KR102410803B1 - 그램 양성균, 그램 음성균 그리고 진균류에 대해 항균효과가 있는 식품소재 허브추출물을 포함하는 천연 항균 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

그램 양성균, 그램 음성균 그리고 진균류에 대해 항균효과가 있는 식품소재 허브추출물을 포함하는 천연 항균 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 복합 추출물과 황금 추출물을 포함하며, 상기 복합 추출물과 황금 추출물은 3:7 내지 7:3의 중량비로 포함되는 식품, 화장품, 의약품, 위생용품, 및 식품포장재용 천연 항균 조성물에 관한 것이다.

Description

그램 양성균, 그램 음성균 그리고 진균류에 대해 항균효과가 있는 식품소재 허브추출물을 포함하는 천연 항균 조성물 및 이의 제조방법{Natural antimicrobial composition containing herbal extracts of food materials that have antibacterial effects against gram positive bacteria, gram negative bacteria and fungi and Method for preparing the same}
본 발명은 식품소재 원료로 구성된 허브추출물을 포함하는 천연 항균 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
항균제는 미생물의 생육을 방지하거나 억제시키는 물질로서 사람, 동물 또는 식물의 질병 예방 또는 개선; 섬유, 의류, 식품, 화장품, 약품 등의 부패를 예방 또는 방지하는 등 광범위한 용도를 갖는다. 현재 항균제는 130 여종이 개발되어 있고 이들 항균제는 합성 항균제와 천연 항균제로 나뉘며, 합성 항균제가 천연 항균제보다 5~6배 정도 더 큰 시장 규모를 형성하고 있다.
그러나 합성 항균제는 가장 안전한 것 알려진 파라옥시안식향산에스테르 또는 파라벤류 조차도 피부 알러지, 피부 부종, 환경호르몬으로서의 작용 가능성 등의 부작용이 보고되고 있다(Andrea Counti et al., Contact Dermatitis, 1997, 37: 35-36; Edwin et al., Toxicology and Applied Pharmacology, 1998, 153: 12-19).
천연 항균제는 그 항균력이 pH에 의한 효과와 킬레이트에 의한 효과가 주 기작으로 추정되고 있으며(EI-shenawy et al., J. Food Protec. 1989, 52(11): 771-778; Bizri et al., J. Food Science, 1994, 59(1):130-135), 현재 편백 추출물인 히노키티올(hinokitiol), 황금 추출물인 바이칼린(baicalin), 목련 추출물인 메그노놀(megnonol), 자몽 종자 추출물인 DF-100 등이 상용화되어 있다.
이 중에서 가장 대중적으로 쓰이고 있는 자몽 종자 추출물은 자몽의 즙을 짜내고 남은 찌꺼기를 여러 번의 화학적 공정을 거쳐서 천연의 페놀성 화합물을 암모늄화 한 것으로 천연 항균제라고 보기에는 무리가 있으며 식품에는 사용이 허가되어 있지 않다. 또한, 국내외 일부 자몽 종자 추출물에서 화학물질이 검출된 보고가 있으며, Bio-chem사의 citricidal 제품에는 메틸파라벤, 트리클로산, 염화벤제토늄이 검출되었다는 관련논문(Pharmazie 1999,54.452-456. Von Woedtke등, J.Agric. Food Chem. 2001.49,3316-3320. Takeoka등)이 알려져 있다.
일반적으로 식품은 유통 기간 및 저장 조건에 따라서 세균, 효모 및 곰팡이 등의 미생물에 의해서 쉽게 부패 또는 오염되어 보존하는데 많은 제약이 따른다. 따라서 식품의 보존성을 증진시키기 위한 방법의 일환으로 식품용 항균제의 개발이 지속적으로 이루어지고 있다. 현재는 주로 화학적 합성 항균제에 대한 개발이 많이 진행되고 있다. 이에 우리나라에서도 소르빈산칼륨, 안식향산나트륨, 프로피온산칼슘 등의 화학적 합성 항균제들이 많이 사용되고 있는 실정이다.
