KR102303811B1 - Cosmetic Composition for Skin Whitening, Moisturizing and Anti-Iching Containing Pseudoalteromonas Fermented of Enzyme Treated Pearls - Google Patents

Cosmetic Composition for Skin Whitening, Moisturizing and Anti-Iching Containing Pseudoalteromonas Fermented of Enzyme Treated Pearls Download PDF

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Abstract

본 발명은 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용, 보습용 및 피부 가려움증 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다. 상기 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은 진주를 단백질 분해효소로 처리하여 수득한 추출물을 멸균시킨 후 해양 미생물인 슈도알테로모나스로 발효시킨 것으로, 진주에 함유된 미네랄 뿐만 아니라 효소처리를 통해 생성된 성분이 발효효능을 더 높여 우수한 미백 효과, 피부 보습 효과 및 가려움증 완화 효과를 갖는다.The present invention relates to a cosmetic composition for skin whitening, moisturizing and alleviating skin itchiness, comprising a fermented product of enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas as an active ingredient. The fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas is sterilized extracts obtained by treating pearls with proteolytic enzymes and then fermented with Pseudoalteromonas, a marine microorganism. The ingredients produced through the treatment enhance the fermentation effect and have excellent whitening effect, skin moisturizing effect and itch relief effect.

Description

효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백, 보습 및 피부 가려움증 완화 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Skin Whitening, Moisturizing and Anti-Iching Containing Pseudoalteromonas Fermented of Enzyme Treated Pearls}A cosmetic composition for skin whitening, moisturizing and relieving skin itching containing fermented products of enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas as an active ingredient

본 발명은 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용, 보습용 및 피부 가려움증 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition for skin whitening, moisturizing and alleviating skin itchiness, comprising a fermented product of enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas as an active ingredient.

사람의 피부색을 결정하는 데는 여러 가지 요인들이 관여한다. 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드, 빌리루빈 등 인체 내외의 색소 함유 유무 등의 요인들이 있다. 그 중 대표적인 요인은 피부가 자외선에 노출됨으로 인한 것이다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 티로시나제가 활성화되고, 이것은 피부조직에 존재하는 아미노산의 일종인 티로신에 작용하여 도파(dopa)를 생성시키고, 다시 도파퀴논(dopaquinone)을 생성시키는 산화과정을 통해 피부 색소세포인 멜라노사이트(Melanocyte)내의 멜라노좀(Melanosome)에서 멜라닌이라는 중합체가 합성된다. 이 멜라닌은 피부의 각질형성 세포인 케라티노사이트(Keratinocyte)로 전달되며, 각질화 과정에 의해 피부 표면에 도달하여 자외선으로부터 피부를 보호하게 된다. Several factors are involved in determining a person's skin color. There are factors such as the activity of melanocytes that make melanin pigment, the distribution of blood vessels, the thickness of the skin, and the presence or absence of pigments inside and outside the human body such as carotenoids and bilirubin. Among them, a representative factor is due to the exposure of the skin to ultraviolet rays. That is, when the skin is exposed to ultraviolet rays, tyrosinase is activated, which acts on tyrosine, a kind of amino acid present in the skin tissue, to generate dopa, and then through the oxidation process to generate dopaquinone again, the skin pigment A polymer called melanin is synthesized in melanosomes in the melanocytes, which are cells. This melanin is transferred to keratinocytes, which are keratinocytes of the skin, and reaches the skin surface by the keratinization process to protect the skin from UV rays.

멜라닌은 우리 인체에 없어서는 안 되는 자외선 방어제이며, 단백질, 지질, 핵산 등과 같은 생체성분을 변형시키는 다양한 라디칼을 제거하는데 효과적인 프리 라디칼 소거제의 역할을 담당한다. 하지만, 멜라닌이 국소적으로 과도하게 합성되거나 피부병변 및 노화에 따른 피부의 생리기능이 떨어지게 되면, 멜라닌이 피부 표면에 침착되어 기미, 주근깨 및 다양한 색소 침착을 유발하게 된다. Melanin is an essential UV protection agent for our human body and plays a role as an effective free radical scavenger to remove various radicals that modify biocomponents such as proteins, lipids, and nucleic acids. However, when melanin is locally synthesized excessively or the physiological function of the skin is deteriorated due to skin lesions and aging, melanin is deposited on the skin surface, causing melasma, freckles and various pigmentation.

피부 흑화의 원인과 기작이 밝혀지면서, 피부 흑화 과정에 관여하는 티로시나제(Tyrosinase)의 활성 저해효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 피부 흑화를 방지하기 위해 일반적으로 사용되고 있다. 이러한 목적으로 사용되고 있는 대표적인 물질로는 알부틴, 아스코르빈산, 히드로퀴논, 상백피추출물 및 감초추출물 등의 식물 추출물이 있다. As the cause and mechanism of skin blackening have been revealed, a method of reducing the production of melanin by mixing substances having an inhibitory effect on the activity of tyrosinase, which is involved in the skin blackening process, into cosmetics, or inhibiting some reactions during the process of melanin production It is commonly used to prevent skin darkening. Representative materials used for this purpose include plant extracts such as arbutin, ascorbic acid, hydroquinone, sagebrush extract and licorice extract.

하지만 알부틴의 경우, 우수한 티로시나제 활성 저해작용을 갖는 반면, 화장품에 배합 시 변색 및 경시변화에 따른 역가 저하 등 안정성에 문제점이 있으며, 피부자극이 커 사용상 한계가 있다. 아스코르빈산은 티로시나제 활성 저해효과가 낮고, 분자 자체의 안정성이 낮아 멜라닌 생성 억제제로 적합하지 않은 문제가 있다. 히드로퀴논은 피부에 대한 자극이 높아 안전성 문제로 현재 화장품 배합 시에 그 사용성이 제한되는 문제가 있다. 또한, 대부분의 식물 추출물들은 고농도에서만 비교적 높은 티로시나제 활성 저해 효과를 나타내며, 저농도에서는 저해 효과가 거의 나타나지 않는 등의 문제점을 갖고 있다. 특히, 기존 멜라닌 생성 억제제들은, 실제 사람 피부에 대한 임상적인 실험 시 미백 효과가 미약하다는 가장 큰 문제점이 있다. 따라서 인체에서 우수한 미백 효과를 나타내면서 안정성과 안전성이 보장되는 물질의 개발이 요구되고 있으며, 이에 부작용이 적은 천연물을 기초로 한 미백용 조성물이 주목 받고 있다. However, in the case of arbutin, while it has an excellent tyrosinase activity inhibitory action, it has problems in stability such as discoloration and a decrease in potency due to changes over time when formulated in cosmetics, and there is a limitation in use due to high skin irritation. Ascorbic acid has a low tyrosinase activity inhibitory effect and is not suitable as a melanogenesis inhibitor due to low molecular stability. Hydroquinone has a high irritation to the skin, so there is a problem that its usability is limited in the current cosmetic formulation due to safety issues. In addition, most plant extracts exhibit a relatively high tyrosinase activity inhibitory effect only at high concentrations, and have problems such as almost no inhibitory effect at low concentrations. In particular, the existing inhibitors of melanin production have the biggest problem that the whitening effect is weak during clinical trials on actual human skin. Therefore, there is a demand for the development of a material that ensures stability and safety while exhibiting an excellent whitening effect in the human body, and thus, a whitening composition based on a natural product with few side effects is attracting attention.

피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 기능을 하는 기관으로서, 인체 내의 물, 전해질 등의 생체 성분의 손실을 방지하며, 동시에 외부로부터 유해물질의 침입을 막는 역할을 한다. 피부의 구조는 외부에서부터 순서대로 표피, 진피, 피하지방 조직의 3개 층으로 구분된다.As an organ that functions as a protective film that protects the living body from the external environment, the skin prevents the loss of biological components such as water and electrolytes in the human body, and at the same time prevents the intrusion of harmful substances from the outside. The structure of the skin is divided into three layers: the epidermis, the dermis, and the subcutaneous tissue in order from the outside.

피부의 수분량은 진피층에서는 70% 정도이나 표피층으로 갈수록 감소하여 표피층에서는 약 10% 내지 30%가 된다. 표피층의 수분함량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 잃게 되어 노화현상이 일어난다. 표피는 외부로부터 각질층, 과립층, 유극층, 기저층의 4개 층으로 구분되는데 각질층의 세포들은 벽돌과 같은 역할을 하고 각질세포 사이 세포 간의 지질들은 몰타르와 같은 역할로 피부 장벽을 이루고 있다.The moisture content of the skin is about 70% in the dermis layer, but decreases toward the epidermis layer and becomes about 10% to 30% in the epidermis layer. When the moisture content of the epidermis layer is less than 10%, the skin becomes rough and the protective function of the body is lost, and aging occurs. From the outside, the epidermis is divided into four layers: the stratum corneum, granular layer, stratum corneum, and basal layer. The cells of the stratum corneum act like bricks, and the lipids between the cells act like mortar, forming a skin barrier.

또한, 건강한 사람의 각질세포에는 고농도의 자연보습인자(Natural Moisturizing Factor, NMF)가 존재하며, 이는 피부의 수분함유를 돕는 기능을 한다. 하지만, 피부의 이러한 기능에도 불구하고, 실내난방, 오염된 대기 및 자외선 등의 외부 환경에 의한 외인성 노화, 내인성 노화 및 마찰, 면도 및 세안 등의 물리화학적 자극에 따른 피부 구성성분의 탈락으로 인하여 수분 불균형이 생겨 피부 건조가 유발된다. 이를 방지하기 위해 피부 보습제의 필요성이 중요시되고 있으며, 피부 보습 효능을 세포수준에서 확인하기 위한 다양한 연구가 진행되고 있다.In addition, a high concentration of Natural Moisturizing Factor (NMF) exists in the keratinocytes of a healthy person, which helps the skin to contain moisture. However, in spite of these functions of the skin, extrinsic aging caused by external environments such as indoor heating, polluted air and ultraviolet rays, intrinsic aging and loss of skin components due to physical and chemical stimuli such as friction, shaving and washing face An imbalance can lead to dry skin. To prevent this, the need for a skin moisturizer is important, and various studies are being conducted to confirm the skin moisturizing effect at the cellular level.

