KR102347135B1 - Device and methods for detecting norovirus using time-resolved fluorescence - Google Patents

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Abstract

본 발명의 일 실시예에 따른 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군을 동시에 독립적으로 검출 측정하는 하나의 노로바이러스 측방 유동 분석장치는, 제 1 노로바이러스 유전자군을 검출하기 위한 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과, 제 2 노로바이러스 유전자군을 검출하기 위한 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈을 포함하며, 상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈은 각각 서로 다른 다공성 막 상에 약 1μs 보다 긴 형광 방출 수명을 갖는 형광표지가 결합된 제 1 및 제 2 고체상 검출라인에 대하여 광 조사 후 시간 지연을 두고 형광 신호 측정하여 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군을 동시에 독립적으로 검출 측정하는 것을 특징으로 한다.One norovirus lateral flow analysis device for simultaneously and independently detecting and measuring at least two norovirus gene groups according to an embodiment of the present invention is a first norovirus gene group analysis for detecting the first norovirus gene group A module and a second norovirus gene group analysis module for detecting a second norovirus gene group, wherein the first norovirus gene group analysis module and the second norovirus gene group analysis module are on different porous membranes, respectively Simultaneously and independently detecting and measuring at least two or more norovirus gene groups by measuring the fluorescence signal with a delay after light irradiation for the first and second solid-phase detection lines to which a fluorescent label having a fluorescence emission lifetime longer than about 1 μs is combined characterized in that

Description

시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 및 이를 이용한 측정방법{DEVICE AND METHODS FOR DETECTING NOROVIRUS USING TIME-RESOLVED FLUORESCENCE}Norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis and measurement method using same {DEVICE AND METHODS FOR DETECTING NOROVIRUS USING TIME-RESOLVED FLUORESCENCE}

본 발명은 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 및 이를 이용한 측정방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군 GI, GII, GIV을 분리하여 독립적으로 시분해 형광분석을 이용하여 검출 측정함으로써 미량의 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군 GI, GII, GIV에 대해서도 고민감도로 분석할 수 있는 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 및 이를 이용한 측정방법에 관한 것이다.The present invention relates to a norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis and a measurement method using the same, and more particularly, to separate time-resolved fluorescence analysis by separating at least two or more norovirus gene groups GI, GII, and GIV It relates to a norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis that can analyze with high sensitivity even a trace amount of at least two or more kinds of norovirus gene groups GI, GII, and GIV by using the same and a measurement method using the same .

노로바이러스(Norovirus)는 식품 및 수질 매개 병원체로, 음식물이나 물 등을 통해 섭취하게 되는 경우, 사람에게 감염성 위장염을 일으키는 장관계 바이러스(Enteric virus)의 한 종류이다. Norovirus is a food- and water-borne pathogen, and is a type of enteric virus that causes infectious gastroenteritis in humans when ingested through food or water.

도 1에 나타낸 바와 같이, 노로바이러스는 RNA 바이러스로 일곱 가지(GI 내지 GVII) 유전자군으로 분류되며, 이들 중 인체감염은 주로 유전자군 GI의 8개 유전자형, GII의 17개 유전자형에 의한 것으로 알려져 있다. As shown in Figure 1, norovirus is an RNA virus and is classified into seven (GI to GVII) gene groups, and among these, human infection is known to be mainly caused by 8 genotypes of GI and 17 genotypes of GII. .

노로바이러스는 입자 100개 정도만 섭취해도 사람에게 설사, 복통, 구토 등의 증상을 유발할 수 있고, 상기 증상들에 의해 배출되는 구토물이나 배설물 등에 약 1억 개의 노로바이러스 입자가 함유되어 있어, 강력한 감염력 및 빠른 전염속도를 가지고 있다. 이에, 식품이나 수질에 존재할 수 있는 미량의 노로바이러스를 고민감도로 검출 및 예방할 수 있는 기술이 더욱 요구되고 있다.Norovirus can cause symptoms such as diarrhea, abdominal pain, and vomiting in humans even if only about 100 particles are ingested. It has a fast rate of transmission. Accordingly, there is a further need for a technology capable of detecting and preventing a trace amount of norovirus that may be present in food or water with high sensitivity.

일반적인 노로바이러스 검출방법으로 전자현미경, EIA, ELISA 방법이 사용되어 왔으며, 가장 일반적인 검출방법으로는 RT-PCR, NASBA, 서던블롯법(Southern blot) 등이 광범위하게 이용되고 있다. Electron microscopy, EIA, and ELISA have been used as general detection methods for norovirus, and RT-PCR, NASBA, Southern blot, and the like are widely used as the most common detection methods.

전자현미경을 사용하여 확인할 경우 약 106 particles/mL, EIA와 ELISA의 경우 약 105-106 particles/mL까지 검출이 가능하다. 이에 반해 RT-PCR을 사용하여 검출할 경우 약 20-100 molecules/reaction의 LOD(limit of detection) 효율을 갖는데, 이들은 다양하고 복잡한 시료 전처리기술이 요구되며, 검출까지 많은 시간과 비용이 소요되는 문제점이 있고, 고가의 특수장비 사용으로 센서 장치를 소형화하기 어렵고 현장에서 실시간으로 이용하기 어렵다. When confirmed using an electron microscope, it is possible to detect up to about 106 particles/mL, and in the case of EIA and ELISA, about 105-106 particles/mL. On the other hand, when detecting using RT-PCR, it has a limit of detection (LOD) efficiency of about 20-100 molecules/reaction. However, it is difficult to miniaturize the sensor device due to the use of expensive special equipment, and it is difficult to use it in real time in the field.

또한, 식품 내에 오염된 노로바이러스 검출 시, 낮은 농도로 존재하는 노로바이러스를 검출하는 데에 한계가 있었다. In addition, when detecting norovirus contaminated in food, there is a limit in detecting norovirus present in a low concentration.

또한, 노로바이러스의 신속 진단 키트 (rapid kit)로 항원-항체 반응을 이용한 면역검사방식이 있는데, 골드를 신호발현물질로 사용하여 육안 검사를 수행하는 방식이다.In addition, as a rapid kit (rapid kit) for norovirus, there is an immunoassay method using an antigen-antibody reaction, which is a method of performing a visual examination using gold as a signal expression material.

이와 같은 골드기반의 신속 진단 키트는 민감도에 한계가 있어서, 도 2 에 도시된 바와 같이, 골드기반의 신속 진단 키트를 이용하여 노로바이러스를 검출하면, GI에 대해서 검출라인이 G1 유전자군 항원 농도가 1000pg/mL 정도가 되도록 검출이 되지 않았으며, GII에 대해서는 검출라인이 GII 유전자군 항원 농도가 1000pg/mL가 된 경우에 신호가 발현되는 등 인체감염을 주로 일으키는 유전자군 GI과 GII에 대해서 조차 낮은 농도로 존재하는 경우에는 검출하지 못하는 문제점이 있다. Such a gold-based rapid diagnostic kit has a limit in sensitivity. As shown in FIG. 2, when norovirus is detected using a gold-based rapid diagnostic kit, the detection line for GI is the G1 gene group antigen concentration. It was not detected so as to be about 1000pg/mL, and for GII, the detection line showed a signal when the antigen concentration of the GII gene group reached 1000pg/mL. When it exists in concentration, there is a problem in that it cannot be detected.

