CN110731436B - 一种黑老虎醋酸饮料及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种黑老虎醋酸饮料及其制备方法和应用，涉及食品技术领域，本发明所述黑老虎醋酸饮料包括黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液5～10％，黑老虎果实的乳酸菌发酵液10～20％、辅料6～12％和余量的水；所述乳酸菌包括植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8。本发明提供的黑老虎醋酸饮料中富含多酚、木脂素、三萜类物质和花色苷等抗氧化和抗炎功能成分，DPPH·的清除率达到90％以上，对酪氨酸酶的抑制活性IC50值为4.5g/L，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌等的抑菌直径均在10mm以上，具有美容养颜、杀菌抗病毒、预防衰老等功效。
Description
技术领域
本发明涉及食品技术领域，尤其涉及一种黑老虎醋酸饮料及其制备方法和应用。
背景技术
黑老虎（Kadsura coccinea）是五味子科南五味子属的常绿木质藤本野生植物，别名冷饭团、过山龙藤、血藤泡、布福娜等，主要分布于中国湖南、云南、福建、广西、四川、江西等地。黑老虎果形奇特、果肉香甜、营养与药用价值较高，是集食用、观赏、药用于一体的极具开发潜力的珍稀野生水果之一。其根、茎、果实均富含氨基酸、矿物质、维生素等营养素，还富含多酚、木脂素、三萜类物质等功能成分，具有很强的提高人体免疫力、抗炎消肿、抗氧化等功能，且研究发现：黑老虎根、茎、果实经微生物发酵后抗氧化、抗炎能力大大增加。但目前黑老虎作为局部具有食用食性的新型水果，急待将其开发成新产品和综合利用，充分利用其功能成分。
醋酸饮料属于果汁饮料的一种，是在中国传统食醋酿造的基础上，配以一定的水果和中药材酿造而成。醋酸饮料一般以果醋为主。果醋是以水果为主要原料，经微生物发酵而成，具有美容养颜、减肥、增强消化功能等功能。
目前虽然存在一些含有果醋或药食同源成分的醋饮品，比如中国专利CN104287036B公开了一种中草药绿茶保健醋饮料及生产工艺，得到了一种具有抗氧化物质含量高、保健效果好、风味佳的醋酸饮料；再比如中国专利CN103549571B公开了一种枸杞醋饮料及其生产工艺，得到一种枸杞醋饮料口感纯正，富含多种天然氨基酸、维生素和矿物质，营养丰富。但是这些醋饮料既未明确功能成分的种类及含量，也未对其功能进行检测，无法判断这些产品是否具有相关功能，提供的相关功能是否稳定。
发明内容
本发明为了克服现有的醋饮料缺乏明确功能成分的醋酸饮料的缺陷，提供了一种黑老虎醋酸饮料及其制备方法和应用，功能成分明确，富含多酚、木脂素、三萜类物质、花色苷等抗氧化和抗炎功能成分，对酪氨酸酶具有显著抑制作用，抑菌谱广。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种黑老虎醋酸饮料，按质量百分比计，包括黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液5~10%，黑老虎果实的乳酸菌发酵液10~20%、辅料6~12%和余量的水；
所述乳酸菌包括植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8；
所述植物乳杆菌Lact.chili.6的保藏编号为CGMCC NO.3021；
所述植物乳杆菌Lact.chili.8的保藏编号为CGMCC NO.3022。
优选的，所述辅料包括果葡糖浆、D-异抗坏血酸钠、山梨酸钾和柠檬酸中的一种或多种。
优选的，所述黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液的制备方法包括以下步骤：
A1、将黑老虎的根茎与质量百分比10~20%的乙醇溶液混合，提取3~6h后固液分离，弃去沉淀，得到黑老虎根茎乙醇提取物；
A2、向黑老虎根茎乙醇提取物中接入醋酸菌，发酵3~6个月，固液分离后弃去沉淀，得到黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液。
优选的，所述步骤A1中，黑老虎的根茎的质量与所述乙醇溶液的体积之比为1g:2~3ml。
优选的，所述步骤A1中，提取的温度为25~45℃。
优选的，所述步骤A2中，所述发酵包括醋酸发酵以及陈化两个步骤，其中，醋酸发酵时的温度为25~35℃，醋酸发酵的时间为2~5天；陈化时的温度为10~20℃，陈化的时间为90~180d。
