TWI767928B

TWI767928B - 復發性和/或難治性實體腫瘤以及非霍奇金氏淋巴瘤之治療

Info

Publication number: TWI767928B
Application number: TW106127044A
Authority: TW
Inventors: 建朱徐; 羅伯特曹; 艾倫阮
Original assignee: 美商塞爾基因定量細胞研究公司
Priority date: 2016-08-10
Filing date: 2017-08-10
Publication date: 2022-06-21
Also published as: IL264718B2; KR20190038622A; AU2017310423B2; US20200297727A1; US10548896B2; KR102469406B1; TW201804999A; US10543213B2; JP2019526546A; US10849898B2; US20200113905A1; US20190240222A1; EP4286381A2; AU2017310423A8; CA3033634A1; JP6998938B2; AU2022202495A1; MX2019001608A; CN109803660A; US20180125844A1

Abstract

本案提供使用適用於抑制離胺酸特異性去甲基酶-1 (LSD-1)之經取代之雜環衍生物化合物及包含化合物之醫藥組成物來治療復發性和/或難治性實體腫瘤(包括神經內分泌癌(NEC))及非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及類似腫瘤的方法。

Description

復發性和/或難治性實體腫瘤以及非霍奇金氏淋巴瘤之治療

本申請案主張2016年8月10日提交的美國臨時專利申請案第62/373,263號及2017年3月8日提交的美國臨時專利申請案第62/468,424號之優先權權益，兩項申請案以引用之方式完全併入本文中以達所有目的。

本文描述的實施例提供用於治療癌症及贅生性疾病之組成物、調配物及方法；其中此種治療包括包含投與離胺酸特異性去甲基酶-1 (lysine specific demethylase-1; LSD-1)抑制劑之療法。

仍需要用於治療患有癌症之受試者的組成物、調配物及方法，該等癌症諸如例如基底細胞癌、復發性或難治性非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma; NHL)、多形性膠質母細胞瘤、退化性星狀細胞瘤或其他晚期實體腫瘤。

例如，基底細胞癌(basal cell carcinoma; BCC)為全世界常見的癌症，且其發病率正日益增長。僅僅在美國，每年有超過350萬新患者被診斷為患有非黑素瘤皮膚癌。大多數BCC可藉由局部療法、外科術、放射療法或其組合來治癒。然而，晚期BCC常常引起顯著的毀容及病態以及相關聯的身體及心理續發症，因為BCC通常發生在諸如面部的暴露於陽光的區域中。另外，此等癌症中之小部分為轉移性的並且不適於典型的療法。幾乎所有的BCC係相關聯於異常的刺蝟蛋白(hedgehog; Hh)訊號轉導，其刺激不受調節的細胞生長，且若干治療性Hh抑制劑已被證明適用於治療BCC。遺憾地，BCC中約20%對當前Hh抑制劑生成抗性，其通常係經由Hh路徑再活化，藉由干擾藥物結合袋，增加Hh訊號轉導活性，或經由抑制基因中之併發複本數量改變而起作用的突變來實現。患者將受益於良好耐受藥劑之研發，該等良好耐受藥劑藉由例如靶向相關訊號轉導路徑中下游的蛋白質來克服此等抗性路徑。

本揭示內容之態樣及實施例提供用於治療患有癌症及贅生性疾病之受試者的方法及醫藥組成物；該等受試者諸如患有晚期實體腫瘤、復發性或難治性實體腫瘤(包括神經內分泌癌(neuroendocrine carcinoma; NEC)及非霍奇金氏淋巴瘤)、多形性膠質母細胞瘤、退化性星狀細胞瘤、基底細胞癌或其他癌症之彼等受試者。至少一個實施例提供一種用於治療癌症及贅生性疾病之方法，該方法包含向有需要之受試者投與治療有效量之至少一種LSD-1抑制劑。

一個實施例提供治療方法，該等方法涉及具有式(I)之結構的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，

其中， W是N、C-H或C-F； X為氫、鹵素、-CN、視需要經取代之烷基、視需要經取代之炔基、視需要經取代之碳環基炔基、視需要經取代之芳基或視需要經取代之雜芳基； Y為氫、視需要經取代之烷基、視需要經取代之環烷基或視需要經取代之環烷基烷基； Z為選自以下各項之視需要經取代之基團：烷基、碳環基、經C連接之雜環基、經N連接之雜環基、雜環基烷基、雜環基烯基、-O-雜環基、-N(R)-雜環基、-O-雜環基烷基、-N(R)-雜環基烷基、-N(R)(C₁ -C₄ 伸烷基)-NR₂ 、-O(C₁ -C₄ 伸烷基)-NR₂ ，且R為氫或C₁ -C₄ 烷基。

一個實施例提供治療方法，該等方法涉及具有式(Ia)之結構的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，

其中， W是N、C-H或C-F； X為氫、鹵素、-CN、視需要經取代之炔基、視需要經取代之碳環基炔基、視需要經取代之芳基或視需要經取代之雜芳基； Y為氫、視需要經取代之烷基、視需要經取代之環烷基或視需要經取代之環烷基烷基；且 Z為選自以下各項之視需要經取代之基團：經N連接之雜環基、-O-雜環基烷基、-N(H)-雜環基、-N(Me)-雜環基、-N(H)-雜環基烷基或-N(Me)-雜環基烷基。

一個實施例提供治療方法，該等方法涉及具有式(Ib)之結構的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，

其中， W是N、C-H或C-F； X為氫、鹵素、視需要經取代之炔基、視需要經取代之碳環基炔基、視需要經取代之芳基或視需要經取代之雜芳基； Y為氫、視需要經取代之烷基或視需要經取代之環烷基；且 Z為選自以下各項之視需要經取代之基團：N-雜環基、-O-雜環基烷基、-N(H)-雜環基烷基或-N(Me)-雜環基烷基。

一個實施例提供治療方法，該等方法涉及醫藥組成物，其包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受的鹽及醫藥學上可接受的賦形劑。一個實施例提供治療方法，該等方法涉及醫藥組成物，其包含式(Ia)化合物或其醫藥學上可接受的鹽及醫藥學上可接受的賦形劑。一個實施例提供治療方法，該等方法涉及醫藥組成物，其包含式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽及醫藥學上可接受的賦形劑。

一個實施例提供治療方法，該等方法涉及調節細胞中之基因轉錄，包含藉由使離胺酸特異性去甲基酶1酶暴露於式(I)化合物而抑制離胺酸特異性去甲基酶1活性。一個實施例提供治療方法，該等方法涉及調節細胞中之基因轉錄，包含藉由使離胺酸特異性去甲基酶1酶暴露於式(Ia)化合物而抑制離胺酸特異性去甲基酶1活性。一個實施例提供治療方法，該等方法涉及調節細胞中之基因轉錄，包含藉由使離胺酸特異性去甲基酶1酶暴露於式(Ib)化合物而抑制離胺酸特異性去甲基酶1活性。

一個實施例提供治療有需要之患者的癌症之方法，該方法包含向該患者投與式(I)化合物或其醫藥學上可接受的鹽。一個實施例提供治療有需要之患者的癌症之方法，該方法包含向該患者投與式(Ia)化合物或其醫藥學上可接受的鹽。一個實施例提供治療有需要之患者的癌症之方法，該方法包含向該患者投與式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽。

除非上下文另外清楚地指定，否則如本文及在隨附申請專利範圍中所使用，單數形式「一」及「該」包括複數提及物。因此，例如，對「一藥劑」之提及包括複數個此等藥劑，且對「該細胞」之提及包括對一或多個細胞(或複數個細胞)及熟習此項技術者所知的其等效物等等之提及。當針對諸如分子量之物理性質或諸如化學式之化學性質使用範圍時，範圍之所有組合及子組合及範圍中之特定實施例皆意欲受包括。在提及數量或數值範圍時的術語「約」意指所提及的該數量或數值範圍為實驗變化性內(或統計學實驗誤差內)的近似值，且因此在一些情況下，該數量或數值範圍將在該所陳述數量或數值範圍的1%與15%之間變化。術語「包含(comprising)」(及相關術語諸如「包含(comprise)」或「包含(comprises)」或「具有」或「包括」)不意欲在其他某些實施例中，例如在本文描述的任何物質組成、組成物、方法或製程或類似物之實施例中排除「由該等所描述特徵組成」或「主要由該等所描述特徵組成」。定義

除非指定為相反，否則如說明書及隨附申請專利範圍中所使用，以下術語具有下文指示的含義。

「胺基」係指-NH₂ 基。

「氰基」係指-CN基。

「硝基」係指-NO₂ 基。

「氧雜」係指-O-基。

「側氧基」係指=O基。

「硫酮基」係指=S基。

「亞胺基」係指=N-H基。

「肟基」係指=N-OH基。

「肼基」係指=N-NH₂ 基。

「烷基」係指僅僅由碳及氫原子組成的不含不飽和度的具有一至十五個碳原子(例如，C₁ -C₁₅ 烷基)之直鏈或支鏈烴鏈基。在某些實施例中，烷基包含一至十三個碳原子(例如，C₁ -C₁₃ 烷基)。在某些實施例中，烷基包含一至八個碳原子(例如，C₁ -C₈ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至五個碳原子(例如，C₁ -C₅ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至四個碳原子(例如，C₁ -C₄ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至三個碳原子(例如，C₁ -C₃ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含一至兩個碳原子(例如，C₁ -C₂ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含一個碳原子(例如，C₁ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含五至十五個碳原子(例如，C₅ -C₁₅ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含五至八個碳原子(例如，C₅ -C₈ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含兩至五個碳原子(例如，C₂ -C₅ 烷基)。在其他實施例中，烷基包含三至五個碳原子(例如，C₃ -C₅ 烷基)。在其他實施例中，烷基係選自甲基、乙基、1-丙基(正丙基)、1-甲基乙基(異丙基)、1-丁基(正丁基)、1-甲基丙基(第二丁基)、2-甲基丙基(異丁基)、1,1-二甲基乙基(第三丁基)、1-戊基(正戊基)。烷基係藉由單鍵連接至分子之剩餘部分。除非在本說明書中另有具體說明，否則烷基視需要經以下取代基中之一或多者取代：鹵基、氰基、硝基、側氧基、硫酮基、亞胺基、肟基、三甲基矽烷基、-OR^a 、-SR^a 、-OC(O)-R^a 、-N(R^a )₂ 、-C(O)R^a 、-C(O)OR^a 、-C(O)N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)OR^a 、-OC(O)-N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)R^a 、-N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-S(O)_t OR^a (其中t為1或2)、-S(O)_t R^a (其中t為1或2)及-S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)。

「烷氧基」係指式-O-烷基的經由氧原子鍵接之基團，其中烷基為如上文定義的烷基鏈。

「烯基」係指僅僅由碳及氫原子組成的含有至少一個碳-碳雙鍵且具有兩至十二個碳原子之直鏈或支鏈烴鏈基。在某些實施例中，烯基包含兩至八個碳原子。在其他實施例中，烯基包含兩至四個碳原子。烯基係藉由單鍵連接至分子之剩餘部分，例如，乙烯基(亦即，乙烯基)、丙-1-烯基(亦即，烯丙基)、丁-1-烯基、戊-1-烯基及類似基團。除非在本說明書中另有具體說明，否則烯基視需要經以下取代基中之一或多者取代：鹵基、氰基、硝基、側氧基、硫酮基、亞胺基、肟基、三甲基矽烯基、-OR^a 、-SR^a 、-OC(O)-R^a 、-N(R^a )₂ 、-C(O)R^a 、-C(O)OR^a 、-C(O)N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)OR^a 、-OC(O)-N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)R^a 、-N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-S(O)_t OR^a (其中t為1或2)、-S(O)_t R^a (其中t為1或2)及-S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)。

「炔基」係指僅僅由碳及氫原子組成的含有至少一個碳-碳三鍵且具有兩至十二個碳原子之直鏈或支鏈烴鏈基。在某些實施例中，炔基包含兩至八個碳原子。在其他實施例中，炔基包含兩至六個碳原子。在其他實施例中，炔基包含兩至四個碳原子。炔基係藉由單鍵連接至分子之剩餘部分，例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基及類似基團。除非在本說明書中另有具體說明，否則炔基視需要經以下取代基中之一或多者取代：鹵基、氰基、硝基、側氧基、硫酮基、亞胺基、肟基、三甲基矽炔基、-OR^a 、-SR^a 、-OC(O)-R^a 、-N(R^a )₂ 、-C(O)R^a 、-C(O)OR^a 、-C(O)N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)OR^a 、-OC(O)-N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)R^a 、-N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-S(O)_t OR^a (其中t為1或2)、-S(O)_t R^a (其中t為1或2)及-S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)。

「伸烷基」或「伸烷基鏈」係指僅僅由碳及氫組成的不含不飽和度且具有一至十二個碳原子的使分子之剩餘部分連接至一基團的直鏈或支鏈二價烴鏈，例如，亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸正丁基及類似基團。伸烷基鏈係經由單鍵連接至分子之剩餘部分且經由單鍵連接至該基團。伸烷基鏈與分子之剩餘部分及與該基團之連接點係經由伸烷基鏈中之一個碳或經由該鏈內的任何兩個碳。在某些實施例中，伸烷基包含一至八個碳原子(例如，C₁ -C₈ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至五個碳原子(例如，C₁ -C₅ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至四個碳原子(例如，C₁ -C₄ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至三個碳原子(例如，C₁ -C₃ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一至兩個碳原子(例如，C₁ -C₂ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含一個碳原子(例如，C₁ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含五至八個碳原子(例如，C₅ -C₈ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含兩至五個碳原子(例如，C₂ -C₅ 伸烷基)。在其他實施例中，伸烷基包含三至五個碳原子(例如，C₃ -C₅ 伸烷基)。除非在本說明書中另有具體說明，否則伸烷基鏈視需要經以下取代基中之一或多者取代：鹵基、氰基、硝基、側氧基、硫酮基、亞胺基、肟基、三甲基矽炔基、-OR^a 、-SR^a 、-OC(O)-R^a 、-N(R^a )₂ 、-C(O)R^a 、-C(O)OR^a 、-C(O)N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)OR^a 、-OC(O)-N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)R^a 、-N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-S(O)_t OR^a (其中t為1或2)、-S(O)_t R^a (其中t為1或2)及-S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)。

「伸炔基」或「伸炔基鏈」係指僅僅由碳及氫組成的含有至少一個碳-碳三鍵且具有兩至十二個碳原子的使分子之剩餘部分連接至一基團的直鏈或支鏈二價烴鏈。伸炔基鏈係經由單鍵連接至分子之剩餘部分且經由單鍵連接至該基團。在某些實施例中，伸炔基包含兩至八個碳原子(例如，C₂ -C₈ 伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含兩至五個碳原子(例如，C₂ -C₅ 伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含兩至四個碳原子(例如，C₂ -C₄ 伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含兩至三個碳原子(例如，C₂ -C₃ 伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含兩個碳原子(例如，C₂ 伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含五至八個碳原子(例如，C₅ -C₈ 伸炔基)。在其他實施例中，伸炔基包含三至五個碳原子(例如，C₃ -C₅ 伸炔基)。除非在本說明書中另有具體說明，否則伸炔基鏈視需要經以下取代基中之一或多者取代：鹵基、氰基、硝基、側氧基、硫酮基、亞胺基、肟基、三甲基矽炔基、-OR^a 、-SR^a 、-OC(O)-R^a 、-N(R^a )₂ 、-C(O)R^a 、-C(O)OR^a 、-C(O)N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)OR^a 、-OC(O)-N(R^a )₂ 、-N(R^a )C(O)R^a 、-N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-S(O)_t OR^a (其中t為1或2)、-S(O)_t R^a (其中t為1或2)及-S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、碳環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、碳環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)。

「芳基」係指藉由自環碳原子移除氫原子而衍生自芳族單環或多環烴環體系的基團。芳族單環或多環烴環體系僅含有氫及碳(五至十八個碳原子)，其中環體系中之至少一個環為完全不飽和的，亦即，其含有根據休克耳理論的環狀、非定域(4n+2)π-電子體系。衍生出芳基之環體系包括但不限於諸如苯、茀、二氫茚、茚、四氫萘及萘之基團。除非在本說明書中另有具體說明，否則術語「芳基」或前綴「芳-」(諸如「芳烷基」中)係意欲包括視需要經獨立地選自以下各項之一或多個取代基取代之芳基：烷基、烯基、炔基、鹵基、氟烷基、氰基、硝基、視需要經取代之芳基、視需要經取代之芳烷基、視需要經取代之芳烯基、視需要經取代之芳炔基、視需要經取代之碳環基、視需要經取代之碳環基烷基、視需要經取代之雜環基、視需要經取代之雜環基烷基、視需要經取代之雜芳基、視需要經取代之雜芳基烷基、-R^b -OR^a 、-R^b -OC(O)-R^a 、-R^b -OC(O)-OR^a 、-R^b -OC(O)-N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )₂ 、-R^b -C(O)R^a 、-R^b -C(O)OR^a 、-R^b -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -O-R^c -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )C(O)OR^a 、-R^b -N(R^a )C(O)R^a 、-R^b -N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t OR^a (其中t為1或2)及-R^b -S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、環烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、環烷基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)，每一R^b 係獨立地為直接鍵或直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且R^c 為直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且其中除非另外指示，否則上文取代基中之每一者為未經取代的。

「芳烷基」係指式-R^c -芳基之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈，例如，亞甲基、伸乙基及類似基團。芳烷基之伸烷基鏈部分如上文對伸烷基鏈所述為視需要經取代的。芳烷基之芳基部分如上文對芳基所述為視需要經取代的。

「芳烯基」係指式-R^d -芳基之基團，其中R^d 為如上文定義的伸烯基鏈。芳烯基之芳基部分如上文對芳基所述為視需要經取代的。芳烯基之伸烯基鏈部分如上文對伸烯基所定義為視需要經取代的。

「芳炔基」係指式-R^e -芳基之基團，其中R^e 為如上文定義的伸炔基鏈。芳炔基之芳基部分如上文對芳基所述為視需要經取代的。芳炔基之伸炔基鏈部分如上文對伸炔基鏈所定義為視需要經取代的。

「芳烷氧基」係指式-O-R^c -芳基的經由氧原子鍵接之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈，例如，亞甲基、伸乙基及類似基團。芳烷基之伸烷基鏈部分如上文對伸烷基鏈所述為視需要經取代的。芳烷基之芳基部分如上文對芳基所述為視需要經取代的。

「碳環基」係指僅僅由碳及氫原子組成的具有三至十五個碳原子之穩定非芳族單環或多環烴基，其包括稠合或橋聯環體系。在某些實施例中，碳環基包含三至十個碳原子。在其他實施例中，碳環基包含五至七個碳原子。碳環基係藉由單鍵連接至分子之剩餘部分。碳環基為飽和(亦即，僅含有單一C-C鍵)或不飽和(亦即，含有一或多個雙鍵或三鍵)。完全飽和的碳環基亦稱為「環烷基」。單環的環烷基之實例包括例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。不飽和碳環基亦稱為「環烯基」。單環的環烯基之實例包括例如環戊烯基、環己烯基、環庚烯基及環辛烯基。多環的碳環基包括例如金剛烷基、降莰基(亦即，雙環[2.2.1]庚烷基)、降莰烯基、十氫萘基、7,7-二甲基-雙環[2.2.1]庚烷基及類似基團。除非在本說明書中另有具體說明，否則術語「碳環基」係意欲包括視需要經獨立地選自以下各項之一或多個取代基取代之碳環基：烷基、烯基、炔基、鹵基、氟烷基、側氧基、硫酮基、氰基、硝基、視需要經取代之芳基、視需要經取代之芳烷基、視需要經取代之芳烯基、視需要經取代之芳炔基、視需要經取代之碳環基、視需要經取代之碳環基烷基、視需要經取代之雜環基、視需要經取代之雜環基烷基、視需要經取代之雜芳基、視需要經取代之雜芳基烷基、-R^b -OR^a 、-R^b -OC(O)-R^a 、-R^b -OC(O)-OR^a 、-R^b -OC(O)-N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )₂ 、-R^b -C(O)R^a 、-R^b -C(O)OR^a 、-R^b -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -O-R^c -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )C(O)OR^a 、-R^b -N(R^a )C(O)R^a 、-R^b -N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t OR^a (其中t為1或2)及-R^b -S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、環烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、環烷基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)，每一R^b 係獨立地為直接鍵或直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且R^c 為直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且其中除非另外指示，否則上文取代基中之每一者為未經取代的。

「碳環基烷基」係指式-R^c -碳環基之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈。伸烷基鏈及碳環基如上文定義為視需要經取代的。

「碳環基炔基」係指式-R^c -碳環基之基團，其中R^c 為如上文定義的伸炔基鏈。伸炔基鏈及碳環基如上文定義為視需要經取代的。

「碳環基烷氧基」係指式-O-R^c -碳環基的經由氧原子鍵接之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈。伸烷基鏈及碳環基如上文定義為視需要經取代的。

如本文所使用，「羧酸生物類性體」係指展現與羧酸部分類似的物理、生物學和/或化學性質之官能基或部分。羧酸生物類性體之實例包括但不限於

及類似物。

「鹵基」或「鹵素」係指溴基、氯基、氟基或碘基取代基。

「氟烷基」係指如上文定義的烷基，其經一或多個如上文定義的氟基取代，例如，三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基及類似基團。在一些實施例中，氟烷基之烷基部分如上文對烷基所定義為視需要經取代的。

「雜環基」係指穩定的3至18員非芳族環基，其包含兩至十二個碳原子及一至六個選自氮、氧及硫之雜原子。除非在本說明書中另有具體說明，雜環基為單環、雙環、三環或四環環體系，其視需要包括稠合或橋聯環體系。雜環基中之雜原子為視需要經氧化的。若存在氮原子，則一或多個氮原子為視需要經四級銨化。雜環基為部分或完全飽和的。雜環基係經由環之任何原子連接至分子之剩餘部分。此種雜環基之實例包括但不限於二氧戊環基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氫異喹啉基、咪唑啉基、咪唑啶基、異噻唑啶基、異噁唑啶基、嗎啉基、十氫吲哚基、十氫異吲哚基、2-側氧基哌嗪基、2-側氧基哌啶基、2-側氧基吡咯啶基、噁唑啶基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、吡唑啶基、奎寧環基、噻唑啶基、四氫呋喃基、三噻烷基、四氫哌喃基、硫代嗎啉基、噻嗎啉基、1-側氧基-硫代嗎啉基及1,1-二側氧基-硫代嗎啉基。除非在本說明書中另有具體說明，否則術語「雜環基」係意欲包括如上文定義的視需要經獨立地選自以下各項之一或多個取代基取代之雜環基：烷基、烯基、炔基、鹵基、氟烷基、側氧基、硫酮基、氰基、硝基、視需要經取代之芳基、視需要經取代之芳烷基、視需要經取代之芳烯基、視需要經取代之芳炔基、視需要經取代之碳環基、視需要經取代之碳環基烷基、視需要經取代之雜環基、視需要經取代之雜環基烷基、視需要經取代之雜芳基、視需要經取代之雜芳基烷基、-R^b -OR^a 、-R^b -OC(O)-R^a 、-R^b -OC(O)-OR^a 、-R^b -OC(O)-N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )₂ 、-R^b -C(O)R^a 、-R^b -C(O)OR^a 、-R^b -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -O-R^c -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )C(O)OR^a 、-R^b -N(R^a )C(O)R^a 、-R^b -N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t OR^a (其中t為1或2)及-R^b -S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、環烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、環烷基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)，每一R^b 係獨立地為直接鍵或直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且R^c 為直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且其中除非另外指示，否則上文取代基中之每一者為未經取代的。

「N-雜環基」或「經N連接之雜環基」係指如上文定義的雜環基，其含有至少一個氮且其中雜環基與分子之剩餘部分之連接點係經由雜環基中之氮原子。N-雜環基如上文對雜環基所述為視需要經取代的。此種N-雜環基之實例包括但不限於1-嗎啉基、1-哌啶基、1-哌嗪基、1-吡咯啶基、吡唑啶基、咪唑啉基及咪唑啶基。

「C-雜環基」或「經C連接之雜環基」係指如上文定義的雜環基，其含有至少一個雜原子且其中雜環基與分子之剩餘部分之連接點係經由雜環基中之碳原子。C-雜環基如上文對雜環基所述為視需要經取代的。此種C-雜環基之實例包括但不限於2-嗎啉基、2-哌啶基或3-哌啶基或4-哌啶基、2-哌嗪基、2-哌咯啶基或3-吡咯啶基及類似基團。

「雜環基烷基」係指式-R^c -雜環基之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈。若雜環基為含氮雜環基，則雜環基視需要在氮原子處連接至烷基。雜環基烷基之伸烷基鏈如上文對伸烷基鏈所定義為視需要經取代的。雜環基烷基之雜環基部分如上文對雜環基所定義為視需要經取代的。

「雜環基烷氧基」係指式-O-R^c -雜環基的經由氧原子鍵接之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈。若雜環基為含氮雜環基，則雜環基視需要在氮原子處連接至烷基。雜環基烷氧基之伸烷基鏈如上文對伸烷基鏈所定義為視需要經取代的。雜環基烷氧基之雜環基部分如上文對雜環基所定義為視需要經取代的。

「雜芳基」係指衍生自3至18員芳族環基之基團，其包含兩至十七個碳原子及一至六個選自氮、氧及硫之雜原子。如本文所使用，雜芳基為單環、雙環、三環或四環環體系，其中環體系中之至少一個環為完全不飽和的，亦即，其含有根據休克耳理論的環狀、非定域(4n+2)π-電子系統。雜芳基包括稠合或橋聯環體系。雜芳基中之雜原子為視需要經氧化的。若存在氮原子，則一或多個氮原子為視需要經四級銨化。雜芳基係經由環之任何原子連接至分子之剩餘部分。雜芳基之實例包括但不限於氮雜卓基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1,3-苯并間二氧雜戊烯、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b] [1,4]二噁庚英基、苯并[b] [1,4]噁嗪基、1,4-苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并間二氧雜戊烯、苯并二噁英基、苯并哌喃基、苯并哌喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基(苯并苯硫基)、苯并噻吩并[3,2-d]嘧啶基、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、[噌基(cinnolinyl)、環戊[d]嘧啶基、6,7-二氫-5H-環戊[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氫苯并[h]喹唑啉基、5,6-二氫苯并[h][噌基、6,7-二氫-5H-苯并[6,7]環庚[1,2-c]噠嗪基、二苯并呋喃基、二苯并苯硫基、呋喃基、呋喃酮基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛[d]嘧啶基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛[d]噠嗪基、5,6,7,8,9,10-六氫環辛[d]吡啶基、異噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、異吲哚基、吲哚啉基、異吲哚啉基、異喹啉基、吲嗪基、異噁唑基、5,8-甲撐-5,6,7,8-四氫喹唑啉基、[萘啶基、1,6-[萘啶酮基、噁二唑基、2-側氧基氮雜卓基、噁唑基、環氧乙烷基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氫苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-1H-吡咯基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、呔嗪基、喋啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡唑并[3,4-d]-嘧啶基、吡啶基、吡哆并[3,2-d]嘧啶基、吡哆并[3,4-d]嘧啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡咯基、喹唑啉基、喹喏啉基、喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、5,6,7,8-四氫喹唑啉基、5,6,7,8-四氫苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、6,7,8,9-四氫-5H-環庚[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6,7,8-四氫吡哆并[4,5-c]噠嗪基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、噻吩并[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基及苯硫基(亦即噻吩基)。除非在本說明書中另有具體說明，否則術語「雜芳基」係意欲包括如上文定義的視需要經獨立地選自以下各項之一或多個取代基取代之雜芳基：烷基、烯基、炔基、鹵基、氟烷基、鹵烯基、鹵炔基、側氧基、硫酮基、氰基、硝基、視需要經取代之芳基、視需要經取代之芳烷基、視需要經取代之芳烯基、視需要經取代之芳炔基、視需要經取代之碳環基、視需要經取代之碳環基烷基、視需要經取代之雜環基、視需要經取代之雜環基烷基、視需要經取代之雜芳基、視需要經取代之雜芳基烷基、-R^b -OR^a 、-R^b -OC(O)-R^a 、-R^b -OC(O)-OR^a 、-R^b -OC(O)-N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )₂ 、-R^b -C(O)R^a 、-R^b -C(O)OR^a 、-R^b -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -O-R^c -C(O)N(R^a )₂ 、-R^b -N(R^a )C(O)OR^a 、-R^b -N(R^a )C(O)R^a 、-R^b -N(R^a )S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t R^a (其中t為1或2)、-R^b -S(O)_t OR^a (其中t為1或2)及-R^b -S(O)_t N(R^a )₂ (其中t為1或2)，其中每一R^a 係獨立地為氫、烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、氟烷基、環烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、環烷基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、芳烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜環基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)、雜芳基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)或雜芳基烷基(視需要經鹵素、羥基、甲氧基或三氟甲基取代)，每一R^b 係獨立地為直接鍵或直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且R^c 為直鏈或支鏈伸烷基或伸烯基鏈，且其中除非另外指示，否則上文取代基中之每一者為未經取代的。

「N-雜芳基」係指如上文定義的雜芳基，其含有至少一個氮且其中雜芳基與分子之剩餘部分之連接點係經由雜芳基中之氮原子。N-雜芳基如上文對雜芳基所述為視需要經取代的。

「C-雜芳基」係指如上文定義的雜芳基，且其中雜芳基與分子之剩餘部分之連接點係經由雜芳基中之碳原子。C-雜芳基如上文對雜芳基所述為視需要經取代的。

「雜芳基烷基」係指式-R^c -雜芳基之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈。若雜芳基為含氮雜芳基，則雜芳基視需要在氮原子處連接至烷基。雜芳基烷基之伸烷基鏈如上文對伸烷基鏈所定義為視需要經取代的。雜芳基烷基之雜芳基部分如上文對雜芳基所定義為視需要經取代的。

「雜芳基烷氧基」係指式-O-R^c -雜芳基的經由氧原子鍵接之基團，其中R^c 為如上文定義的伸烷基鏈。若雜芳基為含氮雜芳基，則雜芳基視需要在氮原子處連接至烷基。雜芳基烷氧基之伸烷基鏈如上文對伸烷基鏈所定義為視需要經取代的。雜芳基烷氧基之雜芳基部分如上文對雜芳基所定義為視需要經取代的。

在一些實施例中，本文揭示的化合物含有一或多個不對稱中心且因此產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他立體異構形式，該等形式就絕對立體化學而言以(R)-或(S)-來定義。除非另有說明，否則本文揭示的化合物之所有立體異構形式意欲由本揭示內容所涵蓋。當本文描述的化合物含有烯烴雙鍵，且除非另有指定，否則本揭示內容意欲包括E及Z幾何異構物二者(例如，順式或反式)。同樣地，亦意指包括所有可能的異構物以及其外消旋及光學純形式及所有互變異構形式。術語「幾何異構物」係指烯烴雙鍵之E或Z幾何異構物(例如，順式或反式)。術語「位置異構物」係指圍繞中心環之結構異構物，諸如圍繞苯環之鄰位異構物、間位異構物及對位異構物。

「互變異構物」係指其中自分子之一個原子至同一分子之另一原子的質子移位為可能的的分子。在某些實施例中，本文提出的化合物係作為互變異構物存在。在其中互變為可能的情況中，將存在互變異構物之化學平衡。互變異構物之確切比率取決於若干因素，包括物理狀態、溫度、溶劑及pH。互變異構平衡之一些實例包括：

「醫藥學上可接受的鹽」包括酸加成鹽及鹼加成鹽。本文描述的任一經取代之雜環衍生物化合物之醫藥學上可接受的鹽意欲涵蓋任何及所有醫藥學上適合的鹽形式。本文描述的化合物之較佳醫藥學上可接受的鹽為醫藥學上可接受的酸加成鹽及醫藥學上可接受的鹼加成鹽。

「醫藥學上可接受的酸加成鹽」係指保留游離鹼之生物有效性及性質，不是生物學上或在其他情況下不合需要的，且與無機酸所形成的彼等鹽，該等無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫碘酸、氫氟酸、亞磷酸及類似物。亦包括與有機酸形成的鹽，該等有機酸諸如脂族單羧酸及二羧酸、經苯基取代之鏈烷酸、羥基鏈烷酸、鏈烷二羧酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸等等，且包括例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及類似物。示範性鹽因此包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸、順丁烯二酸、扁桃酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽及類似物。亦涵蓋胺基酸之鹽，諸如藻酸鹽、葡萄糖酸鹽及半乳糖醛酸鹽(參見，例如，Berge S.M.等人, Pharmaceutical Salts, J. Pharma. Sci. 66:1-19 (1997))。在一些實施例中，鹼性化合物之酸加成鹽係藉由根據熟練技藝人士所熟悉的方法及技術使游離鹼形式與足夠量的所欲酸接觸以產生鹽來製備。

「醫藥學上可接受的鹼加成鹽」係指保留游離酸之生物有效性及性質，不是生物學上或在其他情況下不合需要的彼等鹽。此等鹽係由將無機鹼或有機鹼添加至游離酸而製備。在一些實施例中，醫藥學上可接受的鹼加成鹽係由金屬或胺來形成，諸如鹼金屬及鹼土金屬或有機胺。衍生自無機鹼之鹽包括但不限於鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽及類似鹽。衍生自有機鹼之鹽包括但不限於以下各項之鹽：一級、二級及三級胺、包括天然存在的經取代胺之經取代胺、環胺及鹼性離子交換樹脂，例如，異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基胺基乙醇、2-二乙基胺基乙醇、二環己基胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因、普魯卡因、N,N-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、海卓胺、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、乙二苯胺、N-甲基葡糖胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可鹼、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、多胺樹脂及類似物。參見Berge等人，同上。

如本文所使用，「治療(treatment)」或「治療(treating)」或「減輕」或「改善」可互換地使用。此等術語係指用於獲得包括而不限於治療益處和/或預防益處的有益或所欲結果之方法。「治療益處」意指所治療之基本病症之根除或改善。此外，治療益處係以根除或改善相關聯於基本病症之生理學症狀中之一或多者以使得在患者中觀察到改善而達成，即便是患者仍受基本病症之折磨亦如此。對於預防益處，在一些實施例中，組成物係投與至有風險患上特定疾病之患者，或投與至報告一疾病之生理學症狀中之一或多者的患者，即使尚未做出此疾病之診斷亦如此。

「前藥」意欲指示在一些實施例中在生理學條件下轉化或藉由溶劑分解而轉化成本文描述的生物學上活性化合物之化合物。因此，術語「前藥」係指醫藥學上可接受的生物學上活性化合物之前驅物。當投與至受試者時前藥典型地為惰性的，但例如藉由水解而活體內轉化成活性化合物。前藥化合物常常在哺乳動物生物體內提供可溶性、組織相容性或延遲釋放之優點(參見，例如，Bundgard, H., DESIGN OF PRODRUGS (1985),第7-9, 21-24頁(Elsevier, Amsterdam)。

對前藥之論述提供於Higuchi, T.等人, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, A.C.S. Symposium Series,第14卷及Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B. Roche編, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987中。

術語「前藥」亦意欲包括任何共價鍵結之載劑，該等載劑在當此種前藥投與至哺乳動物受試者時活體內釋放活性化合物。如本文描述的活性化合物之前藥係藉由以一方式修飾活性化合物中存在的官能基來製備，該方式使得該等修飾為在常規操控或活體內分解成親本活性化合物。前藥包括其中羥基、胺基或巰基鍵接至當活性化合物之前藥投與至哺乳動物受試者時分別分解形成游離羥基、游離胺基或游離巰基之任何基團的化合物。前藥之實例包括但不限於活性化合物中醇或胺官能基之乙酸鹽、甲酸鹽及苯甲酸鹽衍生物及類似物。經取代之雜環衍生物化合物

本文提供使用適用於抑制離胺酸特異性去甲基酶-1 (lysine specific demethylase-1; LSD-1)之經取代之雜環衍生物化合物及包含化合物之醫藥組成物來治療復發性和/或難治性實體腫瘤(包括神經內分泌癌(neuroendocrine carcinoma; NEC))及非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma; NHL)及類似腫瘤的方法。適用於抑制LSD-1之適合的經取代之雜環衍生物化合物包括在以下各項中描述的彼等化合物：2015年4月30日提交的美國專利申請序列號第14/701,304號(現為美國專利第9,255,097號)、2016年1月5日提交的美國專利申請序列號第14/988,022號、2016年2月8日提交的美國專利申請序列號第15/018,814號及國際專利申請案第PCT/US2015/028635號，其全部主張2014年5月1日提交的美國專利申請序列號第61/987,354號之優先權權益；以及包括在2015年11月5日提交的美國專利申請序列號第62/251,507號中描述的彼等化合物。此等申請案中各者及每一者之內容係以全文引用之方式併入本文以達所有目的。

一個實施例提供具有式(I)之結構的化合物或其醫藥學上可接受的鹽，

一個實施例提供具有式(Ia)之結構的式(I)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，

一個實施例提供具有式(Ib)之結構的式(I)或(Ia)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中W為C-H。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中W為C-F。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中W為N。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為氫。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為鹵素。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為視需要經取代之炔基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為視需要經取代之碳環基炔基。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為視需要經取代之芳基或視需要經取代之雜芳基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為視需要經取代之芳基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為視需要經取代之苯基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X為視需要經取代之雜芳基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中X選自視需要經取代之吡啶基、視需要經取代之吡唑基或視需要經取代之吲唑基。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Y為氫。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Y為視需要經取代之環烷基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Y為視需要經取代之烷基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Y為視需要經取代之C₁ -C₃ 烷基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Y為視需要經取代之C₁ 烷基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Y為甲基。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-O-雜環基烷基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(H)-雜環基烷基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(Me)-雜環基烷基。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-O-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而R^c 為視需要經取代之C₁ -C₃ 伸烷基鏈。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-O-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而R^c 為視需要經取代之C₁ 伸烷基鏈。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-O-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而雜環基為視需要經取代之含氮4員、5員、6員或7員雜環基。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(H)-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而R^c 為視需要經取代之C₁ -C₃ 伸烷基鏈。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(H)-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而R^c 為視需要經取代之C₁ 伸烷基鏈。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(H)-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而雜環基為視需要經取代之含氮4員、5員、6員或7員雜環基。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(Me)-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而R^c 為視需要經取代之C₁ -C₃ 伸烷基鏈。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(Me)-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而R^c 為視需要經取代之C₁ 伸烷基鏈。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之-N(Me)-雜環基烷基，且雜環基烷基具有式-R^c -雜環基，而雜環基為視需要經取代之含氮4員、5員、6員或7員雜環基。

另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之N-雜環基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為4員、5員、6員或7員N-雜環基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為6員N-雜環基。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之哌啶。另一實施例提供式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽，其中Z為視需要經取代之4-胺基哌啶。

在一些實施例中，式(I)、(Ia)或(Ib)中描述的經取代之雜環衍生物化合物具有表1中提供的結構。

在一些實施例中，本文描述的經取代之雜環衍生物化合物具有表2中提供的結構。

經取代之雜環衍生物化合物之製備

用於本文描述的反應中之化合物係根據熟習此項技術者所知的有機合成技術，自可商購化學品和/或化學文獻中描述的化合物開始來製得。「可商購化學品」係自包括以下的標準商業來源來獲得：Acros Organics (Pittsburgh, PA)、Aldrich Chemical (Milwaukee, WI，包括Sigma Chemical及Fluka)、Apin Chemicals Ltd. (Milton Park, UK)、Avocado Research (Lancashire, U.K.)、BDH Inc. (Toronto, Canada)、Bionet (Cornwall, U.K.)、Chemservice Inc. (West Chester, PA)、Crescent Chemical Co. (Hauppauge, NY)、Eastman Organic Chemicals、Eastman Kodak公司(Rochester, NY)、Fisher Scientific Co. (Pittsburgh, PA)、Fisons Chemicals (Leicestershire, UK)、Frontier Scientific (Logan, UT)、ICN Biomedicals, Inc. (Costa Mesa, CA)、Key Organics (Cornwall, U.K.)、Lancaster Synthesis (Windham, NH)、Maybridge Chemical Co. Ltd. (Cornwall, U.K.)、Parish Chemical Co. (Orem, UT)、Pfaltz & Bauer, Inc. (Waterbury, CN)、Polyorganix (Houston, TX)、Pierce Chemical Co. (Rockford, IL)、Riedel de Haen AG (Hanover, Germany)、Spectrum Quality Product, Inc. (New Brunswick, NJ)、TCI America (Portland, OR)、Trans World Chemicals, Inc. (Rockville, MD)及Wako Chemicals USA, Inc. (Richmond, VA)。

詳述適用於製備本文描述的化合物之反應物的合成或對描述該製備之文章提供參考的適合參考書籍及論文包括例如SYNTHETIC ORGANIC CHEMISTRY, John Wiley & Sons, Inc., New York；S. R. Sandler等人, ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS, 第2版, Academic Press, New York, 1983；H. O. House, MODERN SYNTHETIC REACTIONS, 第2版, W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif. 1972；T. L. Gilchrist, HETEROCYCLIC CHEMISTRY, 第2版, John Wiley & Sons, New York, 1992；J. March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY: REACTIONS, MECHANISMS & STRUCTURE, 第4版, Wiley-Interscience, New York, 1992。詳述適用於製備本文描述的化合物之反應物的合成或對描述該製備之文章提供參考的另外適合參考書籍及論文包括例如Fuhrhop, J.及Penzlin G., ORGANIC SYNTHESIS: CONCEPTS, METHODS, STARTING MATERIALS, SECOND, REVISED & ENLARGED EDITION (1994) John Wiley & Sons ISBN: 3-527-29074-5；Hoffman, R.V., ORGANIC CHEMISTRY, AN INTERMEDIATE TEXT (1996) Oxford University Press, ISBN 0-19-509618-5；Larock, R. C. COMPREHENSIVE ORGANIC TRANSFORMATIONS: A GUIDE TO FUNCTIONAL GROUP PREPARATION, 第2版(1999) Wiley-VCH, ISBN: 0-471-19031-4；March, J. ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY: REACTIONS, MECHANISMS, & STRUCTURE, 第4版(1992) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-60180-2；Otera, J. (編), MODERN CARBONYL CHEMISTRY, (2000) Wiley-VCH, ISBN: 3-527-29871-1；Patai, S., PATAI'S 1992 GUIDE TO THE CHEMISTRY OF FUNCTIONAL GROUPS, (1992) Interscience ISBN: 0-471-93022-9；Solomons, T.W.G., ORGANIC CHEMISTRY, 第7版 (2000) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-19095-0；Stowell, J.C., INTERMEDIATE Organic Chemistry, 第2版 (1993) Wiley-Interscience, ISBN: 0-471-57456-2；INDUSTRIAL ORGANIC CHEMICALS: STARTING MATERIALS & INTERMEDIATES: AN ULLMANN'S ENCYCLOPEDIA, (1999) John Wiley & Sons, ISBN: 3-527-29645-X, 8卷；ORGANIC REACTIONS (1942-2000) John Wiley & Sons, 超過55卷；及CHEMISTRY OF FUNCTIONAL GROUPS, John Wiley & Sons, 73卷。

特定及類似的反應物視需要經由美國化學學會之化學文摘服務社製備的已知化學品之索引來識別，該等索引可在大多數公共及大學圖書館得到以及經由線上資料庫得到(聯繫華盛頓DC之美國化學學會獲得更多細節)。已知的但目錄中不可商購的化學品係視需要藉由慣用的化學合成室製備，其中許多標準的化學供應室(例如，彼等上文所列者)提供慣用的合成服務。用於製備及選擇本文描述的經取代之雜環衍生物化合物之醫藥鹽的參考文獻為P. H. Stahl & C. G. Wermuth, HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS, Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich, 2002。

經取代之雜環衍生物化合物係藉由下文在方案1中描述的通用合成路線來製備。方案1

參考方案1，分子A係選擇性地水解來得到分子B。分子C係利用各種烷基鹵化物R₁ -X自分子B之N-烷基化來獲得。三氯化物分子C之選擇性置換係利用各種胺HN(R₂ )(R₂ ’)於鹼性條件下進行以形成分子D。分子E係利用硼酸例如R₃ -B(OH)₂ 或硼酸酯於鈀介導之交叉偶合條件下自分子D製備。分子F係利用硼酸例如R₃ -B(OH)₂ 或硼酸酯於鈀介導之交叉偶合條件下自化合物E製備。經取代之雜環衍生物化合物之醫藥組成物

在某些實施例中，如本文描述的經取代之雜環衍生物化合物係作為純化學品來投與。在其他實施例中，本文描述的經取代之雜環衍生物化合物係與醫藥學上適合的或可接受的載劑(本文中亦稱為醫藥學上適合的(或可接受的)賦形劑、生理學上適合的(或可接受的)賦形劑或生理學上適合的(或可接受的)載劑)組合，該載劑係基於選定投與路線及如例如在REMINGTON : THE SCIENCE & PRACTICE OF PHARMACY (Gennaro, 第21版Mack Pub. Co., Easton, PA (2005))中描述的標準醫藥實踐來選擇。

本文提供的為一種醫藥組成物，其包含至少一種經取代之雜環衍生物化合物或其立體異構物、醫藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑合物或N-氧化物連同一或多種醫藥學上可接受的載劑。若載劑係與組成物之其他成分相容但對組成物之接受者(亦即，受試者)無害，則載劑(或賦形劑)為可接受的。

一個實施例提供醫藥組成物，其包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受的鹽及醫藥學上可接受的賦形劑。一個實施例提供醫藥組成物，其包含式(Ia)化合物或其醫藥學上可接受的鹽及醫藥學上可接受的賦形劑。一個實施例提供醫藥組成物，其包含式(Ib)化合物或其醫藥學上可接受的鹽及醫藥學上可接受的賦形劑。

在某些實施例中，如藉由式(I)描述的經取代之雜環衍生物化合物係實質上純的，因為其含有小於約5%或小於約1%或小於約0.1%之其他有機小分子，諸如未反應中間物或例如在合成方法之一或多個步驟中產生的合成副產物。

