KR102256398B1 - 신규 카나비디올 퀴논 유도체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 화학식 (I)로 표시되는 신규 카나비디올 퀴논 유도체에 관한 것이다:
화학식 (I)
Figure 112016105294361-pct00066

식에서, R은 선형 또는 분지형 기의 탄소 원자로, 예컨대 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 아실 또는 알콕시카르보닐 기이고; 또는 R은 선형 또는 분지형 기의 질소 원자로, 예컨대 알킬아민, 아릴아민, 알케닐아민 또는 알키닐아민 기이다.
또한, 본 발명은 임의의 화학식 (I)의 화합물을 약제로써, 그리고 치료에, 특히 친전자(Nrf2 활성화) 및 세포독성 활성이 없으면서 높은 PPARg 작용제 효과로 인해 PPARg 조정에 반응성인 질환 및 상태를 치료하는데 사용하기 위한 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물 및 상기 화합물로 질환을 치료하는 방법도 제공한다.

Description

신규 카나비디올 퀴논 유도체{NOVEL CANNABIDIOL QUINONE DERIVATIVES}
본 발명은 신규 카나비디올 퀴논(cannabidiol quinone) 유도체, 및 이 화합물의 합성에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 퍼옥시좀 증식인자-활성화된 수용체 감마(PPARg) 조절에 반응성인 질환 및 상태를 치료하기 위한 약제로써, 그리고 치료에, 특히 PPARg 조정제(modulator)로써 사용되는 상기 화합물의 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이 화합물을 함유하는 약학 조성물 및 이 화합물로 질환을 치료하는 방법도 제공한다.
핵수용체(NR)는 약물 발견의 주 표적이다. NR은 이의 표적 유전자의 전사 활성을 조절하는 DNA와 직접 상호작용하는 능력을 가진 리간드-의존적 전사 인자이다. 이 수용체는 발달, 세포 항상성 및 대사에 중요한 역할을 하고, 광범위한 질환에 연루되어 있어서, 약학 산업에서 약물 개발 노력들의 초점이 되고 있다.
최신 핵 수용체의 명명법에서, 수퍼패밀리 1C(NR1C)는 포유동물의 퍼옥시좀 증식인자 활성화된 수용체(PPAR) 3가지 아형; PPARα(별칭, NR1C1), PPARβ/δ(별칭, NR1C2) 및 PPARγ(별칭, PPARg, 글리타존 수용체 또는 NR1C3)를 함유한다. PPAR은 지방생성, 지질 대사, 염증 및 대사 항상성의 유지에 관여하는 유전자 네트워크의 발현을 조절한다[Barish et al., 2006]. PPAR은 PPAR 표적 유전자의 조절 영역에서 퍼옥시좀 증식인자 반응 요소(PPRE)로 알려진 DNA 서열의 요소들에 결합하여 유전자 전사를 활성화시킨다[Poulsen et al., 2012]. 또한, PPAR은 활성인자 단백질-1(AP-1), 핵인자-카파 B(NF-kB), 전사의 시그널 변환인자 및 활성인자 3(STAT3) 및 활성화된 T 세포의 핵 인자(NFAT) 시그널링 경로에 길항작용하여 염증 반응 유전자의 전사를 네거티브 조절한다[Vanden Berghe et al. 2003].
PPAR 중에서, PPARg는 지방세포 형성, 인슐린 민감성 및 염증의 조절에 관여하기 때문에 특별한 관심이 있다[Fievet et al. 2006][Stienstra et al. 2007][Tontonoz and Spiegelman, 2008]. PPARg는 지방 조직, 골격근 세포, 파골세포, 골아세포, 면역 세포 및 중추 및 말초신경계를 비롯한 다양한 조직에서 발현된다. PPARg는 지방 세포 분화에 필수적이면서 충분하다는 사실때문에 지방생성의 우성 또는 "마스터" 조절인자(regulator)이다. aP2, LPL, 아디포넥틴 및 Glut4와 같이 지질생성 및 인슐린 민감성에 중요한 역할을 하는 다수의 유전자의 조절 영역들은 PPARg의 결합 부위를 함유한다[Rosen and MacDougald, 2006]. 따라서, 지방조직에서 PPARg의 활성화는 전신 인슐린 민감성에 영향을 준다.
대사 항상성 조절에서의 역할 외에도, 최근 부상하는 PPARg의 효과는 특히 항염증, 항암 및 항섬유증의 가능성 등이 보고되고 있다[Zhao et al., 2006]. PPARg 활성화에 의한 TGFb/Smad 시그널링 차단은 간, 폐 및 신장 섬유증에서 콜라겐 침착을 감소시킨다[Ferguson et al., 2009][Wang et al., 2007][Zhang et al., 2009]. 한편, PPARg의 활성화는 염증유발 유전자의 발현을 억제하여 사이토킨, 금속프로테아제 및 급성기 단백질의 생산을 감소시킴으로써 여러 세포 종류에서 항염증 활성을 발휘한다[Tontonoz and Spiegelman, 2008]. 또한, 항염증성 사이토킨을 증가시키고 유도성 산화질소 합성효소(iNOS) 발현을 억제하기도 한다[Szeles et al., 2007]. 흥미롭게도, PPARg 작용물질(agonist)은 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 다발성 경화증 및 발작의 여러 실험 모델뿐만 아니라 몇몇 임상 연구에서도 항염증 및 신경보호 효과를 나타냈다[Bernardo and Minghetti, 2008]. 이런 의미에서, PPARg는 레티노산 처리된 뉴런 전구체(NP)에서 다량 발현되고, NP 형성 동안 및 NP 형성 후 마우스 배아 줄기 세포의 신경 분화 2단계에 연루된 것으로 밝혀져 있다[Ghoochani., 2012]. 또한, PPARg는 공식적으로 유전자적 의미에서 종양 억제인자 유전자로 생각되어야 한다. PPARg는 다양한 종양 세포에서 발현되고, 리간드에 의한 PPARg의 활성화는 세포 증식의 억제 또는 아폽토시스의 유도를 야기한다[Tachibana et al., 2008][Tontonoz and Spiegelman, 2008].
특이적인 리간드 작용제에 의한 PPARg 활성화의 유익한 효과들은 당뇨병, 죽상동맥경화증, 류마티스성 관절염, 간 섬유증, 염증성장질환, 신경병증, 건선, 피부 상처 치유, 피부경화증(SSc) 신경변성 및 신경염증성 장애 및 암과 같은 여러 만성 질환의 치료에 사용될 수 있다.
PPARg 리간드의 활성화제 중에서, 티아졸리딘디온(TZD)이 가장 임상적으로 중요하다[Lehmann et al. 1995]. 이러한 이유로, 지금까지 임상 실습에서는 로시글리타존 및 피오글리타존이 주로 사용되었다. 이들은 혈당 조절뿐 아니라 광범위한 유사 부작용, 예컨대 체중 증가, 체액 저류, 및 PPARg 매개인 것으로 보이는 건강 기능상실의 위험 증가에 유사한 효과를 제공한다. 실제, 로시글리타존은 최근 유럽에서 철회되었고, 미국에서는 2형 당뇨 환자에서 심혈관 사건의 위험 증가로 인하여 사용이 제한되었다.
TZD는 강력한 PPARg 완전 작용제(PPARg-fa)이지만, 그 기전을 기반으로 한 부작용은 이 화합물의 전체 치료 가능성을 제한했다[Gelman et al. 2007][Ciudin et al., 2012]. 하지만, PPARg 경로의 생리학적 및 치료적 관련성은 부작용을 감소시키거나 없애는 더 새로운 클래스의 분자를 개발하도록 신규 연구를 조장했다[Ahmadian et al., 2013]. 따라서, PPARg-fa에 대한 더 안전한 대안으로써 선택적 PPARg 조정제(PPARg-m)의 발견 및 개발에 많은 진보가 이루어졌다. 예비임상 및 임상 발견은 선택적 PPARg-m이 차세대 PPARg 작용제가 될 가능성이 있고, 즉 PPARg-fa보다 우수한 안전성 프로필을 가진 효과적인 인슐린 증감제임을 분명하게 암시한다[Doshi et al. 2010].
이러한 의미에서, 천연 및 합성 카나비노이드는 PPARg의 활성화를 통해 염증 과정을 경감시키는 PPARg-m으로 생각된다. 카나비노이드계 PPARg-m의 몇가지 예는 아줄렘산[Liu et al., 2003], [Burstein S. 2005], WIN55212-2 [Sun and Bennett, 2007], 9△-THC 및 CBD [O'Sullivan 2007], 및 CBG [Granja et al., 2012]이다.
몇몇 카나비노이드 퀴논 유도체, 예컨대 CBD-Q (HU-311, 본 발명에서 VCE-004라고도 명명됨) 및 CBG-Q(VCE-003)는 기술된 바 있다[Kogan et al., 2004] [Granja et al., 2012]. 흥미로운 것은, VCE-004 (HU-331로도 알려져 있음)는 EC50이 5μM이어서, 모분자 CBD(EC50 21μM)보다 결합 친화성이 4배 더 높고, VCE-003은 모분자 CBG(EC50 12.7μM)에 비해 PPARg에 대한 훨씬 증가된 결합 친화성(EC50 2.2μM)을 나타냈다[Granja et al., 2012]. 다른 CBD 퀴논, 예컨대 CBD-l,4-디하이드록시퀴논, 4-메틸-CBD-퀴논 및 4-포르밀-메톡시-CBD-퀴논도 기술된 바 있고, 모분자 CBD에 비해 PPARg에 대해 높은 친화성을 나타냈다[WO2011117429 Al]. 하지만, 이 화합물들의 합성은 재현하기가 매우 어렵고, 이 화합물들은 매우 불안정하여 약제로 개발하는 것은 불가능하다.
퀴논은 독물학적 중간체의 한 부류로써, 다양한 생체내 유해 효과, 예컨대 급성 세포독성 및 면역독성을 산출할 수 있다[Bolton et al., 2000]. 퀴논이 이러한 효과를 유발하는 기전은 꽤 복잡할 수 있다. 퀴논은 마이클 수용체이고, 세포 손상은 중대한 세포 단백질 및/또는 DNA의 알킬화를 통해 일어날 수 있다. 대안적으로, 퀴논은 이의 세미퀴논 라디칼에 의해 산화환원 사이클을 할 수 있는 고도의 산화환원 활성 분자로, 반응성 산소 종(ROS)을 형성시킬 수 있고, 이는 지질, 단백질 및 DNA를 비롯한 산화된 세포 거대분자의 형성을 통해 세포 내에서 심각한 산화 스트레스를 유발할 수 있다[Monks and Jones, 2012]. 치료적 용도가 있는 퀴논계 화합물의 예는 다수가 있지만, 비특이적 독성 및 선택성 결여에 대한 문제로 인해, 마이클 수용체 모티프가 선도 약물의 설계에 도입되는 일은 드물다.
Keap1-Nrf2 경로는 반응성 산소 종(ROS) 및 친전자체에 의해 유발된 내인성 및 외인성 스트레스들에 대한 세포보호 반응들의 주요 조절인자이다. 이 경로 내의 주요 시그널링 단백질은 전사 핵 인자(적혈구 유래 2)-유사 2(Nrf2)로써, 이는 작은 Maf 단백질과 함께 표적 유전자의 조절 영역에 있는 항산화성 반응 요소(ARE)에 결합한다. 기본 상태하에서 Nrf2는 억제제 Keap1(Kelch ECH 결합 단백질 1)에 의해 세포질에 유지된다. 세포가 산화 스트레스, 친전자체 또는 화학예방제에 노출될 때, Nrf2는 Keap1 매개의 억제를 벗어나, 세포의 산화환원 항상성을 유지하기 위해 항산화성 반응 요소(ARE) 의존적 유전자 발현을 활성화시킨다[Na and Surh, 2013].
Nrf2는 다수의 세포보호 유전자의 발현을 증가시켜 다양한 독물과 발암물질로부터 세포 및 조직을 보호할 수 있다. Nrf2가 정상 세포를 보호하는 것처럼, Nrf2는 화학치료제로부터 암세포도 보호하여 암 진행을 촉진할 수 있다는 연구가 밝혀졌다[Na and Surh 2013]. 암세포는 지속적인 내인성 산소 매개의 스트레스에서 생존하고 ROS 생산을 통해 세포독성을 발휘하는 특정 항암제에 내성이 된다. 이러한 조건하에서, 활성 Nrf2 경로는 암세포에서 ROS 수준을 이 세포의 성장 및 생존을 촉진하는 범위 내로 유지하여 유리한 산화환원 균형을 유지할 수 있었다. Nrf2의 지속적인 축적 또는 활성화는 전암성 또는 암성 세포의 서브세트에, 증식하고 아폽토시스를 피하고 전이되고 치료 시술을 견디기에 유리한 환경을 부여하는 것으로 추측된다.
Nrf2 과잉발현의 억제는 암세포의 표현형 특징을 역전시키는 것으로 알려졌고, 이러한 추측을 뒷받침한다[Sporn and Liby, 2012]. Nrf2의 구성적 과다활성화는 수많은 종류의 암, 예컨대 편평 상피 세포 암, 폐암, 유방암, 담낭암, 전립선 암, 신장 암, 뇌실막세포종(ependymomas), 난소 상피 암, 자궁 내막 암 및 췌장암에서 관찰되었다[Na and Surh, 2013]. 종양에 Nrf2 발현이 구성적으로 상승된 수준을 가진 암환자는 일반적으로 더 낮은 생존률을 나타낸다[Solis et al., 2010]. 따라서, Nrf2 활성화는 암 진행의 상태를 측정할 수 있는 예후적 분자 마커라고 생각되며, 이 활성화는 선천적 및 후천적 화학내성 모두에 기여한다. 따라서, 이 항산화 전사 인자는 발암 유전자로 작용할 수도 있고, 증가된 Nrf2 활성은 고형암의 형성 및 화학내성을 촉진한다[Sporn and Liby, 2012].
잠재적 부작용을 피하기 위해 Nrf2의 활성화를 유도함이 없이, PPARg 작용제성 활성만을 향상시키기 위해, 본 발명은 주형으로써 카나비디올 산(CBDA)과 VCE-004로부터 시작하는 신규 화합물의 라이브러리를 개발했고, 놀랍게도 위치 3에 특정 변형을 가진 CBD-퀴논 유도체(CBD-Q 유도체)가 친전자(Nrf2 활성화) 및 세포독성 활성은 결여되되, 높은 PPARg 작용제 효과를 가진 신규 화합물을 초래한다는 것을 발견했다. 따라서, 이 신규 화합물은 PPARg 조절에 반응성인 만성 질환을 치료하는데 적합하다.
본 발명의 CBD-Q 유도체 II 내지 X의 전구체인 VCE-004(화합물 I)는 VCE-004-처리된 세포에서 ROS의 생성을 반영하는 산화적/친전자성 스트레스의 세포 센서인 전사 인자 Nrf2도 활성화시키는 작용제성 PPARg 리간드이다. 따라서, Nrf2 경로를 활성화시키는 이러한 종류의 CDB-Q 유도체로의 장기 치료는 전술한 바와 같이 종양을 촉진시킬 수 있다. 또한, CBD-Q의 구조 유사체인 크로메노피라졸디온(chromenopyrazoledione)은 반응성 산소 종(ROS) 및 PPARg-의존적 기전의 유도를 통해 전립선 암세포에서 세포독성을 유도한다[Morales et al., 2013]. 따라서, CBD 분자의 산화는 PPARg를 활성화시키고 ROS-매개의 Nrf2 활성화를 유도하기도 하는 CBD-Q 화합물의 클래스를 생산한다.
즉, 본 발명의 CBD-Q 유도체는 위치 3의 변형이 본 발명의 화합물에 PPARg를 활성화시키고 Nrf2의 활성화없이 글루타메이트 유도 세포독성으로부터 보호하는 능력을 부여하기 때문에, 코간 등[Kogan et al., 2004] 및 모랄레스 등[Morales et al., 2013]이 기술한 화합물들과는 다르다. 게다가, 위치 3에 변형이 있는 CBD-Q 유도체는 TGFb 유도 콜라겐 유전자 전사 및 콜라겐 발현도 억제했다. 또한, 본 발명에 기술된 화합물은, 불안정하고 합성하기 어려우며 Nrf2 활성화에 대해 결코 시험된 적이 없는 WO 2001 1117429에 기술된 화합물들과도 다르다. 또한, 본 발명에 기술된 CBD-Q 유도체는 최신 기술에 포함된 VCE-004(화합물 I)에 비해 뉴런 기원의 세포주들에서 현저히 낮은 세포독성을 나타내기도 했다.
종래 기술로부터 시작해서, 본 발명의 과제는 Nrf2 활성화 및 세포독성을 유도함이 없이 PPARg 조절 활성을 나타내는 신규 카나비디올-퀴논 유도체(CBD-Q 유도체)를 제공하는 것이다.
더 구체적으로, 본 발명의 화합물은 화학식 (I)로 표시되는 카나비디올-퀴논 유도체(CBD-Q 유도체)이다:
화학식 (I)
Figure 112016105294361-pct00001
식에서, R은 선형 또는 분지형 기의 탄소 원자로, 예컨대 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 아실 또는 알콕시카르보닐 기이고; 또는 R은 선형 또는 분지형 기의 질소 원자로, 예컨대 알킬아민, 아릴아민, 알케닐아민 또는 알키닐아민 기이다. 퀴논 고리는 본 발명의 CBD-Q 유도체를 제공하기 위해 치환체 교체가 이루어지는 고리의 위치를 나타내고자 임의로 번호를 매겼다. IUPAT 명명법이 허용하는 한, 퀴논 고리의 번호매김은 유지했다(화학식 II 내지 X의 유도체들 참조, 여기서 상기 퀴논 고리의 위치 3은 모든 치환체들의 교체가 일어난 위치이며, 전술한 유도체의 명명법이 이러한 사실을 반영하고 부합했다. 하지만, 치환 기들이 퀴논 고리의 위치 3에 결합했을 때, 전술한 퀴논 고리의 위치들의 번호매김을 IUPAT 명명법에 따라 변경시켰고, 그 결과 산출되는 명명법을 사용했지만, 비록 외관적으로만, 퀴논 고리의 위치 3의 교체가 겉보기에는 누락되었지만, 실제로 그런 것은 아니며, 이는 화학식 XI 내지 XV로 표시한 유도체의 구조식에서 확인되었다.
