KR102296938B1 - 긴산꼬리풀 추출물을 포함하는 항산화용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 긴산꼬리풀 추출물(Veronica longifolia)을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 피부 미백, 항산화 및/또는 염증 개선 용도의 화장료 조성물 또는 식품 조성물에 활용될 수 있다.

Description

긴산꼬리풀 추출물을 포함하는 항산화용 조성물{ANTIOXIDANT COMPOSITION COMPRISING VERONICA LONGIFOLIA}

본 발명은 긴산꼬리풀 추출물(Veronica longifolia)을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 피부 미백, 항산화 및/또는 염증 개선 용도의 화장료 조성물 또는 식품 조성물에 활용될 수 있다.

사람의 피부색소침착은 피부세포 내에 있는 멜라닌색소생성세포(melanocyte)에서, 어떤 요인에 의해 멜랄닌 생성활동이 증가되고, 이로 말미암아 만들어진 다량의 멜라닌이 각질형성세포(keratinocyte)로 전달되어, 피부 표피층(epidermis)에 축적된 결과이다.

멜라닌색소생성세포에서 색소침착과정은 멜라닌 함성 전, 멜라닌 합성 및 멜라닌 합성 후 단계로 나누어 볼 수 있다. 이 중 멜라닌 합성 전 단계에서는 멜라닌색소생성세포 내 멜라노좀이 멜라닌을 합성할 수 있도록 변형되며, 티로시나아제 전구체의 당기를 트리밍하는 반응을 통해 성숙된 티로시나아제가 멜라닌을 합성 및 분비한다. 즉, 상기 티로시나아제 전구체는 여러 개의 만노오스와 글루코오스가 글라이코실화되어 있으며, 이러한 티로시나아제 전구체에서 알파-글루코시다제(α-glucosidase) 효소가 글라이코실화되어 있는 당기를 제거함으로써 티로시나아제 자체의 활성을 갖게 되고 멜라닌 색소를 형성하게 된다.

한편, 현재 알려진 미백제로는 코직산, 알부틴, 글루타치온, 비타민A, 비타민C 등이 있지만 소비자들이 만족할 만한 미백효과를 갖지 못하고 있으며 부작용 때문에 그 사용량에 제한이 따르다. 따라서 기존의 미백제보다 효능이 뛰어나고 좀 더 안전한 미백제를 개발하는 것이 절실하다.

이에, 멜라닌 생합성 하는 효소인 티로시나아제의 글라이코실레이션 과정에 관여하는 알파-글루코시다제의 활성을 억제하고, 티로시나아제가 정상적인 산화반응을 거치지 못하도록 항산화 작용을 하여, 보다 효과가 높은 미백 및 항산화 효과를 지닌 화장료 조성물의 개발이 요구되고 있다.

한국등록특허 제 10-0860080호

본 발명의 목적은 긴산꼬리풀(Veronica longifolia) 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 피부 미백용 또는 항산화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 피부 미백용 또는 항산화용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 측면은 긴산꼬리풀(Veronica longifolia) 추출물을 포함하는 항산화용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 긴산꼬리풀(Veronica longifolia)은 현삼과의 여러해살이풀이다. 관상용으로도 활용되고 한방에서는 긴산꼬리풀의 전초를 약재로 사용하며, 최근에는 천식 및 폐질환의 약효가 있음이 밝혀짐에 따라, 천식치료제, 만성폐쇄성 폐질환 치료제로도 개발되어 활용되고 있다.

본 발명에서는 상기 긴산꼬리풀 추출물의 다양한 부위 및 다양한 추출 용매를 이용하여 추출하여 본 결과, 상기 추출물이 자유 라디칼 소거능이 우수하며, 알파-글루코시다제(α-glucosidase) 및 티로시나아제의 활성을 억제시키는데 우수한 효과가 있음을 규명하였다. 이에 본 발명에서는 긴산꼬리풀 추출물을 포함하는 항산화용 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명에서, “항산화”란, 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉진물질과 산화억제물질이 균형을 이루고 있으나, 여러 가지 요인들로 인하여 이러한 균형 상태를 잃고 산화를 촉진하는 방향으로 기울게 되면, 생체 내에 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 세포손상 및 병리적 질환을 유발하게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 화학적으로 불안정하고 반응성이 높아 DNA, 단백질, 지질 및 탄수화물과 같은 여러 생체물질과 쉽게 반응할 수 있으며, 생체 내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 암 등을 초래하게 되고, 노화의 직접적인 원인이 되기도 한다. 이러한 활성 산소종을 제거하거나 감소시킴으로써 항산화 효과를 얻어 노화를 방지하고 건강을 유지할 수 있게 된다.