適合的口服劑量形式包括例如錠劑、藥丸、藥包，或者硬或軟明膠、甲基纖維素或容易溶於消化道中的另一適合材料之膠囊。在一些實施例中，使用適合的無毒固體載劑，其包括例如醫藥級之甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂及類似載劑。(參見，例如，REMINGTON: THE SCIENCE & PRACTICE OF PHARMACY (Gennaro, 第21版 Mack Pub. Co., Easton, PA (2005))。

如本文描述的包含至少一種經取代之雜環衍生物化合物的組成物之劑量取決於患者(例如，人類)之狀況，亦即，疾病之階段、一般健康狀態、年齡及其他因素而有所不同。

醫藥組成物係以適於待治療(或預防)的疾病之方式投與。適當劑量及適合的投與持續時間及頻率將藉由諸如以下的因素來決定：患者之條件、患者疾病之類型及嚴重性、活性成分之特定形式及投與方法。一般而言，適當的劑量及治療方案係以足以提供治療和/或預防益處(例如，改善的臨床結果，諸如更頻繁的完整或部分緩解，或較長的無疾病和/或總體倖存，或症狀嚴重性之減輕)的量來提供組成物。最佳劑量通常使用經驗模型和/或臨床試驗來決定。最佳劑量取決於患者之身體質量、重量或血容量。

口服劑量典型地在約1.0 mg至約1000 mg範圍變化，在每天一次至四次或更多次範圍變化。經取代之雜環衍生物化合物之用途

表觀遺傳學為對除基本DNA序列之外的機制所引起的基因表現中之遺傳性改變的研究。在表觀遺傳學調節中起作用的分子機制包括DNA甲基化作用及染色質/組織蛋白修飾。

真核生物之基因組在細胞之核內高度地組織。需要極大的壓實作用來封裝人類基因組之30億核苷酸至細胞之核中。染色質為DNA及構成染色體之蛋白質的複合物。組織蛋白為染色質之主要蛋白質組分，其充當DNA圍繞其纏繞的軸。染色質結構之改變受組織蛋白蛋白質之共價修飾及非組織蛋白結合蛋白質的影響。已知在各種位點處修飾組織蛋白的若干類別之酶。

存在總共六個類別之組織蛋白(HI、H2A、H2B、H3、H4及H5)，其係組織成兩個群組：核心組織蛋白(H2A、H2B、H3及H4)及連接子組織蛋白(HI及H5)。染色質之基本單位為核小體，其由圍繞核心組織蛋白八聚物纏繞的DNA之約147個鹼基對組成，該八聚物由核心組織蛋白H2A、H2B、H3及H4中每一者的兩個副本組成。

基本核小體單位隨後藉由核小體之聚集及折疊以形成高度濃縮的染色質結構而進一步得以組織及縮合。大範圍的不同縮合狀態係可能的，且染色質結構之緊實度在細胞週期期間變化，在細胞分裂過程期間最為壓實。

染色質結構在調節基因轉錄中起到關鍵作用，其不可自高度縮合的染色質有效地發生。染色質結構係藉由對組織蛋白蛋白質之一系列轉譯後修飾來控制，該等組織蛋白蛋白質主要是H3及H4，且最通常處於組織蛋白尾部，其延伸超出核心核小體結構。此等修飾為乙醯化、甲基化、磷酸化、核糖基化、類泛素化、泛蛋白化、瓜胺酸化、去亞胺化及生物素化。亦可修飾組織蛋白H2A及H3之核心。組織蛋白修飾係於多樣生物過程為整體，該等生物過程諸如基因調節、DNA修復及染色體縮合。

組織蛋白甲基化為最重要的染色質標誌之一；此等標誌在轉錄調節、DNA破壞反應、異染色質形成及維持及X染色體鈍化中起重要作用。近來的發現亦揭露：組織蛋白甲基化藉由影響剪接調節子之募集而影響前-mRNA之剪接結果。組織蛋白甲基化包括離胺酸之單甲基化、二甲基化及三甲基化，及精胺酸之單甲基化、對稱二甲基化及不對稱二甲基化。此等修飾可為活化或抑制標誌，其取決於甲基化之位點及程度。組織蛋白去甲基酶

如本文所提及的「去甲基酶」或「蛋白質去甲基酶」係指自多肽移除至少一個甲基的酶。去甲基酶包含JmjC結構域，且可為甲基-離胺酸或甲基-精胺酸去甲基酶。一些去甲基酶作用於組織蛋白，例如，充當組織蛋白H3或H4去甲基酶。例如，H3去甲基酶可使H3K4、H3K9、H3K27、H3K36和/或H3K79中一或多者去甲基化。替代地，H4去甲基酶可使組織蛋白H4K20去甲基化。去甲基酶為已知的，其可使單甲基化、二和/或三甲基化底物去甲基化。另外，組織蛋白去甲基酶可作用於甲基化核心組織蛋白底物、單核小體底物、二核小體底物和/或寡核小體底物、肽底物和/或染色質(例如，在基於細胞之分析中)。

首先發現的離胺酸去甲基酶為離胺酸特異性去甲基酶1 (lysine specific demethylase 1; LSD-1/KDM1)，其係使用黃素作為輔因子使單甲基化及二甲基化H3K4或H3K9去甲基化。第二類含有組織蛋白去甲基酶之Jumonji C (JmjC)結構域係預測的，且當使用甲醛釋放分析發現H3K36去甲基酶時得以確認，將其稱為含有組織蛋白去甲基酶1之JmjC結構域(JHDM1/KDM2A)。

隨後識別了更多含JmjC結構域之蛋白質且其可系統發育地叢集成七個亞科：JHDM1、JHDM2、JHDM3、JMJD2、JARID、PHF2/PHF8、UTX/UTY及僅JmjC結構域。 LSD-1

離胺酸特異性去甲基酶1 (lysine-specific demethylase 1; LSD-1)為組織蛋白離胺酸去甲基酶，其特異地使K4處的單甲基化及二甲基化組織蛋白H3去甲基化，且亦使在K9處的二甲基化組織蛋白H3去甲基化。儘管LSD-1之主要目標似乎為單甲基化及二甲基化組織蛋白離胺酸，特別是H3K4及H3K9，但在文獻中有證據表明LSD-1可使如p53、E2F1、Dnmtl及STAT3之非組織蛋白蛋白質上的甲基化離胺酸去甲基化。

LSD-1具有與多胺氧化酶及單胺氧化酶之相當程度的結構相似性及胺基酸身份/同源性，該等氧化酶(亦即，MAO-A、MAO-B及LSD-1)全部為黃素依賴性胺氧化酶，其催化氮-氫鍵和/或氮-碳鍵之氧化。LSD-1亦包括N-末端SWRIM結構域。存在藉由替代剪接產生的兩種LSD-1轉錄物變異體。

在一些實施例中，本文揭示的化合物能夠藉由使生物樣本與如本文揭示的經取代之雜環化合物接觸而抑制生物樣本中之LSD-1活性。在一些實施例中，如本文揭示的經取代之雜環化合物能夠調節生物樣本中組織蛋白-4離胺酸-3甲基化之位準。在一些實施例中，如本文揭示的經取代之雜環化合物能夠調節生物樣本中之組織蛋白-3離胺酸-9甲基化位準。

本文揭示的經取代之雜環化合物缺乏顯著的MAO-A或MAO-B抑制活性。在一些實施例中，如本文揭示的經取代之雜環化合物抑制LSD-1抑制活性至比MAO-A和/或MAO-B抑制活性更大的程度。

一個實施例提供調節細胞中之基因轉錄的方法，該方法包含藉由使離胺酸特異性去甲基酶1酶暴露於式(I)化合物而抑制離胺酸特異性去甲基酶1活性。一個實施例提供調節細胞中之基因轉錄的方法，該方法包含藉由使離胺酸特異性去甲基酶1酶暴露於式(Ia)化合物而抑制離胺酸特異性去甲基酶1活性。一個實施例提供調節細胞中之基因轉錄的方法，該方法包含藉由使離胺酸特異性去甲基酶1酶暴露於式(Ib)化合物而抑制離胺酸特異性去甲基酶1活性。治療方法

本文揭示的為通常或相對於一或多個特異靶基因調節細胞或受試者中的去甲基化之方法。去甲基化經調節以控制各種細胞功能，其包括而不限於：分化；增殖；凋亡；腫瘤形成、白血病生成或其他致癌轉變事件；掉髮；或性別分化。

在另一實施例中，提供使用適用於抑制離胺酸特異性去甲基酶-1 (lysine specific demethylase-1; LSD-1)之經取代之雜環衍生物化合物及包含化合物之醫藥組成物來治療復發性和/或難治性實體腫瘤(包括神經內分泌癌(neuroendocrine carcinoma; NEC))及非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma; NHL)及類似腫瘤的方法。復發性係指在改善期之後疾病或疾病之體徵及症狀之返回。難治性係指對治療不反應之疾病或病狀。難治性癌症涉及對治療不反應之癌症且包括其中癌症可在治療開始時有抗性或癌症在治療期間變得有抗性之情況。

神經內分泌腫瘤係在身體神經內分泌系統之產生激素之細胞中開始，其由在傳統的產生激素之內分泌細胞與神經細胞之間的交叉之細胞構成。神經內分泌細胞在遍及身體的諸如肺及胃腸道(包括胃及腸)之器官中發現。該等細胞執行特定功能，諸如調節穿過肺之空氣及血流並控制食物移動穿過胃腸道所處的速度。存在許多類型的神經內分泌腫瘤，包括三個特定類型：嗜鉻細胞瘤、Merkel氏細胞癌及神經內分泌癌。

嗜鉻細胞瘤為在腎上腺之嗜鉻細胞中開始的罕見腫瘤。此等特化細胞在應力時間期間釋放激素腎上腺素。嗜鉻細胞瘤最常常出現在腎上腺髓質中腎上腺內側的區域中。此類型的腫瘤增加激素腎上腺素及去甲腎上腺素之生產，從而增加血壓及心率。即使嗜鉻細胞瘤通常為良性的，但其可仍為危及生命的，因為腫瘤可在損傷後釋放大量腎上腺素至血流中。患有嗜鉻細胞瘤之人的百分之八十(80%)僅在一個腎上腺上具有腫瘤，10%在兩個腺體上具有腫瘤，且10%在腎上腺外部具有腫瘤。

Merkel氏細胞癌症，亦稱為皮膚之神經內分泌癌或梁索型癌(trabular cancer)，其為高度侵襲性的(快速生長)、罕見癌症。其在恰好在皮膚之下的產生激素之細胞及毛髮濾泡中開始，且其在頭及頸區中被發現。

大致60%之神經內分泌腫瘤無法描述為除神經內分泌癌之外的特定類型之癌症。神經內分泌癌可在身體中的許多地方開始，包括肺、腦及胃腸道。

神經內分泌癌之症狀可包括：高血糖(血液中糖過多)；低血糖(血液中糖過少)；腹瀉；特定區域的持續疼痛；食欲缺乏/重量損失；持續咳嗽或嘶啞；身體任何部位的增厚或腫塊；腸或膀胱習性之改變；不可解釋的重量增加或損失；黃疸(皮膚變黃)；異常的流血或排泄；持續發燒或夜間盜汗；頭痛；焦慮；及胃潰瘍疾病。

非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma; NHL)為其中惡性(癌症)細胞在淋巴系統中形成的疾病。存在許多不同類型的自不同類型之白血球(B細胞、T細胞、NK細胞)形成的NHL。大多數類型的NHL係自B細胞形成。NHL可為無痛的(生長緩慢)或侵襲性的(快速生長)。成人中的大多數常見類型的NHL為通常為侵襲性的擴散性大B細胞淋巴瘤，及通常為無痛的濾泡性淋巴瘤。蕈樣黴菌病及塞劄瑞症候群為在皮膚中之白血球中開始的NHL類型。原發性中樞神經系統淋巴瘤為在腦、脊髓或眼睛中之白血球中開始的罕見類型的NHL。

非霍奇金氏淋巴瘤係以不同速率生長及蔓延，且可為無痛的或侵襲性的。無痛淋巴瘤趨向於緩慢地生長及蔓延，且具有幾種體徵及症狀。侵襲性淋巴瘤快速地生長及蔓延，且具有可為嚴重的體徵及症狀。

無痛NHL可包括濾泡性淋巴瘤、淋巴漿細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、類單核球B細胞淋巴瘤、胃黏膜相關聯淋巴組織(gastric mucosa-associated lymphoid tissue; MALT)淋巴瘤、胃外MALT淋巴瘤、地中海腹部淋巴瘤、脾臟邊緣區淋巴瘤及原發性皮膚退行性大細胞淋巴瘤。侵襲性NHL可包括瀰漫性大B細胞淋巴瘤、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、濾泡性大細胞淋巴瘤、III期退行性大細胞淋巴瘤(包括皮膚退行性大細胞淋巴瘤及全身性退行性大細胞淋巴瘤)、淋巴結外NK細胞/T細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣肉芽腫病、血管免疫母細胞性T細胞淋巴瘤、末梢T細胞淋巴瘤、肝脾T細胞淋巴瘤、皮下類脂層炎T細胞淋巴瘤、腸病變類型腸內T細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴胚細胞性淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、外套細胞淋巴瘤、移植後淋巴球增生病症、真組織細胞性淋巴瘤、原發性滲出淋巴瘤及漿母細胞淋巴瘤。

其他實施例及用途將依據本揭示內容而言對熟習此項技術者顯而易見。以下實例僅僅作為對各種實施例之說明來提供且不應解釋為以任何方式限制本發明。實例 I.化學合成

除非另有說明，否則試劑及溶劑係按自商業供應者接受原樣使用。無水溶劑及烘乾玻璃器皿係用於對水分和/或氧敏感的合成轉變。產率未最佳化。反應時間為大致的且未最佳化。除非另有說明，否則管柱層析法及薄層層析法(thin layer chromatography; TLC)係在矽膠上執行。光譜係以ppm(δ)給出，且偶合常數J係以赫茲來報告。對質子光譜而言，溶劑峰係用作參考峰。製備1A：2,5,6-三氯嘧啶-4-醇

向2,4,5,6-四氯嘧啶(5 g, 22.9 mmol)於THF (50 mL)中之溶液逐滴添加1N NaOH (31 mL, 31.2 mmol)，且在RT下攪拌混合物隔夜。利用1N HCl酸化溶液且利用DCM萃取(3x)。將有機物組合、乾燥且真空濃縮。在RT下將固體於Et₂ O中調漿30 min，過濾，用Et₂ O洗滌且乾燥以得到3.0 g (66%)之標題化合物。針對C₄ HCl₃ N₂ O計算之[M+H]，201；實驗值，201。製備1B：2,5,6-三氯-3-甲基-3-氫嘧啶-4-酮

在0℃下向2,5,6-三氯嘧啶-4-醇(1 g, 5.0 mmol)及K₂ CO₃ (759 mg, 5.5 mmol)於THF (50 mL)中之混合物逐滴添加碘甲烷(714 mg, 5.0 mmol)，且在RT下攪拌反應隔夜。利用乙酸乙酯(ethyl acetate; EA)稀釋反應混合物。將有機相利用鹽水洗滌，乾燥且真空濃縮。藉由矽膠層析法(10:1, PE:EA)純化殘餘物以得到760 mg (71%)之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 3.74 (s, 3 H)。針對C₅ H₃ Cl₃ N₂ O計算之[M+H]，213；實驗值，213。製備1C：N-[1-(5,6-二氯-3-甲基-4-側氧基(3-氫嘧啶-2-基)) (4-哌啶基)](第三丁氧基)甲醯胺

在120℃下將2,5,6-三氯-3-甲基-3-氫嘧啶-4-酮(426 mg, 2.0 mmol)、DIEA (536 mg, 4.0 mmol)及哌啶-4-基胺甲酸第三丁酯(400 mg, 2 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液加熱1 h。將溶劑真空移除且藉由矽膠層析法(1:1, PE:EA)純化殘餘物以得到550 mg (73%)之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.45 (s, 9H),1.50-1.58 (m, 2H), 2.06-2.10 (m, 2H), 2.98-3.05 (m, 2H), 3.48 (s, 3 H), 3.53-3.56 (m, 2H), 3.70 (s, 1H), 4.52 (s, 1H)。針對C₁₅ H₂₂ Cl₂ N₄ O₃ 計算之[M+H]，213；實驗值，213。製備1D：1-(5-氯-4-(4-氰基苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)哌啶-4-基胺甲酸第三丁酯

用氮沖洗N-[1-(5,6-二氯-3-甲基-4-側氧基(3-氫嘧啶-2-基))(4-哌啶基)](第三丁氧基)甲醯胺(500 mg, 1.3 mmol)、4-氰基苯基硼酸(195 mg, 1.3 mmol)、[1,1′-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (81 mg, 0.13 mmol)及K₂ CO₃ (359 mg, 2.6 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物，且在85℃下攪拌2 h。添加水，且利用EA萃取混合物(3x)。將有機物合併，用水洗滌，用鹽水洗滌，乾燥且真空濃縮。藉由矽石層析法(1:1, EA:PE)純化殘餘物以得到250 mg (40%)之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.45 (s, 9H), 1.54-1.61 (m, 2H), 2.05-2.10 (m, 2H), 2.99-3.05 (m, 2H), 3.48-3.56 (s, 5H), 3.70 (s, 1H), 4.56 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.0 Hz, 2H)。針對C₂₂ H₂₆ ClN₅ O₃ 計算之[M+H]，444；實驗值，444。製備1E：1-(4-(4-氰基苯基)-1-甲基-6-側氧基-5-對甲苯基-1,6-二氫嘧啶-2-基)哌啶-4-基胺甲酸第三丁酯

用氮沖洗1-(5-氯-4-(4-氰基苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)哌啶-4-基胺甲酸第三丁酯(200 mg, 0.45 mmol)、對甲苯基硼酸(123 mg, 0.90 mmol)、[1,1′-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (28 mg, 0.045 mol)及K₂ CO₃ (124 mg, 0.90 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物，且在85℃下攪拌2 h。添加水，且利用EA萃取混合物(3x)。將有機物合併，用水洗滌，用鹽水洗滌，乾燥且真空濃縮。藉由矽石層析法(1:1, EA:PE)純化殘餘物以得到50 mg (22%)之標題化合物。針對C₂₉ H₃₃ N₅ O₃ 計算之[M+H]，500；實驗值，500。實例1：4-(2-(4-胺基哌啶-1-基)-1-甲基-6-側氧基-5-對甲苯基-1,6-二氫嘧啶-4-基)苯甲腈，HCl鹽

向1-(4-(4-氰基苯基)-1-甲基-6-側氧基-5-對甲苯基-1,6-二氫嘧啶-2-基)哌啶-4-基胺甲酸第三丁酯(50 mg, 0.1 mmol)於EA (10 mL)中之溶液添加EA (5 mL)中之4N HCl溶液，且在RT下將混合物攪拌2 h。將溶劑真空濃縮，且藉由製備HPLC純化殘餘物以得到20 mg (46%)之呈鹽酸鹽的標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.74-1.79 (m,2H), 2.00-2.04 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.96-3.03 (m, 2H), 3.29-3.03 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.71-3.74 (m, 2H), 6.89 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.44(d, J = 8.4 Hz, 2H)。針對C₂₄ H₂₅ N₅ O計算之[M+H]，400；實驗值，400。實例2：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-4-基]-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率5%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.74-1.78 (m, 2H), 2.00-2.03 (m, 2H), 2.98-3.02 (m, 2H), 3.26-3.00 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.70-3.73 (m, 2H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H)。針對C₂₄ H₂₅ N₅ O₂ 計算之[M+H]，416；實驗值，416。實例3：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率11%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.87-1.95 (m, 2H), 2.14-2.17 (m, 2H), 3.15-3.24 (m, 2H), 3.43-3.48 (m, 1H), 3.62 (s,3H), 3.93-3.98 (m, 2H), 4.23 (s, 3H), 7.46 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.71 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 8.12 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H)。針對C₂₃ H₂₄ N₆ O₂ 計算之[M+H]，417；實驗值，417。實例4：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-1-甲基-5-(6-甲基-哌啶-3-基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率4%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz,CD₃ OD): δ 1.79-1.80 (m, 2H), 2.03-2.05 (m, 2H), 2.66 (s, 3H), 3.04-3.09 (m, 2H), 3.30-3.34 (m,1H), 3.50 (s, 3H), 3.83-3.88 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.64 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H)。針對C₂₃ H₂₄ N₆ O計算之[M+H]，401；實驗值，401。實例5：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-4-基]-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率7%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz,CD₃ OD): δ 1.89-1.95 (m, 2H), 2.15-2.18 (m, 2H), 3.14-3.18 (m, 2H), 3.44-3.46 (m, 1H), 3.60 (s,3H), 3.88-3.90 (m, 5H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.96-7.02 (m, 2H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 2H),7.64 (d, J = 8.0 Hz, 2H)。針對C₂₄ H₂₄ FN₅ O₂ 計算之[M+H]，434；實驗值，434。實例6：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率5%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.83-1.89 (m, 2H), 2.10-2.13 (m, 2H), 3.05-3.11 (m, 2H), 3.35-3.38 (m, 1H), 3.55 (s,3H), 3.76 (s, 3H), 3.77-3.82 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.21 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53-7.56 (m, 1H)。針對C₂₄ H₂₄ FN₅ O₂ 計算之[M+H]，434；實驗值，434。製備7A：1-(5-氯-4-(3-氟-4-氰基苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)哌啶-4-基胺甲酸第三丁酯

用氮沖洗N-[1-(5,6-二氯-3-甲基-4-側氧基(3-氫嘧啶-2-基))(4-哌啶基)](第三丁氧基)甲醯胺(150 g, 0.40 mol)、3-氟-4-氰基苯基硼酸(65.8 g, 0.40 mol)、Pd(Ph₃ P)₄ (9.3 g, 8 mmol)及0.4 N Na₂ CO₃ (2 L, 0.80 mol)於ACN (4 L)中之混合物，且在85℃下攪拌2 h。添加水且利用EA萃取混合物(3x)。將有機物合併，用水洗滌，用鹽水洗滌，乾燥且真空濃縮。藉由矽石層析法(1:1, EA:PE)純化殘餘物以得到95 g (57%)之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.45 (s, 9H), 1.54-1.61 (m, 2H), 2.05-2.13 (m, 2H), 2.99-3.08 (m, 2H), 3.53-3.58 (s, 5H), 3.70 (s, 1H), 4.54 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.68-7.80 (m, 3 H)。製備7B：N-[1-[4-(4-氰基-3-氟苯基)-5-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-6-側氧基嘧啶-2-基]哌啶-4-基]胺甲酸第三丁酯

用氮沖洗(第三丁氧基)-N-{1-[5-氯-6-(4-氰基-3-氟苯基)-3-甲基-4-側氧基(3-氫嘧啶-2-基)](4-哌啶基)}甲醯胺(1 g, 2.169 mmol)、3-氟-4-甲氧基苯硼酸(740 mg, 4.338 mmol)、Pd(dppf)Cl₂ (480 mg, 0.651 mmol)及Na₂ CO₃ (690 mg, 6.51 mmol)於二噁烷:H₂ O (3:1, 15 mL)中之混合物，加蓋且在145℃下在微波中攪拌2 h。濃縮反應混合物且藉由FC (1:1, EA:PE)純化殘餘物以得到800 mg (71%)之標題化合物。針對C₂₉ H₃₁ F₂ N₅ O₄ 計算之[M+H]，552；實驗值，552。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ ppm 1.46 (s, 9 H), 1.60 (d, J=10.11 Hz, 2 H), 2.11 (d, J=11.62 Hz, 2 H), 3.06 (t, J=12.00 Hz, 2 H), 3.54 (s, 3 H), 3.60 (d, J=13.64 Hz, 2 H), 3.72 (br. s., 1 H), 3.88 (s, 3 H), 4.52 (br. s., 1 H), 6.79-6.89 (m, 2 H), 6.97 (d, J=12.38 Hz, 1 H), 7.13 (d, J=8.34 Hz, 1 H), 7.31 (d, J=9.85 Hz, 1 H), 7.42 (br. s., 1 H)。實例7：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈(化合物A)

向N-[1-[4-(4-氰基-3-氟苯基)-5-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1-甲基-6-側氧基嘧啶-2-基]哌啶-4-基]胺甲酸第三丁酯(5.2 g, 9.44 mmol)於EA (20 mL)中之溶液添加EA (30 mL)中之1N HCl。在RT下將混合物攪拌2 h。將溶劑真空濃縮以得到呈HCl鹽之標題產物(4.05 g, 88%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.77-1.79 (m, 2H), 2.02-2.04 (m, 2H), 2.99-3.04 (m, 2H), 3.26-3.00 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.73-3.75 (m, 2H), 6.67-6.68 (m, 1H), 6.84-6.95 (m, 2 H), 7.12-7.14 (m, 1H), 7.24-7.36 (m, 1H) , 7.46-7.50 (m, 1H)。針對C₂₄ H₂₃ F₂ N₅ O₂ 計算之[M+H]，452；實驗值，452。實例8：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(6-甲氧基-哌啶-3-基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率6%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.79-1.83 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.04-3.11 (m, 2H), 3.21-3.22 (m, 1H), 3.49(s, 3H), 3.81-3.85 (m, 2H), 4.12 (s, 3H), 7.22-7.24 (m, 1H), 7.38 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.57-7.61 (m, 1H), 8.04-8.07 (m, 1H), 8.21 (s, 1H)。針對C₂₃ H₂₃ FN₆ O₂ 計算之[M+H]，435；實驗值，435。實例9：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率8%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.92-1.96 (m, 2H), 2.16-2.19 (m, 2H), 2.80 (s, 3H), 3.19-3.25 (m, 2H), 3.45-3.49 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.96-3.99 (m, 2H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H)。針對C₂₃ H₂₃ FN₆ O計算之[M+H]，419；實驗值，419。實例10：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(6-乙基-吡啶-3-基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率7%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.30 (t, J = 4.0 Hz, 3H), 1.83-1.88 (m, 2H), 2.06-2.09 (m, 2H), 2.96-2.99 (m, 2H), 3.09-3.16 (m, 2H), 3.26-3.31 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.86-3.89 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H)。針對C₂₄ H₂₆ N₆ O計算之[M+H]，415；實驗值，415。實例11：2-氟-4-[5-(4-甲氧基-苯基)-1-甲基-2-(4-甲基胺基-哌啶-1-基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率7%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz,CD₃ OD): δ 1.80-1.90 (m, 2H), 2.19-2.23 (m, 2H), 2.75 (s, 3H)，3.06-3.12 (m, 2H), 3.32-3.36(m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.84-3.87 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 8.4Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 8.54-7.58 (m, 1H)。針對C₂₅ H₂₆ FN₅ O₂ 計算之[M+H]，448；實驗值，448。實例12：2-氟-4-[5-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1-甲基-2-(4-甲基胺基-哌啶-1-基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率7%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz,CD₃ OD): δ 1.78-1.88 (m, 2H), 2.17-2.20 (m, 2H), 2.73 (s, 3H)，3.05-3.11 (m, 2H), 3.30-3.35(m, 1H), 3.54 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.83-3.86 (m, 2H), 6.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.93-6.99 (m,2H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 8.55-7.589 (m, 1H)。針對C₂₅ H₂₅ F₂ N₅ O₂ 計算之[M+H]，466；實驗值，466。製備13A：2,6-二氯-3-乙基-3H-嘧啶-4-酮

在RT下將2,6-二氯-嘧啶-4-醇(1.0 g, 6.1 mmol)及K₂ CO₃ (1.1 g, 7.9 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液攪拌15 min。將反應混合物冷卻至0℃，且逐滴添加碘乙烷(1.1 mL, 6.7 mmol)。在RT下攪拌隔夜之後，將反應混合物用EA稀釋，用鹽水洗滌，乾燥(Na₂ SO₄ )且真空濃縮。藉由矽石層析法(20:1, EA:PE)純化殘餘物以得到330 mg (28%)之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.37 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 4.76 (q, J = 6.8Hz, 2H), 6.67 (s, 1H)。針對C₆ H₆ Cl₂ N₂ O計算之[M+H]，193、195、197；實驗值，193、195、197。製備13B：[1-(4-氯-1-乙基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基)-哌啶-4-基]-胺甲酸第三丁酯

將2,6-二氯-3-乙基-3H-嘧啶-4-酮(320 mg, 1.64 mmol)、DIEA (423 mg, 3.28 mmol)及(第三丁氧基)-N-(4-哌啶基)甲醯胺(328 mg, 1.64 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液加熱至120℃歷時1 h。將溶劑真空濃縮，且藉由矽石層析法(1:5, EA:PE)純化殘餘物以得到210 mg (36%)之呈黃色固體的標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.25-1.32 (m 2H), 1.35 (t, J = 7.2Hz, 3H), 1.96-2.02 (m, 2H), 2.98-3.06 (m, 2H), 3.70 (br, 1H), 4.30 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 4.44 (br,1H), 4.57-4.61 (m, 2H), 5.95 (s, 1H)。針對C₁₆ H₂₅ ClN₄ O₃ 計算之[M+H]，357、359；實驗值，357、359。製備13C：{1-[4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-乙基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

在90℃下將於CH₃ CN (10 mL)中之[1-(4-氯-1-乙基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基)-哌啶-4-基]-胺甲酸第三丁酯(210 mg, 0.59 mmol)、3-氟-4-氰基苯基硼酸(126 mg, 0.77 mmol)、Pd(PPh)₄ (14 mg, 0.012 mmol)及0.4 M Na₂ CO₃ (4.5 mL, 1.77 mmol)之混合物於N₂ 氣氛下攪拌隔夜。將有機物真空濃縮，且利用DCM萃取水相(2x)。將合併的有機物用鹽水洗滌，乾燥(Na₂ SO₄ )並濃縮。藉由矽石層析法(1:2, EA:PE)純化殘餘物以得到185 mg (64%)之呈黃色固體的標題化合物。針對C₂₃ H₂₈ FN₅ O₃ 計算之[M+H]，442；實驗值，442。實例13：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-1-乙基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

向{1-[4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-乙基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(180 mg, 0.41 mmol)於EA (5 mL)中之混合物添加HCl於EA (3 mL)中之4 M溶液。將反應混合物攪拌30 min。將溶劑真空蒸發以得到150 mg之呈黃色固體(HCl鹽)的標題化合物(97%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 1.48-1.52 (m,2H), 1.99-2.02 (m, 2H), 2.94-3.01 (m, 2H), 3.33-3.38 (m, 1H), 6.81 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 4.85-4.88 (m, 2 H), 6.95 (s, 1H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90-7.95 (m, 2H)。針對C₁₈ H₂₀ FN₅ O計算之[M+H]，342；實驗值，342。製備14A：{1-[4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-環戊基乙炔基-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

在95℃下於密封管中將1-(5-氯-4-(3-氟-4-氰基苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基)哌啶-4-基胺甲酸第三丁酯(200 mg, 0.43 mmol)、乙炔基-環戊烷(82 mg, 0.87 mmol)、Pd(MeCN)₂ Cl₂ (4.5 mg, 0.017 mmol)、X-Phos (10 mg, 0.022 mmol)及K₂ CO₃ (120 mg, 0.87 mmol)於ACN (15 mL)中之混合物攪拌隔夜。將反應混合物冷卻至RT且將溶劑真空濃縮。藉由矽石層析法(1:2, EA:PE)純化殘餘物以得到100 mg (45%)之標題化合物。針對C₂₉ H₃₄ FN₅ O₃ 計算之[M+H]，519；實驗值，519。實例14：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-環戊基乙炔基-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

根據用於製備實例1之一般程序製備呈鹽酸鹽的總產率70%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.50-1.74 (m, 8H), 1.94-1.99 (m, 4H), 2.88-3.01 (m, 4H), 3.51 (s, 3H), 3.60 (d, J =13.2 Hz, 2H), 7.63-7.67 (m, 1H), 8.07-8.11 (m, 2H)。針對C₂₄ H₂₆ FN₅ O計算之[M+H]，419；實驗值，419。製備15A：(2,4,5-三氯-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基)-乙酸甲酯

在0℃下向2,5,6-三氯-3H-嘧啶-4-酮(20.0 g, 0.1 mol)於DMF (150 mL)中之溶液逐份添加NaH (60%於礦物油中，6.0 g, 0.12 mol)，且將混合物攪拌30 min。隨後添加溴乙酸甲酯(18.3 g, 0.12 mol)，且在RT下將反應混合物攪拌隔夜。將溶液用水稀釋(800 mL)且用EA (200 mL, 3x)萃取。將合併有機物用水(800 mL, 3x)、用鹽水(500 mL)洗滌，乾燥(Na₂ SO₄ )且濃縮。藉由矽石層析法(1:50, EA:PE)純化殘餘物以得到6.0 g之標題化合物(22%)。¹ HNMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 3.80 (s, 3H), 5.04 (s, 2H)。針對C₇ H₅ Cl₃ N₂ O₃ 計算之[M+H]，271；實驗值，271。製備15B：[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-4,5-二氯-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸甲酯

在RT下向(2,4,5-三氯-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基)-乙酸甲酯(6.0 g, 22.4 mmol)及哌啶-4-基-胺甲酸第三丁酯(4.9 g, 24.4 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液逐滴添加DIPEA (5.7 g, 44.3 mmol)，且將混合物攪拌隔夜。將反應混合物用水(500 mL)稀釋，且藉由過濾收集固體。隨後將固體溶於DCM (100 mL)中，用水洗滌(100 mL, 3x)，用鹽水(100 mL)洗滌，乾燥(Na₂ SO₄ )且濃縮。藉由矽石層析法(1:2至1:1, DCM:PE)純化殘餘物以得到6.3 g之標題產物(64%)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ1.22-1.34 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.97-2.03 (m, 2H), 2.96-3.09 (m, 2H), 3.68-3.69 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 4.42-4.44 (m, 3H), 4.84 (s, 2H)。針對C₁₇ H₂₄ Cl₂ N₄ O₅ 計算之[M+H]，435；實驗值，435。製備15C：[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-5-氯-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸甲酯

在65℃下將[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-4,5-二氯-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸甲酯(5.76 g, 13.2 mmol)、4-氰基-3-氟苯硼酸(2.24 g, 16.1 mmol)、Pd(PPh₃ )₄ (306 mmol, 0.26 mmol)及Na₂ CO₃ (2.8 g, 26.5 mmol)於DMF:H₂ O (50 mL:10 mL)中之混合物於氮氣氛下攪拌隔夜。將反應混合物濃縮，且藉由矽石層析法(1:20至1:0, EA:PE)純化殘餘物以得到2.4 g之標題產物(43%)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ): δ 1.27-1.37 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.99-2.02 (m, 2H), 2.99-3.06 (m, 2H), 3.68-3.76 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 4.42-4.52 (m, 3H), 4.90 (s, 2H), 7.63-7.66 (m, 1H), 7.67-7.71 (m,2H)。針對C₂₄ H₂₇ ClFN₅ O₅ 計算之[M+H]，520；實驗值，520。製備15D：[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸甲酯

在145℃下將[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-5-氯-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸甲酯(2.2 g, 4.2 mmol)、對甲氧基硼酸(1.9 g, 12.7 mmol)、Pd-118 (274 mg, 0.42 mmol)及K₂ CO₃ (1.2 g, 8.4 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液於氮氣氛下攪拌6 h。將反應混合物用水稀釋且用EA萃取(3x)。將合併的有機物用水洗滌，用鹽水洗滌，乾燥(Na₂ SO₄ )並濃縮。藉由製備HPLC純化殘餘物以得到600 mg之標題產物(24%)。針對C₃₁ H₃₄ FN₅ O₆ 計算之[M+H]，592；實驗值，592。製備15E：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-1-環丙基甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

向[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸甲酯(600 mg, 1.02 mmol)於MeOH (10 mL)中之溶液添加2N NaOH溶液(5 mL)。在完成反應之後，將溶液用1N HCl酸化且用EA萃取(3x)。將合併的有機物用鹽水洗滌，乾燥(Na₂ SO₄ )並濃縮。藉由製備HPLC純化殘餘物以得到240 mg之呈黃色固體的標題產物(41%)。針對C₃₀ H₃₂ FN₅ O₆ 計算之[M+H]，578；實驗值，578。實例15：[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸

向[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸(100 mg, 0.15 mmol)於EA (10 mL)中之溶液添加於EA (5 mL)中之5N HCl溶液。在RT下將反應混合物攪拌2 h，且將溶劑真空濃縮。藉由製備HPLC純化殘餘物以得到25 mg之呈HCl鹽的標題產物(32%)。¹ H NMR (400 MHz,CD₃ OD): δ 1.53-1.56 (m, 2H), 2.00-2.03 (m, 2H), 3.00-3.07 (m, 2H), 3.35-3.39 (m, 1H), 3.67(s, 3H), 4.70 (s, 2H), 4.76-4.77 (m, 2H), 6.74 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.17(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 7.2, 8.0 Hz, 1H)。針對C₂₅ H₂₄ FN₅ O₄ 計算之[M+H]，478；實驗值，478。製備16A：{1-[1-胺甲醯基甲基-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

向[2-(4-第三丁氧基羰基胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙酸(120 mg, 0.2 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液添加NH₄ Cl (17 mg, 0.3 mmol)、HATU (95 mg, 0.25 mmol)及DIEA (25 mg, 0.4 mmol)。在完成反應之後，將溶液用H₂ O稀釋且用DCM萃取(3x)。將合併的有機物乾燥(Na₂ SO₄ )並濃縮。藉由製備HPLC純化殘餘物以得到50 mg之呈黃色固體的標題產物(43%)。針對C₃₀ H₃₃ FN₆ O₅ 計算之[M+H]，577；實驗值，577。實例16：2-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-6H-嘧啶-1-基]-乙醯胺

根據用於製備實例15之程序製備呈鹽酸鹽的產率96%之標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): d1.49-1.53 (m, 2H), 1.98-2.01 (m, 2H), 2.97-3.04 (m, 2H), 3.33-3.36 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 4.69(s, 2H), 4.75-4.78 (m, 2H), 6.75 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.16 (dd, J = 1.2,8.0 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 0.8, 10.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 7.2, 8.0 Hz, 1H)。針對C₂₅ H₂₅ FN₆ O₃ 計算之[M+H]，477；實驗值，477。製備17A：2,6-二氯-3-(3-甲氧基-丙基)-3H-嘧啶-4-酮

在RT下向2,6-二氯-3H-嘧啶-4-酮(600 mg, 3.65 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液添加K₂ CO₃ (1.0 g, 7.3 mmol)，且在RT下將混合物攪拌10 min。隨後在0℃下逐滴添加1-溴-3-甲氧基-丙烷(101 mg, 7.3 mmol)，且在RT下將混合物攪拌隔夜。將DMF真空濃縮，且藉由矽石層析法純化殘餘物以得到400 mg之標題化合物(47%)。針對C₈ H₁₀ Cl₂ N₂ O₂ 計算之[M+H]，237；實驗值，237。製備17B：{1-[4-氯-1-(3-甲氧基-丙基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

在85℃下將2,6-二氯-3-(3-甲氧基-丙基)-3H-嘧啶-4-酮(400 mg, 1.68 mmol)、哌啶-4-基-胺甲酸第三丁酯(405 mg, 2 mmol)及DIEA (260 mg, 2.0 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液攪拌2 h。將溶劑濃縮，且藉由矽石層析法純化殘餘物以得到500 mg之標題化合物(75%)。針對C₁₈ H₂₉ ClN₄ O₄ 計算之[M+H]，400；實驗值，400。製備17C：{1-[4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-(3-甲氧基-丙基)-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

在85℃下將{1-[4-氯-1-(3-羥基-丙基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(200 mg, 0.5 mmol)、4-氰基-3-氟苯基硼酸(107 mg, 0.65 mmol)、Pd(PPh₃ )₄ (12 mg, 0.01 mmol)及0.4M Na₂ CO₃ 溶液(4 mL)於ACN中之混合物攪拌隔夜。將反應混合物用水稀釋且用EA萃取(3x)。在RT下將反應混合物攪拌2 h，且將溶劑真空濃縮。藉由矽石層析法純化殘餘物以得到240 mg之標題產物(99%)。針對C₂₅ H₃₂ FN₅ O₄ 計算之[M+H]，485；實驗值，485。實例17：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-1-(3-羥基-丙基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

在-78℃下向{1-[4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-(3-甲氧基-丙基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(200 mg, 0.41 mmol)於DCM中之溶液添加1M BBr₃ (4 mL)。在RT下將混合物攪拌2 h，且在0℃下用MeOH淬滅。將溶液用飽和NaHCO₃ 水溶液洗滌。將有機層乾燥並濃縮。藉由製備HPLC純化殘餘物以得到35 mg之呈鹽酸鹽的標題產物(23%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): 1.65-1.69 (m, 2H), 1.97-2.19 (m, 4H), 3.13-3.22 (m, 2H), 3.48-3.55 (m, 1H), 3.73 (t, J = 8.0 Hz, 2H),4.55 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 4.94-4.95 (m, 2H), 6.71 (s, 1H), 7.88-8.05 (m, 3H)。針對C₁₉ H₂₂ FN₅ O₂ 計算之[M+H]，371；實驗值，371。製備18A：{1-[5-苯并呋喃-5-基-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

在N₂ 氣氛下將{1-[5-氯-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(200 mg, 0.45 mmol)、苯并呋喃-5-硼酸(120 mg, 0.68 mmol)、Pd(PPh₃ )₄ (26 mg, 0.05 mmol)及2M Na₂ CO₃ (0.9 mL)於1,4-二噁烷(200 mL)中之混合物回流隔夜。將反應混合物用水稀釋且用EA萃取(3x)。將合併的有機物用鹽水洗滌，乾燥(Na₂ SO₄ )並濃縮。藉由矽石層析法純化殘餘物以得到100 mg之標題產物(42%)。針對C₃₀ H₃₀ FN₅ O₄ 計算之[M+H]，543；實驗值，543。實例18：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-苯并呋喃-5-基-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

向製備18A (60 mg, 0.11 mmol)於EA (20 mL)中之溶液添加EA (10 mL)中之4M HCl溶液。在RT下將混合物攪拌2 h。將溶劑真空濃縮以得到43 mg之呈鹽酸鹽的標題產物(53%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): 1.85-1.92 (m, 2H), 2.13-2.18 (m, 2H), 3.10 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 3.31-3.33 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.87 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 6.65-7.21 (m, 3H), 7.38-7.76 (m, 4H), 7.76(s, 1H)。針對C₂₅ H₂₂ FN₅ O₂ 計算之[M+H]，443；實驗值，443。製備19A：{1-[5-氰基-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

在150℃下將{1-[5-氯-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(460 mg, 1 mmol)、Zn(CN)₂ (175 mg, 1.5 mmol)及Pd(PPh₃ )₄ (116 mg, 0.0.1 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物於N₂ 氣氛下攪拌4 h。將反應混合物冷卻至RT且過濾。將濾液真空濃縮，且藉由製備HPLC純化殘餘物以得到150 mg之呈黃色固體的標題產物(33%)。針對C₂₃ H₂₅ FN₆ O₃ 計算之[M+H]，453；實驗值，453。實例19：2-(4-胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-5-甲腈

向{1-[5-氰基-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(150 mg, 0.33 mmol)於EA (5 mL)中之溶液添加EA (5 mL)中之5N HCl溶液。在RT下將反應混合物攪拌2 h，且將溶劑真空濃縮以得到120 mg之呈HCl鹽的標題產物(94%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.67-1.72 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.13-3.16 (m,2H), 3.34-3.38 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.98-4.02 (m, 2H), 7.82-7.90 (m, 3H)。針對C₁₈ H₁₇ FN₆ O計算之[M+H]，353；實驗值，353。實例20：4-[2-(4-胺基哌啶-1-基)-5-氯-1-甲基-6-側氧基嘧啶-4-基]-2-氟苯甲腈

向{1-[5-氯-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(150 mg, 0.33 mmol)於EA (5 mL)中之溶液添加EA (5 mL)中之5N HCl溶液。在RT下將反應混合物攪拌2 h，且將溶劑真空濃縮以得到120 mg之呈HCl鹽的標題產物(94%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.67-1.72 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.13-3.16 (m,2H), 3.34-3.38 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.98-4.02 (m, 2H), 7.82-7.90 (m, 3H)。針對C₁₈ H₁₇ FN₆ O計算之[M+H]，353；實驗值，353。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ): δ ppm 1.73-1.91 (m, 2H), 2.18 (d, J=12.13 Hz, 2 H), 3.06 (t, J=12.76 Hz, 2 H), 3.33-3.40 (m, 1 H), 3.57 (s, 3 H), 3.83(d, J=13.14 Hz, 2 H), 7.75-7.93 (m, 3 H)。

製備120A：[1-(5-氯-4-氰基-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基)-哌啶-4-基]-胺甲酸第三丁酯

在130℃下將N-[1-(5,6-二氯-3-甲基-4-側氧基(3-氫嘧啶-2-基))(4-哌啶基)](第三丁氧基)甲醯胺(2.4 g, 6.38 mmol)、Zn(CN)₂ (388 mg, 3.32 mmol)及Pd(PPh₃ )₄ (740 mg, 0.64 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物於N₂ 氣氛下攪拌5 h。將反應混合物冷卻至RT且過濾。將濾液真空濃縮，且藉由製備HPLC純化殘餘物以得到200 mg之標題產物(9%)。針對C₁₆ H₂₂ ClN₅ O₃ 計算之[M+H]，368；實驗值，368。製備120B：{1-[4-氰基-5-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

將[1-(5-氯-4-氰基-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基)-哌啶-4-基]-胺甲酸第三丁酯(200 mg, 0.54 mmol)、3-氟-4-甲氧基苯硼酸(278 mg, 1.63 mmol)、Pd(dppf)₂ Cl₂ (119 mg, 0.16 mmol)及Na₂ CO₃ (173 mg, 1.63 mmol)於二噁烷(5 mL)及H₂ O (1 mL)中之混合物用N₂ 脫氣，且在145℃下在微波中攪拌2 h。將反應混合物冷卻至RT且過濾。將濾液真空濃縮，且藉由製備HPLC純化殘餘物以得到110 mg之所欲產物(45%)。針對C₂₃ H₂₈ FN₅ O₄ 計算之[M+H]，458；實驗值，458。實例120：2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-4-甲腈

