JP2022519685A - カンナビジオール誘導体の製剤およびカンナビノイド受容体タイプ２（ｃｂ２）のモジュレーターとしてのその使用 - Google Patents

Abstract

増加したバイオアベイラビリティおよび溶解度を示す薬学的製剤中の式（Ｉ）のカンナビジオール誘導体を含む、組成物が記載される。脱髄に関連する疾患を含む、様々な状態および疾患の治療における使用のための、式（Ｉ）のカンナビジオール誘導体およびそれを含む組成物。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年２月６日に出願された米国仮特許出願第６２／８０１，７５６号および２０１９年７月３日に出願された米国特許出願第６２／８７０，５４６号の優先権を主張し、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明は、増加したバイオアベイラビリティおよび溶解度を示す、液体製剤、または錠剤、粉末、懸濁液、ナノ懸濁液、エマルジョンとして薬学的ビヒクルに可溶化される式（Ｉ）のカンナビジオール誘導体を含む、組成物に関する。本発明はまた、カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）活性の調節から利益を得る疾患の治療における使用のための式（Ｉ）のこれらのカンナビジオールキノン誘導体の使用に関する。そのような化合物は、神経炎症を軽減し、神経保護を選好し、軸索損傷を予防し、ミエリン構造を保存および潜在的に促進し、血管形成を支持する相補的シグナル伝達経路を標的とすることによる新規作用機序（ＭＯＡ）を有し、これは、多発性硬化症（ＭＳ）および全身性硬化症（ＳＳｃ）を含む、いくつかの自己免疫および炎症関連障害の治療において有用である。

多発性硬化症（ＭＳ）は、若年成人において最も一般的に罹患される神経疾患のうちの１つを表す中枢神経系（ＣＮＳ）の慢性自己免疫性脱髄性疾患である。疾患進行は、２つの根本的プロセス：髄鞘再生の失敗を伴うミエリン破壊（脱髄）と、回復の可能性がほとんどない進行性軸索損傷と、で構成されると考えられている。ＭＳに関連する様々な神経症状は、神経シグナルを伝達する細胞の能力の低下に起因する。ＭＳは、移動困難ならびに上肢機能、膀胱、腸、および性機能障害、発話および嚥下困難、ならびに視力および認知の問題を含み、時間の経過と共に徐々に障害を引き起し得る。現在、ＭＳのための治療的処理はなく、標準治療は、主に症状を低減することに取り組む。悪化した自然および適応免疫応答は、疾患の病態生理に寄与するため、免疫応答の調節に向けられ、軸索髄鞘再生の刺激を目的とした療法が必要とされる。

全身性硬化症（ＳＳｃ）、または強皮症は、初期および一過性炎症および血管損傷、それらに続く皮膚および複数の内臓に影響を与える線維症に関連するまれな疾患の群である。全身性硬化症は、２つの形態：限局性強皮症（ＬｏＳ）とＳＳｃとに分類される。ＬｏＳは、皮膚および／または下層組織に限定され、多くの場合は良性であるが、ＳＳｃは、微小血管損傷およびＳＳｃ関連過剰線維症を特徴とする重篤な状態であり、これは通常は内臓関与を含む。ＳＳｃは、重要臓器（心臓、腎臓、および肺）、他の内臓（胃および腸）、ならびに血管、筋肉、および関節に影響を与え得る。結果として、ＳＳｃは、慢性的な衰弱および余命の減少につながり得る。現在、ＳＳｃの治療法はない。現在の療法は、臨床的に効果がなく、利用可能な治療選択肢は、臓器および症状特異的である。

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）およびカンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）は、ＭＳの治療のための新規薬物の開発のための、科学文献によって支持される、前臨床的に検証された治療標的である（Ｄｏｃａｇｎｅ Ｆ．ｅｔ ａｌ．２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｔａｒｇｅｔｓ．，１２：１８５－１９５、Ｄｒｅｗ Ｐ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．２００８，ＰＰＡＲ Ｒｅｓ．，２００８：６２７４６３、Ｓｚａｌａｒｄｙ Ｌ ｅｔ ａｌ．２０１３，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ．，５５４：１３１－１３４）。加えて、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）経路の活性化因子は、ＨＩＦ経路が、神経保護および軸索再生を選好し、出生後の髄鞘形成に関与する、免疫応答を調節するため、ＭＳ患者において有益な効果を有し得る（Ｎａｖａｒｒｅｔｅ Ｃ ｅｔ ａｌ．２０１８，Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，１５：６４）。ＰＰＡＲγを活性化するグリタゾンおよびＣＢ_２を活性化するカンナビノイドを含むこれらの経路の一方または他方を活性化する市販薬のクラスがある。

ＣＢ_２受容体は、分化したヒトＨＬ－６０骨髄細胞から最初にクローン化され、脾臓、ならびにＢ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、および好中球などの免疫系の細胞において最も高度に発現する。より低いレベルのＣＢ_２受容体はまた、表皮（角化細胞、毛包、脂腺細胞、および汗腺を含む）、骨芽細胞、破骨細胞、および骨細胞、ならびに胃、肺、心臓、および精巣に見出される。ＣＢ_２受容体発現は、後根神経節（ＤＲＧ）において報告されており、Ｃ線維およびＡδ線維などの他の末梢ニューロンにおけるＣＢ_２受容体発現の証拠が報告されている。最近、ＣＮＳ内でのＣＢ_２受容体発現は、脊髄レベルおよび脊髄上レベルの両方で記載されている。具体的には、ＣＢ_２受容体は、腰髄（Ｌ３－Ｌ４）において、ならびに小脳顆粒ニューロン、脳血管上皮、小膠細胞、および脳幹（線条体、視床核、海馬、扁桃体、黒質、中脳水道周囲灰白質、三叉脊髄核など）のニューロン、皮質および小脳に見られる。

ＣＢ_２受容体は、炎症および疼痛知覚、免疫系制御、神経新生、および骨生理を含む、多くの生理学的プロセスに関与している。ＣＢ_２受容体の上方制御は、特定の病態生理学的状態に関連している。増加したＣＢ_２受容体発現は、脊髄の後角、ならびに神経因性疼痛の慢性絞扼損傷（ＣＣＩ）、脊髄神経結紮（ＳＮＬ）、完全坐骨神経切片、および伏在神経部分結紮モデルにおける一次求心性、Ｃ線維ニューロンにおいて検出されている。ＣＢ_２受容体は、アルツハイマー病脳に見られる神経突起プラークからの小膠細胞および星状細胞において（Ｂｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２３：１１１３６－１１１４１）、またはインターフェロンガンマ（Ｃａｒｌｉｓｌｅ ｅｔ ａｌ．２００２，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２：６９－８２）もしくはリポ多糖（Ｃａｂｒａｌ ｅｔ ａｌ．２００５，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，７８：１９２－１９７）によって、ならびにサル免疫不全ウイルスに感染したマカクからのＴリンパ球（Ｂｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．２００５，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２５：２５３０－２５３６）において上方制御される。ＣＢ_２受容体は、多発性硬化症プラークにおけるＴリンパ球、星状細胞、ならびに血管周囲性および反応性小膠細胞に見られる（Ｂｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．２００７，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２７：２３９６－２４０２）。

多くの神経線維を覆う髄鞘（Ｍｙｅｌｉｎ ｓｈｅａｔｈｓ）は、若齢期に形成されるリポタンパク質層で構成される。中枢神経系（ＣＮＳ）において乏突起膠細胞によって形成されるミエリン（ｍｙｅｌｉｎ）は、末梢にシュワン細胞によって形成されるものとは化学的および免疫学的に異なるが、両タイプは、同じ機能：軸索に沿った神経インパルスの伝達を促進することを有する。多くの先天性代謝障害（例えば、フェニルケトン尿症および他のアミノ酸尿症、テイ－サックス病、ニーマン・ピック病、およびゴーシェ病、ハーラー症候群、クラッベ病および他の白質ジストロフィー）は、主にＣＮＳにおいて、発達中の髄鞘に影響を及ぼす。生化学的欠陥を正すか、または補うことができない限り、永続的な、しばしば広範囲にわたる、神経学的欠損が生じる。

高齢期における脱髄は、多くの神経障害の特徴であり、それは、局所損傷、虚血、毒剤、または代謝障害による神経またはミエリンの損傷に起因し得る。広範なミエリン喪失の後には通常、軸索変性、およびしばしば細胞体変性が続くが、その両方は不可逆的であり得る。しかしながら、髄鞘再生は、多くの事例において発生し、神経機能の修復、再生、および完全回復は、迅速であり得る。回復は、しばしば多くの末梢性ニューロパチーを特徴付ける分節性脱髄後に起こり、このプロセスは、ＭＳの悪化および寛解を説明し得る。中枢（すなわち、脊髄、脳、または視神経の）脱髄は、病因が不明である、原発性脱髄性疾患における主な所見である。最もよく知られているものは、ＭＳである。他の疾患には、例えば、急性散在性脳脊髄炎（感染後脳脊髄炎）、副腎白質ジストロフィー、副腎脊髄ニューロパチー、レーバー遺伝性視神経萎縮および関連ミトコンドリア障害、ならびにヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）感染関連脊髄症が含まれる。

髄鞘再生は、ＭＳ病変における通常の事象として一般的に受け入れられているが、それはミエリン修復には不十分であり、軸索は、ＭＳ患者では脱髄したままである。これについて考えられる説明には、乏突起膠細胞前駆細胞（ＯＰＣ）の動員または生存の失敗、ＯＰＣの分化／成熟の障害、およびミエリン形成能力の喪失が含まれる。したがって、ＭＳのための効果的な介入は、疾患進行を予防するだけでなく、髄鞘再生も促進するべきである。

当該技術分野では、より効率的な薬物送達に取り組むために、増加したバイオアベイラビリティおよび溶解度を有する、疾患修飾薬物、およびその製剤の必要性がある。当該技術分野では、様々な自己免疫疾患、脱髄性疾患、炎症関連障害、ならびにＭＳおよびＳＳｃなどの中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患の管理および治療のために、神経炎症を軽減し、神経保護およびミエリン再生の両方を選好する相補的シグナル伝達経路を標的とする新規作用機序（ＭＯＡ）を有する、疾患修飾薬物、およびその製剤の必要性もある。

本発明は、薬学的ビヒクルに可溶化された少なくとも１つのカンナビジオール誘導体を含む組成物を提供する。一態様では、組成物は、増加したバイオアベイラビリティを有する。別の態様では、組成物は、増加した溶解度を有する。

一態様では、本発明で開示されるカンナビジオール誘導体は、式（Ｉ）の化合物である。

一実施形態では、Ｒは、直鎖もしくは分岐アルキルアミン、アリールアミン、アリールアルキルアミン、ヘテロアリールアミン、ヘテロアリールアルキルアミン、直鎖もしくは分岐アルケニルアミン、直鎖もしくは分岐アルキニルアミン、またはＮＨ_２から独立して選択される基の窒素原子である。

一実施形態では、組成物は、乾燥粉末製剤である。一実施形態では、組成物は、錠剤である。一実施形態では、組成物は、懸濁液である。一実施形態では、組成物は、ナノ懸濁液である。一実施形態では、組成物は、エマルジョンである。一実施形態では、組成物は、溶液である。

一実施形態では、薬学的ビヒクルは、水性緩衝液、溶媒、共溶媒、シクロデキストリン複合体、脂質ビヒクル、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、任意に少なくとも１つの安定剤、乳化剤、ポリマー、抗酸化剤、およびそれらの任意の組み合わせをさらに含む。

