KR102308186B1 - 저 내독소 키토산의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 저 내독소 알카리성 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물을 제조하기 위한 방법과, 또한 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 그리고 키토산 파생물을 제조하기 위한 방법과, 이러한 방법들의 산물에 관한 것이다.
상기 방법은, 혼합물을 형성하기 위해 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물을 알카리 용액에 접촉시키고; 상기 혼합물을 1시간 미만의 기간 동안 유지하고, 선택적으로 상기 혼합물을 건조시키는 것으로 구성된다.
상기 저 내독소 알카리 키토산은 기타 유용한 키토산 기반 제품의 제조에 사용될 것이다.

Description

저 내독소 키토산의 제조방법{Process for producing low endotoxin chitosan}

본 발명은, 저 내독소 알칼리 키토산을 제조하는 방법과, 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 그리고 키토산 파생물을 제조하는 방법과, 이러한 방법들의 산물에 관한 것이다.

키토산은 출혈 조절에 사용하기 위한 지혈제 물질의 제조에 특히 유용하다.

키토산은 갑각류 가공(shellfish processing)으로부터의 고체 폐기물(solid waste)의 파생물(derivative)이며, 균류 배양(fungus culture)으로부터 추출될 수 있다.

키토산은 비수용성 양이온 고분자 물질(water insoluble cationic polymeric material)이다.

키토산을 지혈제 물질로 사용하기에 앞서, 흔히 우선 수용성 염으로 전환된다.

이 방법은, 상기 키토산 염은 혈액의 흐름을 억제하는 겔을 형성하도록 혈액 내에서 가용성이다.

키토산은 체내에서 쉽게 분해되기 때문에, 키토산 염은 여기에 기재된 적용을 위해 이상적으로 적합하다.

키토산은 효소 라이소자임(enzyme lysozyme)에 의해 글루코사민(glucosamine)으로 전환되고, 이에 따라 신체로부터 자연적으로 배출된다.

신체로부터 키토산을 제거할 필요가 없다.

게다가, 키토산 염은 약간의 항박테리아 특성을 나타내며, 이러한 이들의 사용은 감염의 위험을 저감시킨다.

출혈 조절에 사용하기 적합한 지혈제 물질의 제조에 키토산을 사용하기 위해서는, 상기 키토산이 충분히 낮은 내독소 농도를 가지는 것을 보장할 필요가 있다.

내독소는 그람음성균(gram-negative bacteria)의 외막(outer membrane) 표면에 존재하는 지질다당류(lipopolysaccharide)이다.

내독소는 포유동물, 특히 인간에게 매우 유독하며, 물질로부터 제거하기가 극히 어렵다.

내독소는 일반적으로 발견되지 않는 혈류(bloodstream) 또는 기타 조직(tissue) 내로 방출되었을 때, 발열하게 될 것이다.

따라서, 내독소는 약학적으로 허용 가능한 제품으로부터 반드시 제거되어야만 한다.

발열 인자, 특히 내독소를 제거하거나 파괴하는 처치는 '항발열(depyrogenation)' 방법이라 불린다.

내독소를 함유한 물질의 항발열을 위한 기법은, 이온 교환 크로마토그래피(ion exchange chromatography), 초미세여과(ultrafiltration), 증류(distillation), 그리고 내독소 파괴를 목표로 하는 다양한 화학적 공정을 포함한다.

WO 2008063503은 아래의 단계를 포함하여 키토산으로부터 내독소를 제거하는 방법에 관한 것이다.

a) 살균 환경 내에서 살균 무발열인자(pyrogen-free) 장비 및 물질을 사용하고;

b) 내독소 함유 키토산을 24시간 동안 팽창시키고;

c) 1kg/25L에서 1.5kg/25L의 상기 키토산을 0.01M에서 4.0M의 수산화물 베이스(hydroxide base)에서 용해시키고;

d) 최종 키토산 베이스 용액을 지속적으로 교반하고;

e) 상기 용액을 교반하면서 60~100℃ 사이로 45분에서 4시간 동안 가열하고;

f) 상기 용액을 10배 체적까지의 초고순도 무내독소수(ultra-pure endotoxin-free water)로 헹구고;

g) 상기 용액을 6.8에서 7.5사이의 pH로 중화시키고;

h) 초고순도 저 내독소 키토산 슬러리(slurry)를 형성하고, 무내독소 폐쇄계(closed system)로 보내며;

i) 상기 슬러리로부터 과잉수(excess water)를 제거한다.

이는 복잡하고 비용이 높은 공정이며, 특히 살균 장비를 필요로 하고, 상기 용액을 10배 체적의 무내독소수로 헹굴 필요가 있다.

US 2006293509는 아래와 같이 저 내독소를 가진 수용성 키토산을 제조하는 방법에 관한 것이다.

(a) 1시간을 초과하는 시간의 첫 번째 기간 동안 비수용성 키토산을 기본 용액에 접촉시키고;

(b) 잔류 기본 용액을 제거하기 위하여, 바람직하게는 무내독성수로 상기 비수용성 키토산을 헹구고;

(c) 상전이제(phase transfer agent)를 함유한 반응 용액 내에서 상기 비수용성 키토산을 부분적으로 아세틸화하고;

(d) 계면활성제를 함유하며 대략 7.0에서 대략 7.4의 pH를 가진 수용액 내에서 부분적으로 아세틸화된 상기 수용성 키토산을 용해시키고;

(e) 물에 섞이는 용제를 상기 수용액에 첨가하고, 상기 수용액/물에 섞이는 용제의 혼합물로부터 저 내독소 함량을 가진 수용성 키토산의 석출(precipitation)을 야기하도록, 추가로 상기 수용액의 pH를 적어도 8.0의 pH로 조정하고;

(f) 선택적으로 이소프로판올(isoporpanol)과 같은 비용제 내에서 세척한다.

그러나, 이 방법은 복잡하면서 값 비싸고, 바람직하게는 많은 양의 무내독소수 또는 기타 액체의 사용을 포함하고 있다.

상기 방법은 또한 상전이제의 사용을 필요로 하며, 몇 시간에 걸쳐 수행된다.

TW 593342는 아래와 같이 키토산 내의 내독소를 저감시키는 방법에 관한 것이다.

(a) 내독소를 함유한 키토산을 수용액에 용해시키며;

(b) 상기 내독소의 함량이 감소된 비용성(insoluble) 고체와 수용액을 형성하기 위하여, 상기 수용액을 계면활성제에 접촉시키고;

(c) 상기 수용액으로부터 상기 고체를 분리하기 위하여 고액 분리 수단(solid/liquid separation mean)을 사용한다.

그러나, 이 방법은 비용성 고체를 만들기 위하여 상기 용해된 키토산과 반응하기 위한 계면활성제를 필요로 한다.

상기 최종적인 고체는 키토산과 계면활성제의 혼합물이거나 상기 키토산과 계면활성제 사이의 반응 산물일 것이다.