將{1-[4-氰基-5-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(100 mg, 0.23 mmol)於EA (5 mL)中之混合物添加EA (5 mL)中之5N HCl溶液，且在RT下攪拌2 h。將溶劑真空濃縮以得到85 mg之呈HCl鹽的標題產物(93%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.71-1.75 (m, 2H), 1.89-2.03 (m, 2H), 2.96-3.02 (m, 2H), 3.27-3.31 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.69-3.73 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 7.06 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17-2.01 (m, 2H)。針對C₁₈ H₂₀ FN₅ O₂ 計算之[M+H]，358；實驗值，358。製備121A：{1-[5-氰基-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

在150℃下將{1-[5-氯-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(460 mg, 1 mmol)、Zn(CN)₂ (175 mg, 1.5 mmol)及Pd(PPh₃ )₄ (116 mg, 0.0.1 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物於N₂ 氣氛下攪拌4 h。將混合物冷卻至RT且過濾。將濾液真空濃縮，且藉由製備HPLC純化殘餘物以得到150 mg之呈黃色固體的標題產物(33%)。針對C₂₃ H₂₅ FN₆ O₃ 計算之[M+H]，453；實驗值，453。實例121：2-(4-胺基-哌啶-1-基)-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-5-甲腈

向{1-[5-氰基-4-(4-氰基-3-氟-苯基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(150 mg, 0.33 mmol)於EA (5 mL)中之混合物添加EA (5 mL)中之5N HCl溶液，且在RT下將混合物攪拌2 h。將溶劑真空濃縮以得到120 mg之呈HCl鹽的標題產物(94%)。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.67-1.72 (m, 2H), 2.02-2.06 (m, 2H), 3.13-3.16 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.98-4.02 (m, 2H), 7.82-7.90 (m, 3H)。針對C₁₈ H₁₇ FN₆ O計算之[M+H]，353；實驗值，353。製備122A：4-氰基-3-氟-苯甲醯氯

將4-氰基-3-氟-苯甲酸(2.0 g, 12.12 mmol)於SOCl₂ (20 mL)中之混合物回流2 h，且真空移除SOCl₂ 以得到4-氰基-3-氟-苯甲醯氯(2.2 g, 99%)。粗物質無需進一步純化而送至下一步驟。製備122B：3-(4-氰基-3-氟-苯基)-2-(4-甲氧基-苯基)-3-側氧基-丙酸甲酯

在-78℃下向(4-甲氧基-苯基)-乙酸(2.18 g, 12.12 mmol)於THF (20 mL)中之溶液添加LiHMDS (18.2 mL, 18.18 mmol)，且將混合物攪拌30 min。在-78℃下逐滴添加4-氰基-3-氟-苯甲醯氯(2.2 g, 12 mmol)於THF中之溶液；且使反應混合物升溫至RT且攪拌隔夜。添加NH₄ Cl水溶液且利用EA萃取水溶液(3x)。將合併的有機物真空濃縮，且藉由矽石管柱層析法(1:5, EA:PE)純化殘餘物以得到1.8 g (45%)之標題化合物。針對C₁₈ H₁₄ FNO₄ 計算之[M+H]，328；實驗值，328。製備122C：{1-[4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯

將3-(4-氰基-3-氟-苯基)-2-(4-甲氧基-苯基)-3-側氧基-丙酸甲酯(1.8 g, 5.5 mmol)、(1-哌基-哌啶-4-基)-胺甲酸第三丁酯(2.6 g, 9.2 mmol)、DIEA (2.4 g, 18.3 mmol)於甲苯(50 mL)中之混合物回流隔夜。將溶劑真空濃縮。將殘餘物懸浮於MeOH中，且將固體過濾以得到100 mg (4%)之標題化合物。針對C₂₈ H₃₀ FN₅ O₄ 計算之[M+H]，520；實驗值，520。實例122：4-[2-(4-胺基-哌啶-1-基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-1,6-二氫嘧啶-4-基]-2-氟-苯甲腈

向{1-[4-(4-氰基-3-氟-苯基)-5-(4-甲氧基-苯基)-6-側氧基-1,6-二氫-嘧啶-2-基]-哌啶-4-基}-胺甲酸第三丁酯(50 mg, 0.096 mmol)於EA (10 mL)中之溶液添加EA中之5M HCl溶液，且在RT下將混合物攪拌2 h。將溶劑真空移除，且藉由製備HPLC純化殘餘物以得到18 mg (40%)之呈鹽酸鹽的標題化合物。¹ H NMR (400 MHz, CD₃ OD): δ 1.81-1.87 (m, 2H), 2.22-2.25 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 2H), 3.56-3.60 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 4.61-4.64 (m, 2H), 6.86 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.37-7.38 (m, 1H), 7.51-7.53 (m, 1H), 7.74 (s,1H)。針對C₂₃ H₂₂ FN₅ O₂ 計算之[M+H]，420；實驗值，420。 II. 生物學評估實例1a：活體外酶抑制分析-LSD-1

此分析判定測試化合物抑制LSD-1去甲基酶活性之能力。大腸桿菌表現的全長人類LSD-1 (入藏登記號O60341)係購自Active Motif (Cat#31334)。

LSD-1活性之酶促性分析係基於時間解析螢光共振能量轉移(Time Resolved-Fluorescence Resonance Energy Transfer; TR-FRET)偵測。化合物對LSD-1之抑制性質係於以下反應條件下在384孔板格式中測定：0.1-0.5 nM LSD-1、50 nM H3K4me1-生物素標記肽(Anaspec cat # 64355)、於50 mM HEPES之分析緩衝液(pH 7.3)中之2 μM FAD、10 mM NaCl、0.005% Brij35、0.5 mM TCEP、0.2 mg/ml BSA。在LANCE偵測緩衝液(PerkinElmer)中，在諸如1.8 mM之反苯環丙胺鹽酸鹽(2-PCPA)之LSD-1抑制劑存在下，在添加偵測試劑Phycolink抗生蛋白鏈菌素-別藻藍蛋白(Prozyme)及銪-抗未修飾組織蛋白H3離胺酸4 (H3K4)抗體(PerkinElmer)以分別達到12.5 nM及0.25 nM之最終濃度之後，藉由TR-FRET定量地測定反應產物。

根據以下程序進行分析反應：將150 nM H3K4me1-生物素標記肽與2 μL 11點連續稀釋測試化合物於3% DMSO中之2 μL混合物添加至板中之每一孔，繼之以添加2 μL之0.3nM LSD-1及6 μM之FAD以起始反應。隨後在室溫下將反應混合物孵育一小時，且藉由添加於含有25 nM Phycolink抗生蛋白鏈菌素-別藻藍蛋白及0.5 nM銪-抗未修飾H3K4抗體之LANCE偵測緩衝液中的6 μL之1.8 mM 2-PCPA來終止。若在板中使用0.5 LSD-1酶，則在15分鐘內終止酶素性反應。在室溫下的1小時孵育之後，藉由EnVision多標記閱讀器以TR-FRET模式(在320 nm下激發，在615 nm及665 nm下發射)對板讀數。對每一孔計算比率(665/615)且擬合來測定抑制常數(IC₅₀ )。

量化本文揭示的化合物抑制LSD-1活性之能力且測定各別IC₅₀ 值。表4提供本文揭示的各種經取代之雜環化合物之IC₅₀ 值。注意：生物化學分析IC₅₀ 資料指定在以下範圍內：A：≤ 0.10 µM；B：＞ 0.10 µM至≤ 1.0 µM；C：＞ 1.0 µM至≤ 10 µM；D：＞ 10 µM

藉由化合物A之離胺酸特異性去甲基酶1A酶素性抑制係使用LSD1或LSD1-CoREST複合物(報告QC6688 Pharm 1001)來評定。用於抑制H3K4me1/2之LSD1及LSD1-CoREST誘導去甲基化的化合物A之IC50係藉由利用適當底物之連續稀釋方法來測定。化合物A為單獨LSD1或與CoREST之複合物中的有效及選擇性抑制劑，其產率0.25±0.04 nM及3.5±0.55 nM之各別平均IC₅₀ ±SD值。利用LSD1蛋白質之預孵育不影響所觀察到的IC₅₀ ，從而指示化合物A結合至LSD1為可逆的。因為LSD1-CoREST複合物之平均IC50值處於分析方法之偵測下限，所以不可能判定IC₅₀ 之明顯差異是否表示LSD1之游離形式與複合形式之間的真實抑制差異(表5)。表5：離胺酸特異性去甲基酶1A及離胺酸(K)特異性去甲基酶1A-RE1靜默轉錄因子之輔抑制物藉由化合物A之抑制。 CoREST = RE1靜默轉錄因子之輔抑制物；LSD1 =離胺酸特異性去甲基酶1A；平均IC50 =獨立實驗之平均半最大抑制濃度；SD =標準偏差。^a 下限IC₅₀ (約50% LSD1-CoREST濃度)。

使用H3K4me1底物於各種濃度下研究化合物A對LSD1之抑制機制。IC₅₀ 值與底物濃度之間的線性相關性指示化合物A為LSD1之競爭性抑制物，其中Ki為0.12 nM。實例2：活體外酶抑制分析-MAO選擇性

獲得人類重組單胺氧化酶蛋白質MAO-A及MAO-B。MAO催化一級、二級及三級胺之氧化去胺基化。為監視MAO酶促性活性和/或其藉由所關注抑制劑之抑制速率，進行基於螢光(抑制劑)的篩選分析。將非螢光化合物3-(2-胺基苯基)-3-側氧基丙胺(犬尿胺二氫溴化物，Sigma Aldrich)選作底物。犬尿胺為對兩種MAO活性的非特異性底物。儘管經歷藉由MAO活性之氧化去胺基化，但犬尿胺係轉化成4-羥基喹啉(4-HQ)，其為所得的螢光產物。

單胺氧化酶活性係藉由量測犬尿胺向4-羥基喹啉之轉化來估計。在具有透明底部之96孔黑色板(Corning)中以100 µl之最終體積進行分析。分析緩衝液為100 mM HEPES，pH 7.5。每一實驗在同一實驗內進行三次重複。

簡言之，在反應緩衝液中，在各種濃度之如本文揭示的化合物不存在和/或存在下(例如，0 μΜ至50 μΜ，取決於抑制劑強度)，將固定量之MAO (對MAO-A為 0.25 μg且對AO-B為 0.5 μg)在冰上孵育15分鐘。反苯環丙胺(Biomol International)係用作用於抑制之對照。

在使酶與測試化合物相互作用之後，將60至90 μΜ之犬尿胺分別添加至用於MAO-B及MAO-A分析之每一反應，且在37℃下在黑暗中使反應進行1小時。底物之氧化去胺基化係藉由添加50 µl之2N NaOH來停止。犬尿胺向4-羥基喹啉之轉化係使用微板閱讀器(Infinite 200, Tecan)藉由螢光(在320 nm下激發，在360 nm下發射)來監視。任意單位用於量測在測試化合物不存在和/或存在下產生的螢光之位準。

藉由量測在不存在測試化合物下由犬尿胺去胺基化形成的4-羥基喹啉之量來獲得氧化去胺基化活性之最大值，且針對背景螢光加以校正。每一抑制劑之Ki (IC₅₀ )係在Vmax/2下測定。在上文描述的分析中測試化學合成實例1-94、101-106、108-117及120-122，且發現該等實例具有大於2微莫耳之IC₅₀ 。

化合物A對LSD1抑制之選擇性係在篩選分析中使用密切相關的含FAD酶：LSD2、MAO-A及MAO-B來進一步建立。針對LSD2藉由化合物A之抑制的實驗上測定之平均IC₅₀ 值為16,550±6,378 nM。針對MAO-A及MAO-B藉由化合物A之抑制的平均IC₅₀ 值為＞ 20,000 nM。此等結果證明：化合物A對LSD1之選擇性相較於LSD2、MAO-A或MAO-B而言超過60,000倍(表6)。表6：化合物A對離胺酸特異性去甲基酶1A相對於離胺酸特異性去甲基酶1B、單胺氧化酶A及單胺氧化酶B之選擇性 CoREST = RE1靜默轉錄因子之輔抑制物；LSD1 (2) =離胺酸特異性去甲基酶1A (1B)；平均IC₅₀ =跨於多個化合物A批次執行的(n)獨立實驗之平均半最大抑制濃度；MAO-A (B) =單胺氧化酶A (B)；NC =未計算；SD =標準偏差。^a 下限IC₅₀ (約50% LSD1-CoREST濃度)。實例3：LSD-1 CD11b細胞分析

為分析細胞中之LSD-1抑制劑效力，執行CD11b流式細胞術分析。LSD-1抑制誘導THP-1 (AML)細胞中之CD11b表現，其係藉由流式細胞術來量測。將THP-1細胞以100,000個細胞/孔在24孔板中接種於含有RPMI 1640培養基之10%胎牛血清中，其中最終體積為每孔500 μL。LSD-1測試化合物係在DMSO中連續稀釋。據此將稀釋液添加至每一孔以達0.2% DMSO之最終濃度。在攝氏37度下在5% CO₂ 中將細胞孵育4天。以每一孔之250 μL轉移至96孔圓底板中一孔中。在攝氏4度下於Beckman Coulter Alegra 6KR離心機中以1200 rpm將板離心5分鐘。將培養基移除，使細胞留在孔之底部。將細胞在100 μL冷HBSS (漢克斯平衡鹽溶液)加2% BSA (牛血清白蛋白)溶液中洗滌，且在攝氏4度下以1200 rpm離心5分鐘。將洗液移除。將細胞再懸浮於100 μL HBSS加含有APC共軛小鼠抗CD11b抗體(BD Pharmingen Cat#555751)之1:15稀釋液的2% BSA中，且在冰上孵育25分鐘。將細胞離心，且在100 μlHBSS加2% BSA中洗滌兩次。在最終旋轉之後，將細胞再懸浮於100 μL HBSS加含有1 μg/mL DAPI (4',6-二甲脒基-2-苯基吲哚)之2% BSA中。隨後在BD FACSAria機器中藉由流式細胞術分析細胞。分析細胞之CD11b表現。針對每一抑制劑濃度的表現CD11b之細胞之百分比係用於測定每一所分析化合物之IC₅₀ 曲線。

表7提供本文揭示的各種經取代之雜環化合物之細胞IC₅₀ 值。注意：細胞分析IC₅₀ 資料指定在以下範圍內：A：≤ 0.10 µM；B：＞ 0.10 µM至≤ 1.0 µM；C：＞ 1.0 µM至≤ 10 µM；D：＞ 10 µM 實例4：Kasumi-1 AML細胞系增殖分析(細胞-MTS分析)

比色細胞分析用以評定LSD-1小分子抑制劑實現所建立AML癌細胞系Kasumi-1之增殖的能力。分析背景

LSD-1蛋白質已被證實在包括SCLC及AML之各種癌症類型之生物學中起到關鍵作用。為證明作為潛在抗癌療法之LSD-1之小分子抑制，實行用以量測在所建立AML癌細胞系中之增殖抑制程度的分析。分析原理

此細胞-MTS分析為基於7天板之比色分析，其量化在存在及不存在測試化合物下新產生之NADH的量。此等NADH位準係用作用於量化癌細胞增殖之代表。分析方法

具有經驗證p53突變之所建立癌細胞系Kasumi-1係購自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection; ATCC)且例行地根據ATCC公開之協定來傳代。對於常規分析，此等細胞係以每96孔20,000個細胞之密度來接種。在塗板之後24小時，使細胞接收測試化合物之11點稀釋液，其中最終濃度在100 µM至2.0 nM範圍變化。在37℃、5% CO₂ 下，將細胞在化合物存在下孵育168小時。在此化合物孵育期結束時，移除80 µl之培養基且添加20 µL之CellTiter 96^® AQueous非放射性細胞增殖分析溶液(Promega)。將細胞孵育直至OD490 ＞0.6。IC₅₀ 值係使用IDBS XLfit套裝軟體來計算，且包括減去背景之OD490值並針對DMSO對照正規化。

表8提供本文揭示的各種經取代之雜環化合物之Kasumi-1細胞IC₅₀ 值。實例5：活體內異種移植研究-MCF-7異種移植

將含有0.72 mg 17-β雌二醇之限時釋放丸粒皮下植入nu/nu小鼠中。在5% CO₂ 、37℃下在含有10% FBS之RPMI中生長MCF-7細胞。將細胞旋轉分離，且以1X10⁷ 個細胞/mL再懸浮於50% RPMI (無血清)及50% Matrigel中。在丸粒植入後2-3天於右側腹上皮下注射(100 µL/動物) MCF-7細胞，且每兩週監視腫瘤體積(長度x寬度² /2)。當腫瘤達到約200 mm³ 之平均體積時，將動物隨機分組且開始治療。每天利用媒劑或化合物治療動物4週。在整個研究中，每兩週監視腫瘤體積及體重。在治療期結束時，獲取血漿及腫瘤樣本以分別用於藥物動力學及藥效學分析。實例6：活體內異種移植研究-LNCaP異種移植

將具有LSD-1 (shLSD-1細胞)之穩定敲落的LNCaP細胞或對照細胞(諸如shNTC細胞)藉由皮下注射接種在裸鼠之腹背側中(諸如於100 µl之50% RPMI 1640/BD Matrigel中之3 x 10⁶ 個細胞)。每週量測小鼠重量及腫瘤大小一次，且使用式(7i/6) (LxW)估計腫瘤體積，其中L =腫瘤之長度且W =腫瘤之寬度。執行雙樣本t檢驗來判定兩個群組之間的平均腫瘤體積之統計學差異。

藉由皮下注射將未修飾的LNCaP細胞接種至裸鼠之腹背側中(諸如於100 µl之50% RPMI 1640/BD Matrigel中之3 x 10⁶ 個細胞)。在三週之後，每天用水(對照)、巴吉林(0.53 mg或1.59 mg；1或3 mM最終濃度，假定70%生物可用性)或XB154 (4或20 μg；1或5 μM最終濃度，假定70%生物可用性)腹膜內注射小鼠一次或用測試化合物(每週5 mg/kg或每週10 mg/kg)治療小鼠。治療延續三週，在此段時間期間，如上文來量測小鼠重量及腫瘤體積。

如上文將shLSD-1 LNCaP細胞或對照細胞注射至裸鼠中。在三週之後，每天用2.6 μg絲裂黴素C (預測最終濃度為1 μΜ，假定40%生物可用性)、奧拉帕尼(olaparib) (例如，約0.5 mg/kg至25 mg/kg)或媒劑腹膜內治療小鼠一次歷時三週。在其他實例中，如上文將未修飾LNCaP細胞注射在裸鼠中。

在三週之後，如上文用測試化合物或媒劑加MMC或奧拉帕尼治療小鼠。治療延續三週，在此段時間期間，如上文來量測小鼠重量及腫瘤體積。

在用shLSD-1細胞注射的小鼠中相較於對照的腫瘤體積減小指示LSD-1抑制活體內減少腫瘤生長。

類似地，在用LNCaP細胞注射且用本文揭示的化合物治療之小鼠中相較於對照的腫瘤體積減小指示LSD-1抑制活體內減少腫瘤生長。最後，在用LNCaP細胞注射且用本文揭示的化合物加奧拉帕尼治療之小鼠中相較於單獨用本文揭示的化合物治療之小鼠的腫瘤體積減小指示LSD-1之抑制加PARP之抑制活體內減少腫瘤生長。

檢查所收穫的異種移植組織獲得LSD-1抑制之證據。此係利用西方墨點檢查2MK4及2MK9組織蛋白標誌物之總體位準、FA/BRCA基因之表現、FANCD2泛蛋白化及在shRNA細胞狀況下之LSD-1蛋白質位準來評定。此等參數中之一或多者的減小指示LSD-1之有效抑制。另外，利用對H2AX基因座之染色來評定對DNA損壞修復之效應。實例7：在正常人類成纖維細胞及小細胞肺癌細胞中之抗增殖活性

化合物A對細胞生存力之效應係於各種所建立NCI SCLC細胞系(報告QC6688-Pharm-1002)中加以研究。在針對化合物A之0.17至10,000 nM及0.7至500 nM之各別濃度範圍內量測IMR-90、正常人類成纖維細胞系及一組6個SCLC細胞系之半最大抑制濃度值。化合物A證明了在6個所測試的SCLC細胞系中之5個中的有效抗增殖活性。在NCI-H69、NCI-H146、NCI-H209、NCI-H526及NCI-H1417細胞系中，化合物A展現7.0±2.5 nM、9.9±9.6 nM、3.9±0.2 nM、36.4±28.8 nM及14.6±12.6 nM之各別平均IC₅₀ ±SD值。化合物A在NCI-H841 SCLC細胞系中對細胞增殖具有有限的效應，其產生＞ 500 nM之IC₅₀ 值。化合物A在所測試濃度下在IMR-90正常人類成纖維細胞系中不展示對細胞增殖之效應(IC₅₀ 值＞ 10,000 nM) (表9)。表9：針對正常人類成纖維細胞及小細胞肺癌細胞系之化合物A半最大抑制值 2 (或3) D = 2 (或3)維；平均IC50 = (n)獨立實驗之平均半最大抑制濃度；NC =未計算；pIC50 =-log10(平均IC50)，以mol/L計算；SD =標準偏差。 a 2D分析=利用黏附於二維固體表面之細胞的分析 b3D分析=利用懸浮於三維細胞外基質中之細胞的分析實例8：在小細胞肺癌細胞中對藥效學生物標誌物胃泌素釋放肽之效應

離胺酸特異性去甲基酶1A抑制經證實調節SCLC細胞系中諸如人類GRP之神經內分泌腫瘤相關基因之表現。使用定量反轉錄聚合酶鏈反應(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction; qRT-PCR)來評估在人類SCLC細胞系、NCI-H1417、NCI-H209及NCI-H69中LSD1之化合物A介導抑制對GRP表現之效應。在孵育期之後，提取總RNA且藉由使用qRT-PCR量測GRP mRNA位準之成倍改變。藉由計算GRP mRNA表現相對於各別化合物A濃度(相對於DMSO對照)之百分比改變來測定針對GRP表現之化合物A抑制的IC₅₀ 。對照百分比= 100 x 2-ΔΔCt，治療後之GRP mRNA位準係針對管家基因轉錄物來正規化。利用化合物A之治療在NCI-H1417、NCI-H209及NCI-H69細胞中產生GRP傳訊者核糖核酸(messenger ribonucleic acid; mRNA)位準之濃度依賴性下調，從而產率8.9±4.6 nM、7.2±4.7 nM及6.0±3.8 nM之各別IC50±SD值(第1圖)。

另外，LSD1與GRP基因座之結合係在SCLC細胞系NCI-H69及NCI-H209中使用ChIP-seq來研究。染色質免疫沉澱及定序結果展示：LSD1共同佔據鑑別為H3K4me1陽性區之強化子元件，其在GRP基因座之100個千鹼基內。此等結果暗示：LSD1在GRP基因座的可能調節位點處結合，且LSD1可直接調節GRP基因表現，進而支援GRP作為在SCLC中用於LSD1抑制之藥效學 (pharmacodynamic; PD)生物標誌物(第2圖)。實例9：在NCI-H1417小細胞肺癌異種移植模型中藉由化合物A之離胺酸特異性去甲基酶1A抑制對人類胃泌素釋放肽傳訊者核糖核酸表現之效應

為說明在活體外至活體內設定中觀察到的化合物A介導LSD1抑制之效應，在若干SCLC活體內模型中量測在化合物A治療之後的TGI及靶基因表現改變。在無胸腺裸鼠中，在人類NCI-H1417 SCLC異種移植模型中評估人類GRP表現在藉由化合物A之LSD1抑制後的調節。以2.5、5或10 mg鹼/kg QD用化合物A經口治療帶有SC植入NCI-H1417 SCLC腫瘤之雌性小鼠，且測定GRP表現位準。如藉由qRT-PCR所判定，利用化合物A之治療在所治療的帶腫瘤小鼠中產生相較於媒劑治療對照動物的GRP mRNA位準之劑量相關下調。比較平均表現值，在2.5、5及10 mg鹼/kg下，相對於對照動物，化合物A分別減少GRP基因表現44%、53%及56%。GRP基因表現之減小對於≥5 mg鹼/kg之化合物A劑量而言為統計上顯著的(p≤0.05) (第3圖)。實例10. 化合物A在NCI-H1417小細胞肺癌異種移植模型中之效力

在雌性無胸腺裸鼠中，在人類NCI-H1417 SCLC異種移植SC模型中評估化合物A之效力及可耐受性。利用2.5或5 mg鹼/kg化合物A或作為對照的10 mL/kg 0.5%甲基纖維素媒劑對帶有NCI-H1417 SCLC腫瘤之雌性小鼠QD經口給藥歷時65個連續天(QDx65)。在第65天之腫瘤生長抑制分析證明：化合物A治療在NCI-H1417模型中為有效的，其在2.5 mg鹼/kg劑量下產生159%之TGI (p≤0.001)且在5 mg鹼/kg劑量下產生178%之TGI (p≤0.0001) (表10)。七隻對照動物中的六隻在研究結束時展現淨腫瘤體積增加。相反地，來自化合物A治療之動物的除了1個腫瘤之外的全部(15個中的14個)淨體積復原。對照動物中之平均腫瘤生長在研究過程中發展，而2個化合物A治療之群組中的腫瘤在第14天之後減退(第4圖)。化合物A呈現為良好耐受的，且接收2.5或5 mg鹼/kg劑量之動物在研究結束時展現1%及7.5%之各別平均體重增加。所有動物在研究持續時間存活。表10. NCI-H1417研究之反應概要 ANOVA =變方分析；Diff. =差異；NC =未計算；PO =經口給藥；QD =每天給藥一次；TGI =腫瘤生長抑制。注意：p-值係使用單向ANOVA繼之以鄧奈特氏多重比較檢驗(化合物A相對於媒劑)來計算。實例11：化合物A在源自LU2514及LU1480 HuPrime®小細胞肺癌患者的異種移植模型中之效力

在源自患者的HuPrime SCLC模型LU2514及LU1480中評估化合物A，該等模型為在雌性BALB/c裸鼠中植入之SC。

在LU2514研究中，所治療之雌性小鼠以10 mg鹼/kg (n = 10)或以5 mg鹼/kg (n = 8) QD經口接收化合物A歷時28天(QDx28)。在治療後第28天即給藥之最後一天執行腫瘤生長抑制分析。化合物A為有效的，其分別在10 mg鹼/kg及在5 mg鹼/kg下引起61%及43%之TGI (p≤0.01) (表11)。腫瘤生長在兩個化合物A治療之群組中相對於對照動物有所減少(第5圖)。表11：QC-TR-L021 (LU2514)研究之反應概要 BID =每天兩次；Diff. =差異；NC =未計算；PO =經口給藥；QD =每天給藥一次；TGI =腫瘤生長抑制。^a 媒劑BID給藥以匹配未包括在此表中的另外給藥方案。研究長度= 70天，在第28天即給藥之最後一天測定TGI。

在LU2514研究中，以10 mg鹼/kg經口給藥22天之化合物A產生62%之TGI。在化合物A所治療之群組中的平均腫瘤生長相對於對照動物有所減少。組織分析揭露：來自對照動物之腫瘤展示經典的不良分化圓形細胞形態及粒狀染色質。來自化合物A所治療之動物的腫瘤顯示具有「較鬆弛」結構之細胞、減小的核質比率及較高數量之凋亡體(第6圖)。在利用LU2514動物模型之兩個研究中，化合物A呈現為良好耐受的，其中平均體重損失＜ 10%。

在LU1480研究中，經口投與化合物A歷時21天為有效的，其在10 mg鹼/kg劑量下獲得72%之TGI (p≤0.001)且在5 mg鹼/kg劑量下獲得53%之TGI (p≤0.01) (表12)。在化合物A所治療之群組中的平均腫瘤生長相對於對照動物有所減少(第7圖)。在LU1480實驗中，以10 mg鹼/kg經口給藥15天之化合物A產生46%之TGI。在此等LU1480研究中，報告了一般化及持續的體重損失，其可能歸因於LU1480模型之固有惡病質特性。表12：LU1480研究之反應概要 BID =每天兩次；Diff. =差異；NC =未計算；PO =經口給藥；QD =每天給藥一次；TGI =腫瘤生長抑制。^a 媒劑BID給藥以匹配未包括在此表中的另外給藥方案。研究長度= 66天；在21次劑量之後，在最後一天，當至少8只動物保留在每一研究群組中時測定TGI。

總之，當以5或10 mg鹼/kg經口給藥時，化合物A被證實為在SCLC之LU2514及LU1480 PDX模型中為有效的。化合物A所治療的相對於對照動物之劑量相關TGI (43%至72%)在除LU2514之外的所有研究中為統計上顯著，其中樣本大小為小的。實例12：化合物A在源自LXFS 573、LXFS 615、LXFS 1129及LXFS 2156小細胞肺癌患者的異種移植模型中之效力

亦在4個不同的SCLC PDX模型中評估經口投與化合物A之抗腫瘤效應，該等模型即為雌性免疫缺陷NMRI-Foxn1nu小鼠中之植入SC的LXFS 573、LXFS 615、LXFS 1129及LXFS 2156中。利用化合物A之治療在SCLC之LXFS 573 PDX模型中為有效的，其在5 mg鹼/kg劑量下獲得78%之TGI的研究終點(第28天) (p≤0.001)、在7.5 mg鹼/kg劑量下獲得58%之TGI的研究終點(第28天) (p≤0.01)及在10 mg/kg劑量下獲得71%之TGI的研究終點(第28天) (p≤0.001) (表13)。在第10天之後，在化合物A所治療之群組中的平均腫瘤生長相對於對照動物有所減少(第8圖)。化合物A呈現為良好耐受，其中平均體重損失≤3%。表13：LXFS 573實驗之反應概要 ANOVA =變方分析；Diff =差異；NC =未計算；PO =經口給藥；QD =每天給藥一次；TGI =腫瘤生長抑制。注意：單向ANOVA繼之以鄧奈特氏多重比較檢驗用於利用超過兩個群組的實驗，且未配對t檢驗用於比較兩個群組，評估化合物A所治療的相對於對照動物的腫瘤體積分佈差異之實驗。

在LXFS 615 PDX模型中，以5 mg鹼/kg經口投與化合物A歷時30天引起78%之TGI (p≤0.001)。在化合物A所治療之群組中的平均腫瘤生長相對於對照動物有所減少(第9圖)。化合物A呈現為良好耐受的，其中平均體重損失＜ 1%。對在最終劑量之後收集的血漿樣本執行藥物動力學分析證明：在5 mg鹼/kg下化合物A之AUC_0-24 為1,617 ng·hr/mL。

QD投與化合物A歷時30天在SCLC之LXFS 1129 PDX模型中為有效的，其在5 mg鹼/kg劑量下獲得89%之TGI的研究終點(p≤0.001)且在1.5 mg鹼/kg劑量下獲得55%之TGI的研究終點(p≤0.05)。在第12天之後，在兩個化合物A所治療之群組中的平均腫瘤生長相對於對照動物有所減少(第10圖)。化合物A呈現為良好耐受的，其中平均體重損失＜ 6%。在1.5及5 mg鹼/kg下的化合物A之AUC_0-24 值分別為243及1,262 ng·hr/mL，且因此，相對於1.5 mg鹼/kg劑量而觀察到在5 mg鹼/kg劑量下更大的成比例暴露增加。

當以5 mg鹼/kg QDx23經口給藥時，化合物A在LXFS 2156 PDX模型中不是有效的，其產生-7%之TGI。

總之，化合物A之經口投與在SCLC之LXFS 573、LXFS 615及LXFS 1129 PDX模型中為有效的。化合物A所治療的相對於對照動物的TGI位準(55%至89%)為顯著的。化合物A在所有4個所測試模型中呈現為良好耐受的，其中體重損失＜ 6%。實例13. 化合物A在雌性BALB/c裸鼠中的源自各別HuPrime^® 皮下肺及胃神經內分泌癌患者的異種移植模型LU2527及GA0087中之活體內效力

使用在雌性免疫缺陷BALB/c裸鼠中建立的源自各別HuPrime^® 皮下肺及胃神經內分泌癌(neuroendocrine carcinoma; NEC)患者的異種移植(patient-derived xenograft; PDX)模型LU2527及GA0087以每天一次(QD)給藥之時程臨床前評估化合物A之活體內效力及可耐受性。LU2527及GA0087係分別特性化為肺之非典型類癌及胃賁門之類癌。效力係基於腫瘤生長抑制百分比(%TGI)及在TGI分析當天所治療動物與對照動物之間的平均淨腫瘤體積差異及在研究過程中的平均腫瘤生長來測定。可耐受性係基於所治療動物與對照動物之間的平均體重差異來評定。

LU2527腫瘤片段係自stock小鼠中連續傳代(R3P6)之異種移植物獲得。在自供體小鼠移除之後，將腫瘤切成片段(直徑2至3 mm)且皮下接種至受體雌性免疫缺陷BALB/c小鼠之右側腹中。使腫瘤生長50天直至其獲得約159 mm³ 。隨後將帶有腫瘤之小鼠(11-12週齡)隨機化至每組具有八隻小鼠的三個組中，其中平均腫瘤體積為159.7±13.6 mm³ 、159.7±13.9 mm³ 及159.7±13.5 mm³ 。這一天係表示為第0天，且根據表14中所示的預定方案起始給藥。表14. LU2527之治療計畫^a) 對照群組單獨給藥10 mL/kg之媒劑，且以10 mL/kg給藥化合物A作為mg/kg游離鹼等效物；^b 經口給藥(PO)；^c 每天給藥一次(QD)

GA0087腫瘤片段係自stock小鼠中連續傳代(R15P7)之異種移植物獲得。在自供體小鼠移除之後，將腫瘤切成片段(直徑2至3 mm)且皮下接種至受體雌性免疫缺陷BALB/c小鼠之右側腹中。使腫瘤生長24天直至其獲得約133 mm³ 。隨後將帶有腫瘤之小鼠(13-14週齡)隨機化至每組具有八隻小鼠的三個組中，其中平均腫瘤體積為133.2±7.6 mm³ 、133.0±7.8 mm³ 及133.1±8.5 mm³ 。這一天係表示為第0天，且根據15中所示的預定方案起始給藥。表15. GA00870之治療計劃^a) 對照群組單獨給藥10 mL/kg之媒劑，且以10 mL/kg給藥化合物A作為mg/kg游離鹼等效物；^b 經口給藥(PO)；^c 每天給藥一次(QD)

使用卡鉗每週兩次在二維中量測個別腫瘤，且使用式：TV = 0.5 a×b² 來計算以mm³ 計的腫瘤體積(tumor volume; TV)，其中a及b分別為以毫米計的長直徑及短直徑。每週兩次稱重動物。將平均腫瘤生長曲線及平均體重圖以自第0天的變化百分比構圖。

百分比TGI係使用中值腫瘤體積根據下式來計算：

其中T₀ 及C₀ 為在給藥開始之前化合物A治療群組及對照群組中的各別中值腫瘤體積，且T_x 及C_x 為在第「x」天，即TGI分析當天的相應中值腫瘤體積。

分別在第46天及第53天計算LU2527及GA0087研究中之TGI，對所有化合物A治療之動物獲得最後一天的腫瘤體積量測值。在兩個研究中，每一對照群組中之一個動物歸因於不良腫瘤植入而受監查，且在LU2527研究中，在第21天退出研究的第二對照動物係監查為可能歸因於經口胃管灌食法錯誤的意外死亡。在GA0087研究中，接收1.5 mg/kg化合物A之一個動物在第53天獲得腫瘤體積端點(≥3000 mm³ )但不被犧牲直至第57天。因此，監查第56天量測值，將第53天建立為TGI分析當天。

表及表概述LU2527及GA0087研究之各別治療計劃。對每一腫瘤類型而言，將測試動物分選為每組具有八隻小鼠的三個組，且當平均腫瘤大小滿足隨機化標準時在第0天起始治療。對照小鼠以如所示的每天一次(QD)時程接收藉由經口胃管灌食法(PO)投與的10 mL/kg體重之0.5%甲基纖維素媒劑。所治療小鼠以如所示的QD時程PO接收作為mg/kg游離鹼等效物給藥的10 mL/kg之化合物A。每一研究中之兩個動物接收給藥假日，此對結果無影響。每天將測試物品化合物A製備為懸浮於媒劑中之鹽(74%活性化合物)。

LU2527研究之結果展示於表16中。當經口QD給藥46天時化合物A在肺癌之LU2527 PDX模型中在1.5 mg/kg下產生51%之劑量依賴性TGI且在5 mg/kg下產生84%之劑量依賴性TGI。如第11圖所示，5 mg/kg化合物A所治療之動物相對於對照動物的TGI分析當天之平均淨腫瘤體積之差異為顯著的(p = 0.0001)。5 mg/kg化合物A所治療之群組中的平均腫瘤生長相對於對照動物顯著減少，如第12圖所示。化合物A呈現為耐受性可接受的，其展現並非實質上不同於媒劑對照之彼等者的平均體重改變，如第13圖所示。在暗示體重損失的TGI分析當天之後，包括媒劑對照群組的所有群組中發生的累加平均體重損失可為腫瘤負荷相關的。表16.第46天LU2527之反應概要^a) 對照群組單獨給藥10 mL/kg之媒劑，且以10 mL/kg給藥化合物A作為mg/kg游離鹼等效物；^b 經口給藥(PO)；^c 每天給藥一次(QD)

GA0087研究之結果展示於表17中。當經口QD給藥53天時化合物A在胃癌之GA0087 PDX模型中在1.5 mg/kg下產生53%之TGI且在5 mg/kg下產生56%之TGI。如第14圖所示，化合物A所治療之動物相對於對照動物的TGI分析當天之平均淨腫瘤體積之差異不是顯著的(p ＞ 0.05)。在化合物A所治療之群組中的平均腫瘤生長相對於對照動物有所減少，如第15圖所示。化合物A呈現為耐受性可接受的，其展現並非實質上不同於媒劑對照之彼等者的平均體重改變，如第16圖所示。在暗示體重損失的約第49天開始，包括媒劑對照群組的所有群組中發生的累加平均體重損失可為腫瘤負荷相關的。接收1.5 mg/kg化合物A之一個動物在第53天獲得腫瘤體積端點(≥3000 mm³ )但不被犧牲直至第57天。因此，監查第56天量測值以供平均腫瘤生長及平均體重分析。表17. 第53天的E0288-U1604-GA0087之反應概要^a 對照群組單獨給藥10 mL/kg之媒劑，且以10 mL/kg給藥化合物A作為mg/kg游離鹼等效物；^b 經口給藥(PO)；^c 每天給藥一次(QD)

每天經口給藥的化合物A在肺癌之LU2527 PDX模型中為有效的。反應為劑量依賴性的，其在1.5 mg/kg下產生51%之TGI且在5 mg/kg下產生84%之TGI。5 mg/kg化合物A所治療之動物相對於對照動物的TGI分析當天之平均淨腫瘤體積之差異為顯著的，且平均腫瘤生長相對於對照動物顯著減少。

每天經口給藥的化合物A在胃癌之GA0087 PDX模型為適度有效的。反應在1.5 mg/kg下產生53%之TGI且在5 mg/kg下產生56%之TGI，且所治療之動物相對於對照動物的TGI分析當天之平均淨腫瘤體積之差異不是顯著的。所治療動物之平均腫瘤生長相對於對照動物適度減少。

化合物A在兩個研究中呈現為耐受性可接受的。所有群組展現遲的累加平均體重損失，從而暗示體重損失不是治療相關的。實例14：化合物A在兩個人類merkel氏細胞癌模型MKL-1及MS-1中之活體外及活體內效力

人類Merkel氏細胞癌係分類為表現LSD1之侵襲性皮膚神經內分泌腫瘤。此等腫瘤比SCLC腫瘤更易取得，且可證明適用於人類研究中之藥效學工作。有效hMCC治療為高度未得滿足之需求，其可提供對化合物A之另一指示。在當前的非優良實驗室操作(Good Laboratory Practice; GLP)臨床前研究中，執行活體外細胞增殖抑制分析來測定利用化合物A治療的經培養MKL-1及MS-1細胞系之IC₅₀ 值。另外，在雌性NSG小鼠中所建立的兩個hMCC異種移植模型MKL-1及MS-1中評估化合物A作為單療法之活體內效力及可耐受性。

此研究之目的係使用活體外細胞增殖抑制分析來測定用化合物A治療的經培養MKL-1及MS-1細胞之IC50值，且測定作為單療法以間斷時程在5 mg/kg下經口給藥的化合物A在雌性NSG小鼠中所建立的MKL-1及MS-1異種移植模型中之活體內效力及可耐受性。

雌性NSG小鼠(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)係用於此研究。測試小鼠在腫瘤植入當天為7至9週大。在腫瘤植入之前將動物馴養一週。

使動物任意採食水(逆滲透，酸化)及由20%粗蛋白質、5.6%脂肪(酸水解)及4.7%粗纖維組成之PicoLab®齧齒動物飲食。以12小時光循環，在72±2℉及30-70%濕度下將小鼠收容在ALPHA-dri®上之隔離設施中。

Celgene Quanticel Research特別地關於約束、飼養管理、外科程序、餵食及流體條例以及獸醫學照護遵照實驗動物照護及使用指南(國家科學院)之推薦。CQR之動物照護及使用程式符合由Celgene Quanticel Research實驗動物照護及使用委員會所批准的相關管理標準，從而確保與用於實驗動物之照護及使用之可接受標準相符。

在補充有10%胎牛血清(fetal bovine serum; FBS)的含有100個單位/mL青黴素G鈉及100 μg/mL鏈黴素硫酸鹽(cRPMI)之RPMI-1640培養基(Life Technologies, Carlsbad, CA)中活體外培養MKL-1 hMCC細胞。在補充有20% FBS之cRPMI中活體外培養MS-1 hMCC細胞。在37℃下，在5%二氧化碳及95%空氣之氣氛中，在潮濕孵化器中培養兩種細胞系。

對活體外細胞增殖抑制研究而言，在二甲亞碸(dimethylsulfoxide; DMSO)中製備化合物A儲備溶液且在培養基中連續稀釋。對於活體內異種移植研究而言，在10 mL/kg之給藥體積下將化合物A懸浮於水中之0.5%甲基纖維素中，且投與。

將MKL-1及MS-1 hMCC細胞接種至二維(two dimensional; 2D)分析格式的含有生長培養基之多孔板中。隨後將細胞利用化合物A治療歷時預定天數。量化每一細胞系之細胞生存力且計算IC₅₀ 值。

將帶有可觸知hMCC MKL-1及MS-1腫瘤(各別平均腫瘤體積為約63 mm³ 及約45 mm³ )之雌性NSG小鼠各自隨機化至兩個群組中。一個群組以間斷時程(五天用藥繼之以兩天不給藥[5用/2停])經口投與作為單療法的5 mg/kg化合物A，而另一個以相同時程經口投與作為對照之媒劑。

效力係基於所治療動物相對於對照動物之TGI及平均腫瘤生長之差異的統計學評定來測定。可耐受性係藉由監視每一個別動物之健康狀態來評定。

使用在黑壁96孔多孔板中執行的2D分析格式來評定MKL-1及MS-1細胞系之生存力。每一測試孔接收懸浮於補充有10% FBS之100 μL RPMI 1640中之5,000個MKL-1細胞，或懸浮於補充有20% FBS之100 μL RPMI 1640中之7,500個MS-1細胞。將化合物A在DMSO中連續稀釋且隨後在RPMI 1640中稀釋(1:1000)以製成一系列50x儲液。每一測試孔接收2 μl儲液之一或作為陰性對照的2 μl於RPMI 1640中之DMSO以得到在0.0、0.7、2.1、6.2、18.5、55.5、166.7及500 nM的化合物A之最終濃度。在每一濃度下執行四至六次重複實驗。將多孔板孵育7天，且使用CellTiter-Glo®發光細胞生存力分析根據製造商之說明評定每一測試孔中之活細胞數量且利用光度計(FilterMax F3, Molecular Devices)讀出。CellTiter-Glo®發光細胞生存力分析係基於ATP之定量來量測活細胞之數量。

在腫瘤細胞接種當天，在對數期生長期間收穫MKL-1及MS-1細胞且將其以2 x 10⁸ 個細胞/mL之濃度再懸浮於100% Matrigel® (BD Biosciences, San Jose, CA)中。每一測試小鼠接收在右側腹中皮下植入的0.1 mL細胞懸浮液(2 x 10⁷ 個細胞)。使MKL-1及MS-1腫瘤生長14天直至其獲得約63 mm³ 及約45 mm³ 之各別平均腫瘤體積。隨後將帶有MKL-1腫瘤之小鼠隨機化至各自具有八隻小鼠的兩個組中，其中平均腫瘤體積為63.0±12.4 mm³ 及62.9±12.4 mm³ 。將帶有MS-1腫瘤之小鼠隨機化至每組具有八隻小鼠的兩個組中，其中平均腫瘤體積為43.4±9.7 mm³ 及48.1±15.9 mm³ 。隨機化當天係表示為第-3天，且根據表18中所示的預定方案，在第1天起始給藥。表18.MKL-1或MS-1之治療計劃 n =動物數量；PO =經口給藥；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥；---=無測試物品投與。將10 mL/kg之給藥體積按個別動物之重量來定標，且化合物A作為mg/kg游離鹼等效物來給藥。

如表18所示，對照小鼠接收經口投與(PO)的水性0.5%甲基纖維素媒劑歷時5用/2停，重複至研究結束。化合物A單療法群組接收5 mg/kg化合物A，PO，5用/2停。測試物品化合物A係每天製備為懸浮於媒劑中之苯磺酸鹽(74%活性化合物)且作為mg/kg游離鹼等效物來給藥。在所有群組中，10 mL/kg之給藥體積按個別動物之重量來定標。

使用卡鉗每週兩次在三維中量測個別腫瘤，且使用式：TV = 0.5×l×w×h來計算以mm³ 計的腫瘤體積(tumor volume; TV)，其中l、w及h分別為以毫米計的長度、寬度及高度。此等研究之腫瘤體積端點為2000 mm³ 。同時，將動物稱重，且藉助於身體檢查針對體重損失及嗜睡徵象監視每一個別動物之健康狀態。

