KR102300392B1 - 조 글리세롤을 사용한 바이오매스 및 오일의 고밀도 제조 - Google Patents

조 글리세롤을 사용한 바이오매스 및 오일의 고밀도 제조 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하나 이상의 미생물을 배양하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 하나 이상의 미생물을, 제1 농도 수준으로 조 글리세롤을 포함하는 배지에서 배양하는 단계, 일단 제1 농도의 글리세롤이 제1 역치 수준으로 감소되면, 제1 농도 수준을 달성하기에 충분한 농도로 추가량의 조 글리세롤을 상기 배지에 공급하는 단계, 제1 농도의 조 글리세롤이 제1 역치 수준으로 감소될 때까지 조 글리세롤 농도를 모니터링하는 단계를 포함한다. 상기 단계들은 목적하는 미생물 세포 밀도가 달성될 때까지 반복될 수 있다.

Description

조 글리세롤을 사용한 바이오매스 및 오일의 고밀도 제조
본 출원은 2015년 3월 26일자 출원된 미국 가출원 제62/138,631호를 우선권 주장하고 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다.
미생물의 종속영양 발효는 고가치의 오일 및 바이오매스 생성물을 생산하는 효율적인 방법이다. 특정 배양 조건하에서, 미생물은 세포내 오일을 합성하고 상기 오일은 추출될 수 있고 바이오연료(예를 들어, 바이오디젤, 바이오-제트연료 등) 및 영양 지질(예를 들어, 다불포화 지방산, 예를 들어, DHA, EPA, 및 DPA)을 제조하기 위해 사용된다. 일부 미생물의 바이오매스는 또한 높은 다불포화 지방산(PUFA) 및 단백질 함량으로 인해 높은 영양 가치를 갖고 동물 사료용의 영양 보충물로서 사용될 수 있다. 그러나, 종속영양 발효는 고비용, 고에너지 및 공급원료 소비의 집약적 공정이다. 탄소 공급원료 비용은 전형적으로 미생물 바이오매스 및 오일을 제조하기 위한 총 비용 중 매우 상당 부분을 차지한다. 기존의 미생물 발효는 탄소 공급원으로서 주로 고가의 탄수화물, 예를 들어, 글루코스를 사용한다. 제조 공정이 보다 경제적으로 선호되게 하기 위해 보다 저렴한 탄소 대체물이 연구되고 있다. 글루코스 뿐만 아니라 여러 다른 형태의 탄소, 예를 들어, 프락토스 및 글리세롤은 미생물에 대한 천연 탄소 기질이다. 그러나, 고도로 정제된 글리세롤은 글루코스 보다 고가이다.
하나 이상의 미생물을 배양하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 하나 이상의 미생물을, 제1 농도 수준으로 조 글리세롤을 포함하는 배지에서 배양하는 단계, 일단 상기 제1 농도의 글리세롤이 제1 역치 수준으로 감소되면, 추가량의 조 글리세롤을 상기 제1 농도 수준을 달성하기에 충분한 농도로 상기 배지에 공급하는 단계, 상기 제1 농도 수준의 조 글리세롤이 상기 제1 역치 수준으로 감소될 때까지 상기 조 글리세롤 농도를 모니터링하는 단계를 포함한다. 상기 단계들은 목적하는 미생물 세포 밀도가 달성될 때까지 반복할 수 있다.
또한, 하나 이상의 지방산을 제조하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법은 지방산을 생산할 수 있는 미생물을 제공하는 단계, 조 글리세롤을 포함하는 배지를 제공하는 단계, 및 상기 미생물을, 미생물의 50중량% 이상인 최종 농도의 하나 이상의 불포화 지방산을 제공하는 하나 이상의 지방산을 생산하기에 충분한 조건하에서, 배지에서 배양하는 단계를 포함한다.
도 1은 유일한 탄소 공급원으로서 상이한 바이오디젤 생산자로부터의 다양한 조 글리세롤 피드스톡을 사용한 발효 동안에 시간 프로파일에 따른 바이오매스 농도(g/L)를 보여주는 그래프이다.
도 2는 상이한 용적 비율의 조 글리세롤 및 글루코스의 혼합물을 사용한 발효 동안에 시간 프로파일에 따른 바이오매스 농도(g/L)를 보여주는 그래프이다. 글리세롤은 Rothsay로부터의 조 글리세롤을 의미하고; 글루코스는 750 g/L 글루코스 용액을 의미한다. 상기 비율은 2개 용액의 용적 비율이었다.
도 3은 유일한 공급 탄소 공급원으로서 조 글리세롤을 사용한 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) ONC-T18의 대규모(200,000 L) 발효 동안에 시간 프로파일에 따른 바이오스매스 및 지질 농도를 보여주는 그래프이다.
도 4는 메탄올-기반 바이오디젤 에스테르교환 반응의 도식이다.
바이오연료에 대한 증가된 전세계 수요 및 생산 능력은 거대한 과잉의 조 글리세롤을 부산물로서 생성시켰다. 조 글리세롤의 정제는 매우 큰 투자비용이 요구되고 정제되지 않은 조 글리세롤은 경제적 가치가 거의 없다. 결과적으로, 바이오연료의 많은 제조업체는 조 글리세롤을 일종의 산업 폐기물인 것으로 고려한다. 따라서, 상기 조 글리세롤을 보다 고가치의 생성물로 전환시키는 효율적인 공정은 큰 관심 대상이 된다. 바이오디젤 부산물 글리세롤(일종의 조 글리세롤)은 탄소 공급원으로서 사용되어 왔지만, 고밀도 바이오매스 및 오일은 조 글리세롤 불순물에 의해 유발되는 독성 및 상기 독성을 회피하기 위한 적당한 발효 탄소 공급 전략 부재로 인해 달성되지 않았다. 대조적으로, 본원에서는 조 글리세롤을 사용하여 미생물을 배양하고 오일을 제조하는 방법이 제공된다. 상기 제공된 방법은 발효 동안에 68% 오일을 함유하는 172 g/L의 건조 세포 중량을 달성하는 높은 바이오매스 및 오일 생산을 유도하였다. 상기 생산성은 글루코스-기반 배치식(fed-batch) 발효에 의해 달성될 수 있는 것에 필적할만하다.
따라서, 상기 제공된 방법은 다른 영양 성분과 조합된 부분적 또는 유일한 탄소 기질로서 산업 폐기물인 글리세롤(조)을 사용하여 세포 고밀도(> 100 g/L) 및 오일 고함량(> 50%)으로 미생물을 성장시킬 수 있다. 산업 공급원으로부터의 조 글리세롤은 거의 또는 전혀 전처리를 요구하지 않는다. 조 글리세롤 기질은 한정되고 제어된 방식으로 발효기에 공급되어 임의의 생물학적 억제 효과가 최소 유지되고 매우 높은 바이오매스 및 오일 수율이 달성될 수 있도록 한다. 본원에서 또한 무균 발효 공정을 위해 요구되는 전형적 멸균 과정이 제외될 수 있는 것으로 입증된다. 또한 조 글리세롤의 전처리는 감소되거나 제외될 수 있고 상기 글리세롤은 제조업체로부터 수용되는 경우에서와 같이 미생물 배양물로 공급될 수 있다. 이것은 상기 공정이 상업적 규모로 수행되는 경우 상당한 에너지 비용을 절약한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "전처리"는 물리적으로 또는 생물학적으로 배양 성장에 영향을 줄 수 있는 비-글리세롤 불순물의 제거를 언급한다. 전처리의 예는 불순물을 침전시키고 제거하기 위한 화학적 처리, 배양물 환경의 pH와 일치시키기 위한 pH 조정, 현탁된 고체를 제거하기 위한 여과 또는 원심분리를 포함한다.