본 발명은 이러한 문제점을 해결하고자 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 노로바이러스는 RNA 바이러스로 일곱 가지(GI 내지 GVII) 유전자군으로 분류되는 데 실질적으로 사람에게 감염성 위장염을 일으킬 수 있는 GI과 GII에 대해서 동일한 현장의 동일한 샘플에 대해서 교차오염에 대한 우려에 의해 별도의 독립적인 분석장치를 물리적으로 구비할 필요없이 하나의 노로바이러스 측방 유동 분석장치를 사용하여 고민감도를 가지고 현장에서 빠르게 그리고 거희 동시에 검출할 수 있는 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 및 그 제조방법을 제공하는 것이다. The present invention has been devised to solve this problem, and an object of the present invention is that norovirus is an RNA virus and is classified into seven gene groups (GI to GVII). For the same sample at the same site, there is no need to physically provide a separate independent analyzer due to concerns about cross-contamination, and it is detected quickly and at the same time in the field with high sensitivity using a single norovirus lateral flow analyzer. To provide a norovirus lateral flow analysis device using time-resolved fluorescence analysis capable of performing the same, and a method for manufacturing the same.

본 발명의 일 실시예에 따른 동일한 형장의 동일한 테스트 시료에 대해서 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군을 동시에 독립적으로 검출가능한 하나의 노로바이러스 측방 유동 분석장치는
하나의 노로바이러스 측방 유동 분석장치는 상부 및 하부 케이스 사이에 배치되며,
하나의 다공성 막에 대해 폭방향으로 나란히 이격배치되는 제 1 노로바이러스 유전자군을 검출하기 위한 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈와 제 2 노로바이러스 유전자군을 검출하기 위한 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈을 포함하며,
상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈은 각각 상기 다공성 막 상에 폭방향으로 나란히 배치되는 1μs 보다 긴 형광 방출 수명을 갖는 형광표지가 결합된 제 1 및 제 2 고체상 검출라인에 대하여 여기광을 조사 후 시간 지연을 두고 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군을 동시에 독립적으로 검출 측정하는 것을 특징으로 한다.One norovirus lateral flow analyzer capable of simultaneously and independently detecting at least two or more types of norovirus gene groups for the same test sample of the same shape according to an embodiment of the present invention is
One norovirus lateral flow analyzer is disposed between the upper and lower case,
A first norovirus gene group analysis module for detecting a first norovirus gene group and a second norovirus gene group analysis module for detecting a second norovirus gene group, which are spaced apart from each other in the width direction with respect to one porous membrane includes,
The first norovirus gene group analysis module and the second norovirus gene group analysis module are first and second solid phases in which a fluorescent label having a fluorescence emission lifetime longer than 1 μs is combined, respectively, arranged side by side on the porous membrane in the width direction. It is characterized in that at least two or more types of norovirus gene groups are simultaneously and independently detected and measured with a time delay after irradiation with excitation light to the detection line.

본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 및 그 제조방법에 의하면, 식품이나 수질에 존재할 수 있는 소량의 노로바이러스에 대해서도 고민감도를 가지고 현장에서 빠르게 검출할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 및 그 제조방법에 의하면, 식품이나 수질에 존재할 수 있는 노로바이러스 GI에 대해서 0.05 ng/mL 농도로, GII에 대해서는 0.01 ng/mL 농도로 존재하더라도 고민감도를 가지고 현장에서 빠르게 검출할 수 있다.According to the norovirus lateral flow analysis apparatus using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention and its manufacturing method, it is possible to quickly detect in the field with high sensitivity even a small amount of norovirus that may exist in food or water quality. have.
According to the apparatus for analyzing norovirus lateral flow using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention and a method for manufacturing the same, the concentration of 0.05 ng/mL for norovirus GI, which may be present in food or water, and 0.01 for GII Even in the presence of ng/mL concentration, it can be quickly detected in the field with high sensitivity.

도 1은 노로바이러스의 다양한 유전자군을 나타내는 분류표이다.
도 2는 종래 골드기반의 신속진단 키트를 이용한 노로바이러스 유전자군 GI, GII 항원 농도에 따른 검출여부 사진이다.
도 3a 내지 도 3c는 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 개략적인 개념도, 그 분석 원리를 나타내는 도면, 및 본 발명의 변형 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 개략적인 개념도이다.
도 4a 및 도 4b는 각각 본 발명의 일 실시예와 변형 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 차단모듈을 나타내는 도면이다.
도 5는 노로바이러스 유전자군 GI, GII 분리 단독 측정시와, 노로바이러스 유전자군 GI, GII 혼합 측정시의 민감도의 비교 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 검사 순서를 설명하는 플로우차트이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 노로바이러스 유전자군 GI, GII 검출 민감도를 나타내는 그래프이다.1 is a taxonomy showing various gene groups of norovirus.
2 is a photograph showing whether or not detection of norovirus gene group GI and GII antigen concentrations using a conventional gold-based rapid diagnosis kit.
3A to 3C are schematic conceptual diagrams of a norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, a view showing an analysis principle thereof, and time-resolved fluorescence according to a modified embodiment of the present invention It is a schematic conceptual diagram of a norovirus lateral flow analyzer using analysis.
4A and 4B are diagrams illustrating a blocking module of a norovirus lateral flow analysis apparatus using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment and a modified embodiment of the present invention, respectively.
5 is a graph comparing the sensitivity of the norovirus gene group GI and GII separation alone and the norovirus gene group GI and GII mixed measurement.
6 is a flowchart illustrating a procedure for testing a norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention.
7 is a graph showing the detection sensitivity of norovirus gene groups GI and GII of the norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention.

이제, 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 및 그 제조방법에 대하여 도면을 참조하여 상세히 설명한다.Now, a norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention and a manufacturing method thereof will be described in detail with reference to the drawings.

본 발명의 일 실시예는, 본 발명을 설명하기 위해 제공되며, 본 발명을 한정하려는 것이 아니다. 사실상, 당해 기술분야의 통상의 기술자에게는, 본 발명의 사상이나 범위로부터 벗어나지 않으면서 본 발명에 다양한 수정과 변경을 행할 수 있다는 점이 명백할 것이다. One embodiment of the present invention is provided to illustrate the present invention, and is not intended to limit the present invention. In fact, it will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the present invention without departing from the spirit or scope of the present invention.