當已獲得腫瘤體積端點之動物退出研究時，對動物記錄的最終腫瘤體積包括用於計算在後續時間點之平均體積的資料。繪製腫瘤生長曲線，其展示隨時間變化的群組平均腫瘤體積(±平均值之標準偏差[standard error of the mean; SEM])，且將平均體重繪製為自第1天之百分比改變。

使用在每一測試孔中的各別讀出，將活細胞之數量正規化至利用DMSO處理的孔中之活細胞之平均數量，且表示為百分比。將活細胞百分比針對相應化合物A濃度繪圖，且自藉由用於Microsoft Excel的IDBS XLfit程式附加項使用方程式251 (ID Business Solutions Ltd., UK)來產生的四參數邏輯(four parameter logistic; 4PL)非線性迴歸曲線測定IC₅₀ 值。IC₅₀ 值係計算為抑制為半最大之濃度。用於每一細胞系之抑制分析按四至六次生物學重複實驗來執行，且報告IC50±標準偏差(standard deviation; SD)。

在MKL-1及MS-1研究中，在第15天及第36天即一或多個對照動物獲得端點之第一天執行各別TGI分析。百分比TGI係使用中值腫瘤體積根據下式來計算：

其中T₀ 及C₀ 為在給藥開始之前(第-3天)所治療群組及對照群組中的各別中值腫瘤體積，且T_x 及C_x 為在第「x」天，即TGI分析當天的相應中值腫瘤體積。

針對給藥之前的個別腫瘤體積校正TGI分析當天的個別腫瘤體積，且將每一群組之所得淨腫瘤體積繪圖於盒鬚圖上。所治療之動物相對於對照動物的淨腫瘤體積分佈之差異係使用t檢驗來統計評估。所計算機率(p)≤0.05考慮為統計上顯著的。t檢驗為統計學顯著性之檢驗，且不提供對群組之間差異大小的估計或對臨床或生物學顯著性之量度。

2D細胞增殖抑制分析之實驗上測定IC₅₀ 值係概述於表19中。在0.0至500 nM化合物A之濃度範圍內量測MKL-1及MS-1 hMCC細胞系之IC₅₀ 值，且使用4PL非線性迴歸自所得滴定曲線測定。分析包括建立100%細胞增殖之基線的DMSO陰性對照。如表18及第17圖所示，針對以2D格式分析的經培養MKL 1及MS-1細胞系而言，化合物A產生18.4±4.8 nM及19.7±0.7 nM之各別IC₅₀ ±SD值。表19. hMCC細胞增殖之半最大抑制。 IC50 =半最大抑制濃度；[n] =生物學重複實驗數量；SD =標準偏差

此研究中之測試動物係根據表18中之協定來治療，且分別在第15天及第36天即一或多個對照動物獲得端點之第一天執行MKL-1及MS-1研究之TGI分析。

如表20所示，化合物A單療法在MKL-1 hMCC模型中為活體內有效的，其在第15天產生52%之腫瘤生長抑制。如第18圖所示，所治療之動物相對於媒劑對照動物的第15天之平均淨腫瘤體積差異為顯著的(p = 0.0002)。平均腫瘤生長在對照群組中穩定地發展，如第19圖所示。在化合物A單療法群組中，平均腫瘤進程相較於對照中所觀察到的稍微更慢。如第20圖所示，接收媒劑或化合物A單療法之群組展現累加平均體重增加研究之第15天，此後，兩個群組皆展示淨體重增加之類似減小。表20. MKL-1之TGI反應概要 TGI =腫瘤生長抑制；Diff =差異；n =動物數量；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥；--=不適用。將10 mL/kg之給藥體積針對個別動物之重量定標，且化合物A作為mg/kg游離鹼等效物來給藥；p-值係使用t檢驗來計算。

如表21所示，化合物A單療法在MS-1 hMCC模型中為活體內有效的，其在第36天產生95%之腫瘤生長抑制。如第21圖所示，所治療之動物相對於媒劑對照動物的第36天之平均淨腫瘤體積差異為顯著的(p＜0.0001)。平均腫瘤生長在對照群組中快速地發展，如第6圖所示。在化合物A單療法群組中，平均腫瘤進程為幾乎靜態直至第18天，隨後逐漸增加。三個化合物A所治療之腫瘤最初復原且兩個在第25天反彈，如第22圖之插圖中所例示。如第23圖所示，接收媒劑或化合物A單療法之群組在研究過程中展現平均體重增加。表21. MS-1之TGI反應概要 TGI =腫瘤生長抑制；Diff =差異；n =動物數量；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥；--=不適用。將10 mL/kg之給藥體積針對個別動物之重量定標，且化合物A作為mg/kg游離鹼等效物來給藥；p-值係使用t檢驗來計算。

在活體外執行的細胞增殖抑制分析中，化合物A在經培養的MKL-1及MS-1細胞系中證明有效活性，其產生18.4±4.8 nM及19.7±0.7 nM之各別IC₅₀ ±SD值。

化合物A單療法在MKL-1 hMCC模型中為活體內有效的，其產生52%之腫瘤生長抑制及所治療之動物相對於媒劑對照動物的第15天之平均淨腫瘤體積之顯著差異(p = 0.0002)。在化合物A單療法群組中，平均腫瘤進程相較於對照中所觀察到的稍微更慢。

化合物A單療法在MS-1 hMCC模型中為活體內有效的，其產生95%之腫瘤生長抑制及所治療之動物相對於媒劑對照動物的第36天之平均淨腫瘤體積之顯著差異(p＜0.0001)。在化合物A單療法群組中，平均腫瘤進程為幾乎靜態直至第18天，隨後逐漸增加。

接收媒劑或化合物A單療法之群組在此等研究過程中展現平均體重增加。化合物A在MKL-1及MS-1異種移植研究中考慮為耐受性可接受的。實例15. 在Merkel氏細胞癌中化合物A對藥效學生物標誌物之活體外及活體內效應

人類Merkel氏細胞癌係分類為表現LSD1之侵襲性皮膚神經內分泌腫瘤。此等腫瘤比SCLC腫瘤更易取得，且可證明適用於人類研究中之PD工作。有效hMCC治療為高度未得滿足之需求，其可提供對化合物A之另一指示。

在當前的非優良實驗室操作(non-Good Laboratory Practice; GLP)臨床前研究中，在兩個hMCC模型MKL-1及MS-1中作為細胞培養物活體外評估及使用RNA-seq及qRT-PCR作為異種移植物活體內評估在藉由化合物A之LSD1抑制之後人類mRNA表現之調節。另外，在MKL-1及MS-1細胞系中使用ChIP-seq研究LSD1與ST18及FREM2基因座之直接結合及在化合物A治療之後H3K4me2狀態之改變。

此研究之目的係判定在人類hMCC細胞系MKL-1及MS-1中LSD1之化合物A介導抑制對活體外及活體內基因表現之效應。另外，在MKL-1及MS-1細胞系中使用ChIP-seq研究LSD1與ST18及FREM2基因座之直接結合及在化合物A治療之後H3K4me2狀態之改變。

對活體外細胞培養物研究而言，在二甲亞碸(dimethylsulfoxide; DMSO)中製備化合物A儲備溶液且在培養基中連續稀釋。對於活體內異種移植研究而言，將化合物A懸浮於水中之0.5%甲基纖維素中，且在10 mL/kg之給藥體積下投與。

藉由在0、10或100 nM化合物A存在下培養MKL-1或MS-1細胞(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)三天且提取總RNA用於藉由RNA-seq評定來測定藉由化合物A對一組人類基因之基因表現調節。進一步評估在兩個hMCC系中在兩個濃度下下調或上調之基因。隨後，在兩個hMCC系中在兩個濃度下展現至少兩倍之劑量依賴性基因表現改變的基因係鑑別為候選PD生物標誌物基因。

接著，在改進研究中進一步評估候選PD生物標誌物基因。在活體外研究中，針對在經培養的MKL-1或MS-1細胞系中之候選PD生物標誌物基因使用qRT-PCR測定基因表現之化合物A調節的EC50值。在活體內異種移植物劑量反應研究中，帶有可觸知MKL-1或MS-1腫瘤之雌性非肥胖型糖尿病重症聯合免疫缺陷(non-obese diabetic severe combined immune deficiency; NOD-SCID)γ(NSG)小鼠以1、2.5或5mg/kg每天兩次(BID)經口投與媒劑或化合物A單療法歷時五天。在接收最後劑量之後四小時，收集腫瘤且提取總RNA用於針對候選PD生物標誌物的基因表現改變之qRT-PCR評定。在最終研究中，藉由ChIP-seq分析候選PD生物標誌物之LSD1佔用率及在化合物A存在下H3K4me2狀態之改變。

自此等分析，展現與細胞增殖之化合物A抑制之IC50值關聯的EC50值、活體外劑量反應與活體內劑量反應之間的強相關性及在化合物A存在下之LSD1佔用率及H3K4me2調節之基因係鑑別為在hMCC模型中針對LSD1之化合物A抑制的潛在PD生物標誌物。

在利用分別懸浮於補充有10%或20% FBS中之cRPMI中的MKL-1或MS-1細胞接種的多孔培養板中將RNA-seq及qRT-PCR分析重複執行三次。在DMSO中稀釋化合物A且隨後在經補充cRPMI中再次後續稀釋以製得儲備溶液。每一測試孔接收作為媒劑對照之DMSO或化合物A之等分試樣以得到對RNA-seq分析而言在0、10或100 nM下的化合物A之最終濃度，或對qRT-PCR分析而言在0、2.5、7.4、22、66或200 nM的化合物A之最終濃度。在37℃下，在5% CO₂ 及95%空氣之氣氛中，在潮濕孵化器中孵育培養板3天。在孵育期之後，收穫經培養的MKL-1或MS-1細胞且使用RNeasy微型套組(QIAGEN, Valencia, CA)根據製造商之說明純化總RNA。

帶有可觸知hMCC MKL-1及MS-1腫瘤之雌性NSG小鼠隨機化至各自具有三隻小鼠之四組中。三個群組以每天兩次給藥時程經口投與1、2.5或5 mg/kg的作為單療法之化合物A達九次劑量(BID x4.5)。第四群組以BID時程經口投與作為對照之媒劑。在最後給藥之後四小時，收集腫瘤至RNAlater中且冷凍儲存。

將腫瘤樣本解凍且使用RNeasy微型套組根據製造商之說明純化總RNA。根據製造商之說明，使用具有無RNase之DNase設定的柱上DNase處理(QIAGEN, Valencia, CA)移除殘餘去氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid; DNA)。在無RNase之水中溶離總RNA且藉由qRT-PCR分析。

使用用於Illumina®平臺(Kapa Biosystems, Wilmington, MA)之KAPA Stranded mRNA-Seq套組，根據製造商之說明將自所治療及對照的MKL-1或MS-1培養細胞提取的純化總RNA (1 μg)轉化成定序文庫。使用75鹼基配對端之RNA定序在Illumina NextSeq® 500系統(Illumina, San Diego, CA)上將文庫定序。將定序讀數映射至hg19人類基因組構建物，且藉由跨於所有重複實驗相對於媒劑對照之變方分析來測定微分表達式。

使用大容量cDNA反轉錄套組(Life Technologies, Grand Island, NY)，根據製造商之說明，在反轉錄反應中從由所治療及對照MKL-1或MS-1培養細胞或腫瘤樣本提取的純化總RNA產生互補(c) DNA。製備含有去氧核糖核苷酸、隨機引子、反轉錄酶、RNase抑制劑及反轉錄緩衝液之1.5x反轉錄主混合物，且將20 μL添加至96孔多孔板之每一測試孔。每一測試孔隨後接收10 μL之總RNA，且將多孔板密封以防止蒸發。在使用藉由套組製造商提供的最佳化參數程式化之T100^TM熱循環計(Bio-Rad, Hercules, CA)中執行反轉錄。

mRNA回應於化合物A處理之表現位準係藉由qPCR重複量測兩次。使用用於人類基因ST18、FREM2之引子組及使用肌動蛋白β(actin beta; ACTB)作為參考序列以用於正規化針對靶基因之絕對值讀出，對自所處理及對照MKL-1或MS-1培養細胞或腫瘤樣本提取的總RNA所製得的cDNA執行TaqMan® qPCR。mRNA轉錄物之總位準係針對ACTB參考轉錄物來正規化。mRNA表現之改變係藉由計算在化合物A處理之後相對於媒劑處理之對照的基因表現之成倍改變來量化。

利用在分別補充有10%或20% FBS之cRPMI中的懸浮液中生長之MKL-1或MS-1細胞執行ChIP-seq分析。在DMSO中稀釋化合物A且隨後在經補充cRPMI中再次後續稀釋以製得儲備溶液。每一測試孔接收作為媒劑對照之DMSO或化合物A之等分試樣以得到在0或100 nM下的化合物A之最終濃度。在37℃下，在5% CO₂ 及95%空氣之氣氛中，在潮濕孵化器中孵育培養板3天。在孵育期之後，收穫經培養的MKL-1或MS-1細胞，且在周圍溫度下藉由將十分之一體積之新鮮11%甲醛溶液添加至每一孔繼之以孵育20分鐘來交聯。藉由添加1/20體積之2.5 M甘胺酸來使交聯反應淬滅。隨後，收穫經交聯的細胞且用冰冷磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate buffered saline; PBS)清洗兩次。藉由離心作用使細胞成粒，且將含有6 x 10⁶ 個MS 1細胞或4.5 x 10⁶ 個MKL-1細胞之等分試樣在液氮中快速冷凍，且在-80℃下儲存。

將含有甲醛固定之細胞的冷凍細胞球粒溶解，且音波處理以溶解且剪切經交聯的染色質(Bioruptor®, Diagenode, Denville, NJ)。使用用於轉錄因子之iDeal ChIP-seq套組(Diagenode, Denville, NJ)根據製造商之說明製備染色質。LSD1相關聯之染色質係利用抗LSD1抗體(Abcam, Cambridge, MA)使用用於轉錄因子之iDeal ChIP-seq套組來免疫沉澱。H3K4me2相關聯之染色質係利用H3K4me2多株抗體(Millipore, Billerica, MA)使用用於組織蛋白之iDeal ChIP-seq套組(Diagenode, Denville, NJ)來免疫沉澱。自每一樣本製備但未經受任何免疫沉澱的染色質係用作輸入對照且與ChIPed樣本並行處理。每一樣本經處理以供交聯反轉，且藉由利用RNAse A、蛋白酶K及苯酚:氯仿:異戊醇提取繼之以乙醇沉澱之處理來純化DNA。使用MicroPlex文庫製備套組v2 (Diagenode, Denville, NJ)根據製造商之說明製備ChIP文庫。在Illumina NextSeq® 500系統上使用75鹼基之單端讀取長度定序之前，使用AMpure XP珠粒(Beckman Coulter, Indianapolis, IN)根據製造商之說明來對ChIP文庫進行大小選擇。

使用剪接轉錄物比對參考(Spliced Transcripts Alignment to a Reference; STAR)軟體工具(©Alexander Dobin, 2009-2016)將定序讀數映射至hg19人類基因組構建物，且使用R(edgeR)及微分基因表現分析中之數位基因表現資料之經驗分析基於負二項分佈(DESeq2)軟體工具(©Bioconductor, 2003-2017)正規化轉錄物計數。藉由跨於所有重複實驗相對於媒劑對照之變方分析來測定微分表達式。

在qPCR表現分析中，循環閾值(cycle threshold; Ct)係定義為供PCR訊號超過背景所需之循環數。差值CT (ΔCt)相應於針對ACTB參考序列之Ct值正規化的ST18或FREM2靶基因之Ct值，其中

。

相對靶表現之定量係藉由比較Ct方法來計算。比較CT方法涉及如下文所示計算每一所處理及對照樣本之ΔCt靶與對照樣本之平均ΔCt靶之間的差異：

。

靶mRNA表現相對於化合物A濃度(相對於對照)之倍數改變(計算為2-ΔΔCt)係針對所測試的每一化合物A濃度來計算。隨後，由使用Microsoft Excel的IDBS XLfit程式附加項及方程式251 (ID Business Solutions Ltd., UK)擬合至彼資料的4PL非線性迴歸曲線來測定EC50。

ChIP文庫序列係使用Bowtie 2短讀取比對軟體(Langmead, 2012)來與hg19人類基因組構建物比對。在MKL-1或MS-1細胞中用於LSD1或H3K4me2之富集或「結合」區係相對於來自全細胞提取物樣本之背景讀數來測定。僅具有至少20之記分的通過Illumina映射品質(Illumina mapping quality; MAPQ)過濾器的讀數係用於後續分析。來源於PCR兩次重複實驗之讀數使用Picard MarkDuplicates工具(http://broadinstitute.github.io/picard, Broad Institute, Cambridge, MA)來移除。每ChIP-seq之讀數數量在對照樣本與所處理樣本之間藉由自具有最小讀數數量之樣本隨機下取樣至讀數總數來正規化。使用ChIP-seq之基於模型之分析(Model-based Analysis of ChIP-seq; MACS) (http://liulab.dfci.harvard.edu/MACS/; Zhang, 2008)來命名ChIP峰。使用deepTools bamCoverage工具(http://deeptools.readthedocs.io/en/latest/content/tools/bamCoverage.html; Ramirez, 2016)來產生基因組覆蓋軌跡。整合的基因組觀察器IGV (http://software.broadinstitute.org/software/igv/; Robinson, 2011; Thorvaldsdóttir, 2013)用於可視化ChIP-seq軌跡。

藉由在0、10或100 nM化合物A存在下培養MKL-1或MS-1細胞三天且提取總RNA用於藉由RNA-seq評定來測定藉由化合物A對一組人類基因之基因表現調節。如第24圖所示，4303個下調基因中之17個(表22）及3803個上調基因中之172個(表23)在兩個濃度下展現兩個hMCC系中之基因表現改變。表22. 藉由RNA-seq鑑別的下調基因。表23. 藉由RNA-seq鑑別的上調基因。

在進一步評估時，在兩個濃度下在兩個hMCC系中展現至少2倍之劑量依賴性基因表現改變的兩個上調基因ST18及FREM2係鑑別為候選PD生物標誌物基因，如表24所示。ST18已證實係充當乳癌中之腫瘤抑制基因(Jandrig, 2004)，且在成纖維細胞中調節促凋亡及促發炎基因表現(Yang, 2008)。遠側轉移經常地發生在診斷患有肺腺癌之患者中。近期研究證明，FREM2經由焦點黏附激酶訊號轉導之下調調節非小細胞肺癌A549細胞系之遷移及侵入而非增殖(Zhan, 2014)。表24. 候選藥效學生物標誌物基因 Up_Reg = 上調

如第25圖所示，基因表現之化合物A調節之EC50值係藉由在0、2.5、7.4、22、66或200 nM化合物A存在下培養三天的MKL-1或MS-1細胞系中針對候選PD生物標誌物基因之qRT-PCR來測定。ST18及FREM2展現與在此等細胞系中細胞增殖之化合物A抑制之IC50值相關聯的EC50值(＜ 20 nM，資料未展示)。

在活體內異種移植劑量反應研究中，三隻帶有腫瘤之雌性NSG小鼠之群組以1、2.5或5 mg/kg BID x4.5 PO投與媒劑或化合物A。在接收最後劑量之後四小時，收集腫瘤且提取總RNA用於針對候選PD生物標誌物的基因表現改變之qRT-PCR評定。如第25圖所示，ST18及FREM2展示≥2倍基因表現改變且在兩個模型中展現活體內劑量依賴性反應。

如第26圖所示，ChIP-seq分析證明在經培養的MKL-1及MS-1細胞中在ST18及FREM2基因處之LSD1結合。與在ST18基因中H3K4甲基化之LSD1依賴性調節一致，化合物A處理在MKL 1及MS-1模型兩者中導致在LSD1結合位點處增加的H3K4me2。另外，化合物A處理在MKL-1模型中但未在MS-1模型中導致在FREM2基因之LSD1結合位點處增加的H3K4me2。此等結果與ST18及可能FREM2(作為LSD1之直接靶基因)一致，從而支援其作為在hMCC中用於藉由化合物A抑制LSD1的潛在PD生物標誌物。

在兩個hMCC模型MKL-1及MS-1中，針對一組基因評估在藉由化合物A抑制LSD1後的mRNA表現調節。選擇兩個基因ST18及FREM2以用於在MKL 1及MS-1模型中進一步評估LSD1之化合物A介導抑制對活體外及活體內基因表現之效應，及LSD1之直接結合及在其基因座處H3K4甲基化之LSD1依賴性調節。

藉由在經培養的MKL-1或MS-1細胞中評定的針對一組人類基因的藉由化合物A之基因表現調節發現：4303個下調基因中之17個及3803個上調基因中之172個在兩個hMCC系中在兩個濃度下展現表現改變。在進一步評估時，展現至少2倍之劑量依賴性基因表現改變的兩個上調基因ST18及FREM2係鑑別為候選PD生物標誌物基因。

在經培養的MKL-1或MS-1細胞系中使用qRT-PCR測定ST18及FREM2基因表現之化合物A調節之EC50值。兩個基因展現與在此等細胞系中藉由化合物A的細胞增殖抑制之IC50值相關聯的EC50值(＜ 20 nM，資料未展示)。

在活體內異種移植劑量反應研究中，ST18及FREM2展示≥2倍表現改變且在兩個hMCC模型中展現活體內劑量依賴性反應。

ChIP-seq分析證明在經培養的MKL 1及MS-1細胞中在ST18及FREM2基因座處之LSD1結合。與在ST18基因處H3K4甲基化之LSD1依賴性調節一致，化合物A處理在兩個模型中導致在LSD1結合位點處增加的H3K4me2。另外，化合物A處理在MKL-1模型中但未在MS-1模型中導致在FREM2基因之LSD1結合位點處增加的H3K4me2。此等結果與ST18及可能FREM2(作為LSD1之直接靶基因)一致，從而支援其作為在hMCC中用於藉由化合物A抑制LSD1的潛在PD生物標誌物。實例16. 在雌性裸鼠中在源自皮下小細胞肺癌患者的異種移植模型LXFS 573中單獨化合物A及與依託泊苷組合之活體內效力

使用在雌性免疫缺陷Foxn1nu裸鼠中建立的源自皮下小細胞肺癌(subcutaneous small cell lung cancer; SCLC)患者的異種移植(patient-derived xenograft; PDX)模型LXFS 573臨床前評估單獨化合物A及與依託泊苷組合之活體內效力及可耐受性。效力係基於腫瘤生長延遲(tumor growth delay; TGD)、研究存活及在研究過程中所治療動物相對於(vs.)對照動物的平均腫瘤生長之差異來測定。可耐受性係基於所治療動物與對照動物之間的平均體重差異來評定。

LXFS 573腫瘤片段係獲自裸鼠中連續傳代的異種移植物。在自供體小鼠移除之後，將腫瘤切成片段(3至4 mm邊緣長度)且置放於含有10%之青黴素及鏈黴素溶液之磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate-buffered saline; PBS)中。受體雌性免疫缺陷Foxn1nu小鼠藉由吸入異氟烷麻醉，且在側腹中皮下接收單邊腫瘤植入物。使腫瘤生長35天直至其獲得約132 mm³ 。隨後將帶有腫瘤之小鼠隨機化至每組具有八隻小鼠的六個組中，其中平均腫瘤體積為134.3±68.2 mm³ 、130.7±68.9 mm³ 、132.4±66.3 mm³ 、133.1±64.9 mm³ 、132.1±62.6 mm³ 及132.4±63.2 mm³ 。這一天係表示為第0天，且根據表25中所示的預定方案起始給藥。表25. 治療計劃媒劑以10 mL/kg給藥，且化合物A作為mg/kg游離鹼等效物來給藥；PO =經口給藥；SC =皮下給藥。

使用卡鉗每週兩次在二維中量測個別腫瘤，且使用式：TV = 0.5 a×b² 來計算以mm³ 計的腫瘤體積(tumor volume; TV)，其中a及b分別為以毫米計的長直徑及短直徑。將腫瘤生長曲線繪製為隨時間變化的群組平均腫瘤體積(±平均值之標準偏差[standard error of the mean; SEM])。針對比較數量校正的多重t檢驗評定在每一時間點針對作為單療法投與的5 mg/kg化合物A或與依託泊苷組合的平均腫瘤體積差異之顯著性。當已獲得腫瘤體積端點(2000 mm³ )之動物退出研究或歸因於瀕死狀態而安樂死時，對動物記錄的最終腫瘤體積包括用於計算在後續時間點之平均體積的資料。每週將動物稱重兩次，且以自第0天之百分比改變來將平均體重圖表構圖。當一群組中超過50%之可評定動物退出研究，則將兩個圖表截斷。若在測試期間平均體重損失小於20%，且不超過一隻歸因於治療相關之原因而退出研究，則方案係考慮為耐受性可接受的。

當每一測試動物之腫瘤達到2000 mm³ 之端點體積或在研究之最後一天(第133天)(以先達成者為準)，將該測試動物安樂死。每一小鼠之至端點時間(time-to-endpoint; TTE)係由以下方程式來計算：

其中b為截距，且m為藉由log10之線性迴歸獲得的線之斜率—由超過2000 mm³ 之第一觀察結果及三次在先量測值構成的變換腫瘤體積。未達到端點之動物係指派等於研究最後一天之TTE值。在瀕死時安樂死的動物係指派為等於其犧牲當天之TTE值。

治療結果係由腫瘤生長延遲(tumor growth delay; TGD)來決定，其係定義為在治療群組中相較於媒劑對照群組的中值TTE改變： TGD = T – C，

其以天數表示，或定義為媒劑對照群組之中值TTE之百分比：

其中： T =治療群組之中值TTE，且 C =媒劑對照群組之中值TTE。

治療效力亦係由SS (MTV)決定，其係定義為在第133天帶有具有所指示之中值腫瘤體積(median tumor volume; MTV)的腫瘤的研究存活者(study survivor; SS)之數量。

對卡本-麥爾圖表構圖，其展示隨時間推移保留在研究中之動物之百分比。對數秩(Mantel-Cox)檢驗係用於評定群組之間的卡本-麥爾圖表之差異的顯著性。針對多次比較調整的經計算p-值≤(0.05/比較次數)係考慮為統計上顯著的。對數秩檢驗為統計學顯著性之檢驗，且不提供對群組之間差異大小的估計或對臨床或生物學顯著性之量度。

表24概述P380E4_R400_LXFS 573研究之治療計劃。將測試動物分選為每組具有八隻小鼠的六個組，且當平均腫瘤大小滿足隨機化標準時在第0天起始治療。對照小鼠以如所示的每天一次時程接收藉由經口胃管灌食法(PO)投與的0.5%甲基纖維素媒劑。所治療之小鼠以所示的每天一次時程單獨或以組合接收經口化合物A或皮下(subcutaneous; SC)依託泊苷。測試物品化合物A係每天製備為懸浮於媒劑中之苯磺酸鹽(74%活性化合物)且作為mg/kg游離鹼等效物來給藥。在所有群組中，10 mL/kg之給藥體積按個別動物之重量來定標且經計劃之給藥係繼續直至動物退出研究。兩個動物接收給藥假日，此對結果無影響。

根據表19中之協定治療測試動物且在第133天終止研究。表26概述TGD反應，且第27圖展示所有群組之卡本-麥爾圖表。對數秩檢驗係用於評定群組之間的卡本-麥爾圖表之差異的顯著性。針對多次比較調整的經計算p-值≤0.003(0.05/15)係考慮為統計上顯著的。第28圖呈現六組測試動物之平均腫瘤生長曲線。第29圖呈現自第0天的群組平均體重改變百分比。因為在測試期間沒有方案引起＞ 20%之平均體重損失，且未報告治療相關之死亡，所以所有方案皆考慮為耐受性可接受的。表26. TGD反應概要媒劑係在10 mL/kg之0.5%甲基纖維素下給藥，且化合物A係以10 mL/kg作為mg/kg游離鹼等效物來給藥；N =針對每一群組評估的動物數量；TTE =至端點之時間；T-C =針對所治療群組相對於對照群組之中值TTE(天)之差異；%TGD = (T-C)/C x 100；最大可能TGD = 91天(217%TGD)；SS (MTV) =帶有具有中值腫瘤體積(mm³ ) (median tumor volume; MTV)之研究存活者(study survivor; SS)之數量，na =不適用。

如表26及第27圖所示，在對照小鼠中之八個腫瘤在21.2天與55.3天之間生長至2000 mm³ 端點。如在表26中所報告，對照小鼠之中值TTE為42天，其建立對此研究而言91天之最大可能TGD (217%TGD)。平均腫瘤生長快速地發展，如第28圖所示。如第29圖所示，媒劑對照群組在第45天展現平均體重增加，在最後一天，至少一半之動物保留在研究中。

如在表26中所報告，在5 mg/kg下之化合物A單療法產生133天之中值TTE，其相應於最大可能TGD (91天，217%)。如表26及第27圖所示，一個動物在第117天獲得端點，且七個動物在研究中存活，其帶有具有1064 mm³ 之MTV之腫瘤。如在第27圖中所注釋，對數秩檢驗發現當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p ＜ 0.0001)。平均腫瘤進程相較於在對照中觀察到的彼者顯著地延遲，如第28圖所示。化合物A單療法群組在研究結束時展現0.4%之平均體重損失，如第29圖所示。

在24 mg/kg下之依託泊苷單療法產生63天之中值TTE，其相應於21天或50% TGD。八個測試動物中之腫瘤在45.1天與72.5天之間生長至端點。對數秩檢驗發現當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p = 0.0007)，且當相較於5 mg/kg化合物A單療法群組時顯著較少的效力(p ＜ 0.0001)。平均腫瘤體積在反彈至類似於對照動物中腫瘤之彼者的生長率之前減小歷時約17天。依託泊苷單療法群組在第66天展現6.3%之平均體重增加，在最後一天，一半之動物保留在研究中。

以1、2.5或5 mg/kg與依託泊苷組合投與之化合物A產生相應於16天(38%)、79天(188%)及91天(217%，最大可能)之TGD的59、121及133天之各別劑量依賴性中值TTE。

在接收1 mg/kg化合物A組合療法之群組中，在七個測試動物中之腫瘤在45.3天與79.8天之間生長至端點，且一個動物在研究中存活，其帶有具有1430 mm³ 之體積的腫瘤。對數秩檢驗發現當相較於對照群組時總體存活中之顯著差異(p = 0.0015)，當相較於依託泊苷單療法群組時無差異(p = 0.4408)，且當相較於5 mg/kg化合物A單療法群組之顯著較少的效力(p = 0.0008)。平均腫瘤體積在反彈至類似於對照動物中腫瘤之彼者的生長率之前減小歷時約17天。平均腫瘤進程類似於利用依託泊苷單療法所觀察到之彼者。1 mg/kg化合物A組合療法群組在第59天展現5.5%之平均體重增加，在最後一天，至少一半之動物保留在研究中。

在接收2.5 mg/kg化合物A組合療法之群組中，在五個測試動物中之腫瘤在89.6天與125.6天之間生長至端點，且三個動物在研究中存活，其帶有具有1121 mm³ 之MTV的腫瘤。對數秩檢驗發現當相較於對照群組及依託泊苷單療法群組時總體存活中之顯著差異(p ＜ 0.0001)，且當相較於5 mg/kg化合物A單療法(p = 0.0351)群組或1 mg/kg化合物A組合療法(p = 0.0132)群組時無效力差異。平均腫瘤體積在逐漸反彈至比針對對照動物中腫瘤觀察到之彼者更慢的生長率之前減小歷時約17天。2.5 mg/kg化合物A組合療法群組在第126天展現3.8%之平均體重增加，在最後一天，至少一半之動物保留在研究中。

在接收5 mg/kg化合物A組合療法之群組中，八個動物在研究中存活，其帶有具有121 mm³ 之MTV的腫瘤。在第91天，一個腫瘤復原至低於可觸知性極限，其中此保持至研究結束。對數秩檢驗發現當相較於對照及依託泊苷單療法(p ＜ 0.0001)群組及1 mg/kg化合物A組合療法(p = 0.0004)群組時總體存活中之顯著差異，且當相較於5 mg/kg化合物A單療法(p = 0.3173)群組或2.5 mg/kg化合物A組合療法(p = 0.0085)群組時無效力差異。平均腫瘤體積減小歷時約17天，隨後在研究過程中幾乎保持靜態。多重t檢驗發現：在每一時間點作為組合療法投與的5 mg/kg化合物A相較於單療法的平均腫瘤體積之差異以第7天量測值顯著開始，且保持顯著至研究結束(p≤0.01)。5 mg/kg化合物A組合療法群組在研究結束時展現0.6%之平均體重增加。

使用在雌性免疫缺陷Foxn1nu小鼠中建立的SCLC PDX模型LXFS 573臨床前評估單獨化合物A (1、2.5或5 mg/kg)及與依託泊苷(24 mg/kg)組合之活體內效力及可耐受性

在24 mg/kg下之依託泊苷單療法產生63天之中值TTE，其相應於21天或50% TGD。八個測試動物中之腫瘤在45.1天與72.5天之間生長至端點。對數秩檢驗發現當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p = 0.0007)，且當相較於5 mg/kg化合物A單療法群組時顯著較少的效力(p ＜ 0.0001)。

在第4-133天(研究結束)以1、2.5或5 mg/kg每天給藥的經口化合物A與在第1-3天上每天給藥24 mg/kg依託泊苷組合在SCLC之LXFS 573 PDX模型中為有效的。腫瘤生長延遲為劑量依賴性的，其產生相應於16天(38%）、79天(188%）及91天(217%，此研究之最大可能TGD)之TGD的59、121及133天之各別中值TTE。研究存活亦展現劑量依賴性，在第133天分別產生1、3及8個存活者，且當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p≤0.0015)。依託泊苷加5 mg/kg化合物A群組之平均腫瘤體積減小歷時約17天，隨後在研究過程中幾乎保持靜態，其中在第133天MTV為121 mm³ 。

在第1-133天以5 mg/kg每天給藥的經口化合物A單療法亦引出最大反應，其中133天之中值TTE相應於91天或217%之TGD，且當相較於對照群組時產生總體存活之顯著差異(p = 0.0001)。平均腫瘤進程顯著地延遲，其中在第133天MTV為1064 mm³ 。對中值TTE、研究存活者之數量、平均腫瘤生長及隨時間推移保留在研究中之動物之百分比的差異之評定發現：對單獨投與5 mg/kg化合物A或與依託泊苷組合投與之反應優越於所有其他治療方案。儘管接收5 mg/kg化合物A單療法之動物的總體存活相對於組合療法不為顯著不同的(p = 0.9998)，在第7-133天之平均腫瘤體積對接收依託泊苷隨後5 mg/kg化合物A之測試動物而言相較於接收單獨5 mg/kg化合物A之彼等測試動物為顯著較少的(p≤0.01)。

所有治療方案呈現為耐受性可接受的，其在量測之第一天與最後一天之間產生群組平均體重之最小改變且無死亡被分類為治療相關的。實例17. 在NCI-H1417小細胞肺癌異種移植模型中單獨化合物A或與依託泊苷組合之效力

此研究之目的將判定在雌性NSG小鼠中建立的NCI-H1417 SCLC異種移植模型中，作為單療法或與24 mg/kg依託泊苷組合的以5用/2停間斷時程在5 mg/kg下經口給藥的化合物A之效力及可耐受性。

雌性NSG小鼠(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)用於此研究。測試小鼠在腫瘤植入當天為9週大。在腫瘤植入之前將動物馴養一週。

使動物任意採食水(逆滲透，酸化)及由20%粗蛋白質、5.6%脂肪(酸水解)及4.7%粗纖維組成之PicoLab®齧齒動物飲食。以12小時光循環，在72±2℉及30–70%濕度下將小鼠收容在ALPHA-dri®上之隔離設施中。

在補充有10%胎牛血清(cRPMI)、100個單位/mL青黴素G鈉及100 μg/mL鏈黴素硫酸鹽之RPMI-1640培養基中培養NCI-H1417細胞。在37℃下，在5%二氧化碳及95%空氣之氣氛中，在潮濕孵化器中培養細胞。

在水中之0.5%甲基纖維素中以10 mL/kg之給藥體積調配化合物A。

帶有可觸知NCI-H1417 SCLC腫瘤(平均腫瘤體積約230 mm³ )之雌性NSG小鼠隨機化至四個組中。兩個群組以5用/2停間斷時程作為單療法或在利用24 mg/kg依託泊苷之初始三天治療之後經口投與5 mg/kg化合物A。研究包括依託泊苷單療法及媒劑對照群組。

效力係基於對TGD差異及TTE值差異以及在研究過程中所治療動物相對於對照動物之平均腫瘤生長的統計學評定來測定。可耐受性係藉由監視每一個別動物之體重及健康狀態來評定。

在腫瘤細胞接種當天，在對數期生長期間收穫人類NCI-H1417細胞且以7.5 x 10⁷ 個細胞/mL之濃度再懸浮於100% Matrigel®中。隨後每一測試小鼠接收在右側腹中皮下植入的0.1 mL細胞懸浮液(7.5 x 10⁶ 個細胞)。使腫瘤生長43天直至其獲得約230 mm³ 。隨後將帶有腫瘤之小鼠隨機化至每組具有七隻小鼠之四個組中，其中平均腫瘤體積為241.7±29.4 mm³ 、220.4±33.2 mm³ 、222.7±35.9 mm³ 及232.4±41.1 mm³ 。這一天係表示為第1天，且根據表27中所示的預定方案起始給藥。表27. 治療計劃 n =動物數量；PO =經口給藥；SC =皮下給藥；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥至研究結束；QD x 3 =每天一次給藥歷時三天；---=無測試物品投與。將10 mL/kg之給藥體積按個別動物之重量定標，且化合物A作為mg/kg游離鹼等效物來給藥。

如表27所示，對照小鼠接收經口投與(PO)的水性0.5%甲基纖維素媒劑歷時五天繼之以兩天不給藥，重複至研究結束(5用/2停)。化合物A單療法群組接收5 mg/kg化合物A，PO，5用/2停。依託泊苷單療法群組接收皮下(subcutaneously; SC)投與的24 mg/kg依託泊苷，每天一次歷時三個連續天(QD x 3)。依託泊苷繼之以化合物A組合療法群組接收24 mg/kg依託泊苷，SC，QD x 3，隨後5 mg/kg化合物A，PO，5用/2停。測試物品化合物A係每天製備為懸浮於媒劑中之苯磺酸鹽(74%活性化合物)且作為mg/kg游離鹼等效物來給藥。在所有群組中，10 mL/kg之給藥體積按個別動物之重量來定標。

使用卡鉗每週兩次在三維中量測個別腫瘤，且使用式：TV = 0.5×l×w×h來計算以mm³ 計的腫瘤體積(tumor volume; TV)，其中l、w及h分別為以毫米計的長度、寬度及高度。同時，將動物稱重，且藉助於身體檢查針對超過20%之體重損失及嗜睡徵象監視每一個別動物之健康狀態。在第195天終止研究。

當每一測試動物之腫瘤達到2000 mm³ 之端點體積或當每一測試動物之體重損失超過20%時，將該測試動物安樂死。對經歷＞10%重量損失之動物而言，每天監視體重。當體重損失＞20%或動物展現嗜睡時，將該動物犧牲。當將動物安樂死或發現動物死在籠中(found dead in the cage; FDIC)時，針對動物記錄的最終腫瘤體積包括用於計算在後續時間點之平均體積的資料。隨後繪製腫瘤生長曲線，其展示隨時間變化的群組平均腫瘤體積(±平均值之標準偏差[standard error of the mean; SEM])，且將平均體重繪製為自第1天之百分比改變。當一群組中超過50%之可評定動物退出研究，則將兩個圖表截斷。針對比較數量校正的多重t檢驗評定繪製在腫瘤生長曲線上的每一時間點的化合物A單療法平均腫瘤體積相對於組合療法平均腫瘤體積之差異顯著性。

每一小鼠之TTE係由以下方程式計算：

其中b為截距，且m為藉由log10之線性迴歸獲得的線之斜率—由超過2000 mm³ 之第一觀察結果及三次在先量測值構成的變換腫瘤體積。發現死亡或歸因於體重損失而安樂死之動物係指派為等於其犧牲當天之TTE值。在研究中存活之動物係指派等於研究最後一天之TTE值。

治療結果係由TGD來決定，其係定義為在治療群組中相較於媒劑對照群組的中值TTE改變： TGD = T-C，其以天數表示，或定義為媒劑對照群組之中值TTE之百分比：

對卡本-麥爾圖表構圖，其展示隨時間推移保留在研究中之動物之百分比。對數秩(Mantel-Cox)檢驗係用於評定群組之間的卡本-麥爾圖表之差異的顯著性。經計算p-值≤(0.05/比較次數)係考慮為統計上顯著的。對數秩檢驗為統計學顯著性之檢驗，且不提供對群組之間差異大小的估計或對臨床或生物學顯著性之量度。

根據表21中之協定治療研究中之測試動物且在第195天終止研究。表28概述所有群組之TGD反應。第30圖展示平均腫瘤生長曲線且第31圖展示所指示群組之卡本-麥爾圖表。第32圖呈現自第1天的群組平均體重改變百分比。表28. TGD反應概要 TGD =腫瘤生長延遲；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥至研究結束；QD x 3 =每天一次給藥歷時三天。10 mL/kg之給藥體積係按個別動物之重量定標，且化合物A係作為5 mg/kg游離鹼等效物來給藥；n =針對每一群組評估的動物數量；TTE =至端點之時間；T-C =所治療群組相對於對照群組之中值TTE (天)之間的差異；%TGD = (T-C)/C x 100；最大可能TGD = 169天(650% TGD)。

如第31圖所示，對照小鼠中之七個腫瘤在25.8天與35.7天之間生長至2000 mm³ 端點。如在表23中所報告，對照小鼠之中值TTE為26天，其建立對此研究而言169天之最大可能TGD (650% TGD)。平均腫瘤生長快速地發展，如第30圖所示。

如在表28中所報告，在5 mg/kg下之化合物A單療法產生113天之中值TTE，其相應於87天或335% TGD。如第31圖所示，七個動物在91天與140天之間退出研究。如在第31圖中所注釋，對數秩檢驗發現當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p = 0.0001)。平均腫瘤進程最初不受限制至第8天，隨後減慢，之後在第28天之後變得幾乎靜態，如第30圖所示。

在24 mg/kg下之依託泊苷單療法產生50天之中值TTE，其相應於24天或92% TGD。七個測試動物中之腫瘤在45.5天與77.3天之間生長至端點。對數秩檢驗發現當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p = 0.0001)，且當相較於5 mg/kg化合物A單療法群組時顯著較少的效力(p = 0.0001)。平均腫瘤進程相較於在對照中所觀察到之彼者延遲。

在24 mg/kg下之依託泊苷繼之以在5 mg/kg下之化合物A產生139天之中值TTE，其相應於113天或435% TGD。七個動物在120天與195天之間退出研究。對數秩檢驗發現當相較於對照群組及依託泊苷單療法群組時總體存活之顯著差異(p = 0.0001)，但當相較於化合物A單療法群組時無差異(p = 0.1677)。平均腫瘤進程最初減慢，之後在第28天之後變得幾乎靜態。多重t檢驗發現：在每一時間點針對依託泊苷+化合物A組合療法相較於化合物A單療法之平均腫瘤體積差異對第8-113天而言為顯著的(p≤0.004)。

如第32圖所示，接收媒劑或依託泊苷單療法之群組展現平均體重增加，其中接收單獨化合物A或在依託泊苷後之群組對研究之約前100天而言經歷平均體重之很少至無改變。在化合物A單療法群組中，七個動物在91天與140天之間發現死亡或歸因於體重損失＞20%而安樂死，在依託泊苷繼之以化合物A群組中，六個動物在126天與195天之間發現死亡或歸因於體重損失而安樂死。

個別動物之檢查未能建立潛在排除惡病質之在腫瘤負荷與體重損失之間的關係。另外，未記錄與化合物A治療相關毒性(嗜睡、缺少食欲及瘀斑)一致之臨床觀察結果。基於此等觀察結果，化合物A在此研究中考慮為耐受性可接受的。

作為單療法或在利用24 mg/kg依託泊苷之初始三天治療之後的以5用/2停間斷時程在5 mg/kg下經口給藥之化合物A在雌性NOD scid γ (NOD scid gamma; NSG)小鼠中建立的NCI-H1417 SCLC異種移植模型中為有效的及耐受性可接受的。

在5 mg/kg下之經口化合物A產生113天之中值TTE，其相應於87天或335% TGD，且產生藉由對數秩檢驗當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p = 0.0001)。在24 mg/kg下之依託泊苷單療法產生50天之中值TTE，其相應於24天或92% TGD，且產生藉由對數秩檢驗當相較於對照群組時總體存活之顯著差異(p = 0.0001)。對數秩檢驗發現當相較於5 mg/kg化合物A單療法群組時針對依託泊苷單療法群組之顯著較少的效力(p = 0.0001)。依託泊苷繼之以在5 mg/kg下之化合物A產生139天之中值TTE，其相應於113天或435% TGD。對數秩檢驗發現當相較於對照群組及依託泊苷單療法群組時針對依託泊苷化合物A組合群組之總體存活之顯著差異(p = 0.0001)，但當相較於化合物A單療法群組時無差異(p = 0.1677)。在研究之過程中的平均腫瘤生長與TGD結果一致。對中值TTE、平均腫瘤生長及隨時間推移保留在研究中之動物之百分比的差異之評定發現：對單獨投與5 mg/kg化合物A或在依託泊苷之後投與之反應優越於所有其他治療方案。儘管接收5 mg/kg化合物A單療法之動物的總體存活相對於組合療法不為顯著不同的(p = 0.1677)，在第8-113天之平均腫瘤體積對接收依託泊苷隨後5 mg/kg化合物A之測試動物而言相較於接收單獨5 mg/kg化合物A之彼等測試動物為顯著較少的(p≤0.004)。

