KR102452248B1 - 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법 - Google Patents

3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR102452248B1
KR102452248B1 KR1020200173294A KR20200173294A KR102452248B1 KR 102452248 B1 KR102452248 B1 KR 102452248B1 KR 1020200173294 A KR1020200173294 A KR 1020200173294A KR 20200173294 A KR20200173294 A KR 20200173294A KR 102452248 B1 KR102452248 B1 KR 102452248B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cell culture
hydrogel
cells
polydopamine
hydrogel support
Prior art date
Application number
KR1020200173294A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20220083241A (ko
Inventor
박태현
김슬하
Original Assignee
서울대학교산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 서울대학교산학협력단 filed Critical 서울대학교산학협력단
Priority to KR1020200173294A priority Critical patent/KR102452248B1/ko
Publication of KR20220083241A publication Critical patent/KR20220083241A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102452248B1 publication Critical patent/KR102452248B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
    • C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/20—Material Coatings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/06—Plates; Walls; Drawers; Multilayer plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/14—Scaffolds; Matrices
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0062—General methods for three-dimensional culture

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체, 상기 하이드로겔 지지체의 제조방법, 및 상기 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법에 관한 것이다.

Description

3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법{Hydrogel scaffold coated with polydopamine for culturing three-dimensional cells and method for manufacturing the same}
본 발명은 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체, 상기 하이드로겔 지지체의 제조방법, 및 상기 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법에 관한 것이다.
콜라겐은 생체 조직 내에서 가장 흔한 단백질이며, 많은 생체의료용 물질로 각광받고 있으며, 일반적으로 섬유, 막, 코팅 및 하이드로겔 등의 형태로 사용된다. 특히, 하이드로겔 형태는 조직 세포의 배양 및 조직 공학의 관점에서 많은 관심을 받고 있다. 콜라겐 하이드로겔은 세포의 보관 및 배양에 대한 우수한 세포외 기질 조건을 제공할 수 있다. 다양한 세포에 대하여 콜라겐 하이드로겔에서 실험되었고, 대부분 콜라겐 하이드로겔 내에서 잘 성장되는 것이 관찰되었다.
콜라겐 하이드로겔이 세포 및 조직에 적합한 이상적인 3차원 공간을 제공할 수 있음에도 불구하고, 여러 가지 제한이 있다. 그 중에 하나가 높은 생분해율이다. 콜라겐을 주 성분으로 하는 하이드로겔은 가수 분해 또는 효소 분해로 인하여 급격히 분해되며, 그 적용에 한계가 있다. 또한, 세포를 배양하는 동안 현저히 수축하는 문제가 있으며, 이는 시간이 지남에 따라 또는 세포의 수가 증가함에 따라 더욱 두드러진다.
대한민국 공개특허 제10-2018-0049998호
본 발명자들은 콜라겐을 주 성분으로 하는 하이드로겔의 물리-화학적 특성을 개선하기 위하여 예의 노력한 결과, PDMS 시트의 상하부 표면을 관통하는 일정 크기의 홀(hole)을 형성하고, 상기 홀의 가장자리를 폴리도파민 (polydopamine)으로 코팅하여 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체를 제조하는 경우, 세포 배양시 젤의 형태 변형 및 피펫팅으로 인한 손상을 막을 수 있을 뿐만 아니라, 콜라겐의 수축도 발생하지 않음을 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명은 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 또한 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 또한 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “하이드로겔”은 물을 포함하여 콜라겐 분자 사이의 치밀한 네트워크 구조를 가지는 물질을 의미한다. 