그러나, 상기와 같은 화학적 합성 항균제들을 장기간 사용할 경우 체내에 지속적으로 축적되므로, 만성 독성, 발암 및 돌연변이 유발 등의 우려가 크다. 따라서 합성 항균제들의 허가량은 엄격히 규제되며, 사용 대상 식품도 엄격히 제한된다.
또한, 일반 현대인들의 소비성향이 점점 고급화, 천연 지향적, 건강 지향적으로 변화함에 따라 천연 소재로서 미량 사용으로도 탁월한 항균효과를 나타낼 수 있는 천연 유래 식품 항균제의 필요성이 점차적으로 대두되고 있다. 특히, 인체 안전성 측면을 고려할 때 천연 항균제가 바람직하므로, 항균력이 뛰어나면서 인체에 부작용이 없거나 덜 해로운 천연 항균제의 개발이 요구되고 있다.
대한민국 특허공개 제 10-2005-0029649 호
본 발명자들은 종래기술의 상기와 같은 문제점들을 개선하기 위하여 예의 노력한 바, 천연의 식품 소재로부터 항균 활성이 우수한 추출 조성물을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
그러므로, 본 발명은 천연의 식품 소재로부터 얻어지므로 인체에 안전하며, 그램 양성균 및 그램 음성균, 일부 진균에 대하여 항균 활성이 우수하며, 맛이나 향이 거의 없어 식품, 화장품, 의약품, 위생용품, 식품포장재 등에 유용하게 사용될 수 있는 천연 항균 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 상기 천연 항균 조성물의 효율적인 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은
포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 복합 추출물과 황금 추출물을 포함하며,
상기 복합 추출물과 황금 추출물은 3:7 내지 7:3의 중량비로 포함되는 천연 항균 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은,
a) 물, 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 용매를 사용하여 포도과피 추출물, 상엽 추출물, 감초 추출물 및 황금 추출물을 제조하는 단계;
b) 포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 5~25 : 5~25 : 5~25의 중량비로 혼합하여 복합 추출물을 제조하는 단계; 및
c) 상기 a)단계의 황금 추출물을 및 b)단계의 복합 추출물을 3:7 내지 7:3의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하는 천연 항균 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 천연 항균 조성물은 천연의 식품 소재로부터 얻어지므로 인체에 안전하며, 그램 양성균 및 그램 음성균, 일부 진균에 대하여 항균 활성이 우수하며, 맛이나 향이 거의 없어 식품, 화장품, 의약품, 위생용품, 식품포장재 등에 유용하게 사용될 수 있는 효과를 제공한다.
또한, 본 발명의 천연 항균 조성물의 제조방법은 천연 항균 조성물을 효율적으로 제조할 수 있는 효과를 제공한다.
도 1은 그램 양성 및 음성 세균, 일부 진균에 대하여 본원발명의 천연 항균 조성물(실험군), 비교군 및 대조군을 적용하여 항균 활성을 측정한 결과를 도시한 사진이다.
도 2는 본원발명의 천연 항균 조성물(실시예 1) 및 대조군(멸균수)를 액상제품(양배추복합추출물)에 적용하여 항균 활성을 측정한 결과를 도시한 사진이다.
이하에서 본 발명을 자세하게 설명한다.
본 발명은
포도과피 추출물, 상엽(桑葉) 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 복합 추출물과 황금 추출물을 포함하며,
상기 복합 추출물과 황금 추출물은 3:7 내지 7:3의 중량비로 포함되는 천연 항균 조성물에 관한 것이다.
상기 복합 추출물과 황금 추출물은 4:6 내지 6:4의 중량비로 포함되는 것이 더욱 바람직할 수 있다.
상기 복합 추출물은 포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 5~25 : 5~25 : 5~25의 중량비, 바람직하게는 15~25 : 5~10 : 5~10의 중량비 로 포함할 수 있으며, 본 천연항균조성물의 전체 중량에 대하여 20~60 중량%로 포함할 수 있다.
포도(Vitis vinifera L.)의 과피에는 레스베라트롤이 풍부한데 이 성분은 식물이 미생물의 공격을 받으면 자신을 보호하기 위해 피토알렉신(phytoalexin)이라는 방어물질로 인해 균사의 성장을 억제하여 항균활성을 나타낸다.