接收媒劑或依託泊苷單療法之動物展現平均體重增加，且由於該等動物之腫瘤獲得腫瘤體積端點而退出研究。接收單獨化合物A或在依託泊苷之後的動物對研究之約前100天而言經歷平均體重之很少至無改變。兩個群組中之動物在91天與195天之間發現死亡或歸因於體重損失＞20%而安樂死。個別動物之檢查未能建立潛在排除惡病質之在腫瘤負荷與體重損失之間的關係。另外，未記錄與化合物A治療相關毒性(嗜睡、缺少食欲及瘀斑)一致之臨床觀察結果。基於此等觀察結果，化合物A在此研究中考慮為耐受性可接受的。實例18. 化合物A增加前列腺癌細胞LNCaP對照射之敏感性

LNCaP細胞為雄性素敏感性人類前列腺腺癌細胞。在利用或不利用照射(2Gy)或LSD1抑制劑化合物A (100 nM)情況下，利用雄性素受體配位體二羥基睪固酮(DiHydroxyTestosterone; DHT；10nM)處理LNCap細胞。監視LNCap細胞之增殖達220小時。第33圖展示DHT、化合物A及照射之組合顯示相較於利用照射之DHT對LNCap細胞增殖之較好抑制。第34圖展示DHT、化合物A及照射之組合相較於DHT與照射組合或DHT與化合物A組合而顯著地抑制LNCaP細胞增殖。此等發現暗示：化合物A在雄性素受體配位體DHT之存在下有效，在2Gy照射之後減慢LNCaP細胞之增殖。實例19. 化合物A增強前列腺癌細胞LNCaP對雷帕黴素處理之敏感性。

LNCap細胞係利用僅100 nM雷帕黴素、單獨100 nM化合物A或100 nM雷帕黴素與100 nM化合物A之組合來處理。監視LNCap細胞之增殖達90小時。第35圖及第36圖展示雷帕黴素與化合物A之組合顯示相較於單獨雷帕黴素的對LNCap細胞增殖之較大抑制。此等資料暗示化合物A增強前列腺癌細胞LNCaP對雷帕黴素處理之敏感性。 III. 次要藥效學試驗實例1：化合物A在受體、離子通道、神經傳遞質轉運蛋白、激酶及非激酶式酶之活體外藥理學研究組中之效應

在一系列CEREP研究報告中，在10 μM下評定針對一組受體、離子通道、神經傳遞質轉運蛋白、激酶及非激酶式酶之配位體或底物結合的化合物A介導抑制。僅對蕈毒鹼M1受體(76%抑制)及Na+通道(位點2) (62%抑制)觀察到大於50%之抑制。針對化合物A對蕈毒鹼M1受體及Na+通道(位點2)測定之Ki值分別為1.6 μM及11 μM。此等所量測Ki值高於對LSD1觀察到之Ki超過10,000倍。此等資料證明：化合物A相較於140個所測試靶以高特異性結合至LSD1且化合物A為LSD1之選擇性抑制劑。 IV. 安全性藥理學實例1：化合物A對心血管及呼吸系統之活體外效應

評估化合物A對hERG鉀通道(IKr之代用品，其快速地活化延遲整流心臟鉀電流)之活體外效應。在穩定地表現hERG通道之人類胚腎細胞(HEK293)中在0.3、1、3及10 μM之濃度下測試化合物A。化合物A在0.3 μM下抑制hERG電流(平均值±均值標準誤差)達5.9±1.3% (n =3)、在1 μM下抑制達17.8±0.3% (n = 4)、在3 μM下抑制達47.0± 1.9% (n = 4)及在10 μM下抑制77.3± 0.2%(n = 3)。化合物A對hERG電流之抑制效應之IC50值係測定為3.4 μM(係數=1.2)。實例2：在雄性Dunkin Hartley天竺鼠中化合物A對血流力學及心電描記術參數之效應

在麻醉的雄性Dunkin Hartley天竺鼠中檢查化合物A對血流力學及ECG參數之效應。雄性天竺鼠經由10分鐘輸注至頸靜脈中IV投與單獨媒劑(在水中之10%二甲亞碸、30%聚乙二醇400；n = 4只動物)或化合物A (n = 4只動物，每一動物投與5、10、15及20 mg鹼/kg)。使用逐步升高劑量之設計，其中劑量係以20分鐘間隔順序地投與。在整個實驗中監視動物。

平均動脈壓(mean arterial pressure; MAP)及其分量趨向於在媒劑輸注期中減小。在監視期結束時，MAP相較於基線減小24%。利用單獨媒劑之輸注，亦在監視期結束時觀察到HR之23%減小及PR間隔之26%增加。

未觀察到投與化合物A相較於時間匹配媒劑而言之MAP或其分量的顯著效應。在20 mg鹼/kg下，化合物A引起HR之輕微減小，其中相較於媒劑，在9分鐘觀察到10分鐘輸注期的19%之最大抑制。在監視期結束時，心率保持減小18%。利用10、15及20 mg鹼/kg劑量之化合物A時觀察到QT及QTcB間隔之顯著劑量依賴性增加。利用分別在10、15及20 mg鹼/kg劑量之化合物A的情況下，相較於時間匹配媒劑觀察到在輸注起始之後10至18分鐘的大致9%、13%及16%之QTcB間隔的最大增加。在監視期結束時，QTcB間隔保持增加10%。在每一輸注(10分鐘)結束時，針對5、10、15及20 mg鹼/kg之平均血漿濃度分別為1166、2362、4269及6707 ng/mL。不存在對動脈壓、PR間隔、QRS持續時間或定性ECG參數之顯著的化合物A相關效應。基於此等結果，血流力學及ECG端點之NOAEL為在IV投與後10 mg鹼/kg。實例3：在犬中利用4週恢復期的4週經口胃管灌食法關鍵性毒性研究

以0.375、0.75及1.5 mg鹼/kg/劑量之劑量位準QW歷時至多4週；或0.375 mg鹼/kg/劑量之劑量位準BIW歷時至多4週將化合物A經由經口胃管灌食法投與至5組雄性及雌性純種米格魯犬(4或6只/性別/群組)。亦將媒劑對照動物(於逆滲透水中之0.5% w/v甲基纖維素) BIW給藥，且充當並行對照。在最後劑量之後，除0.375 mg鹼/kg/劑量群組外的所有群組中的兩個動物/性別/群組經計劃實現4週無治療恢復期。

每週經口投與化合物A導致在研究第13天與第23天之間11個動物之瀕死安樂死(1只雄性在0.375 mg鹼/kg/劑量下QW投與，2只雄性及1只雌性在0.75 mg鹼/kg/劑量下投與，且3只雄性及4只雌性在1.5 mg鹼/kg/劑量下投與)。此等動物之瀕死狀態係歸因於化合物A相關的胃黏膜潰爛和/或急性炎症。所有其他動物存活至其經計劃之驗屍。由於1.5 mg鹼/kg/劑量之嚴重毒性，此群組之給藥針對剩餘3只雄性及2只雌性在第15天中止；此等動物保持在研究中且在最後一次劑量之後經歷至少4週之恢復。

在給藥前期期間記錄一次心電圖，且針對在給藥期之第22天給藥的所有動物，在給藥前及給藥後大致3小時記錄心電圖。使用八隻引腳記錄心電圖，且在單一引腳上進行ECG之常規定量量測。使用Fridericia方法計算QTc間隔。執行針對所收集ECG之節律異常及擾動之定性複查。

在所評估之任何劑量位準下未發現節律或波形形態學中或HR、RR間隔、PR間隔、QRS持續時間、QT間隔或QTc間隔之化合物A相關異常(亦即，＜ 1.5 mg鹼/kg/劑量)。因此，CV及呼吸改變之NOEL為0.75 mg鹼/kg/劑量QW及0.375 mg鹼/kg/劑量BIW，所評估的具有CV及呼吸作用端點之最高劑量位準。在0.75 mg鹼/kg/劑量QW下之穩定狀態Cmax為36.2 ng/mL (雄性)及40.8 ng/mL (雌性)；且在0.375 mg鹼/kg/劑量BIW下之穩定狀態Cmax值為17.7 ng/mL (雄性)及19.0 ng/mL (雌性)。 V.非臨床藥物動力學及新陳代謝

進行活體外及活體內研究來特性化化合物A之吸收、PK、分佈、排泄及新陳代謝。化合物A為游離鹼之苄磺酸鹽且所有濃度及PK參數涉及游離鹼。研發用於測定化合物A游離鹼濃度之穩健及可再現生物分析方法且將其用於PK及TK研究。在小鼠、大鼠、犬及猴中評估化合物A之藥物動力學及經口生物可用性。使用異速生長定標來預測人類PK參數及暴露。小鼠及犬為用於非臨床毒物學評定之物種。進行活體外研究來評定化合物A吸收、新陳代謝、血漿蛋白質結合、CYP反應表型及用於CYP酶之抑制及誘導潛力。在大鼠中研究非放射性標記化合物A之排泄。實例1：吸收及藥物動力學

在IV及經口投與後在CD-1小鼠、史道二氏大鼠、米格魯犬及石蟹獼猴(報告QC6688-ADME-2004)中評估化合物A之PK。藉由具有質譜偵測之液相層析(LC-MS/MS)測定化合物A之血漿濃度。表29及表30中呈現在IV或經口投與化合物A後的平均PK參數。表29：對動物單一靜脈內劑量後的化合物A之平均血漿藥物動力學參數 AUC_last =自時間零點至最後可量測濃度的血漿濃度時間曲線下面積；AUC_∞ =自時間0外推至無限的血漿濃度時間曲線下面積；CL = 廓清率； hr =小時；PK =藥物動力學；SD =標準偏差；t_1/2,z =濃度時間曲線之最後階段之表觀半衰期；V_ss =穩定狀態下之分佈體積。^a 在小鼠中，自n = 3個動物/時間點獲得複合PK取樣。在其他物種中，PK參數來自n = 3個動物，且所展示之值為平均值加SD (以括號表示)。表30.對動物單一經口劑量後的化合物A之平均血漿藥物動力學參數 AUC_last =自時間零點至最後可量測濃度時間的血漿濃度時間曲線下面積；C_max =最大血漿濃度；F =經口生物可用性；hr =小時；PK =藥物動力學；SD =標準偏差；t_1/2,z =濃度時間曲線之最後階段之表觀半衰期；tmax = Cmax之時間。在小鼠中，使用自n = 3個動物/時間點獲得的複合血漿樣本來測定PK參數。在其他物種中，PK參數來自n = 3個動物，且所展示之值為平均值加SD (以括號表示)。

在IV給藥後，化合物A之全身廓清率在小鼠、犬及猴中為中度的(肝血流之大致30%至40%)且在大鼠中為高的(大於肝血流)。跨於物種的分佈體積在全身水體積之12倍至43倍範圍變化，此暗示向組織中之廣延分佈。在齧齒動物與非齧齒動物之間注意到迥異半衰期，其中在齧齒動物中值在2小時至4小時範圍變化，或在非齧齒動物中在12小時到20小時範圍變化。

化合物A在MDR1 (人類P-gp)-MDCK細胞中之滲透性在A→B方向中為0.5 x 10^-6 cm/s，且在B→A方向中為16.5 x 10^-6 cm/s，其中流出比率為33，其指示化合物A為P-gp底物。

在經口給藥後，化合物A在小鼠、大鼠、犬及猴中快速地及良好地吸收，其中達到峰值血漿濃度之中值時間(t_max )在給藥後0.5小時至6小時範圍變化，且經口生物可用性在齧齒動物中在28%至74%範圍變化，且在犬及猴中在82%至100%範圍變化。

歸因於小鼠與犬之間的迥異半衰期，在小鼠中之毒物學研究係在每天給藥後進行(每週5個連續給藥天歷時4週)，而在犬中之研究遵循QW、BIW或Q2W給藥方案歷時4週。在對小鼠施用多次經口劑量之化合物A後，全身暴露以大於劑量比例之方式自5 mg鹼/kg增加至15 mg鹼/kg，且以劑量比例方式自15 mg鹼/kg增加至45 mg鹼/kg (報告QC6688-TOX-3001)，而在犬中，化合物A暴露以劑量比例方式增加(報告QC6688-TOX-3002、報告-QC6688-TOX-3006)。在用於毒物學研究中之給藥時程中於重複投與後在任一物種中未觀察到累積，且在任一物種中未看到TK之性別差異。實例2：分佈

分佈體積在小鼠、大鼠、犬及猴中為極高的(全身水體積之大致12倍至43倍)，從而暗示化合物A在組織中之廣延分佈。化合物A高度地結合(人類血漿83%，且在動物血漿中83%至92%)至血漿蛋白質而無顯著的物種間差異。尚未評估化合物A於組織中之分佈及化合物A跨於胎盤障壁之輸送。實例3：新陳代謝

使用雄性小鼠、大鼠、犬及猴以及男女混合之人類之低溫保存原生肝細胞來評估化合物A之新陳代謝(報告QC6688-ADME-2006)。化合物A之新陳代謝穩定性在大鼠及犬中為較大的，繼之以在人類及猴中為較大的，而在小鼠中為穩定性最小的。在除了小鼠的所有所研究物種中鑑別單一代謝物(M1；氧化去胺基化代謝物)，且在人類肝細胞中形成的M1之定性位準與在犬肝細胞中形成的彼等者相當，該等物種之一用於臨床前安全性測試且指示人類肝細胞不形成任何獨特代謝物。

使用重組人類CYP酶之研究已證實：CYP3A4似乎主要負責化合物A之氧化新陳代謝，而次要貢獻者來自其他CYP酶(報告QC6688-ADME-2006)。在化合物A之新陳代謝中的非CYP酶之作用尚未確認。實例4：排泄

在膽管插套管之大鼠中，在非放射性標記化合物A之IV給藥後，劑量之平均26.3%(尿中為劑量之8.5%，且在膽汁中為劑量之17.8%)在給藥後的24小時時期中完好排泄，從而指示新陳代謝可在化合物A之清除方面起顯著作用，且完好化合物A之排泄並非清除之主要模式。尚未評估化合物A或其相關組分至乳液中之排泄。實例5：活體外藥物-藥物相互作用

使用經彙集之人類肝微粒體評估藉由化合物A對主要CYP同功異構酶(CYP 1A2、2C9、2C19、2D6及3A4)之細胞色素P450抑制潛力。化合物A (至多50 μM)對CYP 1A2、2C9及2D6具有很小直接抑制效應至不具有直接抑制效應，且展示對CYP2C19及CYP3A4之最小抑制，其中IC50值＞50 µM。因此，在臨床相關濃度下，歸因於CYP抑制而不預期化合物A引起任何藥物-藥物相互作用。

使用低溫保存人類肝細胞之培養物及在孵育至多3天后評估化合物A (0.03至10 µM)之細胞色素P450誘導潛力。測定誘導CYPs1A2、2B6及3A4之mRNA表現的能力(報告QC6688-ADME-2007)。化合物A不引起mRNA之增加(相較媒劑對照＜2倍)，其指示化合物A不是CYP1A2、2B6及3A4之誘導物。

總之，化合物A具有引起與為CYP底物之共同投與藥物的藥物-藥物相互作用之最小潛力。實例6. 化合物A預測之人類藥物動力學

在腫瘤學受試者中，基於動物模型中化合物A之PK參數並使用異速生長定標，預測化合物A具有中度廓清率(9.4 mL/min/kg)及高分佈體積(17.6 L/kg，為全身水體積之大致31倍)。使用異速生長導出之PK參數並假定80%經口生物可用性，在60 kg人類中QW投與1.25 mg經口劑量後化合物A之預測穩定狀態全身暴露(AUCt)為29 ng·hr/mL。 VI. 毒物學

在最多4週之小鼠及犬中進行一系列探察性及關鍵毒性研究及活體外遺傳毒性研究來特性化化合物A之毒性輪廓。使用經口路線來進行活體內研究，因為該經口路線為在臨床試驗中之所欲投與路線。在小鼠中使用以QDx5/週或QODx3/週給藥時程投與的化合物A，且在犬中使用以QW、BIW或Q2W給藥投與的化合物A進行關鍵毒性研究(4週經口重複劑量與4週恢復期；小鼠及犬)。根據針對非臨床實驗室研究之美國FDA GLP條例(21 CFR Part 58)之要求，GLP、ENV/MC/CHEM之OECD原理(98) 17 (1997年修訂，1998年1月發行)，及ICH S9準則, 2009來進行關鍵毒性研究。實例1：在小鼠中具有4週恢復期之4週毒性研究

藉由經口胃管灌食法以0、5、15及45 mg鹼/kg/劑量或25 mg鹼/kg/劑量之劑量位準向雄性及雌性Crl:CD1 (ICR)小鼠(10或15只/性別/群組)投與化合物A。一個給藥時程為QDx5/週歷時總共4週(5、15及45 mg鹼/kg/劑量之劑量位準)。在投與第四循環之最終劑量之後的一天將動物生命終結。另一組動物投與25 mg鹼/kg/劑量QODx3/週歷時總共4週，且在最終劑量之後的一天將動物生命終結。給藥係繼之以4週恢復期(5只/性別/群組，劑量位準為0、15、45或25 mg鹼/kg/劑量)。

用於TK評估之另外的動物(對照群組中6只/性別，且在測試物品群組中36只/性別/群組)係以與毒性動物相同的時程給藥歷時至多26天。

毒性之評定係基於死亡率、臨床觀察結果、體重、食物消耗、眼科評估以及臨床及解剖病理學。自TK動物收集血液樣本以用於TK評估。

早在給藥階段之第7天，歸因於化合物A相關毒性，投與45 mg鹼/kg/劑量之五個動物(4只雄性及1只雌性)在瀕死狀態下犧牲。此等動物全部為TK子群組動物。此等動物之臨床觀察結果包括：消瘦、共濟失調、隆起、活動減退、斜視眼睛、粗糙被毛、慘白耳朵/主體和/或豎毛。因為此等為TK子群組動物，所以其不是以組織學方式檢查的。在給藥階段之第20天犧牲一隻25 mg鹼/kg/劑量雌性，此係由於其右後腿之受限使用，此發現與受傷一致，且因此，此未經計劃之犧牲不視為化合物A相關的。在毒性子群組動物中不存在化合物A相關的未經計劃死亡。

不存在測試物品相關之眼科學效應。

下文提供所有其他測試物品相關之發現。化合物A相關之不利發現： • 在≥15 mg鹼/kg/劑量下之粗糙被毛、在≥25 mg鹼/kg/劑量下之豎毛及隆起外觀、在45 mg鹼/kg/劑量下之慘白耳朵/身體及消瘦外觀。 • 在45 mg鹼/kg/劑量下血小板及網狀紅血球計數之明顯減少。 • 在15及45 mg鹼/kg/劑量下，在胸骨之骨髓空間中的最小至顯著纖維化，其相關聯於受影響胸骨椎內之最小至中度減小的造血組織(細胞減少)。 • 在15及45 mg鹼/kg/劑量下，具有活化骨原細胞之骨膜、骨內膜及小梁片狀骨的最小至中度增加(骨肥厚)。 • 在≥15 mg鹼/kg/劑量下，在胸骨之骨髓中最小至中度的骨髓增生。 • 在45 mg鹼/kg/劑量下股骨骨髓中之中度纖維化(一隻雄性)。 • 在15 mg鹼/kg/劑量下之雄性、在25 mg鹼/kg/劑量下之雌性及在45 mg鹼/kg/劑量之雄性及雌性的脾中邊緣區淋巴細胞之最小至顯著耗盡。

因為在單一天發生的考慮為非不利的化合物A相關發現為自限制性的，不具有毒物學後果，具有小的量值，和/或不具有微觀關聯，該等發現由以下各項組成： • 在45 mg鹼/kg/劑量下的平均體重損失(在第27天，分別對雄性及雌性而言相較於對照低8.6%及12.6%)。 • 在≥5 mg鹼/kg/劑量下輕度至中度較低的紅血球量(RBC計數、血紅素及血球比容)。 • 在5及15 mg鹼/kg/劑量下輕度至中度較低的血小板及絕對網狀紅血球。 • 在投與≥15 mg鹼/kg/劑量之動物中最小至輕度較低的平均血球血紅素、平均血球血紅素濃度及絕對嗜中性球計數(亦在投與5 mg鹼/kg/劑量之雄性中如此)，及在投與15或25 mg鹼/kg/劑量之雄性及投與≥5 mg鹼/kg/劑量之雌性中最小的較高絕對單核細胞計數。 • 在25 mg鹼/kg/劑量下最小的較低總蛋白及在25或45 mg鹼/kg/劑量下最小的較低白蛋白。 • 在≥5 mg鹼/kg/劑量下，胸骨之骨髓中巨核細胞的最小或輕微增加(數量和/或大小)。 • 在≥15 mg鹼/kg/劑量下減小的貯精囊重量(無微觀關聯)。 • 在15及45 mg鹼/kg/劑量下減小的子宮重量(無微觀關聯)。 • 在15或45 mg鹼/kg/劑量下，僅在恢復犧牲時減小的睾丸重量(無微觀關聯)。 • 在脾中，在≥15 mg鹼/kg/劑量下及在5 mg鹼/kg/劑量下一隻雌性中增加的骨髓外造血(最小至顯著)；與在15或45 mg鹼/kg/劑量下之增加的絕對及相對脾重量關聯。

所有測試物品相關之發現證明在4週無治療期之後完成可逆性的傾向。

化合物A TK資料係概述於表31中。

對化合物A之暴露隨劑量位準自5至45 mg鹼/kg/劑量之增加而增加。Cmax及AUC0-24值之增加大體上以大於劑量比例方式自5至15 mg鹼/kg/劑量，且以大致劑量比例方式自15至45 mg鹼/kg/劑量。未觀察到平均化合物A Cmax及AUC0-24值之一致性別差異。在小鼠中在化合物A之多次給藥之後未觀察到化合物A之累積。

基於死亡率、毒性之臨床徵象、血液學及組織病理學發現，STD10在QDx5/週時程後為＞ 45 mg鹼/kg/劑量(分別相應於在雄性及雌性中2,620 ng/mL及29,000 ng·hr/mL與2,130 ng/mL及26,500 ng·hr/mL之平均穩定狀態Cmax及AUC0-24值)，且在QODx3每週時程後為＞ 25 mg鹼/kg/劑量(分別相應於在雄性及雌性中1,450 ng/mL及17,800 ng·hr/mL與1,740 ng/mL及17,500 ng·hr/mL之平均穩定狀態Cmax及AUC0-24值)。NOAEL在QDx5/週時程為5 mg鹼/kg/劑量(分別相應於在雄性及雌性中276 ng/mL及2,010 ng·hr/mL與276 ng/mL及2,410 ng·hr/mL之平均穩定狀態Cmax及AUC0-24值)。針對QODx3/週時程未鑑別NOAEL。表31. 在小鼠中經口給藥後化合物A毒物動力學參數之概述 AUC0-24=自時間零點至24小時的血漿濃度曲線下面積；Cmax =最大血漿濃度；F =雌性；hr =小時；M =雄性；QOD =每隔一天。a 投與25 mg鹼/kg/劑量之動物係以QODx3/週給藥。所有其他劑量群組係以每週5天用藥/2天停藥來給藥。在投與最終劑量之後的一天將動物生命終結。實例2：在犬中具有4週恢復期之4週毒性研究

在初始研究中，以0、0.375、0.75及1.5 mg鹼/kg/劑量之劑量位準QW歷時至多4週；或0.375 mg鹼/kg/劑量之劑量位準BIW歷時至多4週將化合物A經由經口胃管灌食法投與至5組雄性及雌性純種米格魯犬(4或6只/性別/群組)。在最後劑量之後，除0.375 mg鹼/kg/劑量QW群組外的所有群組中的2個動物/性別/群組經計劃實現4週無治療恢復期。

每週經口投與化合物A導致在研究第13天與第23天之間11個動物之瀕死安樂死(1只雄性在0.375 mg鹼/kg下QW投與，2只雄性及1只雌性在0.75 mg鹼/kg下投與，且3只雄性及4只雌性在1.5 mg鹼/kg下投與)。此等動物之瀕死狀態係歸因於化合物A相關的胃黏膜潰爛和/或急性炎症。由於1.5 mg鹼/kg/劑量群組之嚴重毒性，此群組之給藥針對存活的3只雄性及2只雌性在第15天(在計劃的第三次劑量之前)中止；此等動物保持在研究中且在最後一次劑量之後經歷至少4週之恢復。所有其他動物存活至其經計劃之驗屍。

在所有劑量位準及時程(亦即，≥0.375 mg鹼/kg/劑量，QW或BIW)下觀察到不利之發現。主要毒性由以下各項組成：黏膜潰爛、急性和/或炎症亞急性炎症及胃腸道組織之黏膜上皮萎縮。

在投與≥0.375 mg鹼/kg/劑量(QW或BIW)之動物中的以下改變係考慮為化合物A相關的，在以瀕死狀態犧牲之動物和/或存活至計劃驗屍的動物中被注意到，且考慮為不利的： • 活動減退、消瘦外觀、嘔吐物、紅色/黑色/液體/未成形/類黏蛋白糞便、脫水、體重損失、食物消耗減少、發熱和/或GI道不適之跡象。 • 以下的血液學發現：輕度至中度減小的紅血球量、輕度至顯著減小的血小板計數、顯著減小的網狀紅血球計數、輕度至中度減小的嗜酸性球計數、輕度至中度增加的絕對單核細胞及大的未污染細胞計數、中度至顯著減小的嗜中性球計數(投與1.5 mg鹼/kg/劑量之2只雌性)或輕度至中度增加的嗜中性球計數(投與≥0.375 mg鹼/kg/劑量之其他動物)。 • 以下臨床化學發現：輕度至中度減小的白蛋白及白蛋白:球蛋白比率、輕度減小的鈣、輕度至中度減小的無機磷、輕度至中度增加的膽固醇、最小至輕度增加的鹼性磷酸酶活性。 • 在胃中輕微至顯著的黏膜潰爛和/或中度的急性炎症。 • 空腸、回腸、盲腸、結腸和/或直腸中最小至顯著的急性或亞急性炎症及潰爛。 • 空腸和/或回腸中輕微至中度的黏膜上皮的萎縮。 • 食道之輕微潰爛(投與1.5 mg鹼/kg/劑量之1只雌性)。

在存活至其各別驗屍的投與≥0.375 mg鹼/kg/劑量(QW或BIW)之動物中注意到以下改變，且其係考慮為化合物A相關的，但不考慮為不利的，因為其具有低的量值和/或發生率，不存在後果，和/或不具有微觀關聯： • 以下血液學發現：最小至輕度減小的紅血球量(投與0.375 mg鹼/kg/劑量QW [僅雄性]或BIW之動物，投與0.75 mg鹼/kg/劑量之雌性，及投與1.5 mg鹼/kg/劑量之雄性)、輕度減小的絕對網狀紅血球計數(投與1.5 mg鹼/kg/劑量之雌性)、輕度至中度增加的血小板計數(投與0.375 mg鹼/kg/劑量QW或BIW之雄性及在投與1.5 mg鹼/kg/劑量之動物中)、輕度增加的白血球(white blood cell; WBC)、絕對嗜中性球及大的未污染細胞計數(投與1.5 mg鹼/kg/劑量之雄性)。 • 以下臨床化學發現：最小增加的球蛋白(投與0.375 mg鹼/kg/劑量BIW之動物、投與0.75 mg鹼/kg/劑量之雌性及投與1.5 mg鹼/kg/劑量之動物)、輕度增加的膽固醇(投與0.75 mg鹼/kg/劑量之雌性)、最小增加的鹼性磷酸酶活性(投與0.375 mg鹼/kg/劑量BIW或0.75 mg鹼/kg/劑量之雌性及投與1.5 mg鹼/kg/劑量之動物)、最小減小的鈣(投與1.5 mg鹼/kg/劑量之雄性)、輕度減小的無機磷(投與0.75 mg鹼/kg/劑量之雌性)。

瀕死安樂死之動物中的其他發現係歸因於發炎反應(脾中之骨髓外造血及胸骨骨髓中增加的骨髓球系細胞:紅血球系細胞比率)、GI道中繼發於黏膜潰爛之敗血症(多個淋巴結之炎症、SC浮腫或心臟或肝之急性炎症)和/或相關聯於瀕死狀態之應力(胸腺中淋巴細胞之耗盡)。

在≥0.375 mg鹼/kg/劑量下存活至其計劃驗屍的任何動物中不存在對平均體重、食物消耗、凝結、尿分析、心動電流描記法、眼科學、宏觀觀察結果或器官重量之化合物A相關效應。

所有上文發現證實：在4週無治療期後的完全恢復。

當每週給藥時，對化合物A之暴露在第1天以劑量依賴性方式自0.375至1.5 mg鹼/kg/劑量增加且在第22天自0.375至0.75 mg鹼/kg/劑量增加。在雄性與雌性之間的暴露為相當的，且未觀察到TK參數之一致差異。在犬中在化合物A之多次給藥之後未觀察到化合物A之累積。TK參數之概述係呈現於表32中。在第1天及第22天，投與0.375 mg鹼/kg/劑量QW之動物的濃度時間輪廓係類似於投與0.375 mg鹼/kg/劑量BIW之動物的彼等濃度時間輪廓。表32. 在具有4週恢復期之4週毒性研究中，在犬中經口給藥後針對化合物A之平均毒物動力學參數之概述 AUC0-168 =自時間零點至168小時之血漿濃度曲線下面積；AUC0-72 =自時間零點至72小時之血漿濃度曲線下面積；Cmax =最大血漿濃度；F =雌性；hr =小時；M =雄性；NC =未計算。^a 投與1.5 mg鹼/kg/劑量之動物接收兩次劑量且隨後在第15天開始恢復。因此，未獲得第22天之毒物動力學資料。^b 在此群組中將動物每週給藥兩次，此係相較於用於所有其他劑量群組之每週一次。

基於在≥0.375 mg鹼/kg/劑量之QW劑量下的毒性之臨床徵象、死亡率、對體重之不利效應、臨床病理學及組織病理學，未測定針對QW或BIW劑量時程之HNSTD及NOAEL (亦即，＜ 0.375 mg鹼/kg/劑量)。QW 0.375 mg鹼/kg/劑量相應於在給藥階段之第22天的21.9 ng/mL及384 ng·hr/mL (雄性)與15.5 ng/mL及269 ng·hr/mL (雌性)之各別平均Cmax及AUC0-168；BIW 0.375 mg鹼/kg/劑量相應於在給藥階段之第22天的17.7 ng/mL及307 ng·hr/mL (雄性)與19.0 ng/mL及296 ng·hr/mL (雌性)之各別平均Cmax及AUC0-72值。實例3. 在犬中4週毒性研究(無恢復期)

在第二犬研究中，以0、0.125或0.25 mg鹼/kg/劑量之劑量位準QW (總共5次劑量)或0.5 mg鹼/kg/劑量之劑量位準Q2W (總共3次劑量)歷時至少4週將化合物A經由經口胃管灌食法投與至4組雄性及雌性純種米格魯犬(4只/性別/群組) (報告QC6688-TOX-3006)。所有動物存活至終點犧牲。

在臨床觀察結果、體重參數、食物消耗、器官重量、凝結、臨床化學、尿分析參數或宏觀發現中不存在化合物A相關改變。

以下改變考慮為化合物A投與之結果： • 治療相關之不利發現： -回腸中中度的急性炎症及盲腸中顯著的急性炎症(投與0.25 mg鹼/kg/劑量QW之單一雌性) -盲腸中之最小急性炎症(投與0.5 mg鹼/kg/劑量Q2W之單一雄性) • 治療相關但歸因於低量值/嚴重性和/或無微觀關聯而不考慮為不利的： -絕對血小板計數之最小增加(0.5 mg鹼/kg/劑量Q2W投與) -絕對單核細胞計數之最小增加(0.25 mg鹼/kg/劑量QW投與之雌性) − 骨髓外造血之最小增加(投與0.5 mg鹼/kg/劑量Q2W之四個動物及投與0.25 mg鹼/kg/劑量QW之單一雌性) -胸骨及股骨之骨髓中骨髓球系細胞:紅血球系細胞比率之輕微增加(投與0.25 mg鹼/kg/劑量QW之單一雌性)。

TK參數之概述係呈現於表33中。表33. 在4週毒性研究(無恢復期)中，在犬中經口給藥後針對化合物A之平均毒物動力學參數之概述 AUC0-96=自時間零點至96小時的血漿濃度曲線下面積；Cmax =最大血漿濃度；F =雌性；hr =小時；M =雄性；Q2W =每兩週一次；QW =每週一次。 a 投與0.5 mg鹼/kg/劑量之動物係Q2W給藥4週(總計2次劑量)。其他群組係QW給藥。

對化合物A之暴露在第1天隨劑量位準自0.125至0.5 mg鹼/kg/劑量增加而增加，且平均Cmax及AUC0-96值之增加係大致成劑量比例的。在第15天，對化合物A之暴露隨劑量位準自0.125 mg鹼/kg/劑量QW至0.5 mg鹼/kg/劑量Q2W增加而增加，且增加係大致成劑量比例的。未觀察到平均Cmax及AUC0-96值之一致性別差異。在多劑量之後未觀察到化合物A之累積。

基於對在0.25 mg鹼/kg/劑量(QW投與)下之單一雌性及在0.5 mg鹼/kg/劑量(Q2W投與)下之單一雄性的不利微觀發現(回腸和/或盲腸之炎症)，QW投與NOAEL考慮為0.125 mg鹼/kg/劑量，其分別相應於5.26 ng/mL及127 ng·hr/mL之組合第15天平均Cmax及AUC值。未測定Q2W投與NOAEL (亦即，＜ 0.5 mg鹼/kg/劑量)。對於QW給藥，HNSTD為0.25 mg鹼/kg/劑量QW，其分別相應於11.0 ng/mL及287 ng·hr/mL之組合第15天平均Cmax及AUC值。對於Q2W投與，HNSTD為0.5 mg鹼/kg/劑量，其分別相應於22.0 ng/mL及636 ng·hr/mL之組合第15天平均Cmax及AUC值。實例4：活體外遺傳毒性

在存在及不存在S9外生性哺乳動物代謝活化系統的情況下，發現化合物A對在至多500 μg/mL之最大測試濃度的細菌回復突變分析(使用鼠傷寒沙氏桿菌TA98及TA100菌株)中之致突變性而言為陰性的。實例5. 在小鼠中之探察性毒性研究

此研究之目的係測定當以兩個不同劑量時程藉由經口胃管灌食法投與至雄性及雌性CD-1小鼠時的化合物A之可耐受性及TK。一個時程由5個連續給藥天、繼之以2天給藥假日、繼之以另外5天連續給藥(5天用藥/2天停藥)組成；另一時程由在第1、3、5、8、10及12天給藥(QODx3/週)組成。在投與最終劑量之後的一天犧牲動物。

以5天用藥/2天停藥時程在0、10、30或60 mg/kg/劑量下或以QOD時程在60 mg/kg/劑量下將化合物A投與至6只小鼠/性別/群組之群組。另外的動物包括來用於TK評估。

所有小鼠存活直至計劃犧牲，單一TK動物例外。胃管灌食法外傷係確認為TK動物之發病率之原因；因此，此早期死亡係考慮為不是化合物A相關的。

在5天用藥/2天停藥時程的所有劑量位準下注意到體重增加或體重損失之輕微、劑量依賴性減少。在60 mg/kg/劑量下，存在QOD時程相較於5天用藥/2天停藥時程之體重增加的較少嚴重減少。在此研究之過程中未注意到測試物品相關的臨床觀察結果。

在投與化合物A之雄性及雌性小鼠中注意到若干血液學參數之改變。

在研究結束時在所有劑量位準下小鼠中之循環血小板減少。在投與60 mg/kg/劑量QOD之小鼠中相較於60 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥而言效應稍微減少。在10 mg/kg/天5天用藥/2天停藥下，在第8天存在血小板之＞ 2倍增加(遵循2天給藥假日且相較於第一給藥期之結束)；到第二給藥期結束時，血小板位準類似於其他化合物A治療群組中之彼等位準。在研究結束時在所有劑量位準下，暗示再生血小板生成的平均血小板體積增加係通常伴隨血小板之減少，其中最大反應在60 mg/kg/劑量下。

紅血球參數(RBC計數、血球比容及血紅素)大體上在30及60 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥下減少。大體上在以5天用藥/2天停藥時程在所有劑量位準下注意到網狀紅血球計數及百分比之劑量依賴性減少。在60 mg/kg/劑量QOD下，對RBC和/或網狀紅血球參數之效應較不明顯。

在遵循5天用藥/2天停藥時程的所有化合物A治療群組中注意到嗜中性球計數之劑量依賴性減少，其中相較於並行對照及預研究值的最大減少為大致90%。在遵循QOD時程的60 mg/kg/劑量下，減少相較於並行對照而言在66% (雌性)至83% (雄性)範圍變化。

單核細胞在所有劑量位準下有所增加，其中最大效應在5天用藥/2天停藥的30及60 mg/kg/劑量下。儘管資料為高度可變的，但是嗜鹼性球計數呈現為在60 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥下的大多數小鼠中增加。

胸骨(骨及骨髓)、股骨(骨髓)及脾中存在化合物A相關微觀改變。

在遵循5天用藥/2天停藥時程投與化合物A的小鼠之胸骨骨髓中，在60 mg/kg/劑量下之小鼠及在30 mg/kg/劑量下之大多數小鼠中觀察到梗塞。在受感染動物之發生率中及受感染胸骨椎之數量方面存在劑量反應。受感染胸骨椎亦展現最小至輕度的骨膜構成骨形成。在給藥60 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥之1只雄性及2只雌性小鼠及給藥30 mg/kg/劑量之1只雄性小鼠之股骨中，在骨骺下骨幹中存在輕度骨髓纖維化。在脾中，在30或60 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥下，在紅髓內存在最小至中度的骨髓細胞生成增加，其與此等群組中之增加的脾重量(至多2倍)相關。在10 mg/kg/劑量下之1只雄性中注意到最小脾骨髓細胞生成。(在給藥60 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥之個體之胸腺皮質中，及在給藥30 mg/kg/劑量之單一雌性中，注意到輕度或中度的淋巴耗盡。)在臨時給藥60 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥之雄性的下頜骨及腸系膜淋巴結之胚濾泡中存在淋巴細胞凋亡之最小增加。胸腺及淋巴結中之改變係考慮為非特異性的，且與在受感染動物中之一般應力的反應一致。

總之，未觀察到TK中之一致性別差異。在雄性及雌性兩者中，在第1天及第12天，全身性暴露(AUC_0-24 及C_max )隨劑量自10至60 mg/kg/劑量而增加。在化合物A之重複給藥之後，未觀察到累積。在10 mg/kg/劑量(5天用藥/2天停藥)下之小鼠中注意到最小的化合物A相關效應，且大體上包括減少的重量增加、減少的循環血小板、嗜中性球減少症、網狀細胞減少及在單一雄性中之脾骨髓細胞生成之最小增加。以5天用藥/2天停藥給藥時程在30及60 mg/kg/劑量下之小鼠中的化合物A相關效應大體上包括體重損失、減少的循環血小板、減少的RBC參數(RBC、血球比容、血紅素、網狀紅血球)、嗜中性球減少症、單核球增多症及在胸骨(骨膜構成骨形成)、胸骨骨髓(梗塞)、股骨(骨髓纖維化)及脾(增加的骨髓細胞生成)中之微觀效應。60 mg/kg/劑量QOD導致減少的重量增加、減少的血小板及嗜中性球以及增加的單核細胞。此等效應之量值相較於以5天用藥/2天停藥時程之小鼠之彼者有所減少。實例6：在犬中之探察性毒性研究

此研究之目的係測定當遵循2個不同給藥時程藉由經口胃管灌食法投與至純種雄性及雌性米格魯犬時的化合物A之可耐受性及TK。所比較之時程由以下各項組成：在第1、3、5、8、10及12天給藥(QODx3/週)或5個連續給藥天、繼之以2天給藥假日、繼之以另外5天連續給藥(5天用藥/2天停藥) (報告SW14-1929)。在投與最終劑量之後的一天犧牲動物。

以0、0.25、0.5或1.0 mg/kg/劑量之劑量位準QOD或0.5 mg/kg/劑量之劑量位準5天用藥/2天停藥將化合物A投與至2只犬/性別/群組之群組。

給藥0.5 mg/kg/天5天用藥/2天停藥之一只雌性犬在第12天晚上歸因於不利之臨床徵象(嚴重活動減退、減少的呼吸率、觸摸時冰冷)、體重損失(10.8%)及減少的食物消耗而瀕死犧牲。微觀發現大體上與對顯著血小板減少症(對此犬在第9至12天注意到)之反應一致，且包括各種組織內之出血，該等組織包括腋窩、下頜骨及腸系膜淋巴結，胃之固有層，及膀胱之黏膜下層。另外，在此動物中存在肝細胞萎縮，此可能係繼發於厭食/重量損失。亦存在中度的胸腺淋巴耗盡，其與淋巴細胞減少症之血液學觀察結果相關，且可能係繼發於此動物中之一般應力。瀕死狀態係考慮為化合物A相關的。

所有其他犬存活直至第13天之計劃犧牲。在個別犬中，主要在0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥下，注意到化合物A相關重量損失。主要在所有劑量位準及時程下之雌性中注意到減少的食物消耗；食物消耗僅在投與0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥之一只雄性中在研究之最後兩天期間減少。

在以1 mg/kg/劑量QOD或0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥給藥的動物中大體在第11至13天注意到異常臨床觀察結果，且主要由嘴唇、齒齦、陰囊、腹部上及圍繞乳腺的瘀點或瘀斑出血(或瘀血)組成。

在約第5天在0.5 mg/kg/劑量(兩個時程)及1 mg/kg/劑量下觀察到減少的血小板計數；在此等劑量位準下，在大多數犬中計數在研究持續時間持續減少至低於25,000/μL(顯著血小板減少症)。在0.25 mg/kg/劑量下不存在血小板計數減少。在接近研究結束時，在給藥1 mg/kg/劑量QOD或0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥之一些動物中注意到輕微的RBC參數(RBC計數、血球比容及血紅素)減少。在接近研究結束時，白血球計數、主要為嗜中性球大體上在僅1 mg/kg/劑量QOD或0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥之雌性中減少。

儘管為稍微可變的，但亦注意到單核細胞、嗜鹼性球及嗜伊紅細胞之一些改變。單核細胞及嗜鹼性球大體上在1 mg/kg/劑量QOD或0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥減少，且在0.25及0.5 mg/kg/劑量QOD之個別犬中如此。在一些犬中，此效應在研究結束持續；然而，存在注意到反彈效應之若干犬，其中在第12及13天單核細胞計數顯著增加。嗜伊紅細胞資料在雌性中為高度可變的，且嗜酸性球計數之劑量依賴性減少大體上在研究之後半段期間在雄性中注意到。亦在投與0.5及1 mg/kg/劑量之大多數犬中觀察到減少的血清鉀、鈣及磷位準。

主要在0.5及1 mg/kg/劑量下存在化合物A相關的微觀發現。在雄性中與在雌性中相比，化合物A相關的微觀發現大體上發生在更多組織中或為更嚴重的。在1 mg/kg/劑量QOD或0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥下，發現存在於GI道(胃/回腸之出血和/或黏膜潰爛及盲腸中之亞急性炎症)、骨髓(減小的造血)和/或各種組織(結腸、下頜骨、腸系膜、頸、腹股溝和/或膕淋巴結、附睾、肝、睾丸、胸腺以及陰囊皮膚、胸腺縱隔周邊和/或乳腺[皮膚])中之經表現出血性改變。在0.5 mg/kg/劑量QOD下之一只雄性展示下頜骨及腸系膜淋巴結之出血跡象。在1 mg/kg/劑量QOD或0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥下注意到考慮為繼發於一般應力和/或厭食之發現，包括肝細胞萎縮、胰腺腺泡細胞萎縮及胸腺皮質淋巴耗盡(亦在0.5 mg/kg/劑量QOD下注意到)。

在第1天及第12天，暴露(AUC_0-24 及C_max )以劑量比例方式自0.25 mg/kg/劑量增加至1 mg/kg/劑量。在雄性與雌性之間的暴露為相當的，且未觀察到TK參數之一致性別差異。在重複給藥之後，當使用QOD時程時未注意到累積，而在QD X 5時程之後注意到大致2至3倍累積。在0.25 mg/kg/劑量QOD下之犬中大體上不存在化合物A相關效應。腸系膜及下頜淋巴結中之顯著血小板減少症及急性失血主要在0.5 mg/kg/劑量QOD下發現。在1 mg/kg/劑量QOD下，發現大體上由以下各項組成：顯著的血小板減少症、輕微的RBC參數減少、單核細胞及嗜鹼性球位準之變化及微觀發現，包括GI道中之出血和/或黏膜潰爛、骨髓中之減小的造血及許多組織(結腸、下頜骨、腸系膜、頸、腹股溝和/或膕淋巴結、附睾和睾丸、肝、胸腺、陰囊皮膚、胸腺縱隔周邊和/或乳腺[皮膚])中之出血性改變。在0.5 mg/kg/劑量5天用藥/2天停藥下，發現包括在1 mg/kg/劑量QOD下描述之彼等者，除外的是個體中之重量損失及在第12天一隻雌性之瀕死犧牲。 VII. 醫藥劑型之製備實例1：口服膠囊

化合物A膠囊可以適當強度及膠囊大小來獲得，其僅在不透明、硬殼膠囊中含有活性醫藥成分。在膠囊中不使用賦形劑。 VIII. 用於治療復發性和/或難治性實體腫瘤(包括神經內分泌癌(neuroendocrine carcinoma; NEC))及非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma; NHL)之方法實例1：患者投與

研究化合物A-ST-001為在患有復發性和/或難治性實體腫瘤(富集NEC)及非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma; NHL)之受試者中對化合物A之開放標記、1期、劑量增量及擴展、先在人類中(First-In-Human; FIH)之臨床研究。研究之劑量增量部分(部分A)將探察經口劑量逐漸增量之化合物A以估計化合物A之MTD。利用具有超劑量控制之增量(escalation with overdose control; EWOC)的貝氏邏輯迴歸模型(Bayesian logistic regression model; BLRM)將幫助指導化合物A劑量增量決定，其中藉由安全審查委員會(safety review committee; SRC)做出最後決定。擴展部分(部分B)將進一步評估以MTD或低於MTD投與的化合物A在大致20位可評估受試者之選定擴展小組各者中的安全性及效力，以便進一步定義RP2D。一或多個給藥方案和/或疾病子集可針對小組擴展來選擇(部分B)。