본 명세서에 있어서, "노로바이러스"는 예를 들어 사람과 같은 동물을 감염시키는 노로바이러스의 임의의 균주, 혈청형 또는 분리균일 수 있다. 노로바이러스는 유전자형 GI, GII 및 GIV 또는 임의의 다른 유전자형(예, GIII 또는 GV)과 같은 인간 숙주에서 일반적으로 발견되는 유전자형일 수 있다. As used herein, "norovirus" may be, for example, any strain, serotype or isolate of norovirus that infects animals such as humans. The norovirus may be of a genotype normally found in a human host, such as genotypes GI, GII and GIV or any other genotype (eg, GIII or GV).

또한, "테스트 시료(test sample)"는 노로바이러스를 함유할 것으로 의심되는 물질을 지칭한다. 테스트 시료는 공급원에서 수득된 그대로 또는 시료의 특성을 여과, 침전, 희석, 증류, 농축, 간섭 성분의 불활성화 및 시약의 첨가 등을 통해 개질하는 전처리 후에 사용할 수 있다. Also, "test sample" refers to a substance suspected of containing norovirus. The test sample can be used as it is obtained from the source or after pretreatment in which the properties of the sample are modified through filtration, precipitation, dilution, distillation, concentration, inactivation of interfering components, and addition of reagents.

도 3a 내지 도 4b를 참조하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치에 대해서 설명한다.A norovirus lateral flow analysis apparatus using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS. 3A to 4B .

도 3a 내지 도 3c는 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 개략적인 개념도, 그 분석 원리를 나타내는 도면, 및 본 발명의 변형 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 개략적인 개념도이고, 도 4a 및 도 4b는 각각 본 발명의 일 실시예와 변형 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 차단모듈을 나타내는 도면이다.3A to 3C are schematic conceptual diagrams of a norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, a view showing an analysis principle thereof, and time-resolved fluorescence according to a modified embodiment of the present invention It is a schematic conceptual diagram of a norovirus lateral flow analysis device using analysis, and FIGS. 4A and 4B are respectively a blocking module of a norovirus lateral flow analysis device using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment and a modified embodiment of the present invention. It is a drawing showing

본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(1)는 테스트 시료에 존재하는 노로바이러스의 존재를 검출하기 위한 다공성 막 기반 디바이스로 여기된 형광표지에 의해 생성된 신호를 시분해 형광을 사용하여 노로바이러스를 검출한다. The norovirus lateral flow analyzer 1 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention is a porous membrane-based device for detecting the presence of norovirus present in a test sample. The signal is time-resolved to detect norovirus using fluorescence.

본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(1)는 펄스 발광 다이오드(LED) 및 이미징 카메라를 포함하는 형광 검사기(50)에 의해서 광을 조사하여 형광표지를 자극하고 형광을 검출한다.The norovirus lateral flow analyzer 1 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention emits light by a fluorescence tester 50 including a pulsed light emitting diode (LED) and an imaging camera to detect a fluorescent label. stimulate and detect fluorescence.

도 3a 내지 도 4b에 도시된 바와 같이, 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(1)는 제 1 노로바이러스 유전자군(GI)을 검출하기 위한 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10)과, 제 2 노로바이러스 유전자군(GII)을 검출하기 위한 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(100)을 각각 구비하며, 상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10)과 상기 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(100) 사이를 분리하기 위한 이격공간(40)을 갖는 차단모듈(200)을 포함할 수 있다. 3A to 4B, the norovirus lateral flow analyzer 1 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention includes a first for detecting a first norovirus gene group (GI). A norovirus gene group analysis module 10, and a second norovirus gene group analysis module 100 for detecting a second norovirus gene group (GII), respectively, wherein the first norovirus gene group analysis module ( 10) and the second norovirus gene group analysis module 100 may include a blocking module 200 having a separation space 40 for separating.

도 4a에 도시된 바와 같이, 상기 차단모듈(200)은 상기 이격공간(40)을 두고, 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10, 100)을 수용하기 위한 상부 및 하부 케이스(201, 203)를 포함할 수 있으며, 상기 이격공간(40)에 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10, 100)을 차단 분리하기 위한 차단월(41)을 더 가질 수 있으며, 상기 다공성 막(18, 118)의 검출영역(20, 120)에 대응해서 부분적으로 돌출된 돌출부(43)를 더 포함할 수도 있다. As shown in Figure 4a, the blocking module 200 has the separation space 40, and upper and lower cases for accommodating the first and second norovirus gene group analysis modules 10 and 100 ( 201, 203), and may further have a blocking wall 41 for blocking and separating the first and second norovirus gene group analysis modules 10 and 100 in the separation space 40, It may further include a protrusion 43 partially protruding corresponding to the detection regions 20 and 120 of the porous membranes 18 and 118 .

상기 상부 케이스(201)에는 상기 다공성 막(18, 118)의 검출영역(20, 120)을 노출시키기 위한 개구(205)로부터 상기 검출영역(20, 120)을 향해 돌출되되, 상기 개구(205) 주위에 형성되는 플랜지 만곡부(243)가 더 형성되어 상기 다공성 막(18, 118) 상의 테스트 시료의 모세관 이동을 돕고, 상기 제 1 또는 제 2 노로바이러스 유전자군 검출을 위한 시약 또는 노로바이러스 샘플의 오염을 방지할 수 있다.The upper case 201 has an opening 205 for exposing the detection regions 20 and 120 of the porous membranes 18 and 118 to protrude toward the detection regions 20 and 120, and the opening 205 A flange curved portion 243 formed around is further formed to help capillary movement of the test sample on the porous membranes 18 and 118, and a reagent for detecting the first or second norovirus gene group or contamination of the norovirus sample. can prevent

상기 차단월(41)에 대응하여 차단공간(241)이 상기 검출영역(20, 120)을 분리 이격하기 위하여 더 구비될 수 있다. A blocking space 241 corresponding to the blocking wall 41 may be further provided to separate and space the detection areas 20 and 120 from each other.

상기 차단모듈(200)은 상기 차단공간(241)을 중간에 두고 각각 적어도 2종 이상의 수용공간(201a, 201b)을 나란히 구비하여, 상기 적어도 2종 이상의 수용공간(201a, 201b) 내에 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10, 100)을 수용할 수 있으며, 제 3 노로바이러스 유전자군 분석모듈로 교체할 수도 있다. The blocking module 200 is provided with at least two or more types of accommodating spaces 201a and 201b side by side with the blocking space 241 in the middle, and the first and the second norovirus gene group analysis module 10 and 100 may be accommodated, and may be replaced with the third norovirus gene group analysis module.