구체적으로, 상기 추출물은 긴산꼬리풀의 꽃, 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상 부위의 추출물일 수 있다.

또한 구체적으로, 상기 추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 트리클로로메탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 1, 3-부틸렌글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출된 조성물일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 추출 용매는 물, 에탄올일 수 있으며, 보다 더 구체적으로는 에탄올일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에서 상기 긴산꼬리풀의 꽃, 잎 줄기 및 뿌리의 추출물의 자유 라디칼 소거활성을 측정한 결과, 긴산꼬리풀의 부위 및 추출 용매 상관 없이 라디칼 소거능이 뛰어남을 확인하였다(도 4 및 도 5).

본 발명의 일 실시예에서는 긴산꼬리풀 추출물의 폴리페놀 함량이 높음을 확인하였는 바, 항산화 효과가 우수함을 확인하였다(표 2).

상기 추출물은 긴산꼬리풀 추출물 뿐 아니라 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어진 건조물, 상기 추출액의 조제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

상기 긴산꼬리풀 추출물은, 상기 긴산꼬리풀의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직의 배양물로부터도 추출이 가능하다.

본 발명의 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.

본 발명에서 열수 추출 또는 냉침 추출한 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위해 여과, 예를 들어 나일론 등을 이용해 입자를 걸러내거나 냉동여과법 등을 이용해 여과한 후, 그대로 사용하거나 이를 동결건조, 열풍건조, 분무건조 등을 이용해 건조시켜 사용할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 열수추출 또는 에탄올을 이용하여 여과시킴으로써 긴산꼬리풀의 열수추출물 및 에탄올 추출물을 수득하였다.

상기 긴산꼬리풀 추출물은 알파-글루코시다제 저해 활성을 갖을 수 있다.

본 발명에서 “알파-글루코시다제(α-glucosidase)”는 글루코시드를 가수분해하여 당과 아글리콘을 형성하는 반응을 촉매하는 효소로서, 사람의 장점막의 알파-글루코시다제는 이당류의 소화흡수에 관여하고 베타-글루코시다아제는 미생물, 고등동식물등에 널리 분포한다. 상기 알파-글루코시다제는 티로시나아제의 글라이코실레이션 과정에 관여하며, 알파-글루코시다제의 효소 활성을 억제함으로써 당단백 효소인 티로시나아제를 합성하는 글라이코실레이션을 억제할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 긴산꼬리풀의 꽃, 잎·줄기, 뿌리의 열수추출물 및 에탄올 추출물의 알파-글루코시다제의 억제 활성을 측정한 결과, 각 부위의 긴산꼬리풀이 우수한 알파-글루코시다제 억제 효과가 있음을 확인하였다(도 2).

본 발명의 다른 측면은 상기 조성물을 포함하는 피부 미백용 또는 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일 실시예에서는 긴산꼬리풀 추출물의 세포 독성이 없음을 확인하였는 바(도 1), 화장료 조성물 또는 식품 조성물에 활용될 수 있음을 확인하였다.

본 발명에서 “미백”이란, 피부를 하얗게 하는 것을 의미하며 멜라닌의 과도한 합성이나, 티로시나아제 효소의 활성, 멜라닌의 생성 등으로 인한 기미, 주근깨 등의 다양한 색소 침착을 완화 또는 개선하는 것을 말하며, 상기 미백효과를 통해 피부톤 또는 안색이 개선될 수 있다.

본 발명에서, “피부 안색” 및 “피부톤”은 피부가 나타내는 색상 또는 톤을 말하며, 안색이 어둡거나 피부톤이 칙칙한 것으로 느껴지는 경우 화장 만족도가 저하되기도 한다. “피부 안색 개선” 및 “피부톤 개선”은 피부의 밝기 수치를 증가시킴으로써 피부 밝기가 밝아져 화장 만족도가 증가되거나, 화장을 하지 않더라도 밝아진 피부톤을 나타낼 수 있는 모든 경우를 포함한다.

본 발명의 일 실시예에서는, 긴산꼬리풀 추출물의 알파-글루코시다제 효소의 활성 억제 효과가 우수함을 확인하였으며, 티로시나아제 활성 또한 효과적으로 억제함을 확인하였다(도 2 및 도 3).