피부에서 각질세포층의 수분함량을 적절하게 유지하는 것은 매우 중요하다. 이를 위하여 화장품에는 피지와 유사한 성분이나 NMF 성분, 또는 폴리올과 같은 보습제 등이 첨가되어 사용된다. 예를 들어, 수용성 폴리올로서 수산기(OH group)가 3개 이상인 글리세린, 솔리톨 등은 뛰어난 보습력을 나타내나 끈적임이 심하여 사용할 때 불쾌감을 느끼게 하며, 수산기가 2개인 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등은 피부의 부작용이 발생하기도 한다. 또한, 다른 천연보습인자인 피롤리돈 카르복실산 나트륨(PCA-Na), 젖산나트륨(Sodium lactate), 요소 등은 전해성이 강해 화장료의 유화안정성을 해치는 문제점이 있으며, 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등도 보습능력이 있다고 하나 그 보습능력에 한계가 있어 피부 보습력을 높이기 위한 천연물화장품 조성물에 대한 개발이 필요한 실정이다.It is very important to properly maintain the moisture content of the stratum corneum in the skin. For this purpose, a component similar to sebum, an NMF component, or a moisturizing agent such as polyol is added to cosmetics. For example, as water-soluble polyols, glycerin and solitol having three or more hydroxyl groups (OH groups) show excellent moisturizing power, but are sticky and cause discomfort when used, and propylene glycol with two hydroxyl groups, 1,3-butylene Glycol, etc., may cause side effects on the skin. In addition, other natural moisturizing factors such as sodium pyrrolidone carboxylate (PCA-Na), sodium lactate, and urea have strong electrolytic properties, which impair the emulsion stability of cosmetics. Although it has the ability, there is a limit to its moisturizing ability, so it is necessary to develop a natural cosmetic composition to increase skin moisturizing power.

가려움증이란 피부를 긁고 싶어지는 충동이 느껴지며 불쾌감을 유발하는 피부의 상태를 일컫는다. 주로 스트레스, 물리적·화학적 자극, 온도·습도 변화 등 다양한 자극에 의하여 유발되어 진다. 이런 증상들은 민감성 피부를 보유한 사람이나 아토피, 접촉성 피부염과 같은 피부질환자들에게도 동반된다. 가려움 및 피부 질환은 신체 내 특정 면역세포들이 활성화되어 가려움증을 매개하는 히스타민과 TNF-α를 비롯하여 여러 싸이토카인의 분비를 유도하여 일어나는 것으로 알려져 있다. 현재 가려움증 신호전달연구가 활발히 진행되어 신호전달과정의 조절을 통하여 가려움증의 치료 약물이 개발되고 있는 실정이다. 최근 연구에 의하면 특이적인 C 신경섬유는 가려움증 자극을 중추 신경계로 전달한다. 히스타민은 TRPV1 (Transient receptor potential cation channel, subfamily V, member 1) 이온채널의 개방을 유도하는 히스타민 수용체 1(Histamine receptor1, H1)을 통해 뉴런을 활성화시키고 BAM8-22과 chloroquine은 TRPA1(Transient receptor potential cation channel, subfamily A, member 1)채널의 개방을 유도하는 MrgprC11(Mas-related G protein-coupledreceptor C11)와 MgprA3 (Mas-related G protein-coupled receptor A3)를 통해 뉴런을 활성화시켜 신경학적 신호로 척수를 거쳐 최종적으로 대뇌피질로 전달되어 가려움을 느끼게 된다. 이외에도 단백분해효소 수용체, PAR-2(Protease activated receptor 2)는 트립신과 같은 세린-프로테아제(Serine-protease)에 의해 활성화되고 칼시토닌 유전자 관련 펩티드(Calcitonin Gene-Related Peptide; CGRP) 및 NO, TNF-α, 히스타민, Substance-P의 분비를 유도하여 급성·만성 가려움증과 염증을 유발시켜 아토피 피부염뿐만 아니라 두피 가려움증과 접촉성 피부염 증상에도 관여한다. 피부에 저자극이며 피부 가려움증을 완화할 수 있는 천연물화장품 조성물에 대한 개발이 필요한 실정이다. Itching refers to a condition of the skin that causes the urge to scratch the skin and causes discomfort. It is mainly induced by various stimuli such as stress, physical/chemical stimuli, and temperature/humidity changes. These symptoms are also accompanied by people with sensitive skin or skin diseases such as atopic dermatitis and contact dermatitis. It is known that itching and skin diseases are caused by inducing the secretion of various cytokines, including histamine and TNF-α, which mediate itch by activation of specific immune cells in the body. Currently, research on itch signal transduction is being actively conducted, and drugs for treating itch are being developed through regulation of signal transduction process. Recent studies have shown that specific C nerve fibers transmit itch stimuli to the central nervous system. Histamine activates neurons through histamine receptor 1 (H1), which induces the opening of TRPV1 (Transient receptor potential cation channel, subfamily V, member 1) ion channel, and BAM8-22 and chloroquine are TRPA1 (Transient receptor potential cation channel). channel, subfamily A, member 1) activates neurons through MrgprC11 (Mas-related G protein-coupled receptor C11) and MgprA3 (Mas-related G protein-coupled receptor A3), which induce channel opening Finally, it is transmitted to the cerebral cortex and causes itching. In addition, protease receptor, PAR-2 (Protease activated receptor 2), is activated by serine-protease such as trypsin, and calcitonin gene-related peptide (CGRP) and NO, TNF-α , histamine, and Substance-P are secreted to induce acute and chronic itch and inflammation, which is involved not only in atopic dermatitis but also in scalp itch and contact dermatitis symptoms. There is a need to develop a natural cosmetic composition that is hypoallergenic to the skin and can alleviate skin itchiness.

해양의 보물로 불리는 진주는 탄산칼슘이 주성분이며, 우아하고 아름다운 빛깔의 광택이 나는 보석의 일종이다. 담수진주는 중국, 아코야 진주는 일본, 흑진주는 타히티, 남양진주는 인도네시아가 주축이 되어 생산하고 있다. 진주의 양식은 우리나라에서 극소수로 진행되고 있다. 미생물의 성장에는 무기원소로서 P, S, Mg, K, Na, Ca등이 많이 필요하며 Fe, Mn, Co, Zn, Cu등이 미량으로 필요한데, 이들은 대부분 효소의 활성에 관여하기 때문에, 미생물의 생육을 촉진할 수 있다. 미생물은 성장을 하게 되면 아미노산을 생산하게 되는데 미생물의 성장에 따라 아미노산의 생산량도 증가하게 된다. 아미노산 중에는 멜라닌 생성을 억제하여 피부의 미백에 효능을 보이는 메티오닌, 히스티딘, 아르기닌 등의 아미노산 등이 존재한다. 이처럼 미생물 배양을 통해 다양한 생리활성 물질을 개발할 수 있지만 상업적 배지의 가격, 선택배지의 개발, 미생물의 성장속도의 문제점들이 있어 이를 해결하고자 하는 노력들이 시도되고 있다. 한편, 천연 보석의 왕이라 불리는 진주는 20여종의 미네랄과 아미노산, 칼슘 등 생리활성 물질을 함유하고 있다. 이중 미네랄 성분은 미생물이 성장하기 위해 필수적인 영양소로서 미생물 성장을 촉진할 수 있으나 이에 대한 연구가 전무한 실정이다. 하지만 미생물이 배양되는 시간과 활성도에 있어 획기적으로 단축시킬 수 있는 방법들은 많이 찾아볼 수 없고 경제적이지 못하다.Pearl, which is called the treasure of the sea, is a kind of gemstone that contains calcium carbonate as its main ingredient, and has an elegant and beautiful color. Freshwater pearls are produced mainly in China, Akoya pearls in Japan, black pearls in Tahiti, and Namyang pearls in Indonesia. Pearl cultivation is carried out in very few cases in Korea. For the growth of microorganisms, P, S, Mg, K, Na, Ca, etc. are required a lot as inorganic elements, and Fe, Mn, Co, Zn, Cu, etc. are required in trace amounts. Since these are mostly involved in the activity of enzymes, can promote growth. When microorganisms grow, they produce amino acids. As the microorganisms grow, the production of amino acids also increases. Among the amino acids, there are amino acids such as methionine, histidine, and arginine that inhibit melanin production and show efficacy in skin whitening. As such, various physiologically active substances can be developed through microbial culture, but there are problems in the price of commercial media, the development of selective media, and the growth rate of microorganisms, and efforts are being made to solve these problems. On the other hand, pearls, which are called the king of natural gems, contain 20 kinds of minerals, amino acids, and physiologically active substances such as calcium. Among them, the mineral component is an essential nutrient for the growth of microorganisms and can promote the growth of microorganisms, but there is no research on this. However, there are not many methods that can dramatically shorten the culture time and activity of microorganisms, and they are not economical.

한국등록특허 제10-1980068호에서는 발효 식초의 향미 개선 방법 및 이를 통해 제조된 진주발효물을 포함하는 피부상태 개선용 조성물에 관한 기술을 개시하고 있다.Korean Patent Registration No. 10-1980068 discloses a method for improving the flavor of fermented vinegar and a technique for a composition for improving skin condition including a pearl fermented product prepared therethrough.

본 발명은 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 이용한 피부 미백, 피부 보습 및 피부 가려움증 완화용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 구체적으로는, 단백직분해효소(Protamex)를 처리한 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 포함하여, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해하고 멜라닌 생성을 억제하며, 아쿠아포린 발현을 향상시켜 피부의 보습을 향상시킬 뿐 아니라 TRPV1 발현을 저해하여 피부 가려움증을 완화할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a cosmetic composition for skin whitening, skin moisturizing and skin itch relief using a fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas. Specifically, including the fermented product of pearls treated with proteolytic enzyme (Protamex) with Pseudoalteromonas, it inhibits some reactions in the melanin production process, suppresses melanin production, and improves aquaporin expression. An object of the present invention is to provide a cosmetic composition capable of alleviating skin itching by inhibiting TRPV1 expression as well as improving skin moisture.

상기한 과제는, 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용, 피부 보습용 및 피부 가려움증 완화용 화장료 조성물에 의해 달성된다.The above object is achieved by a cosmetic composition for skin whitening, skin moisturizing, and skin itch relief containing a fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas as an active ingredient.

바람직하게는, 상기 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은, 아쿠아포린(Aquaporin, AQP)-3 발현을 향상시켜 피부 보습 효과를 갖고, TRPV1 발현을 저해하여 피부 가려움증 완화 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.Preferably, the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas has a skin moisturizing effect by improving the expression of Aquaporin (AQP)-3, and has a skin itch relief effect by inhibiting the expression of TRPV1 characterized in that

또한 바람직하게는, 상기 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은, 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 99.0 중량% 함유될 수 있다.Also preferably, the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas may be contained in an amount of 0.001 to 99.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.

또한 바람직하게는, 상기 효소는 단백질 분해효소일 수 있다. Also preferably, the enzyme may be a proteolytic enzyme.

