 요법 군은 절반의 동물들이 연구에 남아 있는 마지막 날인 126일째 날에 3.8%의 평균 체중 획득을 나타내었다.
5 mg/kg 화합물 A 조합 요법을 제공받은 군에서, 8마리의 동물들은 121 mm3의 MTV를 가진 종양을 보유하면서 연구 동안 생존하였다. 91일째 날, 1개의 종양은 촉진 한계 미만까지 퇴행하였는데, 이것은 연구 종료일까지 유지되었다. Log 순위 검정은 대조군 및 에토포사이드 단일요법(p < 0.0001) 및 1 mg/kg 화합물 A 조합 요법(p = 0.0004) 군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이, 및 5 mg/kg 화합물 A 단일요법(p = 0.3173) 또는 2.5 mg/kg 화합물 A 조합 요법(p = 0.0085) 군에 비해 효능의 차이 없음을 확인하였다. 평균 종양 부피는 약 17일 동안 감소한 후, 연구의 과정 전체에 걸쳐 거의 정적으로 유지되었다. 다중 t-검정은 단일요법에 비해 조합 요법으로서 투여된 5 mg/kg 화합물 A에 대한 각각의 시점에서의 평균 종양 부피의 차이가 7일째 날 측정부터 유의미하였고 연구 종료일까지 유의미한 상태로 유지되었다는 것(p ≤ 0.01)을 확인하였다. 5 mg/kg 화합물 A 조합 요법 군은 연구의 종료일에 0.6%의 평균 체중 획득을 나타내었다.
암컷 면역결핍 Foxn1nu 마우스에서 확립된 SCLC PDX 모델 LXFS 573을 사용하여 단독으로 또는 에토포사이드(24 mg/kg)와 함께 사용된 화합물 A(1, 2.5 또는 5 mg/kg)의 생체내 효능 및 내약성을 임상 전에 평가하였다.
24 mg/kg의 에토포사이드 단일요법은 21일 또는 50% TGD에 상응하는 63일의 중간 TTE라는 결과를 가져왔다. 8마리 시험 동물들에서 종양은 45.1일 내지 72.5일에 종점까지 성장하였다. Log 순위 검정은 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p = 0.0007) 및 5 mg/kg 화합물 A 단일요법 군에 비해 유의미하게 더 낮은 효능(p < 0.0001)을 확인하였다.
1일째 날부터 3일째 날까지 매일 투약된 24 mg/kg 에토포사이드와 함께 4일째 날부터 133일째 날(연구 종료일)까지 매일 투약된 1, 2.5 또는 5 mg/kg의 경구 화합물 A는 SCLC의 LXFS 573 PDX 모델에서 효과적이었다. 종양 성장 지연은 16일(38%), 79일(188%) 및 91일(217%, 이 연구에 대한 최대 가능한 TGD)의 TGD에 상응하는 각각 59일, 121일 및 133일의 중간 TTE라는 결과를 가져올 정도로 용량 의존적이었다. 연구 생존은 133일째 날에 각각 1명, 3명 및 8명의 생존자라는 결과를 가져올 정도의 용량 의존성, 및 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p ≤ 0.0015)도 나타내었다. 에토포사이드 플러스 5 mg/kg 화합물 A 군에 대한 평균 종양 부피는 약 17일 동안 감소한 후, 133일째 날 121 mm3의 MTV로 연구 과정 전체에 걸쳐 거의 정적으로 유지되었다.
1일째 날부터 133일째 날까지 매일 투약된 5 mg/kg의 경구 화합물 A 단일요법도 91일 또는 217%의 TGD에 상응하는 133일의 중간 TTE로 최대 반응을 이끌어내었고 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p = 0.0001)라는 결과를 가져왔다. 평균 종양 진행은 133일째 날에 1064 mm3의 MTV로 현저히 지연되었다. 중간 TTE, 연구 생존자 수, 평균 종양 성장 및 시간의 경과에 따라 연구에 남아 있는 동물의 퍼센트의 차이의 평가는 단독으로 또는 에토포사이드와 함께 투여된 5 mg/kg 화합물 A에 대한 반응이 모든 다른 치료 섭생법들보다 더 우수하다는 것을 발견하였다. 5 mg/kg 화합물 A 단일요법 대 조합 요법을 제공받은 동물에 대한 전체 생존이 유의미하게 상이하지 않을지라도(p = 0.9998), 에토포사이드에 이어 5 mg/kg 화합물 A를 제공받은 시험 동물들에 대한 7일째 날부터 133일째 날까지 평균 종양 부피는 5 mg/kg 화합물 A만을 제공받은 동물들에 비해 유의미하게 더 작았다(p ≤ 0.01).
모든 치료 섭생법들은 측정 첫날과 마지막 날 사이에 군 평균 체중의 최소 변화, 및 치료 관련 사망으로서 분류된 사망 없음이라는 결과를 가져올 정도로 허용 가능한 내약성을 보이는 듯하였다.
실시예 17. NCI-H1417 소세포 폐암 이종이식편 모델에서 단독으로 또는 에토포사이드와 함께 사용된 화합물 A의 효능
이 연구의 목적은 암컷 NSG 마우스에서 확립된 NCI-H1417 SCLC 이종이식편 모델에서 단일요법으로서 또는 24 mg/kg 에토포사이드와 함께 5일 투약/2일 중단 간헐적 일정으로 5 mg/kg으로 경구 투약된 화합물 A의 효능 및 내약성을 측정하는 것이었다.
암컷 NSG 마우스(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, The Jackson Laboratory, 메인주 바하버 소재)를 이 연구에 사용하였다. 시험 마우스는 종양 이식 당일 9주령이었다. 종양 이식 전에 1주 동안 동물을 순화시켰다.
물(역삼투, 산성화됨), 및 20% 미정제 단백질, 5.6% 지방(산 가수분해) 및 4.7% 미정제 섬유로 구성된 PicoLab® 설치류 정규식을 동물에게 무제한으로 공급하였다. 마우스를 72 ± 2℉ 및 30% 내지 70% 습도에서 12시간 광 주기로 ALPHA-dri®의 장벽 시설에 수용하였다.
10% 태아 소 혈청, 100 유닛/㎖ 페니실린 G 나트륨 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 설페이트로 보충된 RPMI-1640 배지(cRPMI)에서 NCI-H1417 세포를 배양하였다. 세포를 5% 이산화탄소 및 95% 공기의 대기 하에서 37℃의 가습된 항온처리기 내에서 배양하였다.
화합물 A를 10 ㎖/kg의 투약 부피로 물 중의 0.5% 메틸셀룰로스에서 제제화하였다.
촉진 가능한 NCI-H1417 SCLC 종양(평균 종양 부피 약 230 mm3)을 보유하는 암컷 NSG 마우스를 4개의 군들로 무작위로 배정하였다. 단일요법으로서, 또는 24 mg/kg 에토포사이드를 사용한 초기 3일 치료 후, 5일 투약/2일 중단 간헐적 일정으로 5 mg/kg 화합물 A를 2개의 군들에게 경구 투여하였다. 연구는 에토포사이드 단일요법 및 비히클 대조군을 포함하였다.
연구 과정 전체에 걸쳐 처리된 동물 대 대조군 동물에 대한 TGD의 차이, 및 TTE 값 및 평균 종양 성장의 차이의 통계학적 평가를 기반으로 효능을 결정하였다. 각각의 개별 동물의 체중 및 건강 상태를 모니터링함으로써 내약성을 평가하였다.
종양 세포 접종 당일, 대수기 생장 동안 인간 NCI-H1417 세포를 수거하였고 7.5 x 107개 세포/㎖의 농도로 100% Matrigel®에 재현탁하였다. 그 다음, 각각의 시험 마우스의 우측 옆구리에서 0.1 ㎖ 세포 현탁액(7.5 x 106개 세포)을 피하 이식하였다. 종양이 약 230 mm3에 도달할 때까지 종양을 43일 동안 성장시켰다. 그 다음, 종양 보유 마우스들을, 241.7±29.4 mm3, 220.4±33.2 mm3, 222.7±35.9 mm3 및 232.4±41.1 mm3의 평균 종양 부피를 가진 7마리 마우스들의 4개 군들로 무작위로 배정하였다. 이 날을 1일째 날로서 표시하였고, 표 27에 제시된 소정의 섭생법에 따라 투약을 시작하였다.
[표 27]
Figure 112019023638871-pct00156
표 27에 표시된 바와 같이, 대조군 마우스는 연구 종료일까지 반복된, 5일 투약에 이은 투약 없는 2일(5일 투약/2일 중단) 일정으로 경구(PO) 투여된 수성 0.5% 메틸셀룰로스 비히클을 제공받았다. 화합물 A 단일요법 군은 5일 투약/2일 중단 일정으로 경구 투여된 5 mg/kg 화합물 A를 제공받았다. 에토포사이드 단일요법 군은 연속 3일 동안 매일 1회(QD x 3) 피하 투여된(SC) 24 mg/kg 에토포사이드를 제공받았다. 에토포사이드에 이은 화합물 A 조합 요법 군은 QD x 3 일정으로 피하 투여된 24 mg/kg 에토포사이드를 제공받은 후, 5일 투약/2일 중단 일정으로 경구 투여된 5 mg/kg 화합물 A를 제공받았다. 시험 제품 화합물 A는 비히클에 현탁된 벤젠설폰산염(74% 활성 화합물)으로서 매일 제조되었고 mg/kg 유리 염기 균등물로서 투약되었다. 모든 군들에서, 10 ㎖/kg의 투약 부피를 개별 동물의 체중에 맞게 조정하였다.
칼리퍼를 이용하여 개별 종양을 3차원으로 매주 2회 측정하였고, 식 TV = 0.5 x l x w x h를 이용하여 mm3로 종양 부피(TV)를 계산하였는데, 상기 식에서 l, w 및 h는 각각 밀리미터 단위의 길이, 폭 및 높이이다. 동시에, 동물의 체중을 측정하였고, 신체검사를 통해 각각의 개별 동물의 건강 상태를 20% 초과의 체중 손실 및 무기력의 징후에 대해 모니터링하였다. 연구를 195일째 날에 종결하였다.
각각의 시험 동물의 종양이 2000 mm3의 종점 부피에 도달하였을 때 또는 그의 체중 손실이 20%를 초과하였을 때 각각의 시험 동물을 안락사시켰다. 10% 초과의 체중 손실을 겪은 동물의 경우, 체중을 매일 모니터링하였다. 체중 손실이 20%를 초과하였거나 동물이 무기력을 나타내었을 때 동물을 희생시켰다. 동물이 안락사되었거나 우리에서 사망한 상태로 발견되었을 때(FDIC), 동물에 대해 기록된 최종 종양 부피는 후속 시점에서 평균 부피를 계산하는 데 사용된 데이터와 함께 포함되었다. 그 다음, 시간의 함수로서 군 평균 종양 부피(± 평균의 표준 오차[SEM])를 보여주는 종양 성장 곡선을 작도하였고, 1일째 날부터 퍼센트 변화로서 평균 체중을 작도하였다. 군에서 50% 초과의 평가 가능한 동물들이 연구에서 빠졌을 때 두 도표들의 끝이 잘려졌다. 비교의 수에 대해 보정된 다중 t-검정은 종양 성장 곡선에 작도된 각각의 시점에 대한 화합물 A 단일요법 대 조합 요법 평균 종양 부피의 차이의 유의성을 평가하였다.
각각의 마우스에 대한 TTE를 하기 방정식으로부터 계산하였다:
Figure 112019023638871-pct00157
상기 식에서, b는 절편이고, m은 2000 mm3를 초과한 첫 번째 관측치 및 3개의 이전 측정치로 구성된 log10-변환된 종양 부피의 선형 회귀에 의해 수득된 선의 기울기이다. 사망한 상태로 발견되었거나 체중 손실로 인해 안락사된 동물은 그의 희생일과 동등한 TTE 값을 배정받았다. 연구 동안 생존한 동물은 연구의 마지막 날과 동등한 TTE 값을 배정받았다.
치료 결과는 비히클 대조군에 비해 처리군에서의 중간 TTE의 변화로서 정의된 TGD, 즉 TGD = T-C로부터 확인되었고, 날짜 수로 표현되었거나, 비히클 대조군의 중간 TTE의 퍼센트로서 표현되었다:
Figure 112019023638871-pct00158
상기 식에서,
T는 처리군에 대한 중간 TTE이고,
C는 비히클 대조군에 대한 중간 TTE이다.
시간의 경과에 따라 연구에 남아 있는 동물의 퍼센트를 보여주는 카플란-메이에르 도표를 구축하였다. Log 순위(맨텔-콕스) 검정을 이용하여, 카플란-메이에르 도표에서 군들 사이의 차이의 유의성을 평가하였다. (0.05/비교의 수) 이하의 계산된 p-값은 통계학적으로 유의미한 것으로 간주되었다. Log 순위 검정은 통계학적 유의성의 검정이고 군들 사이의 차이의 크기의 추정치, 또는 임상적 또는 생물학적 유의성의 척도를 제공하지 않는다.
연구에서 시험 동물들을 표 21의 프로토콜에 따라 처리하였고, 연구를 195일째 날에 종결하였다. 표 28은 모든 군들에 대한 TGD 반응을 요약한다. 도 30은 평균 종양 성장 곡선을 보여주고, 도 31은 표시된 군들에 대한 카플란-메이에르 도표를 보여준다. 도 32는 1일째 날부터 퍼센트 군 평균 체중 변화를 제공한다.
[표 28]
Figure 112019023638871-pct00159
도 31에 나타낸 바와 같이, 대조군 마우스에서 여러 종양들이 25.8일 내지 35.7일에 2000 mm3 종점까지 성장하였다. 표 23에 보고된 바와 같이, 대조군 마우스에 대한 중간 TTE는 26일이었으므로, 이 연구에 대한 169일(650% TGD)의 최대 가능한 TGD를 확립하였다. 도 30에서 알 수 있는 바와 같이, 평균 종양 성장은 신속히 진행하였다.
표 28에 보고된 바와 같이, 5 mg/kg의 화합물 A 단일요법은 87일 또는 335% TGD에 상응하는 113일의 중간 TTE라는 결과를 가져왔다. 도 31에 표시된 바와 같이, 7마리의 동물들은 91일 내지 140일에 연구에서 빠졌다. 도 31에 주석으로 표시된 바와 같이, Log 순위 검정은 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p=0.0001)를 확인하였다. 도 30에서 알 수 있는 바와 같이, 평균 종양 진행은 초기에 8일째 날까지 제한된 후, 28일째 날 후 거의 정적 상태가 되기 전에 느렸다.
24 mg/kg의 에토포사이드 단일요법은 24일 또는 92% TGD에 상응하는 50일의 중간 TTE라는 결과를 가져왔다. 7마리 시험 동물들에서 종양은 45.5일 내지 77.3일에 종점까지 성장하였다. Log 순위 검정은 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p=0.0001) 및 5 mg/kg 화합물 A 단일요법 군에 비해 유의미하게 더 낮은 효능(p=0.0001)을 발견하였다. 평균 종양 진행은 대조군에서 관찰된 평균 종양 진행에 비해 지연되었다.
24 mg/kg의 에토포사이드에 이은 5 mg/kg의 화합물 A는 113일 또는 435% TGD에 상응하는 139일의 중간 TTE라는 결과를 가져왔다. 7마리의 동물들은 120일 내지 195일에 연구에서 빠졌다. Log 순위 검정은 대조군 및 에토포사이드 단일요법 군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이를 확인하였으나(p=0.0001), 화합물 A 단일요법 군에 비해 차이가 없음을 확인하였다(p=0.1677). 평균 종양 진행은 28일째 날 후 거의 정적 상태가 되기 전에 초기에 느렸다. 다중 t-검정은 화합물 A 단일요법에 비해 에토포사이드 + 화합물 A 조합 요법에 대한 각각의 시점에서의 평균 종양 부피의 차이가 8일째 날부터 113일째 날까지 유의미하다는 것(p ≤ 0.004)을 발견하였다.
도 32에 나타낸 바와 같이, 비히클 또는 에토포사이드 단일요법을 제공받은 군은 평균 체중 획득을 나타낸 반면, 단독으로 또는 에토포사이드 후 화합물 A를 제공받은 군은 연구의 약 처음 100일 동안 평균 체중의 변화를 거의 또는 전혀 경험하지 않았다. 화합물 A 단일요법 군에서 7마리의 동물들은 91일 내지 140일에 사망한 상태로 발견되었거나 20% 초과의 체중 손실로 인해 안락사되었고, 에토포사이드에 이은 화합물 A 군에서 6마리의 동물들은 126일 내지 195일에 사망한 상태로 발견되었거나 체중 손실로 인해 안락사되었다.
개별 동물의 검사는 악액질을 잠재적으로 배제하는, 종양 존재량과 체중 손실 사이의 관계를 확립하지 못하였다. 추가로, 화합물 A 처리 관련 독성(무기력, 식욕 결핍 및 점상출혈)과 일치하는 임상 관찰소견은 없는 것으로 기록되었다. 이 관찰소견에 기반을 둘 때, 화합물 A는 이 연구에서 허용 가능한 내약성을 가진 것으로서 간주되었다.
단일요법으로서, 또는 24 mg/kg 에토포사이드를 사용한 초기 3일 치료 후 5일 투약/2일 중단 간헐적 일정으로 5 mg/kg으로 경구 투약된 화합물 A는 암컷 NOD scid 감마(NSG) 마우스에서 확립된 NCI-H1417 SCLC 이종이식편 모델에서 효과적이었고 허용 가능한 내약성을 가졌다.
5 mg/kg의 경구 화합물 A 단일요법은 87일 또는 335% TGD에 상응하는 113일의 중간 TTE, 및 Log 순위 검정에 의해 확인된, 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p=0.0001)라는 결과를 가져왔다. 24 mg/kg의 에토포사이드 단일요법은 24일 또는 92% TGD에 상응하는 50일의 중간 TTE, 및 Log 순위 검정에 의해 확인된, 대조군에 비해 전체 생존의 유의미한 차이(p=0.0001)라는 결과를 가져왔다. Log 순위 검정은 5 mg/kg 화합물 A 단일요법 군에 비해 에토포사이드 단일요법 군에 대한 유의미하게 더 낮은 효능을 확인하였다(p=0.0001). 에토포사이드에 이은 5 mg/kg의 화합물 A는 113일 또는 435% TGD에 상응하는 139일의 중간 TTE라는 결과를 가져왔다. Log 순위 검정은 대조군 및 에토포사이드 단일요법 군에 비해 에토포사이드 화합물 A 조합 군에 대한 전체 생존의 유의미한 차이를 확인하였으나(p=0.0001), 화합물 A 단일요법 군에 비해 차이가 없음을 확인하였다(p=0.1677). 연구 과정 전체에 걸쳐 평균 종양 성장은 TGD 결과와 일치하였다. 중간 TTE, 평균 종양 성장 및 시간의 경과에 따라 연구에 남아 있는 동물의 퍼센트의 차이의 평가는 단독으로 또는 에토포사이드 후 투여된 5 mg/kg 화합물 A에 대한 반응이 모든 다른 치료 섭생법들보다 더 우수하다는 것을 발견하였다. 조합 요법에 비해 5 mg/kg 화합물 A 단일요법을 제공받은 동물에 대한 전체 생존은 유의미하게 상이하지 않았지만(p = 0.1677), 5 mg/kg 화합물 A만을 제공받은 시험 동물에 비해 에토포사이드에 이은 5 mg/kg 화합물 A를 제공받은 시험 동물에 대한 8일째 날부터 113일째 날까지 평균 종양 부피는 유의미하게 더 작았다(p ≤ 0.004).
비히클 또는 에토포사이드 단일요법을 제공받은 동물은 평균 체중 획득을 나타내었고 그의 종양이 종양 부피 종점에 도달하였을 때 연구에서 빠졌다. 단독으로 또는 에토포사이드 후 화합물 A를 제공받은 동물은 연구의 약 처음 100일 동안 평균 체중의 변화를 거의 또는 전혀 경험하지 않았다. 두 군들의 동물들은 91일 내지 195일에 사망한 상태로 발견되었거나 20% 초과의 체중 손실로 인해 안락사되었다. 개별 동물의 검사는 잠재적으로 악액질을 배제하는, 종양 존재량과 체중 손실 사이의 관계를 확립하지 못하였다. 또한, 화합물 A 처리 관련 독성(무기력, 식욕 결핍 및 점상출혈)과 일치하는 임상적 관찰소견은 없는 것으로 기록되었다. 이 관찰소견에 기반을 둘 때, 화합물 A는 이 연구에서 허용 가능한 내약성을 가진 것으로서 간주되었다.
실시예 18. 화합물 A는 방사선조사에 대한 전립선암 세포 LNCaP의 민감성을 증가시킨다.
LNCaP 세포는 안드로겐 민감성 인간 전립선 선암종 세포이다. LNCaP 세포를 방사선조사(2Gy) 또는 LSD1 억제제 화합물 A(100 nM)과 함께 또는 이들 없이 안드로겐 수용체 리간드 디하이드록시테스토스테론(DHT; 10 nM)으로 처리하였다. LNCaP 세포의 증식을 220시간 동안 모니터링하였다. 도 33은 DHT, 화합물 A 및 방사선조사의 조합이 방사선조사와 조합된 DHT에 비해 LNCaP 세포 증식의 보다 더 우수한 억제를 나타낸다는 것을 보여준다. 도 34는 DHT, 화합물 A 및 방사선조사의 조합이 방사선조사와 조합된 DHT 또는 화합물 A와 조합된 DHT에 비해 LNCaP 세포 증식을 유의미하게 억제한다는 것을 보여준다. 이 발견은 화합물 A가 안드로겐 수용체 리간드 DHT의 존재 하에서 2Gy 방사선조사 후 LNCaP 세포의 증식을 지연시키는 데 효과적이라는 것을 암시한다.
실시예 19. 화합물 A는 라파마이신 처리에 대한 전립선암 세포 LNCaP의 민감성을 향상시킨다.
LNCaP 세포를 100 nM 라파마이신 단독, 100 nM 화합물 A 단독, 또는 100 nM 라파마이신과 100 nM 화합물 A의 조합으로 처리하였다. LNCaP 세포의 증식을 90시간 동안 모니터링하였다. 도 35 및 36은 라파마이신과 화합물 A의 조합이 라파마이신 단독에 비해 LNCaP 세포 증식의 보다 더 큰 억제를 나타낸다는 것을 보여준다. 이 데이터는 화합물 A가 라파마이신 처리에 대한 전립선암 세포 LNCaP의 민감성을 향상시킨다는 것을 암시한다.
III. 이차 약력학
실시예 1: 수용체, 이온 채널, 신경전달물질 수송제, 키나제 및 비-키나제 효소의 시험관내 약리학 패널에서 화합물 A의 효과
일군의 수용체들, 이온 채널들, 신경전달물질 수송제들, 키나제들 및 비-키나제 효소들에 대한 리간드 또는 기질 결합의 화합물 A 매개 억제를 일련의 CEREP 연구 보고에서 10 μM로 평가하였다. 무스카린성 M1 수용체(76% 억제) 및 Na+ 채널(부위 2)(62% 억제)에 대해서만 50% 초과의 억제가 관찰되었다. 무스카린성 M1 수용체 및 Na+ 채널(부위 2)에 대하여 화합물 A에 대해 측정된 Ki 값은 각각 1.6 μM 및 11 μM이었다. 이 측정된 Ki 값들은 LSD1에 대해 관찰된 Ki보다 10,000배 이상 더 높았다. 이 데이터는 화합물 A가 시험된 140개의 표적들에 비해 LSD1에 높은 특이성으로 결합하고 화합물 A가 LSD1의 선택적 억제제라는 것을 입증한다.
IV. 안전성 약리학
실시예 1: 심혈관 및 호흡 시스템에 대한 화합물 A의 시험관내 효과
hERG 칼륨 채널(신속 활성화 지연된 정류기 심장 칼륨 전류인 IKr의 대용물)에 대한 화합물 A의 시험관내 효과를 평가하였다. hERG 채널을 안정하게 발현하는 인간 배아 신장 세포(HEK293)에서 화합물 A를 0.3, 1, 3 및 10 μM의 농도로 시험하였다. 화합물 A는 0.3 μM에서 5.9 ± 1.3%(n = 3), 1 μM에서 17.8 ± 0.3%(n = 4), 3 μM에서 47.0 ± 1.9%(n = 4), 그리고 10 μM 에서 77.3 ± 0.2%(n = 3)까지 hERG 전류(평균 ± 평균의 표준 오차)를 억제하였다. hERG 전류에 대한 화합물 A의 억제 효과에 대한 IC50 값은 3.4 μM(힐 계수 = 1.2)인 것으로 측정되었다.
실시예 2: 수컷 던킨 하틀리(Dunkin Hartley) 기니 피그에서 혈역학 및 심전도 파라미터에 대한 화합물 A의 효과
마취된 수컷 던킨 하틀리 기니 피그에서 혈역학 및 ECG 파라미터에 대한 화합물 A의 효과를 조사하였다. 목정맥 내로의 10분 주입을 통해 비히클 단독(물 중의 10% 디메틸설폭사이드 및 30% 폴리에틸렌 글리콜 400; n = 4마리 동물) 또는 화합물 A(n = 4마리 동물, 이때 5, 10, 15 및 20 mg 염기/kg이 각각의 동물에게 투여됨)를 수컷 기니 피그에게 정맥내로 투여하였다. 용량이 20분 간격으로 순차적으로 투여되는 용량 상승 디자인을 이용하였다. 실험 전체에 걸쳐 동물을 모니터링하였다.
평균 동맥 압력(MAP) 및 이의 성분들은 비히클 주입 기간에 걸쳐 감소하는 경향을 나타내었다. 모니터링 기간의 종료일에, MAP는 기준에 비해 24%까지 감소되었다. 비히클 단독의 주입을 이용하였을 때, HR의 23% 감소 및 PR 간격의 26% 증가도 모니터링 기간의 종료일에 관찰되었다.
시간-일치된 비히클과 비교하였을 때, 화합물 A의 투여 시 MAP 또는 이의 성분들의 현저한 효과는 관찰되지 않았다. 20 mg 염기/kg에서, 화합물 A는 비히클과 비교되었을 때 10분 주입 시간 중 9분에서 관찰된 19%의 최대 억제와 함께 HR의 약간의 감소를 야기하였다. 심박수는 모니터링 기간의 종료일에 18%까지 감소된 상태로 유지되었다. 10, 15 및 20 mg 염기/kg 용량의 화합물 A의 사용 시 QT 및 QTcB 간격의 현저한 용량 의존적 증가가 관찰되었다. 시간-일치된 비히클과 비교되었을 때, 10, 15 및 20 mg 염기/kg 용량의 화합물 A의 사용 시 주입 시작 후 10분 내지 18분에서 각각 대략 9%, 13% 및 16%까지 QTcB 간격의 최대 증가가 관찰되었다. QTcB 간격은 모니터링 기간의 종료일에 10%까지 증가된 상태로 유지되었다. 각각의 주입(10분)의 종료시점에서, 5, 10, 15 및 20 mg 염기/kg에 대한 평균 혈장 농도는 각각 1166, 2362, 4269 및 6707 ng/㎖이었다. 동맥 압력, PR 간격, QRS 지속시간 또는 정성적 ECG 파라미터에 대한 현저한 화합물 A 관련 효과는 없었다. 이 결과에 기반을 둘 때, 정맥내 투여 후 혈역학 및 ECG 종점에 대한 NOAEL은 10 mg 염기/kg이었다.
실시예 3: 개에서 4주 회복 기간을 가진 4주 경구 위관영양법 중추적 독성 연구
경구 위관영양법을 통해 화합물 A를 최대 4주 동안 0.375, 0.75 및 1.5 mg 염기/kg/용량 QW, 또는 최대 4주 동안 0.375 mg 염기/kg/용량 BIW의 용량 수준으로 수컷 및 암컷 순종 비글 개(4마리 또는 6마리/성별/군)의 5개 군에게 투여하였다. 비히클 대조군 동물(역삼투 물 중의 0.5% w/v 메틸셀룰로스)도 BIW로 투약받았고 병행 대조군으로서 사용되었다. 마지막 용량 후, 0.375 mg 염기/kg/용량 군을 제외한 모든 군들에서 2마리의 동물/성별/군은 4주 치료 부재 회복 기간이 예정되어 있었다.
화합물 A의 매주 경구 투여는 연구 13일째 날과 23일째 날 사이에 11마리 동물들(0.375 mg 염기/kg/용량을 QW로 투여받은 1마리 수컷, 0.75 mg 염기/kg/용량을 투여받은 2마리 수컷 및 1마리 암컷, 및 1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 3마리 수컷 및 4마리 암컷)의 빈사 상태 안락사를 초래하였다. 이 동물들의 빈사 상태는 화합물 A 관련 위 점막 궤양 및/또는 급성 염증에 기인하였다. 모든 다른 동물들은 그들의 예정된 부검까지 생존하였다. 1.5 mg 염기/kg/용량에서 심각한 독성의 결과로서, 남은 3마리 수컷 및 2마리 암컷에 대한 이 군의 투약은 15일째 날에 중단되었고; 이 동물들은 연구에 남아 있었고 마지막 용량 후 적어도 4주의 회복을 가졌다.
심전도는 투약 전 기간 동안 1회 기록되었고, 투약 기간의 22일째 날에 투약받은 모든 동물들의 경우 투약 전 및 투약 후 대략 3시간에서 기록되었다. 8개의 리드(lead)를 사용하여 심전도를 기록하였고 단일 리드에 대한 ECG의 통상적인 정량적 측정을 수행하였다. 프리데리시아(Fridericia) 방법을 이용하여 QTc 간격을 계산하였다. 수집된 ECG의 리듬 비정상 및 교란에 대한 정성적 검토를 수행하였다.
리듬 또는 파형 형태, 또는 HR, RR 간격, PR 간격, QRS 지속시간, QT 간격 또는 QTc 간격에 있어서 화합물 A와 관련된 비정상은 평가된 임의의 용량 수준(즉, < 1.5 mg 염기/kg/용량)에서 확인되었다. 따라서, CV 및 호흡 변화에 대한 NOEL은 CV 및 호흡 종점이 평가된 최대 용량 수준인 0.75 mg 염기/kg/용량 QW 및 0.375 mg 염기/kg/용량 BIW이었다. 0.75 mg 염기/kg/용량 QW에서 정상 상태 Cmax 값은 36.2 ng/㎖(수컷) 및 40.8 ng/㎖(암컷)이었고; 0.375 mg 염기/kg/용량 BIW에서 정상 상태 Cmax 값은 17.7 ng/㎖(수컷) 및 19.0 ng/㎖(암컷)이었다.
V. 비임상 약동학 및 대사
화합물 A의 흡수, PK, 분포, 배출 및 대사를 특징규명하기 위해 시험관내 및 생체내 연구를 수행하였다. 화합물 A는 유리 염기의 베실산염이고, 모든 농도 및 PK 파라미터들은 유리 염기를 지칭한다. 화합물 A 유리 염기 농도를 측정하는 강력하고 재현 가능한 생물분석학적 방법을 개발하였고 PK 및 TK 연구에서 사용하였다. 마우스, 래트, 개 및 원숭이에서 화합물 A의 약동학 및 경구 생체이용률을 평가하였다. 상대성장 척도(allometric scaling)를 이용하여 인간 PK 파라미터 및 노출을 예측하였다. 마우스 및 개는 비임상 독성학 평가를 위해 사용된 종이었다. 화합물 A 흡수, 대사, 혈장 단백질 결합, CYP 반응 표현형분석, 및 CYP 효소에 대한 억제 및 유도 잠재력를 평가하기 위해 시험관내 연구를 수행하였다. 방사성표지로 표지되지 않은 화합물 A의 배출을 래트에서 연구하였다.