상기와 같은 결과는 알파-글루코시다제 및 티로시나아제의 활성을 억제시킴으로써 멜라닌의 생합성을 막아 피부 미백에 우수한 효과를 발휘할 수 있음을 시사한다.

본 발명의 일 실시예에서는 긴산꼬리풀 추출물의 자유라디칼(free radical) 소거 활성 측정을 하였으며, ABTS⁺ 라디칼 및 DPPH 라디칼 소거능이 우수함을 확인하였다(도 4 및 도 5).

본 발명의 일 실시예에서는 긴산꼬리풀 추출물이 부위 및 농도에 상관없이 폴리페놀의 함량이 높은 것을 확인하였다(표 2).

상기와 같이 긴산꼬리풀 추출물의 우수한 자유라디칼 소거능 및 폴리페놀 함량은 긴산꼬리풀 추출물이 항산화에 우수한 효과가 있음을 시사한다.

상기 화장료 조성물은 염증 개선 용도를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에서, “염증 개선”이란, 염증을 억제하는 것을 말하며, 상기 염증은 어떤 자극에 대한 생체조직의 방어반응의 하나로, 조직 변질, 순환 장애와 삼출, 조직 증식의 세가지를 병발하는 복잡한 병변을 말한다. 염증 반응은 외부 자극에 대한 생체조직의 방어반응 일환으로 물리적 작용이나 유해물질, 화학적 자극, 세균감염 등에 의한 손상을 재생하려는 기전이다. 지속적인 염증 반응은 오히려 점막 손상을 유발하고 피부 조직의 손상, 염증 및 피부 트러블를 촉진한다.

대식세포는 면역반응에서 매우 중요한 역할을 하며 일산화질소, 프로스타글란딘, 면역 단백질인 염증성 사이토카인을 포함한 다양한 염증 매개물질을 조절한다. 이 중 일산화질소는 박테리아를 죽이거나 종양을 제거하는 등 중요한 역할을 하지만 병인에 의한 과도한 일산화질소 생성은 염증을 유발시키며 이러한 염증 유발은 피부 트러블을 일으킨다. 즉, 대식세포의 일산화질소 생성이 억제되면, 피부 염증을 예방, 완화, 개선 및 치료하며, 염증 반응에 의한 피부 트러블을 예방, 완화, 개선 및 치료할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 긴산꼬리풀 추출물이 LPS로 자극된 대식세포에서 일산화질소의 생성을 효과적으로 억제시킴을 확인하였는 바, 항염증 효과가 우수함을 확인하였다(표 3 및 도 6).

본 발명의 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.

본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 피부에 직접 도포하거나 살포하는 등의 경피 투여 방법으로 사용될 수 있으며, 본 발명 조성물의 투여 경로는 목적조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물의 사용량은 연령, 병변의 정도 등의 개인 차이나 제형에 따라 적절하게 조절될 수 있으며, 1일 1회 내지 수회 적?韜?을 피부에 도포하여 1 주일 내지 수개월 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면은 상기 조성물을 포함하는 피부 미백용 또는 항산화용 식품 조성물에 관한 것이다.

구체적으로, 상기 식품 조성물은 염증 개선 용도를 추가로 포함할 수 있다.

상기 “미백”, “항산화”, “염증 개선” 등에 관한 설명은 전술한 바와 동일하다.

상기 긴산꼬리풀 추출물을 첨가할 수 있는 식품은 육류, 빵, 소시지, 초콜릿류, 스넥류, 캔디류, 과자류, 라면, 피자, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 비타민 복합제, 건강기능성 보조식품 등이 있다.

상기 식품의 종류는 구체적으로 건강기능식품일 수 있다. 상기 건강기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 점증제, pH 조절제, 안정화제, 보존제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

상기 건강기능식품은 식품의 생체 조절 기능을 강조한 식품으로 물리적, 생화학적, 생물공학적인 방법을 이용하여 특정 목적에 작용 및 발현하도록 부가가치를 부여한 식품이다. 이러한 건강기능 식품의 성분은 생체 방어와 신체 리듬의 조절, 질환의 방지 및 회복에 관계하는 신체 조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발휘하도록 설계하여 가공하게 되며, 식품으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제, 감미료 또는 기능성 원료를 함유할 수 있다.