본 발명에서는 효소처리 진주를 해양 미생물인 슈도알테로모나스로 발효시켜 진주가 가지고 있는 미네랄 성분을 영양소로 사용함으로써 슈도알테로모나스의 성장속도를 5배 이상 촉진시켰고, 피부 미백, 보습, 피부 가려움증 완화에 우수한 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.In the present invention, by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas, a marine microorganism, and using the mineral components of pearls as nutrients, the growth rate of Pseudoalteromonas was promoted more than 5 times, and skin whitening, moisturizing, and skin itching relief It is possible to provide a cosmetic composition having an excellent effect on

도 1은 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효시킨 발효물(실시예 1), MA 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 1), 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 2) 및 진주를 슈도알테로모나스로 발효시킨 발효물(비교예 3)의 UV 분광 광도계(spectrophotometer)로 측정한 OD값을 도시한 것이다.
도 2는 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효시킨 발효물(실시예 1), MA 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 1), 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 2) 및 진주를 슈도알테로모나스로 발효시킨 발효물(비교예 3)의 TRPV1의 발현율을 도시한 것이다.
1 is a fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas (Example 1), a pseudoalteromonas culture in MA medium (Comparative Example 1), and a pseudoalteromonas culture in a mineral medium (comparative). Example 2) and a fermented product obtained by fermenting pearls with pseudoalteromonas (Comparative Example 3) shows OD values measured with a UV spectrophotometer.
2 is a fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas (Example 1), a pseudoalteromonas culture in MA medium (Comparative Example 1), and a pseudoalteromonas culture in a mineral medium (comparative). Example 2) and a fermented product obtained by fermenting pearls with Pseudoalteromonas (Comparative Example 3) shows the expression rate of TRPV1.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.All technical terms used in the present invention, unless otherwise defined, have the following definitions and have the meanings as commonly understood by one of ordinary skill in the art in the relevant field of the present invention. In addition, although preferred methods and samples are described herein, similar or equivalent ones are also included in the scope of the present invention.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.The term "about" refers to 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, means an amount, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length varying by 4, 3, 2 or 1%.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이라는 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.Throughout this specification, unless the context requires otherwise, the terms "comprises" and "comprising" include, but are not limited to, a given step or element, or group of steps or elements, but any other step or element, or It is to be understood that a step or group of elements is not excluded.

이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명자는 피부 미백, 피부 보습 및 피부 가려움증 완화에 효능이 우수한 생리활성 물질을 생산하는 미생물의 배양시간을 줄이고 활성도를 증진시켜 상업적으로도 이점을 가질 수 있게 하기 위해, 미생물의 성장을 촉진시키는 풍부한 미네랄을 함유하고 있는 천연물을 함유하는 기능성 화장품에 초점을 두고, 여러 원물들에 있어서 피부 미백, 보습 및 피부 가려움증 완화 화장료 조성물로의 응용 가능성을 연구한 결과, 풍부한 미네랄을 함유하고 있는 진주를 선정하여 본 발명을 완성하였다.The present inventors reduce the culture time of microorganisms that produce physiologically active substances with excellent efficacy in skin whitening, skin moisturizing, and skin itch alleviation and increase the activity to have commercial advantages, Focusing on functional cosmetics containing natural products containing minerals, and studying the potential of various raw materials for skin whitening, moisturizing, and skin itch relief cosmetic composition, pearls containing abundant minerals were selected. The present invention was completed.

본 발명은 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition containing, as an active ingredient, a fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas.

본 발명에서 "진주(Pearl)"는 진주조개, 대합, 전복 등의 체내에 생기는 딱딱한 덩어리로 탄산칼슘이 주성분이며, 우아하고 아름다운 빛깔의 광택이 나는 보석의 일종이다. 담수진주는 중국, 아코야 진주는 일본, 흑진주는 타히티, 남양진주는 인도네시아가 주축이 되어 생산하고 있다. 진주양식은 우리나라에서 극소수로 진행되고 있다. 천연 보석의 왕이라 불리는 진주는 20여종의 미네랄과 아미노산, 칼슘 등 생리활성 물질을 함유하고 있다.In the present invention, "Pearl" is a hard mass formed in the body of pearl oysters, clams, abalone, etc., and calcium carbonate is the main component, and is a kind of jewel with elegant and beautiful color luster. Freshwater pearls are produced mainly in China, Akoya pearls in Japan, black pearls in Tahiti, and Namyang pearls in Indonesia. Pearl farming is carried out in very few cases in Korea. Pearl, which is called the king of natural gems, contains 20 kinds of minerals, amino acids, and physiologically active substances such as calcium.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 함유할 수 있고, 상기 효소처리 진주는 진주 또는 진주파우더를 효소처리한 것일 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may contain a fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas, and the enzyme-treated pearls may be those obtained by enzymatically treating pearls or pearl powder.

본 발명에 따른 화장료 조성물에서, 상기 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은 진주 또는 진주파우더를 단백질 분해효소, 바람직하게는 프로타멕스(Protamex)로 처리한 후 발효 균주로 발효시킨 것일 수 있다.In the cosmetic composition according to the present invention, the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas is obtained by treating pearls or pearl powder with a proteolytic enzyme, preferably Protamex, and then fermenting it with a fermented strain. it could be

상기 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은 상기 진주를 효소로 처리 후 해양 미생물인 슈도알테로모나스 (Pseudoalteromonas sp.)로 발효하여 수득한 것을 포함할 수 있다. The fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas may include those obtained by fermenting the pearls with enzymes and then fermenting them with marine microorganisms, Pseudoalteromonas sp.

본 발명에서 ‘슈도알테로모나스 (Pseudoalteromonas sp.)는 남극 로스해에 서식하는 해양 미생물로, 필수 아미노산이 포함되어 있어 피부에 풍부한 보습감과 피부의 미백에 좋은 효과를 볼 수 있다. In the present invention, ' Pseudoalteromonas sp. ) is a marine microorganism that lives in the Ross Sea, Antarctica, and contains essential amino acids, so it can provide a rich moisturizing effect to the skin and a good effect on skin whitening.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 슈도알테로모나스로 발효한 효소처리 진주는 바람직하게 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001~99.0 중량% 함유되는 것이 좋다. 가장 바람직하게는 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~50중량% 함유되는 것이 좋다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부 미백 개선 효과가 나타나지 않으며, 99.0중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 미백, 보습 및 피부 가려움증 완화 효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다. On the other hand, in the cosmetic composition of the present invention, the enzyme-treated pearl fermented with Pseudoalteromonas is preferably contained in an amount of 0.001 to 99.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. Most preferably, it is good to contain 0.01 to 50% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. When the content of the extract is less than 0.001% by weight, the skin whitening improvement effect does not appear, and when it exceeds 99.0% by weight, the increase in skin whitening, moisturizing, and skin itch alleviation effect for the content increase is insignificant, and safety in formulation And there is a problem in stability, and it is not economical.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 일례로 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.On the other hand, the cosmetic composition of the present invention may include components commonly used in the cosmetic composition, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, conventional adjuvants such as vitamins, pigments and fragrances, and a carrier.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 일례로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.On the other hand, the cosmetic composition of the present invention can be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream, spray, etc., but is not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, a nourishing lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray, or a powder.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.On the other hand, in the cosmetic composition of the present invention, when the formulation is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, Talc or zinc oxide may be used.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 일례로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다. On the other hand, in the cosmetic composition of the present invention, when the formulation is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifier is used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, Benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylene glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan may be used.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.On the other hand, in the cosmetic composition of the present invention, when the formulation is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester, and polyoxyethylene sorbitan ester Suspending agents such as, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tragacanth may be used.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.On the other hand, in the cosmetic composition of the present invention, when the formulation is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In particular, in the case of a spray, additionally propellants such as chlorofluorohydrocarbons, propane/butane or dimethyl ether.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.On the other hand, in the cosmetic composition of the present invention, when the formulation is surfactant-containing cleansing, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, sarcosinate, Fatty acid amide ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester and the like can be used.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 계면활성제 함유된 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형 또는 비누일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 일례로, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.On the other hand, in the cosmetic composition of the present invention, in the case of a surfactant-containing cleansing formulation or a surfactant-free cleansing formulation or soap, it may be applied to the skin and then wiped off, removed, or washed off with water. For example, the soap is liquid soap, powder soap, solid soap, and oil soap, the surfactant-containing cleansing formulation is a cleansing foam, cleansing water, cleansing towel and cleansing pack, and the surfactant-free cleansing formulation is a cleansing cream, cleansing lotions, cleansing waters and cleansing gels, but not limited thereto.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다. On the other hand, the cosmetic composition of the present invention may be used overlapping with other cosmetic compositions other than the present invention. In addition, the cosmetic composition according to the present invention can be used according to a conventional method of use, and the number of times of use can be varied according to the skin condition or taste of the user.

이하, 본 발명의 내용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.Hereinafter, the content of the present invention will be described in more detail in the following examples, but the scope of the present invention is not limited to the following examples, and includes modifications of technical ideas equivalent thereto.

제조예 1: 효소처리 진주 제조 및 미네랄 함량 변화 측정Preparation Example 1: Enzyme-treated pearl preparation and measurement of mineral content change

진주를 구입한 후, 진주를 분쇄한 후 121℃, 15분 멸균한다. 멸균 후 정제수를 분쇄물의 10배가 되게 혼합한 후 단백질 분해효소인 프로타멕스(Protamex, Novozyme Co, Bagsvaerd, Denmark)를 분쇄물의 1 중량%가 되게 첨가한 후 60℃에서 2시간 반응시켰다. 반응 후 95℃에서 15분 효소 비활성화시켜 효소처리 진주를 제조하였다. 제조된 효소처리 진주의 미네랄 함량을 측정하여, 아래 표 1에 나타냈다.After purchasing pearls, pulverize the pearls and sterilize them at 121°C for 15 minutes. After sterilization, purified water was mixed so that 10 times of the pulverized product was added, and protamex, a proteolytic enzyme (Protamex, Novozyme Co, Bagsvaerd, Denmark), was added to 1% by weight of the pulverized product, followed by reaction at 60° C. for 2 hours. After the reaction, the enzyme was inactivated at 95° C. for 15 minutes to prepare an enzyme-treated pearl. The mineral content of the prepared enzyme-treated pearls was measured and shown in Table 1 below.

미네랄mineral 효소 처리 후 진주Pearls after enzyme treatment Phosphorous(mg/100g)Phosphorous (mg/100g) 0.40 mg/100g0.40 mg/100 g Sodium(mg/100g)Sodium (mg/100g) 7.58 mg/100g7.58 mg/100g Calcium(mg/100g)Calcium (mg/100g) 7.93 mg/100g7.93 mg/100g Potassium(mg/100g)Potassium (mg/100g) 4.67 mg/100g4.67 mg/100g Magnesium(mg/100g)Magnesium (mg/100g) 0.41 mg/100g0.41 mg/100 g Zinc(mg/100g)Zinc (mg/100g) 0.02 mg/100g0.02mg/100g

표 1을 보면, 진주를 프로타멕스로 효소 처리하였을 때 여러 종류의 미네랄이 존재하는 것을 확인하였다.Referring to Table 1, it was confirmed that various kinds of minerals were present when pearls were enzymatically treated with Protamex.

