KR102386874B1 - 실크피브로인 단백질 조성물 및 이의 응용방법 - Google Patents

실크피브로인 단백질 조성물 및 이의 응용방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 실크피브로인 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 실크 피브로인 단백질을 이용하여 원격의료 진단 등을 위한 체액의 안정적인 매개체로서 사용하는 방법에 관한 것이다.
구체적으로, 본 발명의 조성물은 특정 집누에나방(Bombyx mori)의 고치로부터 추출한 실크피브로인 단백질을 포함한다. 상기 단백질은 대략 35kDa 내지 400kDa의 분자량을 가지는 중쇄(Heavy chain)와 경쇄(light chain)로 구성되어 있다.
집누에나방으로부터 추출한 단백질 그 자체는 중쇄와 경쇄의 상호작용으로 인해, 입체 구조적으로 α-helix, random coil에서 부분적으로 β-sheet로의 변화가 이루어진다. 때문에 시편의 안정화 능력이 떨어져 본 발명에서의 사용 목적에 적합하지 않다.
따라서, 본 발명에서는 피브로인의 아미노산 반복 서열단위 중 Ala(α), Gly(α), Ala(β)m Gly(β)의 분포 함량을 변화시킴으로써 생물학적 샘플을 안정화시킬 수 있는 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 기존의 콜드체인(cold chain) 저장, 동결건조, 공유 고정화(covalent immobilization) 및 셀룰로오스 기반 기술의 문제점을 보완함으로써 보다 광범위하기 주문형(on demand) 또는 현장형(point of care) 적용에서 넓은 선택의 범위를 제공할 수 있다.

Description

실크피브로인 단백질 조성물 및 이의 응용방법{Silk fibroin protein composition and application method thereof}
본 발명은 실크피브로인 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 실크 피브로인 단백질을 이용하여 원격의료 진단 등을 위한 체액의 안정적인 매개체로서 사용하는 방법에 관한 것이다.
현재 임상병리학적으로 사용되어지는 혈액 또는 혈액의 분획(혈장, 혈청 등)을 저장하고 취급하는 통상적인 방법은 동결(-20℃)에 의한 것이다. 특히, 매우 불안정한 RNA의 경우에는 샘플의 안전성을 보존하기 위해 초저온(-80℃)에서의 보관 및 운송해야 하는 등 큰 제약이 있다. 즉 샘플을 스티로폼 박스 또는 드라이아이스 등을 사용하여 이송하기 때문에 운송과정에서 고가의 운송요금을 추가로 부담하는 경우가 발생한다.
일부 개발도상국 또는 원거리 필드 조건에서는 연속적인 냉장보관을 지원하는 최소한의 기반시설이 제대로 갖춰지지 않은 경우가 많아, 수행 가능한 정밀 진단의 범위가 제한된다.
따라서, 약동학(PK) 스크리닝을 위해 치료 효능을 모니터하고 2차 요법으로 적절한 전환을 안내하기 위한 저렴하고 안정적인 저장 포맷(format)의 필요성이 절실하다.
특히 세계적인 팬더믹(Pandemic)이 발생하였을 경우 의료진 및 환자의 대면 접촉으로 인한 질병의 2차 감염이 유발될 수 있다.
이러한 2차 감염을 방지하기 위해 앞으로의 의료 진단방향은 대면 접촉을 최소화하고, 원거리 진단을 통한 새로운 선별검사(Screening Test) 적용이 보편화될 것으로 전망된다.
현재 가장 널리 쓰이는 셀룰로오스 기반의 포맷은 잠재적 분석 대상인 모든 분석물을 커버하기에는 적합하지 않으며, 일부 마커는 셀룰로오스 매트릭스와 화학적으로 반응하여 이를 분석하기 위한 충분한 회수 과정이 어렵다는 것을 발견하였다.
이들 셀룰로오스 매트릭스 기반의 혈액 및 혈장 안정화 시스템의 몇몇 결점 또한, 수년간 지속된 광범위한 세트의 임상적 평가를 통해 밝혀져 왔다.
이러한 결점은 건조 혈반 시편이 달성할 수 있는 검출 하한치(Lower Limit of Detection, LLD) 및 적정한 정량적 식별이 되는 동적 범위에 한계로 작용하여, 건조 혈반 시편의 완전성을 보장할 수 없고, RNA 바이러스에 대한 분자 시험을 위한 수송 수단으로 사용될 수 없다는 한계점으로 작용할 수 있다.
따라서, 생물학적 샘플 및 성분을 충분히 안정화 할 수 있고, 검출 및 분석용의 안정화된 샘플로부터 다양한 분석을 수행하기 충분한 양의 샘플을 회수 할 수 있는 개선된 안정화 기술 및 제품의 개발 필요성이 시급하다.
본 발명에서는 일정 시간 및 일정 범위의 저장 온도에 걸쳐 전혈 및 특정 혈액 성분을 안정화시킬 수 있고, 분석을 위한 유효성분의 충분한 회수가 가능한 것을 특징으로 하는, 재조합된 피브로인 단백질을 제공한다.
본 발명의 조성물은 시트 상태에서 소량의 체액을 흡수하고, 이어서 안정화 단계로 진입한다. 그리고 박막 내의 혼합 착물로 공기 건조된다. 또한 불안정한 소량의 핵산을 함유하는 재구성된 혼합용액 응고기술을 동결 건조 기술과 접목하여 보다 안정적인 약동학 스크리닝에 적극 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
현재 혈액의 건식 저장을 위해 사용되는 유일한 기술은 셀룰로오스기반 기술이지만, 이 기술은 콜드 체인 성능 매트릭스와 매치할 수 없기 때문에 널리 채택되지 못하고 있다. 본 발명의 단백질 조성물은 온 페이퍼 장치를 대신하도록 사용 가능하며, 콜드 체인 저장에 의존하는 기존 방식에 의존하지 않는 보다 새로운 패러다임을 제시해줄 것으로 기대된다.
또한, 본 발명은 소변, 타액 및 다른 체액 또는 세포로부터의 샘플 수집의 또 다른 형태의 진단 유용성을 적용시킬 수 있을 것으로 기대된다.
대한민국 등록특허 제10-2071733호
상기한 문제점을 해결하기 위한 본 발명의 목적은 생체 시료의 안정적인 보존을 위한 시편의 조성물을 제공하는 것이다.
구체적으로, 본 발명은 집누에나방(Bombyx mori)의 고치로부터 추출한 단백질 중, β 구조를 형성할 수 있는 가능성이 있는 단위 폴리펩티드의 함량을 조절함으로써, Silk Ⅱ 구조로 전이되는 것을 최대한 지연시켜 보다 안정적인 단백질 조성물을 제조하는 것을 그 목적으로 한다.
본 발명은 상기와 같이 단위 폴리펩티드의 함량을 조절함으로써 자발적인 β 구조로의 전이를 감소시킨다. 이와 동시에, 생체 시료의 접촉시 단분자 상태에서도 생체 시료와의 β 구조 형성을 촉진하고, 분자 사슬 간의 상호작용에 영향을 주어 더욱 안정되고 견고한 β 구조로 변환됨으로써, 보다 안정적인 생체 시료의 보존이 가능하다.
본 발명은 재용해도가 뛰어난 실크피브로인 단백질 조성물에 있어서, 상기 실크피브로인 단백질 조성물의 전체 아미노산 함량대비 글리신의 함량이 40 내지 50 중량%, 알라닌의 함량이 25 내지 35 중량%이며, 상기 실크피브로인 단백질 조성물의 평균 분자량이 32 kDa 내지 340 kDa를 가지는 것인, 실크피브로인 단백질 조성물을 제공한다.
구체적으로, 상기 글리신은 글리신(β)와 글리신(α)로 구성되고, 상기 글리신(β)와 글리신(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10 : 90인 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체적으로, 상기 알라닌은 알라닌(β)와 알라닌(α)로 구성되고, 상기 알라닌(β)와 알라닌(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10 : 90인 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 구체적으로 상기 조성물은 중쇄(heavy chain) 및 경쇄(light chain)를 포함하고, 상기 중쇄(heavy chain)와 경쇄(light chain)의 중량 비율이 0.1 : 99.9 내지 10 : 90인 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 pH 1 내지 13의 범위내에서 제조된 것일 수 있고, 0.1atm 내지 2.0atm의 범위내에서 제조된 것일 수 있으며, 3000RCF 내지 20000RCF의 G-Force 범위내에서 제조된 것일 수 있고, 60분 내지 240분의 반응 시간 범위내에서 제조된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체적으로, 상기 조성물은 고체 또는 액체 형태이거나, 상기 조성물은 셀룰로오스 베이스 또는 플라스틱 스틱에 도포되어 동결 및 동결 건조된 시편 형태일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 그 자체로 동결 및 동결 건조된 시편 형태이거나, 건조된 분말 입자 형태일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물은 피브로인 단백질이 3 내지 14일 동안 안정하게 유지되는 것을 특징으로 하며, 본 발명의 조성물은 22℃ 내지 38℃에서 30일동안 보관 안정성이 유지되는 것을 특징으로 한다.