바람직한 양태에 따르면, 본 발명의 화합물은 화학식 (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV) 및 (XV)로 표시되는 것이다.
화학식 (II)
(1'R,6'R)-3-(에틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00002
화학식 (III)
(1'R,6'R)-3-(펜틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00003
화학식 (IV)
(1'R,6'R)-3-(이소부틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00004
화학식 (V)
(1'R,6'R)-3-(부틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00005
화학식 (VI)
(1'R,6'R)-3-(메틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00006
화학식 (VII)
(1'R,6'R)-3-(이소프로필아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00007
화학식 (VIII)
(1'R,6'R)-3-(벤질아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00008
화학식 (IX)
(1'R,6'R)-3-(네오펜틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00009
화학식 (X)
(1'R,6'R)-3-(이소펜틸아민)-6-하이드록시-아민-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
Figure 112016105294361-pct00010
화학식 (XI)
메틸 4-하이드록시-5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
Figure 112016105294361-pct00011
화학식 (XII)
펜틸에틸 4-하이드록시-5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
Figure 112016105294361-pct00012
화학식 (XIII)
(E)-3,7-디메틸옥타-2,6-디에닐-4-하이드록시-5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
Figure 112016105294361-pct00013
화학식 (XIV)
(1R,4S)-1,7,7-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵탄-2-일-4-하이드록시-5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
Figure 112016105294361-pct00014
화학식 (XV)
(1R,2R,4R)-1,5,5-트리메틸비사이클로[2.2.1]헵탄-2-일 4-하이드록시-5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
Figure 112016105294361-pct00015
본 발명의 화학식 I로 표시되는, CBD-Q 유도체 II 내지 X의 VCE-004(화합물 I) 전구체는 CBD(THC Pharma, Germany; ref: THC-1073G-10)로부터 쉽게 합성할 수 있다.
본 발명의 화합물 XI 내지 XV는 천연 카나비노이드 CBDA(카나비디올 산)(THC Pharma, Germany; ref: THC-1232-100)으로부터 시작하여 몇몇 특정 라디칼을 치환시켜 합성할 수 있다.
이하, 실시예와 도면에서 유추할 수 있듯이, 화학식 I에 포함된 위치 3'의 변형은 본 발명의 화합물에 PPARg를 활성화시키고 글루타메이트 유도된 세포독성으로부터 보호하고 TGFb 유도된 콜라겐 생산을 억제하는 능력을 부여한다. 또한, 이 화합물들은 최신 기술에 포함된 VCE-004에 비해 뉴럽 기원의 세포주에서 현저히 낮은 세포독성을 나타내기도 했다.
또한, 본 발명의 화합물은 이 화합물의 유사체, 유도체, 호변이성질체 형태, 이성질체, 입체이성질체, 다형체, 약학적 허용성 염, 약학적 허용성 용매화물 및 이를 함유하는 조성물도 포함한다.
본 발명의 설명을 위해서, "유사체(들)"이란 용어는 화학식 (I)의 화합물과 상동성이거나 화학식 (I)의 화합물에서 구조적으로 유도된 임의의 실체를 의미한다.
본 발명의 정황에서, 화학식 (I) 화합물의 "유도체(들)"는 항상 위치 4'가 치환되고, 본원에 정의된 바와 같이 위치 4'에서의 치환과 관련된 약리학적 성질을 나타내지만, 상기 화학식 (I)에 제시된 기들과 다른, CBD-Q 분자의 다른 위치들에서 모이어티 교체가 이루어지기도 하는, 임의의 CBD-퀴논 유사체로써 해석되어야 한다(이 문장은 이해되지 않는다).
"호변이성질체"란 용어는 화학적 반응(호변이성질체화)에 의해 쉽게 상호변환하는 유기 화합물의 구조 이성질체이다.
"이성질체" 또는 "입체이성질체"란 용어는 화학적 구조가 동일하지만, 공간에서 원자 또는 기의 배열이 상이한 화합물을 의미한다.
본원에 사용된 "다형체"는 화학적 조성은 동일하지만, 결정을 형성하는 분자, 원자 및/또는 이온의 공간 배열이 상이한 결정체 형태를 의미한다.
"약학적 허용성 염"이란 용어는 환자에게 투여 시, 본원에 기술된 바와 같은 화합물을 (직접 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 임의의 약학적 허용성 염을 의미한다. 이러한 염은 생리학적으로 허용성인 유기산 또는 무기산의 산 부가 염이 바람직하다. 산 부가 염의 예로는 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트와 같은 무기 산 부가염, 및 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 말리에이트, 푸마레이트, 시트레이트, 옥살레이트, 석시네이트, 타르트레이트, 말레이트, 만델레이트, 메탄설포네이트 및 p-톨루엔설포네이트와 같은 유기 산 부가염을 포함한다. 알칼리 첨가염의 예로는 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 암모늄 염과 같은 무기 염, 및 에틸렌디아민, 에탄올아민, N,N-디알킬렌에탄올아민, 트리에탄올아민 및 염기성 아미노산 염과 같은 유기 알칼리염을 포함한다. 하지만, 비-약학적 허용성 염도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 이해되는 것이 좋은데, 그 이유는 이 염이 약학적 허용성 염의 제조에 유용할 수 있기 때문이다. 염의 형성 절차는 당업계에 통상적인 것이다.
본 발명에 따른 "용매화물"이란 용어는 특히 수화물 및 알코올화물(alcoholate)을 포함하여, 다른 분자(보통 극성 용매)에 비공유 결합에 의해 결합하는, 본 발명에 따른 활성 화합물의 임의의 형태를 의미하는 것으로써 이해되는 것이 좋다.
본 발명의 추가 양태는 특히 죽상동맥경화증, 염증성 장 질환, 류마티스성 관절염, 간 섬유증, 신경병증, 건선, 피부 상처 치유, 피부 재생, 췌장염, 위염, 신경변성 장애, 신경염증성 장애, 피부경화증, 암, 고혈압, 비만, II형 당뇨병 및 PPARg 작용제에 의해 치료될 수 있는 기타 질환과 같은 질환의 치료에, Nfr2 활성화를 유도하지 않는 약제로써, 특히 PPARg 수용체의 PPARg 작용제로써 사용되는 화학식 (I) 화합물 또는 이의 유도체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태는 죽상동맥경화증, 염증성 장 질환, 류마티스성 관절염, 간 섬유증, 신장병증, 건선, 피부 상처 치유, 피부 재생, 췌장염, 위염, 신경변성 장애, 신경염증성 장애, 피부경화증, 암, 고혈압, 비만, II형 당뇨병 및 PPARg 작용제로 치료할 수 있는 다른 질환과 같이 PPARg 관련 질환을 더 낮은 세포독성으로 치료하기 위한 조성물의 제조에 사용되는 화학식 (I) 화합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 대안적 양태는 본 발명의 적어도 하나의 화합물과 이와 조합되어 부가적 또는 상승작용적 생물학적 활성을 나타내는 적어도 하나의 다른 활성 화합물을 함유하는, 조성물, 특히 약학 조성물로 조제되거나 단독의 전술한 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 유도체의 용도에 관한 것이다. 대안적으로, 이 조성물은 운반체 또는 부형제로써 적어도 하나의 불활성 성분, 예컨대 공용매, 계면활성제, 오일, 습윤제, 연화제, 보존제, 안정제 및 항산화제와 배합될 수 있다. 임의의 약리학적 허용성 완충액, 예컨대 TRIS 또는 포스페이트 완충액이 사용될 수도 있다.
본 발명의 목적에 있어서, "활성 화합물 또는 활성 본질"이란 용어는 동의어로써 간주되어야 하고, 인간 또는 동물에게 투여 시 치료 효과를 발휘하는 화학적 실체를 의미하는 것이다.
전형적인 조성물은 본 발명의 화합물 또는 이의 유도체 및 이와 연합된 약학적 허용성 부형제, 하나의 예시로써 운반체 또는 희석제를 포함한다. 이러한 조성물은 캡슐, 사쉐(sachet), 종이 또는 다른 용기의 형태로 존재할 수 있다. 조성물의 제조에는 약학 조성물을 제조하는 통상적인 기술이 사용될 수 있다. 예를 들어, 당해의 화합물은 일반적으로 운반체와 혼합되거나, 운반체에 의해 희석되거나, 또는 앰플, 캡슐, 사쉐, 종이 또는 다른 용기 형태일 수 있는 운반체 내에 밀봉될 수 있다. 운반체가 희석제로 작용할 때, 운반체는 활성 화합물에 대해 매개제(vehicle), 부형제(excipient) 또는 매질(medium)로써 작용하는 고체, 반고체 또는 액체 물질일 수 있다. 당해의 화합물은 사쉐와 같은 과립형 고체 용기에 흡착될 수 있다. 적당한 운반체의 몇몇 예는 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리하이드록시에톡시화된 피마자유, 땅콩유, 올리브유, 락토오스, 백토(terra alba), 수크로오스, 사이클로덱스트린, 아밀로오스, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 젤라틴, 아가, 펙틴, 아카시아, 스테아르산 또는 셀룰로오스의 저급 알킬 에테르, 규산, 지방산, 지방산 아민, 지방산 모노글리세라이드 및 디글리세라이드, 펜타에리스리톨 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌, 하이드록시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈이다. 이와 마찬가지로, 운반체 또는 희석제는 당업계에 공지된 임의의 지속 방출 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 단독으로 또는 왁스와의 혼합물로 포함할 수 있다. 이 포뮬레이션은 또한 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 보존제, 감미제 또는 향미제를 포함할 수도 있다. 본 발명의 포뮬레이션은 당업계에 공지된 절차를 이용하여 환자에게 투여한 후 활성 성분의 급속, 지속 또는 지연 방출을 제공하도록 조제할 수 있다.
약학 조성물은 살균되고 필요하다면 활성 화합물과 유해한 반응을 하지 않는 보조제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치기 위한 염, 완충액 및/또는 착색 물질 등과 혼합될 수 있다.
이 조성물은 죽상동맥경화증, 염증성 장 질환, 류마티스성 관절염, 간 섬유증, 신장병증, 건선, 피부 상처 치유, 피부 재생, 췌장염, 위염, 신경변성 장애, 신경염증성 장애, 피부경화증, 암, 고혈압, 비만, II형 당뇨병 및 PPARg 작용제로 치료할 수 있는 다른 질환과 같은 질환의 치료에 사용될 수 있다.
바람직한 본 발명의 한 양태는 당해의 화합물을 적당한 또는 바람직한 작용 부위에 효과적으로 수송하는 임의의 경로일 수 있는 투여 경로, 예컨대 경구, 비측, 국소, 폐, 경피 또는 비경구, 예컨대 직장, 피하, 정맥내, 요도내, 근육내, 비내, 안과용 용액 또는 연고에 관한 것이다.
비측 투여를 위한, 제제는 에어로졸 적용을 위해 액체 운반체, 특히 수성 운반체에 용해 또는 현탁된 당해의 화합물을 함유할 수 있다. 운반체는 프로필렌 글리콜과 같은 용해제, 계면활성제, 레시틴(포스파티딜콜린) 또는 사이클로덱스트린과 같은 흡수 증강제, 또는 파라벤과 같은 보존제와 같은 첨가제를 함유할 수 있다.
국소 포뮬레이션을 제조하기 위해, 당해의 화합물은 당업계에 공지된 바와 같은 피부학적 매개제에 배치된다. 국소 포뮬레이션에서 투여할 당해의 화합물의 양 및 화합물의 농도는 선택한 매개제, 전달 시스템 또는 장치, 환자의 임상 상태, 부작용 및 포뮬레이션 중의 화합물의 안정성에 따라 달라진다. 따라서, 의사는 당해의 화합물을 적당한 농도로 함유하는 적당한 제제를 이용하고 투여되는 포뮬레이션의 양을 당해의 환자 또는 유사 환자에 대한 임상적 경험에 따라 선택한다.
안과적 적용을 위해, 당해의 화합물은 눈에 사용하기에 적당한 용액, 현탁액 및 연고로 조제한다. 농도는 일반적으로 국소 제제용에 대해 앞에서 논한 바와 같다.
경구 투여를 위해, 고체 또는 유체 단위 투여량 형태를 제조할 수 있다. 정제와 같은 고체 조성물의 제조를 위해, 당해의 화합물은 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 디칼슘 포스페이트, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 칼슘 설페이트, 전분, 락토오스, 아카시아, 메틸셀룰로오스 및 약학적 희석제 또는 운반체와 기능적으로 유사한 물질과 같은 통상의 성분과 포뮬레이션으로 혼합된다.
캡슐은 당해의 화합물을 불활성 약학적 희석제와 혼합한 뒤, 이 혼합물을 적당한 크기의 경질 젤라틴 캡슐에 충진하여 제조한다. 연질 젤라틴 캡슐은 허용되는 식물성 오일, 경질 액체 바셀린 또는 다른 불활성 오일과 당해의 화합물의 슬러리를 기계식 캡슐화하여 제조한다. 시럽, 엘릭서 및 현탁액과 같은 경구 투여용 유체 단위 투여량 형태도 제조할 수 있다. 이 수용성 형태는 당, 방향족 향미제 및 보존제와 함께 수성 매개제에 용해하여 시럽으로 제조할 수 있다. 엘릭서는 방향족 향미제와 함께 당 및 사카린과 같은 적당한 감미제와 하이드로알코올성(예컨대, 에탄올) 매개제를 사용하여 제조한다. 현탁액은 아카시아, 트라가칸트, 메틸셀룰로오스 및 이의 유사물과 같은 현탁화제의 보조하에 수성 매개제로 제조할 수 있다.
비경구용에 적당한 포뮬레이션은 통상의 기술을 수행하는 자에게 자명한 것으로, 예컨대 적당한 주사용 용액 또는 현탁액용이다. 살균된 이 포뮬레이션은 다양한 국소 또는 비경구 경로, 예컨대 피내, 근육내, 혈관내 및 피하 경로에 적합하다.
당해의 화합물 외에도 조성물은 포뮬레이션 및 원하는 전달 방식에 따라, 동물 또는 인간 투여용 약학 조성물의 형성에 상용되는 매개제를 포함하는 약학적 허용성, 비독성 운반체 또는 희석제를 포함할 수 있다. 희석제는 조합물의 생물학적 활성에 과도한 영향을 미치지 않는 것으로 선택한다.
주사용 포뮬레이션에 특히 유용한 이러한 희석제의 예는 물, 다양한 식염수, 유기 또는 무기 염 용액, 링거액, 덱스트로스 용액 및 행크스 용액이다. 또한, 약학 조성물 또는 포뮬레이션은 다른 운반체; 보조제; 또는 비독성, 비치료성, 비면역원성 안정제 및 이의 유사물과 같은 첨가제를 포함할 수 있다.
또한, 부형제도 포뮬레이션에 포함될 수 있다. 예로는 공용매, 계면활성제, 오일, 습윤제, 연화제, 보존제, 안정제 및 산화방지제를 포함한다. 임의의 약리학적 허용성 완충액, 예컨대 트리스 또는 포스페이트 완충액이 사용될 수 있다. 희석제, 첨가제 및 부형제의 효과적인 양은 용해성, 생물학적 활성 등의 측면에서 약학적 허용성 포뮬레이션을 수득하는데 효과적인 양이다.