실시예 1: 흡수 및 약동학
화합물 A의 PK를 정맥내 및 경구 투여 후 CD-1 마우스, 스프라그 돌리(Sprague Dawley) 래트, 비이글 개 및 사이노몰구스 원숭이에서 평가하였다(보고 QC6688-ADME-2004). 화합물 A의 혈장 농도를 질량 분광측정 검출을 이용하는 액체 크로마토그래피(LC-MS/MS)로 측정하였다. 화합물 A의 정맥내 또는 경구 투여 후 평균 PK 파라미터는 표 29 및 표 30에 제시되어 있다.
[표 29]
Figure 112019023638871-pct00160
[표 30]
Figure 112019023638871-pct00161
정맥내 투약 후, 화합물 A의 전신 제거는 마우스, 개 및 원숭이에서 적당하였고(간 혈류의 대략 30% 내지 40%) 래트에서 높았다(간 혈류보다 더 큼). 종 전체에 걸친 분포 부피는 전신 물 부피의 대략 12배 내지 43배이었는데, 이것은 조직 내로의 광범위한 분포를 암시한다. 설치류에서 2시간 내지 4시간 또는 비-설치류에서 12시간 내지 20시간의 값으로 설치류와 비-설치류 사이의 상이한 반감기가 인지되었다.
MDR1(인간 P-gp)-MDCK 세포에서 화합물 A의 투과성은 33의 유출 비로 A → B 방향으로 0.5 x 10-6 cm/s이었고 B → A 방향으로 16.5 x 10-6 cm/s이었는데, 이것은 화합물 A가 P-gp 기질이라는 것을 시사한다.
경구 투약 후, 화합물 A는 마우스, 래트, 개 및 원숭이에서 신속히 잘 흡수되었는데, 이때 피크 혈장 농도까지의 중간 시간(tmax)은 투약 후 0.5시간 내지 6시간이었고, 경구 생체이용률은 설치류에서 28% 내지 74%이었고 개 및 원숭이에서 82% 내지 100%이었다.
마우스와 개 사이의 상이한 반감기로 인해, 마우스에서의 독성학 연구를 매일 투약(4주 동안 주당 5일 연속 투약) 후 수행한 반면, 개에서의 연구는 4주 동안 QW, BIW 또는 Q2W 투약 섭생법을 따랐다. 다회 경구 용량의 화합물 A를 마우스에게 투여한 후, 전신 노출은 5 mg 염기/kg부터 15 mg 염기/kg까지 용량 비례적 방식보다 더 크게 증가하였고 15 mg 염기/kg부터 45 mg 염기/kg까지 용량 비례적 방식으로 증가한 반면(보고 QC6688-TOX-3001), 개에서 화합물 A 노출은 용량 비례적 방식으로 증가하였다(보고 QC6688-TOX-3002, 보고 QC6688-TOX-3006). 독성학 연구에서 사용된 투약 일정으로 반복 투여한 후 어느 종에서도 축적이 관찰되지 않았고 어느 종에서도 TK의 성별 차이가 인지되지 않았다.
실시예 2: 분포
분포의 부피는 마우스, 래트, 개 및 원숭이에서 매우 높았는데(전신 물 부피의 대략 12배 내지 43배), 이것은 조직 내로의 화합물 A의 광범위한 분포를 암시한다. 화합물 A는 현저한 종간 차이 없이 혈장 단백질에 매우 잘 결합되었다(인간 혈장에서 83%, 및 동물 혈장에서 83% 내지 92%). 조직 내로의 화합물 A의 분포 및 태반 장벽을 가로지른 화합물 A의 수송은 평가되지 않았다.
실시예 3: 대사
수컷 마우스, 래트, 개 및 원숭이, 및 혼성 인간의 냉동보존된 일차 간세포를 사용하여 화합물 A의 대사를 평가하였다(보고 QC6688-ADME-2006). 화합물 A의 대사 안정성은 래트 및 개에서 더 컸고 그 다음에 인간 및 원숭이에서 큰 반면, 안정성은 마우스 간세포에서 가장 작았다. 마우스를 제외한 연구된 모든 종들에서 단일 대사물질(M1; 산화적 탈아민화 대사물질)이 확인되었고, 인간 간세포에서 형성된 M1의 정성적 수준은 임상 전 안전성 시험을 위해 사용된 종들 중 하나인 개 간세포에서 형성된 M1의 정성적 수준에 필적할 만하였는데, 이것은 인간 간세포가 임의의 독특한 대사물질을 형성하지 않았다는 것을 시사한다.
재조합 인간 CYP 효소를 사용한 연구는 CYP3A4가 다른 CYP 효소들로부터의 약간의 도움을 받아 화합물 A의 산화적 대사를 주도적으로 담당하는 것으로 보인다는 것을 보여주었다(보고 QC6688-ADME-2006). 화합물 A의 대사에 있어서 비-CYP 효소의 역할은 아직 확인되지 않았다.
실시예 4: 배출
배관이 담관에 삽입된 래트에서, 방사성표지로 표지되지 않은 화합물 A의 정맥내 투약 후, 평균 26.3%의 용량(소변에서 8.5%의 용량 및 담즙에서 17.8%의 용량)이 투약 후 24시간 이내에 온전히 배출되었는데, 이것은 대사가 화합물 A의 제거에 있어서 유의미한 역할을 수행할 수 있고 온전한 화합물 A의 배출이 일차 제거 모드가 아니라는 것을 시사한다. 모유 내로의 화합물 A 또는 이의 관련된 성분의 배출은 평가되지 않았다.
실시예 5: 시험관내 약물-약물 상호작용
풀링된 인간 간 마이크로좀을 사용하여 화합물 A에 의한 주요 CYP 이소자임들(CYP 1A2, 2C9, 2C19, 2D6 및 3A4)의 사이토크롬 P450 억제 잠재력을 평가하였다. 화합물 A(최대 50 μM)는 CYP 1A2, 2C9 및 2D6에 대한 직접적인 억제 효과를 거의 내지 전혀 갖지 않았고 50 μM 초과의 IC50 값으로 CYP2C19 및 CYP3A4의 최소 억제를 보였다. 따라서, 임상적으로 적절한 농도에서 화합물 A는 CYP 억제로 인해 임의의 약물-약물 상호작용을 야기할 것으로 예상되지 않는다.
냉동보존된 인간 간세포를 배양한 후 최대 3일 동안 항온처리함으로써 화합물 A(0.03 내지 10 μM)의 사이토크롬 P450 유도 잠재력을 평가하였다. CYP 1A2, 2B6 및 3A4의 mRNA 발현을 유도하는 능력을 측정하였다(보고 QC6688-ADME-2007). 화합물 A는 mRNA의 증가를 야기하지 않았는데(비히클 대조군에 비해 2배 미만), 이것은 화합물 A가 CYP 1A2, 2B6 및 3A4의 유도제가 아니라는 것을 시사한다.
요약하건대, 화합물 A는 CYP 기질인 공-투여된 약물과 약물-약물 상호작용을 야기할 최소한의 잠재력을 가진다.
실시예 6. 화합물 A 예측된 인간 약동학
종양학 피험자에서, 동물 모델에서의 화합물 A의 PK 파라미터 및 상대성장 척도에 기반을 둘 때, 화합물 A는 적절한 제거율(9.4 ㎖/분/kg) 및 높은 분포 부피(17.6 ℓ/kg, 전신 물 부피의 대략 31배)를 가질 것으로 예측되었다. 상대성장 유도된 PK 파라미터를 이용하고 80% 경구 생체이용률을 가정하였을 때, 60 kg 인간에서 1.25 mg 경구 용량의 QW 투여 후 화합물 A의 예측된 정상 상태 전신 노출(AUCt)은 29 ng·hr/㎖이다.
VI. 독성학
마우스 및 개에서의 일련의 최대 4주 탐색 및 중추 독성 연구, 및 시험관내 유전학 독성 연구를 수행하여 화합물 A의 독성 프로파일을 특징규명하였다. 경구 경로가 임상시험에서 의도된 투여 경로이기 때문에 경구 경로를 이용하여 생체내 연구를 수행하였다. 마우스에서 QDx5/주 또는 QODx3/주 투약 일정으로 투여되고 개에서 QW, BIW 또는 Q2W 투약 일정으로 투여된 화합물 A를 사용하여 중추적 독성 연구(4주 회복 기간을 가진 4주 경구 반복 투약; 마우스 및 개)를 수행하였다. 비임상 실험실 연구를 위한 미국 FDA GLP 규정의 요건(21 CFR Part 58), GLP의 OECD 원칙, ENV/MC/CHEM(98)17(1997년 개정, 1998년 1월 발행) 및 ICH S9 지침(2009)에 따라 중추적 독성 연구를 수행하였다.
실시예 1: 마우스에서 4주 회복 기간을 가진 4주 독성 연구
경구 위관영양법을 통해 화합물 A를 0, 5, 15 및 45 mg 염기/kg/용량, 또는 25 mg 염기/kg/용량의 용량 수준으로 수컷 및 암컷 Crl:CD1(ICR) 마우스(10마리 또는 15마리/성별/군)에게 투여하였다. 한 투약 일정은 총 4주 동안 QDx5/주(5, 15 및 45 mg 염기/kg/용량의 용량 수준)이었다. 제4 주기의 최종 용량이 투여된 다음날 동물을 종결시켰다. 총 4주 동안 25 mg 염기/kg/용량 QODx3/주를 또 다른 군의 동물들에게 투여하였고 최종 용량 후 종결시켰다. 투약 후 4주 회복 기간이 있었다(0, 15, 45 또는 25 mg 염기/kg/용량의 용량 수준에서 5마리/성별/군).
TK 평가를 위해 추가 동물(대조군에서 6마리/성별, 및 시험 제품 군에서 36마리/성별/군)에게 최대 26일 동안 독성 동물과 동일한 일정으로 투약하였다.
독성의 평가는 사망률, 임상 관찰소견, 체중, 음식 소비, 안과 평가, 및 임상적 및 해부학적 병리학에 기반을 두었다. TK 평가를 위해 TK 동물로부터 혈액 샘플을 채취하였다.
45 mg 염기/kg/용량이 투여된 5마리 동물들(4마리 수컷 및 1마리 암컷)은 화합물 A 관련 독성으로 인해 투약 기간의 7일째 날만큼 이른 시기에 빈사 상태로 희생되었다. 이들 모두가 TK 하위군 동물들이었다. 이 동물들에 대한 임상 관찰소견은 여윈, 운동실조, 활동저하, 가늘게 뜨는 눈, 거친 털, 창백한 귀/신체, 및/또는 입모를 포함하였다. 이들이 TK 하위군 동물이었기 때문에, 이들을 조직학적으로 검사하지 않았다. 1마리 25 mg 염기/kg/용량 암컷을, 손상과 일치하는 소견인 그의 우측 뒷다리의 제한된 사용 때문에 투약 기간의 20일째 날에 희생시켰으므로, 이 예정되지 않은 희생은 화합물 A와 관련된 것으로 간주되지 않았다. 독성 하위군 동물에서 화합물 A와 관련된 예정되지 않은 사망은 없었다.
시험 제품과 관련된 안과학 효과는 없었다.
모든 다른 시험 제품 관련 소견들은 이하에 제공되어 있다. 화합물 A와 관련된 불리한 소견은 다음과 같다:
Figure 112019023638871-pct00162
15 mg 염기/kg/용량 이상에서 거친 털, 25 mg 염기/kg/용량 이상에서 입모 및 웅크린 외관, 45 mg 염기/kg/용량에서 창백한 귀/신체 및 여윈 외관.
Figure 112019023638871-pct00163
45 mg 염기/kg/용량에서 혈소판 및 망상적혈구 카운트의 현저한 감소.
Figure 112019023638871-pct00164
15 및 45 mg 염기/kg/용량에서 영향을 받은 흉골분절 내에서의 최소한으로 내지 중등도로 감소된 조혈 조직(저세포성)과 관련된, 흉골의 수질 공간 내의 최소한 내지 현저한 섬유증.
Figure 112019023638871-pct00165
15 및 45 mg 염기/kg/용량에서 활성화된 조골세포를 가진 골막, 골내막 및 소주 층판 골의 최소한 내지 중등도 증가(골비대증).
Figure 112019023638871-pct00166
15 mg 염기/kg/용량 이상에서 흉골의 골수 내의 최소한 내지 중등도 골수성 과형성증.
Figure 112019023638871-pct00167
45 mg 염기/kg/용량에서 대퇴골 골수 내의 중등도 섬유증(1마리 수컷).
Figure 112019023638871-pct00168
15 mg 염기/kg/용량에서 수컷, 25 mg 염기/kg/용량에서 암컷, 및 45 mg 염기/kg/용량에서 수컷 및 암컷의 비장에서 변연부 림프구의 최소한 내지 현저한 고갈.
하루에 발생하였고/하였거나, 자가 한정적이었고/이었거나, 독성학적 결과를 갖지 않았고/않았거나, 크기가 작았고/작았거나 미시적 상관물을 갖지 않았기 때문에 불리하지 않은 소견으로서 간주된 화합물 A 관련 소견은 하기 소견들로 구성되었다:
Figure 112019023638871-pct00169
45 mg 염기/kg/용량에서 평균 체중 손실(27일째 날 수컷 및 암컷에 대해 대조군들에 비해 각각 8.6% 및 12.6% 더 낮음).
Figure 112019023638871-pct00170
5 mg 염기/kg/용량 이상에서 경미하게 내지 중등도로 더 낮은 적혈 세포 질량(RBC 카운트, 헤모글로빈 및 헤마토크릿(hematocrit)).
Figure 112019023638871-pct00171
5 및 15 mg 염기/kg/용량에서 경미하게 내지 중등도로 더 낮은 혈소판 및 절대 망상적혈구.
Figure 112019023638871-pct00172
15 mg 염기/kg/용량 이상을 투여받은 동물에서 (또한 5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 수컷에서) 최소한으로 내지 경미하게 더 낮은 평균 혈구 헤모글로빈, 평균 혈구 헤모글로빈 농도 및 절대 호중구 카운트, 및 15 또는 25 mg 염기/kg/용량을 투여받은 수컷 및 5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 암컷에서 최소한으로 더 높은 절대 단핵구 카운트.
Figure 112019023638871-pct00173
25 mg 염기/kg/용량에서 최소한으로 더 낮은 총 단백질 및 25 또는 45 mg 염기/kg/용량에서 최소한으로 더 낮은 알부민.
Figure 112019023638871-pct00174
5 mg 염기/kg/용량 이상에서 흉골의 골수 내의 거핵구의 최소한 또는 약간의 증가(수 및/또는 크기).
Figure 112019023638871-pct00175
15 mg 염기/kg/용량 이상에서 감소된 정낭 중량(미시적 상관물 없음).
Figure 112019023638871-pct00176
15 및 45 mg 염기/kg/용량에서 감소된 자궁 중량(미시적 상관물 없음).
Figure 112019023638871-pct00177
회복 희생 시에만 15 또는 45 mg 염기/kg/용량에서 감소된 고환 중량(미시적 상관물 없음).
Figure 112019023638871-pct00178
15 mg 염기/kg/용량 이상, 및 5 mg 염기/kg/용량의 1마리 암컷에서 비장 내의 증가된 수질외 조혈(최소한 내지 현저함); 15 또는 45 mg 염기/kg/용량에서 증가된 절대 비장 중량 및 상대 비장 중량과 상호관련되어 있음.
모든 시험 제품 관련 소견들은 4주 치료 부재 기간 후 부분적 내지 완전한 가역성을 입증하였다.
화합물 A TK 데이터는 표 31에 요약되어 있다.
용량 수준이 5 mg 염기/kg/용량부터 45 mg 염기/kg/용량까지 증가함에 따라 화합물 A에의 노출은 증가하였다. Cmax 및 AUC0-24 값의 증가는 5 mg 염기/kg/용량부터 15 mg 염기/kg/용량까지 용량 비례적 증가보다 일반적으로 더 컸고, 15 mg 염기/kg/용량부터 45 mg 염기/kg/용량까지 대략적으로 용량 비례적이다. 평균 화합물 A Cmax 및 AUC0-24 값의 일치하는 성별 차이는 관찰되지 않았다. 화합물 A를 마우스에게 다회 투약한 후 화합물 A의 축적은 관찰되지 않았다.
사망률, 독성의 임상 징후, 혈액학 및 조직병리학 소견에 기반을 둘 때, STD10은 QDx5/주 일정 후 (수컷 및 암컷에서 각각 2,620 ng/㎖ 및 29,000 ng·hr/㎖, 및 2,130 ng/㎖ 및 26,500 ng·hr/㎖의 평균 정상 상태 Cmax 및 AUC0-24 값에 상응하는) 45 mg 염기/kg/용량을 초과하였고, 매주 QODx3 일정 후 (수컷 및 암컷에서 각각 1,450 ng/㎖ 및 17,800 ng·hr/㎖, 및 1,740 ng/㎖ 및 17,500 ng·hr/㎖의 평균 정상 상태 Cmax 및 AUC0-24 값에 상응하는) 25 mg 염기/kg/용량을 초과하였다. NOAEL은 QDx5/주 일정 후 (수컷 및 암컷에서 각각 276 ng/㎖ 및 2,010 ng·hr/㎖, 및 270 ng/㎖ 및 2,410 ng·hr/㎖의 평균 정상 상태 Cmax 및 AUC0-24 값에 상응하는) 5 mg 염기/kg/용량이었다. QODx3/주 일정에 대한 NOAEL은 확인되지 않았다.
[표 31]
Figure 112019023638871-pct00179
실시예 2: 개에서 4주 회복 기간을 가진 4주 독성 연구
초기 연구에서, 경구 위관영양법을 통해 화합물 A를 최대 4주 동안 0, 0.375, 0.75 또는 1.5 mg 염기/kg/용량 QW, 또는 최대 4주 동안 0.375 mg 염기/kg/용량 BIW의 용량 수준으로 수컷 및 암컷 순종 비글 개의 5개 군들(4마리 또는 6마리/성별/군)에게 투여하였다. 마지막 용량 후, 0.375 mg 염기/kg/용량 QW 군을 제외한 모든 군들에서 2마리 동물들/성별/군은 4주 치료 부재 회복 기간이 예정되었다.
화합물 A의 매주 경구 투여는 연구 13일째 날과 23일째 날 사이에 11마리 동물들(0.375 mg 염기/kg QW에서 1마리 수컷, 0.75 mg 염기/kg에서 2마리 수컷 및 1마리 암컷, 및 1.5 mg 염기/kg에서 3마리 수컷 및 4마리 암컷)의 빈사 상태 안락사를 초래하였다. 이 동물들의 빈사 상태는 화합물 A와 관련된 위 점막 궤양 및/또는 급성 염증에 기인하였다. 1.5 mg 염기/kg/용량 군에서의 심각한 독성의 결과로서, 생존 3마리 수컷들 및 2마리 암컷들을 위해 이 군의 투약을 (예정된 제3 용량 전) 15일째 날에 중단하였고; 이 동물들은 연구에 남아 있었고 마지막 용량 후 적어도 4주의 회복을 가졌다. 모든 다른 동물들은 그들의 예정된 부검까지 생존하였다.
모든 용량 수준 및 일정(즉, ≥ 0.375 mg 염기/kg/용량, QW 또는 BIW)에서 불리한 소견이 관찰되었다. 일차 독성은 GI 관 조직의 점막 궤양, 급성 및/또는 아급성 염증 및 점막 상피 위축으로 구성되었다.
0.375 mg 염기/kg/용량(QW 또는 BIW) 이상을 투여받은 동물에서 하기 변화들이 화합물 A와 관련된 변화로서 간주되었고, 빈사 상태로 희생된 동물 및/또는 예정된 부검까지 생존한 동물에서 인지되었고, 불리한 변화로서 간주되었다:
Figure 112019023638871-pct00180
활동저하, 여윈 외관, 구토, 적색/흑색/액체/비형성된/유점액 대변, 탈수, 체중 손실, 감소된 음식 소비, 발열, 및/또는 GI 관 불편함의 증거.
Figure 112019023638871-pct00181
경미하게 내지 중등도로 감소된 적혈 세포 질량, 경미하게 내지 현저히 감소된 혈소판 카운트, 현저히 감소된 망상적혈구 카운트, 경미하게 내지 중등도로 감소된 호산구 카운트, 경미하게 내지 중등도로 증가된 절대 단핵구 및 염색되지 않은 대세포 카운트, 중등도 내지 현저히 감소된 호중구 카운트(1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 2마리 암컷) 또는 경미하게 내지 중등도로 증가된 호중구 카운트(0.375 mg 염기/kg/용량 이상을 투여받은 다른 동물)의 혈액학 소견.
Figure 112019023638871-pct00182
경미하게 내지 중등도로 감소된 알부민 및 알부민:글로불린 비, 경미하게 감소된 칼슘, 경미하게 내지 중등도로 감소된 무기 인, 경미하게 내지 중등도로 증가된 콜레스테롤, 최소한으로 내지 경미하게 증가된 알칼리성 포스파타제 활성의 임상 화학 소견.
Figure 112019023638871-pct00183
위장에서의 약간의 내지 현저한 점막 궤양 및/또는 중등도 급성 염증.
Figure 112019023638871-pct00184
공장, 회장, 맹장, 결장 및/또는 직장에서의 최소한 내지 현저한 급성 또는 아급성 염증 및 궤양.
Figure 112019023638871-pct00185
공장 및/또는 회장에서의 약간의 내지 중등도 점막 상피 위축.
Figure 112019023638871-pct00186
식도에서의 약간의 궤양(1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 1마리 암컷).
하기 변화들은 각각의 부검까지 생존한, 0.375 mg 염기/kg/용량 이상(QW 또는 BIW)을 투여받은 동물에서 인지되었고, 화합물 A와 관련된 변화로서 간주되었으나, 이들이 낮은 크기 및/또는 발생률을 가졌고/가졌거나, 결과를 갖지 않았고/않았거나 미시적 상관물을 갖지 않았기 때문에 불리한 변화로서 간주되지 않았다:
Figure 112019023638871-pct00187
최소한으로 내지 경미하게 감소된 적혈 세포 질량(0.375 mg 염기/kg/용량 QW[수컷만] 또는 BIW를 투여받은 동물, 0.75 mg 염기/kg/용량을 투여받은 암컷, 및 1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 수컷), 경미하게 감소된 절대 망상적혈구 카운트(1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 암컷), 경미하게 내지 중등도로 증가된 혈소판 카운트(0.375 mg 염기/kg/용량 QW 또는 BIW를 투여받은 수컷, 및 1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 동물), 경미하게 증가된 백혈 세포(WBC), 절대 호중구, 및 염색되지 않은 대세포 카운트(1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 수컷)의 혈액학 소견.
Figure 112019023638871-pct00188
최소한으로 증가된 글로불린(0.375 mg 염기/kg/용량 BIW을 투여받은 동물, 0.75 mg 염기/kg/용량을 투여받은 암컷, 및 1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 동물), 경미하게 증가된 콜레스테롤(0.75 mg 염기/kg/용량을 투여받은 암컷), 최소한으로 증가된 알칼리성 포스파타제 활성(0.375 mg 염기/kg/용량 BIW 또는 0.75 mg 염기/kg/용량을 투여받은 암컷, 및 1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 동물), 최소한으로 감소된 칼슘(1.5 mg 염기/kg/용량을 투여받은 수컷), 경미하게 감소된 무기 인(0.75 mg 염기/kg/용량을 투여받은 암컷)의 임상 화학 소견.
빈사 상태로 안락사된 동물에서의 다른 소견은 염증 반응(비장에서의 수질외 조혈 및 흉골 골수에서의 증가된 골수:적혈구 비), GI 관에서의 점막 궤양에 수반된 패혈증(다수의 림프절에서의 염증, SC 부종, 또는 심장 또는 간에서의 급성 염증), 및/또는 빈사 상태와 관련된 스트레스(흉선에서의 림프구의 고갈)에 기인하였다.
0.375 mg 염기/kg/용량 이상에서 그 자신의 예정된 부검까지 생존한 동물들 중 임의의 동물에서 평균 체중, 음식 소비, 응고, 소변검사, 심전도, 안과학, 거시적 관찰소견 또는 장기 중량에 대한 화합물 A 관련 효과는 없었다.
상기 소견들 모두가 4주 치료 부재 기간 후 완전한 회복을 보였다.
매주 투약되었을 때, 화합물 A에의 노출은 1일째 날에 0.375 mg 염기/kg/용량부터 1.5 mg 염기/kg/용량까지 용량 의존적 방식으로 증가하였고 22일째 날에 0.375 mg 염기/kg/용량부터 0.75 mg 염기/kg/용량까지 용량 의존적 방식으로 증가하였다. 노출은 수컷과 암컷 사이에 필적할 만하였고, TK 파라미터의 일치하는 차이는 관찰되지 않았다. 화합물 A를 개에게 다회 투약한 후 화합물 A의 축적은 관찰되지 않았다. TK 파라미터의 요약은 표 32에 제공되어 있다. 0.375 mg 염기/kg/용량 QW를 투여받은 동물에서 농도-시간 프로파일은 1일째 날 및 22일째 날에 0.375 mg 염기/kg/용량 BIW를 투여받은 동물의 농도-시간 프로파일과 유사하였다.
[표 32]
Figure 112019023638871-pct00189
0.375 mg 염기/kg/용량 이상의 QW 용량에서 독성, 사망률, 체중에 대한 불리한 효과, 임상 병리학 및 조직병리학의 임상 징후에 기반을 둘 때, QW 또는 BIW 용량 일정에 대한 HNSTD 및 NOAEL은 확인되지 않았다(즉, 0.375 mg 염기/kg/용량 미만이었다). QW 0.375 mg 염기/kg/용량은 투약 기간의 22일째 날에 각각 21.9 ng/㎖ 및 384 ng·hr/㎖(수컷), 및 15.5 ng/㎖ 및 269 ng·hr/㎖(암컷)의 평균 Cmax 및 AUC0-168 값에 상응하고; BIW 0.375 mg 염기/kg/용량은 투약 기간의 22일째 날에 각각 17.7 ng/㎖ 및 307 ng·hr/㎖(수컷), 및 19.0 ng/㎖ 및 296 ng·hr/㎖(암컷)의 평균 Cmax 및 AUC0-72 값에 상응한다.
실시예 3. 개에서의 4주 독성 연구(회복 기간 없음)
이차 개 연구에서, 경구 위관영양법을 통해 화합물 A를 적어도 4주 동안 0, 0.125 또는 0.25 mg 염기/kg/용량 QW(총 5회 용량), 또는 0.5 mg 염기/kg/용량 Q2W(총 3회 용량)로 수컷 및 암컷 순종 비글 개의 4개 군들(4마리/성별/군)에게 투여하였다(보고 QC6688-TOX-3006). 모든 동물들은 말기 희생 시까지 생존하였다.
임상 관찰소견, 체중 파라미터, 음식 소비, 장기 체중, 응고, 임상 화학, 소변검사 파라미터 또는 거시적 소견의 화합물 A 관련 변화는 없었다.
하기 변화들은 화합물 A 투여의 결과로서 간주되었다:
Figure 112019023638871-pct00190
치료 관련 불리한 소견:
- 회장에서의 중등도 급성 염증 및 맹장에서의 현저한 급성 염증(0.25 mg 염기/kg/용량 QW를 투여받은 단일 암컷)
- 맹장에서의 최소한의 급성 염증(0.5 mg 염기/kg/용량 Q2W를 투여받은 단일 수컷)
Figure 112019023638871-pct00191
치료와 관련되어 있으나, 낮은 크기/중증도 및/또는 미시적 상관물의 부재로 인해 불리한 소견으로서 간주되지 않는 소견:
- 절대 혈소판 카운트의 최소한의 증가(Q2W로 투여된 0.5 mg 염기/kg/용량)
- 절대 단핵구 카운트의 최소한의 증가(0.25 mg 염기/kg/용량 QW를 투여받은 암컷)
- 수질외 조혈의 최소한의 증가(0.5 mg 염기/kg/용량 Q2W를 투여받은 4마리 동물 및 0.25 mg 염기/kg/용량 QW를 투여받은 단일 암컷)
- 흉골 및 대퇴골의 골수에서의 골수:적혈구 비의 약간의 증가(0.25 mg 염기/kg/용량 QW를 투여받은 단일 암컷).
TK 파라미터의 요약은 표 33에 제시되어 있다.
[표 33]
Figure 112019023638871-pct00192
1일째 날, 용량 수준이 0.125 mg 염기/kg/용량부터 0.5 mg 염기/kg/용량까지 증가함에 따라 화합물 A에의 노출은 증가하였고, 평균 Cmax 및 AUC0-96 값의 증가는 대략 용량 비례적이었다. 15일째 날, 용량 수준이 0.125 mg 염기/kg/용량 QW부터 0.5 mg 염기/kg/용량 Q2W까지 증가함에 따라 화합물 A에의 노출은 증가하였고, 증가는 대략 용량 비례적이었다. 평균 Cmax 및 AUC0-96 값의 일치하는 성별 차이는 관찰되지 않았다. 다회 용량 후 화합물 A의 축적은 관찰되지 않았다.
0.25 mg 염기/kg/용량(QW 투여)에서 단일 암컷 및 0.5 mg 염기/kg/용량(Q2W 투여)에서 단일 수컷의 불리한 미시적 소견(회장 및/또는 맹장에서의 염증)에 기반을 둘 때, QW 투여 NOAEL은 각각 5.26 ng/㎖ 및 127 ng·hr/㎖의 조합된 15일째 날 평균 Cmax 및 AUC 값에 상응하는 0.125 mg 염기/kg/용량인 것으로 간주되었다. Q2W 투여 NOAEL은 확인되지 않았다(즉, < 0.5 mg 염기/kg/용량). QW 투약의 경우, HNSTD는 각각 11.0 ng/㎖ 및 287 ng·hr/㎖의 조합된 15일째 날 평균 Cmax 및 AUC 값에 상응하는 0.25 mg 염기/kg/용량 QW이었다. Q2W 투여의 경우, HNSTD는 각각 22.0 ng/㎖ 및 636 ng·hr/㎖의 조합된 15일째 날 평균 Cmax 및 AUC 값에 상응하는 0.5 mg 염기/kg/용량이었다.
실시예 4: 시험관내 유전독성
화합물 A는 (살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium) TA98 및 TA100 균주를 사용하는) 세균 역돌연변이 어세이에서 S9 외생성 포유동물 대사 활성화 시스템의 존재 및 부재 하에서 500 ㎍/㎖의 시험된 농도까지 돌연변이유발성에 대해 음성을 나타내는 것으로 확인되었다.
실시예 5. 마우스에서의 탐색 독성 연구
이 연구의 목적은 두 상이한 투약 일정으로 수컷 및 암컷 CD-1 마우스에게 경구 위관영양법에 의해 투여되었을 때 화합물 A의 내약성 및 TK를 측정하는 것이었다. 한 일정은 5일 연속 투약에 이은 2일 휴약기, 이어서 추가 5일 연속 투약(5일 투약/2일 중단)으로 구성되었고; 또 다른 일정은 1일째 날, 3일째 날, 5일째 날, 8일째 날, 10일째 날 및 12일째 날 투약(QODx3/주)으로 구성되었다. 최종 용량이 투여된 다음날 동물을 희생시켰다.
화합물 A를 5일 투약/2일 중단 일정으로 0, 10, 30 또는 60 mg/kg/용량, 또는 QOD 일정으로 60 mg/kg/용량의 용량 수준으로 6마리 마우스/성별/군의 군들에게 투여하였다. TK 평가를 위해 추가 동물을 포함시켰다.
단일 TK 동물을 제외한 모든 마우스들은 예정된 희생 시까지 생존하였다. 위관영양법 외상은 TK 동물에 대한 사망의 원인으로서 확인되었으므로; 이 이른 사망은 화합물 A와 관련되지 않은 사망으로서 간주되었다.