비교예 1: MA(MARINE AGAR) 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물Comparative Example 1: Pseudoalteromonas culture in MA (MARINE AGAR) medium

펩톤(Peptone), 5.0 g, 이스트 추출물(Yeast extract), 1.0 g, 구연산 철(Ferric Citrate), 0.1 g, NaCl, 19.45 g, MgCl2, 8.8 g, Na2SO3, 3.24 g, CaCl2, 1.8 g, KCl, 0.55 g, NaHCO3, 0.16 g, KBr, 0.08 g, SrCl2, 0.034 g, H3BO3, 0.022 g, Na2SiO3, 0.004 g, NaF, 0.0024 g, NH4NO3, 0.0016 g, Na2HPO4, 0.008 g, Agar, 15.0 g를 혼합하여 상업적 배지인 MA배지를 제조한 후, 121℃, 15분 멸균하였다. 35℃까지 배지의 온도가 내려간 후 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas sp.) 균사체를 50,000cfu/L 첨가하여 32℃, pH6으로 호기적 조건으로 발효조에서 3일간 배양하여 발효시켰다. 발효 후 상기 발효물을 121℃ 및 1.5 atm 조건에서 15분 동안 멸균시켜 균을 사멸한 후, 0.45㎛의 여과막을 이용하여 여과하여, 배양물을 얻었다.Peptone, 5.0 g, Yeast extract, 1.0 g, Ferric Citrate, 0.1 g, NaCl, 19.45 g, MgCl 2 , 8.8 g, Na 2 SO 3 , 3.24 g, CaCl 2 , 1.8 g, KCl, 0.55 g, NaHCO 3 , 0.16 g, KBr, 0.08 g, SrCl 2 , 0.034 g, H 3 BO 3 , 0.022 g, Na 2 SiO 3 , 0.004 g, NaF, 0.0024 g, NH 4 NO 3 , 0.0016 g, Na 2 HPO 4 , 0.008 g, Agar, and 15.0 g were mixed to prepare a commercial medium MA medium, followed by sterilization at 121° C. for 15 minutes. After the temperature of the medium was lowered to 35 ℃ , Pseudoalteromonas sp. 50,000 cfu/L of mycelium was added and cultured for 3 days in a fermenter under aerobic conditions at 32 ℃, pH6 and fermented. After fermentation, the fermented product was sterilized at 121° C. and 1.5 atm conditions for 15 minutes to kill bacteria, and then filtered using a 0.45 μm filtration membrane to obtain a culture.

비교예 2: 미네랄 조성배지에서의 슈도알테로모나스 배양물Comparative Example 2: Pseudoalteromonas culture in mineral composition medium

인(Phosphorous) 0.40 mg, 나트륨(Sodium) 7.58 mg, 칼슘(Calcium) 7.93 mg, 칼륨(Potasium) 4.67 mg, 마그네슘(Magnesium) 0.41 mg, 아연(Zinc) 0.02 mg을 혼합하여 정제수로 100 g을 맞추어 미네랄 배지를 제조한 후 121℃, 15분 멸균하였다. 35℃까지 배지의 온도가 내려간 후 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas sp.) 균사체를 50,000cfu/L 첨가하여 32℃, pH6으로 호기적 조건으로 발효조에서 3일간 배양하여 발효시켰다. 발효 후 상기 발효물을 121℃ 및 1.5 atm 조건에서 15분 동안 멸균시켜 균을 사멸한 후, 0.45㎛의 여과막을 이용하여 여과하여, 배양물을 얻었다.Mix Phosphorous 0.40 mg, Sodium 7.58 mg, Calcium 7.93 mg, Potasium 4.67 mg, Magnesium 0.41 mg, Zinc 0.02 mg to make 100 g with purified water. After preparing the mineral medium, it was sterilized at 121°C for 15 minutes. After the temperature of the medium was lowered to 35 ℃ , Pseudoalteromonas sp. 50,000 cfu/L of mycelium was added and cultured for 3 days in a fermenter under aerobic conditions at 32 ℃, pH6 and fermented. After fermentation, the fermented product was sterilized at 121° C. and 1.5 atm conditions for 15 minutes to kill bacteria, and then filtered using a 0.45 μm filtration membrane to obtain a culture.

비교예 3: 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물 제조Comparative Example 3: Preparation of a fermented product obtained by fermenting pearls with pseudoalteromonas

진주를 구입한 후, 진주를 분쇄한 후 121℃, 15분 멸균한다. 정제수 200g를 혼합 후 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas sp.) 균사체를 50,000cfu/L 첨가하여 32℃, pH6으로 호기적 조건으로 발효조에서 3일간 배양하여 발효시켰다. 발효 후 상기 발효물을 121℃ 및 1.5 atm 조건에서 15분 동안 멸균시켜 균을 사멸한 후, 0.45㎛의 여과막을 이용하여 여과하였다. 상기 발효 여과물을 하기 실험예에 따라 농도별로 제조하여 사용하였다. After purchasing pearls, pulverize the pearls and sterilize them at 121°C for 15 minutes. After mixing 200 g of purified water , Pseudoalteromonas sp. 50,000 cfu/L of mycelium was added and cultured in a fermenter for 3 days under aerobic conditions at 32° C. and pH 6 and fermented. After fermentation, the fermented product was sterilized at 121° C. and 1.5 atm for 15 minutes to kill bacteria, and then filtered using a 0.45 μm filtration membrane. The fermentation filtrate was prepared and used by concentration according to the following experimental examples.

실시예 1: 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물 제조Example 1: Preparation of fermented product by fermenting enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas

제조예 1로 제조된 효소처리 진주 200g에 슈도알테로모나스(Pseudoalteromonas sp.) 균사체를 50,000cfu/L 첨가하여 32℃, pH5 내지 7, 바람직하게는 pH6으로 호기적 조건으로 발효조에서 3일간 배양하여 발효시켰다. 발효 후 상기 발효물을 121℃ 및 1.5 atm 조건에서 15분 동안 멸균시켜 균을 사멸한 후, 0.45㎛의 여과막을 이용하여 여과하였다. 상기 발효 여과물을 하기 실험예에 따라 농도별로 제조하여 사용하였다. 50,000 cfu/L of Pseudoalteromonas sp. mycelium was added to 200 g of the enzyme-treated pearl prepared in Preparation Example 1, followed by culturing for 3 days in a fermenter under aerobic conditions at 32° C., pH 5 to 7, preferably pH 6. fermented. After fermentation, the fermented product was sterilized at 121° C. and 1.5 atm for 15 minutes to kill bacteria, and then filtered using a 0.45 μm filtration membrane. The fermentation filtrate was prepared and used by concentration according to the following experimental examples.

실험예 1: 미생물 활성도 및 미네랄 함량 측정Experimental Example 1: Measurement of microbial activity and mineral content

MA 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 1), 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 2), 진주를 슈도알테로모나스를 접종하여 3일간 발효시킨 발효물(비교예 3), 및 단백질 분해효소(Protamex)를 처리한 진주를 슈도알테로모나스를 접종하여 3일간 발효시킨 발효물(실시예 1) 각각의 미생물의 활성도를 측정하였다. 미생물의 활성도는 UV 분광 광도계(spectrophotometer)를 이용하여 OD값을 측정하였다. 그 결과를 도 1에 나타냈다.Pseudoalteromonas culture in MA medium (Comparative Example 1), PseudoAlteromonas culture in mineral medium (Comparative Example 2), and fermented product in which pearls were inoculated with PseudoAlteromonas and fermented for 3 days (Comparative Example) 3), and the proteolytic enzyme (Protamex)-treated pearls were inoculated with Pseudoalteromonas and fermented for 3 days (Example 1) to measure the activity of each microorganism. The microbial activity was measured using a UV spectrophotometer (spectrophotometer) OD value. The results are shown in FIG. 1 .

도 1을 보면, 효소처리한 진주에 슈도알테로모나스를 접종하여 발효하였을 때(실시예 1) 슈도알테로모나스의 활성도가 기존 MA배지에서 배양한 것보다 약 2배 높은 것을 확인하였다.Referring to FIG. 1, when the enzyme-treated pearls were inoculated with Pseudoalteromonas and fermented (Example 1), it was confirmed that the activity of Pseudoalteromonas was about twice higher than that of culturing in the existing MA medium.

또한, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1의 미네랄 함량을 한국고분자시험연구소에 의뢰하여 분석하였다. 그 결과를 표 2에 나타냈다. 표 2를 보면, 실시예 1에서 인(Phosphorous), 나트륨(Sodium), 칼슘(Calcium), 칼륨(Potassium), 마그네슘(Magnesium), 아연(Zinc)이 감소하였고, 특히 나트륨, 칼슘, 칼륨의 감소가 컸다. 이를 통해, 슈도알테로모나스가 발효 과정 중에 미네랄을 영양소로 소비한다는 것을 알 수 있다. In addition, the mineral content of Comparative Example 2, Comparative Example 3, and Example 1 was requested and analyzed by the Korea Polymer Testing Laboratory. The results are shown in Table 2. Referring to Table 2, in Example 1, phosphorus (Phosphorous), sodium (Sodium), calcium (Calcium), potassium (Potassium), magnesium (Magnesium), zinc (Zinc) was reduced, in particular, a decrease in sodium, calcium, potassium was big From this, it can be seen that Pseudoalteromonas consumes minerals as nutrients during the fermentation process.

미네랄 mineral 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 실시예 1Example 1 PhosphorousPhosphorous 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g Sodiumsodium 2.58 mg/100g2.58 mg/100g 2.61 mg/100g2.61 mg/100g 2.21 mg/100g2.21 mg/100 g CalciumCalcium 2.73 mg/100g2.73mg/100g 2.56 mg/100g2.56 mg/100g 2.08 mg/100g2.08mg/100g PotassiumPotassium 1.16 mg/100g1.16 mg/100g 0.82 mg/100g0.82 mg/100g 0.52 mg/100g0.52 mg/100g MagnesiumMagnesium 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g ZincZinc 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g

또한, 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1의 아미노산 함량을 한국고분자시험연구소에 의뢰하여 측정하였다. 그 결과를 표 3에 나타냈다. 표 3을 보면, 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3과 비교하여 실시예 1인 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효하였을 때 더 높은 아미노산 함량을 볼 수가 있었다. 효소처리 후 진주를 발효할 때 미네랄뿐만 아니라 효소처리 후 생성되는 성분이 탄소 및 질소원으로 작용하여 미생물의 성장을 촉진시켜 미생물 발효에 따른 생리활성물질인 아미노산의 함량이 증가하였다. In addition, the amino acid content of Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Example 1 was measured by requesting the Korea Polymer Testing Laboratory. The results are shown in Table 3. Referring to Table 3, it was possible to see a higher amino acid content when the enzyme-treated pearl of Example 1 was fermented with Pseudoalteromonas as compared with Comparative Example 1, Comparative Example 2, and Comparative Example 3. When pearls are fermented after enzyme treatment, not only minerals but also components produced after enzyme treatment act as carbon and nitrogen sources to promote the growth of microorganisms, thereby increasing the content of amino acids, which are physiologically active substances according to the fermentation of microorganisms.