본원에서 하나 이상의 미생물을 배양하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 하나 이상의 미생물을, 제1 농도 수준으로 조 글리세롤을 포함하는 배지에서 배양하는 단계, 일단 제1 농도의 글리세롤이 제1 역치 수준으로 감소되면, 상기 제1 농도 수준을 달성하기에 충분한 농도로 추가량의 조 글리세롤을 상기 배지에 공급하는 단계, 및 상기 제1 농도 수준의 조 글리세롤이 제1 역치 수준으로 감소될 때까지 상기 조 글리세롤 농도를 모니터링하는 단계를 포함한다. 임의로, 상기 제1 농도 수준은 1 내지 60 g/L이거나, 1 내지 60 g/L의 임의의 수준이 포함된다. 임의로, 제1 농도 수준은 5 내지 60 g/L, 15 내지 60 g/L, 5 내지 20 g/L, 또는 15 내지 20 g/L이다. 임의로, 상기 제1 역치 수준은 0 내지 5 g/L이거나, 0 내지 5 g/L의 임의의 수준이 포함된다. 따라서, 상기 제1 역치 수준은 예를 들어, 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5 g/L일 수 있다. 임의로, 상기 단계는 목적하는 미생물 세포 밀도가 달성될 때까지 반복된다. 임의로, 상기 목적하는 미생물 세포 밀도는 100 g/L 초과이다. 임의로, 상기 목적하는 세포 밀도는 50 내지 200 g/L, 50 내지 150 g/L, 50 내지 100 g/L, 100 내지 250 g/L, 100 내지 150 g/L, 또는 80 내지 100 g/L이다. 임의로, 상기 세포 밀도는 50 내지 250 g/L의 임의의 밀도가 포함된다. 임의로, 상기 세포 밀도는 80 내지 100 g/L이다. 임의로, 상기 세포 밀도는 120 내지 230 g/L이다. 임의로, 상기 미생물 세포 밀도는 총 지방산의 50중량% 내지 80중량%를 함유한다. 임의로, 상기 총 지방산은 10 내지 45%의 DHA를 포함한다. 임의로, 상기 미생물 세포 밀도는 총 세포 중량을 기준으로 5 내지 36%의 DHA를 함유한다.
상기 미생물은 하나 이상의 지방산을 생산할 수 있다. 따라서, 하나 이상의 지방산을 제조하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법은 지방산을 생산할 수 있는 미생물을 제공하는 단계, 조 글리세롤을 포함하는 배지를 제공하는 단계, 및 상기 미생물을, 미생물의 50중량% 이상인 최종 농도의 하나 이상의 불포화 지방산을 제공하는 하나 이상의 지방산을 생산하기에 충분한 조건하에서 배지에서 배양하는 단계를 포함한다. 임의로, 상기 지방산은 다불포화 지방산이다. 상기 다불포화 지방산은 예를 들어, 알파 리놀렌산, 아라키돈산, 도코사헥산엔산, 도코사펜타엔산, 에이코사펜타엔산, 감마-리놀렌산, 리놀레산, 리놀렌산 및 이들의 조합물일 수 있다.
상기 제공된 방법에서, 조 글리세롤 농도의 모니터링은 당업자에게 공지된 다양한 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 임의로, 상기 모니터링은 용존 산소 수준을 측정함을 포함한다. 임의로, 상기 모니터링은 배지의 샘플을 수득하고 상기 샘플 중 글리세롤 농도를 계측함을 포함한다. 임의로, 상기 모니터링은 열량측정 검정, 화학 반응 기반 열량측정 검정, 형광 검정, HPLC 검정, 효소적 검정 또는 이들의 조합을 사용하여 샘플을 분석함을 포함한다.
상기 제공된 방법에 사용하기에 적합한 다양한 미생물이 있다. 본원에 기재된 미생물은 조류(예를 들어, 미세조류), 진균류(예컨대, 효모), 세균 또는 원생생물일 수 있다. 임의로, 상기 미생물은 트라우스토키트리알레스(Thraustochytriales) 목의 트라우스토키트리드(Thraustochytrid), 보다 구체적으로 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) 속의 트라우스토키트리알레스(Thraustochytriales)를 포함한다. 임의로, 미생물 집단은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제5,340,594호 및 제5,340,742호에 기재된 바와 같은 트라우스토키트리알레스(Thraustochytriales)를 포함한다. 상기 미생물은 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) 종, 예를 들어, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제8,163,515호에 기재된 바와 같은 ATCC 수탁 번호 PTA-6245(즉, ONC-T18)로서 기탁된 트라우스토키트리움(Thraustochytrium)일 수 있다. 따라서, 상기 미생물은 서열번호 1과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9% 이상(예를 들어, 100%를 포함하는) 동일한 18s rRNA 서열을 가질 수 있다.
본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 미생물은 다양한 지질 화합물을 생산할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "지질"은 인지질, 유리 지방산, 지방산의 에스테르, 트리글리세롤, 스테롤 및 스테롤 에스테르, 카로티노이드, 크산토필(예를 들어, 옥시카로티노이드), 탄화수소 및 당업자에게 공지된 다른 지질을 포함한다. 임의로, 상기 지질 화합물은 불포화 지질을 포함한다. 상기 불포화 지질은 다불포화 지질(즉, 2개 이상의 불포화 탄소-탄소 결합, 예를 들어, 이중 결합을 함유하는 지질) 또는 고도의 불포화 지질(즉, 4개 이상의 불포화 탄소-탄소 결합을 함유하는 지질)을 포함할 수 있다. 불포화 지질의 예는 오메가-3 및/또는 오메가-6 다불포화 지방산, 예를 들어, 도코사헥사엔산(즉, DHA), 에이코사펜타엔산(즉, EPA) 및 상기 긴 유도기가 급격히 감축되는 10% 시드(seed) 용량으로 접종된 다른 천연에 존재하는 불포화, 다중 불포화 및 고도의 불포화 화합물을 포함한다.
상기 제공된 방법은 당업계에 공지된 방법에 따라 미생물을 배양하기 위한 추가의 단계를 포함하거나 이와 연계하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 트라우스토키트리드, 예를 들어, 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) 종은 본원에 사용된 방법 및 조성물의 각각의 단계에 대해 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된 미국 특허 공개 제 2009/0117194호 또는 제2012/0244584호에 기재된 방법에 따라 배양될 수 있다.
미생물은 성장 배지(또한 "배양 배지"로서 공지됨)에서 성장시킨다. 임의의 다양한 배지는 본원에 기재된 미생물을 배양하는데 사용하기 위해 적합할 수 있다. 임의로, 상기 배지는 다양한 영양 성분을 공급하고, 이는 미생물을 위해 탄소 공급원 및 질소 공급원을 포함한다. 트라우스토키트리드 배양을 위한 배지는 임의의 다양한 탄소 공급원을 포함할 수 있다. 탄소 공급원의 예는 지방산, 지질, 글리세롤, 트리글리세롤, 탄수화물, 폴리올, 아미노 당, 및 임의의 유형의 바이오매스 또는 폐기 스트림을 포함한다. 지방산은 예를 들어, 올레산을 포함한다. 탄수화물은 글루코스, 셀룰로스, 헤미셀룰로스, 프락토스, 덱스트로스, 크실로스, 락툴로스, 갈락토스, 말토트리오스, 말토스, 락토스, 글리코겐, 젤라틴, 전분(옥수수 또는 밀), 아세테이트, m-이노시톨(예를 들어, 옥수수 침지액으로부터 유래된), 갈락투론산(예를 들어, 펙틴으로부터 유래된), L-푸코스(예를 들어, 갈락토스로부터 유래된), 젠티오비오스, 글루코사민, 알파-D-글루코스-1-포스페이트(예를 들어, 글루코스로부터 유래돤), 셀로비오스, 덱스트린, 알파-사이클로덱스트린(예를 들어, 전분으로부터 유래된), 및 슈크로스(예를 들어, 당밀 기원)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 폴리올은 말티톨, 에리트리톨 및 아도니톨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 아미노 당은 N-아세틸-D-갈락토사민, N-아세틸-D-글루코사민, 및 N-아세틸-베타-D-만노스아민을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
상기 제공된 방법에 사용된 배지(media)는 조 글리세롤을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "조 글리세롤"은 제조 공정, 예를 들어, 바이오디젤 생산의 부산물을 언급한다. 용어 "조 글리세롤"은 이들 생성물이 유일하게 또는 필수적으로 순수 형태로 "글리세롤" 또는 "글리세린"을 포함하기 때문에 용어 "글리세롤" 또는 "글리세린"과 구분된다. 상기 용어 "글리세롤" 및 "글리세린"은 본원 전반에 걸쳐 상호교환적으로 사용된다. 따라서, 조 글리세롤은 순수한 글리세롤 또는 글리세린으로부터의 추가의 제제 및/또는 성분을 함유한다. 임의로, 조 글리세롤은 바이오디젤 생산의 부산물이다. 조 글리세롤은 트리글리세리드 에스테르교환 반응을 통한 바이오디젤 생산의 주 부산물 또는 트리글리세라이드의 가수분해(비누화)를 통한 비누 생산의 부산물이다. 예를 들어, 전형적인 바이오디젤 공정은 지방산(바이오디젤) 및 글리세롤의 에스테르를 형성하기 위한 지방 또는 오일(트리글리세리드)과 메탄올과 같은 알코올의 반응이다. 메탄올-기반 반응의 예는 도 4에 나타낸다. 나트륨 메틸레이트와 같은 화학적 촉매에 의해 흔히 원조되는 반응 자체 뿐만 아니라 지방/오일 내 불순물로 인해, 최종 글리세롤 분획물은 상대적 높은 함량의 불순물을 함유한다. 전형적인 조 글리세롤의 조성물 및 물리적 성질은 표 1(참조: 분석의 REG Ralston 조 글리세롤 서티피케이트)에 나타낸다. 동일한 조 글리세롤의 회분(ash) 조성물은 표 2에 나타낸다. 조 글리세롤 특징분석의 보다 많은 예는 이의 전문이 참조로 인용되는 문헌[Thompson and He, Applied Engineering in Agriculture, Vol. 22(2): 261-265 (2006), and by Hu et al., J. Agric. Food Chem., 2012, 60(23):5915-5921 (2012)]에서 발견될 수 있다.