체중 획득 또는 체중 손실의 약간의 용량 의존적 감소가 5일 투약/2일 중단 일정의 모든 용량 수준에서 인지되었다. 60 mg/kg/용량에서, 5일 투약/2일 중단 일정과 비교될 때 QOD 일정에 의한 체중 획득의 덜 심각한 감소가 있었다. 이 연구의 과정 전체에 걸쳐 인지된 시험 제품 관련 임상 관찰소견은 없었다.
여러 혈액학 파라미터들의 변화가 화합물 A를 투여받은 수컷 및 암컷 마우스에서 인지되었다.
순환 혈소판은 연구의 종료일에 모든 용량 수준에서 마우스에서 감소되었다. 효과는 60 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단에 비해 60 mg/kg/용량 QOD를 투여받은 마우스에서 약간 감소되었다. 10 mg/kg/일 5일 투약/2일 중단 시, (2일 휴약기 후, 제1 투약 기간의 종료일에 비해) 8일째 날 2배 초과의 혈소판 증가가 있었고; 제2 투약 기간의 종료일까지 혈소판 수준은 다른 화합물 A 처리군의 혈소판 수준과 유사하였다. 재생성 혈소판형성을 암시하는 평균 혈소판 부피의 증가는 일반적으로 연구의 종료일에 모든 용량 수준에서 혈소판의 감소를 동반하였고, 이때 가장 큰 반응은 60 mg/kg/용량에서 일어났다.
적혈 세포 파라미터(RBC 카운트, 헤마토크릿 및 헤모글로빈)는 30 및 60 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 시 일반적으로 감소되었다. 망상적혈구 카운트 및 퍼센트의 용량 의존적 감소는 5일 투약/2일 중단 일정의 모든 용량 수준에서 일반적으로 인지되었다. RBC 및/또는 망상적혈구 파라미터에 대한 효과는 60 mg/kg/용량 QOD에서 덜 분명하였다.
5일 투약/2일 중단 일정 후 모든 화합물 A 처리군들에서 호중구 카운트의 용량 의존적 감소가 인지되었는데, 이때 가장 큰 감소는 병행 대조군 및 연구 전 값에 비해 대략 95%이었다. QOD 일정 후 60 mg/kg/용량에서, 감소는 병행 대조군에 비해 66%(암컷) 내지 83%(수컷)이었다.
5일 투약/2일 중단 일정에서 단핵구는 모든 용량 수준에서 증가되었고, 이때 가장 큰 효과는 30 및 60 mg/kg/용량에서 확인되었다. 데이터가 매우 가변적이었을지라도, 호염기구 카운트는 5일 투약/2일 중단 일정의 60 mg/kg/용량에서 대다수의 마우스들에서 증가한 듯하였다.
화합물 A 관련 미시적 변화가 흉골(골 및 골수), 대퇴골(골수) 및 비장에 존재하였다.
5일 투약/2일 중단 일정 후 화합물 A를 투여받은 마우스의 흉골 골수에서, 경색이 60 mg/kg/용량에서 마우스들에서 관찰되었고 30 mg/kg/용량에서 대다수의 마우스들에서 관찰되었다. 영향을 받은 동물의 발생률 및 영향을 받은 흉골분절의 수에 있어서 용량 반응이 있었다. 영향을 받은 흉골분절은 최소한 내지 경미한 골막 직조 골 형성도 나타내었다. 5일 투약/2일 중단으로 60 mg/kg/용량을 투약받은 1마리 수컷 및 2마리 암컷 마우스, 및 30 mg/kg/용량을 투약받은 1마리 수컷 마우스의 대퇴골에서, 경미한 수질 섬유증이 성장판 아래 골간에 존재하였다. 비장에서, 30 또는 60 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 시, 이 군들에서 증가된 비장 중량(최대 2배)과 상호관련되어 있는, 골수조혈의 최소한 내지 중등도 증가가 적비수 내에 존재하였다. 최소한의 비장 골수조혈이 10 mg/kg/용량에서 1마리 수컷에서 인지되었다(5일 투약/2일 중단 일정으로 60 mg/kg/용량을 투약받은 개체, 및 30 mg/kg/용량을 투약받은 단일 암컷의 흉선 피질에서 경미한 또는 중등도의 림프 고갈이 인지되었다). 림프구 아폽토시스의 최소 증가가 5일 투약/2일 중단 일정으로 60 mg/kg/용량을 투약받은 예비 수컷의 하악골 및 장간막 림프절의 생식 여포에 존재하였다. 흉선 및 림프절에서의 변화는 비특이적인 것으로 간주되었고 영향을 받은 동물에서 일반적인 스트레스에 대한 반응과 일치하였다.
요약하건대, TK의 일치하는 성별 차이는 관찰되지 않았다. 전신 노출(AUC0-24 및 Cmax)은 수컷 및 암컷 둘 다에서 1일째 날 및 12일째 날에 10 mg/kg/용량부터 60 mg/kg/용량까지 용량과 함께 증가하였다. 화합물 A의 반복 투약 시, 축적이 관찰되지 않았다. 최소한의 화합물 A 관련 효과는 10 mg/kg/용량(5일 투약/2일 중단)에서 마우스에서 인지되었고 일반적으로 감소된 체중 획득, 감소된 순환 혈소판, 호중구감소증, 망상적혈구감소증, 및 단일 수컷에서의 비장 골수조혈의 최소 증가를 포함하였다. 5일 투약/2일 중단 투약 일정의 30 및 60 mg/kg/용량에서 마우스에서의 화합물 A 관련 효과는 일반적으로 체중 손실, 감소된 순환 혈소판, 감소된 RBC 파라미터(RBC, 헤마토크릿, 헤모글로빈, 망상적혈구), 호중구감소증, 단핵구증가증, 및 흉골(골막 직조 골 형성), 흉골 골수(경색), 대퇴골(수질 섬유증) 및 비장(증가된 골수조혈)에서의 미시적 효과를 포함하였다. 60 mg/kg/용량 QOD는 감소된 체중 획득, 감소된 혈소판 및 호중구, 및 증가된 단핵구를 야기하였다. 이 효과들의 크기는 5일 투약/2일 중단 일정으로 투약받은 마우스의 효과에 비해 감소되었다.
실시예 6: 개에서의 탐색 독성 연구
이 연구의 목적은 투약받지 않은 수컷 및 암컷 비글 개에게 2종의 상이한 투약 일정에 따라 경구 위관영양법에 의해 투여되었을 때 화합물 A의 내약성 및 TK를 확인하는 것이었다. 비교된 일정은 1일째 날, 3일째 날, 5일째 날, 8일째 날, 10일째 날 및 12일째 날 투약(QODx3/주), 또는 5일 연속 투약에 이은 2일 휴약기, 이어서 추가 5일 연속 투약(5일 투약/2일 중단)으로 구성되었다(보고 SW14-1929). 마지막 용량이 투여된 다음날 동물을 희생시켰다.
화합물 A를 0, 0.25, 0.5 또는 1.0 mg/kg/용량 QOD, 또는 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단의 용량 수준으로 2마리 동물/성별/군의 군들에게 투여하였다.
5일 투약/2일 중단 일정으로 0.5 mg/kg/일을 투약받은 1마리 암컷 개는 불리한 임상 징후(심각한 활동저하, 감소된 호흡률, 차가운 촉감), 체중 손실(10.8%) 및 감소된 음식 소비로 인해 12일째 날 저녁에 빈사 상태로 희생되었다. 미시적 소견은 현저한 혈소판감소증(이 개에 대해 9일째 날부터 12일째 날까지 인지됨)에 대한 반응과 일반적으로 일치하였고, 겨드랑이, 하악골 및 장간막 림프절, 위의 점막고유층, 및 방광의 점막하를 포함하는 다양한 조직들 내에서의 출혈을 포함하였다. 추가로, 아마도 식욕부진/체중 손실에 수반된 간세포 위축이 이 동물에 존재하였다. 림프구감소증의 혈액학적 관찰소견과 상호관련되어 있는 중등도의 흉선 림프 고갈도 존재하였고, 아마도 이 동물에서 일반적인 스트레스에 수반되었을 것이다. 빈사 상태는 화합물 A와 관련된 것으로서 간주되었다.
모든 다른 개들은 13일째 날 예정된 희생 시까지 생존하였다. 화합물 A 관련 체중 손실은 주로 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정으로 투여받은 개별 개들에서 인지되었다. 감소된 음식 소비는 모든 용량 수준 및 일정으로 투여받은 암컷에서 주로 인지되었고; 음식 소비는 연구의 마지막 2일 동안 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단으로 투여받은 1마리 수컷에서만 감소되었다.
비정상적인 임상적 관찰소견은 1 mg/kg/용량 QOD 또는 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정으로 투약받은 동물에서 11일째 날부터 13일째 날까지 일반적으로 인지되었고, 주로 입술, 잇몸, 음낭, 복부 및 유선 주위에서의 점상출혈 또는 빈상출혈(또는 피멍)으로 구성되었다.
감소된 혈소판 카운트는 대략 5일째 날에 0.5 mg/kg/용량(두 일정 모두) 및 1 mg/kg/용량에서 관찰되었고; 카운트는 이 용량 수준들에서 대다수의 개들에서 연구 지속시간 동안 25,000/㎕ 미만까지 계속 감소하였다(현저한 혈소판감소증). 0.25 mg/kg/용량에서 혈소판 카운트의 감소는 없었다. RBC 파라미터(RBC 카운트, 헤마토크릿 및 헤모글로빈)의 약간의 감소는 연구의 종료일까지 1 mg/kg/용량 QOD 또는 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정으로 투약받은 일부 동물들에서 인지되었다. 백혈 세포 카운트, 주로 호중구는 연구의 종료일까지 1 mg/kg/용량 QOD 또는 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정으로 투약받은 암컷에서만 일반적으로 감소되었다.
다소 가변적이지만, 단핵구, 호염기구 및 호산구의 일부 변화도 인지되었다. 단핵구 및 호염기구는 1 mg/kg/용량 QOD 또는 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정, 및 0.25 및 0.5 mg/kg/용량 QOD 일정으로 투여받은 개별 개에서 일반적으로 감소되었다. 일부 개들에서, 이 효과는 연구의 종료일까지 지속되었으나, 12일째 날 및 13일째 날 단핵구 카운트의 현저한 증가와 함께 반발 효과가 인지된 여러 개들이 있었다. 호산구 데이터는 암컷에서 매우 가변적이었으나, 호산구 카운트의 용량 의존적 감소는 연구의 제2 절반 기간 동안 수컷에서 일반적으로 인지되었다. 감소된 혈청 칼륨, 칼슘 및 인 수준도 0.5 및 1 mg/kg/용량을 투여받은 대다수의 개들에서 관찰되었다.
화합물 A 관련 미시적 소견은 주로 0.5 및 1 mg/kg/용량에서 존재하였다. 화합물 A 관련 미시적 소견은 더 많은 조직에서 일반적으로 발생하였거나 암컷보다 수컷에서 더 심각하였다. 1 mg/kg/용량 QOD 또는 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정에서, 소견은 GI 관(위/회장 내의 출혈 및/또는 점막 궤양, 및 맹장 내의 아급성 염증), 골수(감소된 조혈)에 존재하였고/하였거나, 다양한 조직들(결장, 하악골, 장간막, 자궁경부, 서혜부 및/또는 슬와 림프절, 부고환, 간, 고환, 흉선, 및 음낭 피부, 흉선주변 종격 및/또는 유선[피부])에서 출혈성 변화를 표시하였다. 0.5 mg/kg/용량 QOD 일정으로 투약받은 1마리 수컷은 하악골 및 장간막 림프절에서의 출혈의 증거를 보였다. 간세포 위축, 췌장 세엽 세포 위축 및 흉선 피질 림프 고갈을 포함하는, 일반적인 스트레스 및/또는 식욕부진에 수반되는 것으로서 간주된 소견은 1 mg/kg/용량 QOD 또는 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정에서 인지되었다(0.5 mg/kg/용량 QOD 일정에서도 인지되었다).
노출(AUC0-24 및 Cmax)은 1일째 날 및 12일째 날에 0.25 mg/kg/용량부터 1 mg/kg/용량까지 용량 비례적으로 증가하였다. 노출은 수컷과 암컷 사이에 필적할 만하였고, TK 파라미터의 일치하는 성별 차이는 관찰되지 않았다. 반복 투약 후, QOD 일정이 이용되었을 때 축적은 인지되지 않은 반면, QDX5 일정 후 대략 2배 내지 3배 축적이 인지되었다. 0.25 mg/kg/용량 QOD 일정으로 투약받은 개에서 화합물 A 관련 효과는 일반적으로 없었다. 장간막 및 하악골 림프절에서의 현저한 혈소판감소증 및 급성 출혈은 0.5 mg/kg/용량 QOD 일정에서의 주요 소견이었다. 1 mg/kg/용량 QOD 일정에서, 소견은 일반적으로 현저한 혈소판감소증, RBC 파라미터의 약간의 감소, 단핵구 및 호염기구 수준의 변경, 및 GI 관에서의 출혈 및/또는 점막 궤양, 골수에서의 감소된 조혈 및 많은 조직들(결장, 하악골, 장간막, 자궁경부, 서혜부 및/또는 슬와 림프절, 부고환 및 고환, 간, 흉선, 음낭 피부, 흉선주변 종격 및/또는 유선[피부])에서의 출혈성 변화를 포함하는 미시적 소견으로 구성되었다. 0.5 mg/kg/용량 5일 투약/2일 중단 일정에서, 소견은 개체에서의 체중 손실 및 12일째 날 1마리 암컷의 빈사 상태 희생 이외에 1 mg/kg/용량 QOD 일정과 관련하여 기재된 소견을 포함하였다.
VII. 약학 제형의 제조
실시예 1: 경구 캡슐
불투명한 경질 껍질 캡슐 내에 활성 약학 성분만을 함유하는 화합물 A 캡슐은 적절한 강도 및 캡슐 크기로 이용될 수 있다. 이 캡슐에서 부형제는 사용되지 않는다.
VIII. 재발된 및/또는 난치성 고형 종양(신경내분비 암종(NEC)을 포함함) 및 비-호지킨 림프종(NHL)의 치료 방법
실시예 1: 환자 투여
연구 화합물 A-ST-001은 재발된 및/또는 난치성 고형 종양(NEC가 풍부함) 및 비-호지킨 림프종(NHL)을 가진 피험자에서의 화합물 A의 개방 표지 1 상 용량 상승 및 확장 선입 인간(FIH) 임상 연구이다. 이 연구의 용량 상승 파트(파트 A)는 화합물 A의 MTD를 추정하기 위해 화합물 A의 경구 용량 상승을 조사할 것이다. 과다복용을 제어하면서 상승시키는(EWOC) 원칙을 이용하는 베이지안 로지스틱 회귀 모델(BLRM)은 화합물 A 용량 상승 결정을 안내하는 데 도움을 줄 것이고, 이때 최종 결정은 안전성 심사 위원회(SRC)에 의해 내려진다. 확장 파트(파트 B)는 RP2D를 더 정의하기 위해 각각 대략 20명의 평가 가능한 피험자들의 선택된 확장 코호트에서 MTD 이하로 투여된 화합물 A의 안전성 및 효능을 더 평가할 것이다. 코호트 확장을 위해 하나 이상의 투약 섭생법 및/또는 질환 서브세트가 선택될 수 있다(파트 B).
파트 A 및 B는 3개의 기간, 즉 스크리닝, 치료 및 추적조사로 구성될 것이다.
스크리닝 기간
스크리닝 기간은 화합물 A의 제1 용량을 투여하기 28일(± 3일) 전에 시작한다. 임의의 다른 연구 절차의 시작 전에 피험자 및 투여 직원은 사전 동의서(ICD)에 서명하고 날짜를 기입해야 한다. 모든 스크리닝 시험 및 절차는 화합물 A의 제1 용량 전 28일(± 3일) 이내에 완료되어야 한다.
치료 기간
치료 기간 동안, 화합물 A를 처음에 4주(28일) 주기마다 매주 1회 경구 투여할 수 있다. 파트 A 및 B 둘 다에서 6시간 이상 지속되는 하룻밤 금식 후, 화합물 A를 아침에 공복(즉, 아침식사하기 1시간 이상 전) 상태에서 적어도 240 ㎖의 물과 함께 매주 1회 투여할 수 있다.
추적조사 기간
추적조사 기간에서, 시험 화합물 또는 약학 조성물의 마지막 용량 후 28일(± 3일) 동안 안전성에 대해 피험자를 추적조사할 것이다. 안전성 추적조사 방문 후, 2년까지 또는 사망할 때까지, 추적조사로부터 누락될 때까지, 또는 시험의 종료일까지(이들 중 가장 이른 때) 생존 추적조사를 위해 후속 3개월(± 2주)마다 모든 피험자들을 추적조사할 것이다.
피험자 기준
피험자는 연구에 등록되기 위해 하기 기준을 충족시켜야 한다.
1. 피험자는 사전 동의서(ICD)에 서명할 때 18세 이상의 남성 또는 여성이다.
2. 피험자는 임의의 연구 관련 평가 또는 절차가 착수되기 전에 ICD를 이해해야 하고 ICD에 자발적으로 서명해야 한다.
3. 피험자는 연구 방문 일정 및 다른 프로토콜 요건을 지킬 의지가 있고 지킬 수 있어야 한다.
4. 진행된 절제 불가능한 고형 종양(소세포 폐암(SCLC) 및 다른 신경내분비 암종(NEC)을 포함함) 또는 비-호지킨 림프종(NHL)(미만성 B 대세포 림프종(DLBCL) 및 무통성 비-호지킨 림프종(iNHL))의 조직학적 또는 세포학적 확인을 받은 피험자.
- 세계보건기구(WHO) 분류에 따른 적절한 병리학적 특징
- 신경내분비 마커(예를 들면, 시냅토파이신 또는 크로모그라닌 A)의 발현
- 수질 갑상선 암종(MTC) 피험자에 대한 정상 범위 초과의 혈청 전구-가스트린 방출 펩타이드(Pro-GRP) 또는 크로모그라닌 A(CgA) 또는 상승된 칼시토닌, 또는 췌장 또는 소장 NEC 피험자에 대한 상승된 판크레아스타틴(pancreastatin).
특정 유형의 NEC 종양에 대한 구체적인 추가 기준은 다음과 같다:
소세포 폐암(SCLC);
- 2015 WHO 분류에 따른 SCLC의 조직학적 또는 세포학적 확인; 또는
- 불특정 사례에서 Ki-67에 의해 입증된 바와 같이 SCLC를 암시하는 면역조직화학, 예컨대, AE1/AE3 양성 세포질 염색, NCAM(CD56) 양성, 크로모그라닌 양성, 시냅토파이신 양성, TTF1 양성 및 높은 증식 활성. 조합된 SCLC가 허용된다.
대세포 신경내분비 암종(LCNEC);
- 2015 WHO 분류에 따른 LCNEC의 조직학적 확인
- CD56, 크로모그라닌 또는 시냅토파이신에 대한 양성을 나타내는 10% 초과의 종양 세포를 보이는 면역조직화학. 조합된 LCNEC가 허용된다.
EGFR 돌연변이체 폐암의 신경내분비 변이체;
- 공지된 EGFR 돌연변이
- 종래 표피 성장 인자(EGFR) 억제제 사용 시 또는 후 진행
- 2015 WHO 분류에 따른 SCLC의 조직학적 또는 세포학적 확인
- 불특정 사례에서 Ki-67에 의해 입증된 바와 같이 SCLC를 암시하는 면역조직화학, 예컨대, AE1/AE3 양성 세포질 염색, NCAM(CD56) 양성, 크로모그라닌 양성, 시냅토파이신 양성, TTF1 양성 및 높은 증식 활성.
- 혈청 Pro-GRP 또는 CgA가 정상 범위를 초과하는 경우 적어도 30% 선암종 및 30% NEC를 가진, 혼합된 선신경내분비 암종(MANEC)을 가진 피험자는 자격이 있다.
수질 갑상선 암종(MTC);
- 절제 불가능한, 국소적으로 진행된 또는 전이성 유전성 또는 산발성 MTC의 미리 확인된 세포학적 또는 조직학적 진단
- 칼시토닌에 대한 양성 염색을 포함하는 MTC를 암시하는 면역조직화학
- 반데타닙(vandetanib) 및/또는 카보잔티닙(cabozantinib)을 사용한 종래 요법 후 문서화된 질환 진행
- 다른 병변이 이용될 수 없지 않은 한, 기준에서 석회화된 병변은 기준에서 표적 병변으로서 사용되어서는 안 된다.
- 정상 범위 초과의 칼시토닌 수준
신경내분비 전립선암(NEPC);
- 면역조직화학에 의해 뒷받침된, 전이성 전립선암, 및 소세포 또는 신경내분비 전립선암의 조직학적 진단 중 적어도 하나
- 전립선 선암종의 조직학적 진단, 및 신경내분비 마커(크로모그라닌, 시냅토파이신, CD56, 또는 신경 특이적 에놀라제(enolase)(NSE))에 대한 50% 초과의 IHC 염색
- PCWG3에 의해 정의된 전립선 특이적 항원(PSA) 진행의 부재 하에서 간 전이의 발생
- 순수한 신경내분비 또는 소세포 암종의 조직학적 증거를 가진 환자는 선행 안드로겐 제거 요법 또는 거세 수준의 테스토스테론을 제공받을 필요가 없으나, 그의 테스토스테론 상태는 연구의 지속시간 동안 유지되어야 한다. 다른 피험자는 수술적 또는 계속되는 의학적 거세를 받아야 하고 50 ng/㎗ 미만 또는 1.73 nmol/ℓ 미만의 기준 혈청 테스토스테론 수준을 가져야 한다.
신경내분비 췌장 암종;
-지지 면역화학에 의한 신경내분비 췌장 암종(Klimstra WHO 분류 2010)의 병리학적 진단
- 1 주기 1일째 날 전 12개월 이내에 방사선학적 질환 진행의 증거
- 1 주기 1일째 날 전 3개월 이내에 수용체-표적화된 방사성표지된 요법 부재
- 1 주기 1일째 날 전 4주 이내에 간 지향 요법의 부재
- 혈청 Pro-GRP 또는 CgA 또는 판크레아스타틴이 정상 범위를 초과하는 경우 혼합된 선암종을 가진 피험자는 자격이 있다.
신경내분비 간세포 암종(NEHCC)
- 지지 면역화학에 의해 조직학적으로 또는 세포학적으로 확인된 NEHCC
- 피험자가 문맥 고혈압을 가진 경우, 혈소판 카운트 ≥ 75 x 109/ℓ(≥ 75,000/mm3), 그렇지 않으면 ≥ 100 x 109/ℓ(≥ 100,000/mm3)
- 차일드 퍼(Child-Pugh) 점수 < 7(즉, 클래스 A 간 기능)
- BCLCC 진행된 단계 질환
- α-인터페론 및/또는 리바비린(ribavirin)의 마지막 용량으로부터 적어도 4주
- 진행성 또는 재발성 질환의 문서화와 함께 경피 에탄올 주사, 고주파 절제, 경동맥 색전술 또는 한냉요법으로부터 적어도 4주
- 반복 측정에 적합하고 종양내 동맥 향상을 보이는 삼중 상 조영 증강 간 컴퓨터 단층촬영(CT) 또는 자기 공명 영상화(MRI) 상에서 RECIST 1.1에 따른 간 또는 측정 가능한 질환 이외에 RECIST 1.1에 따른 측정 가능한 질환. 경계가 잘 표시되지 않는 병변 또는 간에서 비정형적 증강을 보이는 병변은 비-표적 병변으로서 기록되어야 한다.
- 선행 간 이식 부재.
- 수혈, 또는 내시경적 또는 수술적 시술을 요구하는, 이전 3개월 이내의 위장 또는 정맥류 출혈의 부재.
- 뇌병증의 이력 또는 현재 뇌병증의 부재.
- 현재 임상적으로 유의미한 복수(즉, 이뇨제에 의해 용이하게 제어되지 않음)의 부재.
다른 NEC, 예컨대, 메르켈 세포 암종, 신경내분비 대장암, 및 신경내분비 흑색종이 등록될 수 있다. 추가로, NEN G2(10 고배율 시야(HPF)당 유사분열 카운트 2 - 20 및/또는 3-20% Ki67 지수)는 소마토스타틴 유사체 및 종래 라파마이신의 포유동물 표적(mTOR) 억제제 둘 다를 사용한 선행 치료 시 또는 후 진행이 문서화된 경우 등록될 수 있다. 그러나, 병리학 및 면역화학은 신경내분비 요소 및 병리학적 진단을 확인해야 하고, 피험자는 정상 범위 초과의 혈청 전구-가스트린 방출 펩타이드(Pro-GRP) 또는 크로모그라닌 A(CgA)를 가져야 한다.
5. 피험자는 표준 항암 요법 시 또는 후 진행되었어야 하거나(또는 의학적 동반이환 또는 허용 불가능한 독성으로 인해 견딜 수 없었거나), 피험자를 위한 다른 승인된 통상적인 요법이 존재하지 않거나 허용 가능하지 않다.
6. 고형 종양을 가진 피험자는 RECIST 1.1에 따라 측정 가능한 질환의 적어도 하나의 부위를 갖고, NHL을 가진 피험자는 IWG 기준에 따라 측정 가능한 질환의 적어도 하나의 부위를 갖고, 신경내분비 간세포 암종(NEHCC)을 가진 피험자는 mRECIST에 따라 측정 가능한 질환의 적어도 하나의 부위를 가진다.
7. 피험자는 파트 B에서 의무적인 종양 생검(스크리닝 및 치료)에 동의한다. 안전하고 실현 가능할 때마다, 종양 부검은 파트 A에서 채취될 것이다.
8. 피험자는 0 또는 1의 동부 협력 종양학 그룹(ECOG) 수행 상태를 가진다.
9. 피험자는 하기 실험실 값을 가져야 한다:
- 7일(피험자가 페그필가스트림(pegfilgastrim)을 제공받은 경우 14일) 동안 성장 인자 지지 없이 절대 호중구 카운트(ANC) ≥ 1.5 x 109/ℓ.
- 헤모글로빈(Hgb) ≥ 10 g/㎗(≥ 100 g/ℓ 또는 > 6.2 mmol/ℓ).
- 7일 동안 수혈 없이 문맥 고혈압을 가진 NEHCC 피험자의 경우 혈소판 카운트(plt) ≥ 100 x 109/ℓ(NHL 피험자의 경우 ≥ 50 x 109/ℓ) 또는 ≥ 75 x 109/ℓ.
- 정상 범위 이내에 있거나 보충제에 의해 보정 가능한 혈청 칼륨 농도.
- 간 전이가 존재하는 경우 혈청 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(SGOT) AST/SGOT 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(SGPT) ALT/SGPT ≤ 3.0 x 정상의 상한(ULN) 또는 ≤ 5.0 x ULN.
- 혈청 총 빌리루빈 ≤ 1.5 x ULN.
- 피험자는 3.5 g/㎗ 이상의 혈청 알부민을 가져야 한다.
간세포 암종(HCC)을 가진 피험자에 대한 적절한 간 기능은 하기 기능을 포함한다:
- 혈청 AST 및 ALT ≤ 5 x ULN
- 혈청 총 빌리루빈 ≤ 3 mg/㎗(≤ 51 μmol/ℓ)
- 혈청 알부민 ≥ 3.0 g/㎗
- 외생성 여과 마커, 예컨대, 이오헥솔(iohexol), 이눌린(inulin), 51Cr EDTA 또는 125I 이오탈라메이트(iothalamate)의 사용 시 혈청 크레아티닌 ≤ 1.5 x ULN, 또는 측정된 크레아티닌 제거율 ≥ 50 ㎖/분/1.73 m2.
- 정상 범위 이내의 프로트롬빈 시간(PT)(또는 국제 표준화된 비(INR)) 및 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간(APTT).
10. 가임 여성(FCBP)1은
- ICD에 서명한 때부터, 연구 전체에 걸쳐, 그리고 시험 화합물 또는 약학 조성물의 마지막 용량 후 최대 90일 동안 이성 접촉으로부터 진정한 자제에 전념해야 하거나(월 단위로 심사되어야 하고 원시 문서로 기록되어야 함), 적어도 2종의 효과적인 피임 방법들(경구, 주사 가능한 또는 이식 가능한 호르몬 피임제; 난관 결찰; 자궁내 장치; 살정제를 가진 장벽 피임제; 또는 정관절제수술된 파트너)을 사용하는 것에 동의해야 하고 이 방법들을 준수할 수 있어야 하고, 이 방법들 중 하나는 장벽 피임제이어야 하고; 시험 화합물 또는 약학 조성물을 시작하기 전 임상연구원에 의해 검증된 2종의 음성 임신 시험을 받아야 한다.
- 스크리닝 시 음성 혈청 임신 시험(적어도 25 mIU/㎖의 민감성).
- 연구 치료의 1 주기 1일째 날 전 72시간 이내에 음성 혈청 또는 소변 임신 시험.
- 시험 화합물 또는 약학 조성물의 마지막 용량 후 90일 동안 임신을 피해야 한다.
- 연구의 과정 동안 및 연구 치료의 종료일 후 계속되는 임신 시험에 동의해야 한다. 이것은 피험자가 이성 접촉으로부터의 진정한 자제를 실천한 경우에도 적용된다.
11. 남성은 성공적인 정관절제술을 받은 경우조차도 진정한 자제를 실천해야 하거나(월 단위로 심사되어야 함), 임신 여성 또는 FCBP와의 성적 접촉 동안 콘돔(라텍스 콘돔이 권장됨)을 사용하는 것에 동의해야 하고, ICD에 서명한 때부터 연구에 참여하는 동안, 투약 중단 동안, 그리고 시험 화합물 또는 약학 조성물의 투여 중단 후 적어도 90일 동안 임신을 피해야 할 것이다.
배제 기준:
하기 사항들 중 임의의 사항의 존재는 등록으로부터 피험자를 배제할 것이다:
1. 저등급(G1) 신경내분비 종양(고배율 시야(HPF)당 ≤ 2 및/또는 ≤ 2% Ki67 지수), 예컨대, 카르시노이드는 배제된다.
2. 피험자는 ICD에 서명하기 전 4주 또는 5 반감기(이들 중 더 짧은 기간) 이내에 (승인되었거나 임상시험 중인) 항암 요법을 제공받았다.
- 선행 니트로소우레아 또는 미토마이신의 경우 42일 이내
3. (2 등급 말초 신경병증 및 원형탈모증을 제외하고) 선행 전신 암 요법으로부터 비롯된 독성은 시험 화합물 또는 약학 조성물을 사용한 치료를 시작하기 전에 부작용에 대한 국립 암연구소(NCI) 일반 용어 기준(CTCAE) 1 등급 이하까지 해소되어야 한다.
4. 제1 용량 전 3개월 이내에 선행 ASCT 또는 회복되지 않은 피험자.
5. 표준 또는 감소된 강도 컨디셔닝을 이용한 선행 동종이계 줄기 세포 이식.
6. 피험자는 ICD에 서명하기 전 4주 이내에 주요 수술을 받았거나 2주 이내에 간단한 수술을 받았거나, 수술로부터 회복되지 않았다.
7. 피험자는 ICD에 서명하기 전 4주 이내 또는 완화적 골 방사선요법(단일 분획)의 경우 2주 이내에 임의의 방사선 치료를 완료하였다. 25% 초과의 골수세포형성 BM 방사선을 받은 피험자는 이 연구에 등록하는 것이 허용되지 않는다.
8. 피험자는 의학적 관리에도 불구하고 NCI CTCAE 2 등급 이상의 흡수불량 증후군(예컨대, 셀리악 스프루 또는 염증성 장 질환), 또는 시험 화합물 또는 약학 조성물의 흡수에 영향을 미칠 수 있는 임의의 다른 유의미한 GI 장애으로 인한 지속적인 설사를 가진다.
9. 증상을 보이거나 제어되지 않는 궤양(위 또는 십이지장)을 가진 피험자, 특히 천공 및 GI 관 출혈의 이력 및/또는 위험을 가진 피험자.