국제 공개특허공보 WO 2008/063503 미국 특허출원공보 US 2006/293509 대만 등록특허공보 TW 593342

본 발명은 앞에 언급한 어려움을 완화시키기 위한 것을 목적으로 한다.

본 발명의 첫 번째 관점에 따르면,

(a) 혼합물을 형성하기 위하여 키토산(chitosan), 키틴(chitin), 키토산 파생물(chitosan derivative) 또는 키틴 파생물(chitin derivative)을 알칼리 용액에 접촉시키는 단계와;

(b) 상기 혼합물을 1시간 미만의 기간 동안 유지하는 단계;

로 구성되어, 저 내독소 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명은, 저 내독소 알칼리 키토산을 제조하는 방법과, 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 그리고 키토산 파생물을 제조하는 방법과, 이러한 방법들의 산물에 관한 것이다.

도 1은 다른 매체 내에서 키토산 제품의 점도에 대한 산성염 부산물의 다른 농도의 효과를 나타내는 선도이다.

본 발명의 첫 번째 관점에 따르면,

(a) 혼합물을 형성하기 위하여 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물을 알칼리 용액에 접촉시키는 단계와;

(b) 상기 혼합물을 1시간 미만의 기간 동안 유지하는 단계;

로 구성되어, 저 내독소 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명의 상기 방법은 상기 혼합물을 건조시키는 (c)단계가 추가 구성될 수 있다.

본 발명의 상기 방법은 저 내독소 농도를 가진 알칼리 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물을 얻는 효과적인 방법을 제공한다.

유리하게는, 상기 방법은 세척 단계, 헹굼 단계, 계면활성제나 상전이제의 사용, 살균 장비 및/또는 무내독소수의 사용을 필요로 하지 않는다.

게다가, 특별한 공기 여과나 살균 조건 또한 필요로 하지 않는다.

바람직하게는 본 발명의 상기 방법은 상기 키토산을 아세틸화하는 단계를 포함하지 않는다.

더 나아가, 본 발명의 상기 방법은 무내독소 설비를 사용하지 않는다.

이는, 이러한 설비를 필요로 하는 방법에 비해 공정의 비용을 저감시키는데 특히 유익하다.

여기에서 '키토산 파생물'이란 단어는, 소망하는 탈아세틸화의 다른 백분율을 가질 수 있는 부분적으로 탈아세틸화한 키틴을 의미한다.

일반적으로, 본 발명에 사용하기에 적합한 상기 부분적으로 탈아세틸화한 키틴은 대략 50% 초과, 보다 일반적으로는 대략 75% 초과, 그리고 가장 일반적으로는 대략 85%를 초과하는 탈아세틸화 정도를 갖는다.

또한 '파생물'이란 상기 단어는 여기에서 키토산 또는 키틴과 기타 화합물의 반응 산물이다.

이에 한정되는 것은 아니지만 이러한 반응 산물은, 카르복시 메틸 키토산(carboxy methyl chitosan), 하이드록실 부틸 키틴(hydroxyl butyl chitin), N-아실 키토산(N-acyl chitosan), O-아실 키토산(O-acyl chitosan), N-알킬 키토산(N-alkyl chitosan), O-알킬 키토산(O-alkyl chitosan), N-알킬리덴 키토산(N-alkylidene chitosan), O-설포닐 키토산(O-sulfonyl chitosan), 황산 키토산(sulfated chitosan), 인산 키토산(phosphorylated chitosan), 질산 키토산(nitrated chitosan), 알칼리키틴(alkalichitin), 알칼리키토산(alkalichitosan), 또는 키토산을 지닌 금속 킬레이트(metal chelates) 등을 포함한다.

본 발명의 첫 번째 관점은 저 내독소 키토산, 키틴 또는 그 파생물을 제조하기 위한 방법을 제공하지만, 오직 편의와 실예를 보여줄 목적을 위해 키토산에 관해서만 이하에서 설명한다.

상기 키토산은 식용 등급, 의료용 등급 또는 약학적 등급 키토산과 같이 상업적으로 사용 가능한 키토산일 것이다.

따라서 본 발명의 상기 방법은, 상업적으로 사용 가능한 키토산으로부터 저 내독소 알칼리 키토산을 제공하기 위하여 사용할 수 있을 것이다.

이는, 키토산 제조 방법의 일부로 내독소가 제거되거나 감소되는 확실한 공정과는 다르다.

유리하게는, 본 발명의 상기 방법은, 내독소 농도에 의해 의학 분야에 적합하지 않게 제조된 키토산으로부터 저 내독소 알칼리 키토산을 제공하는 데 사용될 수 있다.

여기에서 사용된 알칼리 키토산이란 단어는 pH 7.5를 초과하는 pH 값을 가진 키토산 조성물을 나타낸다.

여기에서 사용된 알칼리 용액이란 단어는 pH 7.5를 초과하는 pH 값을 가진 용액을 의미한다.

상기 내독소의 몰중량은 크게 변화할 수 있기 때문에, 내독소 농도는 물질의 그램 당 내독소 단위(EU)로 측정된다.

내독소 농도의 측정은 참고 내독소(reference endotoxin)의 특정 양(specific quantity)에 대한 내독소 수준의 양을 정하는 것(quantification)이다.

예를 들어, 본 발명에 있어서, 내독소의 농도는 키토산의 그램 당 내독소 단위(EU)로 측정된다.

여기에서 사용된 '저 내독소'란 단어는 키토산의 그램 당 50 내독소 단위(EU) 미만의 내독소 농도를 나타낸다.

따라서 본 발명의 상기 방법은 50EU/g 미만의 내독소 농도를 가진 알칼리 키토산을 제조하는데 적합한다.

바람직하게, 최종 알칼리 키토산은 30EU/g 미만, 보다 바람직하게는 20EU/g 미만, 보다 바람직하게는 15EU/g 미만, 보다 더 바람직하게는 10EU/g 미만, 그리고 가장 바람직하게는 5EU/g 미만의 내독소 농도를 가진다.

알칼리 용액의 낮은 농도가 본 방법에 바람직하다는 것을 알 수 있었다.

상기 방법에 사용된 상기 알칼리 용액의 농도는 대략 0.01M에서 대략 1M까지일 것이다.

바람직하게는, 상기 알칼리 용액의 농도는 대략 1M 미만이다.

보다 바람직하게는, 상기 알칼리 용액의 농도는 대략 0.02M에서 0.25M까지, 그리고 보다 더 바람직하게는 상기 알칼리 용액의 농도는 대략 0.04M에서 0.06M까지, 일반적으로 0.05M이다.

알칼리 용액의 농도는 대략 0.01M, 0.05M, 0.10M, 0.15M, 0.20M 0.25M, 0.30M, 0.35M, 0.40M, 0.45M, 0.50M, 0.55M, 0.60M, 0.65M, 0.70M, 0.75M, 0.80M, 0.85M, 0.90M 또는 0.95M까지 될 수 있다.

좋은 결과가 알칼리 용액 0.1M의 농도에서 관찰되었다.