당해의 화합물은 미소구(microsphere)에 혼입될 수 있다. 당해의 화합물은 알부민 미소구에 부하될 수 있고, 이로부터 이러한 미소구를 비측 투여를 위한 건조 분말로 회수하는 것이 가능하다. 미소구의 제조에 적당한 다른 물질로는 아가, 알긴산염, 키토산, 전분, 하이드록시에틸 전분, 알부민, 아가로스, 덱스트란, 히알우론산, 젤라틴, 콜라겐 및 카제인을 포함한다. 미소구는 분무 건조 공정 또는 유화 공정과 같은 당업자에게 공지된 다양한 공정으로 생산할 수 있다.
예를 들어, 알부민 미소구는 포스페이트 완충액 중의 토끼 혈청 알부민을 교반 하에 올리브 오일에 첨가하여 유중수 에멀젼으로 제조할 수 있다. 그 다음, 이 에멀젼에 글루타르알데하이드 용액을 첨가하고, 에멀젼을 교반하여 알부민을 가교결합시킨다. 미소구는 그 다음 원심분리하여 분리하고, 오일은 제거한 다음, 구는 예컨대 석유 에테르와 그 다음 에탄올로 세척할 수 있다. 마지막으로, 미소구는 체질하고 수집한 뒤 여과 건조할 수 있다.
전분 미소구는 따뜻한 수성 전분 용액, 예컨대 감자 전분 용액을 교반 하에 가열된 폴리에틸렌 글리콜 수용액에 첨가하여 에멀젼으로 제조할 수 있다. 2상계가 형성되면(전분 용액이 내부상으로), 혼합물을 지속적인 교반 하에 실온으로 냉각하고, 이때 내부 상이 겔 입자로 변환된다. 이 입자는 그 다음 실온에서 여과하고, 에탄올과 같은 용매에 슬러리화하고, 그 후 입자는 다시 여과하고 공기 중에서 건조시킨다. 미소구는 열처리 또는 화학적 가교제의 사용과 같은 공지된 가교 절차를 사용하여 경화시킬 수 있다. 적당한 제제로는 글리옥살, 말론디알데하이드, 석시닉알데하이드, 아디프알데하이드, 글루타르알데하이드 및 프탈알데하이드와 같은 디알데하이드류, 부타디온, 에피클로로히드린, 폴리포스페이트 및 보레이트와 같은 디케톤류를 포함한다. 디알데하이드는 아미노기와의 상호작용에 의해 알부민과 같은 단백질을 가교결합하는데 사용되고, 디케톤은 아미노기와 쉬프 염기를 형성한다. 에피클로로히드린은 아미노 또는 하이드록실과 같은 친핵체를 가진 화합물을 에폭사이드 유도체로 활성화시킨다.
다른 바람직한 본 발명의 양태는 투여량 체계이다. "단위 투여량 형태"란 용어는 검체, 예컨대 포유동물 검체, 예컨대 인간, 개, 고양이 및 설치류에게 단위 투여량으로써 적합한 물리적으로 분리된 단위를 의미하며, 각 단위는 필요한 약학적 희석제, 운반체 또는 매개제와 함께 바람직한 약학적 효과를 생산하도록 계산된 소정량의 활성 물질을 함유한다. 본 발명의 단위 투여량 형태에 대한 세부사항은 (a) 활성 물질의 독특한 특성 및 달성하고자 하는 특별한 효과와 (b) 인간 및 동물에 사용하기 위해 상기 활성 물질을 배합하는 기술 고유의 제한에 따라 좌우되고 의존적이다. 단위 투여량 형태의 예는 정제, 캡슐, 환제, 분말 패킷, 웨이퍼, 좌약, 과립, 카시에(cachet), 티스푼 제제(teaspoonfuls), 테이블스푼 제제(tablespoonfuls), 점적기 제제(dropperfuls), 앰플, 바이엘, 계량식 배출을 하는 에어로졸, 임의의 전술한 분리된 복수 제제, 및 본원에 기술된 바와 같은 다른 형태이다. 조성물은 하나 이상의 단위 투여량 형태의 조성물과 본원에 기술된 장애들 중 하나 이상의 장애를 치료하는데 사용하기 위한 지침서를 보유할 수 있는 키트에 포함될 수 있다.
서방형 또는 장기 방출 전달 시스템, 예컨대 다수의 생물중합체(생물학적 기반의 시스템) 중 어느 하나, 리포좀, 콜로이드, 수지 및 다른 중합체성 전달 시스템 또는 구획화된 저장소를 이용하는 시스템은 본원에 기술된 조성물에 이용하여 치료 화합물의 연속 또는 장기 급원을 제공할 수 있다. 이러한 서방형 시스템은 국소, 안내(intraocular), 경구 및 비경구 경로를 통해 전달하기 위한 포뮬레이션에 적용가능하다.
당해의 화합물의 유효량은 치료에 이용된다. 본 발명에 따라 사용되는 화합물의 투여량은 화합물 및 치료되는 상태, 예컨대 수용체 환자의 연령, 체중 및 임상 증상에 따라 달라진다. 다른 요인으로는 투여 경로, 환자, 환자의 의학적 이력, 질환 과정의 중증도, 및 특정 화합물의 효능을 포함한다. 용량은 환자에게 허용할 수 없는 독성을 나타냄이 없이 치료하는 질환의 증후군 또는 징후를 경감시키기에 충분한 것이 좋다. 일반적으로, 화합물의 유효량은 임상가 또는 다른 자격이 있는 관찰자가 확인했을 때 객관적으로 확인가능한 향상 또는 증후군의 객관적인 경감을 제공하는 것이다.
본 발명의 마지막 양태는 상기 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하여, PPARg 작용제로 치료할 수 있는 죽상동맥경화증, 염증성 장 질환, 류마티스성 관절염, 간 섬유증, 신장병증, 건선, 피부 상처 치유, 피부 재생, 췌장염, 위염, 신경변성 장애, 신경염증성 장애, 피부경화증, 암, 고혈압, 비만 및 II형 당뇨병과 같은 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
약어:
AP-1: 활성인자 단백질-1
ARE: 항산화 반응 요소
CBD: 카나비디올
CBDA: 카나비디올 산
CBD-Q: 카나비디올 퀴논
CBG-Q: 카나비제롤 퀴논(VCE-003이라고도 명명됨)
DCC: 디사이클로헥실카르보디이미드
Keap1: 켈크(Kelch) ECH 관련 단백질 1
NFAT: 활성화된 T 세포의 핵인자
NFE2L2 또는 (Nrf2): 핵인자(적혈구 유래 2)-유사 2
NF-kB: 핵인자-카파 B
NP: 뉴런 전구체
NR1C: 핵 서브패밀리 1 C
NRs: 핵 수용체
PPARs: 페릭솜(Perixome) 증식인자 활성화된 수용체
PPARg: PPARγ, 글리타존 수용체 또는 NR1C3이라고도 불리는 퍼옥시좀 증식인자-활성화된 수용체 감마
PPARg-m: PPARg 조절인자
PPARg-fa: PPARg 완전 작용제
PPARα: NR1C1로도 불리는 퍼옥시좀 증식인자-활성화된 수용체 알파
PPARβ/δ: NR1C2로도 불리는 퍼옥시좀 증식인자-활성화된 수용체 베타/델타
PPRE: 퍼옥시좀 증식인자 반응 요소
ROS: 반응성 산소 종
STAT3: 전사 시그널 변환인자 및 활성인자 3
TGFb: 변환 성장인자 베타
VCE-004: 카나비디올 퀴논 화합물; 또한 HU-331 및 화합물 I이라고도 명명됨
HU-331: 카나비디올 퀴논 화합물: VCE-004 및 화합물 I이라고도 명명됨.
본 발명의 도면은 이하에 간단하게 설명된다. 각 도면의 상세한 설명은 모든 관련 실시예에 포함되어 있다.
도면 약어:
I: VCE-004(CBD-Q)
II: 화학식 (II)의 화합물
III: 화학식 (III)의 화합물
IV: 화학식 (IV)의 화합물
V: 화학식 (V)의 화합물
VI: 화학식 (VI)의 화합물
VII: 화학식 (VII)의 화합물
VIII: 화학식 (VIII)의 화합물
IX: 화학식 (IX)의 화합물
X: 화학식 (X)의 화합물
XI: 화학식 (XI)의 화합물
XII: 화학식 (XII)의 화합물
XIII: 화학식 (XIII)의 화합물
XIV: 화학식 (XIV)의 화합물
XV: 화학식 (XV)의 화합물
도 1. HEK -293 세포에서 PPARg 전사활성화 분석
시험된 화합물의 농도(μM)는 x축에 제시했고, PPARg 활성화 배율(fold)은 y축에 제시했다. 이 도면은 PPARg 활성에 미치는 VCE-004(화합물 I)의 효과 vs. 화합물 XI 및 II 내지 V의 효과(도 1a) 및 vs. 화합물 VI 내지 X의 효과(도 1b), 및 vs. 화합물 XII-XV의 효과(도 1c)를 도시한 것이다. PPARγ 완전 작용제 로시글리타존(Rosiglitazone(RZG)) 1μM은 비교 대조군으로 사용했다. 활성화 배율 수준은 참조물질로써 임의의 PPARg 작용제 또는 활성화제의 존재가 없는 대조 샘플(-)을 가지고 계산했다. 데이터는 적어도 3회의 독립 실험의 평균±S.D.로써 나타냈다.
도 2. NIH-3T3 섬유아세포에서 PPARg 전사활성화 분석
시험된 화합물의 농도(μM)는 x축에 제시했고, PPARg 활성화 배율은 y축에 제시했다. 이 도면은 VCE-004(화합물 I) vs. 화합물 III, V, VIII, X 및 XIII이 PPARg 활성에 미치는 효과를 보여준다. PPARγ 완전 작용제 로시글리타존(RZG) 1μM은 비교 대조군으로써 사용했다. 활성화 배율 수준은 참조물질로써 임의의 PPARg 작용제 또는 활성화제의 존재가 없는 대조 샘플(-)을 가지고 계산했다. 데이터는 적어도 3회의 독립 실험의 평균±S.D.로써 나타냈다.
도 3. CBD-퀴논 유도체는 로시글리타존 -유도된 PPARg 활성화를 억제한다.
(A) HEK-293 세포를 GAL4-PPARg 및 GAL4-luc로 공동형질감염시켰다. 세포는 제시된 용량의 화합물 III, V, VIII, X 및 XIII과 30분 동안 예비항온처리하고, 그 다음 1μM 로시글리타존(RSZ)와 6 시간 동안 항온처리했다. 단백질 용해물을 제조하여, 루시퍼라제 활성에 대해 분석했다. 시험된 화합물의 농도(μM)는 x축에 나타내고, PPARg 활성화 배율은 y축에 나타냈다. 이 도면은 RSZ-유도된 PPARg 활성에 미치는 화합물 III, V, VIII, X 및 XIII의 효과를 도시한 것이다. 데이터는 적어도 3회의 독립 실험의 평균±S.D.로써 나타냈다.
(B) 화합물 VIII은 PPARg 상의 RSZ 결합 부위에 결합한다. PPARg에 대한 화합물 VIII(한 예로써)의 결합 특징은 AutoDock 소프트웨어를 사용하고 계산 시스템으로써 Vina 알고리듬을 설정하여 가상 도킹(virtual docking)으로 계산했다. 조사 범위는 분자 표면 둘레 전체에서 결합점을 찾도록 설정했다. 화합물 VIII은 RSZ의 밀접하게 관련된 결합 부위에서 PPARg에 결합하지만, 다른 리간드-수용체 상호작용 패턴이어서 수용체에 미치는 다른 입체형태 효과를 도출한다.
도 4. 세포독성 활성
세포주 N2a(A), HT22(4B) 및 MO3.13(4C) 세포를 표시된 용량의 VCE-004(화합물 I) vs. 화합물 II 내지 XV와 24h 동안 항온처리하고, 세포 생육성을 MTT 분석으로 정량분석했다. 결과는 적어도 3회의 독립 실험의 평균±S.D.로 표시하고, 임의의 PPARg 작용제 또는 활성화제의 존재가 없는 대조 샘플(-)에 대한 세포 생육성의 백분율로써 나타냈다. 대조군은 100%로 설정했고, 데이터는 그 값으로 나타냈다.
도 5. Nrf2 전사 분석
HaCaT-ARE-Luc 세포는 VCE-004(화합물 I) 및 화합물 II 내지 VIII(A) 또는 화합물 IX 내지 XV(B)와 표시된 농도로 6h 동안 항온처리했고, 단백질 용해물을 제조하여 루시퍼라제 활성을 분석했다. 산화촉진제 tert-부틸하이드로퀴논(tBHQ) 20μM 을 양성 대조군으로 사용했다. 참고로, 임의의 PPARg 작용제 또는 활성화제의 존재가 없는 대조 샘플(-)을 가지고 활성화 배율 수준을 계산했다. 데이터는 적어도 3회의 독립 실험으로부터 평균±S.D.로 나타냈다.
도 6. 신경보호활성
N2a 세포는 표시된 농도의 화합물 I 내지 VIII(5A) 및 IX 내지 XV(5B)와 1h 동안 예비항온처리했다. 그 다음, 세포는 24h 동안 5mM 글루타메이트로 처리하여 흥분성독성(excitotoxicity)을 유도했다. 세포 생육성은 MTT 분석으로 정량분석했다. 결과는 적어도 3회 독립 실험의 평균 ± S.D.로 나타내고, 임의의 PPARg 작용제 또는 활성화제의 존재가 없는 대조 샘플(-)에 대비하여, 그리고 글루타메이트의 존재(+) 또는 부재(-) 하에 세포 생육성의 백분율로써 나타냈다. 대조군은 100%로 설정했고, 데이터는 그 값으로 나타냈다.
도 7. TGFb -유도된 콜라겐 I형 유전자 전사의 억제
CBD-유도체의 잠재적 항-섬유증 활성을 조사하기 위해, NIH-3T3 섬유아세포를 플라스미드 COL1A2-Luc로 Rotiⓒ-Fect를 제조자의 지시에 따라 사용하여 일시적 형질감염시켰다. COL1A2-루시퍼라제 작제물은 루시퍼라제 리포터 유전자에 융합된 인간 COL1A2 프로모터의 -353 내지 +58bp에 해당하는 서열을 함유한다(pGL2 기본, Promega, Madison, WI). 24시간 후, 세포를 화합물 III, V, VIII 및 X(전체 패밀리 중에서 화학식 II 내지 XV로 표시되는 CBD-Q 유도체를 입증성 실시예로써 채택함)과 30분 동안 항온처리하고, TGFb(50ng/ml)로 6h 동안 처리했다. 단백질 용해물을 제조하고, 루시퍼라제 활성을 분석했다. 시험된 화합물의 농도(μM)는 x축에 나타내고, COL1A2 활성화 백분율은 y축에 나타내고, 화합물 부재 하의 TGFb의 효과는 100% 활성화로 간주했다. 데이터는 적어도 3회의 독립 실험의 평균±SD로써 나타냈다.
도 8. TGFb -유도된 II형 콜라겐의 억제
콜라겐 생산은 세포 펠릿에 존재하는 콜라겐 단백질과 비-콜라겐 단백질의 양을 정량하도록 고안된, Sirius Red-Fast Green 방법을 사용하여 수행했다. 콜라겐 생산은 Genesis 10 UV 스캐닝 분광형광분석기(spectrofluorometer)(Thermo Fisher Scientific)에서 540nm 및 605nm에서 측정했다. 콜라겐의 양을 계산하기 위해 먼저 540nm에서 흡광도를 방해하는 Fast Green에 의해 기여값을 감하여 OD540 값을 수정했다. Fast Green은 OD 540 값에 29.1%의 기여를 한다. 색 당량은 각각 OD 540 및 640에서 콜라겐 단백질의 경우 37.8, 비콜라겐 단백질의 경우 2.04이다.
콜라겐(pg/100㎕ 세포 펠릿) = {[OD540-(OD605 x 0.291)]/37.8 x 1000} x 106.
실험은 3회 반복하고, 결과는 미처리 세포 대비 유도 배율로 나타냈다.
도 9. ROS 생산 및 미토콘드리아 경막 전위에 미치는 CBD-Q 유도체들의 효과
Jurkat 세포를 VCE-004(HU-311 또는 화합물 I) 또는 화합물 III, V, VII 및 X(화합물 I 유도체의 예)의 증가 농도로 2시간 동안 처리하여 미토콘드리아 막 전위를 검출하고, 또는 6시간 동안 처리하여 반응성 산소 종(ROS)을 검출했다.
형광 프로브 H2DCF-DA(20nM, 녹색 형광) 및 MitoTracker Red CMXR(MTR-CMXR) (50nM)은 각각 ROS 및 미토콘드리아 막 전위를 검출하는데 사용했다(Molecular Probes, Eugene, OR, USA). 처리후, 세포를 저온 인산염완충식염수(PBS)로 2회 세척하고, PBS에서 20분 동안 37℃하에 항온처리한 뒤, FACSCantoII 유세포분석기에서 분석했다.
실시예
이하에 설명되는 본 발명의 실시예들은 보호 범위를 제한함이 없이 바람직한 양태를 예시하기 위한 것이다.
실시예 1. 화학적 합성 및 NMR 분석
A) CBD 로부터 시작한 CBD 퀴논 유도체들의 합성. 화합물 II 내지 X의 합성
r.t.에서 공기의 존재하에 톨루엔 중의 tBuOK를 사용하여 CBD로부터 VCE-004(HU-331 또는 화합물 I로도 명명됨)의 합성을 수행했다(반응식 1). 3번 위치에 알킬아민으로 치환된 유도체들의 합성은 VCE-004를 과량의 아민과 실온에서 공기-개방된 반응 시스템에서 반응시켜 쉽게 달성했다.
반응식 1
Figure 112016105294361-pct00016
섬광 크로마토그래피 정제는 90 내지 95% 순수 산물을 제공했고, 이는 HPLC 정제를 이용하여 최대 98%까지 증가시킬 수 있다. 높은 변환율은 점적 대 점적 반응을 제공할 수 있도록 수 시간 내에 달성되었다. 용매는 증발시키고, 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피로 정제하여 순도가 약 95%인 산물을 제공했다.
제조 화합물 I.
톨루엔(60ml) 중의 CBD(302mg, 0.960mmol) 용액에 tBuOK(298mg, 2.656mmol)를 첨가하여 자주색 용액을 제공했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 공기 개방된 둥근바닥 플라스크에서 교반하고, 변환은 TLC 분석(용출제: 10% EtOAc/헥산)으로 모니터했다. 4h 후, 반응 혼합물을 HCl(5% 수용액, 100ml)로 세척하고, 수성 층은 EtOAc(30ml)로 추출했다(반응식 2). 합한 유기 층을 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤, 농축했다. 미정제 잔류물은 SiO2(0®20% EtOAc/헥산) 상의 섬광 크로마토그래피로 정제하여 234mg의 VCE-004(화합물 I)[갈색 고체, 수율: 74%]를 제공했다.
반응식 2
Figure 112016105294361-pct00017
제조 화합물 II.
( 1'R,6'R )-3-(에틸아민)-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(10ml) 중의 VCE-004(100mg, 0.30mmol) 용액에 에틸아민(1.0ml, 70% 수용액, 12.58mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 2시간 동안 교반하고, 그 다음 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출하여 작업했다(반응식 3). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30@100% CH3CN/H2O)로 정제하여 33mg의 (1'R,6'R)-3-(에틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 오일, 수율: 29%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 6.35 (bs, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.57 (s, 2H), 3.61 (m, 1H), 3.52 (quin, J= 13.2, 7.1 Hz, 2H), 2.73 (m, 1H), 2.48 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 2.26-1.80 (m, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.46-1.24 (m, 9H), 0.89 (t, J= 6.6 Hz, 3H).
반응식 3
Figure 112016105294361-pct00018
제조 화합물 III.
( 1'R,6'R )-3-( 펜틸아민 )-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(10ml) 중의 VCE-004(60mg, 0.155mmol) 용액에 아밀아민(0.75ml, 6.472mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 18시간 동안 교반했다. 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출했다(반응식 4). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 47mg의 (1'R,6'R)-3-(펜틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 고체, 수율: 73%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 6.43 (bs, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.55 (s, 2H), 3.62 (m, 1H), 3.46 (c, J= 6.6 Hz, 2H), 2.72 (m, 1H), 2.48 (t, J= 7.7 Hz, 2H), 2.31-1.72 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.48-1.24 (m, 12H), 0.90 (m, 6H).
반응식 4
Figure 112016105294361-pct00019
제조 화합물 IV.
( 1'R,6'R )-3-( 이소부틸아민 )-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(12ml) 중의 VCE-004(100mg, 0.304mmol) 용액에 이소부틸아민(1.2ml, 12.075mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 22시간 동안 교반했다. 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출했다(반응식 5). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 119mg의 (1'R,6'R)-3-(이소부틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 고체, 수율: 97%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 6.53 (bs, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.62 (m, 1H), 3.27 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.73 (dt, J = 12.0 Hz, 2.8 Hz, 1H), 2.47 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.27-1.72 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.47-1.29 (m, 7H), 1.00 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.89 (t, J= 6.6 Hz, 3H).
반응식 5
Figure 112016105294361-pct00020
제조 화합물 V.
( 1'R,6'R )-3-( 부틸아민 )-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(12ml) 중의 VCE-004(109mg, 0.332mmol) 용액에 n-부틸아민(1.2ml, 12.143mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 18시간 동안 교반했다. 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출했다(반응식 6). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 115mg의 (1'R,6'R)-3-(부틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 고체, 수율: 93%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 6.44 (bs, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.61 (m, 1H), 3.46 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 2.73 (m, 1H), 2.48 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.19 (m, 1H), 1.98 (m, 1H), 1.78-1.57 (m, 8H), 1.49-1.25 (m, 10H), 0.96 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 0.89 (m, 3H).
반응식 6
Figure 112016105294361-pct00021
제조 화합물 VI.
( 1'R,6'R )-3-(메틸아민)-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(20ml) 중의 VCE-004(266mg, 0.810mmol) 용액에 메틸아민(4.0ml, EtOH 중의 8M 용액, 32.0mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 7시간 동안 교반했다. 물(100ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(70ml)로 추출했다(반응식 7). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 114mg의 (1'R,6'R)-3-(메틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 고체, 수율: 39%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 8.38 (bs, 1H), 6.54 (m, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.63 (m, 1H), 3.19 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 2.71 (dt, J = 11.5 Hz, 2.7 Hz, 1H), 2.54 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.28-1.71 (m, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.51-1.25 (m, 6H), 0.89 (t, J= 7.1 Hz, 3H).
반응식 7
Figure 112016105294361-pct00022
제조 화합물 VII.
( 1'R,6'R )-3-( 이소프로필아민 )-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(10ml) 중의 VCE-004(104mg, 0.317mmol) 용액에 이소프로필아민(1.0ml, 11.639mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 22시간 동안 교반했다. 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출했다(반응식 8). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 92mg의 (1'R,6'R)-3-(이소프로필아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 오일, 수율: 75%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 6.40 (m, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.95 (m, 1H), 3.61 (m, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.45 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.21 (m, 1H), 1.92 (m, 1H), 1.77 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.45-1.28 (m, 6H), 1.26 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 0.89 (t, J= 7.1 Hz, 3H).
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Figure 112016105294361-pct00023
제조 화합물 VIII.
( 1'R,6'R )-3-(벤질아민)-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(13ml) 중의 VCE-004(117mg, 0.303mmol) 용액에 벤질아민(1.3ml, 11.913mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 18시간 동안 교반했다. 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출했다(반응식 9). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 87mg의 (1'R,6'R)-3-(벤질아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 고체, 수율: 66%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 8.30 (bs, 1H), 7.44-7.26 (m, 5H), 6.64 (m, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.65 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.59 (m, 2H), 3.64 (m, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.47 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.30-1.76 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.54-1.23 (m, 6H), 0.88 (m, 3H).
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Figure 112016105294361-pct00024
제조 화합물 IX.
( 1'R,6'R )-3-( 네오펜틸아민 )-6- 하이드록시 -3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(7ml) 중의 VCE-004(47mg, 0.143mmol) 용액에 네오펜틸아민(0.7ml, 6.031mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 20시간 동안 교반했다. 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출했다(반응식 10). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 57mg의 (1'R,6'R)-3-(네오펜틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 오일, 수율: 97%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 6.59 (m, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.63 (m, 1H), 3.26 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.74 (dt, J = 12.0 Hz, 3.3 Hz, 1H), 2.49 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.26-1.83 (m, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.50-1.23 (m, 7H), 1.00 (s, 9H), 0.90 (t, J= 6.6 Hz, 3H).
반응식 10
Figure 112016105294361-pct00025
제조 화합물 X.
( 1'R,6'R )-3-( 이소펜틸아민 -6- 하이드록시 )-3'- 메틸 -4- 펜틸 -6'-( 프로프 -1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온
EtOH(15ml) 중의 VCE-004(101mg, 0.307mmol) 용액에 이소펜틸아민(1.5ml, 12.735mmol)을 첨가했다. 이 반응 혼합물을 r.t.에서 22시간 동안 교반했다. 물(50ml)에 붓고, HCl(10% 수용액)로 pH=2 이하로 산성화하고, CH2Cl2(30ml)로 추출했다(반응식 11). 유기 층은 Na2SO4(무수) 상에서 건조하고, 여과한 뒤 농축했다. 미정제 잔류물은 역상 크로마토그래피(30®100% CH3CN/H2O)로 정제하여 125mg의 (1'R,6'R)-3-(이소펜틸아민)-6-하이드록시-3'-메틸-4-펜틸-6'-(프로프-1-엔-2-일)-[1,1'-비(사이클로헥산)]-2',3,6-트리엔-2,5-디온을 제공했다[자주색 오일, 수율: 98%].
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm: 6.38 (bs, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.55 (s, 2H), 3.61 (m, 1H), 3.48 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.72 (m, 1H), 2.48 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.21 (m, 1H), 2.00-1.60 (m, = 7.1 Hz, 2H), 1.46-1.23 (m, 8H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.88 (t, J = 6.6 Hz, 3H).
반응식 11
Figure 112016105294361-pct00026
B) 카나비디올 산 CBDA로부터 CBD 퀴논 유도체의 합성, 화합물 XI 내지 XV의 합성.
화합물 XI 전구체의 합성.
메틸 4- 하이드록시 -5-(( 1R,6R )-3- 메틸 -6-( 프로프 -1-엔-2-일) 사이클로헥스 -2- 에 닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트(CBDA-메틸 에스테르)
반응식 12
Figure 112016105294361-pct00027
a) 메탄올(5ml) 중의 카나비디올 산(CBDA)(180mg, 0.40mmol) 용액에, 디사이클로헥실카르보디이미드(DCC) (163mg, 1.6mmol) 및 촉매성 p-톨루엔설폰산(약 5mg)을 첨가했다(반응식 12). 40분 동안 교반한 후, 반응물을 증발로 워크업(work up)했다. 잔류물을 톨루엔(약 10ml)에 용해하고, 냉각(-18℃)하여 우레아를 침전시켰다. 1h 후 용액을 소결된 유리 필터 위에 여과하고, 잔류물은 RP C-18 실리카겔을 이용한 섬광 크로마토그래피로 정제하여 140mg의 메틸 4-하이드록시-5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트를 수득했다[무색 포말, 수율: 75%].
b) 메탄올(8ml) 중의 카나비디올 산(CBDA)(200mg, 0.54mmol) 용액에, 트리메틸실릴디아조메탄(3.0ml, 헥산 중의 2M)을 첨가했다(반응식 12). 실온에서 5분 동안 교반한 후, 반응물을 증발로 워크업했다. 산물은 바로 산화 단계에 사용하기에 충분하게 순수했다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm 11.97 (s, 1H), 6.40 (bs, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.54 (bs, 1H), 4.51 (bs, 1H), 4.38 (bs, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.77 (m, 2H), 1.81 (bs, 3H), 1.70 (bs, 3H), 0.89 (t, J = 6.6 Hz, 3H).
화합물 XI의 제조
메틸 4- 하이드록시 -5-(( 1R,6R )-3- 메틸 -6-( 프로프 -1-엔-2-일) 사이클로헥스 -2- 에닐 )-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
반응식 13
Figure 112016105294361-pct00028
EtOAc 4ml에 100mg(0.27mmol)의 메틸 4-하이드록시-5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트(CBDA-메틸 에스테르)를 용해한 용액에, SIBX(460mg, 0.77mmol, 3mol 당량)를 첨가하고, 반응물을 1h 동안 환류시켰다(반응식 13). 냉각 및 셀라이트 상으로 여과한 후, 여액을 5% NaHCO3 및 염수로 연속 세척했다. 건조(Na2SO4) 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출제로써 석유 에테르-CH2Cl2 8:5)로 정제하여 24mg의 화합물 XI[갈색 고체, 수율:22%]을 제공했다.
1H NMR CDCl3, 300 MHz) d ppm 7.00 (bs, 1H), 5.13 (bs, 1H), 4.57 (s, 1H), 4.53 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.73 (bd, J = 7.0 Hz, 1H), 2.74 (td, J = 9,1, 9.1, 1.5 Hz, 1H), 2.36 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.72 (bs, 3H), 1.64 (bs, 3H), 0.88 (t, J = 6.6 Hz, 3H).
화합물 XII 전구체의 합성
펜에틸 2,4- 디하이드록시 -3-(( 1R,6R )-3- 메틸 -6-( 프로프 -1-엔-2-일) 사이 클로헥스-2-에닐)-6-펜틸벤조에이트(CBDA-펜에틸 에스테르)
반응식 14
Figure 112016105294361-pct00029
CH2Cl2(20ml) 중의 카나비디올산(CBDA)(2.15g, 6.0mmol) 용액에, 펜에틸 알코올(0.860ml)을 첨가한 다음, DCC(2.550g, 12mmol, 2mol.당량) 및 cat.PTSA(30mg)을 첨가했다. 1h 후 반응물을 증발로 워크업하고, 잔류물을 톨루엔에 용해하고, -18℃에서 20분 동안 냉각시켜 디사이클로헥실우레아를 침전시켰다. 여과 후, 여액을 증발시키고, 잔류물을 RP18 실리카겔을 이용한 섬광 크로마토그래피로, 용출제로써 메탄올-물 구배(6:4부터 순수 메탄올까지)를 이용하여 증발시켜, 1.52g(71%)의 오일을 수득했다.
1H NMR CDCl3, 300 MHz) d ppm 12.0 (s, 1H), 7.35-7.24 m, 5H), 6.51 (bs, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.55 (bs, 1H), 4.55 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.53 (bs, 1H), 4.38 (bs, 1H), 4.10 (bs, 1H), 3.10 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.70 (m, 2H), 1.79 (bs, 3H), 1.71 (bs, 3H), 0.88 (t, J = 6.6 Hz, 3H).
화합물 XII의 제조
펜에틸 4- 하이드록시 -5-(( 1R,6R )-3- 메틸 -6-( 프로프 -1-엔-2-일) 사이클로헥스 -2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
반응식 15
Figure 112016105294361-pct00030
펜에틸 2,4-디하이드록시-3-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-6-펜틸벤조에이트 302mg(0.65mmol)을 4ml EtOAc에 용해한 용액에, SIBX(1.10g, 39.1mmol, 6mol.당량)를 첨가하고, 반응물을 1h 동안 환류시켰다(반응식 15). 냉각 및 셀라이트 상으로 여과 후, 여액을 연속해서 5% NaHCO3 및 염수로 세척했다. 건조(Na2SO4) 및 증발 후, 잔류물을 RP-18 실리카겔 섬광 크로마토그래피에서 용출제로써 메탄올-물 구배(6:4부터 순수 메탄올까지)로 정제하여 최종적으로 94mg(31%)의 화합물 XII를 제공했다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm 7.00 (bs, 1H), 5.14 (bs, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.51 (t, J = 7.5 Hz), 3.74 (bd, J = 7.0 Hz, 1H), 3.02 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.75 (br t, J = 9,1 1.5 Hz, 1H), 2.26 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.74 (bs, 3H), 1.67 (bs, 3H), 0.86 (t, J = 6.6 Hz, 3H).
화합물 XIII 전구체의 합성
(E)-3,7- 디메틸옥타 -2,6- 디에닐 -2,4- 디하이드록시 -3-(( 1R,6R )-3- 메틸 -6-( 프로프 -1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-6-펜틸벤조에이트(CBDA-제라닐 에스테르)
반응식 16
Figure 112016105294361-pct00031
카나비디올 산(CBDA)(300mg, 0.84mmol)을 CH2Cl2(4ml)에 용해한 용액에, 제라니올(0.18ml, 10.1mmol, 1.2mol 당량)을 첨가하고, 그 다음 DCC(345mg, 1.68mmol, 2mol 당량) 및 cat.PTSA(30mg)를 첨가했다. 25분 후, 반응물을 증발로 워크업하고, 잔류물을 톨루엔에 용해한 뒤, -18℃에서 20분 동안 냉각하여 디사이클로헥실우레아를 침전시켰다. 여과 후, 여액은 증발시키고, 잔류물은 중력 실리카겔 크로마토그래피에서 용출제로써 석유에테르-EtOAc 95:5를 사용하여 섬광크로마토그래피로 정제했다. 무색 오일 200mg(67%)을 수득했다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm 12.1 (s, 1H), 6.48 (bs, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.54 (bs, 1H), 5.45 (brt, J = 6.7 Hz, 1H), 5.08 ( (br s, 1H), 4.81 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 4.51 (bs, 1H), 4.38 (bs, 1H), 4.08 (bs, 1H), 2.74 (m, 2H), 1.78 (bs, 3H), 1.75 (bs, 3H), 1.71 (bs, 3H), 1.67 (bs, 3H), 0.88 (t, J = 6.6 Hz, 3H).
화합물 XIII의 제조
(E)-3,7- 디메틸옥타 -2,6- 디에닐 -4- 하이드록시 -5-(( 1R,6R )-3- 메틸 -6-( 프로프 -1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
반응식 17
Figure 112016105294361-pct00032
200mg(0.40mmol)의 (E)-3,7-디메틸옥타-2,6-디에닐2,4-디하이드록시-3-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-6-펜틸-벤조에이트를 4ml EtOAc에 용해한 용액에 SIBX(680mg, 2.4mmol, 6mol. 당량)를 첨가하고, 반응물을 40min 동안 환류시켰다(반응식 17). 냉각하고 셀라이트 위로 여과한 후, 여액을 연속해서 5% NaHCO3 및 염수로 세척했다. 건조(Na2SO4) 및 증발 후, 잔류물을 RP-18 실리카 겔 섬광 크로마토그래피에서 용출제로써 메탄올-물 구배(6:4부터 순수 메탄올까지)를 사용하여 정제하여 궁극적으로 18mg(9%)의 화합물 XIII을 제공했다.
1H NMR (CDC13, 300 MHz) d ppm 6.99 (bs, 1H), 5.38 (bt, J = 6.8 Hz, 1H), 5.12 (bs, 1H), 5.07 (bs, 1H), 4.81 (bs, 1H), 4.80 (bs, 1H), 4.56 (bs, 1H), 3.97 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.73 (m,lH), 2.37 (m, 2H), 1.73 (bs, 3H), 1.70 (bs, 3H), 1.67 (bs, 3H), 1.62 (bs, 3H), 0.86 (t, J = 6.9, 3H).
화합물 XIV 전구체의 합성
( 1S,2S,4R )-1,7,7- 트리메틸비사이클로[2.2.1]헵타 -2-일-2,4- 디하이드록시 -3-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-6-펜틸벤조에이트(CBDA 보르닐 에스테르)
반응식 18
Figure 112016105294361-pct00033
카나비디올산(CBDA)(302mg, 0.84mmol)을 CH2Cl2(4ml)에 용해한 용액에, (-)(S)-보르네올(157mg, 1.2mol 당량)을 첨가한 다음, DCC(350mg, 2mol. 당량) 및 cat. PTSA(30mg)를 첨가했다. 40분 후, 반응물을 증발로 워크업하고, 잔류물을 톨루엔에 용해한 뒤, -18℃에서 20분 동안 냉각하여 디사이클로헥실우레아를 침전시켰다. 여과 후, 여액은 증발시키고, 잔류물은 RP18-실리카 겔 섬광 크로마토그래피에서 메탄올-물 구배(6:4부터 순수 메탄올까지) 용출제를 사용하여 정제했다. 최종적으로 178mg(59%)의 무색 오일이 수득되었다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm 12.2 (s, 1H), 6.48 (bs, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.54 (bs, 1H), 5.54 (bs, 1H), 5.19 ( (br s, 1H), 4.52 (bs, 1H), 4.40 (bs, 1H), 4.12 (bs, 1H), 2.91 (m, 2H), 1.80 (bs, 3H), 1.71 (bs, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.89 (s, 6H), 0.88 (t, J = 6.6 Hz, 3H).
화합물 XIV의 제조
(( 1S,2S,4R )-1,7,7- 트리메틸비사이클로[2.2.1]헵탄 -2-일-4- 하이드록시 -5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
반응식 19
Figure 112016105294361-pct00034
170mg(0.34mmol)의 (1S,2S,4R)-1,7,7-트리메틸-비사이클로[2.2.1]헵탄-2-일-2,4-디하이드록시-3-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-6-펜틸벤조에이트를 4ml EtOAc에 용해한 용액에, SIBX(578mg, 2.1mmol, 6mol. 당량)를 첨가하고, 반응물을 40min 동안 환류시켰다(반응식 19). 냉각하고 셀라이트를 통해 여과한 후, 여액을 연속해서 5% NaHCO3 및 염수로 세척했다. 건조(Na2SO4) 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피에서 용출제로써 석유 에테르-EtOAc 98:2를 사용하여 정제하여 25mg(15%)의 화합물 XIV를 제공했다.
1H NMR (CDC13, 300 MHz) d ppm 6.98 (bs, 1H), 5.16 (bs, 1H), 5.10 (bd, J = 10 Hz, 1H), 4.58 (bs, 1H), 4.56 (bs, 1H), 3.75 (bd, J = 6.8 Hz, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.37 (m, 2H), 1.61 (bs, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.86 (t, J = 6.9, 3H).
화합물 XV 전구체의 합성
( 1R,2R,4R )-1,5,5- 트리메틸비사이클로[2.2.1]헵탄 -2-일-2,4- 디하이드록시 -3-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-6-펜틸벤조에이트(CBDA 펜 칠(fenchyl) 에스테르)
반응식 20
Figure 112016105294361-pct00035
카나비디올산(CBDA)(550mg, 1.54mmol)을 CH2Cl2(4ml)에 용해한 용액에, (+)(R)-펜콜(284mg, 1.2mol 당량)을 첨가한 뒤, DCC(634mg, 2mol 당량) 및 cat.PTSA(30mg)를 첨가했다. 40분 후, 반응물을 증발로 워크업하고, 잔류물을 톨루엔에 용해한 뒤, -18℃에서 20분 동안 냉각하여 디사이클로헥실우레아를 침전시켰다. 여과 후, 여액은 증발시키고, 잔류물은 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 무색 오일 350mg(64%)을 제공했다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) d ppm 12.34 (s, 1H), 6.50 (bs, 1H), 6.24 (s, 1H), 5.57 (bs, 1H), 4.64 (bs, 1H), 4.52 (bs, 1H), 4.39 (bs, 1H), 4.10 (bs, 1H), 2.97 (m, 2H), 1.71 (bs, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.89 (s, 6H), 0.89 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.79 (s, 3H).
화합물 XV의 제조
( 1R,2R,4R )-1,5,5- 트리메틸비사이클로[2.2.1]헵탄 -2-일 4- 하이드록시 -5-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-3,6-디옥소-2-펜틸사이클로헥사-1,4-디엔카르복실레이트
반응식 21
Figure 112016105294361-pct00036
300mg(0.61mmol)의 (1R,2R,4R)-1,5,5-트리메틸비사이클로[2.2.1]-헵탄-2-일-2,4-디하이드록시-3-((1R,6R)-3-메틸-6-(프로프-1-엔-2-일)사이클로헥스-2-에닐)-6-펜틸벤조에이트를 4ml EtOAc에 용해시킨 용액에, SIBX(1.019g, 6mol 당량)를 첨가하고, 반응물을 40min 동안 환류시켰다(반응식 21). 냉각 및 셀라이트를 통해 여과한 후, 여액을 연속해서 5% NaHCO3 및 염수로 세척했다. 건조(Na2SO4) 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피에서 석유에테르-EtOAc 98:2 용출제를 사용하여 정제하여 81mg(27%)의 화합물 XV를 수득했다.