Figure 112017104903593-pct00001
Figure 112017104903593-pct00002
임의로, 조 글리세롤은 배지에서 유일한 탄소 공급원이다. 임의로, 상기 배지는 하나 이상의 추가의 탄소 공급원을 포함한다. 임의로, 상기 조 글리세롤은 멸균되지 않거나 전처리되지 않는다. 임의로, 상기 조 글리세롤은 메탄올, 물, 회분, 비-글리세린 유기물, 황산나트륨, 메틸 탈로웨이트(tallowate), 또는 이들의 조합물을 포함한다. 임의로, 상기 회분은 칼슘, 철, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 아연 또는 이들의 조합물을 포함한다.
임의로, 본원에 제공된 미생물은 바이오매스 및/또는 목적하는 화합물(예를 들어, 오일 또는 총 지방산(TFA) 함량)의 생산을 증가시키는 조건하에서 배양된다. 트라우스토키트리드는 예를 들어, 전형적으로 식염수 배지에서 배양된다. 임의로, 트라우스토키트리드는 약 0.5 g/L 내지 약 50.0 g/L의 염 농도를 갖는 배지에서 배양될 수 있다. 임의로, 트라우스토키트리드는 약 0.5 g/L 내지 약 35 g/L(예를 들어, 약 18 g/L 내지 약 35 g/L)의 염 농도를 갖는 배지에서 배양된다. 임의로, 본원에 기재된 트라우스토키트리드는 저염 조건에서 성장될 수 있다. 예를 들어, 트라우스토키트리드는 약 0.5 g/L 내지 약 20 g/L(예를 들어, 약 0.5 g/L 내지 약 15 g/L)의 염 농도를 갖는 배지에서 배양될 수 있다. 상기 배양 배지는 임의로 NaCl을 포함한다. 임의로, 상기 배지는 천연 또는 인공 해염 및/또는 인공 해수를 포함한다.
상기 배양 배지는 나트륨의 공급원으로서 비-클로라이드-함유 나트륨 염을 포함할 수 있다. 본 발명의 방법에 따라 사용하기에 적합한 비-염화나트륨 염의 예는 소다회(탄산나트륨 및 산화나트륨의 혼합물), 탄산나트륨, 중탄산나트륨, 황산나트륨 및 이들의 혼합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 미국 특허 제5,340,742호 및 제6,607,900호를 참조하고, 이들 각각의 전체 내용은 본원에 참조로 인용된다. 총 나트륨의 상당 부분은 예를 들어, 비-클로라이드 염에 의해 공급될 수 있어 배양 배지 중 약 100%, 75%, 50% 또는 25% 미만의 총 나트륨이 염화나트륨에 의해 공급된다.
임의로, 상기 배양 배지는 약 3 g/L, 500 mg/L, 250 mg/L, 또는 120 mg/L 미만의 클로라이드 농도를 갖는다. 예를 들어, 상기 제공된 방법에 사용하기 위한 배양 배지는 약 60 mg/L 내지 120 mg/L 및 이를 포함하는 클로라이드 농도를 가질 수 있다.
트라우스토키트리드 배양을 위한 배지는 임의의 다양한 질소 공급원을 포함할 수 있다. 예시적 질소 공급원은 암모늄 용액(예를 들어, H2O 중 NH4), 암모늄 또는 아민 염(예를 들어, (NH4)2SO4, (NH4)3PO4, NH4NO3, NH4OOCH2CH3(NH4Ac)), 펩톤, 트립톤, 효모 추출물, 맥아 추출물, 어분(fish meal), 나트륨 글루타메이트, 대두 추출물, 카사미노산 및 증류 곡물을 포함한다. 적합한 배지에서 질소 공급원의 농도는 전형적으로 약 1 g/L 내지 약 25 g/L의 범위 및 이를 포함하는 범위이다.
상기 배지는 임의로 포스페이트, 예를 들어, 인산칼륨 또는 인산나트륨을 포함한다. 배지에서 무기염 및 미량 영양물은 황산암모늄, 중탄산나트륨, 나트륨 오르토바나데이트, 칼륨 크로메이트, 나트륨 몰리브데이트, 셀레노우스산, 황산니켈, 황산구리, 황산아연, 염화코발트, 염화철, 염화마그네슘, 염화칼슘 및 EDTA를 포함할 수 있다. 피리독신 하이드로클로라이드, 티아민 클로라이드, 칼슘 판토테네이트, p-아미노벤조산, 리보플라빈, 니코틴산, 비오틴, 폴산 및 비타민 B12와 같은 비타민이 포함될 수 있다.
배지의 pH는 적당한 경우 산 또는 염기를 사용하고/하거나 질소 공급원을 사용하여 3.0 내지 10.0 및 이를 포함하는 pH로 조정될 수 있다. 임의로, 상기 배지는 멸균될 수 있다.
일반적으로, 미생물 배양을 위해 사용되는 배지는 액체 배지이다. 그러나, 미생물 배양을 위해 사용되는 배지는 고체 배지일 수 있다. 본원에 논의된 바와 같은 탄소 공급원 및 질소 공급원 이외에 추가로, 고체 배지는 구조 지지체를 제공하고/하거나 상기 배지가 고체 형태로 있도록 하는 하나 이상의 성분(예를 들어, 한천 또는 아가로스)을 함유할 수 있다.
임의로, 상기 수득한 바이오매스를 저온 살균하여 상기 바이오매스 내에 존재하는 목적하지 않은 물질을 불활성화시킨다. 예를 들어, 상기 바이오매스를 저온 살균하여 화합물 분해 물질을 불활성화시킬 수 있다. 상기 바이오매스는 발효 배지에 존재할 수 있거나 저온살균 단계를 위해 발효 배지로부터 단리될 수 있다. 상기 저온살균 단계는 상기 바이오매스 및/또는 발효 배지를 고온으로 가열함에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 상기 바이오매스 및/또는 발효 배지는 약 50°C 내지 약 95°C(예를 들어, 약 55°C 내지 약 90°C 또는 약 65°C 내지 약 80°C)의 온도로 가열될 수 있다. 임의로, 상기 바이오매스 및/또는 발효 배지는 약 30분 내지 약 120분(예를 들어, 약 45분 내지 약 90분, 또는 약 55분 내지 약 75분) 동안 가열될 수 있다. 상기 저온살균은 예를 들어, 직접 증기 주입에 의해서와 같은 적합한 가열 수단을 사용하여 수행될 수 있다.