몇몇 실시예에서, 키토산에 대한 상기 알칼리 용액의 양은, 키토산 대략 1에 대하여 알칼리 용액 대략 10의 비율로부터 키토산 대략 10에 대하여 알칼리 용액 대략 1의 비율까지의 범위일 수 있다.

바람직하게, 키토산에 대한 상기 알칼리 용액의 양은, 알칼리 용액 대략 1에 대하여 키토산 대략 2의 비율이며, 보다 바람직하게는 알칼리 용액 대략 1에 대하여 키토산 대략 1의 비율이다.

상기 알칼리 용액은 수산화금속(metal hydroxide), 탄화금속(metal carbonate), 이황화금속(metal bisulphite), 과규산화금속(metal persilicate), 짝염기(conjugate base) 및 수산화암모늄(ammonium hydroxide) 단독 또는 조합으로부터 선택된 알칼리 또는 알칼리성 지구 성분(earth component)으로 구성될 수 있다.

적합한 금속은 나트륨(sodium), 칼륨(potassium), 칼슘, 또는 마그네슘을 포함한다.

바람직하게는, 상기 알칼리 성분은 수산화나트륨(sodium hydroxide), 수산화칼륨(potassium hydroxide) 또는 탄산나트륨(sodium carbonate)이다.

일반적으로, 수산화나트륨이 사용된다.

상기 알칼리 용액은 해당 분야에서 알려진 임의의 적합한 수단에 의해 상기 키토산과 접촉할 것이다.

예를 들어, 상기 알칼리 용액은 상기 키토산에 분무(spray)되거나, 상기 키토산이 상기 알칼리 용액에 혼합될 수 있다.

바람직하게는, 키토산에 접촉한 알칼리의 더 나은 분포이다.

바람직하게는, 상기 키토산은 상기 알칼리 용액에 혼합된다.

낮은 몰중량에서, 상기 키토산은 상기 알칼리 용액에 완전히 또는 부분적으로 용해될 것이다.

상기 키토산은 (a)단계에서 상기 알칼리 용액과 대략 30분까지, 보다 바람직하게는 대략 10분 동안 혼합될 것이다.

몇몇 실시예에서, 상기 키토산은 상기 알칼리 용액과 30분을 초과하는 동안 혼합될 것이다.

몇몇 실시예에서, 상기 키토산은 상기 알칼리 용액에 용해되지 않는다.

몇몇 실시예에서, 상기 키토산은 상기 알칼리 용액 내에서 팽창하지 않는다.

몇몇 실시예에서, 상기 알칼리 용액은 상기 키토산을 용해시키거나 팽창시키지 않고 상기 키토산을 적신다.

몇몇 실시예에서, 키토산과 알칼리 용액의 상기 혼합물은 (b)단계의 기간 동안 간헐적으로 교반될 것이다.

키토산과 알칼리 용액의 상기 혼합물은 충분한 내독소가 파괴되는 시간의 기간 동안 유지된다.

키토산과 알칼리 용액의 상기 혼합물은 1시간 미만의 기간 동안 유지된다.

이후 공정 이전에 상기 키토산과 알칼리를 1시간 미만 시간의 짧은 기간 동안 유지하는 것이, 상기 최종 알칼리 키토산 내에서 바람직하게 낮은 내독소 농도의 결과를 가져온다는 것을 발견하였다.

상기 혼합물이 1시간 미만 동안 유지되었을 때, 적합하게 낮은 내독소 농도가 관찰되었다.

처리 관점으로부터, 상기 키토산과 알칼리 혼합물이 유지되는 시간이 짧을수록 더 좋다.

상기 키토산을 상기 알칼리 용액에 지속적으로 혼합할 필요 없이, 상기 혼합물이 유지될 수 있다는 것은, 본 발명의 상기 방법의 이점이다.

몇몇 실시예에서, 상기 혼합물은 60분, 55분, 50분, 45분, 40분, 35분, 30분, 25분, 20분, 15분, 10분 또는 5분 미만의 기간 동안 유지될 것이다.

바람직하게는, 상기 혼합물은 3분 미만, 보다 바람직하게는 2분 미만, 그리고 가장 바람직하게는 1분 미만의 기간 동안 유지된다.

바람직하게는, 예를 들어 (c)건조 단계와 같이 공정의 이후 단계를 위해 상기 혼합물을 준비하는데 소요된 시간의 기간 동안만 상기 혼합물이 (b)단계에 유지된다.

만약 상기 혼합물을 1시간 내에 건조한다면 시간 경과(대략 1주에서 3주까지)에 따라 상기 내독소 농도가 낮아지는 것이 관찰되었다.

(a)단계에서 키토산을 알칼리 용액에 접촉한 후 즉시 상기 혼합물이 건조되었을 때, 좋은 결과가 관찰되었다.

이러한 맥락에서, 즉시란 (c)건조 단계를 위해 상기 혼합물을 준비하는데 소요되는 시간의 기간 동안만 상기 혼합물이 (b)단계에서 유지되는 것을 의미한다.

일반적으로, 이는 대략 30초 미만, 바람직하게는 20초 미만, 그리고 가장 바람직하게는 10초 미만이다.

따라서, 본 발명의 관점에 따르면,

(a) 혼합물을 형성하기 위하여 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물을 알칼리 용액에 접촉시키는 단계와;

(b) 상기 혼합물을 즉시 건조하는 단계;

로 구성되어 저 내독소 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물을 제조하는 방법을 제공한다.

이러한 방법에서, 공정의 다음 단계를 위해 준비하는데 소요되는 시간 동안 상기 혼합물이 (b)단계에서 유지된다.

예를 들어, 상기 혼합물은 건조를 위한 준비에 소요되는 시간 동안 (b)단계에서 유지될 것이다.

이후 상기 혼합물은 (c)건조 단계에서 건조될 것이다.

상기 혼합물은 실온 및 실압(room temperature and pressure) 하에서 (b)단계에 있도록 유지될 것이다.

여기에서 실온 및 실압이란 대략 20~25℃의 온도와 대략 1기압(atm)의 압력을 의미한다.

이롭게는, 상기 혼합물은 살균 환경 내에 유지될 필요가 없다.

바람직하게는 상기 혼합물은 청정 용기 내에 저장된다.

상기 혼합물은 불활성 분위기 하에 저장될 것이다.

상기 혼합물은 방부제가 추가 구성될 수 있다.

이롭게는, 예를 들어, 상기 혼합물이 장기적인 기간 동안 유지될 때, 상기 방부제는 미생물이 발생하여 성장하게 되는 위험성을 제거할 것이다.

상기 방부제는 생체에 적합하고 알칼리 환경 내에서 사용하기에 적합한 임의의 방부제일 것이다.

적합한 방부제는 은 이온, 아연 이온, 클로로헥시딘(chlorohexadine), 또는 이들의 조합을 포함한다.

상기 건조 단계는 해당 분야에 알려진 임의의 통상적인 건조 수단에 의해 수행될 것이다.

바람직하게, 상기 건조 단계는 오븐(oven) 내에서 또는 공기 건조기를 통한 여과에 의해 수행된다.