상엽(桑葉)은 뽕나무과의 뽕나무(Morus alba L.)의 잎으로 플라보노이드 성분 중 quercetin과 quercetin-3-O-glucoside이 박테리아의 DNA 합성효소발현에 관여하여 (복합체 구성) 균주의 DNA supercoiling 활성을 억제하여 항균활성을 나타낸다.
감초는 콩과에 속하는 다년생 초본의 뿌리이며 플라보노이드 성분인 isoliquiritigenin이 수산기 치환작용으로 DNA(3H-TdR)와 RNA(3H-UdR)를 구성하는 인자의 합성을 억제하여 항균활성을 나타낸다.
황금은 꿀풀과(Labiatae)에 속한 다년생 초본으로 플라보노이드 성분 중의 하나인 baicalin이 DNA(3H-TdR)와 RNA(3H-UdR)를 구성하는 인자의 합성을 억제하여 단백질(3H-leucine) 합성을 억제하여 항균활성을 나타낸다
상기에서 포도과피 추출물, 상엽(桑葉) 추출물, 감초 추출물, 및 황금 추출물은 상기 비율에 맞게 한꺼번에 추출하거나, 개별적으로 추출해서 해당 비율에 맞게 혼합하는 것도 가능하다.
상기 포도과피 추출물, 상엽 추출물, 감초 추출물 및 황금 추출물 각각은 독립적으로 추출용매로서 물, 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 용매를 사용하여 추출할 수 있다.
상기 저급알코올은, 메탄올, 에탄올, 프로판올 등일 수 있으며, 에탄올이 바람직하게 사용될 수 있으며, 상기 저급알코올의 농도는 20 내지 80%(v/v)인 것이 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 포도과피 추출물, 상엽 추출물, 감초 추출물 및 황금 추출물 각각은 독립적으로 추출용매로서 물 및 저급 알코올 중에서 선택되는 1 종 이상의 용매를 사용하여 추출하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명의 천연 항균제 조성물은 아치오테 열매 에탄올 추출물을 천연 항균제 조성물 총 중량에 대하여, 1 내지 10 중량%로 더 포함할 수 있다.
상기 아치오테(스페인어: achiote)는 빅사과 관목의 열매이다. 원산지는 남아메리카와 중앙아메리카 및 멕시코이다. 본 발명에서 아치오테 열매는 열매로부터 씨앗을 제거한 것을 사용한다.
상기 아치오테 열매의 에탄올 추출물은 각종 식중독균 등의 세균류들에 대한 항균력이 우수하며, 소화를 돕는 기능도 수행한다.
상기 추출물들은 각각의 성분들을 혼합한 혼합물 또는 각각의 개별성분들을 추출용매에 넣고, 40~100℃ 더욱 바람직하게는 50~80℃로 가열하고, 교반하면서 0.5 내지 10 시간, 바람직하게는 1 내지 5시간, 더욱 바람직하게는 1 내지 3시간 동안 추출하여 제조될 수 있다.
이 때 교반 속도는 100 내지 5000rpm, 바람직하게는 1000 내지 4000rpm, 더욱 바람직하게는 2500 내지 3500rpm으로 설정하여 진행할 수 있다.
이후, 상기에서 얻은 추출물을 부직포 여과지 등을 사용하여 1차 여과하고, 규조토필터 또는 필터프레스 등을 사용하여 2차 여과하는 과정을 거쳐서 제조될 수 있다.
그러나, 본 발명의 추출 방법은 상기 방법으로 한정되는 것은 아니며, 이 분야에 공지된 방법을 적용할 수도 있다.
상기 천연 항균 조성물은 활성탄을 사용하여 탈색시킨 투명한 성상을 갖는 것일 수 있다. 본 발명의 천연 항균 조성물은 다양한 식품, 화장품, 의약품, 위생용품, 식품포장재 등에 다양하게 사용되므로, 필요에 따라 탈색시킨 투명한 성상이 필요할 수 있다.
상기 천연 항균 조성물은 활성탄을 사용하여 탈색시킨 투명한 성상을 갖는 천연 항균 조성물 및 탈색을 하지 않은 천연 항균 조성물을 3:7 내지 7:3으로 혼합한 것일 수 있다.