상기 건강기능식품은 정제, 과립, 분말, 캅셀, 액상의 용액 및 환으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로 상기 정제 형태의 건강기능식품은 긴산꼬리풀 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축 성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 고미제 등을 함유할 수 있으며, 필요에 따라 적당한 제피제로 제피할 수도 있다.

상기 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질캅셀제는 통상의 경질캅셀에 긴산꼬리풀 추출물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물 또는 그의 입상물 또는 제피한 입상물을 충진하여 제조할 수 있다. 연질캅셀제는 긴산꼬리풀 추출물 및 부형제 등의 첨가제와의 혼합물을 젤라틴 등 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 솔비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.

상기 환 형태의 건강기능식품은 긴산꼬리풀 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 적당한 제피제로 제피를, 또는 전분, 탈크 또는 적당한 물질로 환의를 입힐 수도 있다.

상기 과립 형태의 건강기능식품은 긴산꼬리풀 추출물, 부형제, 결합제, 붕해제 등의 혼합물을 적당한 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 고미제 등을 함유할 수 있다.

상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 고미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 것으로 그 기능 등의 동일 내지 유사한 것들을 포함할 수 있다.

또한, 상기 식품의 종류는 식품 첨가제일 수 있으며, 상기 식품 첨가제는 식품의 제조, 가공, 또는 보존을 위해 식품에 첨가, 혼합, 침윤 기타의 방법에 의해 사용되는 물질을 의미한다. 상기 식품 첨가제는 천연물과 합성품이 있으며, 기능과 용도에 따라 분류할 수 있다. 현재 한국에 식품첨가물로 허가되어 있는 품목은 화학적 합성품 370여종, 천연첨가물 50여종이며, 주로 용도에 따라 보존료, 살균제, 산화방지제, 착색료, 발색제, 표백제, 조미료, 감미료, 착향료, 팽창제, 강화제, 개량제, 유화제, 증점제(호료) 및 안정제, 피막제, 껌 기초제, 소포제, 용제, 이형제, 방충제, 품질개량제와 기타 식품제조용 첨가제 등으로 분류되어 쓰이고 있다.

상기 식품첨가제의 형태는 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 액상 형태를 포함할 수 있으며 구체적으로는 캡슐의 형태일 수 있으나, 상기 형태에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 긴산꼬리풀 추출물을 식품용 조성물로 사용할 경우, 상기 긴산꼬리풀 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용하고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 상기 긴산꼬리풀 추출물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 개선, 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

본 발명의 긴산꼬리풀 추출물은 미백, 항산화 및 염증 개선에 우수한 효과가 있는 바, 화장품 및 식품에 다양한 용도로 활용될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 천연물 유래의 물질이어서 독성이 없으며, 인체에 적용하여도 부작용을 유발하지 않아 화장료 조성몰로의 활용도가 높다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야한다.

도 1은 긴산꼬리풀(Veronica longifolia) 추출물의 세포독성 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 긴산꼬리풀 추출물의 알파-글루코시다제(α-glucosidase) 저해율 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 긴산꼬리풀 추출물의 티로시나아제 저해율 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 긴산꼬리풀 추출물의 ABTS⁺ 라디칼 소거능 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 긴산꼬리풀 추출물의 DPPH 라디칼 소거능 측정 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 긴산꼬리풀 추출물의 일산화질소(NO) 생성 저해율 측정 결과를 나타낸 것이다.

제조예 1. 추출 용매 및 부위 별 긴산꼬리풀 추출물의 제조

국내에서 구입한 긴산꼬리풀의 꽃, 잎·줄기 및 뿌리 각 부위에 대한 열수추출물 및 에탄올 추출물을 준비하였다.

건조한 긴산꼬리풀의 각 부위 50 g(전건중량 기준)에 증류수 1000 mL를 첨가하여 121℃에서 30분간 반응시킨 후 2G3 Glass-filter (PYREX ^® 32940 FNL, JAPAN)를 사용하여 여과한 다음 열수추출물을 획득하였다.

또한, 건조한 긴산꼬리풀 20 g에 95% 에탄올을 1000 mL씩 첨가하여 25℃ 교반 반응기(shaking incubator)에서 48시간 동안 추출한 후 2G3 Glass-filter로 여과하여 에탄올 추출물을 획득하였다.