또한, 상기 건조 단계를 위한 특별한 살균 설비를 필요로 하지 않는다.

상기 건조 단계에서 상기 혼합물이 한번 건조되면, 상기 건조 혼합물의 내독소 수준은 시간이 경과하여도 현저하게 증가하지는 않는다는 것을 발견하였다.

사실, 위에서 언급한 바와 같이, 상기 내독소 수준은 시간 경과에 따라 낮아질 수 있다는 것이 관찰되었다.

이는 상기 혼합물이 추가 공정 이전의 시간의 기간 동안 저장될 수 있다는 점에 유익하다.

따라서 50EU/g 미만의 내독소 농도를 가진 저 내독소 알칼리 키토산을 제공한다.

상기 저 내독소 알칼리 키토산은 비수용성일 것이다.

낮은 몰중량에서, 상기 저 내독소 알칼리 키토산은 약간의 수용성을 나타낼 것이다.

본 발명의 추가적인 관점에 따르면, 여기에 기재된 바와 같은 상기 방법에 의해 얻을 수 있는 저 내독소 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물을 제공한다.

본 발명의 추가적인 관점에 따르면, 50EU/g 미만의 내독소 농도로 구성되는 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물을 제공한다.

바람직하게는 상기 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물은 30EU/g 미만, 바람직하게는 20EU/g 미만, 보다 바람직하게는 15EU/g 미만, 보다 더 바람직하게는 10EU/g 미만 그리고 가장 바람직하게는 5EU/g 미만의 내독소 농도를 갖는다.

상기 저 내독소 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물은 대략 1M 이하의 농도를 갖는 알칼리로 구성될 것이다.

바람직하게는, 상기 농도는 대략 0.5M 이하, 보다 바람직하게는 대략 0.25M 이하, 그리고 보다 더 바람직하게는 대략 0.2M 이하, 그리고 가장 바람직하게는 대략 0.1M 이하이다.

상기 저 내독소 알칼리 키토산은, 예를 들어, 파생물이나 혼성 중합체(copolymer)와 같은 기타 키토산 제품의 제조나, 저 몰중량 키토산이나 키토산 올리고당의 제조에서 중간재로 사용될 수 있다.

상기 저 내독소 알칼리 키토산은 또한, 키토산 기반 섬유(fiber), 직물(fabric), 코팅, 필름, 겔(gel), 용액, 시트 또는 폼(foam)과 같은, 키토산이나 파생물 또는 혼성 중합체의 다른 형태의 제조를 위한 원료로 유용할 것이다.

특히, 상기 저 내독소 알칼리 키토산은 저 내독소 농도를 가지며, 중성 키토산과 키토산 염 그리고 기타 키토산 파생물, 예를 들어, 카르복시메틸 키토산(carboxymethyl chitosan), 하이드록시에틸 키토산(hydroxyethyl chitosan), 아실 키토산(acyl chitosan), 알킬 키토산(alkyl chitosan), 설포닐 키토산(sulphonyl chitosan), 포스포릴레이트 키토산(phosphorylated chitosan), 알킬리덴 키토산(alkylidene chitosan), 금속 킬레이트(metal chelates), 키토산 클로로라이드(chitosan chloride), 젖산 키토산(chitosan lactate), 키토산 아세테이트(chitosan acetate), 키토산 말레이트(chitosan malate), 키토산 글로코네이트(chitosan gluconate)을 포함하는 기타 유용한 키토산 제품를 제조하는 데 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 추가적인 관점에 따르면, 앞서 설명한 상기 방법에 의해 제조된 알칼리 키토산을 산에 접촉시키는 단계로 구성되는, 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제조하는 방법을 제공한다.

상기 방법은, 저 내독소 농도를 가지며, 의학적으로 유용한 중성 키토산, 키토산 염 또는 기타 키토산 파생물을 제공할 수 있다.

상기 알칼리 키토산을 상기 산에 접촉시키는 상기 단계는, 저 내독소 알칼리 키토산을 제조하기 위한 방법에 있어서 상술한 상기 (c)건조 단계 이전에 수행될 것이다.

이와 반대로, 상기 알칼리 키토산을 상기 산에 접촉시키는 상기 단계는, 저 내독소 알칼리 키토산을 제조하기 위한 방법에 있어서 상술한 상기 (c)건조 단계 이후에 수행될 수 있다.

이러한 실시예에서, 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제조하기 위한 방법은, 상기 알칼리 키토산을 산에 접촉시키는 단계 이후에 추가적인 건조 단계가 구성될 수 있다.

상기 건조 단계는 해당 분야에 알려진 임의의 통상적인 건조 수단에 의해 수행될 수 있다.

바람직하게, 상기 건조 단계는 오븐 내에서 또는 공기 건조기를 통한 여과에 의해 수행된다.

상기 산은 해당 분야에서 알려진 임의의 적합한 수단에 의해 상기 알칼리 키토산과 접촉할 수 있다.

예를 들어, 상기 산은 상기 알칼리 키토산에 분무되거나, 상기 알칼리 키토산이 상기 산에 혼합될 수 있다.

바람직하게는, 상기 알칼리 키토산은 상기 산과 혼합된다.

여기에서 중성 키토산은 대략 pH 6.5와 대략 pH 7.5 사이, 그리고 바람직하게는 대략 pH 7의 pH 값을 가진 키토산 조성물을 의미하는 것을 나타낸다.

따라서, 중성 키토산을 제조하기 위해서는, 상기 알칼리 키토산은 6.5에서 7.5 사이의 pH를 가진 중성 용액을 형성하기 위하여 적절한 체적 및/또는 농도의 산과 혼합될 것이다.

상기 알칼리 키토산을 중화시키는데 필요한 상기 산의 체적 및/또는 농도는 상기 알칼리 키토산의 pH에 의존할 것이다.

이와 다르게, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제조하기 위해서는, 상기 알칼리 키토산은 중성 키토산을 제조하는데 요구되었던 것을 초과하는 체적 및/또는 농도의 산에 혼합될 수 있다.

본 발명에 사용하기에 적합한 산은, 유기산(organic acid), 카르복시산(carboxylic acid), 지방산(fatty acid), 아미노산(amino acid), 루이스산(lewis acid), 일염기산(monoprotic acid), 이염기산(diprotic acid), 다염기산(polyprotic acid), 핵산(nucleic acid) 그리고 무기산(mineral acid) 단독 또는 조합으로부터 선택될 수 있다.

적합한 유기산은, 아세트산(acetic acid), 타르타르산(tartaric acid), 시트르산(citric acid), 아스코르브산(ascorbic acid), 아세틸살리실산(acetylsalicylic acid), 글루콘산(gluconic acid) 그리고 젖산(lactic acid) 단독 또는 조합으로부터 선택될 수 있다.