한편, 본 발명의 조성물은 부가적인 첨가제로서 글리세롤을 전체 중량의 20 내지 90중량% 첨가할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물은 물에 재가용화되어 피브로인 응집체가 없는 실크피브로인 용액을 형성하는 것을 특징으로 하며, 특히 재가용화 후 검출 가능한 양의 생물학적 시료 및 시료에 포함된 활성성분을 회수할 수 있는 것을 특징으로 한다.
상기 조성물을 재가용화 후 검출 가능한 양의 생물학적 시료를 회수할 수 있는 조건은 24시간 내지 14일의 시간, 43℃이하의 온도 조건에서 회수가 가능할 수 있고, 상기 생물학적 시료는 세포, 조직, 혈액 (예를 들어 전혈, 혈장, 혈청, 혈소판 등), 수유 생성물, 양수, 객담, 소변, 타액, 점액, 기관지 흡인물 또는 이들의 분획 또는 이들의 조합이거나, 또는 이들을 포함하는 것일 수 있으며, 상기 활성성분은 펩티드, 단백질, 항체, 효소, 아미노산, 헥산, DNA 및 이들의 분획, RNA 및 이들의 분획, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 대사물, 지질, 당, 당단백질, 펩티도글리칸, 미생물, 세포 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 하나이상 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적으로, 상기 피브로인 단백질 조성물과 생물학적 샘플의 비율이 약 1 : 100 내지 100 : 1일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 다른 측면은, 상기 피브로인 단백질 조성물을 포함하는 생물학적 샘플 수집 장치를 포함하는 키트를 제공한다.
구체적으로, 상기 키트는 가용화제를 함유하는 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 가용화제는 물, 완충용액, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
또한, 구체적으로 상기 키트는 안정화제를 함유하는 용기를 포함할 수 있으며, 상기 안정화제는 생물학적 시료 샘플을 안정화하는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 안정화제는 항산화제, 젤라틴 및 그 유도체, 알부민(인간 및 소 혈청), 아미노산, 양이온 및 음이온 계면활성제, 당 알코올 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다. 더욱 구체적으로, 상기 안정화제는 뉴클레아제 또는 프로테이나제 억제제일 수 있고, 가장 구체적으로는 안정화제가 RNase 억제제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 구체적으로 상기 키트는 핵산 증폭제, 성분 정제제, 면역 검출제 또는 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하여 구성되는 것일 수 있다.
본 발명의 실크피브로인 단백질 조성물을 이용하면, 기존 셀룰로오스 기반의 제품의 단점인 특정 온도 및 습도에 영향을 받는다는 한계점을 극복할 수 있어, 이송 과정 중 혈액 샘플에서 단백질 무결성을 확보하여 보다 더 정확한 진단이 가능하다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 Bombyx mori누에에서 피브로인추출 과정 중 본 발명에서 제시된 범위에서 정련과정을 거쳐 건조된 피브로인의 SEM 사진을 나타낸 것이다(A: 본 발명의 제시된 범위, B: 온도, 압력, 시간을 각각 10% 증가시킨 경우, C: 온도, 압력, 시간을 각각 20%씩 증가시킨 경우).
도 2는 본 발명 조성물인 건조체액 안정화 조성물의 분자량 및 크로마토그램 측정 자료를 나타내었다(A: DHS의 분자량 분포도, B: pH 2.5 수용액 상태에서 크로마토그램, C: pH 3.0 수용액 상태에서 크로마토그램, D: pH 3.5 수용액 상태에서 크로마토그램).
도 3은 본 발명 조성물의 pH에 따른 안정성을 측정한 자료를 나타내었다.
도 4는 도 3의 pH에 따른 변화과정을 Raman 분석을 통해 측정한 자료를 나타내었다.
도 5는 본 발명 조성물의 SEM 측정자료를 나타내었다(A: 본 발명 조성물의 SEM 자료, B: 본 발명 조성물에 플라즈마를 적용한 SEM 자료).
도 6은 본 발명 조성물의 XRD 측정 자료를 나타내었다(A: 실험 직후, B: 14일 경과 후).
도 7은 Luminex 면역 검정 시스템을 이용하여 38℃ 또는 22℃에서 30일동안 샘플을 보관 후 각 바이오 마커를 측정한 자료로서, 백색 블록은 DHS(혈장), 검정 블록은 DHS (혈액), 회색 블록은 액체 플라즈마를 나타내었다(A: SAP(serum amyloid P component), B: sVCAM-1(soluble cell adhesion molecule), C: CRP(C-reactive protein)).
도 8은 실험 직후 및 2주 후의 LP(Liquid Plasma), DBS(Dried Blood Spot (cellulose sheet)), DHS(Dried Humoral Spot (silk sheet))의 총 PSA 측정값을 나타내었다(A: 실험 직후, B: 22도 및 43도에서 2주 경과 후).
도 9는 실험 직후 및 2주 후의 LP(Liquid Plasma), DBS(Dried Blood Spot (cellulose sheet)), DHS(Dried Humoral Spot (silk sheet))의 렙틴 측정값을 나타내었다(A: 실험 직후, B: 22도 및 43도에서 2주 경과 후).
도 10은 실험 직후 및 2주 후의 LP(Liquid Plasma), DBS(Dried Blood Spot (cellulose sheet)), DHS(Dried Humoral Spot (silk sheet))의 프로락틴 측정값을 나타내었다(A: 실험 직후, B: 22도 및 43도에서 2주 경과 후).
도 11은 서로 다른 실크 피브로인 품종별(7 품종) 아미노산 함량을 크로마토그래픽으로 분석하여 측정한 자료를 나타내었다(A (Baekok jam), B (Geumgwang ju), C (Hansang Ⅱ), D (Hong bak), E (Imbakgal won), F (N74), G (SK), H (Won jam 125), I (Won won 126)).
이상의 본 발명의 목적들, 다른 목적들, 특징들 및 이점들은 첨부된 도면과 관련된 이하의 바람직한 실시예들을 통해서 쉽게 이해될 것이다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예들에 한정되지 않고 또 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 실시예들은 본 발명의 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 통상의 기술자에게 본 발명의 기술적으로 구현되는 의도가 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다.
각각의 도면을 설명하면서 유사한 참조부호를 유사한 구성요소에 대해 사용하였다. 첨부된 도면에 있어서, 수치는 본 발명의 명확성을 위하여 실제보다 확대하여 도시한 것이다. 제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 권리 범위를 벗어나지 않으면서 제1 구성요소는 제2 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성요소도 제1 구성요소로 명명될 수 있다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다.
본 발명에서, 사용되어지는 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 구성요소, 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 구성요소 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 다른 부분 "상에" 있다고 할 경우, 이는 다른 부분 "바로 위에" 있는 경우뿐만 아니라 그 중간에 또 다른 부분이 있는 경우도 포함한다. 반대로 다른 부분 "하부에" 있다고 할 경우, 이는 다른 부분 "바로 아래에" 있는 경우뿐만 아니라 그 중간에 또 다른 부분이 있는 경우도 포함한다.
본 발명에 사용되는 집누에나방(Bombyx mori)에서 피브로인을 추출하는 과정 중 정련 방법은 통상의 기술자에게 알려진 공지된 방법을 포함해 여러 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명에서 상기 “피브로인(Fibroin)”은 집누에나방 유충 등의 다른 나방 속에 의해 생산되는 실크에 포함된 불용성 단백질을 의미한다.
본 발명에서 용어 “실크”는 가잠견(Bombyx mori silkworm, 집누에) 또는 야잠견(Tussah, Giant silkworm, 들누에)을 통칭하여 누에로부터 추출한 피브로인 및 실크 그 자체를 의미할 수 있으며, 본 발명에서는 집누에라고도 불리는 가잠견을 사용하여 본 발명의 조성물을 제조하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
통상적으로 본 발명에 사용되는 누에는 가잠견 또는 야잠견에 국한되지 아니한다. 하지만, 가잠견의 경우 글리신(Glycin) 42 내지 47 중량 백분율, 알라닌(Alanine) 27 내지 32 중량 백분율, 세린(Serine) 10 내지 14 중량 백분율의 비율을 일정하게 유지하고 있어, 각 구성 성분의 비율 예측 및 조정 가능해 사용하기 유리하다.
누에에서 추출되는 단백질인 실크 피브로인은 대부분 반복된 소수성 부위와 친수성 부위를 가지는 중쇄(heavy chain)와 친수성 아미노산으로 구성된 경쇄(light chain)로 구성되어있다.
전술한 바와 같이 누에의 정련 과정은 여러 방법을 사용하여 수행할 수 있다. 다만, 종래의 방법으로 초기 정련과정을 진행하는 경우, 도 1과 같이 소수성 부위를 가지는 중쇄(heavy chain)부분이 증가된다. 이렇게 증가된 중쇄가 베타 시트(β-sheet) 연결 공유결합을 형성시켜 본 발명의 목적인 안정화에 영향을 미칠 수 있다.
