KR102461962B1 - 비타민 나무 추출물을 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 비타민 나무(Hippophae rhamnoides) 추출물을 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 비타민 나무 추출물은 프로콜라겐(procollagen)의 생성능을 증진시켜 피부 주름 예방 및 개선 효과가 우수한 장점이 있다.

Description

비타민 나무 추출물을 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물 {Cosmetic composition for wrinkles prevention or improvement with seaberry extraction}

본 발명은 비타민 나무(Hippophae rhamnoides) 추출물을 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근 의료기술의 발달로 평균수명이 연장되고 삶의 질이 향상됨에 따라 건강하고 아름다운 삶에 대한 욕구가 증가하였고, 피부미용 및 건강에 대한 관심이 확대되고 있다. 이에, 건강한 피부를 유지하고자 하는 목적에 따라 다양한 미용 기능성 화장품이 개발되었으며, 특히 피부 주름형성 예방, 완화와 개선을 위한 연구가 활발히 진행되고 있다.

피부는 크게 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하지방(hypodermis)의 세 층으로 구성되어 있다. 표피, 특히 표피의 가장 외층인 각질층은 피부장벽의 역할을 함으로서 피부로부터 수분과 전해질이 손실되는 것을 억제하는 한편, 진피층은 콜라겐과 엘라스틴 합성을 통하여 피부의 탄력을 유지하고 구조를 지지하는 역할을 한다. 즉, 콜라겐과 엘라스틴은 섬유아세포에서 생성되는 주요 단백질로서 피부의 기계적 견고성, 조직의 결합력 및 탄력성 등에 관여한다.

그 중, 콜라겐은 형태와 구조적 특징에 따라 다양한 아이소형태(isoform)를 구성한다. 사람의 조직에는 총 28가지의 콜라겐 아이소형태가 존재하는데, 이중 피부조직에 존재하는 콜라겐은 타입 1, 3, 4, 6, 7, 13, 14 및 17 등이 알려져 있다. 콜라겐 타입 1과 3은 진피층의 세포간질 구성성분을 이루고, 콜라겐 타입 7은 표피와 진피 연결부위(dermal and epidermal junction)의 주요 구성물질이 된다.

피부결합조직에는 세포외 기질 단백질 중 타입 I 콜라겐이 가장 많은 양으로 존재하며, 그 밖에 엘라스틴, 피브로넥틴, 인테그린, 피브릴린, 프로테로글리칸 등의 단백질들이 존재한다. 새로 합성된 프로콜라겐은 효소반응을 거쳐 피부세포의 세포외 공간으로 분비된 후 삼중나선구조(triple helix configuration)의 마이크로피브릴을 형성하고, 이들은 류신이 풍부한 작은 프로테오글리칸(leucine-rich small proteoglycans)과 결합하여 피브릴을 형성한다. 결과적으로 이렇게 만들어진 피브릴이 모여 피부의 결합력과 탄력성을 제공하는 콜라겐 섬유를 형성하게 된다.

피부노화는 피부 진피조직의 교원질 중 대부분을 차지하는 단백질인 콜라겐 함량이 감소하기 때문으로 알려져 있고, 콜라겐은 피부의 장력과 강도를 부여하기 때문에 콜라겐의 감소는 피부노화 및 주름생성과 매우 깊은 관계를 가지고 있다. 피부노화는 크게 생리학적 노화에 의한 내인성 노화, 그리고 지속적인 자외선(ultraviolet radiation, UV) 노출에 의해 일어나는 광노화로 구분된다. 반복적인 자외선 노출은 콜라겐 분해효소를 증가시키고 콜라겐 섬유의 변성 및 파괴를 유발하여 피부의 탄력을 감소시키고 주름의 생성을 촉진하는 결과를 초래한다. 즉, 지속적으로 자외선에 노출된 피부조직에는 활성산소종(ROS)의 발생이 증가하고, EGF-R(epidermal growth factor recepto), TNF 수용체 (tumor necrosis factor receptor) 등에 의해 매개되는 신호전달체계를 통해 전염증성 사이토카인 생성을 촉진시키게 된다.