아미노산amino acid 비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 실시예 1Example 1 TyrosineTyrosine 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g GlycineGlycine 3.02 mg/100g3.02mg/100g 5.58 mg/100g5.58 mg/100g 5.88 mg/100g5.88 mg/100g 6.88 mg/100g6.88 mg/100g SerineSerine 1.10 mg/100g1.10 mg/100g 2.61 mg/100g2.61 mg/100g 2.71 mg/100g2.71 mg/100g 3.61 mg/100g3.61 mg/100g AlanineAlanine 2.58 mg/100g2.58 mg/100g 3.16 mg/100g3.16 mg/100g 4.58 mg/100g4.58 mg/100g 5.16 mg/100g5.16 mg/100g Glutamic AcidGlutamic Acid 4.01 mg/100g4.01 mg/100 g 4.51 mg/100g4.51 mg/100 g 6.01 mg/100g6.01 mg/100 g 6.51 mg/100g6.51 mg/100g LysineLysine 0.93 mg/100g0.93 mg/100 g 2.35 mg/100g2.35mg/100g 2.81 mg/100g2.81 mg/100g 3.31 mg/100g3.31 mg/100g leucineleucine 2.13 mg/100g2.13mg/100g 4.17 mg/100g4.17 mg/100g 4.63 mg/100g4.63 mg/100g 5.63 mg/100g5.63 mg/100g MethionineMethionine 0.23 mg/100g0.23 mg/100 g 1.02 mg/100g1.02mg/100g 1.50 mg/100g1.50 mg/100g 1.80 mg/100g1.80 mg/100g ValineValine 2.01 mg/100g2.01mg/100g 1.33 mg/100g1.33mg/100g 2.33 mg/100g2.33mg/100g 3.33 mg/100g3.33mg/100g ArginineArginine 2.04 mg/100g2.04 mg/100g 2.25 mg/100g2.25mg/100g 2.64 mg/100g2.64mg/100g 3.64 mg/100g3.64mg/100g Asparatic AcidAsparatic Acid 2.08 mg/100g2.08mg/100g 3.31 mg/100g3.31 mg/100g 3.68 mg/100g3.68 mg/100g 4.38 mg/100g4.38 mg/100g IsoleucineIsoleucine 3.02 mg/100g3.02mg/100g 3.37 mg/100g3.37 mg/100g 4.56 mg/100g4.56 mg/100g 5.37 mg/100g5.37 mg/100g ThreonineThreonine 0.98 mg/100g0.98 mg/100g 2.07 mg/100g2.07 mg/100g 2.18 mg/100g2.18mg/100g 2.38 mg/100g2.38 mg/100g PhenylalaninePhenylalanine 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g ProlineProline 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g 0 mg/100g0 mg/100g HistidineHistidine 1.82 mg/100g1.82 mg/100 g 2.54 mg/100g2.54 mg/100g 3.07 mg/100g3.07 mg/100g 3.34 mg/100g3.34 mg/100g

실험예 1: 티로시나제 활성 저해 효과 분석Experimental Example 1: Analysis of tyrosinase activity inhibition effect

본 실험예에서는 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1의 티로시나제 활성 저해효과를 확인하였다. 이때, 미백제로 잘 알려진 알부틴을 비교 샘플로 사용하였다.In this experimental example, the tyrosinase activity inhibitory effect of Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Example 1 was confirmed. At this time, arbutin, a well-known whitening agent, was used as a comparative sample.

티로시나제는 생체 내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되도록 하는 효소이다. 티로시나제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 Sigma 사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 L-티로신은 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 용해하여 0.1 ㎎/㎖ 용액으로 만들고, 상업적 배지(MA)에서의 슈도알테로모나스 배양물, 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물, 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물, 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 적당한 농도로 조절하여 용해한 후 사용하였다. L-티로신 용액 0.5 ㎖를 시험관에 넣고 여기에 상업적 배지(MA)에서의 슈도알테로모나스 배양물, 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물, 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물, 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물 시료액을 각각 0.5 ㎖를 가하고 37℃ 항온기에서 10분간 방치하였다. 그 후, 200 unit/㎖ 티로시나제 0.5 ㎖를 첨가하고 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시킨 후, 분광광도계를 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 상업적 배지(MA), 미네랄 배지, 진주발효, 효소처리 진주 발효 대신 완충용액 0.5 ㎖를 넣은 것을 사용하였다. 이때, 티로시나제에 대한 활성 저해율(%)은 하기 수학식 1에 의하여 계산하였으며, 티로시나제 활성이 50% 저해될 때의 IC50의 값을 각 미백물질에 대해 측정하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.Tyrosinase is an enzyme that promotes the oxidation process of a substance called tyrosine in a living body to produce melanin. Tyrosinase was isolated and purified from mushrooms, and was purchased from Sigma and used. The substrate, L-tyrosine, was dissolved in 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) to make a 0.1 mg/ml solution, and Pseudoalteromonas culture in commercial medium (MA), Pseudoalteromonas culture in mineral medium Water, fermented pearls with pseudoalteromonas, and enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas were used after dissolving in 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) to an appropriate concentration. 0.5 ml of L-tyrosine solution is placed in a test tube, and there is a pseudoalteromonas culture in commercial medium (MA), a pseudoalteromonas culture in mineral medium, a fermented product of pearls with pseudoalteromonas, an enzyme 0.5 ml of each sample solution of a fermented product obtained by fermenting treated pearls with Pseudoalteromonas was added and left in a thermostat at 37° C. for 10 minutes. Thereafter, 0.5 ml of 200 unit/ml tyrosinase was added and reacted at 37° C. for 10 minutes. The test tube containing the reaction solution was placed on ice to quench the reaction to stop the reaction, and then the absorbance at a wavelength of 475 nm was measured with a spectrophotometer. As a control, 0.5 ml of a buffer solution was used instead of commercial medium (MA), mineral medium, pearl fermentation, and enzyme-treated pearl fermentation. At this time, the activity inhibition rate (%) for tyrosinase was calculated by Equation 1 below, and the IC 50 value when the tyrosinase activity was inhibited by 50% was measured for each whitening material. The results are shown in Table 2 below.

Figure 112020003599776-pat00001
Figure 112020003599776-pat00001

구분division IC50(ug/ml)(티로시나제 활성 50% 저해시 필요한 농도)IC 50 (ug/ml) (concentration required for 50% inhibition of tyrosinase activity) 비교예 1Comparative Example 1 높은 농도에서 활성 저해 효능 없음 No inhibitory effect on activity at high concentrations 비교예 2Comparative Example 2 높은 농도에서 활성 저해 효능 없음 No inhibitory effect on activity at high concentrations 비교예 3Comparative Example 3 230.7230.7 실시예 1Example 1 165.1165.1 알부틴arbutin 198.5198.5

상기 표 4에서 알 수 있는 바와 같이, 티로시나제 활성을 50% 저해하는 농도는 비교예 1의 MA배지에서의 슈도알테로모나스 배양물은 효능이 나타나지 않았고, 실시예 1의 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물 165.1 g/ml, 알부틴이 198.5 μg/ml인 것과 비교할 때, 효소처리 진주의 슈도알테로모나스 발효의 티로시나제 활성 억제효과가 월등히 뛰어난 것을 확인할 수 있었다. As can be seen in Table 4, the concentration inhibiting tyrosinase activity by 50% did not show efficacy in the Pseudoalteromonas culture in the MA medium of Comparative Example 1, and the enzyme-treated pearl of Example 1 was treated as pseudoaltero. Compared with the fermented product fermented with Monas 165.1 g/ml and arbutin was 198.5 μg/ml, it was confirmed that the tyrosinase activity inhibitory effect of the Pseudoalteromonas fermentation of the enzyme-treated pearls was significantly superior.

실험예 2: B16F10 멜라닌 형성 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 분석Experimental Example 2: Analysis of melanin production inhibitory effect using B16F10 melanin-forming cells

본 실험예에서는 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물의 미백 효과를 확인하기 위해 B16F10 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 알아보고자 하였다. 이때, 미백제로 잘 알려진 알부틴을 비교샘플로 사용하였다. In this experimental example, in order to confirm the whitening effect of the fermented product of enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas, it was attempted to investigate the degree of inhibition of melanogenesis in B16F10 melanin-forming cells. At this time, arbutin, a well-known whitening agent, was used as a comparative sample.

본 실험예에서 사용한 B16F10 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포균으로, ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. B16F10 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2×105 농도로 분주하고, 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 분주하고, 상기 비교예 1, 비교예 2 비교예 3 및 실시예 1을 각각 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후, 세포를 트립신-EDTA로 떼어내고, 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후, 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F10 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 2에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 5에 나타내었다. The B16F10 melanin-forming cells used in this experimental example are mouse-derived cell bacteria, and were used after receiving from ATCC (American Type Culture Collection). B16F10 melanin-forming cells were dispensed at a concentration of 2×10 5 per well in a 6-well plate, and dispensed at a concentration that did not induce toxicity after attaching the cells, and Comparative Examples 1 and 2 Comparative Examples 3 and 1 were treated and incubated for 72 hours. After culturing for 72 hours, the cells were detached with trypsin-EDTA, the number of cells was counted, and the cells were recovered by centrifugation. Quantification of intracellular melanin was performed by modifying the method of Lotan (Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). After washing the cell pellet once with PBS, 1 ml of a homogenization buffer solution (50 mM sodium phosphate, pH6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. After dissolving the extracted melanin by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell filtrate obtained by centrifugation (3,000rpm, 10 minutes), the absorbance of melanin was measured at 405 nm with a microplate reader, and then the melanin was quantified to sample Melanin production inhibition rate (%) was measured. The inhibition rate (%) of melanin production of B16F10 melanin-forming cells was calculated by Equation 2 below, and the results are shown in Table 5.