콜라겐은 인체의 조직 내에 가장 많은 단백질 중의 하나이며, 이의 내부 3차원적 구조로 인하여 세포 성장 공간을 제공하고 조직 간의 연결을 돕는 역할을 한다. 이를 이용한 조직 재생이나 세포 배양의 시도가 있어 왔으나, 콜라겐은 수일 만에 약 10%로 부피가 줄어들 정도로 심한 수축이 발생하기 때문에, 전체적인 하이드로겔의 부피, 확산능, 단위부피당 세포의 밀도, 모양 등에 영향을 미치게 되어 세포들의 거동이 달라지고 이를 통제할 수 없다는 문제가 있다. 이에 본 발명에서는 지지체의 상하부를 관통하여 형성된 홀(hole)의 가장자리가 폴리도파민 (polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체를 이용하여 지지체와 하이드로겔과의 결합력을 높여 하이드로겔의 수축과 배양 과정에서의 손상을 방지할 수 있다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체는 하이드로겔과의 결합력을 높여 하이드로겔의 수축과 배양 과정에서의 손상을 방지할 수 있는 새로운 3차원 세포 배양 시스템을 제공할 수 있다. 따라서 본 발명은 의료용 세포 집합체 전달 및 치료 시스템, 동물실험과 임상 실험 대체를 위한 삼차원 인공조직 제작, 조직 및 종양의 상호 작용 연구 모델 등으로 폭넓게 응용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법의 일 예시적인 모식도를 나타낸다.
도 2는 실험예 1의 시간의 경과에 따른 하이드로겔 가장자리의 세포 분포 변화 확인 실험 결과를 나타낸다.
도 3은 실험예 2의 하이드로겔 분리 확인 실험 결과를 나타낸다.
아하, 발명의 구체적인 구현예에 따른 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법에 대하여 상세하게 설명하기로 한다. 다만, 이는 발명의 하나의 예시로서 제시되는 것으로, 이에 의해 발명의 권리범위가 한정되는 것은 아니며, 발명의 권리범위 내에서 구현예에 대한 다양한 변형이 가능함은 당업자에게 자명하다.
본 명세서 전체에서 특별한 언급이 없는 한 "포함" 또는 "함유"라 함은 어떤 구성 요소(또는 구성 성분)를 별다른 제한 없이 포함함을 지칭하며, 다른 구성 요소(또는 구성 성분)의 부가를 제외하는 것으로 해석될 수 없다.
제1구현예에 따르면,
본 발명은
기판; 및
상기 기판의 상하부 표면을 관통하여 형성된 다수의 홀(hole)을 포함하고,
상기 다수의 홀의 내부는 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 것을 특징으로 하는 하이드로겔 지지체를 제공하고자 한다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체에 있어서, 상기 기판은 폴리디메틸실록산(polydimethylsiloxane, PDMS), 유리, 금속 및 실리콘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체에 있어서, 상기 하이드로겔 지지체는 상기 기판 하부에 폴리아크릴아마이드 시트를 추가로 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체에 있어서, 상기 세포는 근아세포, 섬유아세포, 혈관내피세포, 연골세포, 간세포, 골아세포, 신장세포, 지방세포, 각막상피세포, 줄기세포, 신경세포, 각질세포, 근육세포, 심장근육세포 및 식도상피세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
제2구현예에 따르면,
본 발명은
(A) 다수의 홀(hole)을 포함하는 기판을 준비하는 단계;
(B) 상기 홀 내부를 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅하는 단계; 및
(C) 상기 폴리도파민으로 코팅된 홀에 세포를 포함하는 하이드로겔을 도포하는 단계를 포함하는 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법을 제공하고자 한다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법에 있어서, 상기 기판은 폴리디메틸실록산(polydimethylsiloxane, PDMS)인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법에 있어서, 상기 단계 (B)는 약염기성 조건에서 수행되는 중합 반응에 의해 기판 상에 코팅되는 것을 특징으로 한다. 상기 약염기성 조건은 pH 8 내지 9일 수 있다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법에 있어서, 상기 하이드로겔은 폴리에틸렌글리콜, 폴리에틸렌옥사이드, 폴리하이드록시에틸메타크릴레이트, 폴리아크릴산, 폴리비닐알코올, 폴리(N-이소프로필아크릴아미드), 폴리비닐피롤리돈, 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 폴리카프로락톤, 콜라겐, 젤라틴, 피브린, 히알루론산, 알지네이트, 카라기난, 키토산, 하이드록시알킬셀룰로오스, 알킬셀룰로오스, 실리콘, 고무, 아가, 카르복시비닐 공중합체, 폴리디옥솔란, 폴리아크릴아세테이트, 폴리비닐클로라이드, 무수말레인산/비닐에테르로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 친수성 고분자 또는 이들의 공중합체 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 한다.
제3구현예에 따르면,
본 발명은
(A) 다수의 홀(hole)을 포함하는 기판을 준비하는 단계;
(B) 상기 홀 내부를 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅하는 단계;