상기 차단모듈(200)에 추가의 수용공간이 더 형성되는 경우에 제 3 내지 제 4의 노로바이러스 유전자군 분석모듈이 수용되어 GIV 노로바이러스에 대해서도 동시에 분석을 진행할 수 있다. When an additional accommodating space is further formed in the blocking module 200, the third to fourth norovirus gene group analysis modules may be accommodated to simultaneously analyze GIV norovirus.

본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(1)에 있어서, 이와 같이 상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10)과 상기 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(100)을 분리하여 구비하는 이유에 대해서 도 5 및 실험예 1을 참조하여 설명한다. In the norovirus lateral flow analysis device 1 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, as described above, the first norovirus gene group analysis module 10 and the second norovirus gene group analysis module The reason for separately providing 100 will be described with reference to FIG. 5 and Experimental Example 1. FIG.

[실험예 1][Experimental Example 1]

상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10)과 상기 제 2 노로바이러스 유전자군 분석 모듈(100)에 대하여 각각 약 1μs보다 긴 형광 방출 수명을 갖는 형광표지를 결합시켜 서로 다른 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10, 100)에 대하여 빛을 조사하여 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군을 분리하여 단독 측정한 경우와, 노로바이러스 유전자군 GI, GII를 하나의 분석 모듈에 혼합 측정한 경우에 대하여 항원 농도별 형광 신호 검출세기를 실험하였다. The first norovirus gene group analysis module 10 and the second norovirus gene group analysis module 100 are combined with a fluorescent label having a fluorescence emission lifetime longer than about 1 μs, respectively, to combine first and second noroviruses different from each other. When the virus gene group analysis module (10, 100) is irradiated with light to separate and measure at least two or more types of norovirus gene groups, and when norovirus gene groups GI and GII are mixed and measured in one analysis module fluorescence signal detection intensity for each antigen concentration was tested.

도 5는 노로바이러스 유전자군 GI, GII 분리 단독 측정시와, 노로바이러스 유전자군 GI, GII 혼합 측정시의 민감도의 비교 그래프이다.5 is a graph comparing the sensitivity of the norovirus gene group GI and GII separation alone and the norovirus gene group GI and GII mixed measurement.

도 5에 도시된 바와 같이, GI 항원에 대하여 GI 항체를 단독으로 사용한 경우와 GI 항체와 GII 항체를 혼합한 경우의 GI 노로바이러스 항원 농도에 따른 형광검출세기를 살펴보면, GI항체와 GII 항체를 혼합된 경우에는 GI 항원이 저농도 구간 0-100pg/mL 에서 측정된 형광 신호 세기 기울기가 평평한 정도이지만, GI 항체만 분리하여 독립적으로 사용한 경우에는 GI 항원 저농도인 0-100pg/mL 대해서도 형광 신호세기의 기울기가 가파름을 알 수 있고, 이러한 현상은 저농도 신호 구분력이 증가했다는 것을 의미한다. As shown in FIG. 5 , looking at the fluorescence detection intensity according to the GI norovirus antigen concentration in the case where the GI antibody was used alone and the GI antibody and the GII antibody were mixed with respect to the GI antigen, the GI antibody and the GII antibody were mixed In this case, the gradient of the fluorescence signal intensity measured at 0-100 pg/mL in the low concentration of GI antigen is flat, but when only the GI antibody is isolated and used independently, the gradient of the fluorescence signal intensity is also in the low concentration of 0-100 pg/mL of the GI antigen. It can be seen that is steepness, and this phenomenon means that the ability to discriminate low-concentration signals has increased.

마찬가지로, GII 항원에 대하여 GII 항체를 단독으로 사용한 경우와 GII 항체와 GI 항체를 혼합한 경우의 GII 노로바이러스 항원 농도에 따른 측정된 형광 신호 세기를 살펴보면 GI항체와 GII 항체를 혼합된 경우보다 GII 항체만 분리하여 독립적으로 사용한 경우에 GII 항원 저농도 0-100pg/mL 구간의 형광 신호 세기 기울기가 증가하는 것을 알 수 있었다. Similarly, when looking at the measured fluorescence signal intensity according to the concentration of GII norovirus antigen in the case of using the GII antibody alone and the case of mixing the GII antibody and the GI antibody against the GII antigen, the GII antibody compared to the case where the GI antibody and the GII antibody were mixed It was found that the gradient of the fluorescence signal intensity in the range of 0-100 pg/mL of low GII antigen concentration was increased when only the cells were separated and used independently.

즉, 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(1)를 이용하여, 상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10)과 상기 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(100)을 이용하여 GI 항원에 대하여 GI 항체를 단독으로 사용하여 검출하고, GII 항원에 대하여 GII 항체를 단독으로 사용하여 GI과 GII를 각각 나누어 검출하는 것이 저농도에 대해서 고민감도를 가지고 GI과 GII를 측정할 수 있음을 알 수 있다.That is, using the norovirus lateral flow analysis device 1 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, the first norovirus gene group analysis module 10 and the second norovirus gene group are analyzed Detecting using the GI antibody alone against the GI antigen using the module 100, and separately detecting GI and GII using the GII antibody alone against the GII antigen, has high sensitivity for low concentrations and It can be seen that GII can be measured.

이제 다시 도 3a 내지 도 4b를 참조하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(1)의 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10)과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(100)의 세부 구성에 대해서 상세히 설명한다.Referring again to FIGS. 3A to 4B , the first norovirus gene group analysis module 10 and the second norovirus lateral flow analysis device 1 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention A detailed configuration of the virus gene group analysis module 100 will be described in detail.

본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(1)에 있어서, 상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈(10)과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈(100) 각각은 독립적으로 노로바이러스를 함유한 테스트 시료가 도포되는 샘플 패드(14, 114/그림3a에 없음)와, 상기 샘플 패드(14, 114) 하류에 설치되어 상기 샘플 패드(14, 114)로부터 이동되는 테스트 시료 중의 GI~GIV 노로바이러스와 혼합되어 검출영역(20, 120)의 검출라인(21, 121)에서 검출이 가능한 노로바이러스 복합체를 형성하는 프로브가 포함된 흡착패드(16, 116)와, 상기 흡착패드(16, 116)에 대해 유체 연통하여 상기 노로바이러스 복합체를 검출영역(20, 120)으로 이동시키기 위한 다공성 막(18, 118)을 포함한다.In the norovirus lateral flow analysis device 1 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, the first norovirus gene group analysis module 10 and the second norovirus gene group analysis module 100 Each independently has a sample pad (14, 114/not shown in Figure 3a) onto which a test sample containing norovirus is applied, and installed downstream of the sample pad (14, 114) to move from the sample pad (14, 114). Adsorption pads (16, 116) containing probes that mix with GI to GIV norovirus in the test sample to form a norovirus complex that can be detected in the detection lines (21, 121) of the detection regions (20, 120); and porous membranes 18 and 118 for moving the norovirus complex to the detection regions 20 and 120 in fluid communication with the adsorption pads 16 and 116 .