구분	추출 용매	부위
실시예 1	열수	꽃
실시예 2	열수	잎줄기
실시예 3	열수	뿌리
실시예 4	에탄올	꽃
실시예 5	에탄올	잎줄기
실시예 6	에탄올	뿌리

실험예 1. 긴산꼬리풀 추출물의 세포독성 확인

Raw 264.7 세포를 96 웰 플레이트에 1x10⁵ cell/ml 농도로 접종한 후 24시간 뒤 긴산꼬리풀 꽃, 잎·줄기, 뿌리의 에탄올 및 열수추출물 100 ppm을 최종 농도로 처리하였다. 24시간 후, 0.5 mg/ml의 MTT를 처리하고 2시간 후 세포에 MTT 처리로 인해 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO로 녹여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 긴산꼬리풀 추출물의 꽃, 잎·줄기, 뿌리 추출물은 추출 용매 상관 없이 모두 92% 이상의 세포 생존율을 가지는 바, 세포 독성에 크게 영향을 미치지 않음을 확인하였다(도 1).

실험예 2. 긴산꼬리풀 추출물의 α-글루코시다제(α-glucosidase) 저해 효과

긴산꼬리풀 꽃, 잎·줄기, 뿌리의 열수추출물 및 에탄올 추출물(실시예 1 내지 6)의 알파-글루코시다제에 대한 저해 활성은 p-니트로페닐 알파-D-글루코피라노시드(p-nitrophenyl α-D-glucopyranoside)를 기질로 하여 측정하였다.

1 U/ml 알파-글루코시다제 20 μl에 상기 실시예 1 내지 6의 긴산꼬리풀 추출물 10 μl을 가하여 pH 7.0, 37℃에서 15분간 전처리한 후 2.5mM p-니트로페닐알파-D-글루코피라노시드 70 μl를 가하여 37℃에서 10분간 반응시킨 후 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 긴산꼬리풀 추출물 대신 완충용액을 넣어준 반응액과의 흡광도 차이로부터 저해율을 계산하였다. 대조군으로 알파-글루코시다제 억제제 중 하나인 아카보즈(Acarbose)의 알파-글루코시다제 활성을 동일한 방법으로 측정하였다.

그 결과, 긴산꼬리풀 추출물은 꽃, 잎줄기, 뿌리 각 부위에서 추출 용매 상관없이 알파-글루코시다제의 활성을 억제하는데 효과가 있음을 확인하였다. 특히, 긴산꼬리풀 뿌리 부위의 에탄올 추출물의 경우 82% 이상의 현저한 알파 글루코시다제 억제 활성을 보여주었다(도 2).

상기와 같은 결과는 긴산꼬리풀 추출물이 알파-글루코시다제 효소의 활성을 효과적으로 억제시킴으로써 멜라닌의 생합성을 막아 피부 미백에 효과적임을 시사한다.

실험예 3. 긴산꼬리풀 추출물의 티로시나아제(Tyrosinase) 저해 효과

긴산꼬리풀 꽃, 잎·줄기, 뿌리의 열수추출물 및 에탄올 추출물(실시예 1 내지 6)의 티로시나아제 저해활성 측정은 Yagi 방법에 따라 측정하였다.

먼저, pH 6.8의 0.1 M 인산 나트륨 완충액 220 μl에 긴산꼬리풀 추출물 20 μl와 2000 U/mL 버섯 티로시나아제(mushroom tyrosinase) 20 uL을 첨가하여 37℃에서 10분간 전처리한 후 1.5 mM L-티로신(L-tyrosine)을 녹인 기질액 40 uL을 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA 크롬을 490 nm에서 측정하였다. 대조군으로 알부틴의 티로시나아제 활성 저해율을 측정하였다.

이때, 티로시나아제 저해활성은 시료 용액 처리군의 흡광도와 시료 용액 미처리군의 흡광도 감소율로 나타내었다.

그 결과, 긴산꼬리풀의 열수추출물 및 에탄올 추출물 모두에서 티로시나아제 효소의 활성이 현저히 억제되었으며, 이는 상기 긴산꼬리풀 추출물이 티로시나아제 활성 억제에 우수한 효과가 있음을 시사한다(도 3).

실험예 4. 긴산꼬리풀 추출물의 자유 라디칼 소거능 확인

4-1. ABTS ⁺ 라디칼 소거활성 확인

ABTS⁺[2,2'-아지노-비즈(3-에틸 벤조티아졸린-6-술폰산(ABTS⁺[2,2'-Azino-bis(3-ethyl benzothiazoline-6-sulfonic acid)]) 라디칼 소거활성은 수소 공여 항산화제(hydrogen-donating antioxidants)와 연쇄절단형 항산화제(chainbreaking antioxidants) 모두를 측정할 수 있으며 수용상(aqueous phase)과 유기상(organic phase) 모두에 적용 가능한 측정방법이다.