(C) 상기 폴리도파민으로 코팅된 홀에 세포를 포함하는 하이드로겔을 도포하여 하이드로겔 지지체를 형성하는 단계; 및
(D) 상기 하이드로겔 지지체를 세포배양배지를 포함하는 배양접시에 담구어 배양하는 단계를 포함하는 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법을 제공하고자 한다. 본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법의 일 예시적인 구현예를 도 1에 도시하였다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법에 있어서, 상기 방법은 단계 (A) 이후에 상기 다수의 홀을 포함하는 기판을 폴리아크릴아마이드 시트 상에 위치시키는 단계을 추가로 포함하는 것을 특징으로 한다. 이 경우, 상기 방법은 단계 (C) 이후에 하이드로겔 지지체를 폴리아크릴아마이드 시트로부터 분리하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법에 있어서, 상기 기판은 폴리디메틸실록산(polydimethylsiloxane, PDMS)인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법에 있어서, 상기 단계 (B)는 약염기성 조건에서 수행되는 중합 반응에 의해 기판 상에 코팅되는 것을 특징으로 한다. 상기 약염기성 조건은 pH 8 내지 9일 수 있다.
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법에 있어서, 상기 세포는 근아세포, 섬유아세포, 혈관내피세포, 연골세포, 간세포, 골아세포, 신장세포, 지방세포, 각막상피세포, 줄기세포, 신경세포, 각질세포, 근육세포, 심장근육세포 및 식도상피세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예>
실시예 1. Window frame의 제조
아크릴이나 유리 판 사이에 일정한 두께로 시트를 제작할 수 있도록 원하는 두께의 spacer를 두고 폴리디메틸실록산(PDMS)과 가교결합제의 혼합물을 부어 70℃에서 하룻밤 가교시켰다. 원하는 사이즈의 하이드로겔 몰드를 제작하기 위해 펀치를 이용해 PDMS 시트에 구멍을 내고 적절한 크기로 커팅하여 다수의 홀(holel)을 포함하는 PDMS 기판(이하, “window frame”이라호도 함)를 제작하였다. 상기 Window frame을 100% 에탄올에 담구어 sonication을 이용하여 멸균시킨 후 증류수로 표면을 세척하였다.
실시예 2. 폴리아크릴아마이드 시트의 제조
비스아크릴아마이드(bisacrylamide) 5% (w/v)와 증류수의 혼합물에 암모늄 과황산암모늄(Ammonium persulfate) 및 N,N,N′N′-테트라메틸에틸렌디아민(N,N,N′N′-Tetramethylethylenediamine)을 첨가하여 실온에서 젤화시켜 폴리아크릴아마이드 시트를 제조하였다. 상기 제조된 폴리아크릴아마이드 시트를 증류수로 세척하고 멸균상태로 보관하였다. 사용하기 전에 세포배양배지에 담구어 두었으며, 하기의 실시예 3에 따른 폴리도파민의 코팅 전에, 세포배양배지에 담구어 두었던 폴리아크릴아마이드 (10% w/v) 시트 상에 실시예 1에서 제조된 window frame을 위치시켰다.
실시예 3. 폴리도파민의 코팅
도파민 (dopamine hydrochloride)을 10 mM Tris-HCl (pH 8.6)를 함유하는 증류수에 2 mg/ml농도로 용해시켰다. 상기 용해된 도파민 용액을 상기 폴리아크릴아마이드 시트 상에 위치한 window frame에 도포하고 은박지로 감싸 24시간 동안 반응시켰다. 상기 도파민 용액이 도포된 window frame을 증류수로 충분히 세척하고, 100% Ethanol로 멸균한 후, 건조시켰다.
실시예 4. 하이드로겔의 도포 및 세포 배양
세포를 함유하는 하이드로겔 용액을 window frame 내의 홀이 다 채워질 수 있도록 도포하고, 과량의 젤은 피펫으로 제거하면서 window frame의 홀 속에 하이드로겔이 균일한 높이로 채워지도록 하였다. 그 다음, 상기 하이드로겔이 도포된 window frame을 폴리아크릴아마이드 시트로부터 분리한 후 세포배양배지를 포함하는 배양접시에 담구어 배양을 진행하였다.
<실험예>
실험예 1. 시간의 경과에 따른 하이드로겔 가장자리의 세포 분포 변화 확인
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체에서의 세포 배양시 세포 분포 변화를 알아보기 위하여, 상기 실시예 4에 따른 세포 배양과 window frame 없이 제작된 동일 크기의 콜라겐 하이드로겔의 세포 배양에서 시간 경과에 따른 하이드로겔 가장자리의 세포 분포 변화를 확인하였다.
그 결과, window frame 없이 제작된 동일 크기의 콜라겐 하이드로겔의 세포 배양의 경우 배양 1일차부터 가장자리에서 수축이 발생하여 세포 농도가 달라졌으며, 7일 및 30일차가 되면서 가장자리 부분에 세포들이 밀집하여 세포 안쪽과 확연히 차이가 나타난 반면, 본 발명의 실시예 4에 따른 세포 배양의 경우 30일 까지 장기 배양하여도 하이드로겔 가장자리 부분에 수축이 발생하지 않는 것으로 확인되었다 (도 2).
실험예 2. 하이드로겔 분리 확인
본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체에서의 하이드로겔의 결합력을 알아보기 위하여 외부 물리적인 충격에 따른 하이드로겔 지지체에서의 하이드로겔 분리 실험을 수행하였다.
그 결과, 본 발명에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 경우 락커에서 24시간 또는 shaking incubator에서 24시간 두는 경우에도 하이드로겔이 분리되지 않음이 확인되었다 (도 3).
실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (10)