상기 샘플 패드 (14, 114) 는 도 3a 및 도 4a에 도시된 바와 같이, 상기 제 1 및 제 2 노로 바이러스 유전자군 분석 모듈(10, 100) 각각에 독립적으로 포함될 수 있고, 도 3c 및 도 4b에 도시된 바와 같이, 상기 샘플 패드(14, 114) 하나를 공유하여 상기 샘플패드(14, 114) 하나로부터 상기 흡착패드(16, 116)에 연결되어, 상기 테스트 시료를 동시에 동일하게 상기 하나의 샘플패드(14, 114)에 투입한 후 상기 하나의 샘플패드(14, 114)로부터 분기시켜 각각의 다공성 막(18, 118)에 흐르게 할 수 있다.The sample pads 14 and 114 may be independently included in each of the first and second norovirus gene group analysis modules 10 and 100, respectively, as shown in FIGS. 3A and 4A , and FIGS. 3C and 4B . As shown in Fig., one of the sample pads 14 and 114 is shared and connected from one of the sample pads 14 and 114 to the suction pad 16 and 116, so that the test sample is simultaneously and identically connected to the one sample pad. After input to the sample pads 14 and 114, it can be branched from the one sample pad 14 and 114 to flow through each of the porous membranes 18 and 118.

이와 같이 상기 샘플 패드(14, 114) 하나를 공유하여 상기 샘플패드(14, 114) 하나로부터 상기 흡착패드(16, 116) 각각에 연결함으로써 분석하고자 하는 테스트시료의 동일성과 동시성을 확보할 수도 있다.In this way, by sharing one of the sample pads 14 and 114 and connecting from one of the sample pads 14 and 114 to each of the suction pads 16 and 116, the identity and simultaneity of the test sample to be analyzed may be secured. .

여기서 "프로브"란 노로바이러스와 특이적으로 결합하는 항체들, 상기 항체에 표지되어 결합자리를 형성하는 결합물질, 상기 항체에 표지되어 형광 신호를 발생시키는 형광 물질, 노로 바이러스에 비특이적인 항체를 포함할 수 있다.Here, "probe" includes antibodies that specifically bind to norovirus, a binding material that is labeled with the antibody to form a binding site, a fluorescent material that is labeled with the antibody to generate a fluorescence signal, and an antibody that is non-specific for norovirus can do.

상기 흡착패드(16, 116)는 적어도 2종 이상의 프로브가 독립적으로 순차적으로 제공되는 제 1 및 제 2 흡착패드(15, 115, 16, 116)로 나뉘어질 수 있는데, 상기 노로바이러스 복합체를 형성하는 결합물질이 표지된 항체(포획 항체)를 제공하는 제 1 흡착패드(15, 115)와, 상기 복합체를 형성하는 형광표지된 항체(검출 항체), 노로바이러스 비특이적인 형광물질 표지된 항체를 제공하는 제 2 흡착패드(16, 116)를 포함할 수 있다. The adsorption pads 16 and 116 may be divided into first and second adsorption pads 15, 115, 16, and 116 to which at least two or more probes are independently and sequentially provided. A first adsorption pad (15, 115) that provides an antibody (capture antibody) labeled with a binding material, a fluorescently-labeled antibody (detection antibody) that forms the complex, and a norovirus non-specific fluorescent substance-labeled antibody It may include a second suction pad (16, 116).

상기 검출영역(20, 120)에는 상기 노로바이러스 복합체와 화학적 및 물리적 결합을 형성할 수 있는 고정화된 포획 시약이 도포된 검출라인(21, 121)과 노로바이러스에 비특이적인 항체와 결합을 형성할 수 있는 고정화된 포획 시약이 도포된 교정라인(23, 123)이 형성될 수 있다.In the detection regions 20 and 120, the detection lines 21 and 121 coated with an immobilized capture reagent capable of forming a chemical and physical bond with the norovirus complex and a non-specific antibody to norovirus can form a bond. Calibration lines 23 and 123 to which an immobilized capture reagent is applied may be formed.

상기 고정화된 포획 시약에는 상기 결합물질에 특이적 결합할 수 있는 항체를 함유할 수 있다. The immobilized capture reagent may contain an antibody capable of specifically binding to the binding material.

또한, 상기 흡착 패드(16, 116)는 결합물질 없이 형광표지된 항체 (검출 항체)를 포함할 수 있다. 이러한 경우, 검출라인 (21, 121)에는 노로 바이러스 포획 항체를 포획 시약으로 고정화시켜, 노로 바이러스-검출 항체 복합체와 반응하게 한다.In addition, the adsorption pads 16 and 116 may include a fluorescently-labeled antibody (detection antibody) without a binding material. In this case, the norovirus capture antibody is immobilized in the detection lines 21 and 121 as a capture reagent, so that it reacts with the norovirus-detection antibody complex.

상기 샘플 패드(14, 114)는 상기 다공성 막(18, 118)과 직접 접촉하지 않고 상기 흡착 패드(16, 116)에 의해서 연결되어 상기 샘플패드(14, 114)를 통해 투입된 테스트 샘플이 상기 흡착 패드(16, 116)를 지나서 상기 다공성 막(18, 118)과 유체 연통하도록 구성될 수 있다.The sample pads 14 and 114 are not in direct contact with the porous membranes 18 and 118 but are connected by the suction pads 16 and 116 so that the test sample introduced through the sample pads 14 and 114 is the adsorption. It may be configured to be in fluid communication with the porous membrane 18 , 118 past the pads 16 , 116 .

상기 샘플 패드(14, 114)에는 하나 이상의 분석 전처리 시약을 포함할 수도 있으며, 상기 샘플 패드(14, 114)와 흡착 패드(16, 116)는 테스트 시료가 통과할 수 있는 다공성 유리섬유 재질로 형성될 수 있다.The sample pads 14 and 114 may include one or more assay pretreatment reagents, and the sample pads 14 and 114 and the adsorption pads 16 and 116 are formed of a porous glass fiber material through which the test sample can pass. can be

상기 검출라인(21, 121)과 상기 교정라인(23, 123)을 점점 더 많은 유체가 통과함에 따라 형광 신호 크기가 변화된다. 상기 교정라인(23, 123)은 형광물질로 표지된 노로바이러스와 반응하지 않는 비특이 항체와 반응하며, 노로바이러스 존재 여부와 상관없이 형광 신호가 발현되어 해당 테스트가 유효함을 입증한다. As more and more fluids pass through the detection lines 21 and 121 and the calibration lines 23 and 123, the fluorescence signal intensity is changed. The calibration lines 23 and 123 react with a non-specific antibody that does not react with norovirus labeled with a fluorescent material, and a fluorescent signal is expressed regardless of the presence of norovirus, thereby proving that the test is effective.