적합한 지방산은, 미리스트올레산(myristoleic acid), 팔미톨레산(palmitoleic acid), 사피엔산(sapienic acid), 올레산(oleic acid), 엘라이드산(elaidic acid), 박센산(vaccenic acid), 리놀레산(linoleic acid), 리노엘라이드산(linoelaidic acid), α-리놀렌산(α-Linolenic acid), 아라키돈산(arachidonic acid), 에이코사펜타엔산(eicosapentaenoic acid), 에루크산(erucic acid), 도코사헥사엔산(docosahexaenoic acid), 카프릴산(caprylic acid), 카프르산(capric acid), 라우르산(lauric acid), 미리스트산(myristic acid), 팔미트산(palmitic acid), 스테아르산(stearic acid), 아라키딘산(arachidic acid), 베헨산(behenic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 세로틴산(cerotic acid) 단독 또는 조합으로부터 선택될 수 있다.

적합한 아미노산은, 히스티딘(histidine), 라이신(lysine), 아스파르트산(aspartic acid), 글루탐산(glutamic acid), 글루타민(glutamine), 글리신(glycine), 프롤린(proline), 타우린(taurine) 단독 또는 조합으로부터 선택될 수 있다.

적합한 무기산은, 염산(hydrochloric acid), 황산(sulphuric acid) 그리고 질산(nitric acid) 단독 또는 조합으로부터 선택될 수 있다.

바람직하게는, 상기 중화를 위해 선택된 상기 산은 염산이다.

상기 산은 대략 0.001M의 산으로부터 최대 허용 농도의 산까지의 농도를 가질 것이다.

예를 들어, 황산에 대한 일반적인 최대 농도는 대략 98% 황산이다.

상기 산은 대략 0.01M에서 5M까지, 0.01M에서 3M까지, 또는 0.1M에서 2M까지의 농도를 가질 것이다.

바람직하게는, 상기 산은 대략 1M의 농도를 갖는다.

상기 산의 농도는 대략 0.01M, 0.05M, 0.10M, 0.15M, 0.20M, 0.25M, 0.30M, 0.35M, 0.40M, 0.45M, 0.50M, 0.55M, 0.60M, 0.65M, 0.70M, 0.75M, 0.80M, 0.85M, 0.90M, 0.95M 또는 1.0M까지일 수 있다.

상기 산은, 상기 산과 비용제(non-solvent)로 구성된 액상 산(acid liquor)으로 존재할 수 있다.

상기 비용제는 키토산이 녹지 않는 임의의 용제일 수 있다.

일반적인 비용제는 젖산에틸(ethyl lactate), 아세트산에틸(ethyl acetate), 아세트산메틸(methyl acetate), 에탄올(ethanol), 아세톤(acetone) 또는 그 혼합물을 포함한다.

바람직하게는, 상기 비용제는 아세트산에틸 또는 에탄올로 구성된다.

보다 바람직하게는, 상기 비용제는 물에서 80:20 에탄올로 구성된다.

유익하게는, 물에 대한 에탄올의 80:20 혼합물로 구성된 비용제를 사용하여, 상기 반응이 빠른 속도로 진행된다는 것을 관찰하였다.

액상 산에 대한 키토산의 상기 비율은 대략 5:1로부터 대략 1:5까지일 것이다.

바람직하게는, 액상 산에 대한 키토산의 상기 비율은 대략 2:1이다.

몇몇 실시예에서, 상기 저 내독소 알칼리 키토산은, 대략 30분 이하 동안, 보다 바람직하게는 대략 10분 이하 동안, 그리고 가장 바람직하게는 5분 이하 동안 상기 산과 혼합될 것이다.

이후 상기 혼합물이 건조됨에 따라, 상기 반응의 발생이 허용될 것이다.

알칼리 키토산과 산의 상기 혼합물로부터 얻은 상기 제품은 산성염(acid salt)을 함유할 것이다.

바람직하게는, 형성된 상기 산성염이 생체에 적합한 것을 보장하도록 상기 알칼리 용액과 산이 선택된다.

예를 들어, 상기 알칼리 용액은 수산화나트륨으로 구성될 수 있으며, 상기 산은 염산으로 구성될 수 있다.

이러한 실시예에서, 상기 산성염은 생체에 적합한 염인 염화나트륨이 될 것이다.

상기 산성염은 상기 알칼리 키토산과 상기 산 사이의 반응 부산물로 형성된다.

상기 제품 내에 산성염의 존재는 상기 최종 키토산 제품의 유용성에 영향을 미칠 수 있는 것을 발견하였다.

예를 들어, 키토산은, 물에서 보다 염류 용액(saline solution) 내에서 더 낮은 정도로 엉기고, 두 배 농도의 염류 용액 내에서 보다 더 낮은 정도로 엉기는 것을 관찰하였다.

여기에서 표현된 두 배 농도의 염류 용액은 1.8%의 염화나트륨의 양을 갖는 것으로 생각될 것이다.

결과적으로, 상기 최종 키토산 제품 내에 가능한한 낮은 양의 산성염을 갖는 것이 바람직하며, 이상적으로는, 산성염의 수준이 상기 키토산 제품의 효과에 대한 차이를 조금 또는 실질적으로 없도록 만드는 것이 바람직할 것이다.

놀랍게도, 0.25M 미만, 바람직하게는 0.01M에서 0.2M까지, 그리고 보다 바람직하게는 대략 0.01M에서 대략 0.1M까지와 같이 낮은 농도를 가진 알칼리 용액을 사용하는 것은, 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제조하기 위한 이후의 공정 내에서 생산되는 산성염 부산물을 감소시키면서, 바람직한 저 내독소 농도를 생성하는 결과를 낳는다는 것 또한 발견하였다.

유익하게는, 적은 산성염 부산물은, 많은 양의 산성염을 함유한 제품보다 사용 시 개선된 엉김을 가지는 키토산 제품의 결과를 낳는 것을 알았다.

본 발명의 상기 방법은, 상기 키토산 제품을 세척하거나 헹굴 필요가 없이 적절하게 낮은 양의 산성염을 지닌 키토산 제품을 제공할 수 있다.

이는 또한 세척 또는 헹굼 단계에서 무내독소수의 사용을 필요로 하지 않는다는 이점이 더해진다.

여기에 기재된 바와 같이 낮은 농도의 알칼리 용액을 사용하는 것은, 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제조할 때, 상기 키토산의 점도 저감을 줄이게 된다는 것 또한 알게되었다.

여기에서 알칼리의 낮은 농도는 대략 0.01M에서 대략 1M까지, 바람직하게는 1M 미만, 보다 바람직하게는 대략 0.02M에서 대략 0.25M까지를 의미한다.

몇몇 실시예에서, 상기 알칼리 농도는 0.02M에서 0.1M까지, 바람직하게는 0.05M에서 0.1M까지일 것이다.

대략 0.1M의 알칼리 농도를 사용하여 양호한 결과가 관찰되었다.

몇몇 실시예에서, 상기 알칼리 농도는 앞서 언급한 것과 같을 수 있다.

따라서 유익하게는, 상기 방법에서 낮은 농도의 알칼리 용액을 사용하는 것은 상기 키토산에게 적은 손상을 준다.