部分A及B將由3個時期組成：篩選、治療及追蹤。篩選期

篩選期在化合物A之第一劑量之前28天開始(±3天)。必須由受試者及投藥工作人員在任何其他研究程序之開始之前簽署知情同意書(informed consent document; ICD)並記錄日期。所有篩選測試及程序必須在化合物A之第一劑量之前28天(±3天)內完成。治療期

在治療期期間，化合物A可最初在各4週(28天)循環中每週經口投與一次。在部分A及B兩者中，每週一次在持續≥6小時之隔夜禁食之後，在早晨以至少240 mL之水空腹(亦即，早餐之前≥1小時)投與化合物A。追蹤期

在追蹤期中，將出於安全性在測試化合物或醫藥組成物之最後劑量之後追蹤受試者28天(±3天)。在安全性追蹤隨訪之後，針對存活追蹤直到2年或直至死亡、追蹤丟失或試驗結束(以先發生者為準)來在每後續的3個月(±2週)追蹤所有受試者。受試者標準

受試者必須滿足以下標準來登記進入研究： 1. 在簽署知情同意書(informed consent document; ICD)時，受試者為≥18歲之男人或女人。 2. 在進行任何研究相關評定或程序之前，受試者必須瞭解並自願簽署ICD。 3. 受試者願意並且能夠遵守研究隨訪時程及其他協定需求。 4. 受試者經組織學或細胞學確認患有晚期不可切除的實體腫瘤(包括小細胞肺癌(small cell lung cancer; SCLC)及其他神經內分泌癌(neuroendocrine carcinomas; NEC))或非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma; NHL) (瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma; DLBCL)及無痛非霍奇金氏淋巴瘤(indolent Non-Hodgkin’s lymphoma; iNHL))。 -根據世界衛生組織(World Health organization; WHO)分類的適當病理特徵 -神經內分泌標誌物之表現(例如，突觸素或染色顆粒素A) -血清促胃泌素釋放肽(Pro-gastrin releasing peptide; Pro-GRP)或染色顆粒素A (chromogranin A; CgA)高於正常範圍或甲狀腺髓質癌(medullary thyroid carcinoma; MTC)受試者之升高降血鈣素或胰腺或小腸NEC受試者之升高的胰抑素。針對某些NEC腫瘤類型之特定的另外標準如下：小細胞肺癌(Small Cell Lung Cancer; SCLC)； -根據2015 WHO分類對SCLC之組織學或細胞學確認；或 -暗示以下各項之免疫組織化學：SCLC (諸如AE1/AE3陽性細胞質染色)、NCAM (CD56)確實性、染色顆粒素確實性、突觸素確實性、TTF1確實性及高的增殖活性，如藉由在不確定病例中之Ki-67所證明。允許組合的SCLC。大細胞神經內分泌癌(Large Cell Neuroendocrine Carcinoma; LCNEC)； -根據2015 WHO分類對LCNEC之組織學確認 -免疫組織化學＞ 10%之腫瘤細胞對CD56、染色顆粒素或突觸素為陽性。允許組合的LCNEC。 EGFR突變體肺癌之神經內分泌變異體； -已知的EGFR突變 -在先表皮生長因子(epidermal growth Factor; EGFR)抑制劑時/之後的進程 -根據2015 WHO分類對SCLC之組織學或細胞學確認； -暗示以下各項之免疫組織化學：SCLC (諸如AE1/AE3陽性細胞質染色)、NCAM (CD56)確實性、染色顆粒素確實性、突觸素確實性、TTF1確實性及高的增殖活性，如藉由在不確定病例中之Ki-67所證明。 -患有混合腺神經內分泌癌(mixed adenoneuroendocrine carcinoma; MANEC)之受試者，其至少30%腺癌及30% NEC，若血清Pro-GRP或CgA高於正常範圍，則為合格。甲狀腺髓質癌(Medullary Thyroid Carcinoma; MTC)； -不可切除、局部晚期或轉移遺傳性或散發性MTC之先前確認的細胞學或組織學診斷 -暗示包括針對降血鈣素之陽性染色的免疫化學 -利用凡德他尼和/或卡博替尼之在先療法之後的經記載疾病進程 -在基線時之鈣化病灶不應用作在基線時之靶病灶，除非沒有可獲得的其他病灶。 -降血鈣素位準高於正常範圍神經內分泌前列腺癌(Neuroendocrine Prostate Cancer; NEPC)； -轉移性前列腺癌及對小細胞或神經內分泌前列腺癌之組織學診斷之至少一者，其藉由免疫化學支援。 -對前列腺腺癌加針對神經內分泌標誌物(染色顆粒素、突觸素、CD56或神經元特異性烯醇酶(neuron-specific enolase; NSE))之＞ 50% IHC染色的組織學診斷 -在不存在如PCWG3定義的前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen; PSA)進程下之肝轉移之發展 -具有純神經內分泌癌或小細胞癌之組織學跡象的患者不需要接收在先雄性素剝奪療法或閹割位準之睪固酮，但其睪固酮狀態應維持達研究之持續時間。其他受試者必須經歷外科或進行中之醫學閹割且具有＜50 ng/dL或＜1.73 nmol/L之基線血清睪固酮位準。神經內分泌胰腺癌； -神經內分泌胰腺癌之病理學診斷(Klimstra WHO分類2010)，有支援性免疫化學 -在循環1第1天之前≤12個月的放射性疾病進程之跡象 -在循環1第1天之前≤3個月無受體靶向之放射性標記療法 -在循環1第1天之前≤4週無導向肝之療法 -若血清Pro-GRP或CgA或胰抑素高於正常範圍，則患有混合腺癌之受試者為合格。神經內分泌肝細胞癌瘤(Neuroendocrine Hepatocellular Carcinoma; NEHCC) -組織學或細胞學確認的NEHCC，有支援性免疫化學 -若受試者具有門靜脈高血壓，則血小板計數≥75×10⁹ /L (≥75,000/mm³ )，否則≥100 x 10⁹ /L (≥100,000/mm³ ) -Child-Pugh記分＜ 7 (亦即，A類肝功能) -BCLC C晚期疾病 -自α-干擾素和/或利巴韋林之最後劑量至少4週 -在先經皮乙醇注射、射頻燒蝕、透過動脈栓塞術或冷療法之前至少4週，其中文件記載有進行性或複現疾病。 -肝外部根據RECIST 1.1之可量測疾病或在三相對比增強肝電腦斷層攝影(computed tomography; CT)或磁振造影(Magnetic resonance imaging; MRI)時根據RECIST 1.1之可量測疾病，該電腦斷層攝影及磁振造影適用於重複量測且展示腫瘤內動脈增強。在肝中展示非典型增強之不良區劃病灶應記錄為非靶向病灶。 -無在先肝移植。 -在需要轉輸或內窺鏡或手術介入的先前3個月中無胃腸或脈管曲張流血。 -無腦病變病史或當前無腦病變。 -當前無臨床上之顯著腹水(亦即，不易受利尿劑控制)。可登記諸如merkel氏細胞癌、神經內分泌結腸直腸癌及神經內分泌黑素瘤之其他NEC。若患者在利用體抑素類似物及雷帕黴素(mTOR)抑制劑之在先哺乳動物標靶兩者之在先治療時或之後已記載進程，則可登記另外NEN G2 (根據10個高倍視野(high power field; HPF)之有絲分裂計數2-20個和/或3-20% Ki67指數)。然而，病理學及免疫化學必須確認神經內分泌元素及病理學診斷，且受試者必須具有高於正常範圍之血清促胃泌素釋放肽(Pro-GRP)或染色顆粒素A (CgA)。 5. 受試者必須在標準抗癌劑療法時(或不能為耐受，此歸因於醫學共病或不可接受毒性)或之後已有疾病進程，或針對該等受試者，無其他經批准習知療法存在或為可接受的。 6. 患有實體腫瘤之受試者具有根據RECIST 1.1之可量測疾病之至少一個位點，患有NHL之受試者具有根據IWG標準之可量測疾病之至少一個位點，及患有神經內分泌肝細胞癌瘤(neuroendocrine hepatocellular carcinoma; NEHCC)之受試者具有根據mRECIST之可量測疾病之至少一個位點。 7. 受試者答應在部分B中之腫瘤活組織檢驗(篩選及治療時)。每當安全及可行時，腫瘤活組織檢驗將在部分A中收集。 8. 受試者具有0至1之東岸癌症臨床研究合作組織(Eastern Cooperative Oncology Group; ECOG)表現狀態。 9. 受試者必須具有以下實驗室值： -絕對嗜中性球計數(absolute neutrophil count; ANC)≥1.5 x 10⁹ /L，無生長因子支援達7天(若受試者接收pegfilgastrim，則14天)。 -血紅素(Hgb)≥10 g/dL (≥100 g/L或＞ 6.2 mmol/L)。 -血小板計數(plt)≥100 x 10⁹ /L (針對NHL受試者，≥50 x 10⁹ /L)或針對患有門靜脈高血壓而無轉輸達7天之NEHCC受試者，≥75 x 10⁹ /L。 -血清鉀濃度在正常範圍內，或可利用補充來校正。 -若存在肝轉移，則血清天門冬胺酸轉胺酶(Serum Aspartate aminotransferase; SGOT) AST/SGOT及丙胺酸轉胺酶(Serum Alanine aminotransferase; SGPT) ALT/SGPT≤3.0 x正常值上限(Upper Limit of Normal; ULN)或≤5.0 x ULN。 -血清總膽紅素≤1.5 x ULN。 -受試者必須具有≥3.5 g/dL之血清白蛋白患有肝細胞癌瘤(hepatocellular carcinoma; HCC)之受試者的足夠肝功能包括： -血清AST及ALT≤5 x ULN -血清總膽紅素≤3 mg/dL (≤51 μmol/L) -血清白蛋白≥3.0 g/dL -血清肌酸酐≤1.5 x ULN或所量測肌酸酐廓清率≥50 mL/min/1.73m2，使用外生性過濾標誌物，諸如碘苯六醇、菊糖、51Cr EDTA或125i碘肽酸鹽。 -凝血酶原時間(prothrombin time; PT) (或國際正規化比率(international normalized ratio; INR))及活化部分血栓形成素時間(activated partial thromboplastin time; APTT)在正常範圍內。 10. 具有生育潛力之女性(females of childbearing potential; FCBP) 1必須： -承諾與異性聯絡人之真實禁欲(必須以每月方式審查且記載為源文件)或同意使用並能夠遵照至少兩種有效避孕方法(口服、可注射或植入式激素避孕劑；輸卵管結紮；子宮內裝置；利用殺精子劑之阻隔避孕劑；或切除輸精管的伴侶)，其中之一必須為阻隔，自簽署ICD起貫穿研究且歷時測試化合物或醫藥組成物之最後劑量之後的至多90天；且具有兩次陰性妊娠試驗，如在開始測試化合物或醫藥組成物之前藉由研究員驗證： -在篩選時之陰性血清妊娠試驗(至少25 mIU/mL之敏感性) -在研究治療之循環1第1天之前72小時內的陰性血清或尿妊娠試驗。 -在測試化合物或醫藥組成物之最後劑量之後90天避免懷孕。 -同意在研究過程中及在研究治療結束之後進行中的妊娠試驗。即使受試者與異性聯絡人實踐真實禁欲，此同樣適用。 11. 男性必須實踐真實禁欲(必須以每月方式審查)或同意在與懷孕女性或FCBP之性接觸期間使用避孕套(推薦乳膠避孕套)，且自簽署ICD起，在參與研究同時，在劑量中斷期間且在投與測試化合物或醫藥組成物之中斷之後至少90天避免懷孕，即使他已經歷成功的輸精管切除術亦如此

排除標準：任何以下項之存在將使受試者自登記排除： 1. 排除低級(G1)神經內分泌腫瘤(根據高倍視野(high power field; HPF)≤2和/或≤2% Ki67指數)，諸如類癌。 2. 在簽署ICD之前，受試者已接收抗癌療法(經批准或研究的)≤4週或5個半衰期，以較短者為準。 -在先硝基脲或絲裂黴素C ＜ 42天 3. 由在先全身性癌症療法引起的毒性必須在開始利用測試化合物或醫藥組成物之治療之前已解析至≤國家癌症學會(National Cancer Institute; NCI)針對不利事件之通用術語標準(Common Terminology Criteria for Adverse Event; CTCAE)1級 (例外的是2級周邊神經病變及脫髮)。 4. 第一劑量之前的在先ASCT≤3個月或尚未恢復的彼等患者。 5. 具有標準強度或強度減少調節的在先同種異體幹細胞移植。 6. 受試者在前述ICD之前經歷大手術≤4週或小手術≤2週或尚未自手術恢復的受試者。 7. 受試者在簽署ICD之前已完成任何放射治療＜ 4週或＜ 2週的緩解性骨放射療法(簡分數)。對本研究不允許登記利用＞ 25%之骨髓形成BM放射之受試者。 8. 受試者患有≥NCI CTCAE 2級的歸因於吸收不良型症候群(諸如腹腔口瘡或炎性腸病)之持續腹瀉，儘管有醫學管理仍如此，或任何其他顯著的GI病症，其可影響測試化合物或醫藥組成物之吸收。 9. 具有症狀性或不受控制的潰瘍(胃或十二指腸)之受試者，尤其是具有穿孔及GI道出血病史和/或風險之彼等受試者。 10. 受試者在第一劑量之前的4週內具有任何出血/流血事件＞ CTCAE 2級或咯血＞ 1茶匙 11. 症狀性或未治療或非穩定中樞神經系統(central nervous system; CNS)轉移。 -最近利用針對CNS轉移之整體腦放射或立體定位放射手術治療的受試者必須在循環1第1天之前至少4週已完成療法，且具有追蹤腦CT或MRI，證明在完成放射療法之後穩定或改善轉移4或更多週(後者係作為篩選評定之部分來獲得)。 -受試者必須無症狀且不用類固醇或使用穩定劑量之類固醇達至少4週(≤10 mg/天普賴松等效物) 12. 患有SCLC之受試者具有間質性肺病(interstitial lung disease; ILD)之病史或需要口服或靜脈內(Intra Venous; IV)類固醇之肺炎病史 13. 受試者患有已知的症狀性急性或慢性胰腺炎。 14. 受試者患有受損的心臟功能或臨床上顯著的心臟疾病，包括任何以下項： -如藉由多重閘控截獲掃描(multiple gated acquisition scan; MUGA)或超音波心電圖 (echocardiogram; ECHO)所測定，左心室射出分率(left ventricular ejection fraction; LVEF) ＜ 45%。 -完全的左束支或雙支阻斷。 -先天性長QT症候群。 -持續或臨床上有意義的室性心律不整或心房震顫。 -在篩選ECG時QTcF≥480 msec (三次重複記錄之平均值)。 -在開始化合物A之前不穩定心絞痛或心肌梗塞≤6個月。 15. 受試者患有其他臨床上顯著的心臟病，諸如需要治療之充血性心力衰竭或不受控制的高血壓(血壓≥160/95 mm Hg)。 16. 受試者為懷孕或餵奶女性。 17. 受試者患有已知的人類免疫缺乏病毒(Human immunodeficiency virus; HIV)感染。 18. 受試者患有已知的慢性活動性肝炎B或C病毒(HBV、HCV)感染。 -歸因於HBV疫苗接種為血清陽性的受試者為合格。 -不具有活動性病毒感染且處於針對HBV重新活動之足夠預防之下的受試者為合格。 -患有HCC之受試者自上文標準豁免 19. 正在進行利用抗凝結劑(例如，殺鼠靈、低分子量肝素、因子Xa抑制劑、凝血酶拮抗劑)之長期、治療性給藥來治療的受試者。在研究員的謹慎考慮下允許對患有在先PE及DVT之受試者的用於導管維持及短期預防之低劑量低分子量肝素。 20. 受試者具有需要主動、進行中全身性治療之並行第二癌症之病史。 21. 受試者患有任何顯著的醫學病狀(例如，活動性或不受控制的感染或腎病)、實驗室異常或精神病學疾患，其將阻止受試者參與研究(或有損符合性)，或若受試者參與研究，則會將他/她置於不可接受的風險下。 22. 受試者患有使解釋來自研究之資料的能力受挫的任何病狀。部分A-劑量增量

最少3位受試者將在每一劑量位準下登記。初始化合物A劑量將為每週一次1.25 mg。具有EWOC之BLRM將合併可獲得的事前安全性資訊，並且在受試者完整循環1之每一新小組之後更新模型參數。對下一劑量之決定將藉由SRC，基於使用BLRM及可獲得的安全性(例如，DLT及非DLT安全性資料)、PK、PD及初步效力資訊之風險評定之計算來做出。另外，可在評定中利用相關非臨床資料(例如，GLP (優良實驗室操作)毒性研究、來自異種移植模型之活體內藥理學等等)。統計方法論之細節提供於附錄E中。

在所有決定時間點，BLRM允許基於所觀察到的DLT而變更劑量增量；然而對下一小組之劑量將不超過自在先劑量之100%增加。MTD為最高劑量，針對該最高劑量，利用化合物A治療的群體(非來自群體之樣本)中小於33%在第一循環中遭受DLT，其中至少6位可評估受試者已在此劑量下治療。SRC將關於用於每一小組之化合物A劑量而做出最後決定。

在劑量增量期間，在滿足以下條件之後可將化合物A劑量宣告為MTD： • 至少6位可評估受試者已在該劑量下治療， • 在該劑量下DLT率位於靶間隔(16-33%)中之事後機率超過60%，或在事後機率接近但未能超過60%時，足夠數量之受試者已進入研究來確保MTD估計之精度，及 • 根據BLRM來推薦劑量且由SRC批准。

劑量增量可藉由SRC在任何時間基於出現安全性問題而未建立MTD來終止。SRC將包括研究員(和/或指定代表)、贊助商之研究醫師、安全性醫師、研究統計學家及研究管理員。特別參加者可包括研究藥物動力學者、研究生物標誌物科學家及研究臨床科學家。其他內部和外部專家可藉由SRC按需要會診。

在SRC會議做出的所有決定將被正式記載(經由SRC會議記錄)且以書面形式循環送至所有場所。在書面通知被發送至各別SRC決定之所有參與場所之前，將開始對現存劑量小組之無劑量增量、去劑量增量、給藥時程改變或擴展。

亦將藉由SRC，基於BLRM評定及其對可獲得安全性(亦即，DLT及非DLT資料)、PK、PD及初步效力資訊之審查來判定對評估劑量小組內之另外受試者、較高劑量小組、中間劑量小組、較小劑量增量、替代給藥時程(例如，每隔一週一次)或宣稱MTD之決定。最後決定將藉由SRC做出。

在劑量增量期間在任何小組中投與第一劑量之後，觀察每一小組中之受試者28天(循環1，DLT窗口)，之後可開始下一劑量小組。每天不超過一位受試者將登記進入給定劑量增量小組。可評估DLT之受試者定義為以下受試者： • 在循環1期間已接收≥75%之化合物A總計劃劑量之量而不經歷DLT，或 • 在接收化合物A之至少一個劑量之後經歷DLT。

將替換不可評估DLT之受試者。

在初始劑量位準期間，登記患有復發性及難治性實體腫瘤及NHL之受試者直至循環1中≥2級的研究藥物相關毒性之第二次出現。隨後登記將局限於患有小細胞肺癌(small cell lung cancer; SCLC)及其他神經內分泌癌(neuroendocrine carcinomas; NEC)之受試者，其分泌促胃泌素釋放肽(Pro-gastrin releasing peptide; Pro-GRP)或染色顆粒素A (Chromogranin A; CgA)或胰抑素(針對胰腺及小腸NEC)或降血鈣素(針對甲狀腺髓質癌(medullary thyroid carcinoma; MTC))。

在DLT評定期期間不允許受試者內劑量增量；然而，在循環≥3中，耐受其經指派劑量之化合物A的沒有疾病進程跡象之受試者可(在研究員之裁量下且與贊助商之研究醫師會診並經其同意)逐漸增量至經證實藉由在此研究中至少一個小組之受試者足夠耐受的最高劑量位準(亦即，基於BLRM評定，超劑量風險小於25%)。部分B-小組擴展

在劑量增量(部分A)完成之後，可將選定腫瘤小組登記至各自具有大致20位可評估受試者之擴展階段(部分B)中。擴展可在劑量增量階段建立的MTD及時程下發生，和/或在替代可耐受劑量及時程下發生，此基於對來自部分A之可獲得安全性、PK、PD及效力資料的審查。SRC將針對小組擴展選擇受關注之劑量及時程。可針對小組擴展選擇一或多個給藥方案。SRC將持續在整個研究中定期審查安全性資料，且適當時關於研究持續及劑量修改做出推薦。

研究將遵照國際協調會議(International Conference on Harmonisation; ICH)/優良臨床試驗規範(Good Clinical Practice; GCP)來進行。研究群體

將患有復發性和/或難治性實體腫瘤(富集NEC)及NHL (DLBCL及iNHL)之18歲或更大的男人及女人登記進入研究。研究之長度

預期登記耗費大致30個月來完成(12至18個月用於劑量增量，而9至12個月用於擴展)。預期積極治療及治療後追蹤之完成耗費另外4至28個月。整個研究預期持續大致5年。

試驗結束係定義為最後一次隨訪最後一位受試者以完成治療後追蹤之日期，或接收到來自需要主要、次要和/或探察性分析的最後一位受試者的最後資料點的日期，如在協定中預先指定的，以較晚日期為準。研究治療

Celgene Corporation (Celgene)將供應研究產品，用於經口投與之化合物A (僅含有在0.50 mg、0.75 mg及2.00 mg之劑量強度下的活性醫藥成分)膠囊，其根據相關國家衛生主管機關之規章來適當標記以用於研究用途。

若存在臨床上顯著疾病進程、不可接受的毒性之跡象或受試者/醫師之撤回決定，則可中斷研究治療。關鍵效力評定之概述

在每2個循環之後針對效力評估受試者至循環6，且隨後在循環6之後每3個循環評估受試者。由於除了疾病進程之外的原因而中斷治療之所有受試者開始新的抗癌劑療法，或遵照來自整個研究之撤回同意直至進程和/或新的全身性抗癌劑療法之起始。

腫瘤反應將藉由研究員判定。針對實體腫瘤，評定將基於實體腫瘤之反應評估標準(RECIST 1.1) (Eisenhauer, 2009)。針對NHL，評定將基於針對惡性淋巴瘤之國際工作組修訂的反應標準。[需要[18F]氟去氧葡萄糖(fluorodeoxyglucose; FDG)正子斷層造影術 (positron emission tomography; PET)或FDG PET/CT成像來確認患有FDG活性腫瘤之受試者的完全反應。對於神經內分泌前列腺的癌(neuroendocrine prostate carcinoma; NEPC)，反應評定將基於PCWG3標準。對於神經內分泌肝細胞癌(neuroendocrine hepatocellular carcinoma; NEHCC)，反應將基於mRECIST標準。神經內分泌癌將另外具有在基線及在研究時評定的神經內分泌標誌物位準。關鍵安全性評定之概述

此研究之安全性變數包括不利事件、安全性臨床實驗室變數、12引腳心電圖、東岸癌症臨床研究合作組織表現狀態、左心室射出分率評定、身體檢查、生命體徵、對研究治療之暴露、伴隨藥物之評定及用於具有生育潛力之女性的妊娠測試。化合物A之PK輪廓將自連續血液收集測定。關鍵藥物動力學評定之概述

針對化合物A測定的血漿PK參數將為最大觀察血漿濃度(C_max )、血漿濃度時間曲線下面積(AUC)、至最大血漿濃度之時間(T_max )、終點半衰期(t_1/2 )、表觀廓清率(CL/F)及表觀分佈體積(Vz/F)。暴露反應分析可在適當時進行來輔助鑑別用於部分B或2期研究之給藥方案。統計方法

此研究之主要目標將為評估利用化合物A治療之安全性及可耐受性，包括MTD之測定。用於估計MTD之分析方法為藉由EWOC原理指導的BLRM。

統計分析將按需要或按可應用的藉由劑量位準(部分A)及腫瘤小組(部分B)來執行。所有分析將在本質上為描述性的。安全性資料之所有概述將使用接收任何化合物A之受試者(治療群體)來進行。

研究資料將針對素因、人口統計及基線特性、暴露、效力、安全性、PK及PD來概述。類別資料將藉由頻率分佈(受試者之數量及百分比)來概述，且連續資料將藉由描述統計學(平均值、標準偏差、中值、最小值及最大值)來概述。

治療緊急不利事件(treatment-emergent adverse event; TEAE)將藉由針對不利事件等級之國家癌症研究院通用術語標準來概述。TEAE之頻率將藉由針對管制活動系統的器官類別及較佳項之醫學詞典來製表。將分別對3級或4級TEAE、導致化合物A之中斷的TEAE、研究藥物相關TEAE及SAE製表。將概述自選定實驗室分析物、生命體徵、12引腳ECG及ECHO/MUGA掃描之基線的改變。所有資料將在以受試者為變數之清單中存在。

針對部分A的主要效力變數為臨床受益率(clinical benefit rate; CBR)。CBR係定義為對完全反應(complete response; CR)、部分反應(partial response; PR)及持久穩定疾病(stable disease; SD) (SD為≥4個月持續時間)之腫瘤反應(如藉由研究員所評定)。將報告CBR之點估計值及95%信賴區間。將使用針對類別變數之頻數製表或針對事件時間變數之描述統計學來概述目標反應率(定義為最佳反應為完全反應或部分反應之受試者之百分比)、反應/穩定疾病之持續時間、進程時間、無進程存活及總體存活。效力分析將針對治療群體及效力可評估群體(接收基線疾病評定評估之受試者，在循環1中至少75%之指派劑量，且一位處於研究疾病評定評估中)來重複，其中使用治療群體之結果考慮為主要的。

在部分A劑量增量期間，將登記大致50位受試者。在部分B劑量擴展期間，將最初應計至少14位效力可評估受試者以用於每一腫瘤小組。若觀察到4個月或較長的反應者或SD，則腫瘤小組將擴展至大致20位受試者。研究目標主要目標研究之主要目標： • 判定化合物A之安全性及可耐受性。 • 定義化合物A之最大耐受劑量(maximum tolerated dose; MTD)和/或推薦2期劑量(recommended Phase 2 dose; RP2D)。次要目標次要目標為 • 提供關於化合物A之初步效力的資訊。 • 特性化化合物A之藥物動力學(pharmacokinetic; PK)。探察性目標探察性目標為： • 評估化合物A對周邊血液及若可獲得的話腫瘤樣本中之基因表現的PD效應。 • 評估化合物A對來自NEC及SCLC受試者之血清中的分泌神經肽(諸如Pro-GRP、CgA或降血鈣素)位準之PD效應。 • 探察化合物A劑量、血漿暴露及選定臨床端點(例如，毒性、初步活性和/或生物標誌物之量度)間的關係。 • 探察基線、治療時和/或腫瘤樣本(若可獲得)中基因表現之改變與臨床反應之間的關係。 • 特性化血漿中化合物A之主代謝物，前提是可獲得足夠資料。 • 來自探察性目標之資料可包括在根據SAP(統計分析計劃)之臨床研究報告中。研究端點研究設計

研究化合物A-ST-001為在患有復發性和/或難治性實體腫瘤(包括NEC)及NHL之受試者中對化合物A之開放標記、1a期、劑量增量及擴展、FIH臨床研究。研究之劑量增量部分(部分A)將探察經口劑量逐漸增量之化合物A以估計化合物A之MTD。利用具有超劑量對照之增量(escalation with overdose control; EWOC)的貝氏邏輯迴歸模型(Bayesian logistic regression model; BLRM) (Babb, 1998; Neuenschwander, 2008)將幫助指導化合物A劑量增量決定，其中藉由SRC做出最後決定。擴展部分(部分B)將進一步評估以MTD或低於MTD投與的化合物A在大致20位可評估受試者之選定擴展小組各者中的安全性及效力，以便進一步定義RP2D。一或多個給藥方案和/或疾病子集可針對小組擴展來選擇(部分B)。部分A及B將由3個時期組成：篩選、治療及追蹤期(參考第37圖)。

研究將遵照國際協調理事會(International Council on Harmonisation; ICH) 之針對用於人類用途之醫藥的技術註冊需求/優良臨床試驗規範(Good Clinical Practice; GCP)及可應用管理需求來進行。用於受試者之研究持續時間

預期登記耗費大致30個月來完成(12-18個月用於劑量增量，而9-12個月用於擴展)。預期積極治療及治療後追蹤之完成耗費另外4至28個月。整個研究預期持續大致5年。試驗結束

試驗結束係定義為最後一次隨訪最後一位受試者以完成治療後追蹤之日期，或接收到來自需要原發性、繼發性和/或探察性分析的最後一位受試者的最後資料點的日期，如在協定中預先指定的，以較晚日期為準。

關於程序，關於協定之問題應被引導給醫學監視者或被指定人。針對登記進入研究中之每一受試者進行的程序係概述於表34中：表34.事件表縮寫：AFP = 甲型胎兒蛋白；anti-HBc = B型肝炎核心抗體；anti-HCV = C型肝炎表面抗體；anti-HBS = B型肝炎表面抗體；β-hCG =β人類絨毛膜促性腺素；C=循環；CBC =全血計數；CR=完全反應；CT=電腦斷層攝影；D=天；ECHO =超音波心電圖；ECOG=東岸癌症臨床研究合作組織；FCBP =具有生育潛力之女性；FDG PET = 18-氟-去氧葡萄糖正子斷層造影術；FFPE =福馬林固定、石蠟包埋；HBsAg= B型肝炎表面抗原；HCC =肝細胞癌瘤；INR =國際正規化比率；IRT =交互型反應技術；LVEF =左心室射出分率；mo=月；MUGA =多重閘控截獲掃描；NHL =非霍奇金氏淋巴瘤；PD=藥效學；PK=藥物動力學；PS=表現狀態；PT=凝血酶原時間；PTH = 副甲狀腺素；PTT =部分血栓形成素時間；q=每；SAE =嚴重不利事件；TSH =甲狀腺促進激素；WK=週。 a 此安全性追蹤評定可藉由電話進行(參考第6.3.1部分)。長期存活追蹤達至多2年或直至死亡，追蹤丟失，或試驗結束，以首先發生者為準。可藉由記錄審查進行。 b 所有研究隨訪/程序將具有±3天窗口，且所有實驗室血液樣本應在給藥前抽取，除非在此表或第6部分中另有規定。 c 需要在循環6第1天及僅在第1天之前。 d 篩選三份ECG必須在第1天給藥之前執行≥72小時，以使得中心讀取結果對審查為可獲得的。 e 除非PD已在先前記載。 f 成對腫瘤活組織檢驗針對部分B為強制的且針對部分A為高度推薦的。篩選活組織檢驗(給藥前D-7至D1)應在所有納入/排除之後獲得。已滿足標準。循環1活組織檢驗可在第16或17天獲得(+ 7天窗口)，前提是已投與2個連續化合物A劑量。 g 僅在新鮮活組織檢驗在篩選期間未獲收集情況下強制。 h 由於除了疾病進程之外的原因而中斷治療之所有受試者開始新的抗癌劑療法，或根據指定腫瘤評定時程，遵照來自整個研究之撤回同意直至進程和/或新的全身性抗癌劑療法之起始。 i 若在受試者之最近期歷史骨髓活組織檢驗上結果為正常的，則可省略。另外，若在循環1第1天之前90天內執行事前分析，則可省略此分析。歷史結果將記錄在eCRF中。 j 可在循環3之前省略第8及22天隨訪 k 若在先前28天中執行，則可省略。

除非下文或在事件之表(參考表34)中另有規定，否則所有研究隨訪將具有±3天之窗口。除非另有規定，否則所有實驗室血液樣本應在給藥前抽取(例如，PK樣本)。

研究程序應記錄在源文件及電子病例報告單(electronic case report form; eCRF)中。在受試者未能通過篩選的情況下，根據資料庫說明，將在eCRF上記載最少資訊。

篩選窗口在化合物A之第一劑量之前28天開始(±3天)。參考本部分之表34獲得關於所執行程序及時程之詳細資訊。

在任何情況下，在此試驗之進行期間，將不准許對協定之棄權。

安全性實驗室分析將在當地執行。篩選實驗室值必須證明受試者合格性，但可在必要時在篩選窗口內重複。

ICD將藉由有資格之研究工作人員在篩選隨訪時給與所有受試者。必須簽署ICD且由受試者及給與工作人員在開始任何其他研究程序之前記錄日期，且其完成係記載於源文件及eCRF中。根據表34中所示之時程，所有篩選測試及程序必須在化合物A之第一劑量之前28天內(±3天)完成。

將在已獲得知情同意之後在篩選時執行以下各項： • 將在篩選時評定納入及排除標準，且記錄在源文件及eCRF中。 • 避孕忠告：有資格之保健專業人士將藉由Celgene或被指定人根據對受試者之避孕忠告特定的要求來訓練。一旦受訓，保健工作人員將在投與化合物A之前忠告受試者以確保受試者遵照所有要求，包括使用節育且確保受試者瞭解相關聯於化合物A之風險。 • 將在篩選期間與當地規章一致地收集醫學、腫瘤學及外科史，以及人口統計資料(包括每一受試者之出生日期、性別、種族及族性)。腫瘤學史將包括初級診斷及日期、療法以及反應之詳細歷史。 • 將收集關於在先及伴隨藥物及程序之資訊 • 在交互型反應技術系統(interactive response technology; IRT)中註冊。 • 不利事件監視。 • 量測高度及重量。 • 評定生命體徵。 • 身體檢查(僅記載於源文件中)及ECOG表現狀態。 ○ 對於患有NHL之受試者，淋巴結之量測值及對脾和/或肝之任何放大之文件記載將記錄在源文件及eCRF中。 • B症狀評定(僅NHL受試者)：B症狀為發燒(＞ 100.5℉或38℃) 2或更多週而無其他感染跡象，夜間盜汗超過1個月而無感染跡象，及在先的6個月中重量損失大於10%。 • 重複三次的12引腳ECG將在化合物A之第一劑量之前≥72小時執行，其中結果在給藥以滿足合格標準之前自中央讀數接收並加以評定 • 左心室射出分率(Left Ventricular Ejection Fraction; LVEF)評定。 • 針對具有生育潛力之所有女性的妊娠測試。將在篩選期間與受試者討論避孕之適當方法及胎兒暴露之潛在危險。用於具有生育潛力之女性的雙重避孕方法(其中之一必須為阻障方法) (例如，口服、可注射或植入式激素避孕劑；子宮內裝置；利用殺精子劑之阻障避孕劑；或切除輸精管的伴侶)及用於男性之單一避孕方法(避孕套)必須自簽署ICD之時間起使用，貫穿研究(包括劑量中斷)，及歷時化合物A之最後劑量之後的90天。此將記載於源文件中。 • 臨床實驗室測試將在化合物A之第一劑量之前14天內完成。 • 效力/腫瘤評定 • 在篩選時(第一劑量之14天內)收集骨標誌物(N-尾肽及骨特異性鹼性磷酸酶) • 神經內分泌及腫瘤標誌物將在化合物A之第一劑量之前完成。 − SCLC-Pro-GRP及CgA − NEC-Pro-GRP及CgA − NEPC – PSA、Pro-GRP及CgA − NEHCC-甲型胎兒蛋白(Alpha fetoprotein; AFP)、Pro-GRP及CgA − MTC-CEA、降血鈣素、Pro-GRP及CgA − NE胰腺癌 – Pro-GRP、CgA及胰抑素 − 其他NEC-Pro-GRP及CgA − 適當時的其他腫瘤標誌物，亦即用於卵巢癌之CA125 • 新鮮腫瘤活組織檢驗 − 檔案腫瘤組織(FFPE)收集僅當在篩選期間未收集到新鮮活組織檢驗時才是強制的 • 僅對於HCC受試者而言： − AFP − HBsAg、抗HBS、抗HBc及抗HCV (僅篩選)。 − 若HBsAg、HBcAb總數和/或HBcAb IgM為陽性，則量測B型肝炎病毒病毒負荷(藉由PCR定量的HBV DNA)。 − 在陽性B型肝炎表面抗原、HBcAb IgM和/或病毒負荷之受試者中需要確認利用針對HBV之適當抗病毒劑之抗病毒療法——適當的一線藥劑包括恩替卡韋(entecavir)、泰諾福韋(tenofovir)及拉米夫定(lamivudine) (應注意，拉米夫定具有較高的抗性率)。 − 具有陽性HBV病毒負荷、HBcAb IgM和/或HBsAg之受試者若尚未處於肝病學家之照護之下，則應聯絡肝病學家。

在表34中展示隨訪及評定。完成6個治療循環並繼續研究藥物之受試者僅需要在每一後續循環(循環6及更高循環數)之第1天(±3天)執行診所隨訪/評定，除非臨床上指示隨訪太過頻繁。

當受試者簽署ICD時開始，貫穿研究，且直至化合物A之最後劑量之後28天所服用的所有伴隨藥物及進行的所有程序將記錄在源文件及eCRF中。

將自受試者簽署ICD之時間至化合物A之最後劑量之後的28天記錄不利事件及嚴重不利事件(serious adverse event; SAE)。

經歷AE之受試者將利用相關臨床評定及實驗室測試來監視，如藉由研究員上判定的。將進行每一次嘗試來記載進行中AE之解決日期。AE將記錄在eCRF之AE頁上及受試者之源文件中。應在任何可能的情況下獲得皮疹之照片，匿名，並適當地儲存以供將來擷取之用。

受試者之重量將在表34中所列之隨訪中記錄在源文件及eCRF中。

生命體徵包括體溫、血壓、脈搏率及呼吸率(僅針對在肺中具有腫瘤之受試者)，且將在研究期間之各種時間點加以記錄來用於如表34所述的安全性監視。

所記錄之量測值將獲取至源文件及eCRF中。

將在表34中所列的隨訪時執行完整的身體檢查及東岸癌症臨床研究合作組織表現狀態(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG PS；參考附錄D)。針對兩項之結果將記錄在源文件中。ECOG PS之結果將亦收集在eCRF上。

身體檢查發現將分類為正常或異常。若異常，則將對異常及臨床重要性之描述提供於源文件中。自基線之臨床上顯著改變將記錄在eCRF之AE部分中。

對於患有NHL之受試者，淋巴結之量測值及對脾和/或肝之任何放大之文件記載將記錄在源文件中及eCRF上。

對於患有NHL之受試者，B症狀評定將在表13所列之隨訪時執行，且將結果記錄在源文件中及eCRF上。

B症狀為發燒(＞ 100.5℉或38℃) 2或更多週而無其他感染跡象，夜間盜汗超過1個月而無感染跡象，及在先的6個月中重量損失大於10%。

重複三次的標準12引腳心電圖(electrocardiogram; ECG)將在表34所列的隨訪時記錄。若12引腳ECG及任何血液抽取兩者經計劃達相同標稱時間，則12引腳ECG應在任何血液抽取之前收集。將在受試者已處於仰臥位至少5分鐘之後執行12引腳ECG (在25 mm/sec下之12引腳，報告節律、室率、PR間隔、QRS波群、QT間隔及QTcF間隔)。

重複三次之ECG (在2±1分鐘間隔內的3次記錄)將在以下執行： • 篩選 • 循環1 − 第1天：給藥前(給藥之前30分鐘內)及給藥後2、4、8、24小時(±10分鐘) −第8、15及22天：給藥前(給藥之前30分鐘內)及給藥後4小時(±10分鐘) • 循環2及更高循環數 − 第1天：給藥前(給藥之前30分鐘內)

單一ECG將在EOT隨訪時執行。

對於替代給藥時程，循環1第15天ECG將在循環1中給藥化合物A之最後一天執行。

研究員將基於其對ECG結果之解釋來做出立即的臨床決定且在eCRF中提供其對ECG之總體評定。自基線之臨床上顯著改變將記錄在eCRF之AE部分中。

ECG輸出亦將上載至中心ECG實驗室以用於限定分析及解釋。

左心室射出分率(left ventricular ejection fraction; LVEF) (多重閘控截獲掃描[multiple gated acquisition scan; MUGA]或超音波心電圖 [echocardiogram; ECHO])將在所有受試者中在篩選時進行。追蹤評定應按臨床上所指示來執行。追蹤評定應使用在篩選評定時使用的相同程序。臨床上顯著的減少係定義為LVEF之≥20%絕對減少或下降至低於45%。

具有生育潛力之女性(female of childbearing potential; FCBP)係定義為性成熟之女人，其： • 尚未經歷子宮切除術或雙側卵巢切除術，且 • 尚未處於自然停經後(癌症療法之後無月經不排除生育潛力)至少24個連續月(例如，在24個連續月之前的任何時間具有月經)。

研究員將根據此定義將女性受試者分類為FCBP。對非FCBP受試者不需要妊娠測試，但證明必須記錄在eCRF及源文件中。妊娠測試將藉由當地實驗室來進行。

對於FCBP，妊娠測試將在表34中所列的隨訪時進行 • 具有至少25 mIU/mL之敏感性的血清妊娠測試將在篩選時獲得，且在研究治療之循環1第1天之前的72小時內進行血清或尿妊娠測試。受試者可不接收化合物A直至研究員已驗證兩項篩選妊娠測試為陰性。 • 血清或尿妊娠測試(基於研究員之裁量及最小測試敏感性[25 mIU/mL])應在每個循環之第1天之前72小時內及在治療結束(end of treatment; EOT)隨訪時進行。受試者可不接收化合物A直至研究員已驗證妊娠測試為陰性。 • FCBP或其伴侶為FCBP之男性受試者必須避免在接收化合物A之同時的能夠導致懷孕之活動並歷時化合物A之最後劑量之後的90天。將每月監視對性活動的真實禁欲之實踐且記載於源文件中。

妊娠測試之結果將記錄在源文件及eCRF中。

以下實驗室評定將在研究期間的如表34所述的時間點執行。除非另有規定，否則所有樣本應在給藥前抽取。實驗室評定將記錄在源文件及eCRF中且為以下各項： • 血液學：全血計數(complete blood count; CBC)，包括血紅素、血球比容、WBC計數，其中針對WBC參數及血小板計數為絕對計數。 − 在循環1第1天，應執行利用絕對計數之CBC且在藥物投與之前針對進入標準來檢查結果 • 血清化學：白蛋白、總蛋白質、重碳酸鹽或鎂、磷、鈣、肌酸酐、尿素/BUN、葡萄糖(禁食≥6小時)、鉀、鈉、氯化物、總膽紅素(若在正常範圍外部則分餾)、鹼性磷酸酶、AST或血清麩胺草醋酸轉胺酶(serum glutamic oxaloacetic transaminase; SGOT)、ALT或血清麩胺丙酮酸轉胺酶(serum glutamate pyruvic transaminase; SGPT)、LDH及尿酸。 • 禁食(≥6小時)三酸甘油酯及膽固醇。 • 特殊化學：澱粉酶、脂肪酶、T細胞子集(CD4+及CD8+)、甲狀腺促進激素(thyroid-stimulating hormone; TSH；若異常反射至游離T4)。 • 凝結：PT (或INR)及APTT • 尿分析：量桿 − 在2+或更大蛋白質或惡化蛋白尿之首次出現的情況下，顯微術及尿白蛋白與肌酸酐比率。 • 若血清肌酸酐＞ 1.5 x ULN (參考部分4.2)，則使用在篩選時滿足納入標準所需要的外生性過濾標誌物諸如碘苯六醇、菊糖、⁵¹ Cr EDTA或¹²⁵ I碘肽酸鹽進行所量測肌酸酐廓清率判定。 • 每3個循環及在EOT (除非在先前28天中完成)時收集骨標誌物(N-尾肽及骨特異性鹼性磷酸酶)。 • 僅對於HCC受試者而言： − AFP (若在基線升高) − 在具有基線時陽性B型肝炎病毒負荷和/或陽性HBsAg、HBcAb總數和/或HBcAb IgM (常常在研究員之裁量下，奇數循環僅以循環3或更大循環數開始)之受試者中及在EOT時的B型肝炎病毒DNA定量。 • 僅對於NEPC受試者而言： − PSA • 若神經內分泌及腫瘤標誌物在基線升高(除NEPC中之PSA外)，則僅需要監視神經內分泌及腫瘤標誌物。 − SCLC-Pro-GRP及CgA − NEC-Pro-GRP及CgA − NEPC – PSA、Pro-GRP及CgA − NEHCC-甲型胎兒蛋白、Pro-GRP及CgA − MTC – CEA、降血鈣素、Pro-GRP及CgA − NE胰腺癌– Pro-GRP、CgA及胰抑素 − 其他NEC-Pro-GRP及CgA

應在決定永久中斷已進行之治療之後儘可能快地(≤28天)對由於任何原因自治療撤回的受試者執行EOT評估(參考表34之程序)。

將追蹤所有受試者歷時化合物A之最後劑量之後的28天以獲得AE報告及伴隨藥物資訊。28天(±3天)安全性追蹤接觸可藉由電話進行。另外，將報告研究員在此後的任何時間所得知的任何SAE，疑似其係與化合物A有關。

在安全性追蹤隨訪之後，針對存活追蹤至多2年或直至死亡、追蹤丟失或試驗結束(以先發生者為準)來在每後續的3個月(±2週)追蹤所有受試者。新疾病療法應在相同時間時程下收集。