상기 검출라인(21, 121)은 결합 물질에 특이적인 포획 시약 혹은 노로 바이러스 특이 항체를 함유하여 노로바이러스 복합체만을 포획한다. 테스트 시료는 교정라인(23, 123)을 통과한 후, 최종 목적지로서 흡수패드(24, 124)에 도달한다. 상기 흡수 패드(24, 124)는 모세관 작용 및 유체 흐름을 촉진시키는데 도움을 주며 폐기물 수집기로서 작용한다. The detection lines 21 and 121 contain a capture reagent specific for a binding material or a norovirus specific antibody to capture only the norovirus complex. After passing through the calibration lines 23 and 123, the test sample arrives at the absorbent pads 24 and 124 as a final destination. The absorbent pads 24 and 124 help to promote capillary action and fluid flow and act as waste collectors.

본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치(10)에 있어서, 상기 검출라인(21, 121)에는 포획 시약으로 스트렙트아비딘을 사용하였으며, 상기 프로브의 특이적 결합물질인 비오틴에 대해서 특이 결합할 수 있어서 바람직하다.In the norovirus lateral flow analyzer 10 using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, streptavidin was used as a capture reagent in the detection lines 21 and 121, and the specific It is preferable because it can specifically bind to biotin, which is a binding substance.

상기 시분해 형광 검사기(50)는 상기 검출라인(21, 121) 및 상기 교정라인(23, 123)에 대해 동시에 펄스광을 방출하도록 구성되어 상기 검출라인(21, 121) 및 상기 교정라인(23, 123)에서 형광물질로부터 방출된 형광신호를 동시에 수신할 수 있다. The time-resolved fluorescence tester 50 is configured to simultaneously emit pulsed light to the detection lines 21 and 121 and the calibration lines 23 and 123, and the detection lines 21 and 121 and the calibration line 23 , 123) can simultaneously receive the fluorescent signal emitted from the fluorescent material.

상기 시분해 형광 검사기(50)는 펄스화 여기원 및 광검출기를 이용할 수 있다.The time-resolved fluorescence tester 50 may use a pulsed excitation source and a photodetector.

본 명세서에 있어서, 형광물질은 1 마이크로초 이상의 긴 방출 수명을 지니는 것으로, 산란광 및 자체형광과 같은 많은 원인으로부터의 배경 방해가 실질적으로 제거될 있도록 비교적 긴 방출 수명과 비교적 큰 스토크스 이동을 모두 갖는 사마륨 (Sm(III)), 디스프로슘 (Dy(III)), 유로피움 (Eu(III)), 및 테르븀 (Tb(III))의 란탄족 킬레이트을 이용할 수 있다.In the present specification, a fluorescent material has a long emission lifetime of 1 microsecond or more, and has both a relatively long emission lifetime and a relatively large Stokes shift so that background disturbance from many sources such as scattered light and autofluorescence can be substantially eliminated. Lanthanide chelates of samarium (Sm(III)), dysprosium (Dy(III)), europium (Eu(III)), and terbium (Tb(III)) can be used.

따라서, 상기 시분해 형광 검사기(50)는 간단하고 비싸지 않은 디자인을 지닐 수 있다. 예를 들어, 펄스 발광 다이오드 (LED) 및 이미징 카메라를 이용하여 형광물질를 정확하게 여기시키고 모노크로매터 또는 좁은 방출띠폭 광학 필터와 같은 고가의 부품을 사용하지 않고도 검출라인(21, 121) 및 교정라인(23, 123)의 형광을 검출할 수 있다.Accordingly, the time-resolved fluorometer 50 can have a simple and inexpensive design. For example, pulsed light emitting diodes (LEDs) and imaging cameras are used to accurately excite fluorescent materials, and detection lines 21 and 121 and calibration lines ( 23, 123) can be detected.

이제 도 6 및 도 7 및 실험예 2를 참조하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치를 이용한 노로바이러스 측정방법 및 그 효과에 대해서 설명한다. Now, with reference to FIGS. 6 and 7 and Experimental Example 2, a norovirus measuring method using a norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention and its effects will be described.

도 6는 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치 검사방법을 설명하는 플로우 차트이고 도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치의 노로바이러스 유전자군 GI, GII 식별 민감도를 나타내는 그래프이다.6 is a flowchart illustrating a method for testing a norovirus lateral flow analysis device using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, and FIG. 7 is a norovirus using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention. It is a graph showing the identification sensitivity of norovirus gene group GI and GII of the lateral flow analysis device.

<실험예 2><Experimental Example 2>

도 6에 도시된 바와 같이, 본 발명의 일 실시예에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치를 이용한 노로바이러스 측정방법에 있어서, 먼저 샘플 시료를 준비할 수 있다(S10).As shown in FIG. 6 , in the norovirus measurement method using the norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis according to an embodiment of the present invention, a sample sample may be prepared first (S10).

샘플 시료는 50 mM HEPES 완충액에 노로바이러스 유전자군 GI, GII 항원 농도를 달리하면서 제작 하였다. Samples Samples were prepared in 50 mM HEPES buffer with different concentrations of norovirus gene group GI and GII antigens.

이어서 준비된 샘플 시료들을 제 1 측방 유동 분석모듈(10)과 제 2 측면유동분석모듈(100)의 샘플패드(10, 110)에 80μL 주입한다(S20)Then, 80 μL of the prepared sample samples are injected into the sample pads 10 and 110 of the first lateral flow analysis module 10 and the second lateral flow analysis module 100 (S20).

상기 샘플패드(10, 110) 하나를 공유하여 샘플 시료가 한번에 제공될 수도 있으며, 상기 샘플패드(10, 110) 각각에 샘플 시료가 독립적으로 제공될 수도 있다.A sample sample may be provided at once by sharing one of the sample pads 10 and 110 , or a sample sample may be independently provided to each of the sample pads 10 and 110 .

여기서, 상기 제 1 측방 유동 분석모듈(10)과 제 2 측방 유동 분석모듈(100)은 각각 흡착패드(16, 116)에 동일한 형광물질과 결합물질을 가지며, 제 1 노로바이러스 유전자군과 제 2 노로바이러스 유전자군에 대한 각각의 포획-검출 항체쌍을 적용 분리 도포하고 있다.Here, the first lateral flow analysis module 10 and the second lateral flow analysis module 100 have the same fluorescent material and binding material on the adsorption pads 16 and 116, respectively, and the first norovirus gene group and the second Each capture-detection antibody pair against the norovirus gene family is applied separately.