  1. 기판;
    상기 기판의 상하부 표면을 관통하여 형성되며 세포를 포함하는 하이드로겔이 도포되는 다수의 홀(hole); 및
    상기 기판 하부에 폴리아크릴아마이드 시트을 포함하고,
    상기 다수의 홀의 내부는 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅된 것인, 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 기판은 폴리디메틸실록산(polydimethylsiloxane, PDMS), 유리, 금속 및 실리콘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 것인, 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체.
  3. 삭제
  4. 제1항 또는 제2항에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조방법으로, 상기 방법은:
    (A) 다수의 홀(hole)을 포함하는 기판을 준비하는 단계;
    (B) 상기 다수의 홀을 포함하는 기판을 폴리아크릴아마이드 시트 상에 위치시키는 단계;
    (C) 상기 홀 내부를 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅하는 단계; 및
    (D) 상기 폴리도파민으로 코팅된 홀에 세포를 포함하는 하이드로겔을 도포하는 단계를 포함하는 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 기판은 폴리디메틸실록산(polydimethylsiloxane, PDMS)인 것을 특징으로 하는 것인, 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법.
  6. 제4항에 있어서,
    상기 단계 (B)는 약염기성 조건에서 수행되는 중합 반응에 의해 기판 상에 코팅되는 것을 특징으로 하는 것인, 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체의 제조 방법.
  7. 제1항 또는 제2항에 따른 3차원 세포배양을 위한 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법으로, 상기 방법은:
    (A) 다수의 홀(hole)을 포함하는 기판을 준비하는 단계;
    (B) 상기 다수의 홀을 포함하는 기판을 폴리아크릴아마이드 시트 상에 위치시키는 단계;
    (C) 상기 홀 내부를 폴리도파민(polydopamine)으로 코팅하는 단계; 및
    (D) 상기 폴리도파민으로 코팅된 홀에 세포를 포함하는 하이드로겔을 도포하여 하이드로겔 지지체를 형성하는 단계; 및
    (E) 상기 하이드로겔 지지체를 세포배양배지를 포함하는 배양접시에 담구어 배양하는 단계를 포함하는 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법.
  8. 삭제
  9. 제7항에 있어서,
    상기 방법은 단계 (C) 이후에 하이드로겔 지지체를 폴리아크릴아마이드 시트로부터 분리하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 것인, 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법.
  10. 제7항에 있어서,
    상기 세포는 근아세포, 섬유아세포, 혈관내피세포, 연골세포, 간세포, 골아세포, 신장세포, 지방세포, 각막상피세포, 줄기세포, 신경세포, 각질세포, 근육세포, 심장근육세포 및 식도상피세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 것인, 하이드로겔 지지체를 이용한 세포 배양 방법.
KR1020200173294A 2020-12-11 2020-12-11 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법 KR102452248B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200173294A KR102452248B1 (ko) 2020-12-11 2020-12-11 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200173294A KR102452248B1 (ko) 2020-12-11 2020-12-11 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20220083241A KR20220083241A (ko) 2022-06-20
KR102452248B1 true KR102452248B1 (ko) 2022-10-07