본 발명은 체액의 안정화를 위한 피브로인 조성물을 제조하기 위한 Bombyx mori의 정련 및 추출 프로세스를 제공한다.
구체적으로, Na2CO3를 사용하여 시간은 60분 내지 120분, 온도는 100도 내지 120도, 압력은 0.1 내지 2.0mbar인 조건에서 정련을 시행하였다.
상기의 조건을 초과하여 정련을 실행하는 경우, Bombyx mori가 비등(boiling)되어 가수분해된 피브로인이 부분적으로 생성되므로, 본 발명의 목적성에 부합하지 않는다.
상기 Bombyx mori로부터 추출된 실크피브로인은 수성 염 용액에 용해될 수 있다.
상기의 목적을 달성하기 위한 수성 용액은 브로민화리튬, 리튬 티오시아네이트, 질산칼슘, 칼슘클로라이드 혼합물 또는 추출물을 용해할 수 있는 다른 화학물질을 사용할 수 있다.
일반적으로 브로민화리튬 용액을 이용하는 경우 분자량의 저하가 발생되지 않지만 예를 들어 CaCl2가 함유된 혼합용액을 사용하는 경우에는 분자량 저하가 발생한다.
본 발명에서는 통상적인 방법인 8 내지 12몰의 브로민화리튬을 사용하여 실크피브로인을 용해하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이후 염 용액을 제거하는 과정에서는 통상적인 방법으로서 멤브레인을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
한 실시양태에서, 피브로인과 수성용액의 첨가 비는 1:5 내지 1:100일 수 있다. 예를 들어 적어도 1:5, 적어도 1:10, 적어도 1:15, 적어도 1:20, 적어도 1:25, 적어도1:30, 적어도 1:40, 적어도 1:45, 적어도 1:50, 적어도 1:55, 적어도 1:60, 적어도 1:65, 적어도 1:70, 적어도 1:75, 적어도 1:80, 적어도 1:85, 적어도 1:90, 적어도 1:95, 적어도 1:100 이다.
일부 실시양태에서, 온도는 50도 내지 160℃일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 실시양태에서, 시간은 예를 들어 적어도 60분 내지 240분일 수 있다. 예를 들어, 적어도 60분, 적어도 70분, 적어도 80분, 적어도 90분, 적어도 100분, 적어도 110분, 적어도 120분, 적어도 130분, 적어도 140분, 적어도 150분, 적어도 160분, 적어도 170분, 적어도 180분, 적어도 190분, 적어도 200분, 적어도 210분, 적어도 220분, 적어도 230분, 적어도 240분이다.
일부 실시양태에서는, 압력은 0.1 내지 2.0 atm일 수 있다. 예를 들어 적어도 0.1atm, 적어도 0.2 atm, 적어도 0.3 atm, 적어도 0.4 atm, 적어도 0.5 atm, 적어도 0.6 atm, 적어도 0.7 atm, 적어도 0.8 atm, 적어도 0.9 atm, 적어도 1.0 atm, 적어도 1.1 atm, 적어도 1.2 atm, 적어도 1.3 atm, 적어도 1.4 atm, 적어도 1.5 atm, 적어도 1.6 atm, 적어도 1.7 atm, 적어도 1.8 atm, 적어도 1.9 atm, 적어도 2.0 atm이다.
일부 실시양태에서는, 중력은 3000 내지 20000RCF일 수 있다. 예를 들어 적어도 3000 RCF, 적어도 4000 RCF, 적어도 5000 RCF, 적어도 6000 RCF, 적어도 7000 RCF, 적어도 8000 RCF, 적어도 9000 RCF, 적어도 10000 RCF, 적어도 11000 RCF, 적어도 12000 RCF, 적어도 13000 RCF, 적어도 14000 RCF, 적어도 15000 RCF, 적어도 16000 RCF, 적어도 17000 RCF, 적어도 18000 RCF, 적어도 19000 RCF, 적어도 20000 RCF이다.
일부 실시양태에서는, heavy chain, light chain 및 p25 단백질로 구성되어 있는 이중 피브로인은 글리신, 알라닌 및 세린이 반복되는 결정성 영역을 형성하는 11개의 도메인, 중간부분 그리고 C-말단 N-말단의 비결정성 영역으로 구성되어있다.
상기의 조건에서 제시한 범위의 온도, 시간, 압력, 중력 범위 내에서 heavy chain과 light chain의 중량 비율은 0.1 : 99.9 내지 10.0 : 90.0이 되도록 할 수 있다.
예를 들어 0.1 : 99.9, 적어도 0.2 : 99.8, 적어도 0.3 : 99.7, 적어도 0.4 : 99.6, 적어도 0.5 : 99.5, 적어도 0.6 : 99.4, 적어도 0.7 : 99.3, 적어도 0.8 : 99.2, 적어도 0.9 : 99.1, 적어도 1.0 : 99.0, 적어도 1.1 : 98.9, 적어도 1.2 : 98.8, 적어도 1.3 : 98.7, 적어도 1.4 : 98.6, 적어도 1.5 : 98.5, 적어도 1.6 : 98.4, 적어도 1.7 : 98.3, 적어도 1.8 : 98.2, 적어도 1.9 : 98.1, 적어도 2.0 : 98.0, 적어도 2.1 : 97.9, 적어도 2.2 : 97.8, 적어도 2.3 : 97.7, 적어도 2.4 : 97.6, 적어도 2.5 : 97.5, 적어도 2.6 : 97.4, 적어도 2.7 : 97.3, 적어도 2.8 : 97.2, 적어도 2.9 : 97.1, 적어도 3.0 : 97.0, 적어도 3.1 : 96.9, 적어도 3.2 : 96.8, 적어도 3.3 : 96.7, 적어도 3.4 : 96.6, 적어도 3.5 : 96.5, 적어도 3.6 : 96.4, 적어도 3.7 : 96.3, 적어도 3.8 : 96.2, 적어도 3.9 : 96.1, 적어도 4.0 : 96.0, 적어도 4.1 : 95.9, 적어도 4.2 : 95.8, 적어도 4.3 : 95.7, 적어도 4.4 : 95.6, 적어도 4.5 : 95.5, 적어도 4.6 : 95.4, 적어도 4.7 : 95.3, 적어도 4.8 : 95.2, 적어도 4.9 : 95.1, 적어도 5.0 : 95.0, 적어도 , 적어도 5.1 : 94.9, 적어도 5.2 : 94.8, 적어도 5.3 : 94.7, 적어도 5.4 : 94.6, 적어도 5.5 : 94.5, 적어도 5.6 : 94.4, 적어도 5.7 : 94.3, 적어도 5.8 : 94.2, 적어도 5.9 : 94.1, 적어도 6.0 : 94.0, 적어도 6.1 : 93.9, 적어도 6.2 : 93.8, 적어도 6.3 : 93.7, 적어도 6.4 : 93.6, 적어도 6.5 : 93.5, 적어도 6.6 : 93.4, 적어도 6.7 : 93.3, 적어도 6.8 : 93.2, 적어도 6.9 : 93.1, 적어도 7.0 : 93.0, 적어도 7.1 : 92.9, 적어도 7.2 : 92.8, 적어도 7.3 : 92.7, 적어도 7.4 : 92.6, 적어도 7.5 : 92.5, 적어도 7.6 : 92.4, 적어도 7.7 : 92.3, 적어도 7.8 : 92.2, 적어도 7.9 : 92.1, 적어도 8.0 : 92.0, 적어도 8.1 : 91.9, 적어도 8.2 : 91.8, 적어도 8.3 : 91.7, 적어도 8.4 : 91.6, 적어도 8.5 : 91.5, 적어도 8.6 : 91.4, 적어도 8.7 : 91.3, 적어도 8.8 : 91.2, 적어도 8.9 : 91.1, 적어도 9.0 : 91.0, 적어도 9.1 : 90.9, 적어도 9.2 : 90.8, 적어도 9.3 : 90.7, 적어도 9.4 : 90.6, 적어도 9.5 : 90.5, 적어도 9.6 : 90.4, 적어도 9.7 : 90.3, 적어도 9.8 : 90.2, 적어도 9.9 : 90.1, 적어도 10.0 : 90.0 이다.
일부 실시양태에서, 상기의 조건에서 제시한 범위의 온도, 시간, 압력, 중력 범위 내에서 Gly의 중량 비율이 40%일 때, Gly(β)와 Gly(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10.0 : 90.0이 되도록 할 수 있다.