10. 제1 용량 전 4주 이내에 CTCAE 2 등급 초과의 임의의 출혈/출혈 사건 또는 1 티스푼 초과의 객혈을 가진 피험자.
11. 증상을 보이거나, 치료되지 않았거나 불안정한 중추신경계(CNS) 전이.
- CNS 전이에 대해 전체 뇌 방사선 또는 정위 방사선수술로 최근에 치료받은 피험자는 1 주기 1일째 날로부터 적어도 4주 전에 요법을 완료해야 하고, 방사선요법을 완료한 지 4주 이상 후 안정한 또는 개선된 전이를 입증하는 추적조사 뇌 CT 또는 MRI를 받아야 한다(후자는 스크리닝 평가의 부분으로서 수득됨).
- 피험자는 증상을 보이지 않아야 하고 적어도 4주 동안 스테로이드를 복용하지 않거나 안정한 용량의 스테로이드를 복용해야 한다(≤10 mg/일 프레드니손 당량).
12. SCLC와 함께, 간질성 폐 질환(ILD)의 이력, 또는 경구 또는 정맥내(IV) 스테로이드를 요구하는 폐렴의 이력을 가진 피험자.
13. 피험자는 공지된 증상을 보이는 급성 또는 만성 췌장염을 가진다.
14. 피험자는
- 다중-게이팅 획득 스캔(MUGA) 또는 심초음파검사(ECHO)에 의해 확인될 때 45% 미만의 좌심실 구축률(LVEF);
- 완전한 좌각 또는 이섬유속 차단;
- 선천성 긴 QT 증후군;
- 지속적인 또는 임상적으로 유의미한 심실 부정맥 또는 심방 세동;
- 스크리닝 ECG 상에서의 QTcF ≥ 480 msec(삼중 기록물의 평균); 및
- 화합물 A를 시작하기 전 6개월 이내에 불안정한 협심증 또는 심근경색
중 어느 하나 이상을 포함하는 손상된 심장 기능 또는 임상적으로 유의미한 심장 질환을 가진다.
15. 피험자는 다른 임상적으로 유의미한 심장 질환, 예컨대, 치료를 요구하는 울혈성 심부전 또는 제어되지 않는 고혈압(혈압 ≥ 160/95 mm Hg)을 가진다.
16. 피험자는 임신한 여성 또는 간호사이다.
17. 피험자는 공지된 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염을 가진다.
18. 피험자는 공지된 만성 활성 B형 또는 C형 간염 바이러스(HBV, HCV) 감염을 가진다.
- HBV 백신접종으로 인해 혈청양성을 나타내는 피험자는 자격이 있다.
- 활성 바이러스 감염을 갖지 않고 HBV 재활성화에 대한 적절한 예방 하에 있는 피험자는 자격이 있다.
- HCC를 가진 피험자는 상기 기준으로부터 면제된다.
19. 항응고제(예를 들면, 와파린, 저분자량 헤파린, 인자 Xa 억제제, 트롬빈 길항제)의 만성 치료적 투약으로 계속 치료를 받는 피험자. 선행 PE 및 DVT를 받은 피험자의 경우 카테터 유지 및 단기간 예방을 위한 저용량 저분자량 헤파린은 임상연구원에 의한 신중한 고려 하에 허용된다.
20. 피험자는 적극적인 계속되는 전신 치료를 요구하는, 공존하는 제2 암의 이력을 가진다.
21. 피험자는 피험자가 연구에 참여하는 것을 방해하거나(또는 준수를 위태롭게 하거나), 그/그녀가 연구에 참여하고자 하는 경우 피험자를 허용 불가능한 위험에 놓이게 할 임의의 유의미한 의학적 상태(예를 들면, 활성 또는 제어되지 않는 감염 또는 신장 질환), 실험실 비정상 또는 정신병을 가진다.
22. 피험자는 연구로부터의 데이터를 해석하는 능력에 혼란을 주는 임의의 상태를 가진다.
파트 A - 용량 상승
최소 3명의 피험자들이 각각의 용량 수준에서 등록할 것이다. 초기 화합물 A 용량은 주당 1회 1.25 mg일 것이다. EWOC를 이용하는 BLRM은 이용 가능한 종래 안전성 정보를 포함할 것이고 각각의 새로운 피험자 코호트가 1 주기를 완료한 후 모델 파라미터를 업데이트할 것이다. 다음 용량에 대한 결정은 BLRM을 이용한 위험 평가의 계산 및 이용 가능한 안전성(즉, DLT 및 비-DLT 안전성 데이터), PK, PD 및 예비 효능 정보를 기반으로 SRC에 의해 내려질 것이다. 또한, 관련 비임상 데이터(예를 들면, GLP(임상시험 실시기준) 독성 연구, 이종이식편 모델로부터의 생체내 약리학 등)가 평가에 사용될 수 있다. 통계학적 방법의 세부내용은 부록 E에서 제공된다.
모든 결정 시점에서, BLRM은 관찰된 DLT를 기반으로 용량 증가의 변경을 허용하나; 다음 코호트를 위한 용량은 이전 용량으로부터의 100% 증가를 초과하지 않을 것이다. MTD는 화합물 A로 치료받은 집단(집단으로부터의 샘플이 아님)의 33% 미만이 이 용량으로 치료받은 적어도 6명의 평가 가능한 피험자들을 이용한 제1 주기에서 DLT로 고통받을 때 사용된 최고 용량이다. SRC는 각각의 코호트에 대한 화합물 A 용량에 관한 최종 결정을 내릴 것이다.
용량 상승 동안, 화합물 A 용량은 하기 조건을 충족시킨 후 MTD로서 선언될 수 있다:
Figure 112019023638871-pct00193
적어도 6명의 평가 가능한 피험자들이 상기 용량으로 치료받았고,
Figure 112019023638871-pct00194
DLT 비율이 상기 용량에서 표적 구간(16-33%) 내에 놓일 사후 확률이 60%를 초과하거나, 사후 확률이 60%에 근접하나 이를 초과하지 못하기 때문에 MTD 추정치의 정확성을 보장하기 위해 충분한 수의 피험자들이 연구에 참여하였고,
Figure 112019023638871-pct00195
용량이 BLRM에 따라 제안되고 SRC에 의해 승인된다.
용량 상승은 MTD를 확립하지 않으면서 새로 발생한 안전성 우려를 기반으로 임의의 시점에서 SRC에 의해 종결될 수 있다. SRC는 임상연구원(및/또는 지정된 대표), 의뢰자의 연구 의사, 안전성 의사, 연구 통계학자 및 연구 관리자를 포함할 것이다. 특정 임무 참석자는 연구 약물동력학자, 연구 바이오마커 과학자 및 연구 임상 과학자를 포함할 수 있다. 필요에 따라, SRC는 다른 내부 전문가 및 외부 전문가와 상담할 수 있다.
SRC 회의에서 내려진 모든 결정들은 (SRC 회의록을 통해) 공식적으로 문서화될 것이고 서면으로 모든 장소로 순환될 것이다. 용량 상승 부재, 단계적 축소, 투약 일정의 변화, 또는 기존 용량 코호트의 확장은 작성된 통지서가 각각의 SRC 결정의 모든 참여 장소로 보내지기 전에 시작되지 않을 것이다.
용량 코호트 내의 추가 피험자, 보다 더 높은 용량 코호트, 중간 용량 코호트, 보다 더 작은 용량 증가, 대안적 투약 일정(예를 들면, 2주마다 1회)을 평가할 지에 대한 결정 또는 MTD를 선언할 지에 대한 결정도 BLRM 평가 및 이들의 이용 가능한 안전성(즉, DLT 및 비-DLT 데이터), PK, PD 및 예비 효능 정보 검토를 기반으로 SRC에 의해 내려질 것이다. 최종 결정은 SRC에 의해 내려질 것이다.
제1 용량이 용량 상승 동안 임의의 코호트에게 투여된 후, 각각의 코호트 내의 피험자는 다음 용량 코호트가 시작할 수 있기 전에 28일(1 주기, DLT 시간대) 동안 관찰된다. 하루에 1명 이하의 피험자가 소정의 용량 상승 코호트에 등록될 것이다. DLT에 대해 평가될 수 있는 피험자는
Figure 112019023638871-pct00196
DLT를 경험하지 않으면서 1 주기 동안 총 계획된 용량 양의 75% 이상의 화합물 A를 제공받았거나,
Figure 112019023638871-pct00197
적어도 1회 용량의 화합물 A를 제공받은 후 DLT를 경험한
피험자로서 정의된다.
DLT에 대해 평가받을 수 없는 피험자는 대체될 것이다.
초기 용량 수준 동안, 재발된 및 난치성 고형 종양 및 NHL을 가진 피험자는 1 주기에서 2 이상의 등급의 연구 약물 관련 독성의 이차 발생까지 등록될 것이다. 그 다음, 등록은 전구-가스트린 방출 펩타이드(Pro-GRP) 또는 크로모그라닌 A(CgA) 또는 판크레아스타틴(췌장 및 소장 NEC의 경우) 또는 칼시토닌(수질 갑상선 암종(MTC)의 경우)을 분비하는 소세포 폐암(SCLC) 및 다른 신경내분비 암종(NEC)을 가진 피험자로 제한될 것이다.
피험자내 용량 상승은 DLT 평가 기간 동안 허용되지 않을 것이나; 3 이상의 주기에서, 그 자신의 할당된 용량의 화합물 A에 대한 내약성을 나타내는, 질환 진행의 증거를 갖지 않는 피험자는 (임상연구원의 재량으로 의뢰자의 연구 의사와 상담하고 동의를 얻은 후) 이 연구에서 적어도 하나의 피험자 코호트가 적절한 내약성을 나타내는 것으로 확인된 최고 용량 수준까지 상승할 수 있다(과다복용 위험은 BLRM 평가에 기반을 둘 때 25% 미만이다).
파트 B-코호트 확장
용량 상승의 완료 후(파트 A), 선택된 종양 코호트는 각각 대략 20명의 평가 가능한 피험자들을 가진 확장 단계(파트 B)에 등록될 수 있다. 확장은 파트 A로부터의 이용 가능한 안전성, PK, PD 및 효능 데이터의 검토를 기반으로, 용량 상승 단계에서 확립된 MTD 및 일정, 및/또는 대안적 내약 용량 및 일정으로 일어날 수 있다. SRC는 코호트 확장을 위해 관심 있는 용량 및 일정을 선택할 것이다. 하나 이상의 투약 섭생법이 코호트 확장을 위해 선택될 수 있다. SRC는 연구 전체에 걸쳐 안전성 데이터를 정기적으로 계속 검토할 것이고 적절할 경우 연구 계속 및 용량 변경을 제안할 것이다.
연구는 국제 규제조화 합의체(ICH)/임상시험 실시기준(GCP)에 따라 수행될 것이다.
연구 집단
재발된 및/또는 난치성 고형 종양(NEC가 풍부함) 및 NHL(DLBCL 및 iNHL)을 가진 18세 이상의 남성 및 여성이 연구에 등록될 것이다.
연구의 길이
등록은 완료하기 위해 대략 30개월(용량 상승을 위해 12개월 내지 18개월, 및 확장을 위해 9개월 내지 12개월)이 소요될 것으로 예상된다. 적극적 치료 및 치료 후 추적조사의 완료는 추가 4개월 내지 28개월이 소요될 것으로 예상된다. 전체 연구는 대략 5년 동안 지속될 것으로 예상된다.
시험의 종료일은 프로토콜에 미리 특정된 바와 같이 치료 후 추적조사를 완료하기 위한 마지막 피험자의 마지막 방문일, 또는 일차, 이차 및/또는 탐색 분석을 위해 요구된 마지막 피험자로부터의 마지막 데이터 점의 수령일(이들 중 더 늦은 날)로서 정의된다.
연구 치료
셀진 코포레이션(Celgene Corporation)(셀진(Celgene))은 관련 국가 보건 관청의 규정에 따라 임상시험 사용을 위해 적절히 표지된 임상시험 제품, 즉 경구 투여용 화합물 A(0.50 mg, 0.75 mg 및 2.00 mg의 용량 강도로 활성 약학 성분만을 함유함) 캡슐을 공급할 것이다.
임상적으로 유의미한 질환 진행의 증거, 허용 불가능한 독성, 또는 피험자/의사의 철회 결정이 있는 경우 이러한 치료는 중단될 수 있다.
핵심 효능 평가의 개요
피험자는 6 주기까지 2개 주기 후마다 효능에 대해 평가받을 것이고, 그 후 3개 주기 후마다 효능에 대해 평가받을 것이다. 질환 진행, 새로운 항암 요법의 시작, 또는 전체 연구로부터의 동의의 철회 이외의 이유로 치료를 중단한 모든 피험자들은 새로운 전신 항암 요법의 진행 및/또는 시작까지 추적될 것이다.
종양 반응은 임상연구원에 의해 확인될 것이다. 고형 종양의 경우, 평가는 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST 1.1)(Eisenhauer, 2009)에 기반을 둘 것이다. NHL의 경우, 평가는 악성 림프종에 대한 국제 작업 그룹 개정 반응 기준에 기반을 둘 것이다. [18F] 플루오로데옥시글루코스(FDG) 양전자 방출 단층촬영(PET) 또는 FDG PET/CT 영상화가 FDG 친화성 종양을 가진 피험자에서 완전한 반응을 확인하기 위해 요구된다. 신경내분비 전립선 암종(NEPC)의 경우, 반응 평가는 PCWG3 기준에 기반을 둘 것이다. 신경내분비 간세포 암종(NEHCC)의 경우, 반응은 mRECIST 기준에 기반을 둘 것이다. 신경내분비 암종은 기준에서 평가되고 연구 도중에 평가된 높은 수준의 신경내분비 마커를 추가로 가질 것이다.
핵심 안전성 평가의 개요
이 연구를 위한 안전성 변수는 부작용, 안전성 임상 실험실 변수, 12-리드 심전도, 동부 협력 종양학 그룹 수행 상태, 좌심실 구축률 평가, 신체검사, 활력 징후, 연구 치료에의 노출, 병행 약물의 평가, 및 가임 여성에 대한 임신 시험을 포함한다. 화합물 A의 PK 프로파일은 일련의 혈액 채취물들로부터 확인될 것이다.
핵심 약동학적 평가의 개요
화합물 A에 대해 측정된 혈장 PK 파라미터는 최대 관찰된 혈장 농도(Cmax), 혈장 농도 시간 곡선하 면적(AUC), 최대 혈장 농도까지의 시간(Tmax), 말기 반감기(t1/2), 겉보기 제거율(CL/F) 및 겉보기 분포 부피(Vz/F)일 것이다. 적절한 경우, 파트 B 또는 2 상 연구를 위한 투약 섭생법의 확인에 도움을 주기 위해 노출-반응 분석을 수행할 수 있다.
통계학적 방법
이 연구의 일차 목적은 MTD의 측정을 포함하는, 화합물 A를 사용한 치료의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. MTD를 추정하기 위한 분석 방법은 EWOC 원칙에 의해 안내된 BLRM이다.
통계학적 분석은 필요하거나 적용 가능한 경우 용량 수준(파트 A) 및 종양 코호트(파트 B)에 의해 수행될 것이다. 모든 분석은 설명적인 성격을 띠고 있을 것이다. 안전성 데이터의 모든 요약은 임의의 화합물 A를 제공받는 피험자(치료된 집단)를 이용함으로써 수행될 것이다.
배치, 인구통계학적 및 기준 특성, 노출, 효능, 안전성, PK 및 PD에 대한 연구 데이터가 요약될 것이다. 범주형 데이터는 빈도 분포(피험자의 수 및 퍼센트)별로 요약될 것이고, 연속 데이터는 기술 통계자료(평균, 표준 편차, 중간치, 최소치 및 최대치)별로 요약될 것이다.
치료 도중에 새로 발생한 부작용(TEAE)은 부작용 등급에 대한 국립 암연구소 일반 용어 기준에 의해 요약될 것이다. TEAE의 빈도는 규제 활동 시스템 기관 클래스 및 선호된 용어에 대한 의학 사전에 의해 표로 작성될 것이다. 화합물 A의 중단으로 이어지는 TEAE인 3 또는 4 등급 TEAE, 연구 약물 관련 TEAE, 및 SAE는 따로 표로 작성될 것이다. 선택된 실험실 분석물, 활력 징후, 12-리드 ECG 및 ECHO/MUGA 스캔에서 기준으로부터의 변화가 요약될 것이다. 모든 데이터는 피험자별 목록으로 제공될 것이다.
파트 A에 대한 일차 효능 변수는 임상 이익률(CBR)이다. CBR은 완전한 반응(CR), 부분적 반응(PR) 및 지속 가능한 안정한 질환(SD)(4개월 이상 지속된 SD)의 (임상연구원에 의해 평가된) 종양 반응으로서 정의된다. CBR의 점 추정치 및 95% 신뢰구간이 보고될 것이다. 범주형 변수에 대한 빈도 표 작성, 또는 사상 변수까지의 시간에 대한 기술 통계자료를 사용하여 객관적인 반응률(가장 우수한 반응이 완전한 반응 또는 부분적 반응인 피험자의 퍼센트로서 정의됨), 반응/안정한 질환의 지속시간, 진행까지의 시간, 진행 부재 생존 및 전체 생존을 요약할 것이다. 치료된 집단 및 효능 평가 가능한 집단(기준 질환 평가를 받은 피험자, 1 주기에서 할당된 용량의 적어도 75%, 및 연구 도중에 질환 평가를 받은 피험자)에 대한 효능 분석을 반복할 것이고, 이때 치료된 집단을 사용하여 수득한 결과는 일차 결과로서 간주될 것이다.
파트 A 용량 상승 동안, 대략 50명의 피험자들이 등록될 것이다. 파트 B 용량 확장 동안, 각각의 종양 코호트에 대한 적어도 14명의 효능 평가 가능한 피험자들이 초기에 생길 것이다. 반응자 또는 4개월 이상의 SD가 관찰되는 경우 종양 코호트는 대략 20명의 피험자들까지 확장될 것이다.
연구 목적
일차 목적(들)
연구의 일차 목적은 다음과 같다:
Figure 112019023638871-pct00198
화합물 A의 안전성 및 내약성을 측정하는 것.
Figure 112019023638871-pct00199
화합물 A의 최대 내약 용량(MTD) 및/또는 제안된 2 상 용량(RP2D)을 정의하는 것.
이차 목적(들)
이차 목적은 다음과 같다:
Figure 112019023638871-pct00200
화합물 A의 예비 효능에 대한 정보를 제공하는 것.
Figure 112019023638871-pct00201
화합물 A의 약동학(PK)을 특징규명하는 것.
탐색 목적(들)
탐색 목적은 다음과 같다:
Figure 112019023638871-pct00202
말초 혈액 및, 이용 가능한 경우, 종양 샘플에서 유전자 발현에 대한 화합물 A의 PD 효과를 평가하는 것.
Figure 112019023638871-pct00203
NEC 및 SCLC 피험자로부터의 혈청에서 분비된 신경펩타이드(예컨대, Pro-GRP, CgA 또는 칼시토닌) 수준에 대한 화합물 A의 PD 효과를 평가하는 것.
Figure 112019023638871-pct00204
화합물 A 용량, 혈장 노출 및 선택된 임상 종점(예를 들면, 독성, 예비 활성 및/또는 바이오마커의 측정치) 사이의 관계를 탐색하는 것.
Figure 112019023638871-pct00205
종양 샘플(이용 가능한 경우)에서 기준, 치료 계속 및/또는 유전자 발현의 변화와 임상 반응 사이의 관계를 탐색하는 것.
Figure 112019023638871-pct00206
충분한 데이터가 이용될 수 있는 한, 혈장에서 화합물 A의 주요 대사물질을 특징규명하는 것.
Figure 112019023638871-pct00207
탐색 목적으로부터의 데이터는 SAP(통계학적 분석 계획)에 따라 임상 연구 보고서에 포함될 수 있다.
연구 종점
Figure 112019023638871-pct00208
연구 디자인
연구 화합물 A-ST-001은 재발된 및/또는 난치성 고형 종양(NEC를 포함함) 및 NHL을 가진 피험자에서의 화합물 A의 개방-표지 1a 상 용량 상승 및 확장 FIH 임상 연구이다. 연구의 용량 상승 파트(파트 A)는 화합물 A의 MTD를 추정하기 위해 화합물 A의 경구 용량을 상승시키는 것을 조사할 것이다. 과다복용을 제어하면서 상승시키는(EWOC)(Babb, 1998; Neuenschwander, 2008) 원칙을 이용하는 베이지안 로지스틱 회귀 모델(BLRM)은 화합물 A 용량 상승 결정을 안내하는 것을 도울 것이고, 이때 최종 결정은 SRC에 의해 내려진다. 확장 파트(파트 B)는 RP2D를 더 정의하기 위해 각각 대략 20명의 평가 가능한 피험자들의 선택된 확장 코호트에서 MTD 이하의 용량으로 투여된 화합물 A의 안전성 및 효능을 더 평가할 것이다. 코호트 확장(파트 B)을 위해 하나 이상의 투약 섭생법 및/또는 질환 서브세트가 선택될 수 있다. 파트 A 및 B는 3개의 기간들로 구성될 것이다: 스크리닝, 치료 및 추적조사 기간(도 37 참조).
연구는 인간 사용을 위한 의약품 등록을 위한 기술적 요건의 국제 규제조화 합의체(ICH)/임상시험 실시기준(GCP) 및 적용 가능한 규제 요건에 따라 수행될 것이다.
피험자에 대한 연구 지속시간
등록은 완료하기 위해 대략 30개월(용량 상승을 위한 12개월 내지 18개월 및 확장을 위한 9개월 내지 12개월)이 소요될 것으로 예상된다. 적극적 치료 및 치료 후 추적조사의 완료는 추가 4개월 내지 28개월이 소요될 것으로 예상된다. 전체 연구는 대략 5년 동안 지속될 것으로 예상된다.
시험 종료일
시험의 종료일은 프로토콜에 미리 특정된 바와 같이 치료 후 추적조사를 완료하기 위한 마지막 피험자의 마지막 방문일, 또는 일차, 이차 및/또는 탐색 분석을 위해 요구된 마지막 피험자로부터의 마지막 데이터 점의 수령일(이들 중 더 늦은 날)로서 정의된다.
절차에 대하여, 프로토콜에 대한 질문은 의료 모니터 또는 피지명자에게 향해져야 할 것이다. 연구에 등록된 각각의 피험자에 대해 수행된 절차는 표 34에 요약되어 있다:
[표 34]
Figure 112019023638871-pct00209
Figure 112019023638871-pct00210
Figure 112019023638871-pct00211
Figure 112019023638871-pct00212
이하에 또는 부작용 표(표 34 참조)에 달리 특정되어 있지 않은 한, 모든 연구 방문은 ± 3일 시간대를 가질 것이다. 달리 특정되어 있지 않은 한, 모든 실험실 혈액 샘플들(예를 들면, PK 샘플)은 투약 전에 채취되어야 한다.
연구 절차는 원시 문서 및 전자 사례 보고서 양식(eCRF)으로 기록되어야 한다. 피험자가 스크리닝을 통과하지 못한 경우, 데이터베이스 지시에 따라 최소한의 정보가 eCRF 상에 문서화될 것이다.
스크리닝 시간대는 화합물 A의 제1 용량을 투여하기 28일(± 3일) 전에 시작한다. 수행된 절차 및 일정에 대한 상세한 정보에 대해서는 이 단락의 표 34를 참조한다.
프로토콜에 대한 포기는 임의의 환경 하에서 이 시험의 수행 동안 허용되지 않을 것이다.
안전성 실험실 분석은 국소적으로 수행될 것이다. 스크리닝 실험실 값은 피험자 적격성을 입증해야 하나, 필요하다면 스크리닝 시간대 이내에서 반복될 수 있다.
ICD는 스크리닝 방문 시 자격을 갖춘 연구 직원에 의해 모든 피험자들에게 시행될 것이다. 임의의 다른 연구 절차를 시작하기 전에 피험자 및 관리 직원은 ICD에 서명하고 날짜를 기입해야 하고, 이의 완료는 원시 문서 및 eCRF로 문서화되어야 한다. 모든 스크리닝 시험 및 절차는 표 34에 표시된 일정에 따라 화합물 A의 제1 용량을 투여하기 전 28일(± 3) 이내에 완료되어야 한다.
사전 동의를 얻은 후, 스크리닝에서 하기 절차들이 수행될 것이다:
Figure 112019023638871-pct00213
포함 및 배제 기준은 스크리닝 시 평가될 것이고 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00214
피임 상담: 자격을 갖춘 건강관리 전문가는 피험자의 피임 상담 특유의 요건 면에서 셀진 또는 피지명자에 의해 훈련될 것이다. 일단 훈련되면, 건강관리 직원은 피험자가 출산 제어의 이용을 포함하는 모든 요건들을 준수하고 피험자가 화합물 A와 관련된 위험을 이해하도록 화합물 A의 투여 전에 피험자와 상담할 것이다.
Figure 112019023638871-pct00215
의학적 이력, 종양학적 이력 및 수술 이력, 및 인구통계학적 데이터(각각의 피험자의 출생일, 성별, 인종 및 민족성을 포함함)는 현지 규정에 따라 스크리닝 동안 수집될 것이다. 종양학적 이력은 일차 진단 및 날짜, 요법 및 반응의 상세한 이력을 포함할 것이다.
Figure 112019023638871-pct00216
선행 약물, 병행 약물 및 절차에 대한 정보가 수집될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00217
상호작용 반응 기술 시스템(IRT)에의 등록.
Figure 112019023638871-pct00218
부작용 모니터링.
Figure 112019023638871-pct00219
측정된 신장 및 체중
Figure 112019023638871-pct00220
평가된 활력 징후.
Figure 112019023638871-pct00221
신체검사(원시 문서로만 문서화됨) 및 ECOG 수행 상태.
o NHL을 가진 피험자의 경우, 림프절의 측정치, 및 비장 및/또는 간의 임의의 확장의 문서화가 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00222
B 증상 평가(NHL 피험자만): B 증상은 다른 감염의 증거 없이 2주 이상 동안 발열(>100.5℉ 또는 38℃), 감염의 증거 없이 1개월 초과의 기간 동안 식은 땀, 및 이전 6개월 이내에 10% 초과의 체중 손실이다.
Figure 112019023638871-pct00223
12-리드 ECG는 화합물 A의 제1 용량을 투여하기 72시간 이상 전에 삼중으로 수행될 것이고, 이때 결과는 적격성 기준을 충족시키기 위해 투약 전에 중심 리드로부터 제공받고 평가될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00224
좌심실 구축률(LVEF) 평가.
Figure 112019023638871-pct00225
모든 가임 여성들에 대한 임신 시험. 적절한 피임 방법 및 태아 노출의 잠재적 위험이 스크리닝 동안 피험자와 논의될 것이다. 가임 여성을 위한 이중 피임 방법(이들 중 하나는 장벽 방법이어야 함)(예를 들면, 경구, 주사 가능한 또는 이식 가능한 호르몬 피임제; 자궁내 장치; 살정제를 가진 장벽 피임제; 또는 정관절제수술된 파트너) 및 남성을 위한 단일 피임 방법(콘돔)이 ICD에 서명한 때부터 (용량 중단을 포함하는) 연구 전체에 걸쳐 이용되어야 하고 화합물 A의 마지막 용량 후 90일 동안 이용되어야 한다. 이것은 원시 문서로 문서화될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00226
임상 실험실 시험은 화합물 A의 제1 용량 전 14일 이내에 완료되어야 한다.
Figure 112019023638871-pct00227
효능/종양 평가.
Figure 112019023638871-pct00228
(제1 용량의 14일 이내에) 스크리닝 시 채취될 골 마커(N-텔로펩타이드 및 골 특이적 알칼리성 포스파타제).
Figure 112019023638871-pct00229
신경내분비 및 종양 마커는 화합물 A의 제1 용량 전에 완료되어야 한다.
- SCLC - Pro-GRP 및 CgA
- NEC - Pro-GRP 및 CgA
- NEPC - PSA, Pro-GRP 및 CgA
- NEHCC - 알파 페토단백질(AFP), Pro-GRP 및 CgA
- MTC - CEA, 칼시토닌, Pro-GRP 및 CgA
- NE 췌장암 - Pro-GRP, CgA 및 판크레아스타틴
- 다른 NEC - Pro-GRP 및 CgA
- 적절한 경우 다른 종양 마커, 즉 난소암에 대한 CA125
Figure 112019023638871-pct00230
새로운 종양 생검
- 기록보관 종양 조직(FFPE) 채취는 스크리닝 동안 새로운 생검이 채취되지 않는 경우에만 의무적이다.
Figure 112019023638871-pct00231
HCC 피험자의 경우에만:
- AFP
- HBsAg, 항-HBS, 항-HBc 및 항-HCV(스크리닝만).
- HBsAg, 총 HBcAb 및/또는 HBcAb IgM이 양성인 경우, B형 간염 바이러스 존재량의 측정(PCR에 의한 HBV DNA 정량).
- HBV에 대한 적절한 항바이러스제를 사용한 항바이러스 요법의 확인은 양성 B형 간염 표면 항원인 HBcAb IgM 및/또는 바이러스 존재량을 가진 피험자에서 요구된다 - 적절한 제1선 치료제는 엔테카비르(entecavir), 테노포비르(tenofovir) 및 라미부딘(lamivudine)을 포함한다(라미부딘은 보다 높은 내성률을 가진다는 것을 주목한다).
- 양성 HBV 바이러스 존재량, HBcAb IgM 및/또는 HBsAg를 가진 피험자는 이미 간 전문가의 관리 하에 있지 않은 경우 간 전문가에게 문의해야 한다.
방문 및 평가는 표 34에 표시되어 있다. 보다 더 빈번한 방문이 임상적으로 표시되지 않은 한, 6개 주기의 치료를 완료하고 계속 연구 약물을 복용하는 피험자만이 각각의 후속 주기(6 주기 이상)의 1일째 날(± 3일)에 수행된 진료실 방문/평가를 받을 것이 요구된다.
피험자가 ICD에 서명한 때 시작되어, 연구 전체에 걸쳐 화합물 A의 마지막 용량 후 28일까지 착수되거나 수행된 모든 병행 약물 및 절차는 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다.
부작용 및 심각한 부작용(SAE)은 피험자가 ICD에 서명한 때부터 화합물 A의 마지막 용량 후 28일까지 기록될 것이다.
AE를 겪는 피험자는 임상연구원에 의해 결정되는 관련 임상 평가 및 실험실 검사에 의해 모니터링될 것이다. 계속되는 AE에 대한 해소 날짜를 문서화하고자 하는 모든 시도가 행해질 것이다. AE는 eCRF 및 피험자의 원시 문서의 AE 페이지에 기록될 것이다. 피부 발진의 사진은 가능할 때마다 수득되어야 하고 익명으로 처리되어야 하고 향후 검색을 위해 적절하게 저장되어야 한다.
피험자의 체중은 표 34에 나열된 방문 시 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다.
활력 징후는 체온, 혈압, 맥박수 및 호흡수(폐에 종양을 가진 피험자의 경우에만)를 포함하고, 표 34에 기재된 바와 같이 안전성 모니터링을 위해 다양한 시점들에서 연구 동안 기록될 것이다.
기록된 측정치는 원시 문서 및 eCRF에서 포착될 것이다.
완전한 신체검사 및 동부 협력 종양학 그룹 수행 상태(ECOG PS; 부록 D 참조)는 표 34에 나열된 방문 시 수행될 것이다. 이들 둘 다에 대한 결과는 원시 문서로 기록될 것이다. ECOG PS에 대한 결과는 eCRF 상에서도 수집될 것이다.
신체검사 소견은 정상 소견 또는 비정상 소견으로서 분류될 것이다. 비정상인 경우, 비정상 및 임상적 중요성의 설명이 원시 문서로 제공될 것이다. 기준으로부터의 임상적으로 유의미한 변화는 eCRF의 AE 단락에 기록될 것이다.