优选的，所述黑老虎果实的乳酸菌发酵液的制备方法包括以下步骤：
B1、将黑老虎果实破碎后接入植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8，pH4.5~5.5的条件下发酵12~24h，得到黑老虎果实的乳酸菌发酵物；
B2、对黑老虎果实的乳酸菌发酵物进行固液分离，弃去沉淀，得到黑老虎果实的乳酸菌发酵液。
优选的，所述步骤B1中，植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8以混合发酵剂的形式接入破碎后的黑老虎果实中；
含有植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的混合发酵剂的制备方法包括以下步骤：
S1、将植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8接种于高密度培养基中，培养至植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的菌体密度均达到1011cfu/ml以上，得到高密度培养液；
所述高密度培养基包括：脱脂牛奶10~30g/kg、黑老虎果汁50~100g/kg、胡萝卜汁30~50g/kg和番茄汁30~50g/kg；
S2、将所述高密度培养液离心弃去上清，得到乳酸菌菌泥；
S3、将乳酸菌菌泥与保护剂混合后，将混合物真空冷冻干燥，得到含有植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的混合发酵剂；
所述保护剂包括黑老虎果粉和脱脂奶粉；
所述黑老虎果粉是将黑老虎果实打浆后干燥得到的。
本发明还提供了一种上述技术方案所述黑老虎醋酸饮料的制备方法，包括以下步骤：
将黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液、黑老虎果实的乳酸菌发酵液、辅料和水混合，依次进行过滤和杀菌，即得黑老虎醋酸饮料。
本发明还提供了前述技术方案所述黑老虎醋酸饮料在制备美容养颜、抗氧化、杀菌抗病毒以及预防衰老的食品或保健品中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明提供了一种黑老虎醋酸饮料，按质量百分比计，包括黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液5~10%，黑老虎果实的乳酸菌发酵液10~20%、辅料6~12%和余量的水；所述乳酸菌包括植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8。本发明研究表明，黑老虎的根茎中含有丰富的具有抗氧化、抗炎、增强免疫力作用的木脂素和三萜类化合物，木脂素不溶于水，三萜类化合物溶于水和稀醇溶液，乙醇既可以增加木脂素和三萜类化合物的提取率，又可以为醋酸发酵提供底物。本发明创造性的将黑老虎根茎的乙醇提取物作为原料进行醋酸菌发酵，得到黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液，所得发酵液具有抗氧化、抗炎、增强免疫力作用。
Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8发酵速度快，发酵产品风味好，且能分泌具有抑菌作用的乳酸菌素。黑老虎果实汁液含量丰富，汁液中富含碳水化合物、维生素、矿物质，黑老虎果皮中富含花青素、多酚等功能物质。本发明以植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8对黑老虎果实进行发酵，黑老虎果实经乳酸菌发酵后，风味酸甜可口，并富含多酚、花青素等功能性物质。
本发明将黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液与黑老虎果实的乳酸发酵液复配的优势在于：其一，黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液中主要酸性物质是醋酸，黑老虎果实的乳酸菌发酵液中中主要酸性物质是乳酸，两者混合，使得饮料的酸味更加柔和；其二，黑老虎果实的乳酸菌发酵液中富含碳水化合物、氨基酸、维生素、矿物质、多酚、花青素等，而黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液中富含木脂素和三萜类化合物，两者在营养上互补。