따라서, 점도에 오직 최소 변화만을 야기시키면서, 키토산으로부터 내독소를 제거하는 것이 가능하다.

상기 방법 내에서 상기 키토산의 점도를, 대략 25% 미만, 바람직하게는 대략 15% 미만, 그리고 보다 바람직하게는 대략 10% 미만으로 저감시키는 것이 바람직하다.

저 내독소 중성 키토산을 제공하는 상기 방법에서, 상기 제품은 기타 키토반 기반 제품의 생산에서 중간재로 사용하기에 적합하다.

한 특별한 사용이 키토산 염의 생산이며, 이 키토산 염의 흡수 특성은 이를 출혈 제어를 위한 지혈제 제조에 사용하기 적합하도록 만든다.

상기 키토산 염은 수용성인 것이 바람직하다.

따라서, 본 발명의 또 다른 실시예에서, 여기에 기재된 상기 방법에 의해 제조된 저 내독소 중성 키토산을 산에 접촉시킴으로써 저 내독소 키토산 염이 제조될 수 있을 것이다.

상기 산은 소망하는 키토산 염을 제공하기에 적절한 임의의 산일 것이다.

예를 들어, 키토산 아세테이트가 요구된다면, 아세트산이 사용될 것이고; 만약 키토산 숙시네이트(chitosan succinate)가 요구된다면, 숙신산(succinic acid)이 사용될 수 있는 등이다.

여기에 기재된 임의의 산은, 저 내독소 키토산 염을 제조하기 위한 본 방법에 사용될 것이다.

저 내독소 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제조하기 위한 상기 방법은, 저 내독소 중성 키토산과 산의 상기 혼합물을 건조시키는 단계가 추가 구성될 수 있다.

상기 건조 단계는 해당 분야에 알려진 임의의 통상적인 건조 수단에 의해 수행될 것이다.

바람직하게, 상기 건조 단계는 오븐 내에서 또는 공기 건조기를 통한 여과에 의해 수행된다.

따라서 50EU/g 미만의 내독소 농도를 가진 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제공한다.

상기 저 내독소 중성 키토산은 비수용성일 것이다.

상기 저 내독소 키토산 염은 수용성일 것이다.

본 발명의 다른 관점에 따르면, 여기에 기재된 임의의 상기 방법들에 의해 얻을 수 있는 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제공한다.

본 발명의 다른 관점에 따르면, 50EU/g 미만의 내독소 농도로 구성되는 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물을 제공한다.

상기 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물은 30EU/g 미만, 바람직하게는 20EU/g 미만, 보다 바람직하게는 15EU/g 미만, 보다 더 바람직하게는 10EU/g 미만, 그리고 가장 바람직하게는 5EU/g 미만의 내독소 농도를 가질 것이다.

본 발명의 상기 저 내독소 키토산 염은 혈액의 흐름을 억제하기 위한 지혈제로 사용하기에 적합하다.

따라서, 본 발명의 다른 관점에 따르면, 혈액의 흐름을 억제하기 위한 지혈제로 사용하기 위하여 여기에 기재된 저 내독소 키토산 염을 제공한다.

상기 저 내독소 키토산 염은 내부 또는 외부 출혈에 대한 지혈제로 사용될 수 있다.

내부 출혈에 대한 수술에 사용되는 키토산 염을 위하여, 5EU/g 미만의 내독소 농도가 요구된다.

본 발명의 상기 저 내독소 키토산 염은, 생명에 위협을 주지 않는 깊지 않은 출혈 또는 생명에 위협을 주는 출혈에 대한 상처 드레싱에 포함될 수 있다.

따라서, 본 발명의 다른 관점에 따르면, 생명에 위협을 주지 않는 깊지 않은 출혈 또는 생명에 위협을 주는 출혈에 대한 상처 드레싱에 사용하기 위하여 여기에 기재된 저 내독소 키토산 염을 제공한다.

본 발명의 상기 저 내독소 키토산 염은, 혈액의 흐름을 억제하기 위한 지혈 상처 드레싱(haemostatic wound dressing)의 제조에 사용하기 위해 적합하다.

본 발명의 다른 관점에 따르면, 여기에 기재된 저 내독소 키토산 염으로 구성되는 지혈 상처 드레싱을 제공한다.

본 발명의 또 다른 관점에 따르면, 여기에 기재된 저 내독소 키토산 염으로 구성된 지혈 물질을 제공한다.

상기 지혈 물질 및/또는 키토산 염은, 미립자(particulate), 분말(powder), 낟알(granules), 조각(flake), 섬유(fibrous), 겔(gel), 폼(foam), 시트(sheet), 필름(film) 또는 액상 형태(fluid form)와 같은 임의의 적합한 형태일 수 있다.

본 발명의 또 다른 관점에 따르면, 가능한 상처 부위를 선택적으로 깨끗하게 하고; 여기에 기재된 저 내독소 키토산 염으로 구성된 지혈 상처 드레싱을 상기 상처 부위에 적용하고; 겔 엉김 형태까지 상기 상처 부위에 일정한 압력을 가하는 단계로 구성된 혈액의 흐름을 억제하는 방법을 제공한다.

바람직하게는 일정 압력이 대략 3분 이상 동안 상기 상처 부위에 가해진다.

이롭게는, 본 발명의 상기 지혈 물질의 제조에 사용된 알칼리 용액의 농도가 낮을수록, 상기 물질은 침투성, 혈액 엉김과 지혈을 더 잘 수행한다.

이에 한정되는 것은 아니지만 첨부 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 이하에서 설명할 것이다.

도 1은 다른 매체 내에서 키토산 제품의 점도에 대한 산성염 부산물의 다른 농도의 효과를 나타내는 선도이다.

내독소 시험

1. 키토산 내독소 시험을 위해 USP(United States Pharmacopeia)에 상세히 알려진 USP 추출 용액을 만든다(4.6ml의 1M HCl 와 45.4ml 무내독소수);

2. 시험 키토산 제품 0.1g을 USP 추출 용액 9.9ml에 첨가하는 것에 의해 추출하고, 37℃에서 48시간 동안 유지한다;

3. 48시간 후, 무내독소수 0.9ml 내에서 100㎕ 추출물을 희석한다;

4. 상기의 100㎕를 찰스 리버(Charles River)에 의해 제공된 내독소 특정(Endotoxin Specific)(ES) 완충제(buffer) 100㎕ 내에 혼합한다.

최종 추출물은 FDA 허가 일회용 카트리지를 사용하는 엔도세이프-PTS(Endosafe®-PTS™) 소형 분광광도계(spectrophotomer)를 사용하여 시험되었다.

상기 추출 공정은 2000배 희석과 10EU/g의 최소 시험 한계 검출(minimum test limit detection)을 사용한다.

실시예

실시예1:

키토산 50g이 1M NaOH 50g에 10분 동안 혼합된다.

최종 습윤 알칼리 키토산 부스러기를 유동층(fluid bed) 건조기 내에서 40℃로 즉시 건조한다.