임의로, 저온살균 단계는 수행되지 않는다. 다시 말해서 본원에 교시된 방법은 임의로 저온살균 단계가 없다.
임의로, 상기 바이오매스는 현재 당업자에게 공지된 방법들을 포함하는 다양한 방법에 따라 수거될 수 있다. 예를 들어, 상기 바이오매스는 예를 들어, 원심분리(예를 들어, 고체-분사 원심분리와 함께) 또는 여과(예를 들어, 직교류 여과)를 사용하여 발효 배지로부터 수거될 수 있다. 임의로, 상기 수거 단계는 세포 바이오매스의 가속화된 수거를 위한 침전제(예를 들어, 인산나트륨 또는 염화칼슘)의 사용을 포함한다.
임의로, 상기 바이오매스는 물로 세척한다. 임의로, 상기 바이오매스는 약 20% 고체까지 농축될 수 있다. 예를 들어, 상기 바이오매스는 약 5% 내지 약 20% 고체, 약 7.5% 내지 약 15% 고체, 또는 약 고체 내지 약 20% 고체, 또는 상기된 범위내 임의의 백분율로 농축될 수 있다. 임의로, 상기 바이오매스는 약 20% 이하의 고체, 약 19% 이하의 고체, 약 18% 이하의 고체, 약 17% 이하의 고체, 약 16% 이하의 고체, 약 15% 이하의 고체, 약 14% 이하의 고체, 약 13% 이하의 고체, 약 12% 이하의 고체, 약 11% 이하의 고체, 약 10% 이하의 고체, 약 9% 이하의 고체, 약 8% 이하의 고체, 약 7% 이하의 고체, 약 6% 이하의 고체, 약 5% 이하의 고체, 약 4% 이하의 고체, 약 3% 이하의 고체, 약 2% 이하의 고체 또는 약 1% 이하의 고체로 농축될 수 있다.
상기 제공된 방법은 임의로 바이오매스 또는 미생물로부터 다불포화 지방산을 단리시키는 것을 포함한다. 다불포화 지방산의 단리는 현재 당업자에게 공지된 것들을 포함하는 하나 이상의 다양한 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 다불포화 지방산을 단리시키는 방법은 이의 전문이 참조로 인용된 미국 특허 제8,163,515호에 기재되어 있다. 임의로, 상기 배지는 다불포화 지방산의 단리 전에 멸균되지 않는다. 임의로, 멸균은 온도의 증가를 포함한다. 임의로, 미생물에 의해 생산되고 상기 제공된 방법으로부터 단리된 다불포화 지방산은 중간 쇄 지방산이다. 임의로, 하나 이상의 다불포화 지방산은 알파 리놀렌산, 아라키돈산, 도코사헥사엔산, 도코사펜타엔산, 에이코사펜타엔산, 감마-리놀렌산, 리놀레산, 리놀렌산 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 기재된 방법에 따라 제조된 다불포화 지방산(PUFA) 및 다른 지질을 포함하는 오일은 이들의 생물학적, 영양학적 또는 화학적 성질을 활용하는 임의의 다양한 응용에서 사용될 수 있다. 따라서, 상기 제공된 방법은 임의로 역치 용적의 수거된 부분으로부터 오일을 단리시킴을 포함한다. 임의로, 상기 오일은 연료, 예를 들어, 바이오연료를 제조하기 위해 사용된다. 임의로, 상기 오일은 약제, 식품 보충제, 동물 사료 첨가제, 화장제 등에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 방법에 따라 제조된 지질은 또한 다른 화합물의 제조에서 중간체로서 사용될 수 있다.
예를 들어, 상기 제공된 방법을 사용하여 배양된 미생물에 의해 제조된 오일은 지방산을 포함할 수 있다. 임의로, 상기 지방산은 알파 리놀렌산, 아라키돈산, 도코사헥사엔산, 도코사펜타엔산, 에이코사펜타엔산, 감마-리놀렌산, 리놀레산, 리놀렌산, 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 임의로, 상기 오일은 트리글리세리드를 포함한다. 임의로, 상기 오일은 팔미트산(C16:0), 미리스트산(C14:0), 팔미톨레산(C16:1(n-7)), 시스-박센산(C18:1(n-7)), 도코사펜타엔산(C22:5(n-6)), 도코사헥사엔산(C22:6(n-3)), 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 지방산을 포함한다.
임의로, 본원에 기재된 방법에 따라 제조된 지질은 최종 제품(예를 들어, 식품 또는 사료 보충제, 유아식, 약제, 연료 등)에 혼입될 수 있다. 지질이 혼입될 수 있는 적합한 식품 또는 사료 보충제는 우유, 물, 스포츠 드링크, 에너지 드링크, 차 및 주스와 같은 음료; 캔디, 젤리 및 비스킷과 같은 당과 제품; 낙농 제품과 같은 지방-함유 식품 및 음료; 연질미(soft rice)와 같은 가공 식품(또는 오트밀); 유아식; 조식 시리얼 등을 포함한다. 임의로, 하나 이상의 제조된 지질은 예를 들어, 비타민 또는 종합비타민과 같은 식이 보충제에 혼입될 수 있다. 임의로, 본원에 기재된 방법에 따라 제조된 지질은 식이 보충제에 포함될 수 있고 임의로 음식 또는 사료(예를 들어, 음식 보충제)에 직접 혼입될 수 있다.
본원에 기재된 방법에 의해 제조된 지질이 혼입될 수 있는 사료의 예는 고양이 음식, 개 음식 등과 같은 애완 동물 음식, 아쿠아리움 어류, 사육된 어류 또는 갑각류 등을 위한 음식; 농장 사육된 동물(예컨대, 가축, 및 수경배양으로 사육된 어류 또는 갑각류)에 대한 사료를 포함한다. 본원에 기재된 방법에 따라 제조된 지질이 혼입될 수 있는 음식 또는 사료 재료는 바람직하게 의도된 수용자인 유기체에게 맛이 좋을 수 있다. 상기 음식 또는 사료 재료는 현재 음식 재료(예를 들어, 고체, 액체, 연질)를 위해 공지된 임의의 물리적 성질을 가질 수 있다.
임의로, 하나 이상의 제조된 화합물(예를 들어, PUFA)은 영양학적 제제 또는 약제에 혼입될 수 있다. 상기 영양학적 제제 또는 약제의 예는 다양한 유형의 정제, 캡슐제, 음용가능한 제제 등을 포함한다. 임의로 영양학적 제제 또는 약제는 국소 적용을 위해 적합하다. 용량 투여 형태는 예를 들어, 캡슐, 오일, 과립, 과립 서브틸라, 분말제(pulveres), 타벨라(tabellae), 필루아(pilulae), 트로키제(trochisci) 등을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 방법에 따라 제조된 오일 또는 지질은 임의의 다양한 다른 제제와 조합하여 본원에 기재된 바와 같은 제품에 혼입될 수 있다. 예를 들어, 상기 화합물은 하나 이상의 결합제 또는 충전제, 킬레이팅제, 안료, 염, 계면활성제, 습윤화제, 점도 변형제, 증점제, 연화제, 향제, 방부제 등 또는 이들의 임의의 조합물과 배합될 수 있다.
이를 위해 사용될 수 있거나, 이와 연계하여 사용될 수 있거나, 이의 제조에 사용될 수 있거나, 기재된 방법 및 조성물의 제품인 물질, 조성물 및 성분들이 기재되어 있다. 이들 및 다른 물질이 본원에 기재되어 있고 이들 물질의 조합, 서브세트, 상호작용, 그룹 등이 각각의 다양한 개별 및 총체적 배합 및 이들 화합물의 순열에 대한 특정 참조가 명백히 기재되지 않을 수 있고 각각은 구체적으로 고려되고 본원에 기재되어 있다. 예를 들어, 방법이 기재되고 논의되고 상기 방법을 포함하는 다수의 분자에 가해질 수 있는 다수의 변형이 논의되는 경우, 상기 방법의 각각 및 모든 조합 및 순열은 반대로 구체적으로 기재되지 않은 경우 구체적으로 고려된다. 또한, 이들의 임의의 서브세트 또는 조합이 또한 구체적으로 고려되고 기재된다. 이러한 개념은 기재된 조성물을 사용한 방법에서의 단계를 포함하지만 이에 제한되지 않는 모든 측면의 상기한 바의 모든 양상에 적용한다. 따라서, 수행될 수 있는 다양한 추가의 단계가 있는 경우, 이들 추가 단계 각각은 임의의 특정 방법 단계 또는 기재된 방법 단계의 조합으로 수행될 수 있고 각각의 상기 조합 또는 조합의 서브세트가 구체적으로 고려되고 기재된 것으로 고려되어야 하는 것으로 이해된다.