상기 천연 항균 조성물은 그램 양성균인 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 바실러스균(Bacillus cereus) 및 충치유발균(Streptococcus mutans); 그램 음성균인 대장균(Escherichia coli) 및 녹농균(Pseudomonas aeruginosa); 및 효모류인 칸디다균(Candida albicans) 및 비듬유발균(Malassezia furfur);등의 억제 및 제거에 우수한 활성을 나타낸다.
상기 천연 항균 조성물은 식품, 의약품, 화장품, 위생용품, 식품포장재 등에 0.1 내지 1 중량%로 첨가될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 항균 활성이 필요한 물건에 제한 없이 사용될 수 있다.
본 발명은
a) 물, 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 용매를 사용하여 포도과피 추출물, 상엽 추출물, 감초 추출물 및 황금 추출물을 제조하는 단계;
b) 포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 5~25 : 5~25 : 5~25의 중량비로 혼합하여 복합 추출물을 제조하는 단계; 및
c) 상기 a)단계의 황금 추출물을 및 b)단계의 복합 추출물을 3:7 내지 7:3의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하는 천연 항균 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
상기 제조방법에 관하여, 위에서 언급된 천연 항균 조성물에 대하여 기재한 내용은 모두 동일하게 적용될 수 있다. 그러므로 중복되는 내용의 기재는 생략한다.
이하에서, 제조예 및 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다. 하기의 실시예는 본 발명의 범위 내에서 당업자에 의해 적절히 수정, 변경될 수 있다.
이하의 제조예 및 실시예에서 DF-100(Chemie research & Manufacturing Co.)은 미국 FDA 고시집(Vol. 60, No.51 제조사: Chemie Research 제품 등재)과 국내 식품첨가물공전(천연첨가물 115번)에 등재된 천연첨가물을 의미한다. DF-100은 Dr. Jackob Harich(Chemie Research 사장)가 제조방법에 관한 발명특허(No. US005425944 A)를 가지고 있는 특허품이며 법으로 보호를 받고 있는 자몽종자추출물의 제품명이다.
또한, BHC는 "complex Scutellaria baicalensis extract (BHC)"를 의미한다. BHC는 강력한 항 박테리아 활성으로 식품의 저장 기간과 품질을 높이기 위해 10 년 이상 천연 보존제로 사용되어 오고 있다.
제조예 1: 포도과피 추출물
건조된 포도과피를 5~10 mesh로 잘게 분쇄시켜서 포도과피 분말을 제조하였다.
다음으로 상기 포도과피 분말 1 kg에 50~70 부피% 농도의 에탄올 10 L를 혼합한 후, 교반기를 이용하여 60~80℃에서 교반속도 300rpm으로 2시간 동안 교반하여 추출용액을 제조하였다.
다음으로 상기 추출용액을 부직포 여과지를 이용하여 1차 여과한 뒤, 1차 여과액을 규조토필터를 사용하여 침전물이 생기지 않도록 2차 여과하였다.
회수한 2차 여과액을 농축기를 이용하여 60℃에서 감압 농축하여 포도과피추출물을 수득하였다.
제조예 2: 상엽(桑葉) 추출물
건조된 상엽을 5~10 mesh로 잘게 분쇄시켜서 상엽 분말을 제조하였다.
다음으로 상기 상엽 분말 1kg에 물 10 L를 혼합한 후, 교반기를 이용하여 60~80℃에서 교반속도 300rpm으로 2시간 동안 교반하여 추출용액을 제조하였다.
다음으로 상기 추출용액을 부직포 여과지를 이용하여 1차 여과한 뒤, 1차 여과액을 규조토필터를 사용하여 침전물이 생기지 않도록 2차 여과하였다.
회수한 2차 여과액을 농축기를 이용하여 60℃에서 감압 농축하여 상엽추출물을 수득하였다.
제조예 3: 감초 추출물
건조된 감초를 5~10 mesh로 잘게 분쇄시켜서 감초분말을 제조하였다.
다음으로 상기 감초 분말 1 kg에 물을 10 L를 혼합한 후, 교반기를 이용하여 60~80℃에서 교반속도 300rpm으로 2시간 동안 교반하여 추출용액을 제조하였다.