예를 들어, Gly(β)와 Gly(α)의 비율은 0.1 : 99.9, 적어도 0.2 : 99.8, 적어도 0.3 : 99.7, 적어도 0.4 : 99.6, 적어도 0.5 : 99.5, 적어도 0.6 : 99.4, 적어도 0.7 : 99.3, 적어도 0.8 : 99.2, 적어도 0.9 : 99.1, 적어도 1.0 : 99.0, 적어도 1.1 : 98.9, 적어도 1.2 : 98.8, 적어도 1.3 : 98.7, 적어도 1.4 : 98.6, 적어도 1.5 : 98.5, 적어도 1.6 : 98.4, 적어도 1.7 : 98.3, 적어도 1.8 : 98.2, 적어도 1.9 : 98.1, 적어도 2.0 : 98.0, 적어도 2.1 : 97.9, 적어도 2.2 : 97.8, 적어도 2.3 : 97.7, 적어도 2.4 : 97.6, 적어도 2.5 : 97.5, 적어도 2.6 : 97.4, 적어도 2.7 : 97.3, 적어도 2.8 : 97.2, 적어도 2.9 : 97.1, 적어도 3.0 : 97.0, 적어도 3.1 : 96.9, 적어도 3.2 : 96.8, 적어도 3.3 : 96.7, 적어도 3.4 : 96.6, 적어도 3.5 : 96.5, 적어도 3.6 : 96.4, 적어도 3.7 : 96.3, 적어도 3.8 : 96.2, 적어도 3.9 : 96.1, 적어도 4.0 : 96.0, 적어도 4.1 : 95.9, 적어도 4.2 : 95.8, 적어도 4.3 : 95.7, 적어도 4.4 : 95.6, 적어도 4.5 : 95.5, 적어도 4.6 : 95.4, 적어도 4.7 : 95.3, 적어도 4.8 : 95.2, 적어도 4.9 : 95.1, 적어도 5.0 : 95.0, 적어도 , 적어도 5.1 : 94.9, 적어도 5.2 : 94.8, 적어도 5.3 : 94.7, 적어도 5.4 : 94.6, 적어도 5.5 : 94.5, 적어도 5.6 : 94.4, 적어도 5.7 : 94.3, 적어도 5.8 : 94.2, 적어도 5.9 : 94.1, 적어도 6.0 : 94.0, 적어도 6.1 : 93.9, 적어도 6.2 : 93.8, 적어도 6.3 : 93.7, 적어도 6.4 : 93.6, 적어도 6.5 : 93.5, 적어도 6.6 : 93.4, 적어도 6.7 : 93.3, 적어도 6.8 : 93.2, 적어도 6.9 : 93.1, 적어도 7.0 : 93.0, 적어도 7.1 : 92.9, 적어도 7.2 : 92.8, 적어도 7.3 : 92.7, 적어도 7.4 : 92.6, 적어도 7.5 : 92.5, 적어도 7.6 : 92.4, 적어도 7.7 : 92.3, 적어도 7.8 : 92.2, 적어도 7.9 : 92.1, 적어도 8.0 : 92.0, 적어도 8.1 : 91.9, 적어도 8.2 : 91.8, 적어도 8.3 : 91.7, 적어도 8.4 : 91.6, 적어도 8.5 : 91.5, 적어도 8.6 : 91.4, 적어도 8.7 : 91.3, 적어도 8.8 : 91.2, 적어도 8.9 : 91.1, 적어도 9.0 : 91.0, 적어도 9.1 : 90.9, 적어도 9.2 : 90.8, 적어도 9.3 : 90.7, 적어도 9.4 : 90.6, 적어도 9.5 : 90.5, 적어도 9.6 : 90.4, 적어도 9.7 : 90.3, 적어도 9.8 : 90.2, 적어도 9.9 : 90.1, 적어도 10.0 : 90.0 이다.
일부 실시양태에서, 상기의 조건에서 제시한 범위의 온도, 시간, 압력, 중력 범위 내에서 Gly의 중량 비율이 45%일 때, 적어도 Gly(β)와 Gly(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10.0 : 90.0이 되도록 할 수 있다.
예를 들어, Gly(β)와 Gly(α)의 비율은 0.1 : 99.9, 적어도 0.2 : 99.8, 적어도 0.3 : 99.7, 적어도 0.4 : 99.6, 적어도 0.5 : 99.5, 적어도 0.6 : 99.4, 적어도 0.7 : 99.3, 적어도 0.8 : 99.2, 적어도 0.9 : 99.1, 적어도 1.0 : 99.0, 적어도 1.1 : 98.9, 적어도 1.2 : 98.8, 적어도 1.3 : 98.7, 적어도 1.4 : 98.6, 적어도 1.5 : 98.5, 적어도 1.6 : 98.4, 적어도 1.7 : 98.3, 적어도 1.8 : 98.2, 적어도 1.9 : 98.1, 적어도 2.0 : 98.0, 적어도 2.1 : 97.9, 적어도 2.2 : 97.8, 적어도 2.3 : 97.7, 적어도 2.4 : 97.6, 적어도 2.5 : 97.5, 적어도 2.6 : 97.4, 적어도 2.7 : 97.3, 적어도 2.8 : 97.2, 적어도 2.9 : 97.1, 적어도 3.0 : 97.0, 적어도 3.1 : 96.9, 적어도 3.2 : 96.8, 적어도 3.3 : 96.7, 적어도 3.4 : 96.6, 적어도 3.5 : 96.5, 적어도 3.6 : 96.4, 적어도 3.7 : 96.3, 적어도 3.8 : 96.2, 적어도 3.9 : 96.1, 적어도 4.0 : 96.0, 적어도 4.1 : 95.9, 적어도 4.2 : 95.8, 적어도 4.3 : 95.7, 적어도 4.4 : 95.6, 적어도 4.5 : 95.5, 적어도 4.6 : 95.4, 적어도 4.7 : 95.3, 적어도 4.8 : 95.2, 적어도 4.9 : 95.1, 적어도 5.0 : 95.0, 적어도 , 적어도 5.1 : 94.9, 적어도 5.2 : 94.8, 적어도 5.3 : 94.7, 적어도 5.4 : 94.6, 적어도 5.5 : 94.5, 적어도 5.6 : 94.4, 적어도 5.7 : 94.3, 적어도 5.8 : 94.2, 적어도 5.9 : 94.1, 적어도 6.0 : 94.0, 적어도 6.1 : 93.9, 적어도 6.2 : 93.8, 적어도 6.3 : 93.7, 적어도 6.4 : 93.6, 적어도 6.5 : 93.5, 적어도 6.6 : 93.4, 적어도 6.7 : 93.3, 적어도 6.8 : 93.2, 적어도 6.9 : 93.1, 적어도 7.0 : 93.0, 적어도 7.1 : 92.9, 적어도 7.2 : 92.8, 적어도 7.3 : 92.7, 적어도 7.4 : 92.6, 적어도 7.5 : 92.5, 적어도 7.6 : 92.4, 적어도 7.7 : 92.3, 적어도 7.8 : 92.2, 적어도 7.9 : 92.1, 적어도 8.0 : 92.0, 적어도 8.1 : 91.9, 적어도 8.2 : 91.8, 적어도 8.3 : 91.7, 적어도 8.4 : 91.6, 적어도 8.5 : 91.5, 적어도 8.6 : 91.4, 적어도 8.7 : 91.3, 적어도 8.8 : 91.2, 적어도 8.9 : 91.1, 적어도 9.0 : 91.0, 적어도 9.1 : 90.9, 적어도 9.2 : 90.8, 적어도 9.3 : 90.7, 적어도 9.4 : 90.6, 적어도 9.5 : 90.5, 적어도 9.6 : 90.4, 적어도 9.7 : 90.3, 적어도 9.8 : 90.2, 적어도 9.9 : 90.1, 적어도 10.0 : 90.0 이다.
일부 실시양태에서, 상기의 조건에서 제시한 범위의 온도, 시간, 압력, 중력 범위 내에서 Gly의 중량 비율이 50%일 때, 적어도 Gly(β)와 Gly(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10.0 : 90.0이 되도록 할 수 있다.