Figure 112020003599776-pat00002
Figure 112020003599776-pat00002

A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Amount of melanin in wells to which no sample was added

B: 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양B: the amount of melanin in the well to which the sample was added

처리 농도
(ug/ml)
treatment concentration
(ug/ml)
멜라닌 생성 저해율(% of control)Melanin production inhibition rate (% of control)
비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 실시예 1Example 1 무처리군untreated group 0.00.0 0.00.0 0.00.0 0.00.0 1One 0.70.7 5.05.0 6.46.4 8.08.0 33 1.11.1 10.710.7 11.111.1 15.315.3 1010 2.92.9 17.217.2 20.520.5 30.030.0 3030 5.25.2 38.538.5 45.145.1 56.656.6 100100 11.511.5 66.866.8 69.769.7 80.880.8 알부틴 500 μg/ml Arbutin 500 μg/ml 48.948.9

실험 결과, 표 5에서 보는 바와 같이, 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 100 ug/ml 처리하였을 때의 멜라닌 생성 억제능이 알부틴 500 ug/ml 처리하였을 때보다 좋은 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 따라서 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물의 미백효과가 양성 대조군(positive control)인 알부틴보다 약 10배 정도 뛰어난 효과를 갖는 것을 알 수 있다.As a result of the experiment, as shown in Table 5, when the fermented product fermented with Pseudoalteromonas with enzyme-treated pearls was treated with 100 ug/ml, the melanin production inhibitory ability showed a better effect than when arbutin was treated with 500 ug/ml. Confirmed. Therefore, it can be seen that the whitening effect of the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas is about 10 times superior to that of arbutin, which is a positive control.

실험예 3: 아쿠아포린(Aquaporin, AQP)-3 발현 양상Experimental Example 3: Aquaporin (Aquaporin, AQP)-3 expression pattern

HaCaT 세포를 6 well plate에 3 x 105 cell/well로 분주하고 37oC, 5% CO2 세포 배양기에서 하루 동안 세포를 안정화시켰다. 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1을 농도별로 처리하고 6시간 동안 반응시킨 후 스크래퍼(scraper)를 이용하여 세포를 수집하였다. 1 x 세포 용해 버퍼(cell lysis buffer)를 이용하여 단백질을 분리하고 BCA assay로 단백질을 정량한 후 일정량의 단백질을 10% SDS-PAGE 겔에서 전기영동 시켰다. 겔 상의 분리된 단백질을 PVDF 멤브레인에 전이(transfer)시키고 5% 스킴밀크(skim milk)를 이용하여 1시간 동안 블로킹(blocking)하였다. 1 x TTBS 용액으로 3 회 세척하고 1차 항체(AQP-3, Santa cruz, USA)를 4oC에서 오버나잇(over night) 반응시킨 후, HRP가 결합된 2차 항체를 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 그 후, 1 x TTBS로 3 회 세척하고 ECL용액을 반응시켜 Chemi Doc 기기로 밴드를 검출하였다. 베타-액틴(β-actin)의 발현을 기준으로 정량하여 AQP-3 발현량을 계산하였으며 Image J 1.47 software를 이용하여 수치화하였다(표 6). 양성대조군으로는 덱사메타존(dexamethasone)을 사용하였다.HaCaT cells were seeded in a 6 well plate at 3 x 10 5 cells/well, and cells were stabilized for one day in a 37 o C, 5% CO 2 cell incubator. Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Example 1 were treated by concentration and reacted for 6 hours, and then cells were collected using a scraper. Proteins were isolated using 1 x cell lysis buffer, and proteins were quantified by BCA assay, and then a certain amount of protein was electrophoresed on a 10% SDS-PAGE gel. The separated protein on the gel was transferred to a PVDF membrane and blocked for 1 hour using 5% skim milk. After washing 3 times with 1 x TTBS solution and reacting the primary antibody (AQP-3, Santa cruz , USA) at 4 o C overnight (over night), the HRP-conjugated secondary antibody was incubated at room temperature for 2 hours. reacted. Thereafter, the bands were detected with a Chemi Doc instrument after washing 3 times with 1 x TTBS and reacting the ECL solution. AQP-3 expression level was calculated by quantification based on the expression of beta-actin (β-actin) and quantified using Image J 1.47 software (Table 6). As a positive control, dexamethasone was used.

구분division 농도density AQP-3 증가율(%)AQP-3 increase rate (%) 양성대조군 (Dexamethasone) Positive control (Dexamethasone) 1 μM1 μM 60.3760.37 비교예 1Comparative Example 1 25 ㎍/㎖25 μg/ml 2.502.50 50 ㎍/㎖50 μg/ml 9.589.58 100 ㎍/㎖100 μg/ml 25.7025.70 비교예 2Comparative Example 2 25 ㎍/㎖25 μg/ml 9.259.25 50 ㎍/㎖50 μg/ml 21.6321.63 100 ㎍/㎖100 μg/ml 64.7864.78 비교예 3Comparative Example 3 25 ㎍/㎖25 μg/ml 11.6211.62 50 ㎍/㎖50 μg/ml 25.7125.71 100 ㎍/㎖100 μg/ml 70.8070.80 실시예 1Example 1 25 ㎍/㎖25 μg/ml 12.1112.11 50 ㎍/㎖50 μg/ml 39.5839.58 100 ㎍/㎖100 μg/ml 80.8080.80

상기 표 6을 보면, 양성대조군인 덱사메타존은 60.37%의 AQP-3 발현을 증가시켰고, 실시예 1은 50 ug/ml 농도부터 유의적인 효과를 나타내어 최고 농도인 100 ug/ml 농도에서 양성대조군, 비교예 1, 비교예 2 및 비교예 3 보다 높은 80.80%의 AQP-3 발현 증가율을 보였다. 이를 통해 본 발명의 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물이 아쿠아포린(Aquaporin, AQP)-3 발현을 증가시킴으로써 우수한 보습 효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있었다. Referring to Table 6, the positive control dexamethasone increased the expression of AQP-3 by 60.37%, and Example 1 showed a significant effect from the 50 ug/ml concentration, and the positive control at the highest concentration of 100 ug/ml. , showed an increase rate of AQP-3 expression of 80.80% higher than that of Comparative Example 1, Comparative Example 2 and Comparative Example 3. Through this, it was confirmed that the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearl of the present invention with Pseudoalteromonas exhibits excellent moisturizing effect by increasing the expression of Aquaporin (AQP)-3.

실험예 4: 수분 보유능(water holding capacity) 확인Experimental Example 4: Confirmation of water holding capacity

히알루론산(Hyaluronic acid: HA)을 1 중량% 첨가한 용액을 비교 샘플로 하여 수분 보유능(water holding capacity)을 측정하였다. 일정한 온도에서 실험이 진행되었으며, 상기 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1을 페트리디쉬에 각 20㎖씩 넣어 준 뒤, 0, 2, 4, 6, 12 및 24시간 후 정밀 저울로 무게를 측정하여 기록하였다Water holding capacity was measured by using a solution in which 1 wt% of hyaluronic acid (HA) was added as a comparative sample. The experiment was conducted at a constant temperature, and 20 ml of each of Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Example 1 was put in a Petri dish, and after 0, 2, 4, 6, 12 and 24 hours, precision Weighed with a scale and recorded

구분division 시간hour 0H0H 2H2H 4H4H 6H6H 12H12H 24H24H 비히클
(1% HA)
vehicle
(1% HA)
시료량(mg)Sample amount (mg) 22187.422187.4 21487.521487.5 20475.620475.6 19242.319242.3 17458.517458.5 15145.315145.3
감소율(%)Decrease rate (%) 00 3.23.2 7.77.7 13.313.3 21.321.3 31.731.7 비교예 1Comparative Example 1 시료량(mg)Sample amount (mg) 21983.621983.6 21020.721020.7 20020.120020.1 18684.518684.5 16849.616849.6 15022.115022.1 감소율(%)Decrease rate (%) 00 2.92.9 6.66.6 12.512.5 19.219.2 30.630.6 비교예 2Comparative Example 2 시료량(mg)Sample amount (mg) 21983.621983.6 21081.321081.3 20182.120182.1 19114.519114.5 17812.617812.6 16017.516017.5 감소율(%)Decrease rate (%) 00 2.82.8 6.06.0 10.010.0 16.116.1 23.723.7 비교예 3Comparative Example 3 시료량(mg)Sample amount (mg) 21983.621983.6 21440.721440.7 20682.120682.1 19684.519684.5 18649.618649.6 17022.117022.1 감소율(%)Decrease rate (%) 00 2.52.5 5.95.9 10.510.5 15.215.2 22.622.6 실시예 1Example 1 시료량(mg)Sample amount (mg) 21983.621983.6 21561.721561.7 21038.021038.0 20571.620571.6 19735.419735.4 18823.918823.9 감소율(%)Decrease rate (%) 00 2.42.4 5.35.3 8.28.2 10.410.4 15.015.0

상기 표 7을 보면, 보습력이 우수하다고 알려진 히알루론산과 비교하여 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물의 결합력이 우수하여 증발된 수분의 양이 적은 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해 본 발명의 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물이 히알루론산, 비교예 1의 MA배지에서의 슈도알테로모나스 배양물, 비교예 2의 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물, 비교예 3의 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물보다 우수한 수분 보유능을 가져 뛰어난 보습 효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있었다. Looking at Table 7, compared to hyaluronic acid, which is known to have excellent moisturizing power, it was confirmed that the amount of evaporated moisture was small due to the excellent binding power of the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas. Through this, the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearl of the present invention with pseudoalteromonas is hyaluronic acid, the pseudoalteromonas culture in the MA medium of Comparative Example 1, and the pseudoalteromonas culture in the mineral medium of Comparative Example 2 It was confirmed that water and the pearl of Comparative Example 3 had a superior water retention ability than the fermented product with Pseudoalteromonas and exhibited an excellent moisturizing effect.

실험예 5: TRPV1 발현 억제 평가Experimental Example 5: TRPV1 expression inhibition evaluation