1H NMR (CDC13, 300 MHz) d ppm 6.98 (bs, 1H), 5.16 (bs, 1H), 5.10 (bd, J = 10 Hz, 1H), 4.60 (bs, 1H), 4.57 (bs, 1H), 4.55 (bs, 1H), 3.73 (bd, J = 10 Hz, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.38 (m, 2H), 1.67 (bs, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 0.86 (s, 3H), 0.86 (t, J = 6.9, 3H).
시험관내 분석
실시예 2. PPARg 작용제 활성
신규 화합물의 생물학적 활성을 조사하기 위해 HEK-293 세포 및 NIH-3T3 섬유아세포에서 PPARg 전사활성화 분석을 수행했다.
HEK293T 세포 및 인간 1차 섬유아세포는 10% 소태아혈청(FBS), 및 1%(v/v) 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM에서 5% CO2 함유 가습 대기 하에 37℃에서 유지시켰다. 로시글리타존은 케이맨 케미컬 컴패니(Ann Arbor, MI, USA)에서 구입했다. 다른 모든 시약은 시그마 컴패니(St. Lousi, MO, USA)에서 구입했다. HEK293T 세포(2x103/웰)(도 1a, 1b 및 1c) 또는 NIH-3T3 섬유아세포(5x103/웰)(도 2)는 BD Falcon™ White와 클리어 바텀(Clear Bottom) 96웰 Microtest™ Optilux™ 평판에 접종하여 24시간 동안 배양했다. 그 후, 세포는 Rotiⓒ-Fect(Carl Roth, Karlsruhe, Germany)를 제조자의 지시에 따라 사용하여 발현 벡터 GAL4-PPARγ 및 루시퍼라제 리포터 벡터 GAL4-luc로 일시적으로 동시형질감염시켰다. 24시간 형질감염 후, 세포는 증가하는 용량의 화합물로 6시간 동안 전처리했다. 그 다음, 세포는 25mM 트리스포스페이트 pH7.8, 8mM MgCl2, 1mM DTT, 1% Triton X-100 및 7% 글리세롤에 용해시켰다. 루시퍼라제 활성은 TriStar LB 941 멀티모드 마이크로평판 판독기(Berthold)를 사용하고 루시퍼라제 분석 키트(Promega, Madison, WI, USA)의 지시에 따라 세포 용해물에서 측정했다. 단백질 농도는 Bradford 검정(Bio-Rad, Richmond, CA, USA)으로 측정했다. 용해 완충액으로 수득한 배경값은 각 실험 값에서 빼고, 특이적 전사활성화는 미처리 세포 대비 유도 배율로 나타냈다. 모든 실험은 적어도 3회 반복했다. 사용한 플라스미드는 Gal4-hPPAR감마(플라스미드 명칭: pCMV-BD-hPPARg, Sinal Laboratory, Dept. of Pharmacology, Dalhousie University에서 제조됨) 및 루시퍼라제 유전자에 융합된 5개의 Gal4 DNA 결합 부위를 포함하는 Gal4 luc 리포터 플라스미드였다. 이러한 분석은 도 1(a, b 및 c)과 도 2에 예시했으며, 이 도면들은 루시퍼라제 리포터 유전자와 함께 PPARg를 일시적으로 과잉발현하는 세포(PPARg-GAL4/GAL4-LUC)에서 수행되고 화합물들로 6시간 동안 처리한 전사활성화 분석을 통해 PPARg 활성에 미치는 VCE-004(화합물 I) 및 유사체들의 효과를 보여준다. 데이터는 3반복한 결과의 평균 및 표준편차 오차 막대로 제시했다. 루시퍼라제 활성의 유의적인 증가는 미처리 세포에 비해 퀴논 유도체로 처리된 세포에서 관찰되었다. 이러한 결과는 화합물 II 내지 XIV가 5 내지 50μM 농도에서 PPARg의 활성화에 화합물 VCE-004(화합물 I)보다 유의적으로 더 강력하다는 것을 확인시켜준다. 화합물 II 내지 X는 농도 의존적 방식으로 PPARg 전사활성화를 증가시키며, II, III, IV, V, VII 및 VIII이 가장 활성적인 화합물이다. 또한, 이 화합물들의 고 농도(10, 25 및 50μM)는 VCE-004(화합물 I)에 비해 PPARg를 활성화시키는데 특히 강력하다. 완전 PPARg 작용제인 RZG는 1μM의 농도에서 PPARg의 활성을 100배 넘게 증가시켰다. 이에 반해, 본 발명에 기술된 화합물들의 1μM 농도에 의해 유도된 PPARg 활성의 최대 유도는 결코 5배보다 높지 않았고, 이는 이 신규 화합물들이 PPARg 조정제(modulator)이지, PPARg 완전 작용제(full agonist)는 아니라는 것을 시사한다.
실시예 3. 카나비디올-퀴논 유도체 및 로시글리타존은 PPARg 단백질의 동일 부위에 결합한다.
(A) HEK293T 세포는 10% 소태아혈청(FBS), 및 1%(v/v) 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM에서 5% CO2 함유 가습 대기 하에 37℃에서 유지시켰다. 로시글리타존은 케이맨 케미컬 컴패니(Ann Arbor, MI, USA)에서 구입했다. HEK293T 세포(2x103/웰)(도 3a)는 BD Falcon™ White와 클리어 바텀(Clear Bottom) 96웰 Microtest™ Optilux™ 평판에 접종하여 24시간 동안 배양했다. 그 후, 세포는 Rotiⓒ-Fect(Carl Roth, Karlsruhe, Germany)를 제조자의 지시에 따라 사용하여 발현 벡터 GAL4-PPARγ 및 루시퍼라제 리포터 벡터 GAL4-luc로 일시적으로 동시형질감염시켰다. 24시간 형질감염 후, 세포는 증가하는 용량의 화합물로 30분 동안 전처리한 다음, RSZ(1μM)로 6시간 동안 자극했다. PPARg의 전사 활성은 실시예 2에서처럼 측정했고, 화합물 III, V, VIII, X 및 XIII이 RSZ-유도된 PPARg 전사활성화를 감소시킬 수 있는 것으로 확인되었고, 이는 화합물 III, V, VIII, X 및 XIII과 RSZ가 PPARg 상의 동일한 결합 부위에 결합할 수 있다는 것을 암시한다.
(B) PPARg에 대한 화합물 VIII(한 예로써)의 결합 특징은 AutoDock 소프트웨어를 사용하고 계산 시스템으로써 Vina 알고리듬을 설정하여 가상 도킹(virtual docking)으로 계산했다. 조사 범위는 분자 표면 둘레 전체에서 결합점을 찾도록 설정했다. 이 방법의 효율을 보장하기 위해, 표준 PPARg 리간드 RSZ의 도킹 특징들도 계산하여, 이 결과를 대조군으로 사용했다. AutoDock는 각 리간드(RSZ 및 화합물 VIII)마다 10개의 안정한 입체형태를 보고했다. RSZ 및 화합물 VIII 모두에 대한 이러한 입체형태들 중 6개는 이전에 보고된[Liberato et al., 2012] RSZ 결합 부위와 일치했다. PPARg 중의 잔기 Y473, H323, I326, S289 및 H449는 고착(anchoring) 위치로 확립되었고, PPARg 리간드에 대한 결합 부위를 형성하는, 근접한 공간 위치를 가진 10개의 아미노산 그룹의 일부이다[Nolte et al.1998],[Itot et al. 2008],[Li et al. 2008]. RSZ 결합 부위는 RSZ보다 화합물 VIII에 대해 더 큰 열역학적 안정성을 나타냈고(도 3b), 이는 이 수용체에 대한 화합물 VIII의 더 큰 친화성을 암시한다. 실제로, 화합물 VIII 입체형태의 최고의 친화성은 -8.0 KCal/mol의 결합 친화성을 나타낸 반면, RSZ의 최상의 입체형태는 -6.9 Kcal/mol을 나타냈다. 그럼에도, PPARg에서 10개의 RSZ 결합 잔기들 중 2개, I341 및 R288만이 화합물 VIII과 상호작용할 가능성이 있다. 종합해보면, 이러한 결과는 화합물 VIII이 근접하게 관련된 결합 부위에서 RSZ보다 더 강하게 PPARg에 결합하되, 다른 리간드-수용체 상호작용 패턴이어서, 수용체에 대한 다른 입체형태 효과를 야기한다는 것을 암시한다. 더욱이, I341 및 R288의 차단은 RSZ의 유입을 피하기에 충분할 것이어서 이 약물의 효과를 감소시킨다.
실시예 4. 세포독성 분석
친전자성 퀴논은 세포독성을 유도하고 반응성 산소 종 생성의 세포 센서인 Nrf2 경로를 활성화시킨다. 도 4에서는 3가지 다른 종류의 세포 N2a(A), HT22(B) 및 MO3.13(C)에서 화합물 VCE-004(화합물 I) 및 화합물 (II) 내지 (XV)에 의해 유도된 세포사(cell death)를 분석했다.
3가지 세포주 MO3.13, N2A 및 HT22 세포는 10% 소태아혈청(FBS), 및 1%(v/v) 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM에서 5% CO2 함유 가습 대기 하에 37℃에서 유지시켰다. N2A, HT22 및 MO3.13 세포 생육성은 MTT 분석으로 측정했다. 간략히 설명하면, 세포는 96웰 평판에 104 세포/웰의 밀도로 접종하고, 웰당 200㎕ 세포 현탁액을 24시간 동안 배양했다. 그 다음, 세포를 여러 농도의 화합물과 24시간 동안 항온처리했다. 그 후, MTT:DMEM(1:2) 혼합 용액으로부터 100㎕ MTT(5mg/ml)를 각 웰에 첨가하고, 세포를 암실에서 37℃ 하에 4시간 동안 항온처리했다. 그 다음, 반응을 정지시키고, 상청액을 제거한 뒤, 각 웰에 100㎕ DMSO를 첨가한 뒤, 저속 진탕하에 10분 동안 항온처리했다. 마지막으로, TriStar LB 941(Berthold Technologies, GmbH & Co. KG)을 사용하여 550nm에서 흡광도를 측정했다. 대조용 세포는 100%로 설정했고, 데이터는 그 값으로 나타냈다. 세포주 N2a(도 4a), HT22(도 4b) 및 MO3.13(도 4c) 세포는 제시된 용량의 화합물 VCE-004(화합물 I) 및 화합물 (II) 내지 (XV)와 24h 동안 항온처리했고, 세포 생육성은 MTT 분석으로 정량분석했다. 결과는 적어도 3회 독립된 실험의 평균±S.D로 나타냈고, 대조군 샘플(-)에 대한 세포 생육성의 백분율로 표현했다. 대조군은 100%로 설정했고, 데이터는 그 값으로 나타냈다. 결과들은 VCE-004(화합물 I)와 관련된 세포독성 활성이 Nrf2 활성화를 유도하는 능력과 상관성이 있음을 입증한다. 동일한 의미로, 본 발명에 기술된 VCE-004의 위치 3'에서의 유도체인 화합물 II 내지 XV 유도체의 세포독성 활성의 결여는 Nrf2를 활성시키지 못하는 능력과 상관성이 있는 것이다.
실시예 5. Nrf2 전사 활성
Nrf2 경로에 미치는 화합물들의 활성을 연구하기 위해, HaCaT-ARE-Luc 세포주를 제조했다. HaCat 세포를 Lipofectamineⓒ 2000 형질감염 시약(Life Technologies, Carlsbad, Ca, USA)을 사용하여 Nqo1 ARE-Luc 리포터 플라스미드 및 pPGK-Puro 플라스미드로 동시형질감염시켰다. 안정한 형질전환체를 선택했고, 10% FBS, 1% 페니실린-스트렙토마이신 및 10㎕/ml 퓨로마이신을 함유하는 RPMI 1640에서 유지시켰다. HaCaT-ARE-Luc 세포는 표시된 농도의 VCE-004(화합물 I) 및 화합물 (II) 내지 (VIII)(A) 또는 화합물 (IX) 내지 (XV)(B)와 6h 동안 항온처리했고, 단백질 용해물을 제조하여 실시예 1에 기술된 바와 같이 루시퍼라제 활성에 대해 분석했다. 산화촉진제 tert-부틸하이드로퀴논(tBHQ) 20μM은 양성 대조군으로 사용했다. 활성화 배율 수준을 계산했고, 대조군 샘플(-)을 참조군으로 사용했다(도 5a 및 5b). 데이터는 적어도 3회 독립된 실험의 평균±S.D로 나타냈다. 결과는 VCE-004(화합물 I)와 관련된 반응성 친전자 활성이 본 발명에 기술된 모든 화합물(위치 4의 유도체)에서 사라진 것을 확인시켜 준다.
실시예 6. 신경보호 분석
핵 수용체 PPARg의 활성화는 신경보호에 중요한 역할을 하고 PPARg 작용제가 뉴런 세포에서 글루타메이트 유도 세포독성을 차단하는 것으로 공지되어 있다.
배양된 N2a 세포를 제시된 농도의 화합물 I 내지 VIII(도 6a) 및 IX 내지 XV(도 6b)와 1h 동안 예비항온처리하고, 그 다음 5mM 글루타메이트로 처리하여 24h 동안 흥분성독성을 유도했다. 세포독성은 실시예 4에 기술된 바와 같이 MTT 방법으로 측정했다. 결과는 적어도 3회 독립된 실험의 평균±S.D.로 나타냈고, 대조군 샘플(-)에 대한 세포 생육성의 백분율로써 나타냈다. 대조군은 100%로 설정했고, 데이터는 그 값으로 나타냈다.
결과는 PPARg 조정제이며 글루타메이트 유도 세포사로부터 뉴런 세포를 보호하는 화합물 I과 화합물 II 내지 XV 간에 현저한 차이를 보여준다.
실시예 7: 콜라겐 유전자 전사에 미치는 CBD-퀴논 유도체의 효과
PPARg 리간드는 항-섬유증 효과를 발휘하는 것으로 보고된 바 있고, PPARg 활성화에 의한 TGFb 시그널링 차단은 섬유아세포의 콜라겐 생산을 감소시킨다.
배양된 NIH-3T3 섬유아세포를, 루시퍼라제 리포터 유전자에 융합된 인간 COL1A2 프로모터 중 -353 내지 +58bp의 서열을 함유하는 플라스미드 COL1A2-Luc로 일시적 형질감염시켰다. 24시간 후, 세포를 화합물 III, V, VIII 및 X(실시예로써)과 30분 동안 항온처리하고, TGFb(50ng/ml)로 6h 동안 처리했다. 단백질 용해물을 제조하고 루시퍼라제 활성을 분석했다. 화합물 III, V, VIII 및 X는 TGFb-유도된 콜라겐 I형 유전자 전사를 분명하게 억제하는 것으로 관찰되었다(도 7).
실시예 8. 콜라겐 생산에 미치는 CBD-퀴논 유도체의 효과
세포 펠릿 중의 콜라겐 단백질과 비콜라겐 단백질의 양을 정량하기 위해 고안된 Sirius Red-Fast Green법에 따라 콜라겐 생산을 수행했다. NIH-3T3 세포는 24웰 평판에 5x104/웰의 밀도로 접종하고, 세포가 부착할 때까지 37℃에서 밤새 항온배양했다. 다음, 세포는 표시된 농도의 화합물 III, V, VIII 및 X와 1시간 동안 전배양하고, TGFb(50ng/ml)와 24시간 동안 배양했다. 처리 후, 세포 펠릿을 0.5M 아세트산 100㎕로 4℃에서 밤새 추출했다. 그 다음, 이 세포 펠릿에 무수 용액(포화 피크르산에 용해된 0.1% Sirius Red 및 0.1% Fast Green) 1ml를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 천천히 혼합했다. 그 다음, 샘플을 10,000g에서 5분 동안 원심분리하여 콜라겐을 펠릿화했다. 상청액은 펠릿이 흐트러지지 않게 조심스럽게 분리하고, 미결합된 염료 제거를 위해 각 튜브에 0.1M 염산 1ml를 첨가했다. 샘플을 10,000g에서 5분 동안 원심분리하고, 각 튜브에 0.5M 수산화나트륨 1ml를 첨가한 뒤, 강력하게 볼텍싱하여 결합된 염료를 해리시켰다. 샘플은 2500g에서 5분 동안 원심분리하여 임의의 세포 찌꺼기를 다시 펠릿화했다.
콜라겐 생산을 측정하고, 결과는 미처리 세포 대비 유도 배율로써 나타냈다. 화합물 III, V, VIII 및 X는 섬유아세포에서 TGFb-유도 콜라겐 생산을 분명하게 억제하는 것으로 관찰된다(도 8). VCE-004(HU-331)과 관련된 세포독성으로 인해, 이 화합물이 TGFb-유도 콜라겐 생산에 미치는 효과는 조사하지 않았다.
실시예 9. 반응성 산소 종( ROS ) 생산 및 미토콘드리아 경막 전위에 미치는 VCE-004 및 CDB-퀴논 유도체의 효과
미토콘드리아 막 전위는 ATP를 생산하는 호흡 사슬의 생리적 기능을 유지하는데 중요하다. 미토콘드리아 막 전위의 유의적인 상실은 세포로부터 에너지를 고갈시키고 이어서 사망에 이르게 한다. 따라서, 미토콘드리아 막 전위와 ROS의 측정은 세포의 생리적 상태와 친전자성 및 반응성 분자들에 대한 미토콘드리아의 기능에 대한 중요한 실마리를 제공할 수 있다.
도 5에서, 우리는 VCE-004(화합물 I)이 Nrf2 경로를 활성화시키는 반응성 화합물인 것을 관찰했다. 세포내 ROS 생산 및 미토콘드리아 막 전위 붕괴에 미치는 효과를 더 확인하기 위해, 우리는 HU-311 및 본 발명의 화합물을 직접 분석했다.
Jurkat 세포는 10% 열불활성화된 FCS, 2mM 글루타민 및 항생제를 함유하는 보충된 RPMI 1640 배지에서 37℃, 5% CO2 하에 증식시켰다. 미토콘드리아 경막 전위 및 반응성 산소종(ROS) 생성을 평가하기 위해, 세포(5x105/ml)는 증가하는 농도의 VCE-004(화합물 I) 또는 화합물 III, V, VII 및 X(화합물 I 유도체의 예)로 미토콘드리아 막 전위의 검출을 위해 2시간 동안 처리하고, 또는 ROS의 검출을 위해 6시간 동안 처리했다. 처리 후, 세포는 저온 인산염 완충액 식염수(PBS)로 2회 세척하고, PBS에서 형광 프로브 H2DCF-DA(녹색 형광)(20nM)와 함께 항온처리하여 ROS를 검출하고, MitoTracker Red CMXR(MTR0CMXR)(50nM)과 함께 37℃에서 20분 동안 항온처리하여 미토콘드리아 막 전위를 검출하고, 그 다음 FACSCantoII 유세포분석기로 분석했다. 본 발명자들은 VCE-004(화합물 I)가 세포내 ROS 수준의 분명한 증가 및 미토콘드리아 막 전위의 붕괴를 유도한다는 것을 발견했다. 이와 반대로, 화합물 III, V, VII 및 X는 반응성(ROS 수준 증가)이지 않았고, 미토콘드리아 막 전위의 상실을 유도하지 않았다.
도 9A에서는 화합물 I이 ROS를 과다발현하는 세포의 백분율을 농도 의존적 방식으로 분명히 증가시킨다는 것을 보여준다. 이에 반해, 화합물 III, V, VIII 및 X는 처리된 세포에서 유의적으로 ROS 축적을 유도할 수 없었다. ROS의 발현은 도 9B에서 관찰되듯이 미토콘드리아 막 전위의 붕괴와 상관성이 있었다.
실시예 10. VCE -004 및 화합물 XI과 시스테아민과의 비교 반응
10mg의 VCE-004(화합물 I) 및 화합물 XI(본 발명의 CBD 유도체의 예이며, 전술한 유도체 II 내지 X 및 XII 내지 XV 화합물 패밀리의 다른 멤버들도 적용가능하다)을 각각 1ml DMSO에 용해하고, 이 용액을 과량(4mol 당량)의 시스테아민으로 처리했다. 실온에서 1h 동안 교반한 후, 용액을 물(2ml)로 희석하고, 석유에테르-에테르 9:1로 추출했다. 증발 후, 잔류물은 CDCl3에 용해하고, 1H-NMR로 분석했다. 화합물 XI은 미반응 상태로 회수되었지만, VCE-004(I)는 완전히 반응했고, 잔류물에서 검출할 수 없었으며, 이는 VCE-004가 시스테아민과 불가역적으로 결합했음을 시사한다.
당해의 결과들은 본 발명에 기술된 화합물들, 특히 화합물 III, V, VIII, X 및 XIII이 신경염증 및 신경독성이 유의적인 역할을 하는 외상성 뇌 장애 및 신경변성 질환에서 치료적 용도가 있음을 입증한다. 또한, 본 발명의 화합물은 특히 PPARg 조절에 반응성인 질환 및 상태를 치료하기 위한 PPARg 조정제로써 적합하다.
참고문헌:
ㆍ Ahmadian M, Suh JM, Hah N, Liddle C, Atkins AR, Downes M, Evans RM. 2013. PPARy signaling and metabolism: the good, the bad and the future. Nat Med. 19:557-66
ㆍ Barish GD, Narkar VA, Evans RM. 2006. PPAR8: a dagger in the heart of the metabolic syndrome. J Clin Invest. 116:590-597
ㆍ Bernardo A, Minghetti L. 2008. Regulation of Glial Cell Functions by PPAR- gamma natural and Synthetic Agonists. PPAR Res. 864140.
ㆍ Bolton JL, Trash MA, Penning TM, Dryhurst G, Monks TJ. 2000. Role of quinones in toxicology. Chem Res Toxicol. 3:135-60.
· Burstein S. 2005. PPAR-gamma: a nuclear receptor with affinity for cannabinoids. Life Sci.77:1674-84.
ㆍ Ciudin A, Hernandez C, Simo R. 2012. Update on cardiovascular safety of PPARgamma agonists and relevance to medicinal chemistry and clinical pharmacology. Curr Top Med Chem. 12: 585-604.
· Doshi LS, Brahma MK, Bahirat UA, Dixit AV, Nemmani KV. 2012. Discovery and development of selective PPAR gamma modulators as safe and effective antidiabetic agents. Expert Opin Investig Drugs. 19:489-512.
ㆍ Ferguson HE, Kulkarni A, Lehmann GM, Garcia-Bates TM, Thatcher TH, Huxlin KR. et al.2009. Electrophilic peroxisome proliferator-activated receptor-gamma ligands have potent antifibrotic effects in human lung fibroblasts. Am J Respir Cell Mol Biol. 41 :722-30.
ㆍ Fievet C, Fruchart JC, Staels B. 2006. PPAR alpha and PPAR gamma dual agonists for the treatment of type2 diabetes and the metabolicsyndrome. Curr. Opin. Pharmacol. 6: 606-614.
ㆍ Gelman, L., Feige, J.N., Desvergne, B. 2007. Molecular basis of selective PPARgamma modulation for the treatment of type 2 diabetes. Biochim. Biophys.Acta 1771 : 1094-1107.
· Ghoochani A, Shabani K, Peymani M, Ghaedi K, Karamali F, Karbalaei K, Tanhaie S, Salamian A, Esmaeili A, Valian-Borujeni S, Hashemi M, Nasr-Esfahani MH, Baharvand H. 2012. The influence of peroxisome proliferator-activated receptor g(l) during differentiation of mouse embryonic stem cells to neural cells. Differentiation. 83: 60-67
ㆍ Granja AG, Carrillo-Salinas F, Pagani A, Gomez-Canas M, Negri R, Navarrete C, Mecha M, Mestre L, Fiebich BL, Cantarero I, Calzado MA, Bellido ML, Fernandez-Ruiz J, Appendino G, Guaza C, Munoz E. 2012. A cannabigerol quinone alleviates neuroinflammation in a chronic model of multiple sclerosis. J Neuroimmune Pharmacol. 4:1002-1016
ㆍ Itoh T, Fairall L, Amin K, Inaba Y, Szanto A, Balint BL, Nagy L, Yamamoto K, Schwabe JW. 2008. Structural basis for the activation of PPARgamma by oxidized fatty acids. Nat Struct Mol Biol 15:924-931.
ㆍ Kogan NM, Rabinowitz R, Levi P, Gibson D, Sandor P, Schlesinger M, and Mechoulam R. 2004. Synthesis and antitumor activity of quinonoid derivatives of cannabinoids. J Med Chem 47: 3800-3806
ㆍ Lehmann JM, Moore LB, Smith-Oliver TA, Wilkison WO, Willson TM, Kliewer SA. 1995. An antidiabetic thiazolidinedione is a high affinity ligand for peroxisome proliferator- activated receptor gamma (PPAR gamma). J Biol Chem. 270:12953-12956.
· Li Y, Zhang J, Schopfer FJ, Martynowski D, Garcia-Barrio MT, Kovach A, Suino-Powell K, Baker PR, Freeman BA, Chen YE, Xu HE. 2008. Molecular recognition of nitrated fatty acids by PPAR gamma. Nat Struct Mol Biol 15: 865-867
ㆍ Liberato MV, Nascimento AS, Ayers SD, Lin JZ, Cvoro A, Silveira RL, Martinez L, Souza PC, Saidemberg D, Deng T, Amato AA, Togashi M, Hsueh WA, Phillips K, Palma MS, Neves FA, Skaf MS, Webb P, Polikarpov I. 2012. Medium Chain Fatty Acids Are Selective Peroxisome Proliferator activated Receptor (PPAR) c Activators and Pan-PPAR Partial Agonists. Plos One 7 e36297.
ㆍ Liu J, Li H, Burstein SH, Zurier RB, Chen JD. 2003. Activation and binding of peroxisome proliferator-activated receptor gamma by synthetic cannabinoid ajulemic acid. Mol. Pharmacol. 63: 983-992.
ㆍ Monks TJ, Jones DC. 2002. The metabolism and toxicity of quinones, quinonimines, quinone methides, and quinone-thioethers. Curr Drug Metab. 4:425-38.
ㆍ Morales P, Vara D, Gomez-Canas M, Zuniga MC, Olea-Azar C, Goya P, Fernandez-Ruiz J, Diaz-Laviada I, Jagerovic N. 2013. Synthetic cannabinoid quinones: preparation, in vitro antiproliferative effects and in vivo prostate antitumor activity. Eur J Med Chem. 70: 111- 119.
ㆍ Na HK, Surh YJ. 2013. Oncogenic potential of Nrf2 and its principal target protein heme oxygenase-1. Free Radic Biol Med. 67:353-365
ㆍ Nolte RT, Wisely GB, Westin S, Cobb JE, Lambert MH, Kurokawa R, Rosenfeld MG, Willson TM, Glass CK, Milburn MV.1998. Ligand binding and co-activator assembly of the peroxisome proliferator-activated receptor-gamma. Nature 395: 137-143.
ㆍ O'Sullivan SE. 2007. Cannabinoids go nuclear: evidence for activation of peroxisome proliferator-activated receptors. Br J Pharmacol. 152:576-82.
ㆍ Poulsen L, Siersbaek M, Mandrup S. PPARs: fatty acid sensors controlling metabolism. 2012. Semin Cell Dev Biol. 23:631-639.
· Rosen ED, MacDougald OA. 2006. Adipocyte differentiation from the inside out. Nat Rev Mol Cell Biol. 7:885-96.
ㆍ Solis LM, Behrens C, Dong W, Suraokar M, Ozburn NC, Moran CA, Corvalan AH, Biswal S, Swisher SG, Bekele BN, Minna JD, Stewart DJ, Wistuba II. 2010. Nrf2 and Keapl abnormalities in non-small cell lung carcinoma and association with clinicopathologic features. Clin Cancer Res. 16:3743-53
ㆍ M.B. Sporn, K.T. Liby. 2012. NRF2 and cancer: the good, the bad and the importance of context. Nat. Rev. Cancer. 12: 564-57
ㆍ Stienstra R, Duval C, Muller M, Kersten S, 2007. PPARs, obesity, and inflammation. PPAR Res. 95974.
· Sun Y, Bennett A. 2007. Cannabinoids: A New Group of Agonists of PPARs. PPAR Res. 23513.
ㆍ Szeles, L., Torocsik, D., Nagy, L., 2007. PPARgamma in immunity and inflammation: cell types and diseases. Biochim. Biophys. Acta 1771 : 1014-1030.
ㆍ Tachibana K, Yamasaki D, Ishimoto K, Doi T. 2008. The Role of PPARs in Cancer. PPAR Res. 102737.
ㆍ Tontonoz P, Spiegelman BM. 2008. Fat and beyond: the diverse biology of PPARgamma. Annu Rev Biochem. 77: 289-312.
ㆍ Vanden Berghe W, Vermeulen L, Delerive P, DeBosscher K Staels B, Haegeman G. 2003. A paradigm for gene regulation: inflammation, NF-kB and PPAR. Adv.Exp.Med.Biol. 544:181-196.
ㆍ Vivacell Biotechnology Espana, S.L. 2011. Cannabinoid quinone derivatives. WO 2011117429 Al.
ㆍ Wang W, Liu F, Chen N. 2007. Peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPARgamma) agonists attenuate the profibrotic response induced by TGF-betal in renal interstitial fibroblasts. Mediators Inflamm: 62641
ㆍ Zhao C, Chen W, Yang L, Chen L, Stimpson SA, Diehl AM. 2006. PPARgamma agonists prevent TGFbetal/Smad3-signaling in human hepatic stellate cells. Biochem Biophys Res Commun. 350: 385-391.
ㆍ Zhang GY, Yi CG, Li X, Ma B, Li ZJ, Chen XL. Guo SZ, Gao WY. 2009. Troglitazone suppresses transforming growth factor-betal -induced collagen type I expression in keloid fibroblasts. Br J Dermatol. 160:762-70.

Claims (10)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 유도체:
    화학식 (I)
    Figure 112016114537068-pct00082

    [식에서, R은 선형 또는 분지형 기의 탄소 원자로, 아릴, 알케닐, 알키닐, 아실 또는 알콕시카르보닐 기이고; 또는 R은 선형 또는 분지형 기의 질소 원자로, 알킬아민, 아릴아민, 알케닐아민 또는 알키닐아민 기이다].
  2. 제1항에 있어서, 다음 중에서 선택되는 화합물:
    화학식 (II)
    Figure 112016105294361-pct00038

    화학식 (III)
    Figure 112016105294361-pct00039

    화학식 (IV)
    Figure 112016105294361-pct00040

    화학식 (V)
    Figure 112016105294361-pct00041

    화학식 (VI)
    Figure 112016105294361-pct00042

    화학식 (VII)
    Figure 112016105294361-pct00043

    화학식 (VIII)
    Figure 112016105294361-pct00044

    화학식 (IX)
    Figure 112016105294361-pct00045

    화학식 (X)
    Figure 112016105294361-pct00046

    화학식 (XI)
    Figure 112016105294361-pct00047

    화학식 (XII)
    Figure 112016105294361-pct00048

    화학식 (XIII)
    Figure 112016105294361-pct00049

    화학식 (XIV)
    Figure 112016105294361-pct00050

    화학식 (XV)
    Figure 112016105294361-pct00051
  3. 하기 화학식 I의 화합물, 및
    경우에 따라 추가 활성 화합물 및 약학적 불활성 성분에서 선택되는 하나 이상을 함유하는,
    죽상동맥경화증, 염증성 장 질환, 류마티스성 관절염, 간 섬유증, 신경병증, 건선, 피부 상처치유, 피부 재생, 췌장염, 위염, 신경변성 장애, 신경염증성 장애, 피부경화증, 암, 고혈압, 비만 또는 II형 당뇨병 중에서 선택되는 PPARg 매개의 질환 치료용 약학적 조성물:
    화학식 (I)
    Figure 112020112998770-pct00083

    [식에서, R은 선형 또는 분지형 기의 탄소 원자로, 아릴, 알케닐, 알키닐, 아실 또는 알콕시카르보닐 기이고; 또는 R은 선형 또는 분지형 기의 질소 원자로, 알킬아민, 아릴아민, 알케닐아민 또는 알키닐아민 기이다].
  4. 제3항에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 다음 중에서 선택되는 약학적 조성물:
    화학식 (II)
    Figure 112020112998770-pct00052

    화학식 (III)
    Figure 112020112998770-pct00053

    화학식 (IV)
    Figure 112020112998770-pct00054

    화학식 (V)
    Figure 112020112998770-pct00055

    화학식 (VI)
    Figure 112020112998770-pct00056

    화학식 (VII)
    Figure 112020112998770-pct00057

    화학식 (VIII)
    Figure 112020112998770-pct00058

    화학식 (IX)
    Figure 112020112998770-pct00059

    화학식 (X)
    Figure 112020112998770-pct00060

    화학식 (XI)
    Figure 112020112998770-pct00061

    화학식 (XII)
    Figure 112020112998770-pct00062

    화학식 (XIII)
    Figure 112020112998770-pct00063

    화학식 (XIV)
    Figure 112020112998770-pct00064

    화학식 (XV)
    Figure 112020112998770-pct00065
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약제로써 사용되는, 화합물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, PPARg 매개의 질환을 치료하는데 사용되는, 화합물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 질환은 죽상동맥경화증, 염증성 장 질환, 류마티스성 관절염, 간 섬유증, 신경병증, 건선, 피부 상처 치유, 피부 재생, 췌장염, 위염, 신경변성 장애, 신경염증성 장애, 피부경화증, 암, 고혈압, 비만, 또는 II형 당뇨병 중에서 선택되는 PPARg 매개의 질환을 치료하는데 사용되는 화합물.
  8. 제3항 또는 제4항에 있어서, 약제로써 사용되는, 약학적 조성물.
  9. 제3항에 있어서, 상기 추가 활성 화합물은 부형제이며, 상기 약학적 불활성 성분은 운반체인 약학적 조성물.
  10. 삭제
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2017406103B2 (en) * 2017-03-29 2023-12-14 Emerald Health Pharmaceuticals, Inc. Cannabidiol derivatives as inhibitors of the HIF prolyl hydroxylases activity
CN106866419B (zh) * 2017-04-14 2020-01-10 石河子大学 一类萜酯化合物及其制备方法和用途
AU2018287018B2 (en) * 2017-06-20 2022-04-28 University Of Guelph Cannabidiolic acid esters compositions and uses thereof
US20220041538A1 (en) * 2018-12-11 2022-02-10 Emerald Health Pharmaceuticals Inc Cannabigerol quinone acid and salts thereof
JP2022519685A (ja) * 2019-02-06 2022-03-24 エメラルド ヘルス ファーマシュウティカルズ インコーポレイテッド カンナビジオール誘導体の製剤およびカンナビノイド受容体タイプ２（ｃｂ２）のモジュレーターとしてのその使用
JP2022550797A (ja) 2019-10-03 2022-12-05 イッサム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム・リミテッド リポソームカンナビノイドおよびその使用
WO2021139741A1 (zh) * 2020-01-08 2021-07-15 成都百裕制药股份有限公司 大麻二酚衍生物及其制备方法和在医药上的应用
EP4099993A4 (en) * 2020-02-06 2024-03-13 Emerald Health Pharmaceuticals Inc. COMPOSITION AND METHOD FOR TREATING AND PREVENTING CARDIAC, LUNG, SKIN AND KIDNEY FIBROSIS
EP4267122A4 (en) * 2020-12-24 2024-04-24 Buzzelet Development And Technologies Ltd COMPOSITIONS COMPRISING CANNABINOID ACID ESTERS
CN114315585B (zh) * 2022-03-04 2022-05-13 中国医学科学院药用植物研究所 一种羟戊苯甲酸双酯化合物及其制备方法和制药应用
CN116407529B (zh) * 2023-03-24 2024-05-10 南京医科大学 3-硝基-2,6-二羟基苯甲酸右崁醇或葑醇的酯的药物用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005067917A1 (en) 2004-01-15 2005-07-28 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Therapeutic use of quinonoid derivatives of cannabinoids
US20130203715A1 (en) 2010-07-20 2013-08-08 Pulmatrix, Inc. Use of trp channel agonists to treat infections

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090093521A1 (en) * 2005-06-14 2009-04-09 Maria Laura Bolognesi 2, 5-Bis-Diamine [1,4] Benzoquinone-Derivatives
EP2139847A1 (en) * 2007-03-05 2010-01-06 Yissum Research Development Company, of The Hebrew University of Jerusalem Novel quinonoid derivatives of cannabinoids and their use in the treatment of malignancies
WO2011117429A1 (es) 2010-03-26 2011-09-29 Vivacell Biotechnology España, S.L Derivados quinona de cannabinoides

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005067917A1 (en) 2004-01-15 2005-07-28 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Therapeutic use of quinonoid derivatives of cannabinoids
US8497299B2 (en) 2004-01-15 2013-07-30 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Compositions including quinonoid derivatives of cannabinoids for therapeutic use
US20130203715A1 (en) 2010-07-20 2013-08-08 Pulmatrix, Inc. Use of trp channel agonists to treat infections

Also Published As

Publication number Publication date
IL248030A0 (en) 2016-11-30
BR112016023902A2 (pt) 2017-08-15
CA2945867C (en) 2021-11-09
CN106232570A (zh) 2016-12-14
JP6167248B2 (ja) 2017-07-19
RU2667504C2 (ru) 2018-09-21
EP3131874A1 (en) 2017-02-22
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JP2017516753A (ja) 2017-06-22
CN106232570B (zh) 2018-08-07
WO2015158381A1 (en) 2015-10-22
AU2014390738B2 (en) 2019-05-02
KR20160146765A (ko) 2016-12-21
DK3131874T3 (en) 2018-11-19
RU2016137668A3 (ko) 2018-05-16
EP3131874B1 (en) 2018-07-25
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US9701618B2 (en) 2017-07-11
US20170044092A1 (en) 2017-02-16
RU2016137668A (ru) 2018-05-16
MX352386B (es) 2017-11-22
CA2945867A1 (en) 2015-10-22
IL248030B (en) 2019-10-31
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