存活追蹤可藉由記錄審查(包括公共記錄)和/或與受試者、家庭或受試者之治療醫師電話聯絡來進行。

腫瘤評定將在篩選時執行且將包括胸、腹部及骨盆之CT，及對已知或疑似牽涉大腦之受試者及患有NEPC之所有受試者的腦掃描(CT或MRI)。在篩選之後，放射腫瘤評定將在循環2、4及6結束時(第28天±7天)，且隨後在之後的每3個循環，使用在篩選時使用的相同CT/MRI掃描模態來執行。若在先掃描係在28天內，則不需要獲得EOT掃描。 • 另外對於NHL受試者，將執行篩選FDG PET或FDG PET/CT掃描，除非已知腫瘤為FDG活性陰性。將獲得後續掃描來確認CR。 • 對於已知或疑似牽涉骨髓之NHL受試者，在篩選時執行利用流式免疫表現型之骨髓評估且確認完全反應(complete response; CR)。 • 對於MTC受試者，篩選同位素骨掃描將在基線執行。若此暗示骨轉移，則骨病灶之X射線、CT或MRI應在BL時執行，且在每一計劃效力評定時重複相同技術。 • 對於MTC受試者，應執行肝MRI或若不可獲得，則執行對比增強三相CT掃描。此外，應執行頸部之MRI或CT掃描。此等應在基線時執行且如上文所規定。 • 對於NEPC受試者，應在篩選時執行99mTc-亞甲基二磷酸鹽放射性核種骨掃描及所有後續效力評定。 • 對於NEHCC受試者，應在篩選時執行腹部之對比增強三相CT/MRI掃描及所有後續效力評定。

由於除了疾病進程之外的原因而中斷治療之所有受試者開始新的抗癌劑療法，或根據指定腫瘤評定時程，遵照來自整個研究之撤回同意直至進程和/或新的全身性抗癌劑療法之起始。

將藉由研究員基於以下各項來判定每一篩選後評定時之腫瘤反應：如針對實體腫瘤之附錄B所述的實體腫瘤之反應評估標準(Response Evaluation Criteria in Solid Tumor; RECIST) v 1.1、如針對NHL之附錄C所述的用於惡性淋巴瘤之修訂反應標準、用於NEPC之PCWG3 2016 (附錄J)及用於NEHCC之mRECIST (附錄I)。

除非先前記載疾病進程，否則腫瘤標誌物，亦即在篩選、每個循環之第1天及EOT時用於NEPC之PSA及用於NEHCC之甲型胎兒蛋白(Alpha fetoprotein; AFP)。

將在表13中所列的隨訪時執行神經內分泌標誌物，且將結果記錄在源文件中及eCRF上。應在每一循環之第1天及療法結束時追蹤在基線已知升高的任何神經內分泌標誌物，除非受試者係記載為先前已有進程。然而，應在最小值下追蹤以下各項： • SCLC-Pro-GRP及CgA • NEC-Pro-GRP及CgA • MTC-CEA、降血鈣素、Pro-GRP及CgA • NEPC-Pro-GRP及CgA， • NE胰腺或小腸NEC-Pro-GRP、CgA及胰抑素

下文描述用於部分A之PK評定。將在此研究之部分A中收集到足夠的PK資料之後提供用於部分B之PK評定。

對於評估血漿中化合物A之PK，將在表35所列的時間點自所有受試者收集血液樣本。每一樣本收集之實際時間將記錄在源文件中及電子病例報告單(electronic case report form; eCRF)。可利用針對PK評估收集的血漿樣本來執行化合物A代謝物在血漿中之探察性分析。表35.用於循環1部分A之血液藥劑學取樣時程

贊助商可對PK樣本進行額外分析以便追蹤研究治療之安全性或更好地理解疾病之進程或疾病對研究治療之反應。

參見用於樣本收集、操縱及處理說明之實驗室手冊及附錄G。

藥效學生物標誌物之時程提供於下文： • 用於PD生物標誌物研究之全血 − 循環1第1天：給藥前(≤3小時) − 循環1第3天 − 循環1第5天 − 循環1第8天：給藥前(≤3小時) − 循環1第24天：給藥前(≤3小時) • 用於PD生物標誌物研究之血清(僅NEC及SCLC受試者) − 循環1第1天：給藥前(≤3小時) − 循環1第3天 − 循環1第8天：給藥前(≤3小時) • 用於PD生物標誌物研究之腫瘤組織 − 篩選：給藥前第-28天至第1天(在滿足所有納入及排除標準之後) − 循環1第16或17天(+7天) − 可選、任何其他時間直至EOT隨訪。

贊助商可對PD樣本進行額外分析以便追蹤研究治療之安全性或更好地理解疾病之進程或疾病對研究治療之反應。

在部分A中每當安全及可行時將收集腫瘤活組織檢驗。在部分B中腫瘤活組織檢驗為強制的。在篩選時及在循環1第16或17天(+7天)藉由外科活組織檢驗(較佳)或核心針(若可能則至少3道)收集活組織檢驗。若在此時間之前研究藥物治療經中斷或減少，則活組織檢驗應在受試者已接收兩個連續計劃劑量之化合物A之後延遲直至1至2天(+7天)。若在篩選期間不收集新鮮活組織檢驗，則必須提供檔案腫瘤樣本。細針吸出不足以作為腫瘤活組織檢驗材料之來源。樣本應以福馬林固定石蠟包埋(formalin-fixed paraffin-embedded; FFPE)方式處理。最佳地，將自相同腫瘤位點獲得腫瘤組織樣本(篩選及治療時)。

另外，可在部分A及部分B兩者中，在稍後治療循環期間或在治療中斷之後(在28天追蹤期期間的任何時間)獲得可選腫瘤活組織檢驗，以分別闡明長期治療之效應或抗性機制。研究治療之描述

化合物A為分子量為609.65之苄磺酸鹽。其為白色至淺黃色固體。化合物A將作為不透明瑞典橙膠囊來供應至診所，其僅含有處於劑量強度0.50 mg、0.75 mg及2.00 mg下之活性醫藥成分。膠囊將於具有防兒童蓋之HDPE瓶中供應，該HDPE瓶根據相關國家健康機關之規章來適當標記以用於研究用途。

在部分A及B兩者中，將每週一次在持續≥6小時之隔夜禁食之後，在早晨以至少240 mL之水空腹(亦即，早餐之前≥1小時)投與化合物A。受試者應在每一劑量之後≥1小時避免食物或其他藥物攝取。受試者將在每一4週(28天)循環中每週一次經口投與化合物A。可基於對臨床安全性及實驗室資料之審查藉由SRC實行替代給藥時程。將在完成任何給藥前評定之後在診所中投與化合物A。若存在臨床上顯著疾病進程、不可接受的毒性之證據或受試者/醫師之撤回決定，則可中斷研究治療。

出於劑量增量決定之目的，至少3位受試者將登記進入連續小組中。第一小組將每週一次利用1.25 mg之開始劑量治療。受試者必須完成具有最小安全性評估及藥物暴露之最少1個治療循環，或已在考慮為可評估用於劑量增量決定之第一治療循環內之DLT。當受試者之小組已滿足此等標準時，將發生劑量增量決定。藉由SRC做出劑量增量決定。決定將基於在進行中研究中評估的所有劑量位準所獲得的所有有關資料之合成，包括安全性資訊、DLT、在循環1期間之所有治療相關的CTCAE≥2級毒性資料及來自可評估受試者之PK資料。來自受試者之PK資料將以正在進行為基礎來進行貫穿研究，且給藥將因此得以調適。用於下一小組受試者之推薦劑量將藉由BLRM利用EWOC原理來指導。

適應性貝氏方法提供對化合物A之劑量位準之估計值，其不超過MTD並合併在所有劑量位準下之所有DLT資訊以用於此估計。一般而言，下一推薦劑量將具有DLT率落入靶間隔(位於16-33%中之真實DLT率)內之最高機會，且將始終滿足EWOC原理。根據EWOC，在下一劑量下之DLT率將超過0.33應不可能(＜25%事後機率)。在所有情況下，用於下一小組之推薦劑量將不超過自先前劑量之100%增加。劑量之較小增加可藉由SRC在考慮所有可獲得之臨床資料後做出推薦。

每一劑量小組中用於自然增長受試者之程序及對用於研究之劑量增量/去劑量增量決定之規定如下： 1. 此研究將藉由評估在每一劑量位準下至少3位可評估受試者之小組中的化合物A來開始。最初，小組之間的給藥增加將100%。當單一受試者經歷DLT，或2位受試者經歷≥2級治療相關毒性時，小組規模可增加至用於當前及後續小組之6位可評估受試者。化合物A劑量之增加將針對每一後續劑量增量小組為≤50%。一旦2位受試者經歷≥2級治療相關毒性，登記將局限於患有SCLC及其他NEC(諸如MTC)的受試者，其分泌Pro-GRP或，CgA或降血鈣素(針對MTC受試者)或胰抑素(針對胰腺或小腸NEC)。 2. 在針對小組中之所有可評估受試者完成循環1之後，利用EWOC原理之雙參數BLRM將用於對SRC做出關於下一劑量位準之推薦，其中以下情況例外： − 若在小組中之前2位受試者經歷DLT，則不將另外的受試者登記進入彼小組中直至貝氏模型已利用此新的資訊加以更新。同樣地，若小組中之2位受試者在任何另外受試者之登記之前經歷DLT，則模型將重新評估。 3. 在每一小組之後，SRC將滿足並審查來自BLRM評定之資料及可獲得的安全性(亦即，DLT及非DLT資料)、PK、PD及初步效力資訊。藉由SRC做出最終劑量增量決定。

在重複上文步驟之後，在滿足以下條件之後可將化合物A劑量宣告為MTD： • 至少6位可評估受試者已在該劑量下治療， • 在該劑量下DLT率位於靶間隔(16-33%)中之事後機率超過60%，或在事後機率接近但未能超過60%時，足夠數量之受試者已進入研究來確保MTD估計之精度，及 • 根據BLRM來推薦劑量且SRC批准該劑量。

劑量增量可藉由SRC在任何時間基於出現安全性問題而未建立MTD來終止。在SRC對更好地理解化合物A之安全性、可耐受性及PK的裁量下，另外的受試者小組可在利用進一步劑量增量之前或在進行同時於在先劑量位準下或至中間劑量位準登記。

然而，在增量期間之劑量決定不限於此等劑量。基於BLRM關於可在增量期間的任何決定點不被超過之最高劑量之推薦及藉由該協定允許的劑量之最大增加，可將中間劑量投與至後續新的受試者小組。

亦將藉由SRC，基於其對臨床及實驗室安全性資料之審查來判定對評估劑量小組內之另外受試者、較高劑量小組、中間劑量小組、較小劑量增量、替代給藥時程或宣稱MTD之決定。

接收至少一個劑量之化合物A的所有受試者將對安全性而言為可評估的。

將替換不可評估DLT之受試者。任何劑量小組內之另外受試者可在SRC之裁量之下登記。在DLT評定期期間不允許受試者內劑量增量。

MTD為最高劑量，在該最高劑量下，利用化合物A治療的群體(非群體之樣本)中小於33%在第一循環中遭受DLT，且至少6位可評估受試者已在此劑量下治療。

可評估可變劑量小組(例如，較不頻繁的給藥)以在SRC之裁量之下準確地判定MTD。

在劑量增量期間，DLT評定期為循環1 (28天)。

國家癌症研究院(National Cancer Institute; NCI)針對不利事件之通用術語標準(Common Terminology Criteria for Adverse Event; CTCAE) 4.03版係用作用於對不利事件之嚴重性分級的指導。DLT係定義為在DLT評定內發生的任何以下毒性，除非事件可清楚地判定為與化合物A無關。劑量限制性毒性係描述在下文： • 任何持續時間之任何4級非血液學毒性 • ≥3級之任何非血液學毒性，以下除外： − ≤3天持續時間之3級腹瀉、噁心或嘔吐(利用最佳醫學管理)。 − 痤瘡樣、膿皰性或斑丘疹類型之3級皮疹，其在7天之研究藥物中斷內解決至≤2級且在相同劑量下研究藥物之恢復情況下在相同位準下不復發(利用最佳醫學管理)。 − 3級疲勞，其在7天之研究藥物中斷內解決至≤2級且在相同劑量下研究藥物之恢復情況下在相同位準下不復發(利用最佳醫學管理)。 • 血液學毒性如下： − 熱性嗜中性球減少症 − 持續＞ 7天之4級嗜中性球減少症 − 持續＞ 7天之4級血小板減少症，具有臨床上顯著流血之≥3級血小板減少症 • 任何AE，除非清楚地判定與研究藥物無關，必需在循環1期間劑量位準減少。 • 在安全委員會認為劑量限制性的試驗期間的任何時間之任何其他毒性。

無相關聯臨床徵象或症狀(例如，低鎂血症、高鎂血症、低白蛋白血症、低磷酸鹽血症、淋巴細胞計數增加或減小)之孤立實驗室改變可不包括在此定義中。此等發現將藉由SRC討論且審查。

在包括循環1之任何循環中允許劑量減少。在劑量增量期間在循環1中發生的劑量減少將構成DLT，但受試者將允許在減少劑量下繼續化合物A。

當指示劑量調整時，將首先調整劑量頻率。在與贊助商之研究醫師會診之後允許劑量省略及減少。一旦劑量已減少，則當毒性達到≤1級時可將劑量增量。若毒性在較高劑量下復發，則劑量將第二次減少，但隨後不允許再次增量。若在兩個劑量減少(一個針對劑量位準)之後任何受試者持續經歷不可接受的毒性，則化合物A將永久中斷。

在DLT評定期期間不允許受試者內劑量增量。

滿足DLT之定義的任何AE將需要劑量頻率調整及若無恢復，則後續劑量中斷。若任何治療相關≥2級毒性到下一劑量之時間未解決至≤1級，則劑量應延遲。此等情況應與贊助商之研究醫師討論以判定給藥延遲之最佳持續時間。

治療相關≥3級毒性或長期2級毒性可保證化合物A之劑量減少。此等情況應與贊助商之研究醫師在做出給藥改變之前討論。

在DLT評定期期間不允許受試者內劑量增量，然而，在循環≥3中，耐受其經指派劑量之化合物A的沒有疾病進程跡象之受試者可(在研究員之裁量下且與贊助商之研究醫師會診並經其同意)逐漸增量至經證實藉由在此研究中至少一個小組之受試者足夠耐受的最高劑量位準(亦即，在彼劑量位準下≤33%之可評估受試者已經歷DLT)。

部分B (擴展階段)，不允許超出MTD之劑量增量。

治療可中斷至多4週直至毒性(排除脫髮)達到≤1級或基線位準。治療可在相同或減少劑量下，在研究員之裁量下重新開始。任何此等治療中斷必須與贊助商之研究醫師討論。

在劑量增量階段之DLT評定期中，出於不同於DLT之原因而具有＞ 1個錯過劑量之化合物A的治療中斷將使得受試者不可評估DLT，且必需替換在給藥小組中之彼受試者。任何此等治療中斷必須與贊助商之研究醫師討論。

在研究中以治療意圖允許造血生長因子或其他血液學支援物，諸如紅血球生成素、達依泊汀、顆粒球-群落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor; G-CSF)、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor; GM CSF)及RBC-或血小板轉輸。在任何時間允許G-CSF之治療用途用於經歷3/4級嗜中性球減少症或任何等級熱性嗜中性球減少症之受試者。在循環1期間不允許顆粒球(或顆粒球-巨噬細胞)生長因子之預防用途。

患有3或4級嗜中性球減少症和/或3或4級血小板減少症之受試者應頻繁利用實驗室測試監視直至解決至≤1級。應在適當時考慮抗微生物、抗真菌及抗病毒預防。

腫瘤疼痛或治療誘導疼痛可利用類鴉片及類鴉片相關鎮痛劑控制，該等鎮痛劑諸如可待因、得美樂、丙氧芬或嗎啡，其在臨床醫師之裁量下且按醫學需要規定來投與。特別是在血小板減少症之設定下之流血風險應在使用非甾族消炎藥物(non-steroidal anti inflammatory drug; NSAID)及阿司匹靈之前考慮。若可能，則應避免NSAIDS及阿司匹靈且應替代地投與乙醯胺苯酚。

在研究員之裁量下推薦用於保護食管/胃黏膜之黏膜塗佈劑以及監視受試者之GI流血。然而，質子泵抑制劑可影響NEC受試者中之神經內分泌標誌物，因此組織胺(H2)受體拮抗體應在適當時優先投與。將鼓勵受試者報告GI不適或疼痛、食欲損失、大便改變或便血之所有事件片段。

建議根據提供於附錄F中之準則來管理經歷腹瀉之受試者。應在1-2級腹瀉之最早開始時起始諸如洛派丁胺之抗痢疾藥物。抗痢疾藥物可作為腹瀉之預防及治療來投與。應快速地校正脫水及電解質擾動。應考慮改善腹瀉之一般措施，諸如低纖維飲食及增加的液體消耗，且應密切地監視重量。

如針對此協定定義的超劑量僅涉及給藥之化合物A。基於每一劑量，超劑量係定義為超過指派至給定受試者之化合物A之協定指定劑量的以下量，不管任何相關聯不利事件或後遺症： • PO超過協定指定劑量之任何量

基於時程或頻率，超劑量係定義為比協定所需要時程或頻率更頻繁的任何事物。

應於病例報告單中報告關於藥物投與之完整資料，包括任何超劑量，不管超劑量是否為意外的或故意的。

合格受試者將順序地登記在部分A (劑量增量)中。部分B (劑量擴展)中之登記將藉由疾病小組及給藥時程在可應用時分層次進行。

交互型反應技術(Interactive Response Technology; IRT)系統將用於追蹤部分A中對劑量位準之受試者指派及在部分B中對腫瘤小組之受試者指派。

用於化合物A之標記將包括但不限於贊助商名稱、位址及電話號碼、協定數量、化合物A、劑型及強度(在可應用的情況下)、每個容器之化合物A量、批號、失效日(在可應用的情況下)、藥物鑑別/套組編號、給藥說明書、儲存條件及可應用情況下的所需要警告陳述和/或管制陳述。另外的資訊可包括在標記上，如根據當地規章可應用的。

Celgene (或被指定人)將與研究員及相關場地工作人員審查用於記載化合物A之接收的程序，以及用於計數、調節化合物A及記載此過程之程序。Celgene (或被指定人)亦將與研究員及相關場地工作人員審查用於化合物A返回、處置和/或破壞的過程，包括場地相對於Celgene (或被指定人)之責任。

僅藥劑師或研究員之被指定人將分配化合物A。必須維持藉由每一受試者分配且服用的化合物A之膠囊數量之記錄。藥劑師或研究員之被指定人將在適當研究記錄中記載所分配/投與之劑量。伴隨藥物及程序

當受試者簽署ICD時開始服用的所有藥物(排除在評估下用於腫瘤之在先癌症療法)及在研究期間直至在治療中斷之後28天的所有伴隨療法連同劑量、藥量頻率及療法使用之原因將記錄在源文件及伴隨藥物eCRF上。

在投與研究藥物之前的所有在先化學療法(生物、免疫學或放射療法)及抗癌劑外科術將記錄在eCRF之適當部分中。

研究員將指示受試者通知研究工作人員關於簽署ICD之後服用的任何新的藥物。所有藥物及顯著的非藥物療法(草藥、物理療法等等)及利用現存藥物之給藥的任何改變將記載於eCRF上。

應使用對受試者之照護視為必需的任何伴隨藥物/療法之使用。若對疑似影響藥物吸收或新陳代謝之伴隨藥物做出改變，則可進行重複PK評估。以下為所允許的伴隨藥物及程序： • 患有≥1級腹瀉之受試者應迅速地起始利用狄芬諾西萊/阿托品(Lomotil)或洛派丁胺(Imodium)或針對腹瀉的替代非處方藥品之治療。針對後續劑量之化合物A的利用止瀉劑藥物之預先藥物可為適當的且應與贊助商之研究醫師討論。 • 將拒給抗吐劑直至受試者已經歷CTCAE≥1級之噁心或嘔吐。受試者可隨後在研究員之裁量下接收包括地塞米松之預防性抗吐劑。 • 預防性黏膜防護劑可在研究員之裁量下為適當的。然而，質子泵抑制劑可影響NEC受試者中之神經內分泌標誌物，因此組織胺(H2)受體拮抗體應在適當時優先地投與。 • 在陽性B型肝炎表面抗原、HBcAb IgM和/或病毒負荷之HCC受試者中需要利用針對HBV之適當抗病毒劑之抗病毒療法——適當的一線藥劑包括恩替卡韋、泰諾福韋及拉米夫定(應注意，拉米夫定具有較高的抗性率)。當投與化合物A時，適於HCV之治療的方案不應中斷。 • 允許在任何時間對經歷熱性嗜中性球減少症或3/4級嗜中性球減少症之受試者治療性使用顆粒球生長因子。利用顆粒球群落刺激因子或顆粒球巨噬細胞群落刺激之常規預防 • 在開始化合物A之前接收穩定劑量之重組紅血球生成素或達依泊汀α之受試者可貫穿研究繼續其預治療劑量。受試者可在循環2中開始針對繼發於在先化學療法暴露之低增殖性貧血而重新開始利用紅血球生成素刺激劑(erythropoietin stimulating agent; ESA)之治療，前提是不存在對貧血之併發原因(例如，化合物A誘導)之臨床疑似。 • 允許不經腸流感疫苗接種。 • 不需要常規的傳染病預防。然而，抗生素、抗病毒、抗肺囊蟲屬、抗真菌或其他預防可在研究期間在研究員之裁量下實行。 • 允許利用雙膦酸酯類(例如，帕米膦酸鹽、唑來膦酸鹽)或其他藥劑(例如，癌骨瓦(denosumab))之治療來阻止或延遲骨轉移之進程。推薦貫穿研究之穩定給藥方案之維持。 • 在研究治療期間，在研究員之裁量下允許用於治療癌症相關症狀(例如，局部骨疼痛)之焦點減輕放射療法，前提是此不指示疾病進程，在此情況下應對受試者進行中斷。 • 受試者可接收生理學替換劑量之醣類皮質激素(至多每天10 mg普賴松之當量)作為維持療法。 • 在具有乳癌或前列腺癌病史的受試者中允許維持激素療法。 • 體抑素類似物(somatostatin analog; SSA)可在適當時用於症狀控制。

在受試者處於研究之同時不可使用其他研究療法。

在受試者處於研究之同時，除了研究治療之外，不得對受試者給予抗癌療法(化學療法、生物或研究療法及外科術)。若需要此種治療，則必須使受試者中斷研究。在受試者處於研究之同時不允許利用免疫抑制劑之治療。若需要此種治療，則必須使受試者中斷研究。

不允許利用抗凝結劑(例如，殺鼠靈、低分子量肝素、因子Xa抑制劑、凝血酶拮抗劑)之長期、治療性給藥之治療。若在藉由研究員之謹慎考慮下在醫學上受指示(例如，住院受試者、手術後)，則可在受試者中考慮抗凝劑之短期、預防性給藥。

化合物A可為CYP3A4之底物。應避免為此等CYP酶之已知強烈誘導物或抑制劑之藥物。若此等藥物之一個之使用為必要的，則應在其利用化合物A之伴隨使用之前與贊助商之研究醫師討論風險及益處。

此等藥物之實例為(不包括)： • CYP3A4/5抑制劑：阿紮那韋(atazanavir)、克拉黴素(clarithromycin)、茚地那韋(indinavir)、艾妥可那唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、奈法唑酮(nefazodone)、奈非那韋(nelfinavir)、利托那韋(ritonavir)、沙奎那韋(saquinavir)及泰利黴素(telithromycin) • CYP3A4/5誘導物：雷發平(rifampin)及卡巴馬平(carbamazepine)

若可能，則歸因於對生物標誌物之可能效應，應在NEC受試者中避免質子泵抑制劑。若臨床上適當的，則受試者應在第一劑量之前至少7天改換為H2拮抗劑。

鑒於血小板減少症之潛力，若可能，則應避免NSAIDS及阿司匹靈且應替代地投與乙醯胺苯酚。統計考量

此研究之主要目標將為判定當向患有晚期實體腫瘤(包括NEC)及復發性/難治性NHL之成人受試者每週一次經口投與歷時4週時化合物A之安全性、可耐受性及MTD。次要目標將為對化合物A之抗腫瘤活性做出初步評定，且判定其PK特性。

資料概要/統計分析將在可應用時藉由研究部分(部分A或B)、劑量時程、劑量位準(部分A)及腫瘤小組(部分B)來執行。

研究群體定義如下： • 登記群體-滿足納入/排除標準之所有受試者。 • 治療群體-登記及接收至少一個劑量之化合物A的所有受試者。 • 效力可評估(Efficacy Evaluable; EE)群體-登記進入研究，滿足合格標準，完成化合物A之至少一個循環(服用至少75%之指派劑量)，且具有基線及至少一個有效基線後腫瘤評定之所有受試者。 • 藥物動力學 (pharmacokinetic; PK)可評估群體-登記且接收至少一個劑量之化合物A且具有化合物A之至少一個可量測濃度的所有受試者 • 生物標誌物可評估(Biomarker Evaluable; BE)群體-登記，接收至少一個劑量之研究藥物，且具有至少一個生物標誌物評定，排除取消資格之評定的所有受試者。

在研究之部分A期間，藉由利用超劑量控制之增量(escalation with overdose control; EWOC)原理指導的適應性貝氏邏輯迴歸(Bayesian logistic regression; BLR)模型(具有2個參數)將用於劑量增量。針對此研究不執行正式統計考驗力計算來測定樣本大小。受試者之實際數量將取決於所測試的劑量位準/小組之數量。然而，受試者之預期數量將為大致50。

在自部分A測定MTD之後，部分B將每個預先指定腫瘤類型登記大致20位另外的受試者。

對部分B，樣本大小不是基於考驗力計算而是基於傳統上用於此種類之探察性研究之臨床上、經驗上及實際考慮來測定。在部分B劑量擴展期間，將最初應計至少14位效力可評估受試者以用於每一腫瘤小組。若觀察到4個月或較長的反應者或SD，則腫瘤小組將擴展至大致20位受試者。

在部分A中，受試者之基線特性將藉由用於登記群體之劑量小組概述。在部分B中，受試者之基線特性將藉由腫瘤類型概述。將使用描述統計學概述年齡、重量、高度及其他連續人口統計及基線變數。將利用頻數製表來概述表現狀態、性別、種族及其他類別變數。使用頻數製表藉由系統器官類別及較佳項來概述病史資料。

來自治療及研究之受試者素因(分析群體分配、進行中、中斷，連同主要原因一起)將使用頻率及百分比來概述。將提供按場所登記的受試者之概述。將使用頻數製表概述協定違規。亦將提供支援性相應受試者清單。

效力分析將基於所治療之群體且包括藉由劑量小組及給藥時程(部分A)或腫瘤類型及給藥時程(部分B)對臨床受益率(clinical benefit rate; CBR)、目標反應率(objective response rate; ORR)、反應或穩定疾病之持續時間、無進程存活(progression-free survival; PFS)、進程時間(time to progression; TTP)及OS。腫瘤反應(CR、PR、SD、PD或不可評估)將藉由研究員根據實體腫瘤之反應評估標準(Response Evaluation Criteria in Solid Tumor; RECIST) 1.1版、用於NEHC之mRECIST、用於NEPC及IWG標準之PCWG23來評定。CBR係定義為對CR、PR及持久SD (SD為≥4個月持續時間)之腫瘤反應(如藉由研究員所評定)。ORR係定義為最佳反應為CR或PR的受試者百分比。當SD為最佳反應時，必須在研究進入之後，在自第一劑量之8週最小間隔(亦即，與第一基線後反應評定時間點減評定窗口一致)之後至少一次放射線攝影記載。若不滿足達到SD之最佳反應的最小時間，則受試者之最佳反應將取決於後續評定之結果。例如，在第一評定(其中第一評定不滿足用於SD之最小持續時間標準)時展現SD及在第二評定展現PD之受試者將分類為具有PD之最佳反應。若不滿足用於SD之最小持續時間標準，則在第一SD評定之後追蹤丟失的受試者將考慮不可評估的。

將提供雙邊95% Clopper-Pearson確切信賴區間以用於ORR及CBR估計。將執行類似分析以包括確認反應以及用於效力可評估群體之彼等受試者。

對於具有CR或PR之最佳反應之受試者，反應持續時間係自當首先滿足CR/PR之標準的時間(無論先記錄何者)直至客觀記載進行性疾病之第一日期來量測。對於具有SD之最佳反應之受試者，SD持續時間係自第一劑量日期直至滿足進程標準來量測。若在化合物A中斷之前未記載進程，則將在最後一次足夠的腫瘤評定日期時監查總反應之持續時間及SD之持續時間。

基於研究員之評定的反應/SD之持續時間將藉由用於所治療群體之描述統計學(平均值、標準偏差、中值、最小值及最大值)來概述。除將基於使用卡本-麥爾方法之觀察值及監查值來計算的中值外，所有其他統計學(平均值、標準偏差、最小值及最大值)將僅基於觀察值來計算。TTP係定義為自第一劑量直至腫瘤進程之時間。

無進程存活(Progression-Free Survival; PFS)係定義為自第一劑量之化合物A至疾病進程之第一發生或因任何原因之死亡的時間。將在受試者最後一次足夠腫瘤評定之日期監查在資料截止日期既無進程亦未死亡之受試者。將使用用於所治療群體之描述統計學(平均值、標準偏差、中值、最小值及最大值)來概述PFS。除將基於使用卡本-麥爾方法之觀察值及監查值來計算的中值外，所有其他統計學(平均值、標準偏差、最小值及最大值)將僅基於觀察值來計算。

總體存活(Overall Survival; OS)係量測為自第一劑量之化合物A至歸因於任何原因之死亡的時間，且將以類似於對PFS所描述的方式來分析。

將概述在神經內分泌受試者中隨時間推移的血清神經內分泌標誌物之評定。

將針對所治療群體(藉由部分A中之劑量小組及部分B中之腫瘤類型)概述不利事件，包括治療緊急不利事件(treatment-emergent adverse event; TEAE)、實驗室評定、生命體徵、ECG結果、ECOG效能狀態、LVEF評定、身體檢查、生命體徵、對研究治療之暴露、伴隨藥物之評定及用於具有生育潛力之女性的妊娠測試。

將使用針對管制活動之醫學詞典(Medical Dictionary for Regulatory Activity; MedDRA) 18.1或更高版，系統器官類別(system organ class; SOC)及較佳項(preferred term; PT)來分類所觀察到的不利事件。在以受試者為變數之分析中，將僅對具有相同AE超過一次之受試者計數一次。所有不利事件亦將藉由SOC、PT及NCI CTCAE等級(4.0或更高版)來概述。將分別對導致研究治療中斷之不利事件、分類為3或4級之彼等不利事件、研究藥物相關AE及SAE (包括死亡)進行製表。將提供所有AE、TEAE、SAE (包括死亡)及其歸因之以受試者為變數之清單。

臨床實驗室結果將藉由劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)及隨訪描述性地概述，其亦將包括對自基線之改變顯示。證明自基線至最差基線後實驗室值之改變(低/正常/高)之變換表將以劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)顯示在交叉製表中。亦將針對可應用分析物藉由劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)提供類似變換表，其證明在治療期期間自基線至最差基線後嚴重性等級的NCI CTCAE等級改變。將提供根據NCI CTCAE嚴重性等級(若可應用)、異常旗標(低或高)及後者之臨床顯著性的異常臨床實驗室資料清單。

圖形顯示(例如，「義大利麵式」圖表或盒式圖表)將提供用於關鍵實驗室分析物。

將藉由劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)及隨訪概述用於生命體徵之描述統計學，亦即觀察值及自基線之改變。將藉由劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)在交叉製表中顯示證明自基線至最差基線後值改變的變換表。生命徵象量測值將藉由受試者及藉由隨訪來列出。

將藉由劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)及隨訪使用描述統計學來概述ECG參數及自基線之改變。將使用頻數製表針對以下5個類別概述基線後異常QTc (QTcF及QTcB兩者)值： • QTc ＞ 450 msec • QTc ＞ 480 msec • QTc ＞ 500 msec • 自基線之QTc增加＞ 30 msec • 自基線之QTc增加＞ 60 msec

將藉由劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)在交叉製表中顯示異常(亦即，「正常」、「異常，但非臨床上顯著的」及「異常，臨床上顯著的」或「正常」及「異常」)之自基線至最差基線後品質評定變換。將提供藉由受試者、藉由隨訪之ECG參數清單。

不計劃正式的期中分析。將以進行中為基礎審查資料。

藉由利用EWOC原理之增量指導的適應性BLRM將用於在研究之增量階段期間做出劑量推薦且估計MTD (參考附錄E獲得另外的細節)。

將藉由以下貝氏邏輯迴歸模型描述研究之增量部分中之DLT關係：

其中p_j 為在劑量下之DLT率，d_j 為劑量位準，d * = 30 mg參考劑量，α為在d*下DLT之奇數。

基於針對在每一劑量下DLT之機率的來自臨床前資料及寬信賴區間之事前估計(中值)引出用於模型參數(log(α), log(β))之淡雙變數常態事前機率。在先MTD係基於臨床前資料假定為30 mg。針對第一劑量之DLT之機率係假定為低的。模型參數之事前分佈參數係基於構造弱資訊性的事前機率之方法來選擇，如Neuenschwander等人(2015)所述，且將其提供於表36中。表36. 模型參數之雙變數正態分佈的事前參數

臨時劑量位準為：1.25 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg、15 mg、22.5 mg、30 mg及37.5 mg。然而，可能的是針對試驗選擇的實際劑量位準可不同於臨時劑量位準，此基於出現的安全性資訊。

在受試者之每一小組之後，獲得在不同劑量位準下針對DLT率之機率的事後分佈。就所估計機率而言概述此分析之結果，在每一劑量位準下之真實DLT率將已處於以下間隔之每一者中： • 給藥情況下[0, 0.16) • [0.16, 0.33)靶向毒性 • [0.33, 1.00]過量毒性

遵照利用EWOC之增量之原理，在每一受試者小組之後，在滿足EWOC之劑量間，推薦劑量為DLT率之最高事後機率落入靶間隔[16%, 33%)中之劑量，亦即，不太可能(＜25%事後機率)的是在該劑量下之DLT率落入過量毒性間隔中。

應注意,最大化靶向毒性之事後機率的劑量為MTD之最佳估計，但根據超劑量標準，若資料量不足，則其可不為可容許劑量。若淡事前資訊用於DLT之機率，則在研究之早期階段，此增量程序將反映保守策略。

藉由適應性貝氏邏輯斯諦模型推薦的劑量可被認為是與在分析時在判定待研究之下一劑量位準中觀察到的毒性輪廓之臨床評定整合的指導及資訊。

將藉由非隔室分析方法，自化合物A之血漿濃度時間輪廓計算血漿PK參數，諸如化合物A之AUC、C_max 、T_max 、t_1/2 、CL/F及Vz/F。可在適當時計算其他PK參數。

將藉由標稱時間點、研究天及劑量小組來提供針對化合物A濃度之概述統計學，包括受試者數量(N)、平均值、標準偏差(standard deviation; SD)、變異係數(CV%)、幾何平均值、幾何CV%、中值、最小值及最大值。血漿濃度之平均值及個別曲線圖將以原始及半對數標度來呈現。亦將藉由研究天及劑量小組來提供針對化合物A PK參數之概述統計學且以表格形式呈現。

可進行針對化合物A之群體PK分析來探察血漿藥物暴露及貢獻因子(共變數)之個體間變化性。將探察化合物A劑量、血漿暴露及選定臨床端點(例如，毒性、有效性和/或生物標誌物之量度)之間的關係。群體PK模型與關於暴露反應之知識的組合可用於輔助鑑別用於部分B或2期研究之給藥方案。

將針對包括神經內分泌標誌物之生物標誌物，藉由劑量小組(部分A)或腫瘤類型(部分B)及隨訪來提供有關基線、基線後值及自基線之改變或自基線之百分比改變的描述統計學(N、平均值、SD、中值、min及max)。

將對受試者隨時間推移之生物標誌物結果繪圖。將藉由Wilcoxon符號秩檢驗執行在治療之前及治療期間的生物標誌物位準比較。若可獲得來自生物標誌物分析之足夠及有效結果，則將探察生物標誌物位準之百分比改變與包括ORR及CBR之臨床端點之間的關係。群體PK模型與關於暴露反應之知識的組合可用於輔助鑑別用於部分B或2期研究之給藥方案。不利事件

AE為可在研究過程期間在受試者中出現或惡化的任何有害、非所欲或不適當的醫學事件。其可為新的間發性疾患、正在惡化的伴隨疾患、受傷或受試者之健康的任何伴隨損傷，包括實驗室測試值，不管病原學如何。任何惡化(亦即，預先存在病狀之頻率或強度的任何臨床上顯著的不利改變)應考慮為AE。診斷或症候群應記錄在CRF之AE頁上而非診斷或症候群之個別徵象或症狀。

對研究產品之濫用、撤回、敏感性或毒性應報告為AE。意外或故意的超劑量，無論其是否相關聯於AE，皆應報告在超劑量CRF上。研究產品之意外或故意超劑量之任何後遺症應在AE CRF上報告為AE。若超劑量之後遺症為SAE，則後遺症必須報告在SAE報告單上及AE CRF上。導致SAE之超劑量應在SAE報告單及CRF上鑑別為事件之原因，但不應報告為SAE本身。

在超劑量之事件中，受試者應在適當時受監視，且應在必要時接收支援性措施。不存在針對化合物A超劑量之已知特定解毒劑。實際治療應取決於臨床病情之嚴重性及治療醫師之判斷及經驗。

將在研究期間監視所有受試者之AE。評定可包括監視任何或所有以下參數：受試者之臨床症狀，實驗室、病理學、放射性或外科發現，身體檢查發現，或來自其他測試和/或程序之發現。

將藉由研究員自受試者簽署知情同意書之時間直至化合物A之最後劑量之後的28天記錄所有AE，以及研究員在此後的任何時間得知的疑似與化合物A有關的彼等SAE。AE及SAE將記錄在CRF之AE頁上及受試者之源文件中。必須藉由傳真或其他適當方法，使用SAE報告單或經批准之等效表單在研究員知曉事件之24小時內向Celgene藥物安全機構報告所有SAE。

有資格的研究員將評估關於以下各項的所有不利事件：嚴重度 SAE為在任何劑量下發生的任何AE，其： • 導致死亡； • 為危及生命的(亦即，在研究員認為，受試者處於因AE而死亡之直接風險下)； • 需要住院病人住院或延長現存住院(住院係定義為收容住院病人，不管停留長度)； • 導致持續或顯著的無能/無力(受試者實施正常生命功能之能力的實質破壞)； • 為先天性反常/天生缺陷； • 構成重要的醫學事件。重要的醫學事件係定義為可不為立即危及生命的或導致死亡、住院或無能，但可危害受試者或需要醫學或外科介入來阻止上文所列之其他後果之一。應在決定此AE是否應考慮為嚴重的方面訓練醫學及科學判斷力。不考慮為SAE之事件為住院，因為： • 用於協定療法投與之標準程序。然而，因為療法投與之複雜化而住院或延長住院將報告為SAE。 • 對不相關聯於任何條件惡化之研究適應症之常規治療或監視。 • 血液或血小板轉輸之投與係作為研究適應症之常規治療。然而，由於此種轉輸之複雜化而住院或延長住院仍為可報告之SAE。 • 用於協定/疾病相關研究之程序(例如，外科術、掃描、內視鏡檢查、用於實驗室測試之取樣、骨髓取樣)。然而，由於此種程序之複雜化而住院或延長住院仍為可報告之SAE。 • 在不存在AE之情況下，由於技術、實踐或社會原因之住院或住院延長。 • 經計劃之程序(亦即，在研究中治療開始之前計劃)；必須記載於源文件及CRF中。由於複雜化而住院或延長住院仍為可報告之SAE。 • 與研究適應症無關的用於預先存在病狀之選擇性治療或選擇性程序，該病狀未自基線惡化。 • 不導致收容的緊急門診治療或觀察，除非滿足上文的其他嚴重度標準。若AE係考慮為嚴重的，則必須完成CRF及SAE報告單之AE頁/螢幕。對於每一SAE，研究員將提供關於嚴重性、開始及停止日期、與IP之關係、關於IP採取之行動及後果之資訊。嚴重性/強度對於AE及SAE，研究員必須評定事件之嚴重性/強度。AE之嚴重性/強度將基於受試者之症狀，根據不利事件之通用術語標準(Common Terminology Criteria for Adverse Event; CTCAE，4.0版)之當前有效小型版本來分級；http://ctep.cancer.gov/protocolDevelopment/electronic_applications/ctc.htm#ctc_40 未定義在CTCAE中之AE應根據以下標度來評估嚴重性/強度： • 1級=輕度-暫態或輕度不適；活動不受限制；不需要醫學介入/療法 • 2級=中度-活動受輕度至中度限制，可需要一些輔助；不需要醫學介入/療法或需要最小程度的醫學介入/療法 • 3級=嚴重-活動受顯著限制，通常需要一些輔助；需要醫學介入/療法，住院為可能的 • 4級=危及生命-活動受極端限制，需要顯著的輔助；需要顯著的醫學介入/療法，可能住院或安寧房照護 • 5級=死亡-事件導致死亡] 術語「嚴重」常常用於描述特定事件之強度(如輕度、中度或嚴重心肌梗塞)；然而事件本身可具有相對微小之醫學顯著性(諸如嚴重頭痛)。此標準不與基於受試者/事件後果或相關聯於對受試者之生命或功能執行帶來威脅的事件之行動標準之「嚴重的」相同。嚴重度非嚴重性係充當用於定義管制義務之指導。因果性研究員必須判定IP之投與同如下文定義的非疑似或疑似AE/SAE之發生之間的關係：非疑似：不利事件與IP投與之因果關係不可能或關係疏遠，或其他藥物、治療性介入或隱伏病狀提供對所觀察事件之足夠解釋。疑似：存在IP之投與引起不利事件之合理可能性。合理可能性意指有證據暗示IP與不利事件之間的因果關係。應評定因果性且基於當前可獲得之資訊針對每一AE/SAE來提供。當另外的資訊變得可獲得時，將重新評定並提供因果性。若將事件評定為疑似與尚未藉由Celgene製造或提供的比較者、輔助或另外的CC--90011有關，則請在報告該事件時提供製造商之名稱。持續時間對於AE及SAE兩者，研究員將提供對該事件之開始及停止日期之記錄。所採取之行動研究員將在可應用時報告隨由於AE或SAE之IP而採取之行動(例如，中斷(discontinuation)、中斷或IP之劑量減少，在適當時)且若伴隨和/或另外的治療係針對該事件給出，則進行報告。後果研究員將報告針對AE及SAE兩者的事件後果。在中斷受試者參與研究之後尚未解決的所有SAE必須被追蹤直至恢復(返回至基線)，恢復並有後遺症，或死亡(歸因於SAE)。

若異常為以下各項，則異常實驗室值係考慮為AE： • 導致自研究中斷； • 需要治療、化合物A劑量之修改/中斷或任何其他治療性介入；或 • 被判斷為具有顯著臨床重要性，例如，指示新疾病過程和/或器官毒性，或為現存病狀之加劇或惡化之異常。

不管嚴重性等級，僅滿足嚴重度標準之實驗室異常需要記載為嚴重不利事件。

若實驗室異常為診斷或症候群之一個分量，則僅診斷或症候群應記錄在CRF之AE頁/螢幕上。若異常不為診斷或症候群之一部分，則實驗室異常應記錄為AE。若可能，則實驗室異常應記錄為醫學術語且非簡單地記錄為異常實驗室結果(例如，記錄血小板減少症而非減小的血小板)。

在具有生育潛力之女性受試者或男性受試者之具有生育潛力之伴侶中發生的所有懷孕或疑似懷孕係直接可報告事件。任何懷孕女性(例如，照護者、藥劑師、研究協調者或監視者)對化合物A之暴露亦為直接可報告事件。

在受試者服用化合物A的同時或在受試者之最後劑量之化合物A的90天內發生懷孕及疑似懷孕(包括具有生育潛力之女性受試者中升高的β-hCG或陽性妊娠測試，不管疾病狀態)係考慮為直接可報告事件。研究產品將立即予以中斷。必須立即藉由電子郵件、電話或傳真，或其他適當方法，使用懷孕初始報告單或經批准之等效表單向Celgene藥物安全機構報告懷孕、疑似懷孕或陽性妊娠測試。

女性受試者應聯絡產科醫生-婦科醫師、較佳在生殖毒性方面有經驗的婦科醫師以做進一步評估及忠告。研究員將追蹤女性受試者直至懷孕完成，且必須立即使用懷孕追蹤報告單或經批准之等效表單通知Celgene藥物安全機構關於懷孕之後果(正常或異常後果)。

若懷孕之後果為異常(例如，自發流產)，則研究員應報告異常後果為AE。若異常後果滿足任何嚴重標準，則必須藉由傳真或其他適當方法在研究員知曉事件之24小時內，使用SAE報告單或經批准之等效表單向Celgene藥物安全機構報告該異常後果為SAE。

不考慮因果性，應報告在出生之28天內發生的所有新生兒死亡為SAE。另外，在28天之後研究員懷疑與在子宮暴露於化合物A有關的任何嬰兒死亡亦應藉由傳真或其他適當方法，在研究員知曉事件之24小時內使用SAE報告單或經批准之等效表單向Celgene藥物安全機構報告。

若服用化合物A之男性受試者之女性伴侶變為懷孕，則服用化合物A之男性受試者應通知研究員，且懷孕女性伴侶應被建議立即致電給其保健提供者。在可應用的情況下，化合物A可需要在男性受試者中之中斷，但可稍後在研究員及醫學監視者之裁量下恢復。

滿足針對SAE之任何標準的任何AE需要除記錄在CRF之AE頁/螢幕上之外的SAE報告單之完成。必須藉由傳真或其他適當方法(例如，經由電子郵件)，使用SAE報告單或經批准之等效表單，在研究員知曉事件之24小時內向Celgene藥物安全機構報告所有SAE。此說明係關於初始SAE報告以及任何追蹤報告。

要求研究員確保關於此等表單之資料係準確且一致的。此要求適用於在研究期間(自受試者簽署知情同意書之時間直至最後劑量之化合物A之後28天)發生的所有SAE (不管與化合物A之關係)或在其後任何時間研究員得知的疑似與化合物A有關的任何SAE。將俘獲在治療之前(在簽署ICD之後)發生的嚴重不利事件。