예를 들어, Gly(β)와 Gly(α)의 비율은 0.1 : 99.9, 적어도 0.2 : 99.8, 적어도 0.3 : 99.7, 적어도 0.4 : 99.6, 적어도 0.5 : 99.5, 적어도 0.6 : 99.4, 적어도 0.7 : 99.3, 적어도 0.8 : 99.2, 적어도 0.9 : 99.1, 적어도 1.0 : 99.0, 적어도 1.1 : 98.9, 적어도 1.2 : 98.8, 적어도 1.3 : 98.7, 적어도 1.4 : 98.6, 적어도 1.5 : 98.5, 적어도 1.6 : 98.4, 적어도 1.7 : 98.3, 적어도 1.8 : 98.2, 적어도 1.9 : 98.1, 적어도 2.0 : 98.0, 적어도 2.1 : 97.9, 적어도 2.2 : 97.8, 적어도 2.3 : 97.7, 적어도 2.4 : 97.6, 적어도 2.5 : 97.5, 적어도 2.6 : 97.4, 적어도 2.7 : 97.3, 적어도 2.8 : 97.2, 적어도 2.9 : 97.1, 적어도 3.0 : 97.0, 적어도 3.1 : 96.9, 적어도 3.2 : 96.8, 적어도 3.3 : 96.7, 적어도 3.4 : 96.6, 적어도 3.5 : 96.5, 적어도 3.6 : 96.4, 적어도 3.7 : 96.3, 적어도 3.8 : 96.2, 적어도 3.9 : 96.1, 적어도 4.0 : 96.0, 적어도 4.1 : 95.9, 적어도 4.2 : 95.8, 적어도 4.3 : 95.7, 적어도 4.4 : 95.6, 적어도 4.5 : 95.5, 적어도 4.6 : 95.4, 적어도 4.7 : 95.3, 적어도 4.8 : 95.2, 적어도 4.9 : 95.1, 적어도 5.0 : 95.0, 적어도 , 적어도 5.1 : 94.9, 적어도 5.2 : 94.8, 적어도 5.3 : 94.7, 적어도 5.4 : 94.6, 적어도 5.5 : 94.5, 적어도 5.6 : 94.4, 적어도 5.7 : 94.3, 적어도 5.8 : 94.2, 적어도 5.9 : 94.1, 적어도 6.0 : 94.0, 적어도 6.1 : 93.9, 적어도 6.2 : 93.8, 적어도 6.3 : 93.7, 적어도 6.4 : 93.6, 적어도 6.5 : 93.5, 적어도 6.6 : 93.4, 적어도 6.7 : 93.3, 적어도 6.8 : 93.2, 적어도 6.9 : 93.1, 적어도 7.0 : 93.0, 적어도 7.1 : 92.9, 적어도 7.2 : 92.8, 적어도 7.3 : 92.7, 적어도 7.4 : 92.6, 적어도 7.5 : 92.5, 적어도 7.6 : 92.4, 적어도 7.7 : 92.3, 적어도 7.8 : 92.2, 적어도 7.9 : 92.1, 적어도 8.0 : 92.0, 적어도 8.1 : 91.9, 적어도 8.2 : 91.8, 적어도 8.3 : 91.7, 적어도 8.4 : 91.6, 적어도 8.5 : 91.5, 적어도 8.6 : 91.4, 적어도 8.7 : 91.3, 적어도 8.8 : 91.2, 적어도 8.9 : 91.1, 적어도 9.0 : 91.0, 적어도 9.1 : 90.9, 적어도 9.2 : 90.8, 적어도 9.3 : 90.7, 적어도 9.4 : 90.6, 적어도 9.5 : 90.5, 적어도 9.6 : 90.4, 적어도 9.7 : 90.3, 적어도 9.8 : 90.2, 적어도 9.9 : 90.1, 적어도 10.0 : 90.0 이다.
일부 실시양태에서, 상기의 조건에서 제시한 범위의 온도, 시간, 압력, 중력 범위 내에서 Ala의 중량 비율이 25%일 때, 적어도 Ala(β)와 Ala(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10.0 : 90.0이 되도록 할 수 있다.
예를 들어, Ala(β)와 Ala(α)의 비율은 0.1 : 99.9, 적어도 0.2 : 99.8, 적어도 0.3 : 99.7, 적어도 0.4 : 99.6, 적어도 0.5 : 99.5, 적어도 0.6 : 99.4, 적어도 0.7 : 99.3, 적어도 0.8 : 99.2, 적어도 0.9 : 99.1, 적어도 1.0 : 99.0, 적어도 1.1 : 98.9, 적어도 1.2 : 98.8, 적어도 1.3 : 98.7, 적어도 1.4 : 98.6, 적어도 1.5 : 98.5, 적어도 1.6 : 98.4, 적어도 1.7 : 98.3, 적어도 1.8 : 98.2, 적어도 1.9 : 98.1, 적어도 2.0 : 98.0, 적어도 2.1 : 97.9, 적어도 2.2 : 97.8, 적어도 2.3 : 97.7, 적어도 2.4 : 97.6, 적어도 2.5 : 97.5, 적어도 2.6 : 97.4, 적어도 2.7 : 97.3, 적어도 2.8 : 97.2, 적어도 2.9 : 97.1, 적어도 3.0 : 97.0, 적어도 3.1 : 96.9, 적어도 3.2 : 96.8, 적어도 3.3 : 96.7, 적어도 3.4 : 96.6, 적어도 3.5 : 96.5, 적어도 3.6 : 96.4, 적어도 3.7 : 96.3, 적어도 3.8 : 96.2, 적어도 3.9 : 96.1, 적어도 4.0 : 96.0, 적어도 4.1 : 95.9, 적어도 4.2 : 95.8, 적어도 4.3 : 95.7, 적어도 4.4 : 95.6, 적어도 4.5 : 95.5, 적어도 4.6 : 95.4, 적어도 4.7 : 95.3, 적어도 4.8 : 95.2, 적어도 4.9 : 95.1, 적어도 5.0 : 95.0, 적어도 , 적어도 5.1 : 94.9, 적어도 5.2 : 94.8, 적어도 5.3 : 94.7, 적어도 5.4 : 94.6, 적어도 5.5 : 94.5, 적어도 5.6 : 94.4, 적어도 5.7 : 94.3, 적어도 5.8 : 94.2, 적어도 5.9 : 94.1, 적어도 6.0 : 94.0, 적어도 6.1 : 93.9, 적어도 6.2 : 93.8, 적어도 6.3 : 93.7, 적어도 6.4 : 93.6, 적어도 6.5 : 93.5, 적어도 6.6 : 93.4, 적어도 6.7 : 93.3, 적어도 6.8 : 93.2, 적어도 6.9 : 93.1, 적어도 7.0 : 93.0, 적어도 7.1 : 92.9, 적어도 7.2 : 92.8, 적어도 7.3 : 92.7, 적어도 7.4 : 92.6, 적어도 7.5 : 92.5, 적어도 7.6 : 92.4, 적어도 7.7 : 92.3, 적어도 7.8 : 92.2, 적어도 7.9 : 92.1, 적어도 8.0 : 92.0, 적어도 8.1 : 91.9, 적어도 8.2 : 91.8, 적어도 8.3 : 91.7, 적어도 8.4 : 91.6, 적어도 8.5 : 91.5, 적어도 8.6 : 91.4, 적어도 8.7 : 91.3, 적어도 8.8 : 91.2, 적어도 8.9 : 91.1, 적어도 9.0 : 91.0, 적어도 9.1 : 90.9, 적어도 9.2 : 90.8, 적어도 9.3 : 90.7, 적어도 9.4 : 90.6, 적어도 9.5 : 90.5, 적어도 9.6 : 90.4, 적어도 9.7 : 90.3, 적어도 9.8 : 90.2, 적어도 9.9 : 90.1, 적어도 10.0 : 90.0 이다.
일부 실시양태에서, 상기의 조건에서 제시한 범위의 온도, 시간, 압력, 중력 범위 내에서 Ala의 중량 비율이 30%일 때, 적어도 Ala(β)와 Ala(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10.0 : 90.0이 되도록 할 수 있다.