본원 전반에 걸쳐 사용된 바와 같은 범위(예를 들어, 1 내지 10) 및 대략적인 소정의 값에 대한 언급(예를 들어, 약 1 또는 약 10)은 기재된 값(예를 들어, 1 및/또는 10)을 포함한다.
본원에 인용된 공보 및 이들이 인용되는 자료는 이들의 전문이 본원에 구체적으로 인용된다.
하기 실시예는 본원에 기재된 방법 및 조성물의 특정 측면을 추가로 설명하는 것으로 의도되고 특허청구범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예
실시예 1. 조 글리세롤 발효
4개 스트림의 조 글리세롤은 3개의 상이한 바이오디젤 제조업체(Rothsay(Winnipeg, Canada), BIOX(Hamilton, Canada), 및 REG Newton LLC(Newton, Iowa))로부터 구입하였다. 이들의 조성은 상응하는 제조업체에 의해 제공된 정보를 기준으로 표 3에 열거되어 있다. 상이한 조 글리세롤 간에 큰 변동성이 나타나는 것이 명백하였다.
Figure 112017104903593-pct00003
연구실 규모의 발효 실험을 수행하기 위해, Rothsay 및 BIOX 65 조 글리세롤의 pH는 수산화나트륨 용액을 사용하여 5.5로 조정하였다. BIOX 98 및 REG Newton 조 글리세롤은 pH 조정하지 않았다. 이어서, 모든 조 글리세롤 스트림은 오토클레이빙하고 유일한 탄소 공급원으로서 사용하여 2L 발효기에서 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) ONC-T18의 별도의 조 글리세롤-기반 배치식 발효를 수행하였다. 모든 초기 발효 배지는(리터 당) 다음을 함유하였다: 글리세롤 60 g, 대두 펩톤 2 g; 염화나트륨 1.65 g; 황산마그네슘 7수화물 4 g; 황산칼륨 일염기성 2.2 g; 인산칼륨 이염기성 2.4 g; 황산암모늄 20 g; 염화칼슘 2수화물 0.1 g; 염화철 0.003 g; 황산구리 5수화물 0.003 g; 몰리브덴나트륨 탈수화물 0.0015 g; 황산아연 7수화물 0.003 g; 염화코발트 6수화물 0.0015 g; 염화망간 4수화물 0.0015 g; 황산니켈 6수화물 0.0015 g; 비타민 B12 0.00003 g; 비오틴 0.00003 g; 티아민 하이드로클로라이드 0.006 g. 2L 발효기는 Rothsay, BIOX 65 및 BIOX 98 발효를 위해 사용하였고, 5L 발효기는 REG Newton 발효를 위해 사용하였다. 모든 발효의 pH는 수산화나트륨 및 인산 용액에 의해 4.5 ± 0.2로 조절하였다. 모든 발효의 온도는 28°C에서 조절하였다. 모든 발효는 유일한 탄소 피드스톡으로서 상응하는 조 글리세롤을 사용하여 배치식 방식으로 작동하였다. 적당한 시점에서, 조 글리세롤의 용량은 배지 내 글리세롤 농도를 60 g/L(2L 수행을 위해), 또는 20 g/L(5L 수행을 위해)로 하기 위해 발효기에 자동으로 펌핑하였다.
상기 탄소 공급은 특정 바이오매스 농도 및 세포내 오일 함량에 도달할 때까지 전체 발효 동안에 수행하였다. 140 g/L 내지 165 g/L 범위의 최종 바이오매스 농도가 달성되었고(도 1), 이는 65% 내지 78%(표 4) 범위의 세포내 지질을 함유한다. 시험된 조 글리세롤 피드스톡 및 이들에 적용된 최소 전처리 중에서 품질 변화를 고려하여, 이들 결과는 조 글리세롤 부산물을 사용한 상업적으로 생존가능한 바이오매스 및 지질 제조를 수행하기 위한 개발된 높은 세포/지질 밀도 배치식 발효 공정이 막강함을 양호하게 입증하였다.
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실시예 2. 혼합 탄소 공급원 발효
충분하고 연속적인 양의 탄소 피드스톡 공급은 발효 기반 생산 공장의 가동을 위해 매우 중요하다. 주요 탄소 피드스톡이 짧은 공급 상태로 있는 상황하에서, 보충제 탄소 피드스톡을 활용할 수 있는 것은 공장의 지연된 가동을 위해 중요할 수 있다. 따라서, 글루코스와 조 글리세롤의 혼합물을 사용한 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) ONC-T18의 발효를 수행하였다. 글루코스가 지질 제조를 위한 트라우스토키트리드의 고밀도 발효를 위해 널리 공지된 탄소 공급원이지만, 글루코스가 동일한 발효에서 제2 탄소 공급원과 함께 사용되는 경우 탄소 이화생성물 억제가 발생하는지는 명백하지 않았다. 2개의 2L 발효기는 실시예 1에 보여진 바와 동일한 초기 배지 제형을 사용하여 준비하였다. 실시예 1에서 보여지는 사양을 갖는, Rothway로부터의 조 글리세롤을 수득하였고; 750 g/L 글루코스 용액을 또한 제조하였다. 이어서, 조 글리세롤 및 글루코스 용액을 제1 발효기를 위한 탄소 공급물로서 80:20 용적 비로 물리적으로 혼합하였고 제2 발효기를 위한 공급물로서 20:80 용적 비율로 혼합하였다. 상기 발효는 실시예 1에 기재된 동일한 탄소 공급 전략에 의해 수행하였다. 도 2 및 표 5에 나타낸 데이터에 의해 입증된 바와 같이, 혼합 탄소 공급물로서 조 글리세롤 및 글루코스를 사용하여 바이오매스 및 지질을 제조하였고 이의 결과는 조 글리세롤이 유일한 탄소 공급물로서 사용되는 경우에서의 결과에 상응하였다. 바람직한 탄소 공급원의 존재가, 2개 탄소가 성장 배지에 존재하는 경우 제2 탄소 공급원의 대사를 억제하는 현상인 탄소 이화물 억제는 본 실시예에서의 경우인 것으로 밝혀지지 않았다. 발효 동안에, 글리세롤 및 글루코스 둘다는 배양 공정 전반에 걸쳐 동시에 소모되었다. 본 실시예는 트라우스토키트리드의 상업적 배양 동안에 조 글리세롤이 주요 탄소 공급원 또는 소수 탄소 공급원으로서 사용될 수 있고 제2 탄소 피드스톡이 동일한 발효에 사용될 수 있음을 입증한다. 탄소 사용법에서의 상기 유연성은 대규모 발효 공정 가동의 안정성을 보장한다.
Figure 112017104903593-pct00005
실시예 3. 혼합된 조 글리세롤 발효
실시예 2와 유사하게 지속적 대규모 공장 가동을 위해, 또한 상이한 바이오디젤 제조 공정으로부터 조 글리세롤의 혼합물을 사용할 수 있는 것이 유리하다. 상기 목적을 위해, 4개 스트림의 조 글리세롤은 동등한 용적 비율로 혼합하여 조 글리세롤 혼합물을 형성하였다. 각각의 스트림의 세부 사항은 표 6에 열거한다. 혼합한 후, 조 글리세롤 혼합물은 임의의 추가의 처리(예를 들어, pH 조정, 여과) 또는 멸균 없이 탄소 공급물로서 사용하였다. 30L 발효기는 상기 실험을 위해 준비하였고 초기 배양 배지는 실시예 1에 보여진 바와 동일한 제형을 갖되, 멸균화 과정 전 어떠한 글리세롤도 초기 배지에 첨가되지 않았다. 접종 후 즉시, 조 글리세롤 혼합물은 실시예 1에 기재된 공급 전략에 따라 공급하였고, 각각의 용량 투여는 배지내 글리세롤 농도가 20 g/L가 되도록 한다. 70시간까지, 바이오매스는 171.54 g/L에 도달하였고, 지질은 68.00%였다. 멸균화 없이 사용되지만 발효는 오염이 없었다.