인간 피부 섬유아세포(Human fibroblast)를 6 well 플레이트(Nunc, 덴마크)에 2 ×105 cells/well의 농도로 분주하여, 37℃, 5% CO2 조건에서 24 시간 동안 배양하였다. 캡사이신(Capsaicin, 100 nM)을 처리하여 TRPV1 발현을 유도하였고 대조군은 완충용액을 사용하였다. 상기 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1은 30, 100 ug/ml의 농도로 각각 처리하였다. 시료를 처리하고 6 시간 배양 후, PBS(Phosphate buffer saline) 완충용액을 사용하여 2 회 세척한 후 1X cell lysis buffer로 세포를 용해하였다. 용해된 세포는 1.5 ml 마이크로 튜브에 넣어 12,000 rpm에서 15 분간 원심분리 하였고 나온 상등액을 회수하여 단백질을 분리하였다. 분리한 단백질은 BCA assay 방법으로 정량하였고 SDS-폴리아크롤아마이드 겔을 이용하여 SDS-PAGE를 실시하였다. 전기영동이 끝난 후, 90 분동안 겔에서 PVDF membrane으로 단백질을 트랜스퍼(Transfer)시키고 약 1 시간 동안 5% skim milk로 blocking 하였다. 1차 항체는 1: 1000 비율로 TRPV1 항체를 사용하였고 4℃에서 24 시간 동안 반응시켰다. 1차 항체 반응 후 1X TBS-T 버퍼(buffer)를 이용하여 10 분씩 4 번 세척하였고 바로 2차 항체를 상온에서 1시간 반응시켰다. 반응이 끝나고 10 분씩 4 번 세척 후 ECL 검출 키트를 사용하여 밴드를 확인하였다. 밴드 분석과 수치는 각각 Chemi DocTM XRS+ machine와 Image J 1.47 software 프로그램을 사용하여 나타내었다. TRPV1의 값은 베타-액틴(β-actin) 값을 기준으로 대비하여 %로 나타내었다. 통계적 유의성은 Student`s t-test를 이용하여 분석하였으며, 유의성 수준은 *p < 0.05로 표시하였다(도 2). Human skin fibroblasts (Human fibroblast) were aliquoted in a 6-well plate (Nunc, Denmark) at a concentration of 2 × 10 5 cells/well, 37 ℃, 5% CO 2 Conditions were cultured for 24 hours. TRPV1 expression was induced by treatment with capsaicin (Capsaicin, 100 nM), and a buffer solution was used for the control group. The Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Example 1 were treated at concentrations of 30 and 100 ug/ml, respectively. After processing the sample and incubating for 6 hours, the cells were lysed with 1X cell lysis buffer after washing twice with PBS (Phosphate buffer saline) buffer. The lysed cells were placed in a 1.5 ml microtube and centrifuged at 12,000 rpm for 15 minutes, and the supernatant was recovered to separate proteins. The isolated protein was quantified by the BCA assay method, and SDS-PAGE was performed using an SDS-polyacrylamide gel. After electrophoresis, the protein was transferred from the gel to the PVDF membrane for 90 minutes and blocked with 5% skim milk for about 1 hour. As the primary antibody, TRPV1 antibody was used at a ratio of 1:1000 and reacted at 4°C for 24 hours. After the primary antibody reaction, 1X TBS-T buffer was used to wash 4 times for 10 minutes each, and the secondary antibody was immediately reacted at room temperature for 1 hour. After the reaction was completed, the band was confirmed using an ECL detection kit after washing 4 times for 10 minutes each. Band analysis and numerical values were shown using Chemi DocTM XRS+ machine and Image J 1.47 software, respectively. The value of TRPV1 was expressed as a percentage compared to the beta-actin (β-actin) value. Statistical significance was analyzed using Student`s t- test, and the level of significance was expressed as *p < 0.05 (FIG. 2).

실험결과, 도 2를 보면, 본 발명의 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물(실시예 1)을 함유하는 조성물은 MA 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 1), 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물(비교예 2), 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물(비교예 3)을 함유하는 조성물 보다 농도 의존적으로 TRPV1의 발현을 억제하였다. TRPV1은 감각신경에 존재하고, 활성화 시 가려움증 유발 물질들을 분비하는데 도 2와 같이 실시예 1에서 우수한 TRPV1 발현 억제 효과를 나타냄으로써 가려움증 완화 효과가 있음이 확인되었다.As a result of the experiment, referring to FIG. 2, the composition containing the fermented product (Example 1) obtained by fermenting the enzyme-treated pearls of the present invention with Pseudoalteromonas cultured in MA medium (Comparative Example 1), The expression of TRPV1 was inhibited in a concentration-dependent manner than a composition containing a pseudoalteromonas culture in a mineral medium (Comparative Example 2) and a fermented product obtained by fermenting pearls with pseudoalteromonas (Comparative Example 3). TRPV1 is present in sensory nerves, and when activated, it secretes itch-inducing substances.

제형예: 효소처리 진주 슈도알테로모나스 발효물을 함유하는 화장료의 제조Formulation Example: Preparation of Cosmetics Containing Enzyme-treated Pearl Pseudoalteromonas Fermented Product

비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1에 따른 제조물을 3.0 중량% 함유하는 화장료 조성물을 아래 표 8의 조성으로 제조하였고, 제형예 1, 제형예 2, 제형예 3 및 제형예 4라 하였다. 한편, 효능을 확인하기 위해 발효물을 포함하지 않는 화장료 조성물을 비교제형예 1로 하여 상기 표 8에 나타내었다.A cosmetic composition containing 3.0 wt% of the preparation according to Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Example 1 was prepared in the composition of Table 8 below, and Formulation Example 1, Formulation Example 2, Formulation Example 3 and Formulation Examples 4 was called. On the other hand, in order to confirm the efficacy, the cosmetic composition not containing the fermented product is shown in Table 8 as Comparative Formulation Example 1.

구분
division
성분ingredient 제형예 1
함량(중량%)
Formulation Example 1
content (wt%)
제형예 2
함량(중량%)
Formulation Example 2
content (wt%)
제형예 3
함량(중량%)
Formulation Example 3
content (wt%)
제형예 4
함량(중량%)
Formulation Example 4
content (wt%)
비교제형예 1
함량(중량%)
Comparative Formulation Example 1
content (wt%)


A


A
비교예 1Comparative Example 1 3.03.0 -- -- -- --
비교예 2Comparative Example 2 -- 3.03.0 -- -- -- 비교예 3Comparative Example 3 -- -- 3.03.0 -- -- 실시예 1Example 1 -- -- -- 3.03.0 -- 알부틴arbutin -- -- -- -- 3.03.0 EDTA-2NaEDTA-2Na 0.020.02 0.020.02 0.020.02 0.020.02 0.020.02 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100




B





B
세토스테아릴알코올cetostearyl alcohol 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0
글리세릴스테아레이트Glyceryl Stearate 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 마이크로크리스탈린microcrystallin 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 스쿠알란squalane 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 유동파라핀liquid paraffin 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 트리옥타노인trioctanoin 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 폴리솔베이트polysorbate 1.21.2 1.21.2 1.21.2 1.21.2 1.21.2 솔비탄스테아레이트Sorbitan Stearate 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 토코페릴아세테이트Tocopheryl Acetate 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 사이클로메치콘cyclomethicone 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 BHTBHT 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 CC 향, 방부제fragrance, preservative 적량appropriate amount 적량appropriate amount 적량appropriate amount 적량appropriate amount 적량appropriate amount

실험예 3: 피부 미백 화장료 조성물의 미백 효능 분석Experimental Example 3: Analysis of Whitening Efficacy of Skin Whitening Cosmetic Composition

본 실험예에서는 상기 MA배지에서의 슈도알테로모나스 배양물, 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물, 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물, 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물(제형예 1, 제형예 2, 제형예 3 및 제형예 4)과 비교제형예 1의 알부틴을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물의 미백 효능을 알아보고자 하였다.In this experimental example, the pseudoalteromonas culture in the MA medium, the pseudoalteromonas culture in the mineral medium, the fermented product obtained by fermenting pearls with pseudoalteromonas, and the enzyme-treated pearls were fermented with pseudoalteromonas. Whitening of a cosmetic composition for skin whitening containing a fermented product as an active ingredient (Formulation Example 1, Formulation Example 2, Formulation Example 3 and Formulation Example 4) and a cosmetic composition for skin whitening containing arbutin of Comparative Formulation Example 1 as an active ingredient We wanted to investigate the efficacy.

임상 실험을 위하여, 색소침착증을 가지고 있는 건강한 성인 여성 100명을 무작위로 20명씩 5개 그룹(A, B, C, D, E)으로 나눈 후, A 그룹을 대상으로 제형예 1의 화장료 조성물을, B 그룹을 대상으로 제형예 2의 화장료 조성물을, C 그룹을 대상으로 제형예 3의 화장료 조성물을, D 그룹을 대상으로 제형예 4의 화장료 조성물을, E 그룹을 대상으로 비교제형예 1의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 도포하였다. 이후, 피부색의 변화를 분광광도계(spectrophotometer, Minolta CM600-d)를 이용하여 색의 밝기 변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 미백효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다. 이때, 미백 효능 정도를 다음의 미백 효능 평가 기준에 따라 분류하여 평가하였다. For the clinical trial, 100 healthy adult women with pigmentation were randomly divided into 5 groups (A, B, C, D, E) of 20 each, and then the cosmetic composition of Formulation Example 1 was administered to group A. , the cosmetic composition of Formulation Example 2 for group B, the cosmetic composition of Formulation Example 3 for group C, the cosmetic composition of Formulation Example 4 for group D, and Comparative Formulation Example 1 for group E The cosmetic composition was applied twice a day, respectively, for 8 weeks. Thereafter, the change in skin color is measured using a spectrophotometer (Minolta CM600-d) to measure the change in color brightness (ΔL), and objective visual observation by a plurality of experts and subjective visual observation by a subject are performed to achieve whitening effect was measured. The results are shown in Table 9 below. At this time, the degree of whitening efficacy was classified and evaluated according to the following whitening efficacy evaluation criteria.

<미백효능 평가 기준><Evaluation criteria for whitening efficacy>

-3: 매우악화 -2: 악화 -1: 약간 악화 0: 변화 없음-3: very bad -2: bad -1: slightly worse 0: no change

1: 약간 개선 2: 개선 3: 매우 개선 1: slightly improved 2: improved 3: greatly improved

피검자subject 피부색의밝기변화(ΔL)Change in skin color brightness (ΔL) 숙련자의 객관적 평가(ΔL)Objective Assessment of Experts (ΔL) 피검자의 주관적 평가(ΔL)Subject's subjective evaluation (ΔL) A
그룹
A
group
B
그룹
B
group
C
그룹
C
group
D
그룹
D
group
E
그룹
E
group
A
그룹
A
group
B
그룹
B
group
C
그룹
C
group
D
그룹
D
group
E
그룹
E
group
A
그룹
A
group
B
그룹
B
group
C
그룹
C
group
D
그룹
D
group
E
그룹
E
group
1One 22 22 22 22 1One 22 22 22 22 00 1One 22 22 22 00 22 1One 1One 22 22 1One 1One 1One 1One 22 1One 00 1One 22 22 1One 33 1One 22 22 22 00 1One 22 22 22 00 1One 22 1One 1One 00 44 1One 22 22 22 1One 1One 22 22 22 00 1One 22 22 22 00 55 1One 22 22 22 1One 1One 22 22 22 1One 1One 1One 1One 22 1One 66 1One 22 22 22 1One 1One 22 22 22 1One 00 1One 1One 22 1One 77 00 1One 22 22 1One 00 1One 1One 1One 1One 1One 22 22 22 1One 88 00 22 22 22 00 00 22 22 22 00 22 22 22 22 00 99 22 22 22 22 00 22 22 22 22 00 1One 00 1One 1One 00 1010 1One 1One 1One 1One 00 1One 1One 1One 22 00 1One 1One 1One 22 00 1111 1One 22 22 22 1One 1One 22 22 22 1One 22 1One 1One 22 1One 1212 22 22 22 22 1One 22 22 22 22 1One 00 1One 1One 22 1One 1313 22 22 22 22 1One 22 22 22 22 1One 1One 1One 1One 1One 1One 1414 1One 22 22 22 00 1One 1One 1One 1One 00 22 22 22 22 00 1515 1One 1One 1One 1One 1One 1One 1One 1One 1One 00 1One 22 22 22 00 1616 1One 22 22 22 22 1One 22 22 22 22 1One 22 22 22 22 1717 1One 22 22 22 00 1One 1One 1One 22 00 00 00 00 1One 00 1818 1One 22 22 22 1One 1One 22 22 22 1One 1One 1One 22 22 00 1919 22 1One 1One 22 1One 22 1One 1One 22 1One 00 1One 1One 22 1One 2020 1One 22 22 22 1One 1One 22 22 22 1One 1One 22 22 22 22 평균average 1.21.2 1.81.8 1.81.8 1.91.9 0.80.8 1.21.2 1.61.6 1.61.6 1.91.9 0.60.6 0.90.9 1.41.4 1.51.5 1.81.8 0.60.6