本发明提供的黑老虎醋酸饮料中富含多酚、木脂素、三萜类物质和花色苷等抗氧化和抗炎功能成分，多酚、木脂素、三萜类物质以及花色苷的含量分别在0.273mg/g、0.334mg/g、0.2532mg/g以及0.305mg/g以上，DPPH·的清除率达到90%以上，对酪氨酸酶的抑制活性IC50值为4.5g/L，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌等的抑菌直径均在10mm以上，具有美容养颜、杀菌抗病毒、预防衰老等功效。
本发明所述的黑老虎醋酸饮料的制备方法中，提取剂种类和浓度选择得当，并合理地设定了提取温度和时间，确保功能充分较高的提取率；经醋酸发酵和乳酸发酵后，确保这些功能物质能稳定地存在于发酵液中。通过提取的原料功效物质明确、提取方法正确、微生物发酵稳定功效物质的方式综合，克服了常规醋酸饮料功效物质不明确、不稳定的缺陷。
具体实施方式
本发明提供了一种黑老虎醋酸饮料，按质量百分比计，包括黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液5~10%，黑老虎果实的乳酸菌发酵液10~20%、辅料6~12%和余量的水；
所述乳酸菌包括植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8；
所述植物乳杆菌Lact.chili.6的保藏编号为CGMCC NO.3021；
所述植物乳杆菌Lact.chili.8的保藏编号为CGMCC NO.3022。
在本发明中，所述黑老虎醋酸饮料优选的包括：黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液6~8%，黑老虎果实的乳酸菌发酵液14~18%、辅料8~10%和余量的水。在本发明中，所述辅料为本领域已知的可用于食品的辅料，包括但不限于在本发明的具体实施方式中，以果葡糖浆作为辅料。
在本发明中，所述黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液的制备方法优选的包括以下步骤：
A1、将黑老虎的根茎与质量百分比10~20%的乙醇溶液混合，提取3~6h后固液分离，弃去沉淀，得到黑老虎根茎乙醇提取物。
本发明选择黑老虎的根茎进行乙醇提取的原因在于黑老虎的根茎中含有丰富的具有抗氧化、抗炎、增强免疫力作用的木脂素和三萜类化合物。在本发明中，所述黑老虎根茎在混合前优选的进行切片，所述切片优选的切成2~3mm薄片，以便提取。在本发明中，所述黑老虎根茎的质量与所述乙醇溶液的体积之比优选为1g:2~3ml。在本发明中，所述乙醇溶液的浓度优选为质量百分比12~16%。本发明选择质量百分比10~20%的乙醇溶液作为提取溶剂，是因为质量百分比10~20%的乙醇溶液作为提取溶剂同时对木脂素和三萜类物质具有较高的提取率。乙醇溶液浓度太高会降低三萜类化合物提取率，太低会降低木脂素提取率。
在本发明中，所述提取的温度优选为25~45℃，更优选为40℃。在本发明中，所述提取的时间优选为4~5h。在本发明中，所述提取的pH值优选为为6~7，更优选为6.5。在本发明中，所述固液分离方法为本领域已知的任何固液分离方法，例如离心或过滤。
本发明得到的黑老虎根茎乙醇提取物中含有木脂素和三萜类化合物。选择乙醇溶液作为提取溶剂对人体安全并且提取率高。
A2、向黑老虎根茎乙醇提取物中接入醋酸菌，发酵3~6个月，固液分离后弃去沉淀，得到黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液。
在本发明的具体实施方式中，所述醋酸菌优选为醋酸菌沪酿1.01。在本发明中，所述醋酸菌的接种量优选为2~5%，更优选为2~3%。在本发明中，所述发酵优选的包括醋酸发酵和陈化两个步骤；醋酸发酵的目的是产生醋酸，稳定木脂素和三萜类化合物；陈化的目的是形成更多风味物质，饮料风味更加柔和。在本发明中，所述醋酸发酵时的温度优选为25~35℃，更优选为30℃。在本发明中，当pH≤3时，停止醋酸发酵，进入陈化阶段；所述醋酸发酵的时间优选为2~5天，更优选为4天。在本发明中，所述陈化时的温度优选为10~20℃，更优选为15℃；所述陈化的时间为90~180天，更优选为120天。
本发明对所述固液分离的方法无特殊限定，采用本领域已知的固液分离方法即可，例如过滤或离心。
本发明发酵得到的黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液，是将黑老虎根茎乙醇提取物中的乙醇发酵为醋酸成分。
在本发明中，所述黑老虎果实的乳酸菌发酵液的制备方法优选的包括以下步骤：
B1、将黑老虎果实破碎后接入植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8，pH4.5~5.5的条件下发酵12~24h，得到黑老虎果实的乳酸菌发酵物。