이어서 상기 흡착패드(16, 116)를 지나면서 형성된 형광표지된 노로바이러스 유전자군 GI 복합체와, 형광표지된 노로바이러스 유전자군 GII 복합체가 각각의 다공성막으로 모세관 이동한다(S30)Subsequently, the fluorescently labeled norovirus gene group GI complex and the fluorescently labeled norovirus gene group GII complex formed while passing through the adsorption pads 16 and 116 move capillary to each porous membrane (S30)

이 때, 상기 제 1 측방 유동 분석모듈(10)과 제 2 측방 유동 분석모듈(100) 각각의 검출라인(21, 121)과 교정라인(23, 123)에 시분해 형광 검사기(50)를 이용하여 광조사하여 형광표지된 제 1 노로바이러스 유전자군 복합체와, 형광표지된 제 2 노로바이러스 유전자군 복합체를 여기시켜 제 1 노로바이러스 유전자군과 제 2 노로바이러스 유전자군 각각에 대한 형광 신호를 발생시킬 수 있다(S40)At this time, the time-resolved fluorescence tester 50 is used for the detection lines 21 and 121 and the calibration lines 23 and 123 of the first lateral flow analysis module 10 and the second lateral flow analysis module 100, respectively. to generate a fluorescent signal for each of the first norovirus gene group and the second norovirus gene group by excitation of the fluorescently-labeled first norovirus gene group complex and the fluorescently-labeled second norovirus gene group complex by irradiation with light. Can (S40)

상기 검출라인(21, 121)과 교정라인(23, 123)의 제 1 노로바이러스 유전자군과 제 2 노로바이러스 유전자군에 대한 각각 형광 신호를 비교하여 샘플 시료내 존재하는 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군을 각각 검출할 수 있다(S50).The first and second noroviruses present in the sample sample are compared by comparing the fluorescence signals of the first and second norovirus gene groups of the detection lines 21 and 121 and the calibration lines 23 and 123, respectively. Each gene group can be detected (S50).

본 발명의 일 실시예에 따른 노로바이러스 유동 면역 분석 디바이스를 이용한 노로바이러스 측정방법은 측방 유동 분석법 및 시분해 형광 기술을 사용하여 시료에서 노로바이러스 입자를 검출하는 것이다.A norovirus measurement method using a norovirus flow immunoassay device according to an embodiment of the present invention is to detect norovirus particles in a sample using a lateral flow analysis method and a time-resolved fluorescence technique.

따라서, i) 검출영역(20, 120)에 근접하여 시분해 형광 검사기(50)를 배치하는 단계로서, 상기 형광 검사기는 펄스 여기원 및 시간 게이팅된 검출기를 포함하는, 단계; ii) 펄스 여기원으로 검출영역(20, 120)에서 형광표지를 여기시켜 상기 노로바이러스 GI, GII 의 형광표지가 형광 신호를 방출하게 하는 단계; 및 iii) 시간 게이팅된 검출기로 형광 신호의 세기를 검출, 분석하는 단계를 더 포함할 수 있다. Accordingly, i) disposing a time-resolved fluorometer (50) proximate the detection area (20, 120), the fluorometer comprising a pulsed excitation source and a time-gated detector; ii) excitation of the fluorescent label in the detection regions 20 and 120 with a pulse excitation source so that the fluorescent label of the norovirus GI and GII emits a fluorescent signal; and iii) detecting and analyzing the intensity of the fluorescence signal with a time-gated detector.

한편, 도 7에 도시된 바와 같이, 본 발명의 일 실시예에 따른 노로바이러스 측정방법에 따르면, 노로바이러스 유전자군 GI 항원 농도가 0 과 50pg/ml 의 형광 세기 차이가 크기 때문에 GI 항원 50 pg/ml를 용이하게 검출할 수 있다. On the other hand, as shown in FIG. 7 , according to the norovirus measuring method according to an embodiment of the present invention, since the fluorescence intensity difference between the norovirus gene group GI antigen concentration 0 and 50 pg/ml is large, the GI antigen 50 pg/ml ml can be easily detected.

또한, 노로바이러스 유전자군 GII 항원 농도 0 과 10pg/ml에서 형광 세기 차이가 크기 유전자군 GII를 용이하게 검출 할 수 있다. In addition, the difference in fluorescence intensity at the norovirus gene group GII antigen concentration 0 and 10 pg/ml can easily detect the size gene group GII.

10, 100 : 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군 분석 모듈
15, 115 : 제 1 흡착패드 16, 116 : 제 2 흡착패드
18, 118 : 다공성 막 40 : 이격공간
20, 120 : 검출영역 21, 121 : 검출라인
23, 123 : 교정라인 50 : 형광 검사기10, 100: first and second norovirus gene group analysis module
15, 115: first adsorption pad 16, 116: second adsorption pad
18, 118: porous membrane 40: separation space
20, 120: detection area 21, 121: detection line
23, 123: calibration line 50: fluorescence tester

Claims (9)