실험 결과, 실시예 1의 효소처리한 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 함유한 화장료 조성물(제형예 4)을 도포한 D 그룹의 평균 ΔL 값은 1.9(p<0.05)로서 가장 우수하였고, 비교예 1의 MA배지에서의 슈도알테로모나스 배양물을 함유하는 피부 미백 화장료 조성물(제형예 1)을 도포한 A 그룹의 평균 ΔL 값은 1.2(p<0.05)이었고, 비교예 2의 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물을 함유하는 피부 미백 화장료 조성물(제형예 2)을 도포한 B 그룹의 평균 ΔL 값은 1.8(p<0.05)이었고, 비교예 3의 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 함유하는 화장료 조성물(제형예 3)을 도포한 C 그룹의 평균 ΔL 값은 1.8(p<0.05)이었다. 이에 반해, 알부틴을 함유한 피부미백 화장료 조성물(비교제형예 1)을 도포한 E 그룹의 평균 ΔL 값은 0.8(p<0.05)이었다. As a result of the experiment, the average ΔL value of the group D coated with the cosmetic composition (Formulation Example 4) containing the fermented product of the enzyme-treated pearl of Example 1 with Pseudoalteromonas was 1.9 (p<0.05), which was the best and the average ΔL value of group A to which the skin whitening cosmetic composition (Formulation Example 1) containing the Pseudoalteromonas culture in the MA medium of Comparative Example 1 was applied was 1.2 (p<0.05), and that of Comparative Example 2 The average ΔL value of group B to which the skin whitening cosmetic composition (Formulation Example 2) containing the pseudoalteromonas culture in mineral medium was applied was 1.8 (p<0.05), and the pearl of Comparative Example 3 was treated with pseudoalteromonas The average ΔL value of group C to which the cosmetic composition containing the fermented product (Formulation Example 3) was applied was 1.8 (p<0.05). On the other hand, the average ΔL value of group E to which the skin lightening cosmetic composition containing arbutin (Comparative Formulation Example 1) was applied was 0.8 (p<0.05).

한편, 숙련자에 의한 미백 평가에서 숙련자에 의한 미백 평가에서 A그룹은 1.2, B 그룹은 1.6, C 그룹은 1.6, D 그룹은 1.9, E 그룹은 0.6 이었으며, 피검자에 의한 미백 평가에서는 A그룹은 0.9, B 그룹은 1.4, C그룹은 1.5, D그룹은 1.8, E 그룹은 0.6 으로 나타났다. 이를 통해, 본 발명의 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하는 피부미백 화장료 조성물의 미백효능이 더 우수한 것을 확인할 수 있었다. On the other hand, in the whitening evaluation by the expert, the A group was 1.2, the B group 1.6, the C group 1.6, the D group 1.9, and the E group 0.6, and in the whitening evaluation by the subject, the A group was 0.9 , group B was 1.4, group C was 1.5, group D was 1.8, and group E was 0.6. Through this, it was confirmed that the skin whitening cosmetic composition containing the fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls of the present invention with Pseudoalteromonas as an active ingredient was more excellent in whitening efficacy.

제조예 2: 효소처리 진주 슈도알테로모나스 발효물을 함유하는 화장료의 제조Preparation Example 2: Preparation of Cosmetics Containing Enzyme-treated Pearl Pseudoalteromonas Fermented Product

비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1을 각각 포함하는 화장료(제형예 5 내지 8)를 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1 대신에 보습제로서 글리세린을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), 추출물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3)을 하기 표 10에 나타내었다.Cosmetics (Formulation Examples 5 to 8) each including Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Example 1 were prepared, and for comparison of efficacy, Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3 and Examples A cosmetic composition containing glycerin as a moisturizer instead of 1 (Comparative Formulation Example 2) and a cosmetic composition containing neither an extract nor a moisturizer (Comparative Formulation Example 3) are shown in Table 10 below.

구분division 성분ingredient 제형예 5Formulation Example 5 제형예 6Formulation Example 6 제형예 7Formulation Example 7 제형예
8
Formulation example
8
비교
제형예 2
comparison
Formulation Example 2
비교
제형예 3
comparison
Formulation Example 3
AA 비교예 1Comparative Example 1 5.05.0 -- -- -- -- -- 비교예 2Comparative Example 2 -- 5.05.0 -- -- -- -- 비교예 3Comparative Example 3 -- -- 5.05.0 -- -- 실시예 1Example 1 -- -- -- 5.05.0 -- -- 글리세린glycerin -- -- -- -- 5.05.0 -- 부틸렌글라이콜Butylene Glycol -- -- -- -- 5.05.0 -- EDTA-2NaEDTA-2Na 0.020.02 0.020.02 0.020.02 0.020.02 0.020.02 0.020.02 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 BB 세토스테아틸알코올cetosteayl alcohol 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0 글리세릴스테아테이트glyceryl stearate 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 마이크로크리스탈린microcrystallin 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 스쿠알squal 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 유동파라핀liquid paraffin 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 트리옥타노인trioctanoin 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 폴리솔베이트polysorbate 1.21.2 1.21.2 1.21.2 1.21.2 1.21.2 1.21.2 솔비탄스테아레이트Sorbitan Stearate 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 토코페릴아세테이트Tocopheryl Acetate 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 사이클로메치콘cyclomethicone 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 BHTBHT 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 CC 향, 방부제fragrance, preservative 적량appropriate amount 적량appropriate amount 적량appropriate amount 적량appropriate amount 적량appropriate amount 적량appropriate amount

실험예 4: 피부 가려움증(scratches) 억제 효과 확인Experimental Example 4: Confirmation of skin itching (scratches) inhibitory effect

아토피 병변을 가지고 있는 피부 질환자 100명을 대상으로 실험군을 각각 20명씩 MA 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물을 포함하는 제형예 5, 미네랄 배지에서의 슈도알테로모나스 배양물을 포함하는 제형예 6, 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 포함하는 제형예 7 및 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 포함하는 제형예 8 처리군, 보습제로서 글리세린을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2) 처리군, 발효물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3) 처리군의 6 그룹으로 나누고 각각 도포한 후 3시간 동안 동영상을 촬영하여 긁는 횟수를 관찰하였다. 실험 결과는 하기의 표 11에 나타낸 바와 같다.Formulation Example 5 containing Pseudoalteromonas culture in MA medium, Formulation Example 6 containing Pseudoalteromonas culture in mineral medium, each of 20 experimental groups for 100 skin disease patients with atopic lesions , Formulation Example 7 containing a fermented product of pearls fermented with Pseudoalteromonas and Formulation Example 8 treatment group containing a fermented product of fermented pearls with enzyme-treated Pseudoalteromonas, Cosmetic composition comprising glycerin as a moisturizing agent ( Comparative Formulation Example 2) Treatment group, a cosmetic composition that does not contain any fermented product or moisturizer (Comparative Formulation Example 3) was divided into 6 groups and the number of scratches was observed by taking a video for 3 hours after each application. The experimental results are shown in Table 11 below.

구분division 제형예 5Formulation Example 5 제형예 6Formulation Example 6 제형예 7Formulation Example 7 제형예 8Formulation Example 8 비교제형예 2Comparative Formulation Example 2 비교제형예 3Comparative Formulation Example 3 긁는 횟수/hNumber of scratches/h 2121 1010 66 22 2424 5757

실험 결과, 비교제형예 3 조성물을 도포한 피부 질환자와 비교하여 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 함유된 제형예 8에서 피부를 긁는 횟수가 현저히 낮았으며, MA배지에서의 슈도알테로모나스 배양물을 함유한 제형예 5는 보습제로서 글리세린을 포함하는 비교제형예 2와 비슷한 결과를 나타내었다 As a result of the experiment, the number of skin scrapings was significantly lower in Formulation Example 8 containing the fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas compared to those with skin diseases to which the composition of Comparative Formulation Example 3 was applied. Formulation Example 5 containing the Alteromonas culture showed similar results to Comparative Formulation Example 2 containing glycerin as a moisturizer

이제까지 본 발명에 대한 구체적인 실시예들을 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far, specific embodiments of the present invention have been described. Those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains will understand that the present invention can be implemented in a modified form without departing from the essential characteristics of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments are to be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is indicated in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the scope equivalent thereto should be construed as being included in the present invention.

Claims (7)

효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하고, 상기 발효물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 99.0 중량% 함유되고, 상기 효소는 단백질 분해효소인, 피부 미백용 화장료 조성물.A fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas as an active ingredient, the fermented product is contained in an amount of 0.001 to 99.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, and the enzyme is a proteolytic enzyme, a cosmetic for skin whitening composition. 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하고, 상기 발효물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 99.0 중량% 함유되고, 상기 효소는 단백질 분해효소인, 피부 보습용 화장료 조성물.A fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas as an active ingredient, the fermented product is contained in an amount of 0.001 to 99.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, and the enzyme is a proteolytic enzyme, skin moisturizing cosmetic composition. 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물을 유효성분으로 함유하고, 상기 발효물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 99.0 중량% 함유되고, 상기 효소는 단백질 분해효소인, 피부 가려움증 완화용 화장료 조성물.It contains a fermented product obtained by fermenting enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas as an active ingredient, the fermented product is contained in an amount of 0.001 to 99.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, and the enzyme is a proteolytic enzyme, for relieving skin itching cosmetic composition. 제2항에 있어서,
상기 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은, 아쿠아포린(Aquaporin, AQP)-3 발현을 향상시켜 피부 보습 효과를 갖는, 피부 보습용 화장료 조성물.
3. The method of claim 2,
The fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with pseudoalteromonas is a cosmetic composition for moisturizing the skin, which improves the expression of aquaporin (AQP)-3 and has a skin moisturizing effect.
제3항에 있어서,
상기 효소처리 진주를 슈도알테로모나스로 발효한 발효물은, TRPV1 발현을 저해하는 것을 특징으로 하는 피부 가려움증 완화용 화장료 조성물.
4. The method of claim 3,
The fermented product obtained by fermenting the enzyme-treated pearls with Pseudoalteromonas is a cosmetic composition for alleviating skin itchiness, characterized in that it inhibits TRPV1 expression.
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