本发明选择黑老虎果实作为发酵原料，是因为黑老虎果实汁液含量丰富，汁液中富含碳水化合物、维生素、矿物质，黑老虎果皮中富含花青素、多酚等功能物质，进而获得风味酸甜可口的发酵物，并富含多酚、花青素等功能性物质。本发明选择植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8对黑老虎果实进行共同发酵，选择这两种菌株进行混合发酵是因为发酵速度快，酸度增加快，缩短发酵周期，抑制其它杂菌生长，提高多酚、花青素等功能物质的稳定性。
本发明所述植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8均已于2009年04月14日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行了保藏，并已在其他中国专利中公开，属于已知菌种。
在本发明中，所述植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8优选的以混合发酵剂的形式接入破碎后的黑老虎果实中；本发明优选的，所述含有植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的混合发酵剂的制备方法包括以下步骤：
S1、将植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8接种于高密度培养基中，培养至植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的菌体密度均达到1011cfu/ml以上，得到高密度培养液；
所述高密度培养基包括：脱脂牛奶10~30g/kg、黑老虎果汁50~100g/kg、胡萝卜汁30~50g/kg和番茄汁30~50g/kg；
S2、将所述高密度培养液离心弃去上清，得到乳酸菌菌泥；
S3、将乳酸菌菌泥与保护剂混合后，将混合物真空冷冻干燥，得到含有植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的混合发酵剂；
所述保护剂包括黑老虎果粉和脱脂奶粉；
所述黑老虎果粉是将黑老虎果实打浆后干燥得到的。
在本发明中，所述植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8在接种高密度培养基前优选的进行活化。在本发明中，接种高密度培养基后的培养时间优选为24~48h，更优选为30~40h；所述培养的温度优选为35~38℃，更优选为37℃。
在本发明中，所述高密度培养基优选的包括：脱脂牛奶10~30g/kg、黑老虎果汁50~100g/kg、胡萝卜汁30~50g/kg和番茄汁30~50g/kg；更优选的包括：脱脂牛奶15~25g/kg、黑老虎果汁60~80/kg、胡萝卜汁35~45g/kg和番茄汁35~45g/kg；所述高密度培养基的溶剂优选为水。在本发明中，所述黑老虎果汁的制备方法优选为：将黑老虎果实洗净后破碎，榨汁，固液分离取液体部分，即得黑老虎果汁。本发明所述的高密度培养基中，脱脂牛奶起到提供碳水化合物、蛋白质等主要营养物质的作用，黑老虎果汁起到提供木脂素、三萜类化合物、多酚、花青素、矿物质、维生素等促生长因子作用，胡萝卜汁起到提供矿物质、维生素、类胡萝卜素等促生长因子作用，番茄汁起到提供矿物质、维生素、番茄红素等促生长因子作用。
本发明对所述高密度培养液离心的目的是为了获得植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的复合菌体。在本发明中，所述离心的转速优选为5000~12000r/min，更优选为8000 ~11000r/min，最优选为10000 r/min。本发明所述离心的时间优选为5~12min，更优选为7~10min，最优选为10min。
本发明在乳酸菌菌泥中添加保护剂的目的是为了减少真空冷冻干燥对乳酸菌活性的影响。在本发明中，所述乳酸菌菌泥与保护剂的质量比优选为1:0.5~1.5，更优选为1:1。
在本发明中，所述保护剂中优选的按照黑老虎果粉和脱脂奶粉质量比0.5~2:0.5~2，更优选为1:1。在本发明中，所述黑老虎果粉的制备方法优选的包括：将黑老虎果实清洗、去籽、打浆，得到黑老虎果浆，采用真空冷冻干燥至含水量低于10%，得黑老虎果粉。所述保护剂中的黑老虎果粉起到提供木脂素、三萜类化合物、多酚、花青素、矿物质、维生素等促生长因子作用，脱脂奶粉起到提供碳水化合物、蛋白质等主要营养物质作用。在本发明中，所述真空冷冻干燥的条件依次包括：-80℃下预冷冻1~2h，-60℃~-100℃下干燥6~10h。