이들 수용체의 활성화는 결과적으로 MAPK(mitogen-activated protein kinase)를 포함하는 다운스트림(downstream)의 신호전달을 매개하는 단백질들을 활성화시키는 연속적인 인산화로 이루어지고, 결과적으로 AP-1(activator protein-1)과 NF-κB(nuclear factor κB)와 같은 전사인자를 활성화시켜 염증반응을 유발하고 MMPs(matrix metalloproteinase)와 같은 콜라겐 분해효소(collagenase)의 활성을 촉진시킴으로써 피부탄력을 감소시키고 주름생성을 촉진시키게 된다. AP-1은 세포의 성장과 분화에 관련되는 수많은 유전자의 발현을 조절하고 일부 MMPs의 발현을 강력히 조절한다. AP-1에 의해 발현이 조절되는 MMP 중 MMP-1은 콜라겐 분해효소 1으로 알려져 있으며, 타입 1과 3 콜라겐을 기질로 한다.

본 특허는 과제번호 'P0013814', 연구기간 '2021.06.01. ~ 2022.05.31', 연구사업명 '시군구 지역연고산업육성(비R&D)사업', 연구과제명 '천연식물자원을 활용한 강원 영서북부 뉴트리코스메틱스산업 활성화 지원사업'의 도움을 받아 수행되었다.

한국등록특허 제10-2145447호 (2020.08.11)에는, 비타민나무 발효물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 비타민 나무(Hippophae rhamnoides) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 비타민 나무(Hippophae rhamnoides) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 비타민 나무는, 일 예로 비타민 나무의 꽃, 잎, 열매 및 뿌리 중 선택되는 어느 하나일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 추출물은, 바람직하게는 용매 추출법 또는 마이크로웨이브 추출법을 통해 수득되는 것이 좋다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 주름 예방 또는 개선은, 바람직하게는 세포 내 프로콜라겐(procollagen) 생성능 증진에 의해 유도되는 것일 수 있다.

본 발명의 비타민 나무 추출물은 프로콜라겐(procollagen)의 생성능을 증진시켜 피부 주름 예방 및 개선 효과가 우수한 장점이 있다.

도 1은 비타민 나무 열매 추출물 처리에 따른 HS68 세포 생존율을 측정한 결과이다.
도 2는 비타민 나무 열매 추출물 처리에 따른 HS68 세포에서 프로콜라겐(procollagne) 생성능을 확인한 결과이다.

본 발명은 비타민 나무(Hippophae rhamnoides) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

비타민 나무는 2~4m 높이까지 자랄 수 있는 강건한 낙엽 또는 상록수 관목이다. 갈색 또는 검은색의 거친 껍질과 두꺼운 회녹색의 크라운이 있다. 잎은 어긋나고 좁고 피침형이며 윗면은 은녹색이다. 암꽃과 암꽃이 서로 다른 관목에 피는 이성화이다.

타원형 또는 약간 둥근 과일은 옅은 노란색에서 짙은 오렌지색까지 다양한 소형 열매로 자란다. 개별 과일의 무게는 270~480㎎이며, 많은 양의 비타민 C, 비타민 E, 카로티노이드, 플라보노이드 및 건강에 유익한 지방산, 다른 과일보다 많은 양의 비타민 B12를 함유하고 있다.

비타민 나무는 장미목(Rosales)으로 보리수나무과(Elaeagnaceae)에 속한다. 비타민 나무는 carpatica, caucasia, fluviatilis, mongolica, rhamnoides, sinensis, turkestanica 및 yunnanensis의 8개의 아종으로 나뉜다.