예를 들어, Ala(β)와 Ala(α)의 비율은 0.1 : 99.9, 적어도 0.2 : 99.8, 적어도 0.3 : 99.7, 적어도 0.4 : 99.6, 적어도 0.5 : 99.5, 적어도 0.6 : 99.4, 적어도 0.7 : 99.3, 적어도 0.8 : 99.2, 적어도 0.9 : 99.1, 적어도 1.0 : 99.0, 적어도 1.1 : 98.9, 적어도 1.2 : 98.8, 적어도 1.3 : 98.7, 적어도 1.4 : 98.6, 적어도 1.5 : 98.5, 적어도 1.6 : 98.4, 적어도 1.7 : 98.3, 적어도 1.8 : 98.2, 적어도 1.9 : 98.1, 적어도 2.0 : 98.0, 적어도 2.1 : 97.9, 적어도 2.2 : 97.8, 적어도 2.3 : 97.7, 적어도 2.4 : 97.6, 적어도 2.5 : 97.5, 적어도 2.6 : 97.4, 적어도 2.7 : 97.3, 적어도 2.8 : 97.2, 적어도 2.9 : 97.1, 적어도 3.0 : 97.0, 적어도 3.1 : 96.9, 적어도 3.2 : 96.8, 적어도 3.3 : 96.7, 적어도 3.4 : 96.6, 적어도 3.5 : 96.5, 적어도 3.6 : 96.4, 적어도 3.7 : 96.3, 적어도 3.8 : 96.2, 적어도 3.9 : 96.1, 적어도 4.0 : 96.0, 적어도 4.1 : 95.9, 적어도 4.2 : 95.8, 적어도 4.3 : 95.7, 적어도 4.4 : 95.6, 적어도 4.5 : 95.5, 적어도 4.6 : 95.4, 적어도 4.7 : 95.3, 적어도 4.8 : 95.2, 적어도 4.9 : 95.1, 적어도 5.0 : 95.0, 적어도 , 적어도 5.1 : 94.9, 적어도 5.2 : 94.8, 적어도 5.3 : 94.7, 적어도 5.4 : 94.6, 적어도 5.5 : 94.5, 적어도 5.6 : 94.4, 적어도 5.7 : 94.3, 적어도 5.8 : 94.2, 적어도 5.9 : 94.1, 적어도 6.0 : 94.0, 적어도 6.1 : 93.9, 적어도 6.2 : 93.8, 적어도 6.3 : 93.7, 적어도 6.4 : 93.6, 적어도 6.5 : 93.5, 적어도 6.6 : 93.4, 적어도 6.7 : 93.3, 적어도 6.8 : 93.2, 적어도 6.9 : 93.1, 적어도 7.0 : 93.0, 적어도 7.1 : 92.9, 적어도 7.2 : 92.8, 적어도 7.3 : 92.7, 적어도 7.4 : 92.6, 적어도 7.5 : 92.5, 적어도 7.6 : 92.4, 적어도 7.7 : 92.3, 적어도 7.8 : 92.2, 적어도 7.9 : 92.1, 적어도 8.0 : 92.0, 적어도 8.1 : 91.9, 적어도 8.2 : 91.8, 적어도 8.3 : 91.7, 적어도 8.4 : 91.6, 적어도 8.5 : 91.5, 적어도 8.6 : 91.4, 적어도 8.7 : 91.3, 적어도 8.8 : 91.2, 적어도 8.9 : 91.1, 적어도 9.0 : 91.0, 적어도 9.1 : 90.9, 적어도 9.2 : 90.8, 적어도 9.3 : 90.7, 적어도 9.4 : 90.6, 적어도 9.5 : 90.5, 적어도 9.6 : 90.4, 적어도 9.7 : 90.3, 적어도 9.8 : 90.2, 적어도 9.9 : 90.1, 적어도 10.0 : 90.0 이다.
일부 실시양태에서, 상기의 조건에서 제시한 범위의 온도, 시간, 압력, 중력 범위 내에서 Ala의 중량 비율이 35%일 때, 적어도 Ala(β)와 Ala(α)의 비율이 0.1 : 99.9 내지 10.0 : 90.0이 되도록 할 수 있다.
예를 들어, 0.1 : 99.9, 적어도 0.2 : 99.8, 적어도 0.3 : 99.7, 적어도 0.4 : 99.6, 적어도 0.5 : 99.5, 적어도 0.6 : 99.4, 적어도 0.7 : 99.3, 적어도 0.8 : 99.2, 적어도 0.9 : 99.1, 적어도 1.0 : 99.0, 적어도 1.1 : 98.9, 적어도 1.2 : 98.8, 적어도 1.3 : 98.7, 적어도 1.4 : 98.6, 적어도 1.5 : 98.5, 적어도 1.6 : 98.4, 적어도 1.7 : 98.3, 적어도 1.8 : 98.2, 적어도 1.9 : 98.1, 적어도 2.0 : 98.0, 적어도 2.1 : 97.9, 적어도 2.2 : 97.8, 적어도 2.3 : 97.7, 적어도 2.4 : 97.6, 적어도 2.5 : 97.5, 적어도 2.6 : 97.4, 적어도 2.7 : 97.3, 적어도 2.8 : 97.2, 적어도 2.9 : 97.1, 적어도 3.0 : 97.0, 적어도 3.1 : 96.9, 적어도 3.2 : 96.8, 적어도 3.3 : 96.7, 적어도 3.4 : 96.6, 적어도 3.5 : 96.5, 적어도 3.6 : 96.4, 적어도 3.7 : 96.3, 적어도 3.8 : 96.2, 적어도 3.9 : 96.1, 적어도 4.0 : 96.0, 적어도 4.1 : 95.9, 적어도 4.2 : 95.8, 적어도 4.3 : 95.7, 적어도 4.4 : 95.6, 적어도 4.5 : 95.5, 적어도 4.6 : 95.4, 적어도 4.7 : 95.3, 적어도 4.8 : 95.2, 적어도 4.9 : 95.1, 적어도 5.0 : 95.0, 적어도 , 적어도 5.1 : 94.9, 적어도 5.2 : 94.8, 적어도 5.3 : 94.7, 적어도 5.4 : 94.6, 적어도 5.5 : 94.5, 적어도 5.6 : 94.4, 적어도 5.7 : 94.3, 적어도 5.8 : 94.2, 적어도 5.9 : 94.1, 적어도 6.0 : 94.0, 적어도 6.1 : 93.9, 적어도 6.2 : 93.8, 적어도 6.3 : 93.7, 적어도 6.4 : 93.6, 적어도 6.5 : 93.5, 적어도 6.6 : 93.4, 적어도 6.7 : 93.3, 적어도 6.8 : 93.2, 적어도 6.9 : 93.1, 적어도 7.0 : 93.0, 적어도 7.1 : 92.9, 적어도 7.2 : 92.8, 적어도 7.3 : 92.7, 적어도 7.4 : 92.6, 적어도 7.5 : 92.5, 적어도 7.6 : 92.4, 적어도 7.7 : 92.3, 적어도 7.8 : 92.2, 적어도 7.9 : 92.1, 적어도 8.0 : 92.0, 적어도 8.1 : 91.9, 적어도 8.2 : 91.8, 적어도 8.3 : 91.7, 적어도 8.4 : 91.6, 적어도 8.5 : 91.5, 적어도 8.6 : 91.4, 적어도 8.7 : 91.3, 적어도 8.8 : 91.2, 적어도 8.9 : 91.1, 적어도 9.0 : 91.0, 적어도 9.1 : 90.9, 적어도 9.2 : 90.8, 적어도 9.3 : 90.7, 적어도 9.4 : 90.6, 적어도 9.5 : 90.5, 적어도 9.6 : 90.4, 적어도 9.7 : 90.3, 적어도 9.8 : 90.2, 적어도 9.9 : 90.1, 적어도 10.0 : 90.0 이다.
일부 실시양태에서, 본 조성물의 수용액의 pH 변화에 따라 분자쇄(chain) 간의 상호 결합 시간이 달라질 수 있다.
즉, 이론적으로는 피브로인을 포함한 단백질은 등전점(isoelectronic point) 부근에서 중쇄(heavy chain), 경쇄(light chain) 및 랜덤 코일(random coil) 분자쇄들이 양쪽성 이온(zwitter ion)을 형성하여 상호간의 이온 반발력이 최소화하게 된다. 이에 따라 거대 분자쇄들 사이에 소수성결합, 수소결합, 이온결합 등의 증가 또는 감소에 의해 β-sheet 구조가 형성되고, 망상구조로 발달하게 되어 겔의 형성에 영향을 준다.
본 발명에 생성된 조성물에서 적어도 pH 1 이하일때, 분자쇄간 상호 반발력이 작용하여 겔이 생성되지 않았다. pH 1 내지 13일 때는 분자쇄간 상호 반발력이 감소하여 겔 형성 시간이 감소되었다. pH 3 일 때 분자쇄간 상호 반발력이 최소이며, pH가 증가할수록 분자쇄간 상호 반발력이 증가하여 겔 형성 시간이 증가되었다.
적어도 pH 13 이상에서는 분자쇄간의 음전하 또는 양전하가 우세하게 되며, 이에 따라 발생하는 분자간의 강한 이온 반발력으로 인하여 분자쇄들 사이에 응집이 이루어지지 않음을 실시예를 통해서 확인하였다.
일부 실시양태에서, 상기의 pH변화에 따른 분자쇄간의 상호 결합시간은 조성물의 농도에 따라 달라질 수 있으며, 농도는 0.1 중량 분율 내지 60 중량 분율일 수 있다.
예를 들어, 농도는 적어도 조성물의 농도가 0.1 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 1 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 2 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 3 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 4 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 5 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 6 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 7 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 8 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 9 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 10 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 11 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 12 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 13 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 14 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 15 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 16 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 17 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 18 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 19 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 20 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 21 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 22 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 23 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 24 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 25 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 26 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 27 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 28 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 29 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 30 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 31 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 32 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 33 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 34 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 35 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 36 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 37 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 38 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 39 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 40 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 41 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 42 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 43 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 44 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 45 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 46 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 47 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 48 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 49 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 50 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 51 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 52 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 53 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 54 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 55 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 56 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 57 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 58 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 59 중량 분율 일때, 적어도 조성물의 농도가 60 중량 분율 일때, 상기의 pH에 대한 특성이 발현된다.
일부 실시양태에서, 상기 전체의 과정에서 제조된 본 발명의 조성물의 안정성을 추가하기 위해 추가적인 첨가물로써 글리세롤을 첨가할 수도 있다.