Figure 112017104903593-pct00006
실시예 4. 상업적 바이오매스 및 지질 제조를 위한 조 글리세롤
상업적 바이오매스 및 지질 제조를 위해 개발된 조 글리세롤 기반 발효 공정의 실행가능성을 입증하기 위해, 2개의 대규모(200,000L) 발효를 수행하였다. REG Ralston 조 글리세롤을 임의의 전처리 또는 멸균화 없이 유일한 공급 탄소 공급원으로서 사용하였다. 상기 배지 제형은 실시예 1에 기재된 바와 동일하되, 단지 30 g/L의 글루코스가 초기 배지에 첨가되었고, 1 g/L의 대두 펩톤이 제1 배치에 사용되었고 1 g/L의 옥수수 침지 고형물(대두 펩톤 대신)이 제2 배치에 사용되었다. 발효는 pH 4.5 ± 0.3에서 수행하였고, 온도는 29 ± 1°C로 조절하였다. 2개의 발효 중 하나의 바이오매스 및 지질 시간 프로파일은 도 3에 나타내고; 2개의 대규모 수행으로부터 완전한 공정 메트릭스는 표 7에 열거한다. 평균적으로, 126.53 g/L의 지질을 갖는 180.76 g/L 바이오매스는 임의의 전처리 또는 멸균화 과정 없이 유일한 공급 탄소 공급원으로서 바이오디젤 조 글리세롤 부산물을 사용하여 200,000 L 발효기에 의해 제조될 수 있다. 이들 결과는 바이오매스 및 지질의 대규모 상업적 제조를 위한 탄소 피드스톡으로서 조 글리세롤을 사용하는 능력을 입증한다.
Figure 112019031718150-pct00012
SEQUENCE LISTING <110> Mara Renewables Corporation <120> High Density Production of Biomass and Oil Using Crude Glycerol <130> 095523-0972128 (011WO1) <140> PCT/IB2016/051722 <141> 2016-03-25 <150> US 62/138,631 <151> 2015-03-26 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1723 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 gtagtcatac gctcgtctca aagattaagc catgcatgtg taagtataag cgattatact 60 gtgagactgc gaacggctca ttatatcagt tatgatttct tcggtatttt ctttatatgg 120 atacctgcag taattctgga attaatacat gctgagaggg cccgactgtt cgggagggcc 180 gcacttatta gagttgaagc caagtaagat ggtgagtcat gataattgag cagatcgctt 240 gtttggagcg atgaatcgtt tgagtttctg ccccatcagt tgtcgacggt agtgtattgg 300 actacggtga ctataacggg tgacggggag ttagggctcg actccggaga gggagcctga 360 gagacggcta ccacatccaa ggaaggcagc aggcgcgtaa attacccaat gtggactcca 420 cgaggtagtg acgagaaata tcaatgcggg gcgcttcgcg tcttgctatt ggaatgagag 480 caatgtaaaa ccctcatcga ggatcaactg gagggcaagt ctggtgccag cagccgcggt 540 aattccagct ccagaagcgt atgctaaagt tgttgcagtt aaaaagctcg tagttgaatt 600 tctggggcgg gagccccggt ctttgcgcga ctgcgctctg tttgccgagc ggctcctctg 660 ccatcctcgc ctcttttttt agtggcgtcg ttcactgtaa ttaaagcaga gtgttccaag 720 caggtcgtat gacctggatg tttattatgg gatgatcaga tagggctcgg gtgctatttt 780 gttggtttgc acatctgagt aatgatgaat aggaacagtt gggggtattc gtatttagga 840 gctagaggtg aaattcttgg atttccgaaa gacgaactac agcgaaggca tttaccaagc 900 atgttttcat taatcaagaa cgaaagtctg gggatcgaag atgattagat accatcgtag 960 tctagaccgt aaacgatgcc gacttgcgat tgcggggtgt ttgtattgga ccctcgcagc 1020 agcacatgag aaatcaaagt ctttgggttc cggggggagt atggtcgcaa ggctgaaact 1080 taaaggaatt gacggaaggg caccaccagg agtggagcct gcggcttaat ttgactcaac 1140 acgggaaaac ttaccaggtc cagacatagg taggattgac agattgagag ctctttcttg 1200 attctatggg tggtggtgca tggccgttct tagttggtgg agtgatttgt ctggttaatt 1260 ccgttaacga acgagacctc ggcctactaa atagcggtgg gtatggcgac atacttgcgt 1320 acgcttctta gagggacatg ttcggtatac gagcaggaag ttcgaggcaa taacaggtct 1380 gtgatgccct tagatgttct gggccgcacg cgcgctacac tgatgggttc aacgggtggt 1440 catcgttgtt cgcagcgagg tgctttgccg gaaggcatgg caaatccttt caacgcccat 1500 cgtgctgggg ctagattttt gcaattatta atctccaacg aggaattcct agtaaacgca 1560 agtcatcagc ttgcattgaa tacgtccctg ccctttgtac acaccgcccg tcgcacctac 1620 cgattgaacg gtccgatgaa accatgggat gaccttttga gcgtttgttc gcgagggggg 1680 tcagaactcg ggtgaatctt attgtttaga ggaaggtgaa gtc 1723

Claims (33)

  1. 하나 이상의 지방산을 생산하는 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) 미생물을 배양하는 방법으로서,
    (a) 트라우스토키트리움 미생물을, 질소 공급원과 15 g/L 내지 60 g/L의 제1 농도 수준의 조 글리세롤(crude glycerol)을 포함하는 배지에서 배양하는 단계;
    (b) 글리세롤의 제1 농도가 0 g/L 내지 5 g/L의 제1 역치 수준으로 감소되면, 추가량의 조 글리세롤을 상기 제1 농도 수준을 달성하기에 충분한 농도로 상기 배지에 공급하는 단계로서, 상기 공급 동안 배지에 질소 공급원은 첨가하지 않는, 단계;
    (c) 조 글리세롤의 제1 농도 수준이 제1 역치 수준으로 감소될 때까지 조 글리세롤 농도를 모니터링하는 단계;
    (d) 목적하는 미생물 세포 밀도가 달성될 때까지 단계 (b) 및 (c)를 반복하는 단계; 및
    (e) 지방산을 단리시키는 단계
    를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 트라우스토키트리움 미생물이 ATCC 수탁 번호 PTA-6245를 갖는 미생물인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 지방산이 다불포화 지방산인, 방법.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 다불포화 지방산이 알파 리놀렌산, 아라키돈산, 도코사헥사엔산, 도코사펜타엔산(docosapentaenoic acid), 에이코사펜타엔산(eicosapentaenoic acid), 감마-리놀렌산, 리놀레산, 리놀렌산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 모니터링이 용존 산소 수준을 측정함을 포함하는, 방법.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 모니터링이 상기 배지의 샘플을 수득하고 상기 샘플 중 글리세롤 농도를 계측함을 포함하는, 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 모니터링이 열량측정 검정, 형광 검정, HPLC 검정, 효소적 검정 또는 이들의 조합을 사용하여 상기 샘플을 분석함을 포함하는, 방법.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 세포 밀도가 50 g/L 내지 250 g/L인, 방법.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    목적하는 미생물 세포 밀도가 달성될 때, 미생물이 총 세포 중량을 기준으로 50 중량% 내지 80 중량%의 총 지방산을 함유하는, 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 지방산이, 지방산의 총 중량을 기준으로 10중량% 내지 45중량%의 DHA를 포함하는, 방법.
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    목적하는 미생물 세포 밀도가 달성될 때, 미생물이 총 세포 중량을 기준으로 5중량% 내지 36중량%의 DHA를 함유하는, 방법.
  12. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 배지가 하나 이상의 추가의 탄소 공급원을 포함하는, 방법.
  13. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조 글리세롤이 멸균되지 않은 것인, 방법.