원료 키토산의 초기 내독소 : 64.8EU/g

건조 처리된 알칼리 키토산 : <5EU/g

실시예2:

키토산 50g이 0.1M NaOH 50g에 10분 동안 혼합된다.

최종 습윤 알칼리 키토산 부스러기를 유동층 건조기 내에서 40℃로 즉시 건조한다.

원료 키토산의 초기 내독소 : 64.8EU/g

건조 처리된 알칼리 키토산 : 16.3EU/g

실시예3:

키토산 50g이 0.05M NaOH 50g에 10분 동안 혼합된다.

최종 습윤 알칼리 키토산 부스러기를 유동층 건조기 내에서 40℃로 즉시 건조한다.

원료 키토산의 초기 내독소 : 64.8EU/g

건조 처리된 알칼리 키토산 : 20.0EU/g

실시예4:

키토산 50g이 NaOH 0.01M 50g에 10분 동안 혼합된다.

최종 습윤 알칼리 키토산 부스러기를 유동층 건조기 내에서 40℃로 즉시 건조한다.

원료 키토산의 초기 내독소 : 64.8EU/g

건조 처리된 알칼리 키토산 : <30EU/g

상기 방법은 확장될 수 있으며, 큰 배치 크기(batch size)를 형성하는 데 사용된다.

상기 방법은 키토산 섬유나 키토산 직물과 같은 다른 물리적 형태의 키토산에 사용될 수 있다.

상기 방법은 예를 들어 수산화칼륨과 같이 수산화나트륨의 다른 베이스 또한 사용할 수 있다.

실시예1~4는 저 내독소 알칼리 키토산의 제조에 관한 것이다.

이 저 내독소 알칼리 키토산은 나중에 기타 키토산 기반 제품을 만들기 위한 원료로 사용될 수 있다.

예를 들어, 알칼리 키토산은 중성 키토산을 형성하기 위하여, 생체에 적합한 염을 만들기 위해 베이스와 반응하는 낮은 수준의 적절한 산을 첨가하는 것에 의해 pH 7로 중화될 수 있다.

예를 들어, 만약 수산화나트륨이 베이스 용액으로 사용된다면, 이는 염산의 첨가에 의해 중화될 수 있다.

상기 제품은 적은 염화나트륨 잔류량을 함유할 것이다.

실시예1~4에서 형성된 상기 저 내독소 알칼리 키토산은 또한 저 내독소 수용성 키토산 염이나 기타 키토산 파생물을 제조하는 데 사용될 수 있다.

이롭게는, 이는 살균 환경에 대한 필요가 없으며, 값 비싼 무내독소수의 많은 양의 사용이 없고, 헹굼이나 세척에 대한 필요 없이 달성될 수 있다.

예를 들어, 저 내독소 알칼리 키토산은 높은 수준의 적절한 산과 반응할 수 있다.

상기 산의 적은 부분이 생체 적합한 염을 만들기 위하여 상기 베이스와 반응할 것이다.

다른 실시예에서, 저 내독소 알칼리 키토산은 카르복시 메틸 키토산과 같은 저 내독소 키토산 파생물의 제조를 위한 원료로도 사용될 수 있다.

점도에 대한 산성염의 영향

중성 pH 키토산이나 키토산 염을 생산하기 위한, 상기 저 내독소 알칼리 키토산과 산의 반응은 산성염 부산물을 생산한다.

이 부산물의 존재는 상기 키토산 제품의 성능에 영향을 미칠 수 있다.

예를 들어, 부산물의 수준은 염분내에서 키토산 제품의 점도에 영향을 미칠 수 있다.

도 1을 참조하면, 젖산 나트륨을 다른 농도의 염분에 첨가한 결과와, 3분 후 다른 매체의 20g 용액 내에서 현재 유통중인 키토산 제품 셀록스(CELOX®)의 샘플 2g의 점도에 대한 최종 효과를 보여준다.

상기 베이스 매체는, 다른 수준의 젖산 나트륨이 첨가된 체액으로부터의 염분이었다.

상기 젖산 나트륨은 수산화나트륨과 젖산 사이의 반응의 부산물로 나타났다.

상기 결과가 표 1과 도 1에 나타나 있다.

	점도
농도	시험1	시험2	시험3	평균
염분	55000	62000	59000	58667
1.5%	54000	52000	61000	55667
2.5%	50000	43000	39000	44000
5.0%	35000	51000	31000	39000
7.5%	35000	34000	38000	35667
10.0%	37000	32000	36000	35000

첨가된 염의 수준이 증가함에 따라, 상기 매체 내 셀록스의 점도는 떨어진다는 것이 도 1로부터 명확하다.

따라서, 오직 낮은 수준의 잔류 염 부산물이 존재하는 것이 본 발명의 상기 키토산 제품의 결과를 낳는데 유리하다.

점도에 대한 저 농도 알칼리 용액의 영향

본 발명의 저 내독소 알칼리 키토산은, 몰중량의 측정을 고려하여, 키토산 중합체의 점도에 대한 산의 처리의 영향을 입증하기 위하여 시험될 수 있다.

상기 시험은 다음의 방법 단계로 구성된다.

a) 5g의 저 내독소 알칼리 키토산 낟알을 계량하고;

b) 600ml 비커 내에서 4.95g의 아세트산을 계량하고;

c) 495g의 1% 아세트산 용액을 제조하기 위하여, 490.05g 탈이온수(deionised water)를 상기 비커에 첨가하며;

d) 상기 비커를 교반판(suirrer plate)에 위치시키고, 교반을 작동시키고(상기 용액의 점도가 증가하도록 증가);

e) 상기 키토산 낟알을 상기 아세트산 용액에 첨가하고;

f) 모든 상기 낟알이 용해될 때까지 정기적으로 상기 용액을 점검하고, 필요하다면 상기 용액의 점도가 증가하도록 교반 수준을 증가시키며;

g) 상기 용액을 총 24시간 동안 유지하고, 상기 키토산 낟알이 상기 아세트산 용액에 녹는 시간을 측정하고;

h) 스핀들 64를 브룩필드 점도계에 장착하고;

i) 상기 스핀들을 10rpm으로 설정하고;

j) 상기 스핀들의 표시까지 상기 스핀들을 상기 용액 내에 넣고, 상기 점도계를 작동시키며, 안정화시키며;

k) 선택된 시간 간격에서 점도(cPs)를 기록한다.

알칼리 용액의 농도를 낮추는 효과

본 발명의 상기 방법에서 낮은 농도의 알칼리 용액을 사용하는 효과는, (1) 시험 샘플 내로 염분의 침투성 백분율; (2) 혈액 엉김까지의 시간 기간; 그리고 (3) 상복부 서버 생체 내 모델(epigastric server in-vivo model)에서 지혈제 백분율에 초점이 맞춰진 3가지 실험으로 시험될 수 있다.

(1) 염분 내로 침투성 백분율에 대한 일반적인 시험 방법은 다음과 같다;

5ml의 증류수를 시험 튜브에 첨가한다.

적색 식용색소 한 방울을 상기 물에 첨가한다.