NHL을 가진 피험자의 경우, 림프절의 측정치, 및 비장 및/또는 간의 임의의 확장의 문서화는 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다.
NHL을 가진 피험자의 경우, B 증상 평가는 표 13에 나열된 방문 시 수행될 것이고, 결과는 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다.
B 증상은 다른 감염의 증거 없이 2주 이상 동안 발열(>100.5℉ 또는 38℃), 감염의 증거 없이 1개월 초과의 기간 동안 식은 땀, 및 이전 6개월 이내에 10% 초과의 체중 손실이다.
삼중 표준 12-리드 심전도(ECG)는 표 34에 나열된 방문 시 기록될 것이다. 12-리드 ECG 및 채혈이 동일한 공칭 시간 동안 예정되어 있는 경우, 12-리드 ECG는 임의의 채혈 전에 수집되어야 한다. 12-리드 ECG(박동, 심실 박동수, PR 간격, QRS 복합체, QT 간격 및 QTcF 간격을 보고하는 25 mm/sec의 12-리드)는 피험자가 적어도 5분 동안 누운 자세로 있은 후 수행될 것이다.
삼중 ECG는(2 ± 1분 간격 이내에 3회 기록)는
Figure 112019023638871-pct00232
스크리닝,
Figure 112019023638871-pct00233
1 주기,
- 1일째 날: 투약 전(투약 전 30분 이내), 및 투약 후 2시간, 4시간, 8시간 및 24시간(± 10분),
- 8일째 날, 15일째 날 및 22일째 날: 투약 전(투약 전 30분 이내) 및 투약 후 4시간(± 10분),
Figure 112019023638871-pct00234
2 주기 이상
- 1일째 날: 투약 전(투약 전 30분 이내)
에서 수행될 것이다.
단일 ECG는 EOT 방문 시 수행될 것이다.
대안적 투약 일정의 경우, 1 주기 15일째 날 ECG는 1 주기에서 화합물 A 투약 마지막 날에 수행될 것이다.
임상연구원은 그의 ECG 결과 해석을 기반으로 즉시 임상적 결정을 내릴 것이고 eCRF로 그의 전체 ECG 평가를 제공할 것이다. 기준으로부터의 임상적으로 유의미한 변화는 eCRF의 AE 단락에 기록될 것이다.
ECG 출력물도 확정적 분석 및 해석을 위해 중앙 ECG 실험실에 업로딩될 것이다.
좌심실 구축률(LVEF)(다중-게이팅 획득 스캔[MUGA] 또는 심초음파검사[ECHO])은 모든 피험자들에서 스크리닝 시 수행될 것이다. 추적조사 평가는 임상적으로 표시된 바와 같이 수행되어야 한다. 추적조사 평가는 스크리닝 평가 시 이용된 절차와 동일한 절차를 이용해야 한다. 임상적으로 유의미한 감소는 LVEF의 20% 이상의 절대 감소 또는 45% 미만까지의 하락으로서 정의된다.
가임 여성(FCBP)은
Figure 112019023638871-pct00235
자궁절제술 또는 양측 난소절제술를 받지 않았고,
Figure 112019023638871-pct00236
적어도 연속 24개월 동안 자연적으로 폐경 후(암 요법 후 무월경은 가임력을 배제하지 않음) 상태가 아닌(예를 들면, 이전 연속 24개월 이내에 임의의 시점에서 월경을 가진)
성적으로 성숙한 여성으로서 정의된다.
임상연구원은 이 정의에 따라 여성 피험자를 FCBP로서 분류할 것이다. 임신 시험은 비-FCBP 피험자의 경우 요구되지 않으나, 타당한 이유가 eCRF 및 원시 문서로 기록되어야 한다. 임신 시험은 현지 실험실에 의해 수행될 것이다.
FCBP의 경우, 임신 시험은 표 34에 나열된 방문 시 수행될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00237
적어도 25 mIU/㎖의 민감성을 가진 혈청 임신 시험은 스크리닝 시 수득되어야 하고, 혈청 또는 소변 임신 시험은 연구 치료의 1 주기 1일째 날 전 72시간 이내에 수득되어야 한다. 피험자는 임상연구원이 2종의 스크리닝 임신 시험 시 음성을 나타냄을 확인할 때까지 화합물 A를 제공받지 않을 수 있다.
Figure 112019023638871-pct00238
(임상연구원의 판단 및 최소 시험 민감성[25 mIU/㎖]에 기반을 둔) 혈청 또는 소변 임신 시험은 모든 주기의 1일째 날 전 72시간 이내 또는 치료 종료일(EOT) 방문 시 수행되어야 한다. 피험자는 임상연구원이 임신 시험 시 음성을 나타냄을 확인할 때까지 화합물 A를 제공받지 않을 수 있다.
Figure 112019023638871-pct00239
FCBP, 또는 FCBP의 파트너인 남성 피험자는 화합물 A를 제공받는 동안 및 화합물 A의 마지막 용량 후 90일 동안 피임으로 이어질 수 있는 활동을 피해야 한다. 성적 활동으로부터의 진정한 자제의 실천은 월 단위로 모니터링될 것이고 원시 문서로 문서화될 것이다.
임신 시험에 대한 결과는 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다.
하기 실험실 평가는 표 34에 기재된 시점에서 연구 동안 수행될 것이다. 달리 특정되어 있지 않은 한, 모든 샘플들은 투약 전에 채취되어야 한다. 실험실 평가는 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이고 다음과 같다:
Figure 112019023638871-pct00240
혈액학: 헤모글로빈, 헤마토크릿, WBC 파라미터에 대한 절대 카운트를 가진 WBC 카운트 및 혈소판 카운트를 포함하는 완전한 혈액 카운트(CBC).
- 1 주기 1일째 날, 절대 카운트를 가진 CBC가 수행되어야 하고, 결과는 약물 투여 전 입력 기준에 대해 확인되어야 한다.
Figure 112019023638871-pct00241
혈청 화학: 알부민, 총 단백질, 중탄산염 또는 마그네슘, 인, 칼슘, 크레아티닌, 우레아/BUN, 글루코스(6시간 이상 금식), 칼륨, 나트륨, 염화물, 총 빌리루빈(정상 범위를 벗어나는 경우 분획화함), 알칼리성 포스파타제, AST 또는 혈청 글루탐산 옥살로아세트산 트랜스아미나제(SGOT), ALT 또는 혈청 글루타메이트 피루브산 트랜스아미나제(SGPT), LDH 및 요산.
Figure 112019023638871-pct00242
금식(≥ 6시간) 트리글리세라이드 및 콜레스테롤.
Figure 112019023638871-pct00243
특별한 화학: 아밀라제, 리파제, T 세포 서브세트(CD4+ 및 CD8+), 갑상선 자극 호르몬(TSH; 비정상인 경우 유리 T4에 대한 반사작용).
Figure 112019023638871-pct00244
응고: PT(또는 INR), 및 APTT
Figure 112019023638871-pct00245
소변검사: 딥스틱(dipstick)
- 2+ 이상의 단백질의 첫 출현 또는 단백뇨 악화의 경우 현미경관찰 및 소변 알부민 대 크레아티닌 비.
Figure 112019023638871-pct00246
혈청 크레아티닌이 1.5 x ULN을 초과하는 경우 포함 기준을 충족시키기 위해 스크리닝 시 요구된 외생성 여과 마커, 예컨대, 이오헥솔, 이눌린, 51Cr EDTA 또는 125I 이오탈라메이트의 사용을 통한 측정된 크레아티닌 제거 확인(4.2 단락 참조).
Figure 112019023638871-pct00247
(이전 28일 이내에 수행되지 않은 한) 3개 주기마다 수집되고 EOT에서 수집될 골 마커(N-텔로펩타이드 및 골 특이적 알칼리성 포스파타제).
Figure 112019023638871-pct00248
HCC 피험자의 경우에만:
- AFP(기준에서 상승된 경우)
- 기준에서 양성 B형 간염 바이러스 존재량을 갖고/갖거나 (3 주기로 시작되는 홀수 주기에서만 또는 임상연구원의 재량으로 더 빈번히, 및 EOT에서) 양성 HBsAg, 총 HBcAb 및/또는 HBcAb IgM을 가진 피험자에서 B형 간염 바이러스 DNA 정량.
Figure 112019023638871-pct00249
NEPC 피험자의 경우에만:
- PSA
Figure 112019023638871-pct00250
신경내분비 및 종양 마커들은 이들이 NEPC에서 PSA를 제외하고 기준에서 상승된 경우에만 모니터링될 필요가 있다.
- SCLC - Pro-GRP 및 CgA
- NEC - Pro-GRP 및 CgA
- NEPC - PSA, Pro-GRP 및 CgA
- NEHCC - 알파 페토단백질, Pro-GRP 및 CgA
- MTC - CEA, 칼시토닌, Pro-GRP 및 CgA
- NE 췌장암 - Pro-GRP, CgA 및 판크레아스타틴
- 다른 NEC - Pro-GRP 및 CgA
EOT 평가(절차에 대해서는 표 34 참조)는 치료를 영구적으로 중단하는 결정이 내려진 후 가능한 빨리(≤ 28일) 임의의 이유로 치료를 철회한 피험자에 대해 수행되어야 한다.
모든 피험자들은 AE 보고 및 병행 약물 정보를 위해 화합물 A의 마지막 용량 후 28일 동안 추적조사될 것이다. 28일(± 3일) 안전성 추적조사 접촉은 전화기에 의해 수행될 수 있다. 추가로, 그 후 임의의 시점에서 임상연구원에게 공지된, 화합물 A와 관련된 것으로 의심되는 임의의 SAE는 보고될 것이다.
안전성 추적조사 방문 후, 최대 2년 동안 또는 사망할 때까지, 추적조사로부터 누락될 때까지, 또는 시험의 종료일까지(이들 중 가장 이른 때) 생존 추적조사를 위해 후속 3개월(± 2주)마다 모든 피험자들을 추적조사할 것이다. 새로운 질환 요법은 동일한 일정으로 수집되어야 한다.
생존 추적조사는 (공식 기록을 포함하는) 기록 검토 및/또는 피험자, 가족 또는 피험자의 치료 의사와의 전화 접촉에 의해 수행될 수 있다.
종양 평가는 스크리닝 시 수행될 것이고 흉부, 복부 및 골반의 CT, 및 뇌 관련성이 공지되어 있거나 의심되는 피험자 및 NEPC를 가진 모든 피험자들에 대한 뇌 스캔(CT 또는 MRI)을 포함할 것이다. 스크리닝 후, 스크리닝에서 이용된 CT/MRI 스캐닝 양식과 동일한 CT/MRI 스캐닝 양식을 이용하여 2 주기, 4 주기 및 6 주기의 종료일(28일째 날 ± 7일) 및 그 후 3개 주기마다 방사선학적 종양 평가를 수행할 것이다. EOT 스캔은 이전 스캔이 28일 이내에 수행된 경우 수득될 필요가 없다.
Figure 112019023638871-pct00251
추가로, NHL 피험자의 경우, 종양이 FDG 친화성 음성을 나타내는 것으로 공지되어 있지 않은 한, 스크리닝 FDG PET 또는 FDG PET/CT 스캔이 수행될 것이다. 후속 스캔은 CR을 확인하기 위해 수득될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00252
골수 관련성이 공지되어 있거나 의심되는 NHL 피험자의 경우, 유동 면역표현형분석을 이용한 골수 평가는 스크리닝 시, 및 완전한 반응(CR)을 확인하기 위해 수행될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00253
MTC 피험자의 경우, 스크리닝 동위원소 골 스캔이 기준에서 수행될 것이다. 이것이 골 전이를 암시하는 경우, 골 병변의 X-선, CT 또는 MRI가 BL에서 수행되어야 하고, 동일한 기법이 각각의 예정된 효능 평가에서 반복되어야 한다.
Figure 112019023638871-pct00254
MTC 피험자의 경우, 간 MRI가 수행되어야 하거나, 이용 가능하지 않은 경우, 조영 증강 삼중 상 CT 스캔이 수행되어야 한다. 목의 MRI 또는 CT 스캔도 수행되어야 한다. 이들은 기준에서 상기 규정된 바와 같이 수행되어야 한다.
Figure 112019023638871-pct00255
NEPC 피험자의 경우, 99mTc-메틸렌 디포스포네이트 방사성핵종 골 스캔이 스크리닝 및 모든 후속 효능 평가 시 수행되어야 한다.
Figure 112019023638871-pct00256
NEHCC 피험자의 경우, 복부의 조영 증강 삼중 상 CT/MRI 스캔이 스크리닝 및 모든 후속 효능 평가 시 수행되어야 한다.
질환 진행, 새로운 항암 요법의 시작, 또는 전체 연구로부터의 동의의 철회 이외의 이유로 치료를 중단한 모든 피험자들은 새로운 전신 항암 요법의 진행 및/또는 시작까지 특정된 종양 평가 일정에 따라 추적조사될 것이다.
각각의 스크리닝 후 평가에서 종양 반응은 고형 종양에 대해 부록 B에 기재된 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST) v 1.1, NHL에 대해 부록 C에 기재된 악성 림프종에 대한 개정된 반응 기준, NEPC에 대한 PCWG3 2016(부록 J) 및 NEHCC에 대한 mRECIST(부록 I)를 기반으로 임상연구원에 의해 확인될 것이다.
질환 진행이 이전에 문서화되어 있지 않은 한, 스크리닝, 모든 주기의 1일째 날 및 EOT에서 종양 마커, 즉 NEPC의 경우 PSA 및 NEHCC의 경우 알파 페토단백질(AFP).
신경내분비 마커는 표 13에 나열된 방문 시 수행될 것이고, 결과는 원시 문서 및 eCRF로 기록될 것이다. 피험자가 이미 진행된 것으로 문서화되어 있지 않은 한, 기준에서 상승되어 있는 것으로 공지되어 있는 임의의 신경내분비 마커는 각각의 주기의 1일째 날 및 요법의 종료일에 추적조사되어야 한다. 그러나, 하기 마커들은 최소한도로 추적조사되어야 한다:
Figure 112019023638871-pct00257
SCLC - Pro-GRP 및 CgA,
Figure 112019023638871-pct00258
NEC - Pro-GRP 및 CgA,
Figure 112019023638871-pct00259
MTC - CEA, 칼시토닌, Pro-GRP 및 CgA,
Figure 112019023638871-pct00260
NEPC - Pro-GRP 및 CgA,
Figure 112019023638871-pct00261
NE 췌장 또는 소장 NEC - Pro-GRP, CgA 및 판크레아스타틴.
파트 A를 위한 PK 평가는 이하에 기재되어 있다. 파트 B를 위한 PK 평가는 충분한 PK 데이터가 이 연구의 파트 A에서 수집된 후 제공될 것이다.
혈장에서의 화합물 A의 PK를 평가하기 위해, 표 35에 나열된 시점에서 모든 피험자들로부터 혈액 샘플을 채취할 것이다. 각각의 샘플 채취의 실제 시간은 원시 문서 및 전자 사례 보고서 양식(eCRF)으로 기록될 것이다. PK 평가를 위해 채취된 혈장 샘플을 사용하여 혈장에서 화합물 A 대사물질의 탐색 분석을 수행할 수 있다.
[표 35]
Figure 112019023638871-pct00262
의뢰자는 연구 치료의 안전성을 추적조사하거나 질환의 진행 또는 연구 치료에 대한 질환의 반응을 더 잘 이해하기 위해 PK 샘플에 대한 추가 분석을 수행할 수 있다.
샘플 채취, 취급 및 프로세싱 지시에 대해서는 실험실 매뉴얼 및 부록 G를 참조한다.
약력학적 바이오마커에 대한 일정은 이하에서 제공되어 있다:
Figure 112019023638871-pct00263
PD 바이오마커 연구를 위한 전혈
- 1 주기 1일째 날: 투약 전(≤ 3시간)
- 1 주기 3일째 날
- 1 주기 5일째 날
- 1 주기 8일째 날: 투약 전(≤ 3시간)
- 1 주기 24일째 날: 투약 전(≤ 3시간)
Figure 112019023638871-pct00264
PD 바이오마커 연구를 위한 혈청(NEC 및 SCLC 피험자만)
- 1 주기 1일째 날: 투약 전(≤ 3시간)
- 1 주기 3일째 날
- 1 주기 8일째 날: 투약 전(≤ 3시간)
Figure 112019023638871-pct00265
PD 바이오마커 연구를 위한 종양 조직
- 스크리닝: 투약 전 -28일째 날부터 1일째 날까지(모든 포함 및 배제 기준이 충족된 후)
- 1 주기 16일째 날 또는 17일째 날(+ 7일)
- 임의로, EOT 방문까지 임의의 다른 시간.
의뢰자는 연구 치료의 안전성을 추적조사하거나 질환의 진행 또는 연구 치료에 대한 질환의 반응을 더 잘 이해하기 위해 PD 샘플에 대한 추가 분석을 수행할 수 있다.
파트 A에서 안전하고 실현 가능할 때마다 종양 생검이 채취될 것이다. 파트 B에서 종양 생검은 의무적이다. 상기 생검은 스크리닝 시 및 1 주기 16일째 날 또는 17일째 날(+ 7일)에 수술적 생검(선호됨) 또는 코어 바늘(가능한 경우 적어도 3회 통과)에 의해 채취된다. 연구 약물 치료가 이 시간 전에 중단되거나 감소되는 경우, 생검은 피험자가 화합물 A의 2회 연속 계획된 용량을 제공받은 후 1일째 날 또는 2일째 날(+ 7일)까지 지연되어야 한다. 보관용 종양 샘플은 새로운 생검이 스크리닝 동안 채취되지 않는 경우 제공되어야 한다. 세침 흡인은 종양 생검 물질의 공급원으로서 충분하지 않다. 샘플은 포르말린에 의해 고정되고 파라핀에 매립된(FFPE) 상태로서 프로세싱되어야 한다. 최적으로, 종양 조직 샘플(스크리닝 및 치료 도중)은 동일한 종양 부위로부터 수득될 것이다.
추가로, 장기간 치료 또는 내성 기작의 효과를 설명하기 위해 각각 후반부 치료 주기 동안 또는 치료 중단 후(28일 추적조사 기간 동안 임의의 시점에서) 파트 A 및 파트 B 둘 다에서 임의적 종양 생검을 수득할 수 있다.
연구 치료의 설명
화합물 A는 609.65의 분자량을 가진 베실산염이다. 이 물질은 백색 내지 옅은 황색 고체이다. 화합물 A는 0.50 mg, 0.75 mg 및 2.00 mg의 용량 강도로 활성 약학 성분만을 함유하는 불투명한 스웨디쉬 주황색 캡슐로서 진료실에 공급될 것이다. 상기 캡슐은 관련 국가 보건 관청의 규정에 따라 임상시험 용도에 적합하게 표지된, 소아용 안전 마개를 가진 HDPE 병으로 공급될 것이다.
화합물 A는 파트 A 및 B 둘 다에서 6시간 이상 지속되는 하룻밤 금식 후 아침에 공복(즉, 아침식사하기 1시간 이상 전) 상태에서 적어도 240 ㎖의 물과 함께 매주 1회 투여될 것이다. 피험자는 각각의 용량 후 1시간 이상 동안 식품 또는 다른 약물 섭취를 삼가해야 한다. 피험자는 각각의 4주(28일) 주기로 매주 1회 화합물 A를 경구 투여할 것이다. 대안적 투약 일정은 SRC에 의한 임상 안전성 및 실험실 데이터의 검토를 기반으로 실행될 수 있다. 화합물 A는 임의의 투약 전 평가가 완료된 후 진료실에서 투여될 것이다. 이러한 치료는 임상적으로 유의미한 질환 진행의 증거, 허용 불가능한 독성 또는 피험자/의사의 철회 결정이 있는 경우 중단될 수 있다.
용량 상승 결정이라는 목적을 위해, 적어도 3명의 피험자들이 연속적인 코호트에 등록될 것이다. 제1 코호트는 매주 1회 1.25 mg의 출발 용량으로 치료받을 것이다. 피험자는 최소 안전성 평가 및 약물 노출을 받으면서 최소 1 주기의 치료를 완료해야 하거나, 용량 상승 결정을 위해 평가될 수 있는 것으로서 간주되는 DLT를 치료의 제1 주기 내에 가졌어야 한다. 용량 상승 결정은 피험자의 코호트가 이 기준을 충족시켰을 때 일어날 것이다. 용량 상승 결정은 SRC에 의해 내려질 것이다. 결정은 안전성 정보, DLT, 1 주기 동안 2 CTCAE 등급 이상의 모든 치료 관련 독성 데이터, 및 평가 가능한 피험자들로부터의 PK 데이터를 포함하는, 계속 진행 중인 연구에서 평가된 모든 용량 수준들로부터 입수될 수 있는 모든 관련 데이터의 합성에 기반을 둘 것이다. 피험자들로부터의 PK 데이터는 연구 전체에 걸쳐 지속적으로 이용 가능해질 것이고, 이에 맞게 투약이 조정될 것이다. 다음 코호트의 피험자들을 위한 권장된 용량은 EWOC 원칙을 이용하는 BLRM에 의해 안내될 것이다.
적응 베이지안 방법은 MTD를 초과하지 않는 화합물 A의 용량 수준의 추정치를 제공하고 이 추정을 위해 모든 용량 수준에서 모든 DLT 정보를 포함한다. 일반적으로, 다음 권장된 용량은 DLT 비율이 표적 구간 내에 있고(16-33% 내에 있는 진정한 DLT 비율) EWOC 원칙을 항상 충족시킬 가장 높은 가능성을 가질 것이다. EWOC에 따르면, 다음 용량에서 DLT 비율은 0.33을 초과할 가능성이 거의 없을 것이다(<25% 사후 확률). 모든 경우에서, 다음 코호트를 위한 권장된 용량은 이전 용량으로부터의 100% 증가를 초과하지 않을 것이다. 용량의 보다 더 작은 증가는 모든 이용 가능한 임상 데이터의 고려 시 SRC에 의해 권장될 수 있다.
각각의 용량 코호트에서 피험자를 증가시키고 연구를 위한 용량 상승/단계적 축소 결정을 제공하는 절차는 다음과 같다:
1. 이 연구는 각각의 용량 수준에서 적어도 3명의 평가 가능한 피험자들의 코호트에서 화합물 A를 평가함으로써 시작될 것이다. 초기에, 코호트들 사이의 투약 증가는 100%일 것이다. 단일 피험자가 DLT를 경험하거나, 2명의 피험자들이 2 등급 이상의 치료 관련 독성을 경험할 때, 현재의 코호트 및 후속 코호트에 대한 코호트 크기는 6명의 평가 가능한 피험자들까지 증가될 수 있다. 각각의 후속 용량 상승 코호트에 대한 화합물 A 용량의 증가는 50% 이하일 것이다. 일단 2명의 피험자들이 2 등급 이상의 치료 관련 독성을 경험하면, 등록은 Pro-GRP, 또는 CgA 또는 칼시토닌(MTC 피험자의 경우) 또는 판크레아스타틴(췌장 또는 소장 NEC의 경우)을 분비하는 SCLC 및 다른 NEC, 예컨대, MTC를 가진 피험자로 제한될 것이다.
2. 코호트 내의 모든 평가 가능한 피험자들에 대한 1 주기의 완료 후, EWOC 원칙을 이용하는 2-파라미터 BLRM을 이용하여, 하기 예외를 가진, 다음 용량 수준을 SRC에게 제안할 것이다:
- 코호트 내의 처음 2명의 피험자들이 DLT를 경험하는 경우, 베이지안 모델이 이 새로운 정보로 업데이트될 때까지 추가 피험자는 그 코호트에 등록되지 않을 것이다. 마찬가지로, 코호트 내의 2명의 피험자들이 임의의 추가 피험자의 등록 전에 DLT를 경험하는 경우 상기 모델은 재평가될 것이다.
3. 각각의 코호트 후, SRC는 회의를 열어 BLRM 평가 및 이용 가능한 안전성(즉, DLT 데이터 및 비-DLT 데이터), PK, PD 및 예비 효능 정보로부터의 데이터를 검토할 것이다. 최종 용량 상승 결정은 SRC에 의해 내려질 것이다.
상기 단계들을 반복한 후, 화합물 A 용량은 하기 조건을 충족시킨 후 MTD로서 선언될 수 있다:
Figure 112019023638871-pct00266
적어도 6명의 평가 가능한 피험자들이 상기 용량에서 치료되었고,
Figure 112019023638871-pct00267
DLT 비율이 상기 용량에서 표적 구간(16-33%)에 놓일 사후 확률이 60%를 초과하거나, 사후 확률이 60%에 근접하나 이를 초과하지 못하기 때문에 MTD 추정치의 정확성을 보장하기 위해 충분한 수의 피험자들이 연구에 참여하였고,
Figure 112019023638871-pct00268
상기 용량이 BLRM에 따라 제안되고 SRC가 이를 승인한다.
용량 상승은 MTD를 확립하지 않으면서 새로 발생한 안전성 우려를 기반으로 임의의 시점에서 SRC에 의해 종결될 수 있다. 화합물 A의 안전성, 내약성 및 PK를 더 잘 이해하기 위해 SRC의 재량으로, 추가 용량 상승을 진행하기 전에 또는 진행하는 동안 추가 코호트의 피험자를 이전 용량 수준 또는 중간 용량 수준에서 등록할 수 있다.
그러나, 상승 동안 용량 결정은 이 용량들로 한정되지 않는다. 상승 동안 임의의 결정 시점에서 초과될 수 없는 최고 용량 및 프로토콜에 의해 허용된 용량의 최대 증가에 대한 BLRM의 권고를 기반으로, 중간 용량을 후속 새로운 코호트의 피험자에게 투여할 수 있다.
용량 코호트 내의 추가 피험자, 보다 더 높은 용량 코호트, 중간 용량 코호트, 보다 더 작은 용량 증가, 대안적 투약 일정을 평가할 지에 대한 결정 또는 MTD를 선언할 지에 대한 결정도 임상 및 실험실 안전성 데이터의 검토를 기반으로 SRC에 의해 내려질 것이다.
적어도 1회 용량의 화합물 A를 제공받는 모든 피험자들은 안전성에 대해 평가될 수 있을 것이다.
제1 용량이 용량 상승 동안 임의의 코호트에 투여된 후, 각각의 코호트 내의 피험자는 다음 용량 코호트가 시작될 수 있기 전에 28일(1 주기, DLT 시간대) 동안 관찰된다. 하루에 1명 이하의 피험자가 소정의 용량 상승 코호트에 등록될 것이다. DLT에 대해 평가될 수 있는 피험자는
Figure 112019023638871-pct00269
DLT를 경험하지 않으면서 1 주기 동안 총 계획된 용량 양의 75% 이상의 화합물 A를 제공받았거나,
Figure 112019023638871-pct00270
적어도 1회 용량의 화합물 A를 제공받은 후 DLT를 경험한
피험자로서 정의된다.
DLT에 대해 평가될 수 없는 피험자는 대체될 것이다. 임의의 용량 코호트 내의 추가 피험자는 SRC의 재량으로 등록될 수 있다. 피험자내 용량 상승은 DLT 평가 기간 동안 허용되지 않을 것이다.
MTD는 화합물 A로 치료받은 집단(집단의 샘플이 아님)의 33% 미만이 이 용량으로 치료받은 적어도 6명의 평가 가능한 피험자들을 이용한 제1 주기에서 DLT로 고통받을 때 사용된 최고 용량이다.
가변 용량 코호트(예를 들면, 덜 빈번한 투약)은 SRC의 재량으로 MTD를 정확히 측정하기 위해 평가될 수 있다.
용량 상승 동안, DLT 평가 기간은 1 주기(28일)이다.
부작용에 대한 국립 암연구소(NCI) 일반 용어 기준(CTCAE) 버전 4.03은 부작용의 중증도의 등급화를 위한 가이드로서 이용된다. 부작용이 화합물 A와 무관한 것으로 명확히 확인될 수 없는 한, DLT는 DLT 평가 동안 발생하는 하기 독성들 중 임의의 독성으로서 정의된다. 용량 제한 독성은 이하에 기재되어 있다:
Figure 112019023638871-pct00271
임의의 지속시간의 임의의 4 등급 비-혈액학적 독성
Figure 112019023638871-pct00272
하기 3가지 독성을 제외한 3 등급 이상의 임의의 비-혈액학적 독성:
- (최적 의학적 관리의 이용 시) 3일 이하 동안 지속되는 3 등급 설사, 구역 또는 구토
- 연구 약물을 중단한 지 7일 이내에 2 등급 이하까지 해소되거나 (최적 의학적 관리의 이용 시) 동일한 용량으로 연구 약물의 재개 시 동일한 수준으로 재발되지 않는 여드름모양, 농포성 또는 반점구진성 유형의 3 등급 발진
- 연구 약물을 중단한 지 7일 이내에 2 등급 이하까지 해소되거나 (최적 의학적 관리의 이용 시) 동일한 용량으로 연구 약물의 재개 시 동일한 수준으로 재발되지 않는 3 등급 피로
Figure 112019023638871-pct00273
다음과 같은 혈액학적 독성:
- 발열성 호중구감소증
- 7일 초과의 기간 동안 지속되는 4 등급 호중구감소증
- 7일 초과의 기간 동안 지속되는 4 등급 혈소판감소증, 및 임상적으로 유의미한 출혈을 가진 3 등급 이상의 혈소판감소증
Figure 112019023638871-pct00274
연구 약물과 무관한 것으로 명확히 확인되지 않은 한, 1 주기 동안 용량 수준 감소를 필요로 하는 임의의 AE.
Figure 112019023638871-pct00275
안전성 위원회에 의해 용량 제한 독성으로서 간주되는, 시험 동안 임의의 시점에서의 임의의 다른 독성.
관련된 임상 징후 또는 증상(예를 들면, 저마그네슘혈증, 고마그네슘혈증, 저알부민혈증, 저인산염혈증, 증가되거나 감소된 림프구 카운트)을 갖지 않는 단리된 실험실 변화는 이 정의에 포함되지 않을 수 있다. 이 소견들은 SRC에 의해 논의되고 검토될 것이다.
용량 감소는 1 주기를 포함하는 임의의 주기에서 허용된다. 용량 상승 동안 1 주기에서 일어나는 용량 감소는 DLT를 구성할 것이나, 피험자는 감소된 용량으로 화합물 A를 계속 복용하도록 허용될 것이다.
용량 조절이 표시된 경우, 용량 빈도가 먼저 조절될 것이다. 용량 누락 및 감소는 의뢰자의 연구 의사와 상담한 후 허용된다. 일단 용량이 감소되면, 독성이 1 등급 이하에 도달할 때 용량이 상승될 수 있다. 독성이 보다 더 높은 용량에서 재발하는 경우, 용량은 다시 감소될 것이나, 그 다음 재상승은 허용되지 않는다. 임의의 피험자가 2회 용량 감소(용량 수준에 대해 1회) 후 허용 불가능한 독성을 계속 경험하는 경우, 화합물 A는 영구적으로 중단될 것이다.
피험자내 용량 상승은 DLT 평가 기간 동안 허용되지 않을 것이다.
DLT의 정의를 충족시키는 임의의 AE는 회복되지 않는 경우 용량 빈도 조절 및 후속 용량 중단을 요구할 것이다. 임의의 치료 관련 2 등급 이상의 독성이 다음 용량 투여 시까지 1 등급 이하로 해소되지 않는 경우, 용량이 지연되어야 한다. 이러한 경우는 투약 지연의 최적 지속시간을 결정하기 위해 의뢰자의 연구 의사와 논의되어야 한다.
치료 관련 3 등급 이상의 독성 또는 만성 2 등급 독성은 화합물 A의 용량 감소를 정당화할 수 있다. 이러한 경우는 투약 변화가 이루어지기 전에 의뢰자의 연구 의사와 논의되어야 한다.