在本发明中，所述植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的发酵pH值优选为5；所述发酵的时间优选为14~20h。
B2、对黑老虎果实的乳酸菌发酵物进行固液分离，弃去沉淀，得到黑老虎果实的乳酸菌发酵液。
本发明对所述固液分离方法无特殊限定，采用本领域已知的任何固液分离方法进行即可，例如离心或过滤。本发明制备得到的黑老虎果实的乳酸菌发酵液中含有木脂素、三萜类化合物、多酚、花青素、矿物质、维生素及活性乳酸菌，能够为所述黑老虎醋酸饮料提供美容养颜、杀菌抗病毒、预防衰老等功效。
本发明提供的黑老虎醋酸饮料具有天然蔬的风味，富含多酚、木脂素、三萜类物质以及花色苷，有效成分明确；DPPH·清除率高，对酪氨酸酶具有显著的抑制活性，抑菌谱广。
本发明还提供了一种上述技术方案所述黑老虎醋酸饮料的制备方法，包括以下步骤：
将黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液、黑老虎果实的乳酸菌发酵液、辅料和水混合，依次进行过滤和杀菌，即得黑老虎醋酸饮料。
在本发明的具体实施方式中，所述过滤优选的采用孔径0.001微米的RO膜芯式的过滤装置。在本发明中，所述黑老虎醋酸饮料在工业生产时，优选的将过滤后的混合溶液进行灌装，再进行后续杀菌步骤。在本发明中，所述杀菌的方法优选为超高温瞬时杀菌；所述超高温瞬时杀菌的温度优选为125~135℃，杀菌时间优选为1~2s。
本发明前述技术方案所述黑老虎醋酸饮料中富含多种抗氧化和抗炎有效成分，可应用于制备美容养颜、抗氧化、杀菌抗病毒以及预防衰老的食品或保健品。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
下面实施例中的高密度培养基的配方为每1000g高密度培养基中含脱脂牛奶10~30g、黑老虎果汁50~-100g、胡萝卜汁30~50g、番茄汁30~50g，其余为蒸馏水；保护剂的配方为黑老虎果粉与脱脂奶粉按质量比1:1混合。
所述黑老虎果粉的制备方法包括：将黑老虎果实清洗、去籽、打浆，得到黑老虎果浆，采用真空冷冻干燥至含水量低于10%，得黑老虎果粉。
实施例1
黑老虎根和茎清洗，晾干后，切成2~3mm薄片，采用质量百分比15%乙醇溶液提取其功能性成分，固液比为1:2，30℃下提取5h，过滤，收集滤液，以3%（w/w）接种量加入醋酸菌发酵4d、陈化4个月，得到根茎乙醇提取物醋酸菌发酵液，备用；
将植物乳杆菌Lact.chili.6和Lact.chili.8于MRS固体培养基斜面上，37℃活化培养30h。将活化后的Lact.chili.6和Lact.chili.8转移至高密度培养基中，培养30h，发酵液中Lact.chili.6和Lact.chili.8的菌体浓度达到1011cfu/ml。将发酵液离心，弃去上清液，生理盐水洗涤沉淀，离心，得到菌泥，按菌泥重添加150%保护剂，混匀，-80℃预冻2h，放入真空冷冻干燥机-60℃至-100℃干燥8h，即得乳酸菌冻干粉，备用；
黑老虎果实经清洗、破碎、接种乳酸菌冻干粉2%，37℃发酵24h，控制pH 5.0，过滤，取滤液，得到黑老虎果实乳酸菌发酵液，备用；以黑老虎醋酸饮料总重为基准，根茎乙醇提取物醋酸菌发酵液添加量为5%，黑老虎果实乳酸菌发酵液添加量为20%，果葡糖浆添加量为8%，余量为蒸馏水，混匀，过滤，罐装，杀菌，得到黑老虎醋酸饮料。
测定制备得到的黑老虎醋酸饮料中木脂素(高效液相色谱法)、三萜类化合物(高效液相色谱法)、多酚（福林酚检测法）、花色苷（分光光度比色法）的含量，并检测其DPPH·清除率（分光光度比色法）、酪氨酸酶抑制活性（分光光度比色法）以及抗菌性（抑菌圈法），结果如表1所示。
表1 本发明实施实例1黑老虎醋酸饮料与市场上醋酸饮料指标对比
实施实例2
黑老虎根和茎清洗，晾干后，切成2~3mm薄片，采用质量百分比20%乙醇溶液提取其功能性成分，固液比为1:3，40℃下提取3h，过滤，收集滤液，2%（w/w）接种量加入醋酸菌发酵5d、陈化6个月，得到根茎乙醇提取物醋酸菌发酵液，备用；
将植物乳杆菌Lact.chili.6和Lact.chili.8于MRS固体培养基斜面上，37℃活化培养30h。将活化后的Lact.chili.6和Lact.chili.8转移至高密度培养基中，培养30h，发酵液中Lact.chili.6和Lact.chili.8的菌体浓度达到1011cfu/ml。将发酵液离心，弃去上清液，生理盐水洗涤沉淀，离心，得到菌泥，按菌泥重添加150%保护剂，混匀，-80℃预冻2h，放入真空冷冻干燥机-60℃~-100℃干燥8h，制得乳酸菌冻干粉，备用；黑老虎果实经清洗、破碎、接种乳酸菌冻干粉3%，37℃发酵18h，控制pH4.5，过滤，取滤液，得到黑老虎果实乳酸菌发酵液，备用；