  14. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조 글리세롤이 메탄올, 물, 회분, 비-글리세린 유기물(non-glycerin organic matter), 황산나트륨, 메틸 탈로웨이트(tallowate) 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  15. 제14항 있어서,
    상기 회분이 칼슘, 철, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 아연 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  16. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 조 글리세롤이 바이오디젤 부산물인, 방법.
  17. (a) 지방산을 생산하는 트라우스토키트리움(Thraustochytrium) 미생물을 제공하는 단계;
    (b) 15 g/L 내지 60 g/L의 농도 수준의 조 글리세롤을 포함하는 배지를 제공하는 단계; 및
    (c) 배지 내의 조 글리세롤이 0 g/L 내지 5 g/L으로 감소되면, 질소 없이 추가량의 조 글리세롤을 반복적으로 첨가함으로써 미생물을 배지에서 배양하여, 하나 이상의 지방산을 생산하고 상기 미생물의 총 세포 중량을 기준으로 50 중량% 이상인 하나 이상의 불포화 지방산의 최종 농도를 제공하는, 단계; 및
    (d) 지방산을 단리시키는 단계
    를 포함하는, 하나 이상의 지방산을 생산하는 방법.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 트라우스토키트리움 미생물이 ATCC 수탁 번호 PTA-6245를 갖는 미생물인, 방법.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서,
    상기 지방산이 다불포화 지방산을 포함하는, 방법.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 다불포화 지방산이 알파 리놀렌산, 아라키돈산, 도코사헥사엔산, 도코사펜타엔산, 에이코사펜타엔산, 감마-리놀렌산, 리놀레산, 리놀렌산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  21. 제17항 또는 제18항에 있어서,
    상기 배지가 하나 이상의 추가의 탄소 공급원을 포함하는, 방법.
  22. 제17항 또는 제18항에 있어서,
    상기 조 글리세롤이 멸균되지 않은 것인, 방법.
  23. 제17항 또는 제18항에 있어서,
    상기 조 글리세롤이 메탄올, 물, 회분, 비-글리세린 유기물, 황산나트륨, 메틸 탈로웨이트 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서,
    상기 회분이 칼슘, 철, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 아연 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  25. 제17항 또는 제18항에 있어서,
    상기 조 글리세롤이 바이오디젤 부산물인, 방법.
  26. 제1항에 있어서,
    조 글리세롤은 전처리 되지 않은 것인, 방법.
  27. 제1항에 있어서,
    질소 공급원이 4.2 g/L 내지 5.3 g/L의 질소를 포함하는, 방법.
  28. 제1항에 있어서,
    목적하는 미생물 세포 밀도가 160 g/L 내지 250 g/L인, 방법.
  29. 제1항에 있어서,
    질소 공급원이 황산암모늄인, 방법.
  30. 제29항에 있어서,
    배지가 20g/L 내지 25g/L의 황산암모늄을 포함하는, 방법.
  31. 제1항에 있어서,
    목적하는 미생물 세포 밀도가 달성될 때, 미생물이 총 세포 중량을 기준으로 70 중량% 내지 80중량%의 지방산을 포함하는, 방법.
  32. 제12항에 있어서,
    추가의 탄소 공급원이 글루코스인, 방법.
  33. 제32항에 있어서,
    조 글리세롤 대 글루코스의 용적 비가 80:20 또는 20:80인, 방법.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4198136A3 (en) 2021-12-16 2023-08-30 Indian Oil Corporation Limited Methods and formulations for enhancing high value lipids

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008541779A (ja) 2005-06-07 2008-11-27 オーシャン・ニュートリション・カナダ・リミテッド 脂質および抗酸化剤の製造のための真核微生物
US20090209014A1 (en) * 2008-02-20 2009-08-20 Zhanyou Chi Heterotrophic algal high cell density production method and system
WO2014137538A2 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Virginia Polytechnic Institute And State University Production of omega-3 fatty acids from crude glycerol

Family Cites Families (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL57712A (en) 1979-07-03 1984-02-29 Yissum Res Dev Co Cultivation of halophilic algae of the dunaliella species for the production of fuel-like product
US4680314A (en) 1985-08-30 1987-07-14 Microbio Resources, Inc. Process for producing a naturally-derived carotene/oil composition by direct extraction from algae
NO157302C (no) 1985-12-19 1988-02-24 Norsk Hydro As Fremgangsmaate for fremstilling av et fiskeoljekonsentrat.
US5070018A (en) 1986-11-07 1991-12-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of controlling gene expression
US4952511A (en) 1987-06-11 1990-08-28 Martek Corporation Photobioreactor
WO1989000606A1 (en) 1987-07-20 1989-01-26 Maricultura, Incorporated Microorganism production of omega-3 (n-3) lipids
US5104803A (en) 1988-03-03 1992-04-14 Martek Corporation Photobioreactor
US5171680A (en) 1988-06-14 1992-12-15 Chiron Corporation Superoxide dismutase analogs having novel binding properties
US5340594A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5985348A (en) 1995-06-07 1999-11-16 Omegatech, Inc. Milk products having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6451567B1 (en) 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US7033584B2 (en) 1988-09-07 2006-04-25 Omegatech, Inc. Feeding Thraustochytriales to poultry for increasing omega-3 highly unsaturated fatty acids in eggs
US5340742A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US5130242A (en) 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US20060094089A1 (en) 1988-09-07 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5698244A (en) 1988-09-07 1997-12-16 Omegatech Inc. Method for raising animals having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6977167B2 (en) 1988-09-07 2005-12-20 Martek Biosciences Corporation Mixtures of omega-3 and omega-6 highly unsaturated fatty acids from euryhaline microorganisms
ATE153214T1 (de) 1989-06-14 1997-06-15 Martek Corp Medien zur zellzucht und verfahren dazu
US5162051A (en) 1989-11-22 1992-11-10 Martek Corporation Photobioreactor
US5151347A (en) 1989-11-27 1992-09-29 Martek Corporation Closed photobioreactor and method of use
US5407957A (en) 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
US5244921A (en) 1990-03-21 1993-09-14 Martek Corporation Eicosapentaenoic acids and methods for their production
US5164308A (en) 1990-05-21 1992-11-17 Martek Corporation Preparation of labelled triglyceride oils by cultivation of microorganisms
DE69231793T2 (de) 1991-01-24 2001-11-08 Martek Corp Mikrobielle öle und ihre verwendungen
US5658767A (en) 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
PH11992043811B1 (en) 1991-01-24 2002-08-22 Martek Corp Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US5168056A (en) 1991-02-08 1992-12-01 Purdue Research Foundation Enhanced production of common aromatic pathway compounds
DE4219360C2 (de) 1992-06-12 1994-07-28 Milupa Ag Verfahren zur Gewinnung von Lipiden mit einem hohen Anteil von langkettig-hochungesättigten Fettsäuren
US5272073A (en) 1992-06-30 1993-12-21 Purdue Research Foundation Biocatalytic synthesis of catechol from glucose
US6410281B1 (en) 1992-07-10 2002-06-25 Omegatech, Inc. Reducing corrosion in a fermentor by providing sodium with a non-chloride sodium salt
JPH078215A (ja) 1993-04-30 1995-01-13 Kawasaki Steel Corp ドコサヘキサエン酸含有海洋性微細藻類食品素材およびその製造方法
US5487987A (en) 1993-09-16 1996-01-30 Purdue Research Foundation Synthesis of adipic acid from biomass-derived carbon sources
US5629181A (en) 1993-09-16 1997-05-13 Purdue Research Foundation Synthesis of catechol from biomass-derived carbon sources
US5583019A (en) 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
EP0823475B1 (en) 1995-04-17 2009-06-17 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms
GB9514649D0 (en) 1995-07-18 1995-09-13 Zeneca Ltd Extraction of triglycerides from microorganisms
US20030143659A1 (en) 1996-03-28 2003-07-31 Hendrik Louis Bijl Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of a compound thereform
US6255505B1 (en) 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
ES2267137T5 (es) 1996-03-28 2014-03-14 Dsm Ip Assets B.V. Aceite microbiano que contiene ácido graso poli-insaturado y método de producir aceite a partir de biomasa pasteurizada y granulada