7.4 mM 2,2'-아지노-비즈(3-에틸 벤조티아졸린-6-술폰산을 증류수로 용해하여 1:1로 혼합한 후 암실에서 실온으로 15시간 이상 동안 반응시켜 ABTS⁺로 라디칼을 형성시켰다. 735 nm (Versa Max microplate reader; Molecular Devices)에서 추출액과 반응하기 전에 ABTS⁺ 용액의 흡광도는 0.70(±0.01)으로 증류수로 희석하였다. 열수추출물 2 μl를 ABTS⁺ 용액 198 μl를 가하여 암실 상태의 실온에서 5분간 반응시켜 735 nm에서 흡광도를 측정하였다. ABTS⁺ 라디칼 소거 활성은 다음식에 의해 계산하였다.

[식 1]

ABTS⁺ 라디칼 소거능 (%) = [1 - (시료 용액 처리군의 흡광도/시료 용액 무처리군의 흡광도)] × 100

그 결과, ABTS⁺ 라디칼 소거능은 100 ppm 농도에서 50~80% 이상의 소거능을 가짐을 확인하였다. 특히 꽃 및 잎줄기의 추출물이 뿌리 추출물보다 1.6배 높게 나타났으며, 에탄올 추출물에서 ABTS⁺ 라디칼 소거능이 높게 나타남을 확인하였다(도 4).

4-2. DPPH 소거활성 확인

실시예 1 내지 6의 자유라디칼(free radical) 소거활성을 측정하기 위하여 DPPH(1,1-diphenyl1-2-picry1hydrazy1)을 이용하였다. DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 자유 라디칼 소거활성을 측정하였다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 515 nm에서 자유라디칼 소거율을 측정하였다.

먼저, 상기 실시예 1 내지 6의 추출물을 각 0.1, 1, 10 mg/ml의 농도로 준비하였다. 추출물 5 μl에 에탄올에 용해된 DPPH 195 μl을 가한 후 96 웰 플레이트에 각각 넣고, 여기에 6x10^-5 M 메탄올 용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200 μl가 되도록 하였다. 이후 상온에서 15분간 방치하고, 515 nm에서 흡광도를 측정하였다. 자유라디칼 소거활성(%)은 다음식에 의해 계산하였다.

[식 2]

자유라디칼 소거활성(%) = 100(시료 용액 처리군의 흡광도-시료 용액 무처리군의 흡광도) X 100

그 결과, 긴산꼬리풀 추출물의 DPPH 라디칼 소거능은 250 ppm 농도에서 51~86% DPPH 라디칼 소거능을 가지는 것을 확인하였다. 특히 꽃과 잎줄기의 추출물이 뿌리 추출물보다 1.7배 이상 높게 나타났으며, 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능이 열수추출물보다 높음을 확인하였다(도 5).

상기와 같은 결과는 실시예 1 내지 6의 긴산꼬리풀 추출물이 부위 및 용매 상관없이 ABTS⁺ 및 DPPH 라디칼 소거활성을 나타내며, 이에 따른 항산화 효과가 우수함을 시사한다.

실험예 5. 긴산꼬리풀 추출물의 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 확인

긴산꼬리풀 추출물의 폴리페놀 함량을 비교하기 위해 시료를 10 mg/ml 농도로 추출물을 준비한 다음 20 μl을 취하여, Foiln-ciocalteu's 페놀 시약 100 μl를 첨가 후 혼합하여 실온에서 5분간 반응시켰다. 여기에 Na₂CO₃ 포화용액 80 μl를 가하여 실온에서 2시간 동안 반응시킨 후, UV/VIS 분광광도계를 사용하여 760 nm에서 흡광도를 측정하여 추출물의 총 폴리페놀 화합물 함량을 산출하였다.