글리세롤의 첨가 함량은 본 발명의 수용액상 조성물 대비 적어도 20 중량 백분율, 적어도 25 중량 백분율, 적어도 30 중량 백분율, 적어도 35 중량 백분율, 적어도 40 중량 백분율, 적어도 45 중량 백분율, 적어도 50 중량 백분율, 적어도 55 중량 백분율, 적어도 60 중량 백분율, 적어도 65 중량 백분율, 적어도 70 중량 백분율, 적어도 75 중량 백분율, 적어도 80 중량 백분율, 적어도 85 중량 백분율, 적어도 90 중량 백분율 이다.
상기의 범위 이상이면 글리세롤 함량이 증가함에 따라 겔화 시간이 서서히 감소한다. 이는 글리세롤의 강한 친수성 작용으로 단백질영역 내에서 물을 배제시켜 단백질의 소수성을 증가시킴으로써 소수성결합에 영향을 미치는 구조로 되어 안정화되기 때문이다.
일부 실시양태에서, 상기 과정에서 제조된 본 발명의 조성물은 셀룰로오스 베이스에 도포를 하여 동결 및 동결 건조된 시편 형태일 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 과정에서 제조된 본 발명의 조성물은 그 자체로 동결 및 동결 건조된 시편 형태일 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 과정에서 제조된 본 발명의 조성물은 건조된 분말 입자 형태일 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 전체의 과정에서 제조된 본 발명의 조성물은 플라스틱 및 그와 유사한 스틱에 도포하여 동결 및 동결 건조한 시편 형태일 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 전체의 과정에서 제조된 본 발명의 조성물은 수용액 상태의 시편일수도 있다.
이하, 바람직한 실시예가 본 발명에 상세하게 묘사되고 기술되었지만, 관련 기술의 숙련자는 다양한 변형, 추가, 대체 등이 본 발명의 취지를 벗어남 없이 이루어질 수 있고 이것이 청구항에 정의된 본 발명의 범위 내에서 고려될 수 있음을 명확히 한다. 본 발명에 기술되고 설명된 다양한 실시 예 중 어느 하나가 본 발명에 개시된 다른 임의의 실시예에서 보여지는 특징을 도입하여 추가로 변형될 수 있다는 것이 통상의 관련 기술자에 의해 이해될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 고체 시편의 Ser, Gly, Ala 함량 분석
본 발명의 고체 시편의 아미노산 조성을 확인하기 위하여, 세린(Ser), 글라이신(Gly) 및 알라닌(Ala)의 함량을 아미노산 분석기(L-8900, hitachi)를 사용하여 분석하였다.
구체적으로, 본 발명 조성물에 6N 염산 10mL을 가한 후, 내부를 질소 가스로 치환 및 밀봉하여 110℃ 온도에서 24시간 가열하여 가수분해한 후 아미노산을 측정하였다.
이때, 피브로인과 가용성 염의 비율은 1 대 40으로 고정하였고, G-Force는 3000 RCF로 고정하였으며, 온도, 시간, 압력 및 pH를 달리하여 1차 아미노산 중 Ser, Gly, Ala의 함량 차이를 확인하였다.
실험 1은 온도 50도, 실험 2는 온도 140도에서 제조하였고, 시간은 60분, 압력은 0.1atm, pH 2.5에서 제조하여 측정하였다.
실험 3는 시간 60분, 실험 4는 시간 240분에서 제조하였고, 온도 50도, 압력은 0.1atm, pH 2.5에서 제조하여 측정하였다.
실험 5는 압력 0.1atm, 실험 6은 압력 2.0atm에서 제조하였고, 온도 50도, 시간은 60분, pH 2.5에서 제조하여 측정하였다.
실험 7은 pH 2.5, 실험 8은 pH 3.0, 실험 9는 pH 3.5에서 제조하였고, 온도 50도, 시간은 60분, 압력은 0.1atm에서 제조하여 측정하였다.
실험 1 실험 2 실험 3 실험 4 실험 5 실험 6 실험 7 실험 8 실험 9
Ser 2.5 4.0 1.8 1.3 3.6 3.2 3.9 3.2 3.5
Gly 40.4 40.6 41.0 46.5 40.8 40.2 40.6 40.4 46.4
Ala 30.4 28.3 28.3 30.7 28.4 29.8 27.9 28.2 27.1
상기 표 1에 나타난 바와 같이, 본 실험을 통해 본 발명에서 제시한 범위에서 제조한 실크 피브로인 단백질 조성물의 1차 아미노산 서열 중 글리신 및 알라닌 함량은 증가되는 반면, 상대적으로 세린의 함량은 감소하여 본 발명의 조성물이 수용액상에서의 안정성을 확보할 수 있음을 확인하였다.
실시예 2. 건조체액반점(DHS)의 분자량 분포 측정
분자량 분포를 측정하기 위해 동결 건조된 시편을 요소에 첨가하여 4M의 실크 수용액을 제조한 후 Fast Protein Liquid Chromatography(FPLC)(AKTA Purifier, Amersham Biosciences)로 측정하였다. 칼럼은 superdex 200 10/300GL를 사용하였고, 유량속도는 0.5ml/min으로 하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 수용액 상태의 피브로인 시료는 크로마토그램에서는 분자량의 상한분획한계에 해당하는 10 min 지점에서 날카로운 피크(sharp peak)와 15 min에서 30 min까지 넓은 영역에서 넓은 피크(broad peak)를 나타내었다.
즉, 수용액 상태의 피브로인은 약 350kDa의 heavy chain의 펩타이드로부터 칼럼의 분획한계인 30 kDa 이하까지 넓은 범위의 분자량 분포를 가지는 것을 확인하였다.
10 min에 나타나는 peak는 부분적으로 중쇄(heavy chain), 경쇄(light chain), 랜덤 코일(random coil)이 시간의 경과에 따라 분자쇄 간의 β-sheet를 형성함으로써 겔을 형성하는 것을 확인하였다.
유전자 염기서열에 기반하여 계산한 중쇄(heavy chain)의 분자량은 340kDa이므로, 상기 실험 결과를 보면 본 발명의 피브로인 조성물은 분자쇄가 서로 뭉쳐서 단백질 콜로이드를 형성하는 것을 억제하는 것으로 보인다.
또한, 이와 동시에 서로 연결되는 3차원적 망상구조를 형성하는 분산계의 반고형 겔 형성을 억제함으로써, 보다 안정화된 조성물을 제조할 수 있음을 확인하였다.
실시예 3. 건조체액반점(DHS)의 13C NMR 구조 분석
실크 피브로인에 대한 구조적 유사성을 확인하기 위하여, 13C NMR 분석을 실시하였다.
본 발명을 통해 제조한 실크 단백질 조성물을 물로 결정화시킨 시료에서는 분광 분석 결과 Gly(Cα) 44.6ppm, Gly(C=O) 169.5ppm, Ala(Cα)49.8ppm, Ala(Cβ) 21.4ppm, Ala(C=O) 173.0 ppm에서 peak가 관측되었다.
메탄올을 이용하여 결정화시킨 조성물에서는 각각 Gly(Cα) 45.6ppm, Gly (C=O) 170.4ppm, Ala(Cα) 50.7ppm, Ala(Cβ) 22.1 ppm, Ala(C=O) 173.9 ppm에서 peak가 관측되었다.
그리고 메탄올과 물의 혼합 용액에(80:20)의해 결정화된 조성물은 Gly(Cα) 44.5 ppm, Gly(C=O) 169.4ppm, Ala(Cα) 49.7ppm, Ala(Cβ) 20.7 ppm, Ala(C=O) 172.0 ppm에서 peak가 관측이 되었다.
silk Ⅱ의 구조에서 특징적으로 나타나는 Ala β 탄소 Ala(Cβ)에 의한 peak가 20 ppm 부근에서 나타나는 것으로 보아, 본 발명에서 제조된 조성물은 모두 피브로인과 유사한 구조적인 특성을 나타나는 것을 확인하였다.
실시예 4. 생물학적 시편으로부터의 혈액 회수
본 발명에서 사용되는 생체 시편의 혈장 및 혈액의 회수율을 계산하기 위하여, 혈액 및 혈장 시편으로부터 회수된 단백질의 수치를 공여자와 일치된 혈장에서 발견된 농도로 정확하게 변환하여 회수율 효율을 측정하였다.
혈액 및 혈장의 물리적 측정을 위해 흄 후드(Fume Hood)에서 24시간 동안 전혈 또는 전체 혈장을 건조시키고 잔류물을 측정함으로써, 혈액 또는 혈장의 무게/부피 분율(중량%; 단위 부피(ml)당 혈액 또는 건조된 혈장(g))을 측정하였다. 그리고 혈액 중 혈장 부피를 기존 문헌에 따라 55%로 가정하여 혈액 부피 당 혈장 고체의 중량 분율을 추정하였으며, 이를 하기 계산식 1 및 2에 나타내었다.