Family

ID=82249980

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020200173294A KR102452248B1 (ko) 2020-12-11 2020-12-11 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102452248B1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017212952A (ja) * 2016-06-01 2017-12-07 大日本印刷株式会社 細胞集合体の製造方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180049998A (ko) 2016-11-04 2018-05-14 한양대학교 산학협력단 온도감응성 하이드로겔을 이용한 3차원 세포 구상체의 제조방법
KR102124420B1 (ko) * 2017-11-02 2020-06-18 한국과학기술연구원 선 스트레인의 조합 및 물성에 따른 구조체 내 미세섬유 정렬 제어 방법
KR102177124B1 (ko) * 2019-03-14 2020-11-10 한국교통대학교 산학협력단 감법전사방식에 의한 도파민 패턴 제조방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2017212952A (ja) * 2016-06-01 2017-12-07 大日本印刷株式会社 細胞集合体の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR20220083241A (ko) 2022-06-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101196365B1 (ko) Ｉｐｎ 하이드로젤 및 그 제조방법
Goding et al. Considerations for hydrogel applications to neural bioelectronics
CN104892962B (zh) 一种巯基/二硫键可控自交联透明质酸水凝胶的制备方法及其应用
Shah et al. The development of a tissue-engineered cornea: biomaterials and culture methods
EP2203194B1 (en) Method for preparing porous scaffold for tissue engineering, cell culture and cell delivery
Kim et al. Bacterial cellulose nanofibrillar patch as a wound healing platform of tympanic membrane perforation
CA2500410A1 (en) Programmable scaffold and methods for making and using the same
WO2012148684A1 (en) Cell-friendly inverse opal hydrogels for cell encapsulation, drug and protein delivery, and functional nanoparticle encapsulation
EP3235470A1 (en) Biohybrid for the use thereof in the regeneration of neural tracts
CN106397819B (zh) 一种用于调控细胞三维微图案化生长的水凝胶及其制备方法
Lin et al. Tri-layered chitosan scaffold as a potential skin substitute
EP0355112A1 (en) Cell culture processes, materials and products
Varoni et al. Hierarchic micro-patterned porous scaffolds via electrochemical replica-deposition enhance neo-vascularization
KR101757063B1 (ko) 그래핀 옥사이드 및 배지 성분을 포함하는 세포 배양용 하이드로젤
CN106924817B (zh) 一种超薄载体细胞片及其制备方法
KR102452248B1 (ko) 3차원 세포배양을 위한 폴리도파민으로 코팅된 하이드로겔 지지체 및 이의 제조방법
KR20200014247A (ko) 다층 세포 시트의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 다층 세포 시트
CN102940909A (zh) 一种修饰组织工程支架的方法及其应用
La Gatta et al. Novel poly (HEMA‐co‐METAC)/alginate semi‐interpenetrating hydrogels for biomedical applications: synthesis and characterization
Hassarati et al. Biofunctionalization of conductive hydrogel coatings to support olfactory ensheathing cells at implantable electrode interfaces
CN114616317A (zh) 细胞培养用基材及带有细胞的细胞培养用基材
Lo et al. Morphological transformation of h BMSC from 2 D monolayer to 3 D microtissue on low‐crystallinity SF‐PCL patch with promotion of cardiomyogenesis
KR102098691B1 (ko) 기계적 강도가 제어된 인공피부용 하이드로겔 및 이의 제조방법
WO2013071062A1 (en) Multilayered collagen tubular scaffold
JP2008035834A (ja) 細胞の培養方法、細胞培養アレイ装置、細胞培養物及び再生医用生体材料

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant