KR102260452B1 - 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물에 관한 것으로, 외과 수술 및 외상 등 외과 영역에서 발생되는 출혈 시 상처 부위에 직접 사용이 가능하여 효과적으로 지혈할 수 있으며, 상처 밀봉, 조직 수복 촉진, 상처 표면의 조직 보호 및 감염 방지 등을 수행할 수 있으며, 거즈(면사) 및 스폰지 등의 지혈용품에 함유시켜 출혈 부위의 지혈 속도를 촉진시킴과 동시에 신속한 지혈이 가능하여 지혈 시간을 단축시킬 수 있으며, 과다 출혈로 인해 환자가 위험에 빠지는 상황을 방지할 수 있는 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물을 제공하기 위한 것으로서, 멸균증류수에 젤라틴을 혼합하는 단계(S10); 혼합된 젤라틴을 졸화시키는 단계(S30); 졸화된 젤라틴에 카올린을 혼합하는 단계(S50); 및 카올린이 혼합된 혼합액에 점성을 부여하는 단계(S70); 를 포함하는 것을 특징으로 한다.

Description

흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물{Manufacturing method of haemostatic composition in vivo absorbency and haemostatic composition thereof}

본 발명은 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 외과 영역에 지혈용품으로 사용되는 거즈(면서), 스펀지 등에 함유되어 지혈을 촉진시킴과 동시에 신속한 지혈이 가능하고, 젤라틴 및 카올린이 함유되어 출혈 부위에 효과적으로 작용하여 지혈 작용 및 지혈 효과가 우수한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물에 관한 것이다.

혈액은 전체 혈액의 55%를 차지하는 액체 성분인 혈장과 나머지 45%를 차지하는 세포 성분의 혈구로 이루어지고, 혈구는 액체 상(phase) 내에 분산된 적혈구와 백혈구와 기타 혈구 및 혈소판을 포함한다.

일반적으로, 외과 영역에서 출혈 시에 출혈 부위에 지혈을 실시하고 있으며, 지혈법은 결찰법, 압박법, 전기 응고법, 트롬빈 또는 피브린 아교 등 생리 활성물질 등을 이용하여 지혈하는 방법이 있다.

여기서, 출혈점이 명확한 동맥성 출혈의 경우, 결찰법 또는 전기 응고법을 이용하고 있으며, 정맥성 출혈의 경우, 결찰법 또는 압박만으로 충분히 지혈이 가능하다.

그러나, 실질 장기로부터 모세 혈관 출혈 또는 혈관 문합부로부터의 출혈이 발생될 경우, 상술한 지혈법이 유효하지 않은 경우가 발생되며, 이로 인해 심장 혈관 외과 영역에서는 항응고제인 헤파린을 사용하여 수술하는 경우나, 간부전으로 출혈 경향이 있는 경우나, 또는 일반적인 수술 시에도 광범위한 박리 조작을 수반하는 수술의 경우에는 지혈에 곤란을 초래할 수 있다.

상술한 바와 같이, 지혈에 곤란을 초래할 경우, 출혈면에 접촉시키는 것만으로도 혈액 응고 반응이 촉진되고, 빠르게 혈전을 형성하여 출혈을 저지하는 국소 흡수성 지혈제가 수술 시간을 단축시킬 뿐만 아니라, 수술 후의 재출혈까지도 방지할 수 있도록 지혈이 가능한 지혈방법 및 지혈용품이 요구되고 있다.

한편, 일반적인 국소 흡수성 지혈제로는 셀룰로스를 소재로 하는 지혈제와 젤라틴을 소재로 하는 지혈제과 아테로콜라겐을 소재로 하는 지혈제 및 미세 섬유성 콜라겐을 소재로 하는 지혈제가 일반적이다.

여기서, 셀룰로스를 소재로 하는 지혈제는, 저렴하고, 조작성이 우수하다는 장점이 있으나, 소재 자체에 생리 활성 작용이 없기 때문에 지혈 능력이 충분하지 않다는 문제점이 있으며, 젤라틴을 소재로 하는 지혈제는, 혈액을 포함할 경우, 표면이 겔화되고, 출혈된 상처 부위의 접착성이 손상되어 박리가 쉽다는 문제점이 있고, 아테로콜라겐을 소재로 하는 지혈제는, 아테로콜라겐을 섬유화하기 위하여 가교제가 사용됨으로써 화학물질에 대한 독성 문제가 있으며, 미세 섬유성 콜라겐을 소재로 하는 지혈제는, 콜라겐의 미세 섬유가 출혈 상처 부위에 흘러 들어가 분산되도록 이루어짐으로써 지혈 효과가 크지 않고, 정전기가 발생되어 사용 시 손 또는 핀셋 등에 부착되는 등의 문제가 있었다.

따라서, 높은 지혈 능력을 갖으며, 출혈 부위에 사용 시 생체에 독성이 없으며, 생체 조직과 유사하고, 생체에 침입하여 항체를 형성하는 항원성이 없으며, 생체 내에서 분해 흡수가 용이하고, 제조비용이 저렴한 지혈제가 요구되고 있는 실정이다.

대한민국 공개특허 제10-2001-0074825호

본 발명은 상기한 바와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로, 외과 수술 및 외상 등 외과 영역에서 발생되는 출혈 시 상처 부위에 직접 사용이 가능하여 효과적으로 지혈할 수 있으며, 상처 밀봉, 조직 수복 촉진, 상처 표면의 조직 보호 및 감염 방지 등을 수행할 수 있으며, 거즈(면사) 및 스폰지 등의 지혈용품에 함유시켜 출혈 부위의 지혈 속도를 촉진시킴과 동시에 신속한 지혈이 가능하여 지혈 시간을 단축시킬 수 있으며, 과다 출혈로 인해 환자가 위험에 빠지는 상황을 방지할 수 있는 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

그리고, 본 발명은, 젤라틴 및 카올린이 함유되어 출혈 부위에 효과적으로 작용하여 지혈 작용 및 지혈 효과가 우수하고, 생체 적합성을 갖으며, 생체 내에서 흡수분해가 용이하고, 모세 혈관 출혈 또는 혈관 문합부로부터의 출혈에 대하여 신속하게 대응할 수 있으며, 지혈에 유효하게 적응될 수 있고, 혈소판의 접착을 활성화시켜 혈소판마개의 형성을 촉진시킬 수 있으며, 출혈 부위에 더욱 효율적으로 작용하여 지속적인 지혈 효과를 거둘 수 있는 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기한 바와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은, 멸균증류수에 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재, 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상을 혼합하는 단계; 혼합물을 졸화시키는 단계; 졸화된 혼합물에 카올린을 혼합하는 단계; 및 카올린이 혼합된 혼합액에 점성을 부여하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 한다.

여기서, 멸균증류수에 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재, 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상의 혼합 시, 멸균증류수 100중량부에 대하여 1중량부 내지 10중량부로 혼합된다.

바람직하게는, 멸균증류수에 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재, 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상이 혼합된 혼합물의 졸화 시, 40℃ 내지 100℃의 온도 범위에서 1 내지 2시간 동안 100rpm 내지 500rpm으로 교반하여 졸화시킨다.

여기서, 졸화된 혼합물에 카올린의 혼합 시, 멸균증류수 100중량부에 대하여 카올린 1중량부 내지 10중량부로 혼합된다.

바람직하게는, 졸화된 혼합물에 카올린의 혼합 시, 40℃ 내지 100℃의 온도 범위에서 20분 내지 1시간 동안 100rpm 내지 500rpm으로 교반하여 혼합한다.

이때, 카올린이 혼합된 혼합액에 점성 부여 시, 혼합액을 냉각기 내에 투입한 후 냉각기의 하부면에 구비되는 냉각판을 0℃ 내지 10℃의 온도 범위에서 100rpm 내지 500rpm으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여한다.

한편, 멸균증류수 100중량부에 대하여 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재, 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상을 1중량부 내지 10중량부로 혼합하고, 멸균증류수에 혼합된 혼합물을 40℃ 내지 100℃의 온도에서 1 내지 2시간 동안 100rpm 내지 500rpm으로 교반하여 혼합물을 졸화시킨 후 졸화된 혼합물에 카올린을 1중량부 내지 10중량부로 혼합하여 40℃ 내지 100℃의 온도 범위에서 20분 내지 1시간 동안 100rpm 내지 500rpm으로 교반하고, 카올린이 혼합된 혼합액을 냉각기에 투입한 후 냉각기의 냉각판을 0℃ 내지 10℃의 온도 범위에서 100rpm 내지 500rpm 으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여하여 제조된다.

이상에서 설명한 바와 같이 상기와 같은 구성을 갖는 본 발명은, 외과 수술 및 외상 등의 원인으로 인한 출혈 시 상처 부위에 직접 사용이 가능하고, 상처 부위에 직접 사용하여 효과적인 지혈이 가능하며, 상처 밀봉, 조직 수복 촉진, 상처 표면의 조직 보호 및 감염 방지 등을 수행할 수 있고, 거즈(면사) 및 스폰지 등의 지혈용품에 함유시켜 사용이 가능하여 출혈 부위의 지혈 속도를 촉진시킴과 동시에 신속한 지혈이 가능하여 지혈 시간을 단축시킬 수 있으며, 과다 출혈로 인해 환자가 위험에 빠지는 상황을 방지할 수 있는 효과를 거둘 수 있다.

그리고, 본 발명은, 젤라틴 및 카올린이 함유되어 출혈 부위에 효과적으로 작용하여 지혈 작용 및 지혈 효과가 우수하고, 생체 적합성을 갖으며, 생체 내에서 흡수분해가 용이하고, 모세 혈관 출혈 또는 혈관 문합부로부터의 출혈에 대하여 신속하게 대응할 수 있으며, 재출혈을 방지하여 지혈작용이 우수하고, 이로 인해 환부에 대한 효과적인 지혈이 이루어질 수 있으며, 높은 지혈 능력을 갖고, 출혈 부위에 사용 시 생체에 독성이 없으며, 생체 조직과 유사하고, 생체에 침입하여 항체를 형성하는 항원성이 없으며, 생체 내에서 분해 흡수가 용이하고, 제조비용이 저렴하며, 출혈 부위에 더욱 효율적으로 작용하여 지속적인 지혈 효과를 거둘 수 있다.

도 1은 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈 조성물의 제조방법을 개략적으로 나타내는 흐름도,
도 2는 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 실시예 및 비교예에 따른 세포 독성 시험 결과를 나타내는 도면,
도 3은 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 실시예 및 비교예에 따른 혈액 응고 시험 결과를 나타내는 도면,
도 4는 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물에 혼합되는 카올린의 함량에 따른 혈액 응고율을 나타내는 도면,
도 5는 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 실시예에 따라 혈액이 응고하는 모습을 나타내는 도면,
도 6은 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 지혈 후 재출혈 실험 결과를 나타내는 도면.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되는 실시예를 참조하면 명확해질 것이다.

그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예로 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이다.

본 명세서에서 본 실시예는 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이다.

그리고, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

따라서, 몇 몇 실시예에서, 잘 알려진 구성 요소, 잘 알려진 동작 및 잘 알려진 기술들은 본 발명이 모호하게 해석되는 것을 피하기 위하여 구체적으로 설명되지 않는다.

또한, 명세서 전체에 걸쳐 동일 참조 부호는 동일 구성 요소를 지칭하고, 본 명세서에서 사용된(언급된) 용어들은 실시예를 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다.

본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함하며, '포함(또는, 구비)한다'로 언급된 구성 요소 및 동작은 하나 이상의 다른 구성요소 및 동작의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다.

또한, 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 정의되어 있지 않은 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.

이하, 첨부된 도면을 참고로 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명한다. 도 1은 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈 조성물의 제조방법을 개략적으로 나타내는 흐름도이고, 도 2는 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 실시예 및 비교예에 따른 세포 독성 시험 결과를 나타내는 도면이며, 도 3은 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 실시예 및 비교예에 따른 혈액 응고 시험 결과를 나타내는 도면이고, 도 4는 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물에 혼합되는 카올린의 함량에 따른 혈액 응고율을 나타내는 도면이며, 도 5는 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 실시예에 따라 혈액이 응고하는 모습을 나타내는 도면이고, 도 6은 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법에 따라 제조된 지혈조성물의 지혈 후 재출혈 실험 결과를 나타내는 도면이다.

도면에서 도시하고 있는 바와 같이, 본 발명에 의한 흡수성 체내용 지혈제 제조방법은 다음과 같다.

먼저, 혼합탱크 내에 멸균증류수에 젤라틴을 투입하여 혼합한다(S10).

상기 젤라틴(Gelatin)은 동물의 가죽, 힘줄 및 연골 등을 구성하는 천연 단백질인 콜라겐로부터 얻어지는 유도 단백질의 일종으로서, 투명한 색상을 띄며, 젤라틴 표면의 다중 흡수공이 자연적인 응고를 유도하는 효소의 활성화를 통해 혈소판의 분열을 촉진시켜 신속한 지열작용을 돕는다.

이러한 젤라틴은 액체에 함침시키면 수분을 흡수해 부풀고, 액체에 함침시켜 가열하면 녹아서 교질의 졸(Sol) 상태가 되어 점성이 증가하며, 냉각되면 굳어져 겔(Gel) 상태를 형성한다.

여기서, 겔 상태의 젤라틴은 고온에서 다시 졸 상태로 변화하고, 졸 상태의 젤라틴을 다시 냉각시키면 겔 상태로 변화하는 등 온도의 영향에 따라 겔 상태 및 졸 상태로의 유연성이 결정된다.

본 발명의 일 실시예에서는 상기 멸균증류수에 젤라틴을 투입하여 혼합하도록 이루어져 있으나, 상기 멸균증류수에 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재 또는 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상이 포함되는 것도 가능하다.

여기서, 콜라겐(Collagen)은 동물의 신체에 다양한 결합조직 (Connective tissues)의 세포밖 공간을 채우는 주요 조직 형성 단백질로서, 무기화작용 (Mineralization)의 정도에 따라, 뼈에서처럼 단단하거나, 힘줄에서처럼 유연하거나, 연골에서 보이듯 단단한 부분부터 유연한 부분까지 구배되기도 한다.

콜라겐은 근육조직의 1~2 %를 차지하고 강하고 힘줄이 많은 근육에서는 6 % 정도를 차지하고, 체내에서 가장 흔한 세포인 섬유아세포 (fibroblasts)가 콜라겐을 생성 분비하며, 식품 및 의약산업에서 널리 이용되는 젤라틴은 콜라겐을 비가역적으로 가수분해 한 것이다.

그리고, 콜라겐펩타이드(Collagen Peptide)는 젤라틴을 효소분해하여 분자량을 수 천, 수 백 정도까지 작게 한 것이다. 즉, 콜라겐은 가열로 인해 녹는 성질을 가지며, 이로 인해 콜라겐이 가열에 의해 변성된 것이 젤라틴이며, 다시 젤라틴을 효소분해하여 미세한 크기로 작게 만든 것을 말한다.

이러한 콜라겐펩타이드는 분자량의 크기를 감소시켜 소화흡수가 용이하여 인체에 빠른 흡수가 가능하다.

한편, 키토산(Chitosan)은 갑각류에 함유되어 있는 키틴을 탈아세틸화하여 얻어낸 물질로서, 인체에 흡수가 쉽도록 가공한 것이다. 여기서, 키토산의 특성은 노폐해진 세포를 활성화하여 노화를 억제하고 면역력을강화해주며 질병을 예방해준다. 또한 생체의 자연적인 치유 능력을 활성화하는기능과 함께 생체 리듬을 조절해준다

이러한 키토산의 효능은 체내에 과잉된 유해 콜레스테롤을 흡착, 배설하는 역할 즉탈콜레스테롤 작용을 하고, 암 세포의 증식을 억제하는 항암 작용을 하며, 혈압 상승의 원인이 되는 염화물 이온을 흡착, 장에서의 흡수를 억제한 뒤체외로 배출시킴으로써 혈압 상승 억제 작용 및 장내의 유효 세균을 증식시키고, 세포를 활성화시킨다.

그밖에도, 혈당 조절과 간 기능 개선 작용과 체내 중금속 및 오염 물질 배출 등의 효과가 있다.

그리고, 고분자 지혈소재는 연한 피부를 덮어 지혈하는 방수포부터, 상처를 접속시키는 세포 접착제, 벌어진 상처를 메우는 충진제, 수분조절을 위한 흡수 드레싱, 항균작용을 하는 드레싱, 박테리아와 균으로부터 보호하는 얇은 투명 드레싱, 카테터와 카테터를 삽입하는 장소를 안전하게 고정시키고 덮어주는 장치 등의 재료로 사용된다.

여기서, 고분자 지혈소재로는 섬유소 접착제 또는 시아노 아크릴레이트 접착제를 포함한다.

상기 섬유소 접착제는 액체상태의 연골세포에 접착제(생체 섬유소 성분)를 섞어서 손상된 부위에 주입하면 서서히 굳어지면서 부착되는 원리를 이용한 것으로서, 인체 자체의 성분으로 되어 있고, 자연 지혈의 여러 반응을 이용할 줄 안다.

응고 마지막 단계에서 트롬빈 단백질이 피브리노겐의 중합에 촉매로 작용하여 불용성 섬유소를 만든다.

　이러한 섬유소 접착제는 자연 응고 과정에서 이 단백질 사슬들이 적혈구를 가두 어 혈액이 흐르는 것을 막는 덩어리를 만들고, 섬유소 접착제 제품에서는 인체의 혈청보다 많은 농도의 물질들이 서로 분리된 저장체에서 나와 반응하여 단백질 덩어리를 만들어 세포에 강하게 붙어서 지 혈을 하거나 세포를 함께 접착시킨다.

이렇게 섬유소 접착제로 상품화된 제품들은 단백질의 용해와 재흡수를 막는 기타 촉매와 요소들을 강화시킨 것이다.

한편, 시아노 아크릴레이트 접착제는 빠른 경화속도 및 강한 접착력을 제공하여 의료용으로 많이 사용되고 있으며, 피부에 난 깨끗한 상처들을 봉합하는 재료로 각광받고 있어 응급 시 지혈제로 사용되고 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 고분자 지혈소재로서 섬유소 접착제 또는 시아노 아크릴레이트 접착제가 적용되어 있으나, 알긴산 염 또는 하이드로겔을 더 포함할 수 있다.

여기서, 알긴산 염은 자연 고분자로 갈색 바다풀에서 얻을 수 있으며, 이들은 선형의 D- mannuronic acid 그리고 L- guluronic acid 잔기로써 β- (1,4) 결합을 갖는다.

나토리움염인 알긴산 염 고분자는 용해성이 있고, 나토리움염을 염화칼슘 속으로 밀어 넣으면 섬유 조직으로 뽑아낼 수 있으며,나토리움염 용액과 염화칼슘을 혼합하면 겔로 만들 수 있다.

섬유 조직이나 겔 둘 다 많은 양의 수분이나, 상처 삼출물을 흡수하고, 섬유 조직으로 가제를 만들거나, 허술한 끈을 만들어 삼추하는 상처에 놓으면 삼출물을 고정시키거나 흡수한다.

겔은 점착력이 적당히 있어 상처로부터 깨끗이 떨어지며 섬유 조직과 같은 찌꺼기를 남기지 않아 상처가 아무는데 지장이 없게 한다.

한편, 하이드로겔은 친수성 고분자인 폴리사카라이드나 poly(N- vinylpyrrolidone)으로부터 만들어진 겔과 같은 물질들을 패드나 실과 같이 만들어 상처를 충전할 수 있으며, 내부에 생리활성 물질들을 포함시켜 상처를 아물게 하거나 박테리아의 성장을 저지할 수도 있다.

또한, 상기 고분자 지혈소재에 레이온, 폴리에스테르, 칼슘 알지네이트 섬유를 더 포함할 수 있으며, 지혈이 용이하다면 기타 다양한 소재가 더 포함되는 것도 가능하고, 이에 한정하지 아니한다.

한편, 밀랍은 꿀벌들이 꽃으로부터 긁어모은 당을 효소 작용하여 체내에서 생성하는 물질인 액체 기름으로서, 주성분은 고분자 탄화수소와 멜리실 알코올의 팔미트산 에스터와 세로트산의 중합체이며, 점착성이 있는 비결정성 물질로 화장품, 절연제, 마룻바닥의 도료 및 양초의 원료로도 쓰인다,

이때, 상기 멸균증류수에 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재, 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상의 혼합 시 멸균증류수 100중량부에 대하여 1중량부 내지 10중량부로 혼합된다.

바람직하게는, 상기 멸균증류수에 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재, 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상의 혼합 시 멸균증류수 100중량부에 대하여 5중량부 내지 8중량부로 혼합된다.

상기한 바와 같이, 상기 멸균증류수에 젤라틴, 콜라겐, 콜라겐펩타이드, 키토산, 고분자 지혈소재, 밀랍 중 적어도 어느 하나 이상을 혼합한 후 혼합물을 졸(Sol)화 시킨다(S30).

여기서, 상기 혼합물의 졸화 시 40℃ 내지 100℃의 온도 범위에서 1 내지 2시간 동안 100rpm 내지 500rpm으로 교반하여 졸화시킨다.

바람직하게는, 상기 혼합물은 70℃ 내지 80℃의 온도에서 1 시간 동안 300rpm으로 교반하여 졸화시킨다.

이렇게, 졸화된 혼합물에 카올린을 혼합한다(S50).

상기 카올린(kaolin)은 천연으로 생산되는 함수규산 알루미늄, 백색 또는 유백색의 분말로서, 화학 성분은 Al₂Si₂O₅(OH)₄에 납석이 포함된다.

이러한 카올린은 혈액 내에 존재하는 혈장 단백질 가운데 Factor XII(하게만 인자, Hageman Factor)와 접촉하여 상호작용을 통해 혈액 응고를 촉진할 수 있다.

그리고, 카올린은 Factor XII, Factor XI(혈장트롬보플라스틴 전구물질, Thromboplastin Antecedent), 프리칼리크레인(Prekallikrein) 등을 활성화시켜 변형을 일으키는 역할을 한다.

특히, Factor XII가 활성화에 관여하며, 카올린으로 인해 Factor XII의 혈장성분인 칼리크리엔의 민감도가 증가되어 활성화 속도를 상당히 가속화시켜 혈액응고를 촉진시키고, 상처의 지혈 효과를 향상시킬 수 있다.

여기서, 상기 졸화된 혼합물에 카올린의 혼합 시 상기 멸균증류수 100중량부에 대하여 카올린 1중량부 내지 10중량부로 혼합된다.

바람직하게는, 상기 졸화된 혼합물에 카올린의 혼합 시 상기 멸균증류수 100중량부에 대하여 카올린 3중량부 내지 6중량부로 혼합된다.

한편, 상기 졸화된 혼합물에 카올린의 혼합 시 40℃ 내지 100℃의 온도 범위에서 20분 내지 1시간 동안 100rpm 내지 500rpm으로 교반하여 혼합한다.

바람직하게는, 상기 졸화된 혼합물에 카올린의 혼합 시 60℃ 내지 80℃의 온도에서 30분 동안 350rpm 내지 450rpm으로 교반하여 혼합한다.

상기한 바와 같이, 카올린이 혼합된 혼합액에 점성을 부여한다(S70).

여기서, 상기 카올린이 혼합된 혼합액에 점성 부여 시 혼합액을 냉각기 내에 투입 후 상기 냉각기의 하부면에 회전가능하게 구비되는 냉각판의 온도를 0℃ 내지 10℃의 온도 범위에서 100rpm 내지 500rpm 으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여한다.

이렇게, 3,000cps의 점도에 도달한 혼합액은 다시 23℃ 내지 28℃의 온도 범위에서 100rpm 내지 200rpm으로 교반한다. 바람직하게는, 3,000cps의 점도에 도달한 혼합액은 25℃의 온도에서 100rpm 내지 200rpm으로 교반한다.

실시예 및 비교예

이하, 실시예 및 비교예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명한다. 본 발명이 속하는 분야의 평균적 기술자는 아래 실시예에 기재된 조성 외에 여러 가지 다른 형태로 본 발명을 변경할 수 있으며, 이하 실시예에서는 본 발명을 예시할 따름이지 본 발명의 기술적 사상의 범위를 아래 실시예의 범위로 한정하기 위한 의도로 해석해서는 아니된다.

실시예 1

혼합탱크에 멸균증류수 중량을 기준으로 하여 젤라틴을 5wt% 첨가하고, 80℃의 온도에서 1시간 동안 가열하여 혼합한다. 그 다음, 젤라틴의 졸(Sol)화 여부를 확인하고, 졸화된 혼합액에 카올린 용액을 1wt%를 첨가하여 혼합한 후 80℃의 온도에서 30분 동안 450rpm의 일정 속도로 교반한다. 교반한 혼합액을 냉각기에 투입하여 4℃의 온도에서 150rpm으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여한 후 3,000cps의 점도가 부여된 혼합액을 25℃의 실온에서 기포를 제거한 후 실린지에 주입하였다.

실시예 2

카올린 용액을 2wt% 첨가하여 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.

실시예 3

카올린 용액을 3wt% 첨가하여 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.

실시예 4

카올린 용액을 4wt% 첨가하여 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.

실시예 5

카올린 용액을 5wt% 첨가하여 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일하게 실시하였다.

비교예 1

혼합탱크에 멸균증류수 중량을 기준으로 하여 젤라틴을 5wt% 첨가하고, 80℃의 온도에서 1시간 동안 가열하여 혼합한다. 그 다음, 젤라틴의 졸(Sol)화 여부를 확인 후 졸화된 혼합액을 냉각기에 투입하여 4℃의 온도에서 150rpm으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여한 후 3,000cps의 점도가 부여된 혼합액을 25℃의 실온에서 기포를 제거한 후 실린지에 주입하였다.

비교예 2

혼합탱크에 멸균증류수 중량을 기준으로 카올린 용액 3wt%를 첨가하여 혼합한 후 30분 동안 450rpm의 일정 속도로 교반한 후 교반된 혼합액을 냉각기에 투입하여 4℃의 온도에서 150rpm으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여한 후 3,000cps의 점도가 부여된 혼합액을 25℃의 실온에서 기포를 제거한 후 실린지에 주입하였다.

비교예 3

혼합탱크에 멸균증류수 중량을 기준으로 하여 젤라틴을 3wt% 첨가하고, 80℃의 온도에서 1시간 동안 가열하여 혼합한다. 그 다음, 젤라틴의 졸(Sol)화 여부를 확인하고, 졸화된 혼합액에 카올린 용액을 7wt%를 첨가하여 혼합한 후 30분 동안 450rpm의 일정 속도로 교반한다. 교반된 혼합액을 교반된 혼합액을 냉각기에 투입하여 4℃의 온도에서 150rpm으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여한 후 3,000cps의 점도가 부여된 혼합액을 25℃의 실온에서 기포를 제거한 후 실린지에 주입하였다.

[실험예]

세포 독성 시험(MTT ASSAY)

세포 배양 기술을 이용하여 의료기기 및 원자재 또는 이들의 용출물에 의한 세포의 용해, 세포 성장의 저해, 군집 형성, 기타 세포에 대한 영향을 측정할 수 있다.

MTT 시약을 이용하는 tetrazolium assay 노란색의 수용성 MTT tetrazolium을 세포에 처리하여 대사 과정이 온전하게 살아있는 세포의 미토콘드리아에 있는 탈수소효소에 의해 tetrazolium의 ring 구조가 끊어지면서 청자색을 띄는 비수용성의 MTT formazan 결정으로 환원되는 원리를 이용한다.

MTT formazan 결정은 일반적으로 dimethyl sulfoxide(DMSO)와 같은 유기용매에 녹여 ELISA reader를 이용하여 흡광도를 측정한다.

human primary cell을 96well cell plate에 seeding 후 24시간 동안 cell plate에 부착 시킨 다음 24시간, 48시간마다 MTT Cell Proliferation Assay Kit을 처리한 후 490nm 파장으로 확인하였다.

혈액 응고 시험

응혈 인자 단계적 반응(clotting factor cascade)이 활성화되어 일어나는 현상을 확인하기 위한 시험을 실시하였다.

12주령 SD 계통 Male Rat 준비 후, Avertin 마취제를 이용하여 마취하였다.

마취 후 Cardiac blood collection 실험법을 통해 혈액을 확보한 후 채혈한 혈액을 흡수성 체내용 지혈용품이 들어 있는 튜브에 넣고, 혈액이 응고되기까지의 시간을 측정하여 결과 값을 확인하였다.

지혈 성능 시험

12주령 SD 계통 Male Rat 준비 후, Avertin 마취제를 이용하여 마취하였다.

그 다음, 실험동물을 고정 후 대퇴부 동맥 절단 후 출혈부위에 지혈제를 적용하고 압박하며 지혈을 관찰하였다.

지혈 완료 후 수술부위를 일정시간마다 관찰하여 재출혈을 확인하였다.

[실험 결과]

도 2를 참고하면, 세포 독성 시험 결과, 실시예 1 내지 5에 따른 지혈조성물이 비교예 1 내지 3에 따른 지혈조성물의 세포 생존율(cell viability rate)은 큰 차이가 없으나, 실시예 1 내지 5에 따른 지혈조성물이 비교예 1 내지 3에 따른 지혈조성물에 비하여 세포 생존율(cell viability rate)이 약간 높은 것으로 관찰되었다. 이는 젤라틴 또는/및 카올린이 혼합되면 세포 증식이 활발해짐을 알 수 있다.

도 3을 참고하면, 실시예 3 내지 5, 비교예 2 및 3에서 혈액 응고율이 높게 나타났으며, 이는 카올린의 함량에 따라 혈액 응고율이 더 높아짐을 알 수 있었다. 다만, 실시예 4의 경우, 카올린의 함량이 많은 실시예 5에 비하여 혈액 응고율이 높은 것으로 보아 단순히 카올린의 함량에 따라 혈액 응고율이 높아지는 것이 아닌 것을 확인할 수 있었다.

즉, 도 4 및 5를 참고하면, 카올린의 함량이 5%인 경우 보다 4%일 경우가 혈액 응고율이 더 높은 것을 알 수 있으며, 이로 인해 단순히 카올린의 함량이 많을 경우에 혈액 응고율이 높아지는 것은 아님을 확인할 수 있었으며, 카오린과 젤라틴의 혼합 함량이 중요한 것임을 알 수 있었다.

	지혈 시간(1차)	지혈 시간(2차)	지혈 시간(3차)
실시예 1	9분	10분	8분
실시예 2	8분	9분	7분
실시예 3	5분	4분	5분
실시예 4	1분 30초	2분	1분 40초
실시예 5	5분	6분	6분
비교예 1	N/A	N/A	N/A
비교예 2	N/A	N/A	N/A
비교예 3	N/A	N/A	N/A

[표 1]을 참고하면, 실시예 4가 실시예 1 내지 3, 5에 비하여 신속하게 지혈되는 것을 관찰할 수 있으며, 카올린의 함량이 높은 실시예 5에 비하여 실시예 3의 지혈 시간이 짧은 것을 알 수 있으며, 이는 카올린의 함량도 중요하나, 젤라틴과의 함량비가 중요하다는 것을 알 수 있다.

한편, 도 6을 참고하여 본 발명에 의한 지혈 조성물과 시중에서 판매되고 있는 지혈제품을 비교하여 설명하면, 지혈을 유도한 후 본 발명에 의한 지혈 조성물과 시중에서 판매되고 있는 지혈제품을 통해 지혈할 경우, 2분 후 지혈됨을 알 수 있으나, 지혈제품의 경우, 5분 후에 재출혈이 나타남을 알 수 있으며, 따라서 본 발명에 의한 지혈 조성물을 지혈용품에 함유시켜 사용 시 기존 지혈제품 대비 출혈 부위의 지혈 속도를 촉진시킬 수 있어 신속한 지혈이 가능하고, 지혈 시간을 단축시킬 수 있는 등의 지혈 효과를 거둘 수 있음을 확인할 수 있다.

이상, 본 발명은 특정의 실시예와 관련하여 도시 및 설명하지만, 첨부 특허청구의 범위에 나타난 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 한도 내에서 다양한 개조 및 변화가 가능하다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자라면 누구나 쉽게 알 수 있을 것이다.

Claims (7)

1. 멸균증류수에 젤라틴을 혼합하는 단계(S10);
   상기 혼합물을 졸화시키는 단계(S30);
   상기 졸화된 혼합물에 카올린을 혼합하는 단계(S50); 및
   상기 카올린이 혼합된 혼합액에 점성을 부여하는 단계(S70);
   를 포함하되,
   상기 멸균증류수에 젤라틴을 혼합 시, 상기 멸균증류수 100중량부에 대하여 5중량부 내지 7중량부로 혼합되고,
   상기 멸균 증류수에 젤라틴이 혼합된 혼합물의 졸화 시, 70℃ 내지 80℃의 온도 범위에서 1시간 동안 300rpm으로 교반하여 졸화시키고,
   상기 졸화된 혼합물에 카올린의 혼합 시, 상기 멸균증류수 100중량부에 대하여 카올린 4중량부로 혼합되며, 혼합 후 70℃ 내지 80℃의 온도 범위에서 30분 내지 40분 동안 350rpm 내지 450rpm으로 교반하여 혼합하고,
   상기 카올린이 혼합된 혼합액에 점성 부여 시, 상기 혼합액을 냉각기 내에 투입한 후 상기 냉각기의 하부면에 구비되는 냉각판을 4℃ 내지 5℃의 온도 범위에서 100rpm 내지 150rpm으로 교반하여 3,000cps의 점도를 부여하고, 3,000cps의 점도가 부여된 혼합액을 25℃의 실온에서 기포를 제거한 후 실린지에 주입하는 것을 특징으로 하는 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법.
   
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7. 청구항 1항의 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법을 이용하여 제조되는 것을 특징으로 하는 흡수성 체내 지혈조성물.

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