동일한 현장의 동일한 테스트 시료에 대해서 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군을 동시에 독립적으로 검출가능한 하나의 노로바이러스 측방 유동 분석장치에 있어서,
하나의 노로바이러스 측방 유동 분석장치는 상부 및 하부 케이스 사이에 배치되며,
하나의 다공성 막에 대해 폭방향으로 나란히 이격배치되는 제 1 노로바이러스 유전자군을 검출하기 위한 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈와 제 2 노로바이러스 유전자군을 검출하기 위한 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈을 포함하며,
상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈은 각각 상기 다공성 막 상에 폭방향으로 나란히 배치되는 1μs 보다 긴 형광 방출 수명을 갖는 형광표지가 결합된 제 1 및 제 2 고체상 검출라인에 대하여 여기광을 조사 후 시간 지연을 두고 적어도 2종 이상의 노로바이러스 유전자군을 동시에 독립적으로 검출 측정하는 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치.In one norovirus lateral flow analyzer capable of simultaneously and independently detecting at least two or more norovirus gene groups for the same test sample at the same site,
One norovirus lateral flow analyzer is disposed between the upper and lower case,
A first norovirus gene group analysis module for detecting a first norovirus gene group and a second norovirus gene group analysis module for detecting a second norovirus gene group, which are spaced apart from each other in the width direction with respect to one porous membrane includes,
The first norovirus gene group analysis module and the second norovirus gene group analysis module are first and second solid phases in which a fluorescent label having a fluorescence emission lifetime longer than 1 μs is combined, respectively, arranged side by side on the porous membrane in the width direction. A norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis that simultaneously and independently detects and measures at least two or more norovirus gene groups with a delay after irradiating excitation light with a detection line. 제 1 항에 있어서,
상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 상기 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈 사이를 이격 차단하기 위한 상기 다공성 막 폭방향에 이격공간을 가지며, 상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 상기 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈을 수용하는 차단모듈을 더 포함하는 노로바이러스 측방 유동 분석장치.The method of claim 1,
A separation space is provided in the width direction of the porous membrane for blocking the separation between the first norovirus gene group analysis module and the second norovirus gene group analysis module, and the first norovirus gene group analysis module and the second norovirus gene group analysis module Norovirus lateral flow analysis device further comprising a blocking module for accommodating the virus gene group analysis module. 제 1 항에 있어서,
상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈은 샘플시료가 투입되는 샘플패드와, 상기 샘플패드에 투입된 샘플 시료에 존재하는 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군에 결합되는 프로브를 갖는 흡착패드와, 상기 흡착패드와 유체연통하여 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군과 상기 프로브의 결합에 의한 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군 복합체를 각각 고정하는 검출라인과 교정라인을 갖는 다공성막을 포함하며,
상기 흡착패드는 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 복합체를 형성하는 결합물질이 표지된 포획항체를 제공하는 제 1 흡착패드와, 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 복합체를 형성하는 형광표지된 검출항체, 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군에 비특이적인 형광물질 표지된 항체를 제공하는 제 2 흡착패드를 포함하는 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치. The method of claim 1,
The first norovirus gene group analysis module and the second norovirus gene group analysis module are coupled to a sample pad to which a sample sample is input, and first and second norovirus gene groups present in the sample sample input to the sample pad. An adsorption pad having a probe, a detection line and a calibration line for fixing the first and second norovirus gene group complexes by binding the first and second norovirus gene groups to the probe in fluid communication with the adsorption pad, respectively It includes a porous membrane having
The adsorption pad comprises a first adsorption pad providing a capture antibody labeled with a binding material forming the first and second norovirus complexes, a fluorescently-labeled detection antibody forming the first and second norovirus complexes; A norovirus lateral flow analyzer using time-resolved fluorescence analysis comprising a second adsorption pad that provides a fluorescent substance-labeled antibody non-specific to the first and second norovirus gene groups. 제 3 항에 있어서,
상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈은 상기 샘플패드를 각각 독립적으로 구비하거나 또는 상기 샘플패드 하나를 공유하여, 상기 샘플패드상의 테스트시료로부터 상기 제 1 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈 각각의 상기 흡착패드와 상기 다공성막으로 이동시키는 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치. 4. The method of claim 3,
The first norovirus gene group analysis module and the second norovirus gene group analysis module each independently have the sample pad or share one of the sample pads, and the first norovirus gene is extracted from the test sample on the sample pad. A norovirus lateral flow analysis device using time-resolved fluorescence analysis to move the group analysis module and the second norovirus gene group analysis module to the adsorption pad and the porous membrane, respectively. 제 4 항에 있어서,
상기 결합물질은 비오틴으로 상기 제 1 및 제 2 노로바이러스 유전자군 포획 항체에 표지되어 상기 검출라인에 도포된 스트렙타아비딘과 특이 결합하며, 상기 형광물질은 유로피움인 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치. 5. The method of claim 4,
The binding material is biotin labeled with the first and second norovirus gene group capture antibodies and specifically binds to streptavidin coated on the detection line, and the fluorescent material is europium. Norovirus using time-resolved fluorescence analysis Lateral flow analyzer. 제 1 항에 있어서,
상기 제 2 노로바이러스 유전자군 분석모듈은 제 3 노로바이러스 유전자군 분석모듈과 교체가능하며,
상기 제 1 노로바이러스 유전자군은 GI 유전자군이며, 상기 제 2 노로바이러스 유전자군은 GII 유전자군이며, 제 3 노로바이러스 유전자군은 GIV 유전자군인 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치. The method of claim 1,
The second norovirus gene group analysis module is replaceable with the third norovirus gene group analysis module,
The first norovirus gene group is a GI gene group, the second norovirus gene group is a GII gene group, and the third norovirus gene group is a GIV gene group. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 시분해 형광분석을 이용한 노로바이러스 측방 유동 분석장치를 이용한 노로바이러스 검출 측정방법에 있어서,
GI, GII 유전자군을 포함하는 테스트 시료를 준비하는 단계와, 상기 준비된 테스트 시료를 측방 유동 분석장치의 샘플패드에 주입하는 단계와,
상기 샘플패드에 인접한 흡착패드로 이동시키면서 형광물질이 표지된 제 1 노로바이러스 유전자군 복합체와, 형광물질이 표지된 제 2 노로바이러스 유전자군 복합체를 형성하여 상기 흡착패드에 유체연동하는 다공성막으로 모세관 이동시키는 단계와,
상기 제 1 측방 유동 분석모듈과 제 2 측방 유동 분석모듈 모두의 검출라인과 교정라인에 시분해 형광 검사기를 이용하여 광조사하는 단계와,
상기 검출라인과 교정라인의 제 1 노로바이러스 유전자군과 제 2 노로바이러스 유전자군에 대한 각각의 형광 신호를 비교하여 샘플시료의 제 1 및 제 2 유전자군 노로바이러스 각각을 독립적으로 검출하는 단계를 포함하는 노로바이러스 측정방법.In the norovirus detection measuring method using the norovirus lateral flow analyzer using the time-resolved fluorescence analysis according to any one of claims 1 to 6,
Preparing a test sample comprising the GI and GII gene groups, and injecting the prepared test sample into a sample pad of a lateral flow analyzer;
While moving to the adsorption pad adjacent to the sample pad, a fluorescent material-labeled first norovirus gene group complex and a fluorescent material-labeled second norovirus gene group complex are formed to form a capillary tube with a porous membrane in fluid communication with the adsorption pad. moving step,
Light irradiating the detection line and the calibration line of both the first lateral flow analysis module and the second lateral flow analysis module using a time-resolved fluorescence tester;
Comprising the step of independently detecting each of the first and second gene group norovirus of the sample sample by comparing the respective fluorescence signals for the first norovirus gene group and the second norovirus gene group in the detection line and the calibration line Norovirus measurement method. 제 7 항에 있어서,
상기 항체는 형광표지와 결합물질에 각각 결합하며, 상기 형광표지는 유로피움이며, 상기 결합물질은 바이오틴을 사용하며, 상기 검출라인에는 상기 결합물질과 특이결합하는 스트렙타아비딘이 고정된 노로바이러스 측방 유동 면역 분석방법.8. The method of claim 7,
The antibody binds to a fluorescent label and a binding material, respectively, the fluorescent label is europium, biotin is used as the binding material, and streptavidin specifically binding to the binding material is immobilized on the detection line. Flow immunoassay method. 제 7 항에 있어서,
GI 유전자군 노로바이러스의 항원 농도가 0 내지 100pg/ml인 경우와, GII 유전자군 노로바이러스의 항원 농도가 0 내지 10pg/ml인 경우에 대해서 GI 유전자군 노로바이러스와 GII 유전자군 노로바이러스의 검출이 가능한 노로바이러스 측방 유동 면역 분석방법.8. The method of claim 7,
When the antigen concentration of the GI genotype norovirus was 0 to 100 pg/ml and the antigen concentration of the GII genotype norovirus was 0 to 10 pg/ml, the detection of the GI genotype norovirus and the GII genotype norovirus was Possible norovirus lateral flow immunoassay method.
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