피험자내 용량 상승은 DLT 평가 기간 동안 허용되지 않을 것이나, 3 주기 이상의 주기에서, 그 자신의 할당된 용량의 화합물 A에 대한 내약성을 보이는, 질환 진행의 증거를 갖지 않은 피험자는 (임상연구원의 재량으로 의뢰자의 연구 의사와와 상담하고 동의를 얻은 후) 이 연구에서 적어도 하나의 피험자 코호트가 적절한 내약성을 보이는 것으로 확인된 최고 용량 수준까지 상승할 수 있다(즉, 평가 가능한 피험자들의 33% 이하가 그 용량 수준에서 DLT를 경험한다).
파트 B(확장 단계)에서, MTD를 넘는 용량 상승은 허용되지 않는다.
(원형탈모증을 제외한) 독성이 1 등급 이하 또는 기준 수준에 도달할 때까지 치료를 최대 4주 동안 중단할 수 있다. 임상연구원의 재량으로 치료를 동일한 또는 감소된 용량으로 재시작할 수 있다. 임의의 이러한 치료 중단은 의뢰자의 연구 의사와 논의되어야 한다.
용량 상승 단계의 DLT 평가 기간에서, DLT 이외의 이유로 1회 초과의 용량의 화합물 A가 누락된 치료 중단은 피험자를 DLT에 대해 평가 불가능하게 만들 것이고 투약 코호트에서 그 피험자의 교체를 필요로 할 것이다. 임의의 이러한 치료 중단은 의뢰자의 연구 의사와 논의되어야 한다.
조혈 성장 인자 또는 다른 혈액학적 지지체, 예컨대, 에리쓰로포이에틴(erythropoietin), 다베포에틴(darbepoetin), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 과랍구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 및 RBC 또는 혈소판 수혈은 치료 의도로 연구에서 허용된다. G-CSF의 치료적 사용은 3/4 등급 호중구감소증 또는 임의의 등급의 발열성 호중구감소증을 경험하는 피험자를 위해 임의의 시점에서 허용된다. 과립구(또는 과립구-대식세포) 성장 인자의 예방적 사용은 1 주기 동안 허용되지 않는다.
3 또는 4 등급 호중구감소증 및/또는 3 또는 4 등급 혈소판감소증을 가진 피험자는 1 등급 이하로 해소될 때까지 실험실 시험에 의해 자주 모니터링되어야 한다. 적절한 경우, 항균, 항진균 및 항바이러스 예방이 고려되어야 한다.
종양 통증 또는 치료에 의해 유도된 통증은 임상의의 재량으로 의학적으로 필요할 때 오피오이드 및 오피오이드 관련 진통제, 예컨대, 코데인, 메페리딘, 프로폭시펜 또는 모르핀에 의해 제어될 수 있다. 특히 혈소판감소증의 상황에서 출혈의 위험은 비-스테로이드성 소염성 약물(NSAID) 및 아스피린의 사용 전에 고려되어야 한다. NSAIDS 및 아스피린은 가능한 경우 피해져야 하고, 그 대신에 파라세타몰이 투여되어야 한다.
식도/위 점막의 보호를 위한 점막 코팅제는 임상연구원의 재량 및 GI 출혈에 대한 피험자의 모니터링에 의해 권장된다. 그러나, 양성자 펌프 억제제는 NEC 피험자에서 신경내분비 마커에 영향을 미칠 수 있으므로, 적절한 경우 히스톤(H2) 수용체 길항제를 우선적으로 투여해야 한다. 피험자는 GI 불편함 또는 통증, 식욕 손실, 대변의 변화 또는 혈변의 모든 에피소드를 보고하도록 촉구될 것이다.
설사를 경험하는 피험자는 부록 F에 제공된 지침에 따라 관리되는 것이 권장된다. 지사 약물, 예컨대, 로퍼라마이드(loperamide)는 1 또는 2 등급 설사의 최초 발병 시점에서 시작되어야 한다. 지사 약물은 설사의 예방 및 치료를 위해 투여될 수 있다. 탈수 및 전해질 교란은 신속히 교정되어야 한다. 설사를 개선하기 위한 일반적인 조치, 예컨대, 저섬유 식이 및 증가된 액체 소비가 고려되어야 하고 체중이 면밀히 모니터링되어야 한다.
이 프로토콜에 대해 정의된 과다복용은 화합물 A 투약만을 지칭한다. 용량당 기준으로, 과다복용은 임의의 관련된 부작용 또는 후유증과 관계 없이 소정의 피험자에게 배정된 화합물 A의 프로토콜-특정된 용량을 초과하는 하기 양으로서 정의된다:
Figure 112019023638871-pct00276
프로토콜-특정된 용량을 초과하는 PO 임의의 양.
일정 또는 빈도 기준으로, 과다복용은 프로토콜에 의해 요구된 일정 또는 빈도보다 더 빈번한 임의의 일정 또는 빈도로서 정의된다.
과다복용이 우발적이든 아니면 의도적이든 관계 없이 임의의 과다복용을 포함하는, 약물 투여에 대한 완전한 데이터는 사례 보고서 양식으로 보고되어야 한다.
적격 피험자는 파트 A(용량 상승)에 순차적으로 등록될 것이다. 파트 B(용량 확장)에의 등록은 적용 가능한 경우 질환 코호트 및 투약 일정에 의해 계층화될 것이다.
상호작용 반응 기술(IRT) 시스템은 파트 A에서 용량 수준으로의 피험자 배정 및 파트 B에서 종양 코호트로의 피험자 배정을 추적하는 데 이용될 것이다.
화합물 A에 대한 표지(들)는 의뢰자 이름, 주소 및 전화번호, 프로토콜 번호, 화합물 A, 제형 및 강도(적용 가능한 경우), 용기당 화합물 A의 양, 로트 번호, 만료일(적용 가능한 경우), 약물 확인/키트 번호, 투약 지시, 저장 조건, 및 적용 가능한 경우 요구된 경고 문구 및/또는 규제 문구를 포함할 것이나 이들로 한정되지 않는다. 추가 정보는 현지 규정에 따라 적용 가능한 경우 표지에 포함될 수 있다.
셀진(또는 피지명자)은 화합물 A의 수령을 문서화하는 절차뿐만 아니라 카운팅하고 화합물 A를 조화시키고 이 과정을 문서화하는 절차도 임상연구원 및 관련 현장 직원과 함께 검토할 것이다. 셀진(또는 피지명자)은 현장 대 셀진(또는 피지명자)에 대한 책임을 포함하는, 화합물 A 회수, 폐기 및/또는 파괴의 과정도 임상연구원 및 관련 현장 직원과 함께 검토할 것이다.
약사 또는 임상연구원의 피지명자만이 화합물 A를 조제할 것이다. 각각의 피험자에게 조제되고 각각의 피험자에 의해 복용된 화합물 A의 캡슐 수의 기록은 유지되어야 한다. 약사 또는 임상연구원의 피지명자는 조제된/투여된 용량을 적절한 연구 기록으로 문서화할 것이다.
병행 약물 및 절차
피험자가 ICD에 서명한 때부터 복용한 모든 약물들, 및 치료 중단 후 28일까지 연구 동안의 모든 병행 요법은 용량, 용량 빈도 및 요법 사용 이유와 함께 원시 문서 및 병행 약물 eCRF로 문서화될 것이다.
연구 약물의 투여 전 모든 선행 화학요법(생물학적, 면역학적 또는 방사선 요법) 및 항암 수술은 eCRF의 적절한 단락에 기록될 것이다.
임상연구원은 피험자가 ICD에 서명한 후 복용한 임의의 새로운 약물에 대하여 연구 직원에게 통보하도록 지시할 것이다. 모든 약물 및 유의미한 비-약물 요법(허브 의약품, 물리적 요법 등), 및 기존 약물을 사용한 투약의 임의의 변화가 eCRF로 문서화될 것이다.
피험자의 관리를 위해 필요하다고 간주되는 임의의 병행 약물/요법은 사용되어야 한다. 약물 흡수 또는 대사에 영향을 주는 것으로 의심되는 병행 약물의 변화가 있는 경우 반복된 PK 평가를 수행할 수 있다. 허용된 병행 약물 및 절차는 다음과 같다:
Figure 112019023638871-pct00277
1 등급 이상의 설사를 경험하는 피험자는 디페니옥실레이트/아트로핀(로모틸(Lomotil)) 또는 로퍼라마이드(이모듐(Imodium)), 또는 처방전 없이 구입할 수 있는 대안적 설사 치료제를 사용한 치료를 즉시 시작해야 한다. 후속 용량의 화합물 A를 위해 지사 약물을 사용한 예비약물치료가 적절할 수 있고 의뢰자의 연구 의사와 논의되어야 한다.
Figure 112019023638871-pct00278
피험자가 1 CTCAE 등급 이상의 구역 또는 구토를 경험할 때까지 진토제는 보류될 것이다. 그 다음, 피험자는 임상연구원의 재량으로 덱사메타손을 포함하는 예방 진토제를 제공받을 수 있다.
Figure 112019023638871-pct00279
예방 점막 보호제는 임상연구원의 재량으로 적절할 수 있다. 그러나, 양성자 펌프 억제제는 NEC 피험자에서 신경내분비 마커에 영향을 미칠 수 있으므로, 적절한 경우 히스타민(H2) 수용체 길항제를 우선적으로 투여해야 한다.
Figure 112019023638871-pct00280
HBV에 대한 적절한 항바이러스제를 사용한 항바이러스 요법은 양성 B형 간염 표면 항원인 HBcAb IgM 및/또는 바이러스 존재량을 가진 피험자에서 요구된다 - 적절한 제1선 치료제는 엔테카비르, 테노포비르 및 라미부딘을 포함한다(라미부딘은 보다 높은 내성률을 가진다는 것을 주목한다). HCV의 치료에 적합한 섭생법은 화합물 A를 투여할 때 중단되어서는 안 된다.
Figure 112019023638871-pct00281
과립구 성장 인자의 치료적 사용은 발열성 호중구감소증 또는 3/4 등급 호중구감소증을 경험하는 피험자를 위해 임의의 시점에서 허용된다. 과립구 콜로니 자극 인자 또는 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자를 사용한 통상적인 예방.
Figure 112019023638871-pct00282
화합물 A를 시작하기 전 적어도 4주 동안 안정한 용량의 재조합 에리쓰로포이에틴 또는 다베포에틴 알파를 제공받는 피험자는 연구 전체에 걸쳐 그의 치료 전 용량을 유지할 수 있다. 빈혈(예를 들면, 화합물 A에 의해 유도된 빈혈)에 대한 동시 원인의 임상적 의심이 없는 한, 피험자는 선행 화학요법 노출에 수반되는 저증식성 빈혈을 위해 2 주기에서 시작되는 에리쓰로포이에틴 자극제(ESA)를 사용한 드 노보(de novo) 치료를 시작할 수 있다.
Figure 112019023638871-pct00283
부모 감기 백신접종은 허용된다.
Figure 112019023638871-pct00284
통상적인 감염성 질환 예방은 요구되지 않는다. 그러나, 항생제, 항바이러스제, 항-폐포자충, 항진균제 또는 다른 예방은 임상연구원의 재량으로 연구 동안 실시될 수 있다.
Figure 112019023638871-pct00285
비스포스포네이트(예를 들면, 파미드로네이트, 졸렌드로네이트) 또는 다른 물질(예를 들면, 데노수맙)을 사용한 치료는 골 전이의 진행을 예방하거나 지연시키기 위해 허용된다. 연구 전체에 걸쳐 안정한 투약 섭생법의 유지가 권장된다.
Figure 112019023638871-pct00286
질환 진행(이 경우, 피험자는 중단되어야 함)의 표시가 없는 한, 암 관련 증상(예를 들면, 국소화된 골 통증)의 치료를 위한 국소 완화적 방사선요법은 임상연구원의 재량으로 연구 치료 동안 허용된다.
Figure 112019023638871-pct00287
피험자는 유지 요법으로서 생리학적 대체 용량의 글루코코르티코이드(10 mg 매일 프레드니손의 당량까지)를 제공받을 수 있다.
Figure 112019023638871-pct00288
유지 호르몬 요법은 유방암 또는 전립선암의 이력을 가진 피험자에서 허용된다.
Figure 112019023638871-pct00289
적절한 경우 소마토스타틴 유사체(SSA)는 증상 제어를 위해 사용될 수 있다.
피험자가 연구에 참여하고 있는 동안 다른 임상시험 요법은 사용되지 않아야 한다.
피험자가 연구에 참여하고 있는 동안 연구 치료 이외의 항암 요법(화학요법, 생물학적 또는 임상시험 요법, 및 수술)은 피험자에게 제공되지 않아야 한다. 이러한 치료가 요구되는 경우, 피험자는 연구를 중단해야 한다. 피험자가 연구에 참여하고 있는 동안 면역억제제를 사용한 치료는 허용되지 않는다. 이러한 치료가 요구되는 경우, 피험자는 연구를 중단해야 한다.
항응고제(예를 들면, 와파린, 저분자량 헤파린, 인자 Xa 억제제, 트롬빈 길항제)의 장기간 치료적 투약을 이용한 치료는 허용되지 않는다. 의학적으로 표시된 경우(예를 들면, 입원한 피험자, 수술 후) 임상연구원에 의한 신중한 고려 하에 항응고제의 단기간 예방적 투약이 피험자에서 고려될 수 있다.
화합물 A는 CYP3A4의 기질일 수 있다. 이 CYP 효소의 공지된 강한 유도제 또는 억제제인 약물은 피해져야 한다. 이 약물들 중 한 약물의 사용이 필요한 경우, 위험 및 이익은 이 약물과 화합물 A의 동시 사용 전에 의뢰자의 연구 의사와 논의되어야 한다.
이 약물들의 예는 다음과 같다(포괄적이 아님):
Figure 112019023638871-pct00290
CYP3A4/5 억제제: 아타자나비르(atazanavir), 클라리쓰로마이신(clarithromycin), 인디나비르(indinavir), 이트라코나졸(itraconazole), 케토코나졸(ketoconazole), 네파조돈(nefazodone), 넬피나비르(nelfinavir), 리토나비르(ritonavir), 사퀴나비르(saquinavir) 및 텔리쓰로마이신(telithromycin)
Figure 112019023638871-pct00291
CYP3A4/5 유도제: 리팜핀(rifampin) 및 카바마제핀(carbamazepine).
가능한 경우, 양성자 펌프 억제제는 바이오마커에 대한 가능한 효과로 인해 NEC 피험자에서 피해져야 한다. 임상적으로 적절한 경우, 피험자는 제1 용량을 투여하기 적어도 7일 전에 H2 길항제로 교체해야 한다.
혈소판감소증에 대한 잠재력에 비추어 볼 때, 가능한 경우, NSAIDS 및 아스피린은 피해져야 하고, 그 대신에 파라세타몰이 투여되어야 한다.
통계학적 고려
이 연구의 일차 목적은 진행된 고형 종양(NEC를 포함함) 및 재발된/난치성 NHL을 가진 성인 피험자에게 4주(28일 주기) 동안 매주 1회 경구 투여될 때 화합물 A의 안전성, 내약성 및 MTD를 측정하는 것이다. 이차 목적은 화합물 A의 항종양 활성의 예비 평가를 수행하고 그의 PK 특성을 확인하는 것이다.
데이터 요약/통계학적 분석은 적용 가능한 경우 연구 파트(파트 A 또는 B), 용량 일정, 용량 수준(파트 A) 및 종양 코호트(파트 B)에 의해 수행될 것이다.
연구 집단 정의는 다음과 같다:
Figure 112019023638871-pct00292
등록된 집단 - 포함/배제 기준을 충족시키는 모든 피험자들.
Figure 112019023638871-pct00293
치료된 집단 - 등록되었고, 적어도 1회 용량의 화합물 A를 제공받은 모든 피험자들.
Figure 112019023638871-pct00294
효능 평가 가능한(EE) 집단 - 연구에 등록되었고, 적격 기준을 충족시키고, 적어도 1 주기의 화합물 A를 완료하고(할당된 용량의 적어도 75%를 복용하고), 기준 종양 평가 및 적어도 하나의 유효한 기준 후 종양 평가를 받은 모든 피험자들.
Figure 112019023638871-pct00295
약동력학(PK) 평가 가능한 집단 - 등록되었고, 적어도 1회 용량의 화합물 A를 제공받고, 적어도 하나의 측정 가능한 농도의 화합물 A를 가진 모든 피험자들.
Figure 112019023638871-pct00296
바이오마커 평가 가능한(BE) 집단 - 등록되었고, 적어도 1회 용량의 연구 약물을 제공받았고, 자격을 잃은 평가를 제외한 적어도 하나의 바이오마커 평가를 받은 모든 피험자들.
연구의 파트 A 동안, 과다복용을 제어하면서 상승시키는(EWOC) 원칙에 의해 안내된 적응 베이지안 로지스틱 회귀(BLR) 모델(2개 파라미터를 가짐)이 용량 상승을 위해 이용될 것이다. 샘플 크기를 결정하기 위한 공식 통계학적 검증력 계산은 이 연구를 위해 수행되지 않았다. 피험자의 실제 수는 시험된 용량 수준/코호트의 수에 의존할 것이다. 그러나, 피험자의 예상된 수는 대략 50일 것이다.
MTD가 파트 A로부터 결정된 후, 파트 B는 미리 특정된 종양 유형당 대략 20명의 추가 피험자들을 등록할 것이다.
파트 B의 경우, 샘플 크기는 검증력 계산을 기반으로 결정되는 것이 아니라, 오히려 이 종류의 탐색 연구를 위해 전통적으로 이용된 임상적, 경험적 및 실제 고려사항을 기반으로 결정된다. 파트 B 용량 확장 동안, 각각의 종양 코호트에 대해 적어도 14명의 효능 평가 가능한 피험자들이 초기에 생길 것이다. 반응자 또는 4개월 이상의 SD가 관찰되는 경우 종양 코호트는 대략 20명의 피험자들까지 확장될 것이다.
파트 A에서, 피험자의 기준 특성은 등록된 집단에 대한 용량 코호트별로 요약될 것이다. 파트 B에서, 피험자의 기준 특성은 종양 유형별로 요약될 것이다. 연령, 체중, 신장 및 다른 연속적인 인구통계학 및 기준 변수는 기술 통계자료의 사용을 통해 요약될 것이다. 수행 상태, 성별, 인종 및 다른 범주형 변수는 빈도 표 작성에 의해 요약될 것이다. 의학적 이력 데이터는 시스템 기관 클래스 및 선호된 용어로 빈도 표 작성을 이용함으로써 요약될 것이다.
치료 및 연구로부터의 피험자 배치(일차 이유와 함께 분석 집단 배정, 계속 진행 중, 중단됨)는 빈도 및 퍼센트를 이용함으로써 요약될 것이다. 장소별로 등록된 피험자의 요약이 제공될 것이다. 프로토콜 위반은 빈도 표 작성을 이용함으로써 요약될 것이다. 뒷받침하는 상응하는 피험자 목록도 제공될 것이다.
효능 분석은 치료된 집단에 기반을 둘 것이고, 용량 코호트 및 투약 일정(파트 A) 또는 종양 유형 및 투약 일정(파트 B)별로 임상 이익률(CBR), 객관적인 반응률(ORR), 반응 또는 안정한 질환의 지속시간, 진행 부재 생존(PFS), 진행까지의 시간(TTP) 및 OS를 요약하는 것을 포함할 것이다. 종양 반응(CR, PR, SD, PD 또는 평가 불가능한)은 고형 종양의 반응 평가 기준(RECIST) 버전 1.1, NEHC의 경우 mRECIST, NEPC의 경우 PCWG23, 및 IWG 기준에 따라 임상연구원에 의해 평가될 것이다. CBR은 (임상연구원에 의해 평가될 때) CR, PR 및 지속 가능한 SD(4개월 이상 지속되는 SD)로서 정의된다. ORR은 가장 우수한 반응이 CR 또는 PR인 피험자의 퍼센트로서 정의된다. SD가 가장 우수한 반응일 때, 이것은 제1 용량으로부터 최소 8주의 간격(즉, 기준 후 첫 번째 반응 평가 시점 마이너스 평가 시간대와 일치함)을 둔 후 연구 참여 후 적어도 1회 방사선학적으로 문서화되어야 한다. SD의 가장 우수한 반응을 위한 최소 시간이 충족되지 않는 경우, 피험자의 가장 우수한 반응은 후속 평가의 결과에 의존할 것이다. 예를 들면, (첫 번째 평가가 SD에 대한 최소 지속 기준을 충족시키지 않는 경우) 첫 번째 평가에서 SD를 나타내고 두 번째 평가에서 PD를 나타내는 피험자는 PD의 가장 우수한 반응을 가진 피험자로서 분류될 것이다. 첫 번째 SD 평가 후 추적조사로부터 누락된 피험자는 SD에 대한 최소 지속 기준이 충족되지 않은 경우 평가 불가능한 피험자로서 간주될 것이다.
ORR 및 CBR 추정치에 대한 2측 95% 클롭퍼-피어슨(Clopper-Pearson) 정확 신뢰구간이 제공될 것이다. 효능 평가 가능한 집단뿐만 아니라 확인된 반응을 가진 피험자도 포함하기 위해 유사한 분석이 수행될 것이다.
CR 또는 PR의 가장 우수한 반응을 가진 피험자의 경우, 반응의 지속시간은 CR/PR에 대한 기준이 가장 먼저 충족된(가장 먼저 기록된) 때부터 진행성 질환이 객관적으로 문서화된 첫째 날까지 측정된다. SD의 가장 우수한 반응을 가진 피험자의 경우, SD의 지속시간은 제1 용량 투여 날부터 진행에 대한 기준이 충족될 때까지 측정된다. 진행이 화합물 A 중단 전에 문서화되지 않은 경우, 전체 반응의 지속시간 및 SD의 지속시간은 마지막 적절한 종양 평가일에 검열될 것이다.
임상연구원의 평가에 기반을 둔 반응/SD의 지속시간은 치료된 집단에 대한 기술 통계자료(평균, 표준 편차, 중간치, 최소치 및 최대치)별로 요약될 것이다. 카플란-메이에르 방법을 이용하여 관찰된 값 및 검열된 값 둘 다를 기반으로 계산할 중간치를 제외한 모든 다른 통계자료(평균, 표준 편차, 최소치 및 최대치)는 관찰된 값만을 기반으로 계산될 것이다. TTP는 제1 용량부터 종양 진행까지의 시간으로서 정의된다.
진행 부재 생존(PFS)은 화합물 A의 제1 용량부터 임의의 원인으로 인한 질환 진행 또는 사망의 첫 번째 발생까지의 시간으로서 정의된다. 데이터 컷-오프 날에 진행하지 않고 사망하지도 않은 피험자는 그의 마지막 적절한 종양 평가일에 검열될 것이다. PFS는 치료된 집단에 대한 기술 통계자료(평균, 표준 편차, 중간치, 최소치 및 최대치)를 사용함으로써 요약될 것이다. 카플란-메이에르 방법을 이용하여 관찰된 값 및 검열된 값 둘 다를 기반으로 계산할 중간치를 제외한 모든 다른 통계자료(평균, 표준 편차, 최소치 및 최대치)는 관찰된 값만을 기반으로 계산될 것이다.
전체 생존(OS)은 화합물 A의 제1 용량부터 임의의 원인으로 인한 사망까지의 시간으로서 측정되고 PFS에 대해 기재된 방식과 유사한 방식으로 분석될 것이다.
신경내분비 피험자에서 시간의 경과에 따른 혈청 신경내분비 마커의 평가가 요약될 것이다.
치료 도중에 새로 발생한 부작용(TEAE)을 포함하는 부작용, 실험실 평가, 활력 징후, ECG 결과, ECOG 수행 상태, LVEF 평가, 신체검사, 활력 징후, 연구 치료에의 노출, 병행 약물의 평가, 및 가임 여성에 대한 임신 시험이 치료된 집단에 대해 (파트 A에서 용량 코호트 및 파트 B에서 종양 유형별로) 요약될 것이다.
관찰된 부작용은 조절 활성에 대한 의학 사전(MedDRA)(버전 18.1 이상), 시스템 기관 클래스(SOC) 및 선호된 용어(PT)를 사용함으로써 분류될 것이다. 피험자별 분석에서, 1회 초과의 빈도로 동일한 AE를 가진 피험자는 1회만 카운팅될 것이다. 모든 부작용은 SOC, PT 및 NCI CTCAE 등급(버전 4.0 이상)에 의해서도 요약될 것이다. 연구 치료의 중단으로 이어지는 부작용, 3 또는 4 등급으로서 분류된 부작용, 연구 약물 관련 AE 및 SAE(사망을 포함함)는 따로 표로 작성될 것이다. 모든 AE, TEAE, SAE(사망을 포함함) 및 이의 귀인의 피험자별 목록이 제공될 것이다.
기준으로부터의 변화의 표시도 포함할 임상 실험실 결과는 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B) 및 방문별로 설명하는 방식으로 요약될 것이다. 기준부터 가장 나쁜 기준 후 실험실 값까지의 변화(낮음/정상/높음)를 나타내는 변동 표는 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B)별로 교차표를 작성함으로써 표시될 것이다. 치료 기간 동안 기준부터 가장 나쁜 기준 후 중증도 등급까지 NCI CTCAE 등급의 변화를 나타내는 유사한 변동 표도 적용 가능한 분석물에 대해 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B)별로 제공될 것이다. NCI CTCAE 중증도 등급(적용 가능한 경우)에 따른 비정상적인 임상 실험실 데이터, 비정상적인 플래그(flag)(낮음 또는 높음) 및 후자의 임상적 유의성의 목록이 제공될 것이다.
핵심 실험실 분석물에 대한 그래프 표시(예를 들면, "스파게티" 도표 또는 상자 도표)가 제공될 것이다.
활력 징후에 대한 기술 통계자료(관찰된 값 및 기준으로부터의 변화 둘 다)는 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B) 및 방문별로 요약될 것이다. 기준부터 가장 나쁜 기준 후 값까지 변화를 나타내는 변동 표는 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B)별로 교차표로 작성됨으로써 표시될 것이다. 활력 징후 측정치는 피험자 및 방문별로 나열될 것이다.
ECG 파라미터 및 기준으로부터의 변화는 기술 통계자료를 사용함으로써 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B) 및 방문별로 요약될 것이다. 기준 후 비정상적인 QTc(QTcF 및 QTcB 둘 다) 값은 하기 5개의 범주들에 대한 빈도 표 작성을 이용함으로써 요약될 것이다:
Figure 112019023638871-pct00297
QTc > 450 msec
Figure 112019023638871-pct00298
QTc > 480 msec
Figure 112019023638871-pct00299
QTc > 500 msec
Figure 112019023638871-pct00300
기준으로부터의 QTc 증가 > 30 msec
Figure 112019023638871-pct00301
기준으로부터의 QTc 증가 > 60 msec
기준부터 가장 나쁜 기준 후 정성적 평가까지 비정상의 변동(즉, '정상적', '비정상적이고 임상적으로 유의미하지 않은' 및 '비정상적이고 임상적으로 유의미한' 또는 '정상적' 및 '비정상적')은 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B)별로 교차표로 작성됨으로써 표시될 것이다. 피험자 및 방문별로 ECG 파라미터의 목록이 제공될 것이다.
공식적 중간(interim) 분석은 계획되지 않는다. 데이터는 지속적으로 검토될 것이다.
EWOC 원칙을 이용한 상승에 의해 안내된 적응 BLRM은 연구의 상승 단계 동안 용량을 제안하고 MTD를 추정하는 데 이용될 것이다(추가 상세한 내용에 대해서는 부록 E 참조).
연구의 상승 파트에서의 DLT 관계는 하기 베이지안 로지스틱 회귀 모델에 의해 기재될 것이다:
Figure 112019023638871-pct00302
상기 모델에서, pj는 용량에서 DLT 비율이고, dj는 용량 수준이고, d*은 30 mg 기준 용량이고, α는 d*에서 DLT의 확률이다.
모델 파라미터(log(α),log(β))에 대한 모호한 이변량 정규 사전 분포는 임상 전 데이터로부터의 사전 추정치(중간치) 및 각각의 용량에서 DLT의 확률에 대한 넓은 신뢰구간을 기반으로 이끌어내진다. 임상 전 데이터에 기반을 둘 때, 사전 MTD는 30 mg인 것으로 추정된다. 제1 용량에 대한 DLT의 확률은 낮은 것으로 추정된다. 모델 파라미터의 사전 분포의 파라미터는 문헌(Neuenschwander et al (2015))에 기재된 바와 같이 좋지 않은 정보를 제공하는 사전 분포를 구축하는 방법을 기반으로 선택되고, 표 36에서 제공되어 있다.
[표 36]
Figure 112019023638871-pct00303
잠정적 용량 수준은 1.25 mg, 2.5 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 22.5 mg, 30 mg 및 37.5 mg이다. 그러나, 최근에 드러난 안전성 정보에 기반을 둘 때, 시험을 위해 선택된 실제 용량 수준은 잠정적 용량 수준과 상이할 수 있다.
각각의 코호트의 피험자 후, 상이한 용량 수준에서 DLT 비율의 확률에 대한 사후 분포가 수득된다. 이 분석의 결과는 각각의 용량 수준에서 DLT의 진정한 비율이 하기 구간들 각각에 놓여 있을 추정된 확률의 관점에서 요약된다:
Figure 112019023638871-pct00304
[0, 0.16] 과소 투약
Figure 112019023638871-pct00305
[0.16, 0.33] 표적화된 독성
Figure 112019023638871-pct00306
[0.33, 1.00] 과도한 독성
EWOC를 이용한 상승의 원칙에 따라, 각각의 코호트의 피험자 후, 권장된 용량은 EWOC를 충족시키는 용량들 중에서 DLT 비율이 표적 구간(16%, 33%)에 속할 가장 높은 사후 확률을 가진 용량이다. 즉, 상기 용량에서 DLT 비율은 과도한 독성 구간에 속할 가능성이 거의 없다(<25% 사후 확률).
표적화된 독성의 사후 확률을 최대화하는 용량은 MTD의 가장 우수한 추정치이나, 데이터의 양이 불충분한 경우 과다복용 기준에 따른 허용 가능한 용량이 아닐 수 있다는 것을 주목한다. 모호한 사전 정보가 DLT의 확률을 위해 사용되는 경우, 연구의 초기 단계에서 이 상승 절차는 보존적 전략을 반영할 것이다.
적응 베이지안 로지스틱 모델에 의해 권장된 용량은 조사될 다음 용량 수준을 결정하는 데 있어서 분석할 때 관찰된 독성 프로파일의 임상 평가와 통합될 지침 및 정보로서 간주될 수 있다.
화합물 A의 혈장 PK 파라미터, 예컨대, AUC, Cmax, Tmax, t1/2, CL/F 및 Vz/F는 화합물 A의 혈장 농도-시간 프로파일로부터의 비구획적 분석 방법에 의해 계산될 것이다. 다른 PK 파라미터는 적절한 경우 계산될 수 있다.
피험자의 수(N), 평균, 표준 편차(SD), 변동 계수(CV%), 기하 평균, 기하 CV%, 중간치, 최소치 및 최대치를 포함하는, 화합물 A 농도에 대한 요약 통계자료가 공칭 시점, 연구일 및 용량 코호트별로 제공될 것이다. 혈장 농도의 평균 및 개별 도표는 원래의 크기 및 절반-대수적 크기 둘 다로 제공될 것이다. 화합물 A PK 파라미터에 대한 요약 통계자료도 연구일 및 용량 코호트별로 제공될 것이고 표 형태로 제시될 것이다.
혈장 약물 노출 및 기여 인자(공변량)의 개체간 가변성을 조사하기 위해 화합물 A에 대한 집단 PK 분석을 수행할 수 있다. 화합물 A 용량, 혈장 노출 및 선택된 임상 종점(예를 들면, 독성, 효과 및/또는 바이오마커의 측정치) 사이의 관계가 조사될 것이다. 노출-반응에 대한 지식과 함께 집단 PK 모델을 사용하여 파트 B 또는 2 상 연구를 위한 투약 섭생법의 확인을 도울 수 있다.