以黑老虎醋酸饮料总重为基准，根茎乙醇提取物醋酸菌发酵液添加量为10%，黑老虎果实乳酸菌发酵液添加量为10%，果葡糖浆添加量为10%，余量为蒸馏水，混匀，过滤，罐装，杀菌，得到老虎醋酸饮料。
测定制备得到的黑老虎醋酸饮料中木脂素(高效液相色谱法)、三萜类化合物(高效液相色谱法)、多酚（福林酚检测法）、花色苷（分光光度比色法）的含量，并检测其DPPH·清除率（分光光度比色法）、酪氨酸酶抑制活性（分光光度比色法）以及抗菌性（抑菌圈法），结果如表2所示。
表2 本发明实施实例2黑老虎醋酸饮料与市场上醋酸饮料指标对比
由以上实施例可知，本发明制备得到的黑老虎醋酸饮料中以多酚、木脂素、三萜类物质以及花色苷为明确的功能性物质，有效物质含量高；抗氧化活性高，DPPH·的清除率达到90%以上，对酪氨酸酶的抑制活性IC50值为4.5g/L（抑制黑色素形成），对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌等的抑菌直径均在10mm以上，具有美容养颜、杀菌抗病毒、预防衰老等功效。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种黑老虎醋酸饮料，其特征在于，按质量百分比计，包括黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液5~10%，黑老虎果实的乳酸菌发酵液10~20%、辅料6~12%和余量的水；
所述乳酸菌包括植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8；
所述植物乳杆菌Lact.chili.6的保藏编号为CGMCC NO.3021；
所述植物乳杆菌Lact.chili.8的保藏编号为CGMCC NO.3022；
所述黑老虎果实的乳酸菌发酵液的制备方法包括以下步骤：
B1、将黑老虎果实破碎后接入植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8，pH4.5~5.5的条件下发酵12~24h，得到黑老虎果实的乳酸菌发酵物；所述植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8以混合发酵剂的形式接入破碎后的黑老虎果实中；
B2、对黑老虎果实的乳酸菌发酵物进行固液分离，弃去沉淀，得到黑老虎果实的乳酸菌发酵液；
所述步骤B1中，所述混合发酵剂的制备方法包括以下步骤：
S1、将植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8接种于高密度培养基中，培养至植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的菌体密度均达到1011cfu/ml以上，得到高密度培养液；
所述高密度培养基包括：脱脂牛奶10~30g/kg、黑老虎果汁50~100g/kg、胡萝卜汁30~50g/kg和番茄汁30~50g/kg；
S2、将所述高密度培养液离心弃去上清，得到乳酸菌菌泥；
S3、将乳酸菌菌泥与保护剂混合后，将混合物真空冷冻干燥，得到含有植物乳杆菌Lact.chili.6和植物乳杆菌Lact.chili.8的混合发酵剂；
所述保护剂包括黑老虎果粉和脱脂奶粉；
所述黑老虎果粉是将黑老虎果实打浆后干燥得到的；
所述黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液的制备方法包括以下步骤：
A1、将黑老虎的根茎与质量百分比10~20%的乙醇溶液混合，提取3~6h后固液分离，弃去沉淀，得到黑老虎根茎乙醇提取物；所述黑老虎的根茎的质量与所述乙醇溶液的体积之比为1g:2~3ml；所述提取的温度为25~45℃；
A2、向黑老虎根茎乙醇提取物中接入醋酸菌，发酵3~6个月，固液分离后弃去沉淀，得到黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液。
2.根据权利要求1所述的黑老虎醋酸饮料，其特征在于，所述辅料包括果葡糖浆、D-异抗坏血酸钠、山梨酸钾和柠檬酸中的一种或多种。
3.一种权利要求1或2所述黑老虎醋酸饮料的制备方法，包括以下步骤：
将黑老虎根茎乙醇提取物的醋酸发酵液、黑老虎果实的乳酸菌发酵液、辅料和水混合，依次进行过滤和杀菌，即得黑老虎醋酸饮料。
4.权利要求1或2所述黑老虎醋酸饮料在制备美容养颜、抗氧化或预防衰老的保健品中的应用。
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