SAE報告應提供對SAE之詳細描述且包括醫院記錄及其他相關文件之簡明概述。若受試者死亡且已執行屍體解剖，則屍體解剖報告及死亡證明書之複本將在此等複本變為可獲得時就發送至Celgene藥物安全機構。任何追蹤資料應於後續SAE報告單或經批准之等效表單中詳述，且發送至Celgene藥物安全機構。

在當地立法要求的情況下，研究員負責通知SAE之人體試驗委員會/倫理委員會(Institutional Review Board/Ethics Committee; IRB/EC)，且向其提供關於該事件之所有相關初始及追蹤資訊。研究員必須在包括與Celgene及IRB/EC通信的檔案上保存所有SAE資訊之複本。

關於SAE之查詢將經由傳真或電子郵件自Celgene藥物安全機構傳達至場所。反應時間預期不超過五(5)個工作日。緊急查詢(例如，遺漏的因果性評定)可藉由電話來操作。

出於管制報告之目的，Celgene藥物安全機構將基於研究員手冊來判定疑似與化合物A有關的事件之預期性。

在美國，所有疑似非預期嚴重不利反應(suspected unexpected serious adverse reaction; SUSAR)將根據21 CFR 312.32以快速方式來報告。]

對於歐洲經濟區 (European Economic Area; EEA)內之國家而言，Celgene或其授權代表將以快速方式根據指引2001/20/EC及關於自對研究產品用於人類使用之臨床試驗(ENTR/CT3)產生的不利反應之收集、驗證及呈現的詳細指導以及根據國家特定的要求而向管制機關及倫理委員會報告受關注的、疑似非預期嚴重不利反應(suspected unexpected serious adverse reaction; SUSAR)。

諸如疾病進程、與疾病進程有關之死亡(在不存在嚴重化合物A相關事件的情況下)及歸因於研究適應症之復發性的嚴重事件的不利事件將不經受藉由贊助商向管制機關之加快報告。

Celgene或其授權代表應通知研究員以下資訊： • 疑似與在此研究中或在嚴重及非預期之其他研究(例如，SUSAR)中使用化合物A有關的任何AE； • 來自實驗室動物之測試的暗示人類受試者之顯著風險的任何發現，包括致突變性、致畸形性或致癌性之報告。

在當地立法要求的情況下，研究員應迅速地通知他/她的IRB/EC此等新的嚴重及非預期AE或對受試者之顯著風險。

研究員必須在包括與Celgene及IRB/EC通信的檔案上保存所有切合的安全性資訊之複本。中斷

以下事件係將受試者中斷研究產品所考慮的充分原因： • 不利事件 • 藉由受試者撤回 • 缺乏效力 • 醫師決定 • 協定違反 • 進行性疾病 • 死亡 • 追蹤丟失 • 其他(待在CRF上指定)

治療中斷之原因應記錄在CRF及源文件中。在不利事件之後治療中斷之情況下，將進行每一工作來追蹤受試者歷時最後劑量之化合物A之後的28天。

對使受試者中斷治療之決定仍為治療醫師之職責，其將不會藉由贊助商延遲或拒絕。然而，在中斷受試者之前，研究員可聯絡醫學監視者且轉發適當的支援文件以供審查及討論。

應注意：感覺為臨床上顯著的諸如嗜中性球減少症、血小板減少症、其他異常等等之任何實驗室結果應被追蹤直至返回基線或1級。

以下事件係將受試者中斷研究所考慮的充分原因： • 篩選未通過 • 藉由受試者撤回 • 缺乏效力 • 醫師決定 • 協定違反 • 進行性疾病 • 死亡 • 追蹤丟失 • 其他(待在CRF上指定)

研究中斷之原因應記錄在CRF及源文件中。緊急程序

在緊急情形中，研究員應藉由電話根據列在協定之緊急聯絡人資訊頁(標題頁之後)上之號碼來聯絡負責的贊助商之研究醫師/醫學監視者或被指定人。

在贊助商之研究醫師/醫學監視者或被指定人無法獲得的不太可能事件中，請藉由電話根據列在協定之緊急聯絡人資訊頁(標題頁之後)上之號碼來聯絡全球緊急呼叫中心。此全球緊急呼叫中心為全天24小時及全週7天可用的。代表負責用於獲得您的回撥資訊並聯絡值班Celgene/合同研究組織醫學監視者，其將隨後迅速地聯絡您。

應注意：應僅在您不能接通用於緊急呼叫之贊助商之研究醫師或醫學監視者或被指定人的情況下使用備用的24小時全球緊急聯絡呼叫中心。

此為開放標記研究；因此，化合物A將在封裝標記上鑑別。登記進入此研究中之受試者將被頒與身份卡，其展示此研究之名稱及緊急聯絡號碼。此可藉由尋找關於參與研究中之受試者的緊急資訊的保健專業人士使用。管制考慮

在此研究協定中陳述的關於此研究之進行、評估及文件記載的程序係設計來確保Celgene、其授權代表及研究者遵守優良臨床試驗規範(Good Clinical Practice; GCP)，如國際協調會議 (International Conference on Harmonisation; ICH)準則E6所述及根據赫爾辛基宣言(Declaration of Helsinki)中概述的通用倫理原理。研究將在開始之前接收來自IRB/EC之批准。研究員將根據切合的管制機關之可應用的國家、州及地方法律進行此研究之所有態樣。

研究者職責係陳述在用於優良臨床試驗規範之ICH準則中及在當地規章中。Celgene工作人員或授權代表將評估並批准所有研究者，該等研究者又將選擇其工作人員。

研究員應確保輔助研究之所有人被充分通知關於協定、修正、研究治療以及研究相關責任及功能(包括Celgene資訊之機密性之義務)。研究員應維持亞研究者及其他適當有資格人員之清單，他或她對該等人員具有委派的顯著研究相關責任。

研究員負責保存所有簽署知情同意書(informed consent form; ICD)之受試者的記錄並且針對進入研究中來篩選。未能通過篩選之受試者必須具有記錄在受試者之源文件中的原因。

研究員或研究員之工作人員之指定成員必須在監視隨訪期間為可獲得的以審查資料，解決查詢且允許直接存取受試者記錄(例如，醫學記錄、辦公室圖表、醫院圖表及研究相關圖表)以獲得源資料驗證。研究員必須及時確保且準確完成CRF及查詢。

協定及修正中含有的資訊(除藉由Celgene在公共註冊網站上提供的資訊外)係考慮為Celgene機密資訊。僅先前藉由Celgene在公共註冊網站上揭示的資訊可藉由研究員或其機構自由揭示，或概述在臨床試驗協議中。在沒有Celgene之明確書面批准的情況下，Celgene協定、修正及IB資訊不得製作為公眾可獲得的(例如，在研究員或其機構之網站上可獲得)。用於發表在研究員之或其機構之網站上所建議的資訊必須提交至Celgene以供審查及批准，提供至少5個工作日以供審查。

在此研究之結果對公眾可獲得時，Celgene將提供研究者對結果之概述，其係針對外行人來撰寫。研究員負責將此等結果與受試者和/或在受試者所同意時其照護者共享此等結果。

研究員必須在任何研究相關程序之前獲得受試者和/或受試者之法定代表之知情同意。

對在研究受試者進入研究之前發生的知情同意及知情同意過程之文件記載應記錄在研究受試者之源文件中，包括日期。在研究受試者進入研究中之前由研究受試者及同意研究受試者之人員所簽署並記錄日期之原始ICD必須維持在研究員之研究檔案中且將複本給予研究受試者。另外，若協定為修正的，且其影響知情同意之內容，則必須修訂ICD。當實行修正協定時參與研究之研究受試者必須以ICD之修訂版本來重新同意。由研究受試者及同意研究受試者之人員所簽署並記錄日期之修訂ICD必須維持在研究員之研究檔案中且將複本給予研究受試者。

Celgene確認受試者保護隱私侵犯且遵照ICH及其他當地規章(無論何者為最嚴格的)之權利。Celgene需要研究員允許Celgene之代表及必要時來自管制機關之代表根據當地法律審查和/或複製與研究有關之任何醫學記錄。

若直接存取醫學記錄需要與簽署ICD之受試者分開的豁免或授權，則研究員之職責係獲得來自適當個體之此種書面許可。

對此協定之任何修正必須藉由贊助商之研究醫師/醫學監視者批准。修正將提交至IRB/EC以供書面批准。書面批准必須在修正版本之實行發生之前獲得。來自IRB/EC之書面簽署批准應特定地引用研究員名稱、協定編號、研究標題及可應用的修正編號。行政修正本質上不需要IRB/IEC批准，但將提交至IRB/IEC以達資訊目的。

在研究中實質修正的時間中，相應修正將提交至每一國家之勝任管制機關，且將不予實行直至其已獲批准。

在研究開始之前，研究協定、ICD及任何其他適當文件將以封面信件或列出所提交文件、其頒與日期及針對其之批准為當地法律要求之場所(或管轄權區或區域，如可應用的)之表單提交至IRB/EC。

在關於用於開始研究之所有倫理及法律要求的文件記載已藉由Celgene或其授權代表接收之後，IP可僅藉由Celgene或其授權代表供應至研究者。此文件記載亦必須包括IRB/EC之成員及其職業及資格之清單。若IRB/EC不揭示委員會成員之名稱、職業及資格，則應詢問來頒與確認委員會之組成係根據GCP之陳述。例如，IRB通用保證編號可作為對此清單之替代物來接收。藉由IRB/EC之正式批准應提及協定標題、編號、修正編號(若可應用)、研究場所(或管轄權區或區域，如可應用的)及審查的任何其他文件。必須提及做出決定之日期且必須藉由委員會成員官方簽署。在第一位受試者登記進入研究中之前，所有倫理及法律要求必須得以滿足。

IRB/EC及若可應用時機關必須得知根據當地法律要求之所有後續協定修正。必須評估修正來判定是否必須尋求正式批准及是否亦應修訂ICD。

研究員必須保持與IRB/EC之所有通訊且若可應用則協調研究者與IRB/EC之間的所有通訊之記錄。此陳述亦適用於研究員(或協調研究者，若可應用)與管制機關之間的任何通訊。

用於招募研究之受試者的任何廣告必須藉由Celgene及IRB/EC在使用之前予以審查。

若立法或IRB/EC要求，則研究員必須提交至IRB/EC以下各項： • 儘可能快地關於嚴重或非預期不利事件之資訊； • 對研究進程之定期報告； • 與協定之偏差或可涉及對受試者之添加風險的任何事物。

Celgene保留在任何時間由於合理醫學或行政原因而過早地終止此研究之權利。任何過早中斷將根據當地要求(例如，IRB/EC、管制機關等等)來適當地記載。

另外，研究員或Celgene具有在研究期間任何時間由於醫學或行政原因而中斷單一場所之權利，該等原因諸如： • 不滿意的登記； • GCP不符； • 不準確或不完全資料收集； • 記錄之偽造； • 未能遵循研究協定。資料處理及記錄保存

研究員必須確保關於研究之進行的記錄及文件，且研究產品之分佈係完整的、準確的、存檔及保留。源文件之實例包括：醫院記錄；診所及辦公室圖表；實驗室註釋；備忘錄；受試者之日記或評估檢核表；分配記錄；來自自動化儀器之記錄資料；在驗證之後證明為準確複本的複本或抄錄；微縮膠片；X光膠片及報告；及在藥房及實驗室處保存的記錄，以及CRF或CD-ROM之複本。

資料將經由CRF收集且根據Celgene SOP而輸入臨床資料庫中。此資料將經由使用藉由臨床團隊指定的程式化編輯檢查來電子地驗證。資料中之偏差將得到臨床團隊且必要時研究場地工作人員之注意。此等問題之解決方案將反映在資料庫中。系統內之稽查蹤跡將追蹤對資料做出之所有改變。

必需文件必須藉由研究員根據在臨床試驗協議中概述的時間段來保留。研究員必須保留此等文件達上文所述的時間段或根據當地法律或要求來保留，以較長者為準。必需文件包括但不限於以下： • 所有受試者所簽署之ICD； • 受試者鑑別碼清單，篩選日誌(若可應用)，及登記日誌； • 研究員與IRB/EC之間的所有通訊之記錄； • IRB/EC之組成； • 研究員、Celgene與其授權代表之間的所有通訊之記錄； • 亞研究者及研究員已委託顯著研究相關責任至其的其他適當有資格人員之清單，連同其在研究中之角色、履歷及其簽字； • CRF之複本(若紙質)及用於所有受試者之校正的文件記載之複本； • IP可歸責性記錄； • 所保留任何體液或組織樣本之記錄； • 所有其他源文件(受試者記錄、醫院記錄、實驗室記錄等等)； • 如GCP (用於臨床試驗之進行的必需文件)上ICH合併準則之部分8中所列之所有其他文件。

若他/她希望將必需文件指派至其他人，將該等必需文件移除至另一位置或不能將其保留達特定時期，則研究員必須通知Celgene。在任何記錄之破壞之前，研究員必須獲得Celgene之書面批准。若研究員不能滿足此義務，則研究員必須詢問Celgene來獲得做出替代佈置之許可。此等佈置之細節應予以記載。

所有研究文件應在需要時藉由相關健康機關製作為可獲得的。研究者或機構應採取措施來阻止對此等文件之意外或過早破壞。品質控制及品質保證

研究之所有態樣將藉由Celgene或其授權代表針對相對於當前GCP及SOP與可應用政府規章之符合來謹慎地監視。

Celgene確保適當的監視程序在研究之前、期間及之後執行。研究之所有態樣係由研究員及工作人員在研究初始隨訪和/或在研究員之會議時審查。在將受試者登記進入研究中，Celgene代表將審查協定、CRF、程序以由研究員獲得知情同意、記錄保存並報告AE/SAE。監視將包括由研究員及他/她的工作人員現場隨訪以及藉由郵件、電子郵件、傳真或電話之任何適當通訊。在監視隨訪期間，設施、研究產品儲存區域、CRF、受試者之源文件及所有其他研究文件記載將藉由Celgene代表根據研究監視計劃檢查/審查。

準確度將藉由執行源資料驗證來檢查，該源資料驗證為在CRF進行的條目相對適當源文件記載之直接比較。將由研究員和/或他/她的工作人員審查任何所得偏差。任何必要的校正將藉由研究員和/或他/她的工作人員對CRF直接做出或經由查詢來做出。監視程序需要知情同意、遵循SAE之納入/排除標準及文件記載及驗證其適當記錄。另外的監視活動可概述在研究特定監視計劃中。

除常規監視程序之外，優良臨床試驗規範品質保證單位存在於Celgene內。此單位之代表將進行根據Celgene SOP之臨床研究活動審計以評估與優良臨床試驗規範準則及規章之符合。

要求研究員允許直接進出研究進行之設施、直接存取源文件、CRF及研究受試者參與之可應用支援性記錄以供藉由IRB/EC、管制機關 (例如，FDA、EMA、Health Canada)及公司授權代表審計及檢查。研究員應使每一工作對審計和/或檢查可獲得的。若研究員藉由任何管制機關關於檢查來聯絡，則他/她應立即聯絡Celgene。公開

除藉由Celgene在公共註冊網站上提供的資訊外之所有協定及修正相關資訊係考慮為Celgene機密資訊且不用於任何公開物中。針對用於公開物中所建議的Celgene協定相關資訊必須提交至Celgene以供審查及批准，且在沒有來自Celgene之明確書面批准或如臨床試驗協議所述的情況下，不應用於公開物中。

Celgene將確保Celgene贊助之研究係考慮用於公開在同儕審查期刊中之科學文獻中，不管結果如何。在最少情況下，此適用於來自所有3期臨床研究之結果及具有顯著醫學重要性之任何其他研究結果。此亦包括關於已中斷研發計劃的研究醫藥之結果。

研究結果亦可在一或多個醫學代表大會呈現，且可用於科學交流及教授目的。另外，此研究及其結果可提交以用於納入所有適當的健康機關研究註冊，以及在健康機關研究註冊網站上之公開物，按藉由當地健康機關規章所要求的。

針對外部來源之合格性以及第一來源之選擇將基於若干考慮，包括但不限於對協議開發之貢獻、研究招募、資料品質、參與資料分析、參與研究指導委員會(當可應用時)及對摘要、簡報和/或公開發佈之貢獻。附錄A：縮寫表附錄B：RECIST 1.1版以下資訊係提取/概述自Eisenhauer, 2009, New Response Evaluation Criteria in Solid Tumors :修訂的RECIST準則(1.1版)。請參考主要參考文獻來獲得進一步資訊。定義在篩選時，腫瘤病灶/淋巴結將分類為可量測的或不可量測的。可量測的疾病腫瘤病灶. 必須在至少一個維度(將記錄量測平面中之最長直徑)中準確地量測以下最小大小： • 藉由CT掃描(CT掃描切片厚度不大於5 mm)之10 mm • 藉由臨床檢查之10 mm卡鉗量測值(無法利用卡鉗準確量測之病灶應記錄為不可量測的) • 藉由胸部X射線之20 mm 惡性淋巴結：為在病理學上考慮為擴大及可量測的，當藉由CT掃描(CT掃描切片厚度推薦為不大於5 mm)評定時，淋巴結必須在短軸中為≥15 mm。在基線及追蹤中，將僅量測並沿短軸進行。不可量測的疾病所有其他病灶，包括小病灶(最長直徑＜10 mm或具有≥10至＜ 15 mm短軸之病理學淋巴結)以及真實不可量測的病灶。考慮為真實不可量測的病灶包括：軟細腦膜疾病、腹水、胸膜或心包滲液、炎性乳房疾病、皮膚或肺之淋巴管炎牽連、藉由身體檢查鑑別的不可藉由可再現成像技術量測的腹部塊狀物/腹部器官巨大(abdominal organomegaly)。腫瘤反應評估靶病灶：當超過一個可量測的腫瘤病灶在基線時存在，代表所有受牽連器官的至多最大值為總共五個病灶之所有病灶(及每個器官最大值為2個病灶)之所有病灶應鑑別為靶病灶且將在基線時記錄並量測。靶病灶應基於其大小(具有最長直徑之病灶)來選擇，其代表所有受牽連器官，但另外應為使其自身可再現重複量測之彼等病灶。應注意，病理學結必須滿足藉由CT掃描之≥15 mm之短軸的可量測標準且僅此等結之短軸將貢獻至基線總和。所有其他病理學結(短軸≥10 mm但＜ 15 mm之彼等結)應考慮為非靶病灶。具有＜ 10 mm之短軸的結係考慮為非病理學的且不應記錄或跟隨進行。在基線，將記錄靶病灶之總和(腫瘤病灶之最長直徑加淋巴結之短軸：總最大值為5)。在基線之後，應在eCRF上針對用於每一評定之所有經鑑別靶病灶提供一值，即使極小亦如此。若極小及極微之病灶無法準確地量測但被認為存在，則可使用5 mm之預設值。若病灶過小而無法量測且的確據信其不存在，則可使用0 mm之預設值。非靶病灶：所有不可量測的病灶(或疾病位點)加超出並高於列為靶病灶之彼等者的任何可量測病灶係考慮為非靶病灶。不需要量測，但此等病灶應在基線加以注意且應就「存在」、「不存在」或「明確進程」而言來追蹤。反應標準：單獨地評估靶及非靶病灶之反應，且隨後總體上將腫瘤負荷評估為總反應。靶病灶反應：靶病灶係如下評定： • 完全反應(Complete Response; CR). 所有靶病灶消失。任何病理學淋巴結(無論靶或非靶)必須具有短軸至＜ 10 mm之減少。 • 部分反應(Partial Response; PR). 靶病灶直徑總和之至少30%減小，以基線總和直徑為參考。 • 進行性疾病(Progressive Disease; PD). 靶病灶直徑總和之至少20%增加，以研究之最小總和(此包括基線總和，若其為研究之最小值)為參照。除20%之相對增加之外，總和亦必須證明至少5 mm之絕對增加。(注意：一或多個新病灶之出現亦考慮為進程)。 • 穩定疾病(Stable Disease; SD). 既無針對PR定性的足夠縮減亦無針對PD定性的足夠增加，以在研究同時直徑之最小總和為參考。非靶病灶反應：非靶病灶將如下評定： • 完全反應(Complete Response; CR). 所有非靶病灶之消失及腫瘤標誌物位準之正常化。所有淋巴結必須在大小上為非病理學的(＜ 10 mm短軸)。 • 非-CR/非-PD。一或多個非靶病灶之持續和/或維持腫瘤標誌物位準高於正常極限。 • 進行性疾病(Progressive Disease; PD). 現存非靶病灶之明確進程(參見下文注釋)。(注意：一或多個新病灶之出現亦考慮為進程)。當受試者亦患有可量測的疾病時：在此設定中，為達成基於非靶疾病之「明確進程」，必須存在非靶疾病之實質惡化的總位準，甚至在靶疾病中存在SD或PR之情況下亦如此，總體腫瘤負荷已充分增加以便應中斷療法。一或多個非靶病灶之大小的中度「增加」通常不足以定性明確進程狀態。僅僅基於非靶疾病在靶疾病之SD或PR方面的改變來指定總體進程因此將為極罕見的。當受試者僅患有不可量測的疾病時：此情況導致在其不為具有可量測的疾病之研究進入標準時的一些3期試驗。如上文指出的相同一般概念在此適用；然而，在此情況下，不存在對解釋不可量測的疾病負荷之增加的因素的可量測疾病評定。因為非靶疾病之惡化無法輕易量化(根據定義：若所有病灶為真實不可量測的)，所以當針對明確進程評定受試者時可應用的有用測定將考慮基於不可量測的疾病之改變的總體疾病負荷之增加是否在量值可相當於宣告可量測的疾病之PD所要求的增加：亦即表示「體積」之另外73%增加之腫瘤負荷增加(其等效於可量測的病灶之直徑的20%增加)。實例包括胸膜滲出液自「痕量」至「大量」之增加、淋巴管炎疾病自局部化至遍佈之增加，或在協定中可描述為「足以需要療法之改變」。若看到「明確進程」，則受試者應考慮為必須在彼點具有總體PD。儘管具有適於不可量測的疾病之目標標準為理想的，但彼疾病之真正性質使其不可能進行：因此，增加必須為實質的。總反應：總反應應根據針對患有靶病灶之受試者的表A及針對僅患有非靶病灶之受試者的表B來評定。表A：時間點反應：患有靶(±非靶)疾病之受試者 CR =完全反應、PR =部分反應、SD =穩定疾病、PD =進行性疾病、NE =不可評估。表B：時間點反應：僅患有非靶疾病之受試者 CR =完全反應、PR =部分反應、SD =穩定疾病、PD =進行性疾病、NE =不可評估。^a 非-CR/非-PD相比針對非靶疾病之「穩定疾病」為較佳，因為SD越來越多地用作一些試驗中評定效力之端點，因此不建議在沒有病灶可量測時指派此類別。症狀性惡化具有需要中斷治療健康狀態之整體惡化而在彼時沒有疾病進程之客觀證據的受試者應報告為「症狀性惡化」。應進行每次工作來記載甚至在中斷治療之後的目標進程。症狀性惡化不是目標反應之描述符：其為停止研究療法之原因。此類受試者之目標反應狀態將藉由靶及非靶疾病之評估來判定。附錄C：針對惡性淋巴瘤的修訂反應標準針對惡性淋巴瘤之國際工作組修訂反應標準(Cheson, 2007)可在：http://jco.ascopubs.org/cgi/reprint/25/5/579線上訪問附錄D：表現狀態標準表37.東岸癌症臨床研究合作組織(Eastern Cooperative Oncology Group; ECOG)表現狀態附錄E：貝氏邏輯迴歸模型之特性用於利用超劑量控制(Babb, 1988)之劑量增量的適應性貝氏邏輯迴歸模型(Neuenschwander, 1998)將用於指導此研究中之劑量增量。此附錄之目的將為提出效能度量(操作特性)，其說明在各種劑量-毒性關係下經由電腦模擬來估計MTD之設計的精度。另外，藉由利用超劑量控制原理之BLRM推薦下一劑量位準係早期小組(為簡單起見假定每一小組中有剛好3位可評估患者)中在各種假想後果情形下提供以展示其如何促進研究中之劑量增量決定。模擬研究之規範及結果此部分提出操作特性，其說明在各種假定真實劑量-毒性關係下估計MTD之設計的精度。在總共5個真實劑量-DLT關係情形下執行用於BLRM之模擬(參考表38)： 1. 劑量-DLT關係係陡曲線且MTD在早期劑量位準下達到(SE)。 2. 劑量-DLT關係係陡曲線且MTD在中間劑量位準下達到(SM)。 3. 劑量-DLT關係係陡曲線且MTD在晚期劑量位準下達到(SL)。 4. 劑量-DLT關係係平坦曲線且MTD在中間劑量位準下達到(FM)。 5. 劑量-DLT關係係平坦曲線且MTD在晚期劑量位準下達到(FL)。表38：針對五種模擬情形之P(DLT)，其中灰色數字指示具有在靶毒性間隔[16%, 33%]內之真實P(DLT)的劑量審查操作特性來研究每一真實情形下BLRM之總體效能。表39概述來自所執行模擬之結果。表39：對BLRM模擬之概述度量及與3+3之比較總之，合理地執行具有指定事前機率之BLRM模型。利用相似或大一點的樣本大小，BLRM模型可在靶範圍內以較高機率選擇MTD，尤其對情形1、2及4而言如此。除上文研究的總體操作特性外，設計應在研究期間基於所觀察到的毒性而做出合理決定。在給定小組完成之後，對選擇用於後續小組之劑量逐漸增量及實際劑量之決定將取決於根據EWOC原理及對可獲得的臨床及實驗室資料之醫學審查而對BLRM之推薦。說明劑量增量至多第三劑量小組之一些情形在表40中使用2參數BLRM來列出。假定每一小組剛好具有3位可評估患者。表40：至多每一小組具有三位受試者之第三給藥小組的可能情形再次，針對假想劑量增量情形合理地執行BLRM模型。貝氏邏輯迴歸模型致能吾等合併臨床前資訊，以及基於研究中之所有安全性資料來更新所推薦劑量。藉由審查表中呈現的度量，可見模型對不同的事實情形不敏感。一般而言，此模型歸因於超劑量控制標準而為保守的。在所有情形中，推薦毒性過量的具有真實P(DLT)≥33%之劑量的機率遠小於推薦真實P(DLT)在16%與33%之間的劑量作為MTD之彼機率。基於模型之研究中推薦與臨床決定做出過程一致，且應與藉由Celgene臨床試驗團隊及研究研究者在決定待測試之劑量位準以便判定MTD之其他可獲得臨床資訊結合考慮。附錄F：針對治療誘導腹瀉之管理的推薦提供於第38圖中之公開準則(Benson, 2004)經修改以便與研究協定一致。附錄G：生物試樣之管理此為對實驗室手冊之補充說明。樣本操縱及儲存針對作為此研究之部分的不為耗盡追蹤分析的生物標誌物及遺傳研究所收集的所有血液及組織樣本將被儲存以供在該研究完成之後至多5年的研究中使用。經受試者同意，儲存將延展至該研究完成之後的20年以供未來研究以便關於癌症及其他疾病做更多學習。樣本將儲存在針對長期樣本儲存而設計的安全實驗室設施中，該實驗室設施具有適當的進出控制、監視及備用系統。樣本編碼所有生物標誌物及遺傳研究樣本將僅藉由代碼(受試者鑑別碼)來鑑別。此等樣本將不具有關於它們的任何其他個人資訊。研究醫生將保存代碼密鑰。樣本及代碼密鑰將機密並單獨保存。執行對樣本之測試的研究員將僅看見代碼且不會參見特定地鑑別出受試者之任何資訊。對血液及組織樣本之研究生物標誌物及遺傳研究樣本將藉由贊助商或藉由贊助商簽約之公司來測試以供未來研究以便關於癌症及其他疾病做更多學習。此包括判定血液細胞或腫瘤細胞中之生物標誌物是否證明化合物A為生物學上活性的。報告及生物標誌物及遺傳結果之可利用性生物標誌物及遺傳研究樣本測試結果將不與受試者、保險公司亦不與不涉及如上文所述之樣本分析的任何其他第三方共享。結果將不在受試者之醫學記錄中存檔。測試結果係僅用於研究目的且不用於做出關於受試者之常規醫療照護之決定。受試者之名稱及身份將不會在公開物或報告中提及，進而最小化心理學或社會風險之可能性，該等風險可起因於對此生物標誌物及遺傳資訊之知曉，諸如可雇傭性或可保險性之風險或歧視之風險。在撤回同意之後請求樣本破壞之機制若受試者撤回對參與研究之同意，則其可另外請求使其生物標誌物及遺傳研究樣本破壞。在此等情況下，受試者將通知研究醫生同意已遭撤回且請求使任何儲存的未使用樣本破壞。任何未使用樣本將隨後藉由贊助商破壞。然而，若在撤回同意之前分析了樣本，則贊助商可仍使用已可獲得之資料。若受試者同意允許生物標誌物及遺傳研究樣本被保存20年以供未來研究，則其亦在任何時間自由地完全反轉彼決定。受試者將通知研究醫生對用於未來研究之樣本已撤回許可。任何未使用樣本將隨後藉由贊助商破壞。然而，若在撤回同意之前分析了樣本，則贊助商可仍使用已可獲得之資料。附錄H：Child-Pugh分類具有Child-Pugh A分類而無肝性腦病變之受試者滿足用於研究之此個體納入標準。表41：Child-Pugh分類來源：Pugh, 1973。 INR =國際正規化比率。附錄J：前列腺癌臨床試驗工作組(PCWG23) 關於針對患有進行性前列腺癌及閹割位準之睪固酮的患者(Scher, 20082016)之設計及臨床試驗端點的PCWG23推薦可在：http://jco.ascopubs.org/content/34/12/1402線上訪問

無

第1圖展示在NCI-H1417、NCI-H209及NCI-H69細胞中化合物A對胃泌素釋放肽傳訊者核糖核酸表現之效應。DMSO =二甲亞碸；GRP =胃泌素釋放肽；IC50 =最大抑制濃度的一半；mRNA =傳訊者核糖核酸；RNA =核糖核酸。資料係以針對NCI-H1417及NCI-H209之三次獨立實驗及NCI-H69之兩次獨立實驗的平均百分比活性而提供，且誤差條線表示標準偏差。

第2圖展示對結合至NCI-H69及NCI-H209細胞之去氧核糖核酸的離胺酸特異性去甲基酶1之染色質免疫沉澱及定序分析。Chr = 染色體；GRP =胃泌素釋放肽；H3K4me1 = 單甲基組織蛋白H3離胺酸4；LSD1 =離胺酸特異性去甲基酶1；SCLC =小細胞肺癌；來自兩種LSD1抗體(抗KDM1/LSD1抗體[abcam®, Cambridge, MA Cat No. ab17721]及抗BHC110/LSD1抗體[Bethyl Laboratories, Montgomery, TX Cat No. A300-215A])及H3K4me1抗體(abcam®, Cambridge, MA Cat No. ab8895)之結果以每百萬之正規化讀數展示於瀏覽器軌跡中。每一軌跡下方之黑色條線指示背景上所富集的區域(亦即，結合)。紅色橢圓形指示藉由LSD1及H3K4me1共同佔據的調控區。展示了GRP基因於人類染色體18上之位置。方框指示藉由帶箭頭之線連接的外顯子，該等箭頭指示轉錄之方向，其中第一外顯子在左邊。GRP之相鄰基因係以灰色展示。針對每一細胞系展示來自輸入對照之讀數(背景)。

第3圖展示在NCI-H1417小細胞肺癌異種移植模型中化合物A對人類胃泌素釋放肽傳訊者核糖核酸表現之效應。ANOVA =變方分析；ns =統計上不顯著。圖表展示按所描述來計算的個別2-ΔΔCt值，其中水平線處於平均值±標準偏差；p-值係使用單向ANOVA繼之以鄧奈特氏多重比較檢驗(化合物A相對於對照)來計算。

第4圖為展示藉由投與化合物A或媒劑對照來對SCLC異種移植物進行腫瘤生長抑制之圖。腫瘤體積係以平均值±平均值之標準偏差(standard error of the mean; SEM)來繪圖。

第5圖為展示藉由投與化合物A或媒劑對照來對SCLC異種移植物進行腫瘤生長抑制之圖。BID為每日兩次；PO為經口給藥；QDX28為每天一次歷時28天；腫瘤體積係以平均值±平均值之標準偏差(standard error of the mean; SEM)來繪圖。

第6圖為來自LU2514研究的腫瘤組織之蘇木精及伊紅染色。

第7圖為展示藉由投與化合物A或媒劑對照來對SCLC異種移植物進行腫瘤生長抑制之圖。BID為每日兩次；PO為經口給藥；QDX21為每天一次歷時21天；腫瘤體積係以平均值±平均值之標準偏差(standard error of the mean; SEM)來繪圖。

第8圖為展示藉由投與化合物A或媒劑對照來對SCLC異種移植物進行腫瘤生長抑制之圖。腫瘤體積係以平均值±平均值之標準偏差(standard error of the mean; SEM)來繪圖。

第9圖為展示藉由投與化合物A或媒劑對照來對SCLC異種移植物進行腫瘤生長抑制之圖。腫瘤體積係以平均值±平均值之標準偏差(standard error of the mean; SEM)來繪圖。

第10圖為展示藉由投與化合物A或媒劑對照來對SCLC異種移植物進行腫瘤生長抑制之圖。腫瘤體積係以平均值±平均值之標準偏差(standard error of the mean; SEM)來繪圖。

第11圖為展示LU2527研究的在第46天的平均淨腫瘤體積差異之圖。開放符號表示歸因於不良腫瘤植入而監查的資料；在第21天退出研究的另一對照動物的資料(未展示)係監查為可能歸因於經口胃管灌食法錯誤的意外死亡。

第12圖為展示LU2527之平均腫瘤生長的圖。腫瘤體積係以平均值±標準誤差(mean±standard error; SEM)來繪圖。第46天的垂直線表示TGI分析當天。

第13圖為展示LU2527之百分比平均體重變化的圖。體重係以平均值%±標準誤差(%mean±standard error; SEM)來繪圖。第46天的垂直線表示TGI分析當天，且在0%及-10%處的水平線意指體重變化。

第14圖為展示GA0087研究的在第53天的平均淨腫瘤體積差異之圖。開放符號表示歸因於不良腫瘤植入而監查的資料。

第15圖為展示GA0087之平均腫瘤生長的圖。腫瘤體積係以平均值±標準誤差(mean±standard error; SEM)來繪圖。第53天的垂直線表示TGI分析當天。

第16圖為展示GA0087之百分比平均體重變化的圖。體重係以平均值%±標準誤差(%mean±standard error; SEM)來繪圖。第53天的垂直線表示TGI分析當天，且在0%及-10%處的水平線意指體重變化。

第17圖為展示利用化合物A對hMCC細胞系進行增殖抑制之圖。對照百分比=針對活陰性對照細胞之平均數量正規化的活化合物A治療之細胞的數量，其係表示為百分比，如資料分析部分中所述；對每一圖，資料係以針對生物學重複實驗的對照之平均百分比±標準偏差來提供。

第18圖為展示在第15天的MKL-1淨腫瘤體積之圖。符號表示淨腫瘤體積。展示了針對在化合物A治療群組與媒劑對照群組之間的平均淨腫瘤體積之差異的TGI百分比(%)及統計學結果，如藉由虛線所示。

第19圖為展示MKL-1平均腫瘤生長之圖。腫瘤體積係以平均值±標準誤差(mean±standard error; SEM)來繪圖。垂直虛線係展示在第15天，亦即TGI分析當天。

第20圖為展示MKL-1之百分比平均體重變化的圖。體重係以平均值%±標準誤差(%mean±standard error; SEM)來繪圖。垂直虛線係展示在第15天，亦即TGI分析當天，且0%處的水平虛線意指體重變化。

第21圖為展示在第36天的MS-1淨腫瘤體積之圖。符號表示淨腫瘤體積，其中水平虛線處於0 mm³ 淨腫瘤體積處。展示了針對在化合物A治療群組與媒劑對照群組之間的平均淨腫瘤體積之差異的TGI百分比(%)及統計學結果，如藉由虛線所示。

第22圖為展示MS-1平均腫瘤生長之圖。腫瘤體積係以平均值±標準誤差(mean±standard error; SEM)來繪圖。垂直線係展示在第36天，亦即TGI分析當天。

第23圖為展示MS-1之百分比平均體重變化的圖。體重係以平均值%±標準誤差(%mean±standard error; SEM)來繪圖。垂直虛線係展示在第36天，亦即TGI分析當天，且0%處的水平虛線意指體重變化。

第24圖為展示如藉由RNA-seq所識別的基因表現之化合物A調節的圖。文氏圖展示在兩個hMCC細胞系MKL-1及MS-1中的回應於10 nM和/或100 nM化合物A而下調(頂部)或上調(底部)之基因。

第25圖為展示在活體外及活體內的藥效學生物標誌物基因表現之化合物A劑量反應的圖。滴定曲線展示活體外細胞培養物(左)之劑量反應及EC50值，其中帶有「x」之開放圓符號為監查資料點。相應的盒鬚圖展示在異種移植研究中之活體內劑量反應(右)。虛線指示最大平均反應。

第26圖為展示LSD1佔用率及H3K4me2狀態之ChIP-seq分析的圖。LSD1及H3K4me2之基因組瀏覽器視圖富集在hMCC細胞系MKL-1及MS-1中之ST18及FREM2基因處。LSD1峰值軌跡(綠色)證明LSD1富集區相較於背景之位置。H3K4me2 ChIP-seq軌跡(藍色)展示媒劑或化合物A治療樣本中的H3K4me2結合。輸入軌跡係展示為對照。RefSeq軌跡表示基因之位置及方向。

第27圖為展示卡本-麥爾圖表的圖。不帶*之p-值係針對與對照之對數秩比較，而帶*之p-值係針對與依託泊苷單療法之對數秩比較。進行十五次比較，而產生p≤0.003 (α=[0.05/15])之顯著性水準。

第28圖為展示平均腫瘤生長之圖。腫瘤體積係以平均值±標準誤差(mean±standard error; SEM)來繪圖。當一群組中超過50%之可評定動物退出研究，則將圖表截斷。

第29圖為展示百分比平均體重變化的圖。體重係以平均值%±標準誤差(%mean±standard error; SEM)來繪圖。在0%處之水平線意指體重變化。當一群組中超過50%之可評定動物退出研究，則將圖表截斷。

第30圖為展示平均腫瘤生長之圖。QD x 3 =每天給藥一次歷時三天；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥。腫瘤體積係以平均值±標準誤差(mean±standard error; SEM)來繪圖。當一群組中超過50%之可評定動物退出研究，則將圖表截斷。

第31圖為展示卡本-麥爾圖表的圖。QD x 3 =每天給藥一次歷時三天；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥。不帶*之p-值係針對與對照之對數秩比較，帶*之p-值係針對與依託泊苷單療法之對數秩比較，且帶**之p-值係針對與化合物A單療法之比較。進行六次比較，而產生p≤0.008 (α=[0.05/6])之顯著性水準。

第32圖為展示百分比平均體重變化的圖。QD x 3 =每天給藥一次歷時三天；5用/2停=給藥五天繼之以兩天不給藥。體重係以平均值%±標準誤差(%mean±standard error; SEM)來繪圖。在0%及-10%處之水平線意指平均體重變化。當一群組中超過50%之可評定動物退出研究，則將圖表截斷。

第33圖為展示利用以下各項之治療時隨時間推移的LNCaP細胞增殖分析之結果的圖：10 nM DHT、10 nM DHT加2Gy照射、10 nM DHT加100 nM化合物A以及10 nM DHT加100 nM化合物A及2Gy照射。

第34圖為展示利用以下各項之治療時LNCaP細胞增殖分析之結果的圖：10 nM DHT、10 nM DHT加2Gy照射、10 nM DHT加100 nM化合物A以及10 nM DHT加100 nM化合物A及2Gy照射。

第35圖為展示無任何治療時或利用以下各項之治療時隨時間推移的LNCaP細胞增殖分析之結果的圖：EtOH、DMSO、100 nM雷帕黴素、100 nM化合物A或100 nM雷帕黴素及100 nM化合物A之組合。

第36圖為展示無任何治療時或利用以下各項之治療時隨時間推移的LNCaP細胞增殖分析之結果的圖：EtOH、DMSO、100 nM雷帕黴素、100 nM化合物A或100 nM雷帕黴素及100 nM化合物A之組合。

第37圖為概述適用於證明醫藥組成物之安全性或效力的總體研究設計之圖解。

第38圖為展示針對管理治療誘導腹瀉的已公開推薦(Benson等人, 22 J. Clin. Oncol. 2918 (2004))之方案，該等推薦針對與研究協定之一致性而加以修改。以引用之方式併入

本說明書中提及的所有出版物、專利及專利申請案係以引用之方式併入本文以達本文所認定的特定目的。

國內寄存資訊 (請依寄存機構、日期、號碼順序註記) 無

國外寄存資訊 (請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記) 無

Claims

一種具有式(I)之結構的化合物或其醫藥學上可接受的鹽在製造用於治療人默克細胞癌(human merkel cell carcinoma)或胃神經內分泌癌之一藥劑中的用途，該藥劑係以一有效量投與至一有需要之患者，
其中，W是N、C-H或C-F；X為氫、鹵素、-CN、視需要經取代之烷基、視需要經取代之炔基、視需要經取代之碳環基炔基、視需要經取代之芳基或視需要經取代之雜芳基；Y為氫、視需要經取代之烷基、視需要經取代之環烷基或視需要經取代之環烷基烷基；Z為選自以下各項之視需要經取代之基團：烷基、碳環基、經C連接之雜環基、經N連接之雜環基、雜環基烷基、雜環基烯基、-O-雜環基、-N(R)-雜環基、-O-雜環基烷基、-N(R)-雜環基烷基、-N(R)(C₁-C₄伸烷基)-NR₂、-O(C_1-C₄伸烷基)-NR₂；且 R為氫或C₁-C₄烷基。
如請求項1所述之用途，其中W為C-H。
如請求項1所述之用途，其中W為C-F。
如請求項1所述之用途，其中X係選自由以下各項組成之群組：氫、鹵素、視需要經取代之炔、視需要經取代之碳環基炔基、視需要經取代之芳基及視需要經取代之雜芳基。
如請求項4所述之用途，其中X為視需要經取代之芳基。
如請求項5所述之用途，其中該視需要經取代之芳基為視需要經取代之苯基。
如請求項4所述之用途，其中X為視需要經取代之雜芳基。
如請求項7所述之用途，其中X係選自由以下各項組成之群組：視需要經取代之吡啶基、視需要經取代之吡唑基及視需要經取代之吲唑基。
如請求項1所述之用途，其中Z為選自由以下各項組成之群組的雜環基烷基：視需要經取代之-O-雜環基烷基、視需要經取代之-N(H)-雜環基烷基及視需要經取代之-N(Me)-雜環基烷基。
如請求項9所述之用途，其中該雜環基烷基具有式-R^c-雜環基，其中R^c為視需要經取代之 C₁-C₃伸烷基鏈或視需要經取代之C₁伸烷基鏈。
如請求項9所述之用途，其中該雜環基烷基具有式-R^c-雜環基，其中雜環基為視需要經取代之含氮4員、5員、6員或7員雜環基。
如請求項1所述之用途，其中Z為視需要經取代之經N連接之雜環基。
如請求項12所述之用途，其中該視需要經取代之經N連接之雜環基為4員、5員、6員或7員經N連接之雜環基。
如請求項13所述之用途，其中該視需要經取代之經N連接之雜環基為6員經N連接之雜環基。
如請求項12所述之用途，其中該視需要經取代之經N連接之雜環基為視需要經取代之哌啶。
如請求項15所述之用途，其中該視需要經取代之哌啶為4-胺基哌啶。
如請求項1所述之用途，其中Y為選自由以下各項組成之群組的視需要經取代之烷基：視需要經取代之C₁-C₃烷基、視需要經取代之C₁烷基及甲基。
如請求項1所述之用途，其中該化合物為：
或其醫藥學上可接受的鹽。
如請求項1所述之用途，其中該藥劑調配成經口投與。
如請求項1所述之用途，其中該化合物的有效量包含約1.5mg/kg至約10mg/kg。
如請求項1所述之用途，其中該化合物呈一錠劑、藥丸、藥包，或者硬或軟明膠膠囊形式。
如請求項21所述之用途，其中該化合物呈一膠囊形式。
如請求項20所述之用途，其中該化合物呈一膠囊形式，該膠囊包含劑量強度約0.50mg、0.75mg及2.00mg之該化合物。
如請求項1所述之用途，其中該化合物與至少一醫藥學上可接受的賦形劑組合。
一種具有式(I)之結構的化合物或其醫藥學上可接受的鹽與依託泊苷(Etoposide)組合在製造用於治療癌症及贅生性疾病之一藥劑中的用途，其中該藥劑係以一治療有效量投與至一人類患者，
其中，W是N、C-H或C-F；X為氫、鹵素、-CN、視需要經取代之烷基、視需要經取代之炔基、視需要經取代之碳環基炔基、視需要經取代之芳基或視需要經取代之雜芳基；Y為氫、視需要經取代之烷基、視需要經取代之環烷基或視需要經取代之環烷基烷基；Z為選自以下各項之視需要經取代之基團：烷基、碳環基、經C連接之雜環基、經N連接之雜環基、雜環基烷基、雜環基烯基、-O-雜環基、-N(R)-雜環基、-O-雜環基烷基、-N(R)-雜環基烷基、-N(R)(C₁-C₄伸烷基)-NR₂、-O(C₁-C₄伸烷基)-NR₂；且R為氫或C₁-C₄烷基。
如請求項25所述之用途，其中該癌症為小細胞肺癌。
如請求項25所述之用途，其中該化合物為：
或其醫藥學上可接受的鹽。
如請求項27所述之用途，其中該化合物之鹽為苄磺酸鹽。
如請求項25所述之用途，其中該藥劑調配成經口投與。
如請求項25所述之用途，其中該化合物的有效量包含約1.5mg/kg至約10mg/kg。
如請求項25所述之用途，其中該化合物與至少一醫藥學上可接受的賦形劑組合。