신경내분비 마커를 포함하는 바이오마커에 대한 기준, 기준 후 값, 및 기준으로부터의 변화 또는 기준으로부터의 퍼센트 변화에 대한 기술 통계자료(N, 평균, SD, 중간치, 최소치 및 최대치)가 용량 코호트(파트 A) 또는 종양 유형(파트 B) 및 방문별로 제공될 것이다.
시간의 경과에 따라 피험자의 바이오마커 결과가 작도될 것이다. 치료 전 및 동안 바이오마커 수준의 비교를 윌콕슨 부호 순위 검정으로 수행할 것이다. 바이오마커 어세이로부터의 충분하고 유효한 결과가 수득될 수 있는 경우, 바이오마커 수준의 퍼센트 변화와, ORR 및 CBR을 포함하는 임상 종점 사이의 관계가 조사될 것이다. 노출-반응에 대한 지식과 함께 집단 PK 모델을 사용하여 파트 B 또는 2 상 연구를 위한 투약 섭생법의 확인을 도울 수 있다.
부작용
AE는 연구의 과정 동안 피험자에서 나타날 수 있거나 악화될 수 있는 임의의 유해한, 의도되지 않은 또는 뜻밖의 의학적 사건이다. 이것은 병인과 관계 없이 새로 중간에 생기는 질병, 악화되는 동반 질병, 상해, 또는 실험실 시험 값을 포함하는, 피험자의 건강의 임의의 동반 손상일 수 있다. 임의의 악화(즉, 기존 상태의 빈도 또는 강도의 임의의 임상적으로 유의미한 불리한 변화)는 AE로서 간주되어야 한다. 진단 또는 증후군의 개별 징후 또는 증상보다는 오히려 진단 또는 증후군이 CRF의 AE 페이지에 기록되어야 한다.
임상시험 제품에 대한 남용, 금단, 민감성 또는 독성은 AE로서 보고되어야 한다. 우발적 또는 의도적 과다복용은 AE와 관련되어 있든 아니면 관련되어 있지 않던 과다복용 CRF에 보고되어야 한다. 임상시험 제품의 우발적 또는 의도적 과다복용의 임의의 후유증은 AE CRF에 AE로서 보고되어야 한다. 과다복용의 후유증이 SAE인 경우, 이 후유증은 SAE 보고서 양식 및 AE CRF에 보고되어야 한다. SAE를 초래하는 과다복용은 SAE 보고서 양식 및 CRF에서 부작용의 원인으로서 확인되어야 하나, SAE 그 자체로서 보고되어서는 안 된다.
과다복용의 경우, 피험자는 적절한 경우 모니터링되어야 하고 필요한 경우 지지 조치를 제공받아야 한다. 화합물 A 과다복용에 대한 공지된 특정 해독제는 없다. 실제 치료는 임상 상황의 중증도, 및 치료 의사의 판단 및 경험에 의존해야 한다.
모든 피험자들은 연구 동안 AE에 대해 모니터링될 것이다. 평가는 하기 파라미터들 중 임의의 또는 모든 파라미터의 모니터링을 포함할 수 있다: 피험자의 임상 증상, 실험실, 병리학적, 방사선학적 또는 수술적 소견, 신체검사 소견, 또는 다른 시험 및/또는 절차로부터의 소견.
모든 AE뿐만 아니라, 화합물 A와 관련되어 있는 것으로 의심되는, 나중에 임의의 시점에서 임상연구원에게 알려진 SAE도 피험자가 사전 동의서에 서명한 때부터 화합물 A의 마지막 용량 후 28일까지 임상연구원에 의해 기록될 것이다. AE 및 SAE는 CRF의 AE 페이지 및 피험자의 원시 문서에 기록될 것이다. 모든 SAE는 임상연구원이 사건을 인식한 지 24시간 이내에 SAE 보고서 양식 또는 승인된 동등한 양식을 사용함으로써 팩시밀리 또는 다른 적절한 방법에 의해 셀진 드러그 세이프티(Celgene Drug Safety)에 보고되어야 한다.
자격을 갖춘 임상연구원은 하기 사항들에 대하여 모든 부작용을 평가할 것이다:
심각성
SAE는
Figure 112019023638871-pct00307
사망을 초래하거나;
Figure 112019023638871-pct00308
생명을 위협하거나(즉, 임상연구원의 견해에 따를 때, 피험자가 AE로 인한 사망의 즉각적인 위험에 있거나);
Figure 112019023638871-pct00309
입원환자 입원 또는 기존 입원의 연장(입원은 체류 기간과 관계 없이 입원환자 허가로서 정의됨)을 요구하거나;
Figure 112019023638871-pct00310
지속적인 또는 상당한 장애/불능(정상 생활 기능을 수행할 피험자의 능력의 실질적인 파괴)을 초래하거나;
Figure 112019023638871-pct00311
선천적 기형/선천적 결손이거나;
Figure 112019023638871-pct00312
중요한 의학적 사건을 구성하는
임의의 용량에서 일어나는 임의의 AE이다.
중요한 의학적 사건은 즉시 생명을 위협할 수 없거나 사망, 입원 또는 장애를 초래할 수 없으나, 피험자를 위태롭게 할 수 있거나 상기 나열된 다른 결과들 중 하나를 예방하기 위해 의학적 또는 수술적 시술을 요구할 수 있는 사건으로서 정의된다. 이러한 AE가 심각한 것으로서 간주되는 지를 결정하는 데 있어서 의학적 및 과학적 판단이 발휘되어야 한다.
SAE로서 간주되지 않는 사건은 하기 목적을 위한 입원이다:
Figure 112019023638871-pct00313
프로토콜 요법 투여를 위한 표준 절차. 그러나, 요법 투여의 합병증으로 인한 입원 또는 연장된 입원은 SAE로서 보고될 것이다.
Figure 112019023638871-pct00314
임의의 상태 악화와 관련되지 않은 연구된 적응증의 통상적인 치료 또는 모니터링.
Figure 112019023638871-pct00315
연구된 적응증의 통상적인 치료로서 혈액 또는 혈소판 수혈의 투여. 그러나, 이러한 수혈의 합병증으로 인한 입원 또는 연장된 입원은 보고 가능한 SAE로 남아 있다.
Figure 112019023638871-pct00316
프로토콜/질환 관련 연구를 위한 절차(예를 들면, 수술, 스캔, 내시경, 실험실 시험을 위한 샘플링, 골수 샘플링). 그러나, 이러한 절차의 합병증으로 인한 입원 또는 연장된 입원은 보고 가능한 SAE로 남아 있다.
Figure 112019023638871-pct00317
AE의 부재 하에서 기술적, 실용적 또는 사회적 이유로 인한 입원 또는 입원의 연장.
Figure 112019023638871-pct00318
계획된(즉, 연구 중인 치료의 시작 전에 계획된) 절차는 원시 문서 및 CRF로 문서화되어야 한다. 합병증으로 인한 입원 또는 연장된 입원은 보고 가능한 SAE로 남아 있다.
Figure 112019023638871-pct00319
기준으로부터 악화되지 않은, 연구된 적응증과 관련 없는, 기존 상태를 위한 선택적 절차의 선택적 치료.
Figure 112019023638871-pct00320
상기 다른 심각성 기준을 충족시키지 않는 한, 입원을 초래하지 않는 응급 외래환자 치료 또는 관찰소견.
AE가 심각한 AE로서 간주되는 경우, CRF 및 SAE 보고서 양식의 AE 페이지/스크린 둘 다가 기입되어야 한다.
각각의 SAE에 대해, 임상연구원은 중증도, 시작일 및 중단일, IP와의 관계, IP에 대해 취해진 조치 및 결과에 대한 정보를 제공할 것이다.
중증도/강도
AE 및 SAE 둘 다에 대해, 임상연구원은 부작용의 중증도/강도를 평가해야 한다. AE의 중증도/강도는 부작용에 대한 일반 용어 기준의 현재 유효한 부버전(CTCAE, 버전 4.0)(http://ctep.cancer.gov/protocolDevelopment/electronic_applications/ ctc.htm#ctc_40)에 따라 피험자의 증상을 기반으로 등급화될 것이다.
CTCAE에서 정의되어 있지 않은 AE는 하기 등급에 따라 중증도/강도에 대해 평가되어야 한다:
Figure 112019023638871-pct00321
1 등급 = 경증 - 일시적인 또는 경미한 불편함; 활동의 제한 없음; 요구된 의학적 시술/요법 없음.
Figure 112019023638871-pct00322
2 등급 = 중등도 - 활동의 경미한 내지 중증도 제한, 약간의 보조가 필요할 수 있음; 요구된 의학적 시술/요법이 없거나 최소한으로 있음.
Figure 112019023638871-pct00323
3 등급 = 중증 - 활동의 현저한 제한, 약간의 보조가 통상적으로 요구됨; 의학적 시술/요법이 요구됨, 입원이 가능함.
Figure 112019023638871-pct00324
4 등급 = 생명 위협 - 극도의 활동 제한, 상당한 보조가 요구됨; 상당한 의학적 시술/요법이 요구됨, 입원 또는 호스피스 케어가 가능함.
Figure 112019023638871-pct00325
5 등급 = 사망 - 사망을 야기하는 부작용.
용어 "중증"은 (경증, 중등도 또는 중증 심근경색과 같은) 특정 부작용의 강도를 기술하기 위해 종종 사용되나; 부작용 그 자체는 의학적 유의성이 상대적으로 작을 수 있다(예컨대, 중증 두통). 이 기준은 피험자/부작용 결과 또는 조치 기준에 기반을 둘 때 피험자의 삶 또는 활동에 위협을 가하는 부작용과 관련된 "심각한"과 동일하지 않다.
중증이 아닌 심각함은 규제 의무를 정의하기 위한 지침으로서 사용된다.
인과관계
임상연구원은 IP의 투여와, 하기 정의된 "의심되지 않는" 또는 "의심되는"으로서의 AE/SAE의 발생 사이의 관계를 확인해야 한다:
의심되지 않는: 부작용과 IP 투여의 인과관계가 거의 없거나 멀거나, 다른 약물, 치료적 시술 또는 기저 상태가 관찰된 부작용에 대한 충분한 설명을 제공한다.
의심되는: IP의 투여가 부작용을 야기할 합당한 가능성이 있다. '합당한 가능성'은 IP와 부작용 사이의 인과관계를 암시하는 증거가 있다는 것을 의미한다.
현재 이용 가능한 정보를 기반으로 모든 AE/SAE에 대한 인과관계가 평가되고 제공되어야 한다. 추가 정보가 이용 가능해질 때 인과관계가 재평가되고 제공되어야 한다.
부작용이 비교대상, 즉 셀진에 의해 제조되지 않았거나 제공되지 않은 보조 또는 추가 CC-90011과 관련되어 있는 것으로 의심되는 것으로서 평가되는 경우, 부작용을 보고할 때 제조자의 이름을 제공해야 한다.
지속시간
AE 및 SAE 둘 다에 대해, 임상연구원은 부작용의 시작일 및 중단일의 기록을 제공할 것이다.
취해진 조치
임상연구원은 적용 가능한 경우 AE 또는 SAE의 결과로서 IP에 의해 취해진 조치(예를 들면, 적당한 경우 IP의 중단, 단절 또는 용량 감소)를 보고할 것이고 부작용에 대한 병행 및/또는 추가 치료가 제공되었는 지를 보고할 것이다.
결과
임상연구원은 AE 및 SAE 둘 다에 대해 부작용의 결과를 보고할 것이다.
피험자가 연구에 참여하는 것을 중단하였을 때 해소되지 않은 모든 SAE는 회복될(기준으로 복귀될) 때까지, 후유증을 남기면서 회복될 때까지, 또는 (SAE로 인해) 사망할 때까지 추적조사되어야 한다.
비정상적인 실험실 값은 비정상이
Figure 112019023638871-pct00326
연구로부터의 중단을 초래하는 경우;
Figure 112019023638871-pct00327
치료, 화합물 A 용량의 변형/중단, 또는 임의의 다른 치료적 시술을 요구하는 경우; 또는
Figure 112019023638871-pct00328
상당히 임상적으로 중요한 것으로 판단되는 경우, 예를 들면, 새로운 질환 과정 및/또는 장기 독성을 표시하거나, 기존 상태의 항진 또는 악화인 경우
AE인 것으로서 간주된다.
중증도 등급과 관계 없이, 심각성 기준을 충족시키는 실험실 비정상만이 심각한 부작용으로서 문서화될 필요가 있다.
실험실 비정상이 진단 또는 증후군의 한 구성요소인 경우, 진단 또는 증후군만이 CRF의 AE 페이지/스크린에 기록되어야 한다. 비정상이 진단 또는 증후군의 일부가 아닌 경우, 실험실 비정상은 AE로서 기록되어야 한다. 가능한 경우, 실험실 비정상은 의학 용어로 기록되어야 하고 단순히 비정상적인 실험실 결과로서 기록되어서는 안 된다(예를 들면, 감소된 혈소판보다는 오히려 혈소판감소증으로서 기록되어야 한다).
가임 여성 피험자, 또는 남성 피험자의 가임 파트너에서 발생하는 모든 임신 또는 의심되는 임신은 즉시 보고될 수 있는 사건이다. 화합물 A에의 임의의 임신 여성(예를 들면, 간병인, 약사, 연구 책임자 또는 모니터)의 노출도 즉시 보고될 수 있는 사건이다.
피험자가 화합물 A를 복용하는 동안 또는 화합물 A의 피험자의 마지막 용량 후 90일 이내에 일어나는 임신 및 의심되는 임신(질환 상태와 관계 없이 가임 여성 피험자에서의 상승된 β-hCG 또는 양성 임신 시험을 포함함)은 즉시 보고될 수 있는 사건으로서 간주된다. 임상시험 제품은 즉시 중단되어야 한다. 임신, 의심되는 임신 또는 양성 임신 시험은 임신 초기 보고서 양식 또는 승인된 동등한 양식을 사용함으로써 이메일, 전화 또는 팩시밀리, 또는 다른 적절한 방법에 의해 셀진 드러그 세이프티에 즉시 보고되어야 한다.
여성 피험자는 추가 평가 및 상담을 위해 산부인과-부인과 의사, 바람직하게는 생식 독성 분야에서 경험을 가진 산부인과-부인과 의사에게 위탁되어야 한다. 임상연구원은 임신이 완료될 때까지 여성 피험자를 추적조사할 것이고, 임신 추적조사 보고서 양식 또는 승인된 동등한 양식을 사용하여 임신 결과(정상적인 또는 비정상적인 결과)에 대해 셀진 드러그 세이프티에 즉시 통보해야 한다.
임신의 결과가 비정상적인 경우(예를 들면, 자연 유산), 임상연구원은 비정상적인 결과를 AE로서 보고해야 한다. 비정상적인 결과가 심각성 기준 중 임의의 기준을 충족시키는 경우, 이 결과는 임상연구원이 사건을 안 지 24시간 이내에 SAE 보고서 양식 또는 승인된 동등한 양식을 사용함으로써 팩시밀리 또는 다른 적절한 방법에 의해 셀진 드러그 세이프티에 SAE로서 보고되어야 한다.
출생한 지 28일 이내에 일어나는 모든 신생아 사망은 인과관계와 관계 없이 SAE로서 보고되어야 한다. 추가로, 임상연구원이 화합물 A에의 자궁 노출과 관련된 것으로 의심하는 28일 후 임의의 유아 사망도 임상연구원이 사건을 안 지 24시간 이내에 SAE 보고서 양식 또는 승인된 동등한 양식을 사용함으로써 팩시밀리 또는 다른 적절한 방법에 의해 셀진 드러그 세이프티에 보고되어야 한다.
화합물 A를 복용하는 남성 피험자의 여성 파트너가 임신한 경우, 화합물 A를 복용하는 남성 피험자는 임상연구원에게 통보해야 하고, 임신 여성 파트너는 즉시 그의 건강관리 제공자에게 전화하라는 조언을 받아야 한다. 적절한 경우, 화합물 A는 남성 피험자에서 중단될 필요가 있을 수 있으나, 임상연구원 및 의료 모니터의 재량으로 나중에 재개될 수 있다.
SAE에 대한 임의의 기준을 충족시키는 임의의 AE는 CRF의 AE 페이지/스크린에 기록되는 것 이외에 SAE 보고서 양식의 작성을 요구한다. 모든 SAE는 임상연구원이 사건을 안 지 24시간 이내에 SAE 보고서 양식 또는 승인된 동등한 양식을 사용함으로써 팩시밀리 또는 다른 적절한 방법(예를 들면, 이메일)에 의해 셀진 드러그 세이프티에 보고되어야 한다. 이 지시는 초기 SAE 보고서뿐만 아니라 임의의 추적조사 보고서와 관련된다.
임상연구원은 이 양식 상의 데이터가 정확하고 일치한다는 것을 보장하도록 요구받는다. 이 요건은 (피험자가 사전 동의서에 서명한 때부터 화합물 A의 마지막 용량 후 28일까지) 연구 동안 발생하는 모든 SAE(화합물 A와의 관련성과 관계 없이), 또는 화합물 A와 관련된 것으로 의심되는, 그 후 임의의 시점에서 임상연구원에게 알려진 임의의 SAE에 적용된다. (ICD에 서명한 후) 치료 전에 발생하는 심각한 부작용은 포착될 것이다.
SAE 보고서는 SAE의 상세한 설명을 제공해야 하고 병원 기록의 간결한 요약 및 다른 관련 문서를 포함해야 한다. 피험자가 사망하였고 부검이 수행된 경우, 부검 보고서 및 사망 증명서의 복사본은 이들이 입수될 수 있자마자 셀진 드러그 세이프티로 보내져야 한다. 임의의 추적조사 데이터는 후속 SAE 보고서 양식 또는 승인된 동등한 양식에 상세히 기재되어야 하고 셀진 드러그 세이프티로 보내져야 한다.
현지 법률에 의해 요구되는 경우, 임상연구원은 SAE를 임상시험 심의 위원회/윤리 위원회(IRB/EC)에게 알리고 부작용에 관한 모든 관련된 초기 및 추적조사 정보를 이들에게 제공할 책임이 있다. 임상연구원은 셀진 및 IRB/EC와의 서신을 포함하는 모든 SAE 정보의 사본을 파일 형태로 보관해야 한다.
SAE와 관련된 질문은 팩시밀리 또는 전자 메일을 통해 셀진 드러그 세이프티로부터 현장으로 전달될 것이다. 응답 시간은 오(5)일 이하의 영업일일 것으로 예상된다. 긴급 질문(예를 들면, 인과관계 평가의 누락)은 전화에 의해 다루어질 수 있다.
규제 보고를 목적으로, 셀진 드러그 세이프티는 임상연구원 브로셔를 기반으로 화합물 A와 관련된 것으로 의심되는 부작용의 예측도를 결정할 것이다.
미국에서, 모든 의심되는 예상외의 심각한 불리한 반응(SUSAR)은 21 CFR 312.32에 따라 신속처리 방식으로 보고될 것이다.
유럽 경제 지역(EEA) 내의 국가들의 경우, 셀진 또는 이의 권한을 부여받은 대표는 디렉티브(Directive) 2001/20/EC, 및 인간 사용을 위한 임상시험 제품에 대한 임상시험으로부터 비롯된 불리한 반응 보고의 수집, 검증 및 제시에 대한 상세한 지침(ENTR/CT3)에 따라, 그리고 또한 국가 특이적 요건에 따라 의심되는 예상외의 심각한 불리한 반응(SUSAR)을 관련된 규제 관청 및 윤리 위원회에 신속처리 방식으로 보고할 것이다.
질환 진행, (심각한 화합물 A 관련 부작용의 부재 하에서) 질환 진행과 관련된 사망, 및 연구된 적응증의 재발로 인한 심각한 부작용과 같은 부작용은 의뢰자에 의해 규제 관청에 신속처리 방식으로 보고되지 않을 것이다.
셀진 또는 이의 권한을 부여받은 대표는 하기 정보를 임상연구원에게 통보할 것이다:
Figure 112019023638871-pct00329
이 연구 또는 다른 연구에서 화합물 A의 사용과 관련된 것으로 의심되는, 심각하고 예상되지 않은 임의의 AE(예를 들면, SUSAR);
Figure 112019023638871-pct00330
돌연변이유발성, 최기성 또는 발암성의 보고를 포함하는, 인간 피험자에 대한 상당한 위험을 암시하는, 실험실 동물의 시험으로부터의 임의의 소견.
현지 법률에 의해 요구되는 경우, 임상연구원은 심각하고 예상되지 않은 이 새로운 AE(들), 또는 피험자에의 상당한 위험을 그/그녀의 IRB/EC에 즉시 통보할 것이다.
임상연구원은 셀진 및 IRB/EC와의 서신을 포함하는 모든 관련된 안전성 정보의 사본을 파일 형태로 보관해야 한다.
중단
하기 사건들은 피험자가 임상시험 제품(들)을 중단해야 하는 충분한 이유로서 간주된다:
Figure 112019023638871-pct00331
부작용
Figure 112019023638871-pct00332
피험자에 의한 철회
Figure 112019023638871-pct00333
효능의 결여
Figure 112019023638871-pct00334
의사 결정
Figure 112019023638871-pct00335
프로토콜 위반
Figure 112019023638871-pct00336
진행성 질환
Figure 112019023638871-pct00337
사망
Figure 112019023638871-pct00338
추적조사로부터의 누락
Figure 112019023638871-pct00339
(CRF 상에 특정될) 기타 이유
치료 중단에 대한 이유는 CRF 및 원시 문서로 기록되어야 한다. 부작용 후 치료 중단의 경우, 화합물 A의 마지막 용량 후 28일 동안 피험자를 추적조사하기 위해 모든 노력을 기울일 것이다.
의뢰자에 의해 지연되지 않거나 거절되지 않을, 피험자를 치료하는 것을 중단하기로 하는 결정은 치료 의사의 책임으로 남아 있다. 그러나, 피험자를 중단시키기 전에, 임상연구원은 의료 모니터와 접촉할 수 있고 검토 및 논의를 위해 적절한 근거 문서를 보낼 수 있다.
주: 임상적으로 유의미하다고 느껴지는 임의의 실험실 결과, 예컨대, 호중구감소증, 혈소판감소증, 다른 비정상 등은 기준 또는 1 등급으로 복귀될 때까지 추적조사되어야 한다.
하기 사건은 피험자를 연구로부터 중단시킬 만한 충분한 이유로서 간주된다:
Figure 112019023638871-pct00340
스크린 실패
Figure 112019023638871-pct00341
피험자에 의한 철회
Figure 112019023638871-pct00342
효능의 결여
Figure 112019023638871-pct00343
의사 결정
Figure 112019023638871-pct00344
프로토콜 위반
Figure 112019023638871-pct00345
진행성 질환
Figure 112019023638871-pct00346
사망
Figure 112019023638871-pct00347
추적조사로부터의 누락
Figure 112019023638871-pct00348
(CRF 상에 특정될) 기타 이유
연구 중단에 대한 이유는 CRF 및 원시 문서로 기록되어야 한다.
응급 절차
응급 상황에서, 임상연구원은 (표제 페이지 다음의) 프로토콜의 응급 접촉 정보 페이지에 나열된 번호(들)로 전화하여 의뢰자의 책임 연구 의사/의료 모니터 또는 피지명자와 접촉해야 한다.
혹시라도 의뢰자의 연구 의사/의료 모니터 또는 피지명자와 연락될 수 없는 경우에는, (표제 페이지 다음의) 프로토콜의 응급 접촉 정보 페이지에 나열된 번호로 전화하여 광역 응급 콜 센터와 접촉해야 한다. 이 광역 응급 콜 센터는 주당 7일 동안 하루에 24시간 이용 가능하다. 대표는 피험자의 답신전화 정보를 입수하고 나중에 피험자와 즉시 접촉할 긴급대기 셀진/계약 연구 기관 의료 모니터와 접촉할 책임이 있다.
주: 예비(back-up) 24시간 광역 응급 접촉 콜 센터는 피험자가 응급 통화를 위해 의뢰자의 연구 의사(들) 또는 의료 모니터 또는 피지명자와 연락이 닿을 수 없는 경우에만 이용되어야 한다.
이것은 개방-표지 연구이므로, 화합물 A는 팩키지 표지 상에서 확인될 것이다. 이 연구에 등록된 피험자는 이 연구의 명칭 및 응급 접촉 번호를 보여주는 식별 카드를 발행받을 것이다. 이것은 연구에 참여하는 피험자에 관한 응급 정보를 찾는 건강관리 전문가에 의해 이용될 수 있다.
규제 고려사항
이 연구의 수행, 평가 및 문서화와 관련된, 이 연구 프로토콜에 기재된 절차는 셀진, 이의 권한을 부여받은 대표 및 임상연구원이 국제 규제조화 합의체(ICH) 지침 E6에 기재된 임상시험 실시기준(GCP) 및 헬싱키 선언에 요약된 일반적인 윤리 원칙을 준수한다는 것을 보장하도록 디자인된다. 연구는 시작 전에 IRB/EC로부터 승인을 받을 것이다. 임상연구원은 관련된 규제 관청의 적용 가능한 국가, 주 및 현지 법률에 따라 이 연구의 모든 양태들을 수행할 것이다.
임상연구원의 책임은 임상시험 실시기준에 대한 ICH 지침 및 현지 규정에 기재되어 있다. 셀진 직원 또는 권한을 부여받은 대표는 그들의 직원을 선택할 모든 임상연구원들을 평가하고 승인할 것이다.
임상연구원은 연구를 보조하는 모든 사람들이 프로토콜, 수정안, 연구 치료뿐만 아니라, 셀진 정보의 비밀유지 의무를 포함하는 연구 관련 의무 및 직무에 대해서도 충분히 안다는 것을 보장해야 한다. 임상연구원은 그가 또는 그녀가 상당한 연구 관련 의무를 위임한 보조 임상연구원 및 다른 적절한 자격을 갖춘 사람의 목록을 유지해야 한다.
임상연구원은 사전 동의서 양식(ICD)에 서명하고 연구에의 참여를 위해 스크리닝된 모든 피험자들의 기록을 보관할 책임이 있다. 스크리닝에 실패한 피험자는 피험자의 원시 문서에 기록된 이유(들)를 가져야 한다.
임상연구원, 또는 임상연구원의 직원의 지정된 구성원은 데이터를 검토하고 질문을 해결하고 원시 데이터 검증을 위해 피험자 기록(예를 들면, 의료 기록, 사무실 차트, 병원 차트 및 연구 관련 차트)에의 직접적인 접근을 허용하기 위해 모니터링 방문 동안 이용될 수 있어야 한다. 임상연구원은 CRF 및 질문의 시기적절한 및 정확한 작성을 보장해야 한다.
프로토콜 및 수정안에 함유된 정보(공용 등록 웹사이트 상에서 셀진에 의해 제공된 정보를 제외함)는 셀진 비밀유지 정보로서 간주된다. 공용 등록 웹사이트 상에서 셀진에 의해 이미 개시된 정보만이 임상연구원 또는 이의 기관에 의해, 또는 임상시험 동의서에 요약된 바와 같이 자유롭게 개시될 수 있다. 셀진 프로토콜, 수정안 및 IB 정보는 셀진으로부터의 속달 서면 승인 없이 (예를 들면, 임상연구원 또는 그의 기관의 웹사이트 상에서) 공개적으로 이용 가능하게 되어서는 안 된다. 임상연구원 또는 그의 기관의 웹사이트 상에 포스팅하도록 제안된 정보는 검토를 위해 적어도 5일의 영업일을 제공하면서 검토 및 승인을 위해 셀진에게 제출되어야 한다.
이 연구의 결과가 공개적으로 이용 가능해졌을 때, 셀진은 비전문가를 위해 작성된 결과의 요약을 임상연구원에게 제공할 것이다. 임상연구원은 피험자의 동의를 받았을 때 피험자 및/또는 그의 간병인과 이 결과를 공유할 책임이 있다.
임상연구원은 임의의 연구 관련 절차 전에 피험자 및/또는 피험자의 법률 대리인의 사전 동의서를 입수해야 한다.
연구 피험자가 연구에 참여하기 전에 얻은 사전 동의 및 사전 동의 과정의 문서화는 날짜를 포함하는, 연구 피험자의 원시 문서로 기록되어야 한다. 연구 피험자가 연구에 참여하기 전에 연구 피험자 및 연구 피험자의 동의를 얻은 사람에 의해 서명되고 날짜가 기입된 원본 ICD는 임상연구원의 연구 파일에 유지되어야 하고 사본은 연구 피험자에게 제공되어야 한다. 추가로, 프로토콜이 수정되고 사전 동의서의 내용에 영향을 미치는 경우, ICD는 개정되어야 한다. 수정된 프로토콜이 실행될 때 연구에 참여하는 연구 피험자는 ICD의 개정된 버전에 재동의해야 한다. 연구 피험자 및 연구 피험자의 동의를 얻은 사람에 의해 서명되고 날짜가 기입된 개정된 ICD는 임상연구원의 연구 파일에 유지되어야 하고 사본은 연구 피험자에게 제공되어야 한다.
셀진은 사생활 침해로부터 보호에 대한 피험자의 권리, 및 ICH 및 다른 현지 규정(이들 중 가장 엄격한 것)의 준수를 확인한다. 셀진은 셀진의 대표 및, 필요할 때, 규제 관청의 대표가 현지 법률에 따라 연구와 관련된 임의의 의료 기록을 검토하고/하거나 복사하는 것을 허용할 것을 임상연구원에게 요청한다.
의료 기록에의 직접적인 접근이 피험자에 의해 서명된 ICD와 별개로 포기 또는 허가를 요구하는 경우, 적절한 개인으로부터의 작성에 있어서 이러한 허가를 받는 것은 임상연구원의 책임이다.
이 프로토콜에 대한 임의의 수정은 의뢰자의 연구 의사/의료 모니터에 의해 승인되어야 한다. 수정은 작성된 승인서를 위해 IRB/EC에 제출될 것이다. 작성된 승인서는 수정된 버전이 실행되기 전에 입수되어야 한다. IRB/EC로부터의 작성된 서명된 승인서는 구체적으로 적용 가능한 임상연구원 이름, 프로토콜 번호, 연구 제목 및 수정안 번호(들)를 언급해야 한다. 성질 면에서 행정적 수정안인 수정안은 IRB/IEC 승인을 요구하지 않으나, 정보 목적을 위해 IRB/IEC에 제출될 것이다.
연구에서 실질적인 수정이 있는 경우, 상응하는 수정안은 각각의 국가의 권한이 있는 규제 관청에 제출될 것이고, 승인될 때까지 실행되지 않을 것이다.
연구를 시작하기 전에, 연구 프로토콜, ICD 및 임의의 다른 적절한 문서는 제출된 문서, 이의 발행일, 및 현지 법률 요건인 승인을 받을 장소(또는 적용 가능한 경우 관할 지역 또는 영역)를 나열하는 표지 또는 양식과 함께 IRB/EC에 제출될 것이다.
연구를 시작하기 위한 모든 윤리적 및 법률적 요건들에 대한 문서화가 셀진 또는 이의 권한을 부여받은 대표에 의해 제공받은 후, IP만이 셀진 또는 이의 권한을 부여받은 대표에 의해 임상연구원에게 공급될 수 있다. 이 문서화는 IRB/EC의 구성원들 및 이들의 직위 및 자격의 목록도 포함해야 한다. IRB/EC가 위원회 구성원의 이름, 직위 및 자격을 개시하지 않을 경우, 위원회의 구성이 GCP를 준수한 것임을 확인시켜주는 문구를 발행할 것을 요청해야 한다. 예를 들면, IRB 일반 보증 번호는 이 목록에 대한 대체물로서 받아들여질 수 있다. IRB/EC에 의한 공식 승인서는 프로토콜 제목, 번호, 수정안 번호(적용 가능한 경우), 연구 장소(또는 적용 가능한 경우 관할 지역 또는 영역), 및 검토된 임의의 다른 문서를 언급해야 한다. 상기 승인서는 결정이 내려진 날짜를 언급해야 하고 위원회 구성원에 의해 공식적으로 서명되어야 한다. 첫 번째 피험자가 연구에 등록되기 전에, 모든 윤리적 및 법률적 요건들이 충족되어야 한다.