WO1997039106A1 (en) 1996-04-12 1997-10-23 Martek Biosciences Corporation Methods and tools for transformation of eukaryotic algae
DE69711374T3 (de) 1996-05-15 2007-05-16 Dsm Ip Assets B.V. Verfahren zum extrahieren von sterol mit einem polaren lösungsmittel zur herstellung eines mikrobiellen öles mit niedrigem sterolgehalt
DE19629433A1 (de) 1996-07-22 1998-01-29 Hoechst Ag Omega-3-fettsäurenenthaltende Zubereitung aus Mikroorganismen als Prophylaktikum bzw. Therapeutikum gegen parasitäre Erkrankungen beim Tier
ATE469244T1 (de) 1996-07-23 2010-06-15 Nagase Chemtex Corp Verfahren zur herstellung von docosahexansäure und docosapentansäure
JP2002510205A (ja) 1997-06-04 2002-04-02 カルジーン エルエルシー ポリケチド様合成遺伝子を植物内で発現させることによる多不飽和脂肪酸の製造
US6372460B1 (en) 1997-08-01 2002-04-16 Martek Biosciences DHA-containing nutritional compositions and methods for their production
CN1200603C (zh) 1997-08-14 2005-05-11 马泰克生物科学公司 提高ω－3高度不饱和脂肪酸在家禽肉中的结合率的方法
US6350890B1 (en) 1998-07-22 2002-02-26 Axiva Gmbh Method for obtaining fatty acids from biomass by combined in/situ extraction, reaction and chromatography using compressed gases
US6166231A (en) 1998-12-15 2000-12-26 Martek Biosciences Corporation Two phase extraction of oil from biomass
US7247461B2 (en) 1999-01-14 2007-07-24 Martek Biosciences Corporation Nucleic acid molecule encoding ORFA of a PUFA polyketide synthase system and uses thereof
ATE273373T1 (de) 1999-02-26 2004-08-15 Martek Biosciences Corp Verfahren zum abtrennen von einem docosahexaensäure enthaltenden triglyerid aus einem triglyceridgemisch
WO2000051444A1 (fr) 1999-03-04 2000-09-08 Suntory Limited Utilisation d'une matiere contenant de l'acide docosapentaenoique
AU3884500A (en) 1999-03-16 2000-10-04 Martek Biosciences Corporation Infant formulas and other food products containing phospholipids
US6395778B1 (en) 2000-01-11 2002-05-28 Omegatech, Inc. Process for making an enriched mixture of polyunsaturated fatty acid esters
AU2001223942A1 (en) 2000-01-14 2001-07-24 Olafur Halldorsson Marine lipid composition for feeding aquatic organisms
AU780619B2 (en) 2000-01-19 2005-04-07 Dsm Ip Assets B.V. Solventless extraction process
WO2001053508A2 (en) 2000-01-20 2001-07-26 Omegatech, Inc. Methods for raising rabbits
ATE374531T1 (de) 2000-01-28 2007-10-15 Martek Biosciences Corp Verstaerkte produktion von lipiden enthaltend mehrfachungesaettigte fettsaeuren durch hochdichte kulturen von eukariotischen mikroben in gaervorrichtungen
US6783951B2 (en) 2000-02-24 2004-08-31 Long, Ii Thomas Veach Process for production of carotenoids, xanthophylls and apo-carotenoids utilizing eukaryotic microorganisms
JP3425622B2 (ja) 2000-03-30 2003-07-14 独立行政法人産業技術総合研究所 ラビリンチュラ属菌を用いた高度不飽和脂肪酸含有培養物および高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
US6410282B1 (en) 2000-03-30 2002-06-25 Council Of Scientific And Industrial Research Method for enhancing levels of polyunsaturated fatty acids in thraustochytrid fungi
EP1178118A1 (en) 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
EP1178103A1 (en) 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils
US7067145B2 (en) 2000-09-07 2006-06-27 University Of Maryland Biotechnology Institute Use of arachidonic acid for enhanced culturing of fish larvae and broodstock
TWI377253B (en) 2001-04-16 2012-11-21 Martek Biosciences Corp Product and process for transformation of thraustochytriales microorganisms
US20050129739A1 (en) 2001-05-14 2005-06-16 Gerhard Kohn Production and use of a polar lipid-rich fraction containing omega-3 and/or omega-6 highly unsaturated fatty acids from microbes, genetically modified plant seeds and marine organisms
AU2002323409A1 (en) 2001-08-24 2003-03-10 Martek Biosciences Boulder Corporation Products containing highly unsaturated fatty acids for use by women and their children during stages of preconception, pregnancy and lactation/post-partum
WO2003033683A1 (fr) 2001-10-16 2003-04-24 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Micro-organismes et production de composes de carotinoide
JP4647212B2 (ja) 2001-12-12 2011-03-09 マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション 脂肪種子および微生物供給源からの脂質の抽出および脱ろう
JP4280158B2 (ja) 2002-12-27 2009-06-17 富士フイルム株式会社 ドコサヘキサエン酸生産能を有する微生物及びその利用
WO2005068642A2 (en) 2003-10-01 2005-07-28 Board Of Trustees Operating Michigan State University Bacterial synthesis of 1,2,4-butanetriol enantiomers
ES2235642B2 (es) 2003-12-18 2006-03-01 Gat Formulation Gmbh Proceso de multi-microencapsulacion continuo para la mejora de la estabilidad y almacenamiento de ingredientes biologicamente activos.
ZA200800079B (en) 2005-06-07 2009-03-25 Ocean Nutrition Canada Ltd Eukaryotic microorganisms for producing lipids and antioxidants
CA2639071A1 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Avesthagen Limited Docosahexaenoic acid (dha) producing thraustochytrid strain - sc1
WO2007074479A1 (en) 2005-12-29 2007-07-05 Abl Biotechnologies Ltd Novel strain of schizochytrium limacinum useful in the production of lipids and extracellular polysaccharides and process thereof
US9023616B2 (en) * 2006-08-01 2015-05-05 Dsm Nutritional Products Ag Oil producing microbes and method of modification thereof
US8088614B2 (en) 2006-11-13 2012-01-03 Aurora Algae, Inc. Methods and compositions for production and purification of biofuel from plants and microalgae
US7977076B2 (en) 2006-12-29 2011-07-12 Genifuel Corporation Integrated processes and systems for production of biofuels using algae
US7950181B2 (en) 2007-01-17 2011-05-31 Mip, Llc Apparatus and methods for production of biodiesel
JP5649785B2 (ja) 2007-01-26 2015-01-07 国立大学法人 宮崎大学 油脂含有物あるいは油脂中のドコサヘキサエン酸含有率を増加する方法
US8993314B2 (en) 2007-07-28 2015-03-31 Ennesys Sas Algae growth system for oil production
WO2009034124A1 (en) 2007-09-12 2009-03-19 Novozymes A/S Omega-3 stabilisation towards oxidation
WO2009143007A2 (en) 2008-05-19 2009-11-26 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Producing eicosapentaenoic acid (epa) from biodiesel-derived crude glycerol
CN101899481A (zh) * 2009-05-25 2010-12-01 华盛顿州立大学 异养海藻高密度生产的方法和系统
CA2779201A1 (en) * 2009-10-29 2011-05-05 Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. Process for biodiesel production from a yeast strain
US8617857B2 (en) 2010-05-04 2013-12-31 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology Thraustochytrid-based microalgae, and method for preparing bio-oil by using same
CN103649313B (zh) 2011-03-07 2017-10-24 Dsm营养产品股份公司 工程化破囊壶菌属微生物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008541779A (ja) 2005-06-07 2008-11-27 オーシャン・ニュートリション・カナダ・リミテッド 脂質および抗酸化剤の製造のための真核微生物
US20090209014A1 (en) * 2008-02-20 2009-08-20 Zhanyou Chi Heterotrophic algal high cell density production method and system
US7989195B2 (en) 2008-02-20 2011-08-02 Washington State University Research Foundation Heterotrophic algal high cell density production method and system
WO2014137538A2 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Virginia Polytechnic Institute And State University Production of omega-3 fatty acids from crude glycerol

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