다음으로 상기 추출용액을 부직포 여과지를 이용하여 1차 여과한 뒤, 1차 여과액을 규조토필터를 사용하여 침전물이 생기지 않도록 2차 여과하였다.
회수한 2차 여과액을 농축기를 이용하여 60℃에서 감압 농축하여 감초추출물을 수득하였다.
제조예 4: 복합 추출물의 제조
제조예 1에서 제조된 포도과피 추출물, 제조예 2에서 제조된 상엽 추출물, 및 제조예 3에서 제조된 감초 추출물을 20:5:5의 중량비로 혼합하여 복합 추출물을 제조하였다.
제조예 5: 황금 추출물
건조된 황금을 5~10 mesh로 잘게 분쇄시켜서 황금 분말을 제조하였다.
다음으로 상기 황금 분말 1 kg에 50~70 부피% 농도의 에탄올 10 L를 혼합한 후, 교반기를 이용하여 60~80℃에서 교반속도 300rpm으로 2시간 동안 교반하여 추출용액을 제조하였다.
다음으로 상기 추출용액을 부직포 여과지를 이용하여 1차 여과한 뒤, 1차 여과액을 규조토필터를 사용하여 침전물이 생기지 않도록 2차 여과하였다.
회수한 2차 여과액을 농축기를 이용하여 60℃에서 감압 농축하여 황금추출물을 수득하였다.
제조예 6: 아치오테 열매 에탄올 추출물의 제조
아치오테(스페인어: achiote) 열매에서 씨앗을 제거한 아치오테 열매를 세절하여 1 kg에 50~70 부피% 농도의 에탄올 10 L를 혼합한 후, 교반기를 이용하여 60~80℃에서 교반속도 300rpm으로 3시간 동안 교반하여 추출용액을 제조하였다.
다음으로 상기 추출용액을 부직포 여과지를 이용하여 1차 여과한 뒤, 1차 여과액을 규조토필터를 사용하여 침전물이 생기지 않도록 2차 여과하였다.
회수한 2차 여과액을 농축기를 이용하여 60℃에서 감압 농축하여 아치오테 열매 에탄올 추출물을 수득하였다.
실시예 1: 천연 항균 조성물(DHNA-O)의 제조
상기 제조예 4에서 제조된 복합 추출물과 제조예 5에서 제조된 황금 추출물을 2:3의 중량비로 혼합하여 천연 항균 조성물을 제조하였다.
실시예 2: 탈색된 천연 항균 조성물(DHNA-DC)의 제조
상기 실시예 1에서 제조된 천연 항균 조성물(DHNA-O) 100 중량부에 활성탄 6~10 중량부를 첨가한 후, 필터로 여과하여 탈색된 천연 항균 조성물(DHNA-DC)을 제조하였다.
실시예 3: 혼합 천연 항균 조성물(DHNA-AD)의 제조
상기 실시예 1에서 제조된 천연 항균 조성물(DHNA-O)과 상기 실시예 2에서 제조된 천연 항균 조성물(DHNA-DC)을 1:1의 중량비로 혼합하여 혼합 천연 항균 조성물(DHNA-AD)을 제조하였다.
실시예 4: 천연 항균 조성물의 제조
상기 실시예 1에서 제조된 천연 항균 조성물(DHNA-O) 100 중량부에 제조예 6에서 제조된 아치오테 열매 에탄올 추출물 5 중량부를 첨가하여 천연 항균 조성물을 제조하였다.