층이 형성되도록 3g의 샘플 지혈제 분말을 상기 물의 위에 부드럽게 덮는다.

1분 후, 상기 지혈제 분말 내로 상기 물에 의해 이동한 거리를 측정하고 침투성 백분율로 기록한다.

(2) 혈액 엉김까지의 시간 기간에 대한 일반적인 시험 방법은 다음과 같다;

0.75g의 샘플 지혈제 분말을 시험 튜브에 첨가하고, 여기에 5ml의 헤파린 처리된 토끼 혈액(heparinised rabbit blood)을 첨가한다.

이후 상기 시험 튜브를 뒤집고, 상기 혈액이 겔 덩어리로 완전히 엉기는데 소요된 시간을 기록한다.

(3) 상복부 서버 생체 내 모델에서 지혈제 백분율에 대한 일반적인 시험 방법은 다음과 같다;

3~5cm 서버가 인체 모형(헤파린 처리되지 않은)의 상복부 동맥 내에 들어간다.

낟알 형태의 상기 지혈제 물질이 가해지고, 1분 동안 압축이 가해진다.

만약 재출혈이 발생하면, 추가로 1분 동안 압축이 가해진다.

본 발명을 상술한 실시예로 한정하기 위한 것이 아니며 오직 실시예를 통해 설명하기 위한 것으로 이해되어야 할 것이다.

Claims (39)

1. (a) 혼합물을 형성하기 위하여 키토산(chitosan), 키틴(chitin), 키토산 파생물(chitosan derivative) 또는 키틴 파생물(chitin derivative)을 0.01M~0.2M의 농도를 가진 알칼리 용액에 접촉시키는 단계와;
   (b) 상기 혼합물을 1시간 미만의 기간 동안 유지하는 단계와;
   (c) 상기 혼합물을 건조시키는 단계;
   를 포함하는 것을 특징으로 하는 저 내독소 알칼리 키토산, 키틴 또는 그 파생물의 제조방법.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 알칼리 용액의 농도는 0.1M인 것을 특징으로 하는 제조방법.
3. 제1항에 있어서,
   상기 알칼리 용액은 수산화금속(metal hydroxide), 탄화금속(metal carbonate), 이황화금속(metal bisulphite), 과규산화금속(metal persilicate), 짝염기(conjugate base) 및 수산화암모늄(ammonium hydroxide) 단독 또는 조합으로부터 선택된 알칼리 또는 알칼리성 지구 성분(earth component)을 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
4. 제1항에 있어서,
   상기 알칼리 용액은 상기 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물에 분무(spray)되거나, 상기 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물이 상기 알칼리 용액에 혼합되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
5. 제1항에 있어서,
   상기 혼합물은 3분 미만의 기간동안 유지되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
6. 제1항의 방법으로 얻을 수 있는 것을 특징으로 하는 저 내독소 알칼리 키토산, 키틴, 키토산 파생물 또는 키틴 파생물.
7. 제1항의 방법으로 제조된 알칼리 키토산을 산에 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물 제조방법.
8. 제7항에 있어서,
   상기 산은 상기 알칼리 키토산에 분무되거나, 상기 알칼리 키토산이 상기 산에 혼합되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
9. 제7항 또는 제8항에 있어서,
   상기 산은, 아세트산(acetic acid), 타르타르산(tartaric acid), 시트르산(citric acid), 아스코르브산(ascorbic acid), 아세틸살리실산(acetylsalicylic acid), 글루콘산(gluconic acid) 그리고 젖산(lactic acid) 단독 또는 조합으로부터 선택되는 유기산(organic acid); 카르복시산(carboxylic acid); 미리스트올레산(myristoleic acid), 팔미톨레산(palmitoleic acid), 사피엔산(sapienic acid), 올레산(oleic acid), 엘라이드산(elaidic acid), 박센산(vaccenic acid), 리놀레산(linoleic acid), 리노엘라이드산(linoelaidic acid), α-리놀렌산(α-Linolenic acid), 아라키돈산(arachidonic acid), 에이코사펜타엔산(eicosapentaenoic acid), 에루크산(erucic acid), 도코사헥사엔산(docosahexaenoic acid), 카프릴산(caprylic acid), 카프르산(capric acid), 라우르산(lauric acid), 미리스트산(myristic acid), 팔미트산(palmitic acid), 스테아르산(stearic acid), 아라키딘산(arachidic acid), 베헨산(behenic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 세로틴산(cerotic acid) 단독 또는 조합으로부터 선택되는 지방산(fatty acid); 히스티딘(histidine), 라이신(lysine), 아스파르트산(aspartic acid), 글루탐산(glutamic acid), 글루타민(glutamine), 글리신(glycine), 프롤린(proline), 타우린(taurine) 단독 또는 조합으로부터 선택되는 아미노산(amino acid); 루이스산(lewis acid); 일염기산(monoprotic acid); 이염기산(diprotic acid); 다염기산(polyprotic acid); 핵산(nucleic acid); 그리고 염산(hydrochloric acid), 황산(sulphuric acid) 그리고 질산(nitric acid) 단독 또는 조합으로부터 선택되는 무기산(mineral acid) 단독 또는 조합으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
10. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    상기 산은 1M의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 제조방법.
11. 제10항에 있어서,
    상기 산은, 산과 젖산에틸(ethyl lactate), 아세트산에틸(ethyl acetate), 아세트산메틸(methyl acetate), 에탄올(ethanol), 아세톤(acetone), 에탄올:물이 부피비 80:20인 혼합물 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 비용제(non-solvent)를 포함하는 액상 산(acid liquor)으로 존재하고;
    상기 알칼리 키토산은 5분 동안 상기 산과 혼합되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
12. 제11항에 있어서,
    키토산과 액상 산의 부피 비율은 5:1로부터 1:5까지인 것을 특징으로 하는 제조방법.
13. 제7항의 방법으로 얻을 수 있는 것을 특징으로 하는 저 내독소 중성 키토산, 키토산 염 또는 키토산 파생물.
14. 제3항에 있어서,
    상기 금속은 나트륨(sodium), 칼륨(potassium), 칼슘, 또는 마그네슘으로부터 선택되고;
    알칼리 성분은 수산화나트륨(sodium hydroxide), 수산화칼륨(potassium hydroxide) 또는 탄산나트륨(sodium carbonate)으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
15. 제4항에 있어서,
    상기 혼합물은 은 이온, 아연 이온, 클로로헥시딘(chlorohexadine), 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 방부제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
16. 제1항에 있어서,
    (b)단계 및 (c)단계는 (a)단계 이후 상기 혼합물을 즉시 건조시키는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
17. 삭제
18. 삭제
19. 삭제
20. 삭제
21. 삭제
22. 삭제
23. 삭제
24. 삭제
25. 삭제
26. 삭제
27. 삭제
28. 삭제
29. 삭제
30. 삭제
31. 삭제
32. 삭제
33. 삭제
34. 삭제
35. 삭제
36. 삭제
37. 삭제
38. 삭제
39. 삭제

Images