비타민 나무는 특히 러시아와 동북 아시아에서 널리 사용된다. 그 중 과일은 전통 오스트리아 의학에서 감염 치료를 위한 차, 주스 또는 시럽으로 사용되고 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 비타민 나무 추출물은, 일 예로 비타민 나무의 꽃, 잎, 열매 및 뿌리 중 선택되는 어느 하나로부터 얻어진 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 비타민 나무 열매에서 얻어진 추출물일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 비타민 나무 추출물을 얻는 방법은 특별한 것으로 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 다양한 추출 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면, 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜, 디클로로메탄, 헥산 용매를 각각 단독 또는 이들을 2종 이상 혼합한 혼합용매를 추출 용매로 이용하여 추출할 수 있다. 바람직하게는 용매 추출법, 특히 열수 추출법 또는 마이크로웨이브 추출법을 통해 수득되는 것이 좋다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어, 상기 주름 예방 또는 개선은, 바람직하게는 세포 내 프로콜라겐(procollagen) 생성능 증진에 의해 유도되는 것일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 상기 비타민 나무 추출물의 세포 내 프로콜라겐 생성능 증진 효능을 확인한 바있다. 프로콜라겐은 주름 개선에 효능이 있는 것으로 알려진 인자이다.

한편, 본 발명에 있어, 상기 비타민 나무 추출물은, 바람직하게 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001~30.0중량%가 함유되는 것이 좋다. 더욱 바람직하게는 화장료 조성물 전체 중량에 대해서 0.01~10중량% 함유되는 것이 좋다. 비타민 나무 추출물의 함량이 0.0001중량% 미만인 경우에는 주름 개선 효과가 미미하고, 30.0중량% 초과할 경우 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과 증가가 보이지 않는다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 본 발명의 비타민 나무 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 구성을 하기 실시예 및 실험예를 통해 구체적으로 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 및 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

[ 실시예 1: 비타민 나무 열매 추출물의 제조]

비타민 나무 열매 열수 추출물(CWE)은 비타민 나무 열매 중량의 10배의 물을 첨가한 뒤 60℃에서 24시간 동안 추출하였다. 비타민 나무 열매 열수 추출물의 추출추율은 4%로 확인되었다.

비타민 나무 열매 마이크로웨이브 추출물(CMAE)은 비타민 나무 열매 중량의 10배의 물을 넣어준 뒤 2,450 MHz, 700W 조건에서 10분, 20분 및 30분 동안 각각 전처리하였으며, 전처리 과정에서 소실된 물은 첨가한 뒤 60℃에서 24시간 동안 추출하였다. 비타민 나무 열매 마이크로웨이브 추출물의 추출추율은 6%로 확인되었다.

상기 추출물은 원심분리 및 감압필터하여 고형물질을 제거하고, 동결건조하여 하기 실험에 사용하였다. 또한, 본 발명의 추출물을 하기 표 1에 정리하였다.

	실시예 1-1	실시예 1-2	실시예 1-3	실시예 1-4
약칭	CWE	CMAE 10	CMAE 20	CMAE 30
추출방법	비타민 나무 열매 중량 대비 10배 물 첨가 후, 60℃에서 24시간 동 열수 추출	2,450 MHz, 700W 조건에서 10분 동안 마이크로웨이브 전처리 후, 열수 추출	2,450 MHz, 700W 조건에서 20분 동안 마이크로웨이브 전처리 후, 열수 추출	2,450 MHz, 700W 조건에서 30분 동안 마이크로웨이브 전처리 후, 열수 추출

[ 실험예 1: 비타민 나무 열매 추출물 처리에 의한 HS68 세포생존율 변화 확인]

HS68 세포는 10% FBS, 100U/㎖ 페니실린(penicillin) 및 100㎍/㎖ 스트렙토마이신(streptomycin)이 첨가된 DMEM 배지를 사용하였으며, 5% CO₂, 37℃의 조건에서 배양하였다. 이후, HS68 세포를 96웰 플레이트에 1×10⁴ cell/㎖의 세포를 분주하고 2일 후 배지를 교환하였다.

비타민 나무 열매 추출물의 세포독성을 확인하기 위하여 세포가 70% 정도 가득차면 FBS가 혼합되지 않은 DMEM 배지에 비타민 나무 열매를 농도별(0.1, 0.5, 1㎎/㎖)로 희석시킨 뒤 24시간 동안 처리하였다.