실험예 1: 항균 활성 측정(디스크 확산법)
본 발명에 따른 천연 항균 조성물의 항균 활성을 확인하기 위해 디스크 확산법 이용하였다. 유해 세균으로 알려진 그램 양성균인 황색포도상구균(Staphylococcus aureus, ATCC 6538), 바실러스(Bacillus cereus, ATCC 21772), 충치유발균(Streptococcus mutans, KCTC 5316), 그램 음성균인 대장균(Escherichia coli, ATCC 11229), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 15522), 효모류인 칸디다 알비칸스(Candida albicans, KCTC 1940), 비듬유발균(Malassezia furfur, KCTC 7743)을 디스크 확산법 측정용 평판배지에 분주하여 도말하였다. 멸균된 페이퍼 디스크를 상기 유해 세균이 도말된 평판배지에 붙인 후, 실시군으로서 실시예 1(천연 항균 조성물(DHNA-O)), 실시예 2(천연 항균 조성물(DHNA-DC)), 및 실시예 3(천연 항균 조성물(DHNA-AD)); 비교군으로서 complex Scutellaria baicalensis extract(BHC), 자몽종자 추출물(DF-100), 및 폴리리신(Polylysine); 및 대조군으로서 멸균수를 균주별 액체배지에 용해시켜 멸균된 페이퍼 디스크에 4mg/disc의 농도로 점적한 후 배지 위에 올려놓았다. 이 평판배지를 각 균주에 따른 적정온도에서 24시간 동안 배양한 후, 생육 저지환(Clean Zone)의 크기를 측정하였다. 그 결과를 표 1 및 도 1에 나타내었다.
분류 Strain Clean zone(mm)
시료명
BHC
[0.1%] 		DF-100
[0.1%] 		Polylysine
[0.1%] 		실시예 1
DHNA-O
[0.1%] 		실시예 2
DHNA-DC
[0.1%] 		실시예 3
DHNA-AD
[0.1%]
Gram(+) Staphylococcus aureus - 22 16 22 19 21
Streptococcus mutans - 22 14 21 22 23
Bacillus cereus - 21 15 22 19 21
Gram(-) Pseudomonas aeruginosa - 21 12 22 20 22
Escherichia coli - 21 15 22 20 23
Yeast Candida albicans - 21 12 22 - 12
Malassezia furfur - 23 16 21 23 23
실험예 2: 항균 활성 측정(최소저해농도법)
본 발명에 따른 조성물의 항균 활성을 확인하기 위해 최소저해농도법을 이용하였다. 유해 세균으로 알려진 황색포도상구균(Staphylococcus aureus, ATCC 6538), 바실러스(Bacillus cereus, ATCC 21772), 충치유발균(Streptococcus mutans, KCTC 5316), 그램 음성균인 대장균(Escherichia coli, ATCC 11229), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 15522), 효모류인 칸디다 알비칸스(Candida albicans, KCTC 1940), 비듬유발균(Malassezia furfur, KCTC 7743)을 OD660nm 0.2가 되도록하여 액체배지에 배양하였다. 상기 유해 세균이 배양된 액체배지 5㎖에 실시군으로서 실시예 1(천연 항균 조성물(DHNA-O)), 실시예 2(천연 항균 조성물(DHNA-DC)), 및 실시예 3(천연 항균 조성물(DHNA-AD)); 비교군으로서 complex Scutellaria baicalensis extract(BHC), 자몽종자 추출물(DF-100), 및 폴리리신(Polylysine); 및 대조군으로서 멸균수를 각각 100㎕씩 첨가하여 각 균주에 따른 적정온도에서 24시간 동안 배양한 후 최소저해농도(MIC50, MIC90)를 측정하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.
Figure 112020087158892-pat00001
실험예 3: 보존력 및 방부력 측정
본 발명에 따른 조성물을 액상제품에 적용하여 보존력 및 방부력을 확인하였다. 먼저 액상제품(양배추복합추출물)에는 실시예 1의 천연 항균 조성물(DHNA-O)를 0.05 및 0.1 중량%가 되도록 첨가하여 37℃에서 7일간 배양하여 총균수 변화를 측정하고, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 대조군으로는 상기 항균 조성물을 넣지 않은 액상제품을 사용하였다.
시험예 4: 아치오테 열매 에탄올 추출물의 항균활성 측정
제조예 6에서 제조된 아치오테 열매 에탄올 추출물의 항균 활성을 다음과 같은 방법으로 평가하였다.
대표적인 식중독균(Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Campylobacter jejuni, Escherichia coli, Escherichia coli O-157, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Salmonella enteritidis, Salmonella thypimurium, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica)을 사용하였다.