[계산식 1]
혈액 중 고체 혈장 중량 fraction(g/mL) = 혈장 중량 fraction(g/mL) Ⅹ 0.55 (혈장 부피 mL/전체 혈액 부피 mL)
[계산식 2]
생체 시편의 중량 당 고체혈장 fraction(g/g) = 혈액 중의 건조된 혈장 중량 fraction(g/mL) Ⅹ 0.02 mL 혈액
고체 혈장의 질량 표준화는 40mg 시편 중 혈장 농도(mg/mL)와 곱하고 이것을 960ul의 1ⅩPBS에 현탁한 부피(약 1.02±0.05 mL) 중 총 고체 혈장의 질량을 표준화하여 계산식 3 및 4에 나타내었다.
[계산식 3]
40mg 생체 시편 중 이론적 혈장 fraction (mg/mL) = 혈장 시편의 중량 당 고체 혈장(mg/mg) Ⅹ 시편 40mg Ⅹ (혈장 농도(mg/mL)/(고체 혈장 중량 fraction(mg/mL) Ⅹ PBS 현탁부피(mL))
[계산식 4]
40mg 생체 시편 중 이론적 혈액 fraction (mg/mL) = 혈액 시편의 중량 당 고체 혈장(mg/mg) Ⅹ 시편 40mg Ⅹ (혈장 농도(mg/mL)/(고체 혈장 중량 fraction(mg/mL) Ⅹ PBS 현탁부피(mL))
상기한 방법 및 계산식을 이용하여 5명의 혈액을 1ml씩 추출하고, 이들의 측정 평균치를 하기 표 2에 나타내었다.
혈액 중량 fraction 혈장 중량 fraction 고체 혈장 중량 fraction 혈액 중량 당
고체 혈장		 혈장 중량 당
고체 혈장
0.22 0.10 0.06 0.04 0.07
상기의 결과로부터, 본 발명의 조성물을 이용하면 혈액 및 혈장의 회수율이 통계학적으로 유의한 수준에 도달할 수 있음을 확인하였다.따라서, 본 발명의 조성물을 사용하면 혈액 및 혈장의 종류에 관계없이, 생체 시편으로부터 분석물을 효과적으로 회수할 수 있음을 확인하였다.
실시예 5. C-반응성단백질의 회수율
본 발명의 조성물을 이용하는 경우의 분석물 회수율을 측정하였다. 마커로 사용된 분석물로서 C-반응성단백질을 사용하였고, 측정 결과 통계학적으로 유의한 수준에 도달한 것을 확인하였다.
구체적으로, 본 실험방법은 간단한 채혈로 얻은 검체를 면역 검사(immunoassay)를 이용하여 C-반응성 단백질의 함량을 측정하였다.
일반적으로 사용하는 면역 검사 방법(immunoassay)으로는 응집법(particle immunoassay), 효소 면역 측정법(enzyme immunoassay, EIA), 방사 면역 측정법, 형광 면역 측정법, 화학 발광 면역 측정법 등을 사용할 수 있다. 본 실시예 에서는 효소 면역 측정법(enzyme immunoassay, EIA)을 이용하여 C-반응성단백질을 수치화 하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
전 처리과정을 거친 두 종의 샘플에 결합하는 항체에 효소를 미리 부착시켜 놓고 항원 항체반응을 유도하였다. 그 후 결합한 효소에 반응하는 기질을 첨가하여 효소 반응을 유도하였다.
이때 사용되는 효소는 알카리성 인산분해효소(alkaline phosphatase), 당근과산화효소(horseradish peroxidase), 메타갈라토시다제(β-galactosidase) 중 어느 하나를 사용하여 측정 가능하다. 그리고 효소 반응 후 분광광도계(spectrophotometer)을 사용하여 C-반응성 단백질의 농도를 도출하였다.
건강한 성인 남성 10명을 대상으로 측정한 결과 플라즈마 샘플에서는 평균 수치는 0.7±0.2(mg/dL)을 나타내었으며, 본 조성물에서 측정한 수치는 0.7±0.23(mg/dL)로 나타나는 것을 확인하였다.
실시예 6. 액체 혈장대비 매트릭스의 안정화 검증 실험
본 실시예는 Luminex Assays 프로토콜을 이용하여 액체 혈장대비 매트릭스의 안정화를 비교하는 실험을 실시하였다.
구체적으로, 본 조성물의 저장 상태 및 샘플운송 시간 프레임을 시뮬레이션하기 위해 22℃ 및 38℃의 항온 인큐베이터에서 30일 동안 샘플을 보관한 후, 별도의 공여자 혈액 샘플에서 3개의 마커를 측정하였다.
상기 3개의 마커는 SAP(혈청 아밀로이드 P 성분, serum amyloid P component), sVCAM-1(수용성 세포 부착 분자, soluble cell adhesion molecule) 및 CRP(C-반응성 단백질, C-reactive protein)를 사용하였다.
22℃에서의 보관 안정성은 표 3에, 38℃에서의 보관 안정성은 표 4에 나타내었다. 이때, 건조체액시편(DHS)에 혈장을 처리한 것은 DHS(혈장), 혈액을 처리한 것은 DHS(혈액)으로 표시하였다. 또한, 혈장은 -20℃에서 동결 보관 및 해동 후에 검측하였다.
DHS (혈장) DHS (혈액) 혈장
CRP % recovery 85 75 95
SAP % recovery 95 110 95
sVCAM-1 % recovery 97 105 80
DHS (혈장) DHS (혈액) 혈장
CRP % recovery 80 75 95
SAP % recovery 110 110 110
sVCAM-1 % recovery 95 105 40
상기 결과에 나타난 바와 같이, 본 조성물을 이용해 처리한 혈장 및 혈액은 sVCAM-1, CRP, SAP에서 -20℃에서 동결된 혈장과 비슷한 수준의 회복 정도를 보여, 우수한 안정성을 가지는 것을 확인하였다.
실시예 7. 보존 온도 및 시간에 따른 바이오 마커의 회수 및 안정성 실험
상기 실시예 6에서 확인한 3종의 바이오마커 외에 프로락틴(prolactin), 태아성암항원(carcinoembryonic antigen, CEA), 렙틴(leptin), TNF 관련 세포사멸 유도 리간드(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand, TRAIL) 및 총 전립선 특이 항원(total prostate specific antigen, total PSA)을 대상으로 온도 및 시간에 따른 회수 및 안정성 실험을 실시하였고, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
이때, 하기 표 5에서 LP는 액체 혈장(Liquid Plasma), DHS는 본 발명 조성물 시트 기반의 건조체액반점, DBS는 셀룰로오스 시트 기반의 건조체액 반점을 나타내었다.
0 일(DAY) 2주 후
LP DHS DBS LP DHS DBS
보존온도 (℃) -80℃ 22℃ 22℃ 22℃ 22℃ 43℃ 22℃ 43℃ 22℃ 43℃

마
커 		PROLACTIN ● ● ● ○ ○ ○ ● ● ○ ○
CEA ● ● ● ○ ● ○ ● ● ● ○
LEPTIN ● ● ● ○ ● ○ ◎ ● ○ ○
TRAIL ● ● ● ● ○ ● ● ● ● ○
TOTAL PSA ● ● ● ○ ○ ○ ● ● ○ ○
- ● : 유의한 차이가 없음
- ◎ : 유의하게 낮은 수준
- ○ : 안정성 문제 발생
상기 실험 결과에 나타난 바와 같이, 본 발명의 조성물인 DHS는 상온 및 높은 온도에서 우수한 저장안정성을 보이며, 기존 기술인 셀룰로오스 시트 기반의 기술 대비 현저히 개선된 효과를 나타내는 것을 확인하였다.전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (1)

  1. 재용해도가 뛰어난 실크피브로인 단백질 조성물에 있어서,
    상기 실크피브로인 단백질 조성물의 전체 아미노산 함량대비 글리신의 함량이 40.2 내지 46.5 중량%, 알라닌의 함량이 27.1 내지 30.7 중량%, 세린의 함량이 1.3 내지 4.0 중량%이며,
    상기 실크피브로인 단백질 조성물의 평균 분자량이 32 kDa 내지 340 kDa를 가지는 것이고,
    상기 조성물은 pH 2.5 내지 3.5, 기압 0.1atm 내지 2.0atm, 중력 가속도 3000RCF 및 반응 시간 60분 내지 240분의 범위내에서 제조된 것이며,
    상기 조성물은 그 자체로 동결 및 동결 건조된 형태 또는 셀룰로오스 베이스 또는 플라스틱 스틱에 도포되어 동결 및 동결 건조된 시편 중 어느 한 형태이고,
    상기 조성물은 22℃ 내지 38℃에서 적어도 14일동안 SAP, sVCAM-1, CRP, 프로락틴, CEA, 렙틴, TRAIL 및 PSA로 구성된 군에서 하나 이상 선택된 바이오마커의 보관 및 회수 안정성이 유지되는 것을 특징으로 하며,
    첨가제로서 글리세롤을 전체 중량의 20 내지 90 중량% 첨가한 것인, 실크피브로인 단백질 조성물.
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