시료	총 페놀 함량 (mg GA/g ± SD)	총 페놀 함량 (mg rutin/g ± SD)	RSA(ABTS): IC50 (ug/ml)	RSA(DPPH): IC50 (ug/ml)
실시예 1	0.69 ± 0.03	0.35 ± 0.02	66.48	149.46
실시예 2	0.74 ± 0.03	0.45 ± 0.07	56.72	120.16
실시예 3	0.40 ± 0.02	0.04 ± 0.00	93.96	226.59
실시예 4	1.20 ± 0.06	1.75 ± 0.03	40.74	59.97
실시예 5	1.10 ± 0.05	1.43 ± 0.09	36.12	63.18
실시예 6	0.16 ± 0.07	0.16 ± 0.08	98.07	242.55

그 결과, 상기 표 2에 나타난 바와 같이 간신꼬리풀 추출물은 실시예 1 내지 6에서 각각 0.69, 0.74, 1.2, 1.1, 0.16 mg GA/g 총 폴리페놀 함량을 가지는 것을 확인하였으며, 이를 통해 간신꼬리풀 추출물은 각 부위별로 뛰어난 항산화 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.

실험예 6. 긴산꼬리풀 추출물의 염증 개선 효과 확인

RAW 264.7 세포를 24 웰 플레이트에 1 X 10⁶ cell/ml 농도로 접종하고 18시간 뒤 LPS 1 μg/ml를 처리하였다. 2시간 후 상기 실시예 1 내지 6의 간신꼬리풀 추출물이 100 ppm가 되도록 처리하여 24시간 배양하였다. 그 후 세포 배양 상등액 100 μl와 그리스 시약 [1%(w/v) 설파닐 아미드, 2.5%(v/v) 인산 중 0.1% (w/v) 나프틸 에틸렌 디아민 100 μl를 혼합하여 96 웰 플레이트에서 10분 동안 반응시키고, 540 nm에서 NO 생성량을 측정하였다. 아질산나트륨(sodium nitrite)을 사용하여 검량선을 작성한 후, NO 측정에 사용하였다.

시료	ppm	NO 생성
		[μM]	[%]
미처리		0.59 ± 0.00	2.12
LPS	1 μg/ml	27.86 ± 0.01	100.00
실시예 1	100	27.08 ± 0.01	97.22
실시예 2		27.69 ± 0.02	99.38
실시예 3		26.65 ± 0.03	95.67
실시예 4		12.55 ± 0.01	45.05
실시예 5		16.14 ± 0.00	57.94
실시예 6		21.74 ± 0.01	78.04

그 결과, 실시예 1 내지 6의 긴산꼬리풀 추출물은 일산화질소 생성 저헤 효과가 우수함을 확인하였다. 특히 실시예 1 내지 3의 긴산꼬리풀 추출물이 각각 45.05%, 57.94% 및 78.04% 수준으로 우수한 일산화질소 생성 억제 효과를 나타내었다(도 6). 상기 결과는 긴산꼬리풀 추출물이 염증 억제 활성이 우수함을 시사한다

제조예 1. 긴산꼬리풀 추출물(실시예 1 내지 6)을 함유하는 에센스 제조

하기의 표 4와 같이 에센스 제형의 화장료 조성물을 제조하였다(단위: 중량%).

원료명	함량(중량%)
세테아릴알코올	2
세테아릴글루코사이드	1
호호바씨오일	5
실리카	0.5
글리세린	10
실시예 1 내지 6	5
정제수	to 100

제조예 2. 긴산꼬리풀 추출물(실시예 1 내지 6)을 함유하는 크림 제조

하기의 표 5와 같이 크림 제형의 화장료 조성물을 제조하였다(단위: 중량%).

조성물	함량(중량%)
실시예 1 내지 6	5
스테아린산	15
에탄올	1
수산화칼륨	0.7
글리세린	5
프로필렌글리콜	3
방부제	적량
향	적량
정제수	to 100

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단 일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

1. 긴산꼬리풀(Veronica longifolia) 에탄올 추출물을 포함하고,
   상기 추출물은 긴산꼬리풀의 꽃, 잎 및 줄기로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상 부위의 추출물인, 항산화 및 염증 개선용 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 조성물을 피부 미백 용도를 추가로 포함하는 것인, 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 긴산꼬리풀 추출물은 알파-글루코시다제(α-glucosidase) 저해 활성을 갖는, 조성물.
4. 제1항의 조성물을 포함하는, 항산화 및 염증 개선용 화장료 조성물.
5. 제4항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 피부 미백 용도를 추가로 포함하는, 화장료 조성물.
6. 제1항의 조성물을 포함하는, 항산화 및 염증 개선용 식품 조성물.
7. 제6항에 있어서,
   상기 식품 조성물은 피부 미백 용도를 추가로 포함하는, 식품 조성물.

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