상기 세균류를 멸균된 TSB 배지 10㎖에 배양물 50㎕를 접종하여 30℃에서 24±1 시간 계대배양하였다. 이 배양물의 농도는 microplate reader 흡수파장 655㎚에서 Abs 0.6±0.1이 유지되었다. 계대배양 한 실험균을 멸균증류수로 10-3배로 희석하여 원판확산법을 실시하였다. 즉, 희석균주를 멸균면봉에 묻혀 4?L 두께의 평판배지에 확산 도말하고 멸균된 8?L(두께 1?L) 여지를 올려 상기 시료 1 내지 3 50㎕를 주입하였다. 20분 정도 충분히 흡입시킨 후 30℃에서 24±1 시간 배양하고 생육환을 확인하였다.
상기 아치오테 열매 에탄올 추출물의 항균활성은 여지를 포함한 투명대의 크기를 측정하여 평가하고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
균주명 균주번호a 제조예 6의 아치오테 열매 에탄올 추출물
세균류 Bacillus cereus KCTC 1012 13
Bacillus subtilis KCCM 1021 12
Campylobacter jejuni KCCM 41772 12
Escherichia coli ATCC 25922 11
Escherichia coli O-157 ATCC 43888 12
Listeria monocytogenes ATCC 15313 13
Pseudomonas aeruginosa KCTC 1750 14
Staphylococcus aureus ATCC 25923 11
Salmonella enteritidis KCCM 11862 13
Salmonella thypimurium ATCC 13076 12
Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802 10
Yersinia enterocolitica ATCC 23715 14
㈜ a: ATCC American Type Culture Collection, KCTC 한국생명공학연구원 생물자원센터; KCCM (사)한국종균협회
b: 투명대의 크기(직경 mm)

Claims (9)

  1. 포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 복합 추출물과 황금 추출물을 포함하며,
    상기 복합 추출물과 황금 추출물은 3:7 내지 7:3의 중량비로 포함되는 천연 항균 조성물으로서,
    상기 복합 추출물은 포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 5~25 : 5~25 : 5~25의 중량비로 포함하며,
    상기 포도과피 추출물, 상엽 추출물, 감초 추출물 및 황금 추출물 각각은 독립적으로 추출용매로서 물, 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 용매를 사용하여 추출된 추출물이며,
    상기 천연 항균 조성물 총 중량에 대하여 아치오테 열매 에탄올 추출물 1 내지 10 중량%를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 항균 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 포도과피 추출물, 상엽 추출물, 감초 추출물 및 황금 추출물 각각은 독립적으로 추출용매로서 물 및 저급 알코올 중에서 선택되는 1 종 이상의 용매를 사용하여 추출된 추출물인 것을 특징으로 하는 천연 항균 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 천연 항균 조성물은 활성탄을 사용하여 탈색시킨 투명한 성상을 갖는 것을 특징으로 하는 천연 항균 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 천연 항균 조성물은 활성탄을 사용하여 탈색시킨 투명한 성상을 갖는 천연 항균 조성물 및 탈색을 하지 않은 천연 항균 조성물을 3:7 내지 7:3으로 혼합한 것을 특징으로 하는 천연 항균 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 천연 항균 조성물은 그램 양성균인 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 바실러스균(Bacillus cereus) 및 충치유발균(Streptococcus mutans); 그램 음성균인 대장균(Escherichia coli) 및 녹농균(Pseudomonas aeruginosa); 및 효모류인 칸디다균(Candida albicans) 및 비듬유발균(Malassezia furfur);에 대해 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 천연 항균 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 천연 항균 조성물은 식품, 의약품, 화장품, 위생용품, 및 식품 포장재에 0.1 내지 1 중량%로 첨가되는 것을 특징으로 하는 천연 항균 조성물.
  9. a) 물, 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 용매를 사용하여 포도과피 추출물, 상엽 추출물, 감초 추출물 및 황금 추출물을 제조하는 단계;
    b) 포도과피 추출물, 상엽 추출물 및 감초 추출물을 5~25 : 5~25 : 5~25의 중량비로 혼합하여 복합 추출물을 제조하는 단계; 및
    c) 상기 a)단계의 황금 추출물을 및 b)단계의 복합 추출물을 3:7 내지 7:3의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하는 제1항의 천연 항균 조성물의 제조방법.
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