IRB/EC 및, 적용 가능한 경우, 관청은 현지 법률 요건에 따라 모든 후속 프로토콜 수정안을 안내받아야 한다. 공식 승인을 받아야 하는 지, 및 ICD도 개정해야 하는 지를 확인하기 위해 수정안을 평가해야 한다.
임상연구원은 IRB/EC와의 모든 통신 및, 적용 가능한 경우, 조정 임상연구원과 IRB/EC 사이의 모든 통신의 기록을 보관해야 한다. 이 문장은 임상연구원(또는 적용 가능한 경우 조정 임상연구원)과 규제 관청 사이의 임의의 통신에도 적용된다.
연구를 위해 피험자를 모집하는 데 이용된 광고는 사용 전에 셀진 및 IRB/EC에 의해 검토되어야 한다.
법률 또는 IRB/EC에 의해 요구된 경우, 임상연구원은
Figure 112019023638871-pct00349
가능한 신속히 심각한 또는 예상되지 않은 부작용에 대한 정보;
Figure 112019023638871-pct00350
연구의 진행에 대한 주기적 보고;
Figure 112019023638871-pct00351
프로토콜로부터의 이탈, 또는 피험자에의 추가된 위험을 수반할 수 있는 임의의 상황
을 IRB/EC에 제출해야 한다.
셀진은 타당한 의학적 또는 행정적 이유로 임의의 시점에서 이 연구를 조기에 종결시킬 권리를 유보한다. 임의의 조기 중단은 현지 요건(예를 들면, IRB/EC, 규제 관청 등)에 따라 적절히 문서화될 것이다.
추가로, 임상연구원 또는 셀진은 의학적 또는 행정적 이유, 예컨대,
Figure 112019023638871-pct00352
불만족스러운 등록;
Figure 112019023638871-pct00353
GCP 비준수;
Figure 112019023638871-pct00354
부정확한 또는 불완전한 데이터 수집;
Figure 112019023638871-pct00355
기록의 위조;
Figure 112019023638871-pct00356
연구 프로토콜 준수 실패
로 인해 연구 동안 임의의 시점에서 단일 장소를 중단할 권리를 가진다.
데이터 취급 및 기록 보관
임상연구원은 연구의 수행 및 임상시험 제품의 배포에 관한 기록 및 문서가 완전하고 정확하고 파일링되고 유지된다는 것을 보장해야 한다. 원시 문서의 예로는 병원 기록; 진료실 및 사무실 차트; 실험실 노트; 비망록; 피험자의 일기 또는 평가 체크목록; 분배 기록; 자동화된 기계로부터의 기록된 데이터; 검증 후 정확한 사본인 것으로 인증된 사본 또는 필사본; 마이크로피시(microfiche); x-선 필름 및 보고서; 및 약국 및 실험실에 보관된 기록물뿐만 아니라, CRF 또는 CD-ROM의 사본도 있다.
데이터는 CRF를 통해 수집되고 셀진 SOP에 따라 임상 데이터베이스 내로 입력될 것이다. 이 데이터는 임상 팀에 의해 특정된 프로그래밍된 편집 체크의 이용을 통해 전자적으로 검증될 것이다. 데이터의 불일치는 필요한 경우 임상 팀 및 임상시험 장소 직원의 주의를 끌 것이다. 이 문제점에 대한 해결은 데이터베이스에 반영될 것이다. 시스템 내의 감사 추적은 데이터에 대해 만들어진 모든 변화들을 추적할 것이다.
필수 문서는 임상시험 동의서에 요약된 기간에 따라 임상연구원에 의해 보유되어야 한다. 임상연구원은 위에 기재된 기간 동안 또는 현지 법률 또는 요건에 따라(이들 중 더 긴 기간) 이 문서를 보유해야 한다. 필수 문서는 하기 문서들을 포함하나 이들로 한정되지 않는다:
Figure 112019023638871-pct00357
모든 피험자들에 대한 서명된 ICD;
Figure 112019023638871-pct00358
피험자 식별 코드 목록, 스크리닝 로그(적용 가능한 경우) 및 등록 로그;
Figure 112019023638871-pct00359
임상연구원과 IRB/EC 사이의 모든 통신의 기록;
Figure 112019023638871-pct00360
IRB/EC의 구성;
Figure 112019023638871-pct00361
임상연구원, 셀진 및 이들의 권한을 부여받은 대표(들) 사이의 모든 통신의 기록;
Figure 112019023638871-pct00362
연구에서의 그들의 역할, 이력서 및 그들의 서명과 함께, 임상연구원이 유의미한 연구 관련 의무를 위임한 보조 임상연구원 및 다른 적절한 자격을 갖춘 사람들의 목록;
Figure 112019023638871-pct00363
모든 피험자들에 대한 CRF(종이인 경우) 및 수정 문서의 사본;
Figure 112019023638871-pct00364
IP 책임 기록;
Figure 112019023638871-pct00365
보유된 임의의 체액 또는 조직 샘플의 기록;
Figure 112019023638871-pct00366
모든 다른 원시 문서(피험자 기록, 병원 기록, 실험실 기록 등);
Figure 112019023638871-pct00367
GCP에 대한 ICH 통합 지침의 단락 8에 나열된 모든 다른 문서들(임상시험의 수행을 위한 필수 문서들).
임상연구원은 그/그녀가 필수 문서를 다른 누군가에게 맡기고자 하거나, 이 문서를 또 다른 위치로 내보내고자 하거나, 특정된 기간 동안 이 문서를 보유할 수 없는 경우 셀진에게 통보해야 한다. 임상연구원은 임의의 기록의 파괴 전에 셀진으로부터 작성된 승인서를 입수해야 한다. 임상연구원이 이 의무를 충족시킬 수 없는 경우, 임상연구원은 대안적 배정을 하는 것을 허락하도록 셀진에게 요청해야 한다. 이 배정의 세부사항은 문서로 작성되어야 한다.
모든 연구 문서들은 관련 보건 관청에 의해 요구되는 경우 이용 가능해져야 한다. 임상연구원 또는 기관은 이 문서들의 우발적 또는 조기 파괴를 방지하는 조치를 취해야 한다.
품질 조절 및 품질 보증
연구의 모든 양태들은 현재의 GCP 및 SOP와 관련하여 적용 가능한 정부 규정을 준수하는 지에 대해 셀진 또는 이의 권한을 부여받은 대표에 의해 신중히 모니터링될 것이다.
셀진은 적절한 모니터링 절차가 연구 전, 동안 및 후에 수행된다는 것을 보장한다. 연구의 모든 양태들은 연구 시작 방문 및/또는 임상연구원의 회의에서 임상연구원 및 직원과 함께 검토된다. 피험자를 연구에 등록시키기 전에, 셀진 대표는 프로토콜, CRF, 사전 동의를 얻기 위한 절차, 기록 보관, 및 임상연구원을 통한 AE/SAE의 보고를 검토할 것이다. 모니터링은 임상연구원 및 그/그녀의 직원에 의한 현장 방문뿐만 아니라, 메일, 이메일, 팩스 또는 전화에 의한 임의의 적절한 통신도 포함할 것이다. 모니터링 방문 동안, 시설, 임상시험 제품 저장 장소, CRF, 피험자의 원시 문서 및 모든 다른 연구 문서가 연구 모니터링 계획에 따라 셀진 대표에 의해 조사/검토될 것이다.
정확성은 CRF 상에 만들어진 입력항목과 적절한 원시 문서를 직접적으로 비교하는 원시 데이터 검증을 수행함으로써 확인될 것이다. 확인된 임의의 불일치는 임상연구원 및/또는 그/그녀의 직원에 의해 검토될 것이다. 임의의 필요한 수정은 CRF에 직접적으로 만들어지거나, 임상연구원 및/또는 그/그녀의 직원에 의한 질문을 통해 만들어질 것이다. 모니터링 절차는 사전 동의, 포함/배제 기준 준수, 및 SAE의 문서화 및 이의 적절한 기록이 검증될 것을 요구한다. 추가 모니터링 활동은 연구 특이적 모니터링 계획에 요약될 수 있다.
통상적인 모니터링 절차 이외에, 임상시험 실시기준 품질 보증 유닛이 셀진 내에 존재한다. 이 유닛의 대표는 임상시험 실시기준 지침 및 규정의 준수를 평가하기 위해 셀진 SOP에 따라 임상 연구 활동의 감사를 수행할 것이다.
임상연구원은 IRB/EC, 규제 관청(예를 들면, FDA, EMA, 헬쓰 캐나다(Health Canada)) 및 회사로부터 권한을 부여받은 대표에 의한 감사 및 조사를 위해 연구가 수행된 시설, 원시 문서, CRF 및 연구 피험자 참여의 적용 가능한 근거 기록에 직접 접근하는 것을 허용하도록 요청받는다. 임상연구원은 상기 감사 및/또는 조사를 위해 이용될 수 있도록 모든 노력을 해야 한다. 임상연구원이 조사에 대한 임의의 규제 관청과 접촉하는 경우, 그/그녀는 셀진과 즉시 접촉해야 한다.
공개문헌
공용 등록 웹사이트 상에서 셀진에 의해 제공된 정보를 제외한 모든 프로토콜 및 수정 관련 정보는 셀진 비밀유지 정보로서 간주되고 임의의 공개문헌에서 사용되어서는 안 된다. 공개문헌에서 사용되도록 제안된 셀진 프로토콜 관련 정보는 검토 및 승인을 위해 셀진에 제출되어야 하고, 셀진으로부터의 속달 서면 승인 없이 또는 임상시험 동의서에 기재된 바와 같이 공개문헌에서 사용되어서는 안 된다.
셀진은 셀진-의뢰 연구를 결과와 관계 없이 동료 심사 학술지(peer-reviewed journal)의 과학 문헌에서 공개하는 것을 고려한다는 것을 보장할 것이다. 최소한, 이것은 모든 3 상 임상 연구로부터의 결과, 및 상당히 의학적으로 중요한 임의의 다른 연구 결과에 적용된다. 이것은 개발 프로그램이 중단된 임상시험 의약과 관련된 결과도 포함한다.
연구 결과는 하나 이상의 의학 회의에 제공될 수도 있고, 과학적 교환 및 교육 목적으로 사용될 수 있다. 추가로, 이 연구 및 이의 결과는 현지 보건 관청 규정에 의해 요구될 때 보건 관청 연구 등록 웹사이트 상에서의 공개뿐만 아니라 모든 적절한 보건 관청 연구 등록서에 포함되도록 제출될 수 있다.
첫 번째 저자의 선택뿐만 아니라 외부 저자에 대한 적격성도 프로토콜 개발에의 기여, 연구 모집, 데이터 품질, 데이터 분석에의 참여, 연구 운영 위원회(적용 가능할 때)에의 참여, 및 초록, 발표 및/또는 공개 개발에의 기여를 포함하나 이들로 한정되지 않는 여러 고려사항에 기반을 둘 것이다.
부록 A: 약어 표
Figure 112019023638871-pct00368
Figure 112019023638871-pct00369
Figure 112019023638871-pct00370
Figure 112019023638871-pct00371
부록 B: RECIST 버전 1.1
하기 정보는 고형 종양의 새로운 반응 평가 기준(Eisenhauer, 2009)(개정된 RECIST 지침(버전 1.1))으로부터 추출/요약된다. 추가 정보를 위해서는 일차 참고문헌을 참조한다.
정의
스크리닝 시, 종양 병변/림프절은 측정 가능한 또는 측정 불가능한 것으로서 범주화될 것이다.
측정 가능한 질환
종양 병변은 하기 최소 크기를 가진 적어도 하나의 차원으로 정확히 측정되어야 한다(측정 평면에서 가장 긴 직경이 기록되어야 함):
Figure 112019023638871-pct00372
CT 스캔에 의해 10 mm(5 mm 이하의 CT 스캔 슬라이스 두께)
Figure 112019023638871-pct00373
임상검사에 의한 10 mm 칼리퍼 측정(칼리퍼에 의해 정확히 측정될 수 없는 병변은 측정 불가능한 병변으로서 기록되어야 함)
Figure 112019023638871-pct00374
흉부 X-선에 의해 20 mm.
악성 림프절: 림프절은 병리학적으로 확대되고 측정 가능한 것으로서 간주되기 위해 CT 스캔에 의해 평가될 때 단축에서 15 mm 이상이어야 한다(5 mm 이하이도록 권장된 CT 스캔 슬라이스 두께). 기준 및 추적조사에서, 단축만이 측정되고 추적조사될 것이다.
측정 불가능한 질환
진정한 측정 불가능한 병변뿐만 아니라 작은 병변(10 mm 미만의 가장 긴 직경 또는 10 mm 이상 내지 15 mm 미만의 단축을 가진 병리학적 림프절)도 포함하는 모든 다른 병변들. 진정한 측정 불가능한 병변으로서 간주되는 병변은 재현 가능한 영상화 기법에 의해 측정될 수 없는, 신체검사에 의해 확인된 연수막 질환, 복수, 늑막 또는 심장주위 유출, 염증성 유방 질환, 피부 또는 폐의 림프관염 수반, 복부 덩어리/복부 장기종대를 포함한다.
종양 반응 평가
표적 병변: 하나 초과의 측정 가능한 종양 병변이 기준에서 존재할 때, 모든 관련된 장기들을 대표하는 최대 총 5개의 병변들(및 장기당 최대 2개의 병변들)까지 모든 병변들이 표적 병변으로서 확인되어야 하고 기준에서 기록되고 측정될 것이다. 모든 관련된 장기들을 대표하는 표적 병변들은 그들의 크기(가장 긴 직경을 가진 병변)를 기반으로 선택되어야 하고, 또한 재현 가능한 반복된 측정에 적합한 병변이어야 한다. 병리학적 림프절이 CT 스캔에 의해 15 mm 이상의 단축이라는 측정 가능한 기준을 충족시켜야 하고 이 림프절의 단축만이 기준 합계에 기여할 것임을 인지해야 한다. 모든 다른 병리학적 림프절(10 mm 이상 내지 15 mm 미만의 단축을 가진 림프절)은 비-표적 병변으로서 간주되어야 한다. 10 mm 미만의 단축을 가진 림프절은 비-병리학적 림프절로서 간주되고, 기록되거나 추적조사되지 않아야 한다. 기준에서, 표적 병변의 합계(종양 병변의 가장 긴 직경 플러스 림프절의 단축: 5의 전체 최대치)가 기록되어야 한다.
기준 후, 모든 확인된 표적 병변들에 대한 값은 매우 작을지라도 각각의 평가를 위해 eCRF 상에 제공되어야 한다. 극도로 작고 희미한 병변이 정확히 측정될 수 없으나 존재하는 것으로 간주되는 경우, 5 mm의 디폴트 값이 사용될 수 있다. 병변이 측정하기에 너무 작고 실제로 부재하는 것으로 생각되는 경우, 0 mm의 디폴트 값이 사용될 수 있다.
비-표적 병변: 표적 병변으로서 나열된 병변들 이외의 모든 측정 불가능한 병변(또는 질환의 부위) 플러스 임의의 측정 가능한 병변은 비-표적 병변으로서 간주된다. 측정은 요구되지 않으나, 이 병변들은 기준에서 인지되어야 하고 "존재", "부재" 또는 "분명한 진행"으로서 추적조사되어야 한다.
반응 기준: 표적 병변 및 비-표적 병변은 반응에 대해 따로 평가되고, 그 다음 전체로서 종양 존재량은 전체 반응으로서 평가된다.
표적 병변 반응: 표적 병변은 다음과 같이 평가된다:
Figure 112019023638871-pct00375
완전한 반응(CR). 모든 표적 병변들의 사라짐. (표적이든 비-표적이든) 임의의 병리학적 림프절은 10 mm 미만까지 단축의 감소를 가져야 한다.
Figure 112019023638871-pct00376
부분적 반응(PR). 기준 합계 직경을 기준물로서 간주할 때, 표적 병변의 직경의 합계의 적어도 30% 감소.
Figure 112019023638871-pct00377
진행성 질환(PD). 연구 동안 가장 작은 합계를 기준물로 간주할 때, 표적 병변의 직경의 합계의 적어도 20% 증가(이것은 기준 합계가 연구 동안 최소치인 경우 그 기준 합계도 포함한다). 20%의 상대적 증가 이외에, 합계는 적어도 5 mm의 절대 증가도 나타내어야 한다. (주: 하나 이상의 새로운 병변의 등장도 진행으로서 간주된다).
Figure 112019023638871-pct00378
안정한 질환(SD). 연구 동안 직경의 가장 작은 합계를 기준물로서 간주할 때, PR의 자격을 얻기에 충분한 수축이 없고 PD의 자격을 얻기에 충분한 증가도 없다.
비-표적 병변 반응: 비-표적 병변은 다음과 같이 평가될 것이다:
Figure 112019023638871-pct00379
완전한 반응(CR). 모든 비-표적 병변들의 사라짐 및 종양 마커 수준의 정상화. 모든 림프절들은 크기 면에서 비-병리학적이어야 한다(10 mm 미만의 단축).
Figure 112019023638871-pct00380
비-CR/비-PD. 하나 이상의 비-표적 병변(들)의 지속 및/또는 정상 한계 초과의 종양 마커 수준의 유지.
Figure 112019023638871-pct00381
진행성 질환(PD). 기존 비-표적 병변의 분명한 진행(하기 논평 참조). (주: 하나 이상의 새로운 병변의 등장도 진행으로서 간주된다).
피험자가 측정 가능한 질환도 가질 때: 이 상황에서, 비-표적 질환을 기반으로 "분명한 진행"을 달성하기 위해, 표적 질환의 SD 또는 PR의 존재 하에서 조차도 전체 종양 존재량이 요법을 중단하기에 마땅할 정도로 충분히 증가하였을 정도로 비-표적 질환의 전체 실질적인 악화 수준이 있어야 한다. 하나 이상의 비-표적 병변의 크기의 적당한 "증가"는 통상적으로 분명한 진행 상태의 자격을 얻기에 충분하지 않다. 따라서, 오로지 표적 질환의 SD 또는 PR의 면에서 비-표적 질환의 변화에 기반을 둔 전체 진행의 표기는 극도로 드물 것이다.
피험자가 측정 불가능한 질환만을 가질 때: 이 상황은 측정 가능한 질환을 갖는 것이 연구 참여의 기준이 아닐 때 일부 3 상 시험에서 발생한다. 동일한 일반적인 개념이 상기 인지된 바와 같이 여기에 적용되나; 이 경우, 측정 불가능한 질환 존재량의 증가의 해석을 요인으로 포함하는 측정 가능한 질환 평가는 없다. 비-표적 질환의 악화가 용이하게 정량될 수 없기 때문에(정의에 의해: 모든 병변들이 진정한 측정 불가능한 병변인 경우), 분명한 진행에 대해 피험자를 평가할 때 적용될 수 있는 유용한 시험은 측정 불가능한 질환의 변화에 기반을 둔 전체 질환 존재량의 증가가 측정 가능한 질환에 대해 PD를 선언하기 위해 요구될 증가, 즉 (측정 가능한 병변의 20% 증가 직경과 동등한) "부피"의 추가 73% 증가를 나타내는 종양 존재량의 증가에 크기 면에서 필적할 만한 지를 고려해야 한다. 예는 "미량"부터 "대량"까지 늑막 유출의 증가, "국소화된"부터 "널리 퍼진"까지 림프관염 질환의 증가를 포함하거나, 프로토콜에서 "요법의 변화를 요구하기에 충분한"으로서 기재될 수 있다. "분명한 진행"이 확인되는 경우, 피험자는 그 시점에서 전체 PD를 가진 것으로서 간주되어야 한다. 객관적인 기준을 측정 불가능한 질환에 적용하는 것이 이상적이지만, 그 질환의 바로 그 성질이 이것을 수행하는 것을 불가능하게 만들기 때문에, 증가는 실질적인 증가이어야 한다.
전체 반응: 전체 반응은 표적 병변을 가진 피험자의 경우 표 A에 따라 평가되어야 하고 비-표적 병변만을 가진 피험자의 경우 표 B에 따라 평가되어야 한다.
[표 A]
Figure 112019023638871-pct00382
[표 B]
Figure 112019023638871-pct00383
증상 악화
그 시점에서 질환 진행의 객관적인 증거 없이 치료의 중단을 요구하는 건강 상태의 전반적인 악화를 가진 피험자는 '증상 악화'로서 보고되어야 한다. 치료의 중단 후에도 객관적인 진행을 문서화하기 위해 모든 노력을 해야 한다. 증상 악화는 객관적인 반응의 기술어가 아니다: 이것은 연구 요법을 중단하는 이유이다. 이러한 피험자의 객관적인 반응 상태는 표적 질환 및 비-표적 질환의 평가에 의해 확인되어야 한다.
부록 C: 악성 림프종에 대한 개정된 반응 기준
악성 림프종에 대한 국제 작업 그룹 개정된 반응 기준(Cheson, 2007)은 온라인(http://jco.ascopubs.org/cgi/reprint/25/5/579)으로 접근될 수 있다.
부록 D: 수행 상태 기준
[표 37]
Figure 112019023638871-pct00384
부록 E: 베이지안 로지스틱 회귀 모델의 특징
과다복용 제어를 이용한 용량 상승에 대한 적응 베이지안 로지스틱 회귀 모델(Neuenschwander, 1998)을 이용하여 이 연구에서 용량 상승을 안내할 수 있다.
이 부록의 목적은 컴퓨터 시뮬레이션을 통해 다양한 용량-독성 관계 하에서 MTD를 추정하는 데 있어서 디자인의 정확성을 보여주는 수행 메트릭스(metrics)(작동 특징)을 제시하는 것이다. 추가로, 연구 동안 용량 상승 결정을 용이하게 하는 방법을 보여주기 위해 초기 코호트(단순함을 위해 각각의 코호트에서 정확히 3명의 평가 가능한 환자들을 가정함)에서 다양한 가상 결과 시나리오들 하에서 과다복용 제어 원칙을 이용한 BLRM에 의한 다음 용량 수준의 제안이 제공된다.
시뮬레이션 연구의 설계명세서 및 결과
이 단락은 다양한 가정된 진정한 용량-독성 관계 하에서 MTD를 추정하는 데 있어서 디자인의 정확성을 보여주는 작동 특징을 제시한다.
진정한 용량-DLT 관계의 총 5개 시나리오들 하에서 BLRM에 대한 시뮬레이션을 수행한다(표 38 참조).
1. 용량-DLT 관계는 가파른 곡선이고 MTD는 초기 용량 수준(SE)에 도달한다.
2. 용량-DLT 관계는 가파른 곡선이고 MTD는 중간 용량 수준(SM)에 도달한다.
3. 용량-DLT 관계는 가파른 곡선이고 MTD는 후기 용량 수준(SL)에 도달한다.
4. 용량-DLT 관계는 평평한 곡선이고 MTD는 중간 용량 수준(FM)에 도달한다.
5. 용량-DLT 관계는 평평한 곡선이고 MTD는 후기 용량 수준(FL)에 도달한다.
[표 38]
Figure 112019023638871-pct00385
각각의 진정한 시나리오 하에서 BLRM의 전체 수행을 조사하기 위해 작동 특징을 검토한다. 표 39는 수행된 시뮬레이션으로부터의 결과를 요약한다.
[표 39]
Figure 112019023638871-pct00386
전체적으로, 특정된 사전 분포를 가진 BLRM 모델은 합리적으로 수행된다. 유사한 또는 약간 더 큰 샘플 크기를 이용하였을 때, BLRM 모델은 특히 시나리오 1, 2 및 4에 대해 보다 더 높은 확률로 표적 범위 내에서 MTD를 선택할 수 있다.
상기 연구된 전체 작동 특징과 별개로, 디자인은 관찰된 독성을 기반으로 연구 동안 합리적인 결정을 내려져야 한다. 소정의 코호트의 완료 후, 용량 상승의 결정 및 후속 코호트를 위해 선택된 실제 용량은 EWOC 원칙에 따른 BLRM의 제안, 및 이용 가능한 임상 데이터 및 실험실 데이터의 의학적 검토에 의존한다.
2-파라미터 BLRM을 사용하여 제3 용량 코호트까지 용량을 상승시키는 것을 보여주기 위한 일부 시나리오들이 표 40에 나열되어 있다. 각각의 코호트는 정확히 3명의 평가 가능한 환자들을 가진다고 가정된다.
[표 40]
Figure 112019023638871-pct00387
다시, BLRM 모델은 가상 용량 상승 시나리오에 대해 합리적으로 수행된다. 베이지안 로지스틱 회귀 모델은 본 발명자들이 연구에서 모든 안전성 데이터를 기반으로 권장된 용량을 업데이트할 수 있게 할뿐만 아니라 임상 전 정보를 포함시킬 수 있게 한다. 표에서 제공된 메트릭스를 검토함으로써, 상기 모델이 진실의 상이한 시나리오들에 민감하지 않다는 것을 알 수 있다. 일반적으로, 이 모델은 과다복용 제어 기준으로 인해 보존적이다. 모든 시나리오들에서, 33% 이상의 진정한 P(DLT)로 과도한 독성을 나타내는 용량을 제안할 확률은 16% 내지 33%의 진정한 P(DLT)로 용량을 MTD로서 제안할 확률보다 훨씬 더 작다. 상기 모델에 기반을 둔 연구 도중 제안은 임상적 결정을 내리는 과정과 일치하고, MTD를 결정하기 위해 시험될 용량 수준을 결정하는 데 있어서 셀진 임상시험 팀 및 연구 임상연구원에 의해 다른 이용 가능한 임상 정보와 함께 고려되어야 한다.
부록 F: 치료에 의해 유도된 설사의 관리를 위한 제안
도 38에 제공된 공개된 지침(Benson, 2004)은 연구 프로토콜과 일치하도록 변형되었다.
부록 G: 생물학적 표본의 관리
이것은 실험실 매뉴얼의 부록이다.
샘플 취급 및 저장
분석 후 고갈되지 않는, 이 연구의 부분으로서 바이오마커 및 유전학 연구를 위해 채취된 모든 혈액 및 조직 샘플들은 연구가 완료된 후 최대 5년 동안 연구에서 사용되도록 저장될 것이다. 피험자가 동의할 때, 암 및 다른 질환에 대해 더 많이 알기 위한 장래 연구에서 사용하기 위해 저장 기간은 연구가 완료된 후 20년까지 연장될 것이다. 샘플은 적절한 접근 제어, 모니터링 및 백업 시스템을 갖춘, 장기간 샘플 저장을 위해 디자인된 보안 실험실 시설에서 저장될 것이다.
샘플 코딩
모든 바이오마커 및 유전학 연구 샘플들은 암호(피험자 식별 번호)에 의해서만 식별될 것이다. 이 샘플들은 임의의 다른 개인 정보를 갖지 않을 것이다. 연구 의사는 암호 키를 보관할 것이다. 샘플 및 암호 키는 비밀유지 상태에서 따로 보관될 것이다. 샘플에 대한 시험을 수행하는 연구원은 암호만을 알 것이고 피험자를 구체적으로 식별하는 임의의 정보를 알지 못할 것이다.
혈액 및 조직 샘플에 대한 연구
바이오마커 및 유전학 연구 샘플은 암 및 다른 질환에 대해 더 많이 알기 위해 장래 연구에서 사용되도록 의뢰자, 또는 의뢰자와 계약한 회사에 의해 시험될 것이다. 이것은 혈액 세포 또는 종양 세포 내의 바이오마커가, 화합물 A가 생물학적으로 활성을 가진다는 것을 입증하는 지를 확인하는 단계를 포함한다.
바이오마커 및 유전학 결과의 보고 및 이용 가능성
바이오마커 및 유전학 연구 샘플 시험 결과는 전술된 샘플 분석에 관여하지 않은 피험자, 보증 회사 및 임의의 다른 제3자와 공유되지 않을 것이다. 결과는 피험자의 의료 기록에 파일링되지 않을 것이다. 시험 결과는 단지 연구 목적을 위한 것이고 피험자의 통상적인 의료 관리에 대한 결정을 내리는 데 사용되지 않을 것이다.
피험자 및 식별자의 이름은 공개문헌 또는 보고서에서 언급되지 않음으로써, 이 바이오마커 및 유전학 정보의 지식으로부터 발생할 수 있는 정신적 또는 사회적 위험, 예컨대, 고용능력 또는 보증능력에 대한 위험 또는 차별 위험의 확률을 최소화할 것이다.
동의 철회 시 샘플 파괴를 요청하는 방법
피험자가 연구에 참여한다는 동의를 철회하는 경우, 피험자는 그의 바이오마커 및 유전학 연구 샘플을 파괴할 것을 요청할 수도 있다. 이러한 경우, 피험자는 동의가 철회되었다는 것을 연구 의사에게 알릴 것이고 임의의 저장된 미사용 샘플을 파괴할 것을 요청할 것이다. 그 다음, 임의의 미사용 샘플은 의뢰자에 의해 파괴될 것이다. 그러나, 동의가 철회되기 전에 샘플이 분석된 경우, 의뢰자는 이미 이용 가능해진 데이터를 여전히 사용할 수 있다.
피험자가 장래 연구를 위해 바이오마커 및 유전학 연구 샘플을 20년 동안 보관하는 것에 동의하는 경우, 이 피험자는 임의의 시점에서 그 결정을 되돌릴 자유도도 가진다. 피험자는 장래 연구를 위해 샘플을 사용하게 하는 허락이 철회되었다는 것을 연구 의사에게 알릴 것이다. 그 다음, 임의의 미사용 샘플은 의뢰자에 의해 파괴될 것이다. 그러나, 동의가 철회되기 전에 샘플이 분석된 경우, 의뢰자는 이미 이용 가능해진 데이터를 여전히 사용할 수 있다.
부록 H: 차일드-퍼 분류
간 뇌병증 없이 차일드-퍼 A 분류를 가진 피험자는 연구를 위한 이 개별 포함 기준을 충족시킨다.
[표 41]
Figure 112019023638871-pct00388
부록 J: 전립선암 임상시험 작업 그룹(PCWG23)
진행성 전립선암 및 거세 수준의 테스토스테론을 가진 환자에 대한 임상시험의 디자인 및 종점에 대한 PCWG23의 제안은 온라인(http://jco.ascopubs.org/content/34/12/1402)으로 접근될 수 있다.

Claims (31)

  1. 유효량의 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, 인간 메르켈 세포 암종 또는 위 신경내분비 암종을 치료하기 위한 약학 조성물로서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 약학 조성물:
    Figure 112022079376538-pct00429
    .
  2. 제1항에 있어서, 경구 투여용으로 조정된 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 화합물의 유효량은 1.5 mg/kg ∼ 10 mg/kg을 포함하는 것인 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 정제, 환제, 사세, 또는 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐의 형태인 약학 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 캡슐의 형태인 약학 조성물.
  6. 제4항에 있어서, 0.50 mg, 0.75 mg 또는 2.00 mg을 포함하는 용량 강도로 화합물을 함유하는 캡슐의 형태인 약학 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 화합물은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제와 조합되는 것인 약학 조성물.
  8. 치료 유효량의 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을, 에토포사이드(etoposide)와 조합하여 포함하는, 소세포 폐암을 치료하기 위한 약학 조성물로서, 화학식 (I)의 구조를 갖는 화합물은
    Figure 112022079376538-pct00430
    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 약학 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 화합물의 염은 베실산염인 약학 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 경구 투여용으로 제제화된 약학 조성물.
  11. 제8항에 있어서, 화합물의 유효량은 1.5 mg/kg ∼ 10 mg/kg을 포함하는 것인 약학 조성물.
  12. 제8항에 있어서, 화합물은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제와 조합되는 것인 약학 조성물.
  13. 삭제
  14. 삭제
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