이후, 배지를 제거하고 PBS로 세척한 뒤 MTT 솔루션 (0.5㎎/㎖)을 처리하고 4시간 동안 배양하였다. 그 후, MTT 솔루션을 제거하고, PBS로 세척한 후 실온에서 1시간 동안 건조시켰다. 이후, DMSO 0.1㎖를 각 웰에 넣어주고 포르마잔(formazan) 용해 후 570㎚에서 흡광도를 측정하였다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 모든 농도에서 HS68 세포생존률이 80% 이상으로 확인되어 세포독성을 나타내지 않음을 확인하였다. 도 1은 비타민 나무 열매 추출물 처리에 따른 HS68 세포 생존율을 측정한 결과이다.

[ 실험예 2: 비타민 나무 열매 추출물 처리에 의한 프로콜라겐 ( procollagen ) 생성능 변화 확인]

실시예 1의 추출물을 HS69 세포에 처리한 뒤, 세포가 배지로 방출되는 프로콜라겐(procollagen) 함량을 측정하였다.

이를 위하여, HS68 세포는 10% FBS, 100IU/㎖의 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)이 첨가된 DMEM 배지를 사용하였으며, 5% CO₂, 37℃의 조건에서 배양하였다. 이후, HS68 세포를 96웰 플레이트에 1×10⁴ cell/㎖의 세포를 분주하고 2일 후 배지를 교환하였다.

비타민 나무 열매 추출물의 세포독성을 확인하기 위하여 세포가 70% 정도 가득차면 FBS가 혼합되지 않은 DMEM 배지에 비타민 나무 열매를 농도별(0.1, 0.5, 1㎎/㎖)로 희석시킨 뒤 24시간 동안 처리하였다.

이후, 배양배지를 회수하고 PIP(procollagen type I c-peptide) ELISA 키트 (Takara-bio, Shiga, Japan)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen) 함량을 측정하였다.

비타민 나무 열매 추출물을 샘플 희석액(sample diluent)을 사용해 10배 희석하였으며, ELISA 키트에 포함된 96웰 플레이트에 항체-POD 콘쥬게이트 솔루션(antibody-POD conjugate solution) 100㎕와 비타민 나무 열매 추출물 20㎕를 분주하고, 37℃에서 3시간 동안 반응시켰다.

그 후, PBS로 4회 세척하였으며, TMBZ(substrate solution) 100㎕를 각 웰에 첨가하고 실온 (20-30℃)에서 15분 동안 반응시켰다. 이후, 1N 황산(stop solution) 100㎕로 반응을 종결시킨 후, 450㎚에서 흡광도를 측정하였다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 1의 추출물 모두에서 세포 내 프로콜라겐의 생성능이 증가되었음을 확인하였다. 특히, 열수 추출보다 마이크로웨이브 추출시 세포 내 프로콜라겐 생성능이 더 증가된 것으로 나타났다.

또한, 마이크로웨이브 추출 시간에 따른 프로콜라겐 생성능을 비교하였을 때, 마이크로웨이브 10분 전처리(실시예 1-2)보다 20분 전처리(실시예 1-3) 군에서 프로콜라겐 생성능이 더 증가하였으며, 20분(실시예 1-3)과 30분(실시예 1-4)의 프로콜라겐 생성능의 차이는 없는 것으로 확인되었다. 도 2는 비타민 나무 열매 추출물 처리에 따른 HS68 세포에서 프로콜라겐(procollagne) 생성능을 확인한 결과이다.

Claims (4)

1. 비타민 나무(Hippophae rhamnoides) 마이크로웨이브 추출물을 유효성분으로 포함하되,
   상기 비타민(Hippophae rhamnoides) 나무 마이크로웨이브 추출물은 비타민 나무 열매에 물을 가하여 2,450 MHz, 700W 조건으로 10분~30분 동안 전처리한 뒤 열수 추출한 것인 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 제1항에 있어서,
   상기 주름 개선은,
   세포 내 프로콜라겐(procollagen) 생성능 증진에 의해 유도되는 것을 특징으로 하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

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