一態様では、本発明の少なくとも１つのカンナビジオール誘導体を含む組成物は、油に可溶化される。いくつかの実施形態では、本発明の少なくとも１つのカンナビジオール誘導体を含む組成物は、少なくとも２つの油を含む油混合物に可溶化される。いくつかの実施形態では、本発明の少なくとも１つのカンナビジオール誘導体を含む組成物は、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ：トウモロコシ油混合物に可溶化される。

本発明はまた、部分的に、脱髄に関連する状態または疾患の治療を必要とする対象における脱髄に関連する状態または疾患を治療する方法に関する。本発明は、対象におけるＣＢ_２活性の調節に応答する状態または疾患を治療する方法をさらに提供する。一実施形態では、方法は、治療有効量の少なくとも１つのカンナビジオール誘導体またはその製剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。

いくつかの態様では、本発明は、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む組成物に関し、神経炎症を軽減し、神経保護を選好し、軸索損傷を予防し、ミエリン構造を保存し、髄鞘再生を潜在的に促進する相補的シグナル伝達経路を標的とすることによる新規作用機序（ＭＯＡ）を有する。組成物は、ＣＢ_２受容体シグナル伝達を調節する非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む。いくつかの例では、組成物は、ＰＰＡＲγおよびＣＢ_２受容体シグナル伝達の両方を調節する非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＰＰＡＲγおよびＣＢ_２受容体シグナル伝達を調節し、ＨＩＦ－１αを安定化し、よってエリスロポエチン（ＥＰＯ）および血管内皮成長因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）を含むいくつかの関連因子の発現を上方制御する、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む。結果として、そのような組成物は、ＳＳｃにおける疾患修飾剤として強力な可能性を有し得る。

本発明はさらに、部分的に、髄鞘再生を必要とする対象における髄鞘再生の方法に関する。本発明の一態様では、方法は、治療有効量の少なくとも１つのカンナビジオール誘導体またはその製剤を対象に投与することを含む。一実施形態では、対象は、脱髄に関連する状態または疾患を有する。一実施形態では、対象は、ＣＢ_２活性の調節に応答する状態または疾患を有する。一実施形態では、対象は、脱髄に関連する状態または疾患およびＣＢ_２活性の調節に応答する状態または疾患を有する。

一態様では、ＣＢ_２受容体活性の調節に応答する状態もしくは疾患、または脱髄に関連する状態もしくは疾患は、自己免疫疾患、脱髄性疾患、炎症関連障害、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、ＣＢ_２受容体活性の調節に応答する状態もしくは疾患、または脱髄に関連する状態もしくは疾患は、ＳＳｃ、髄鞘破壊性障害、無痛症、急性および慢性疼痛、炎症性疼痛、術後疼痛、神経因性疼痛、筋弛緩、免疫抑制、アレルギー、緑内障、気管支拡張、骨粗鬆症および骨格系の障害、癌、これらに限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病（ＰＤ）、およびハンチントン病を含む神経変性障害、ＭＳ、筋痙直、振戦、線維筋痛、狼瘡、リウマチ性関節炎、重症筋無力症、他の自己免疫障害、刺激性腸症候群、間質性膀胱炎、片頭痛、心因性掻痒症、湿疹、脂漏症、乾癬、帯状疱疹、脳虚血、脳溢血、頭蓋脳外傷、脳卒中、脊髄損傷、肝硬変、アテローム性動脈硬化症、咳嗽、喘息、悪心、嘔吐、胃潰瘍、視神経脊髄炎、中枢神経系ニューロパチー、橋中心髄鞘崩壊、脊髄症、白質脳症、白質ジストロフィー、末梢性ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、進行性炎症性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

本発明の様々な実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むと、よりよく理解されるであろう。本発明を説明する目的で、例示的な実施形態が図面に示されている。しかしながら、本発明は、図面に示される実施形態の正確な配置および手段に限定されないことを理解されたい。
図１Ａおよび図１Ｂを含み、カンナビジオール誘導体の生成のための合成スキームを示す。図１Ａは、ＣＢＤ出発材料から産生されるアミノ官能化カンナビジオール誘導体生成物の全体的な合成を表す。図１Ｂは、ＶＣＥ－００４のアミノ化を介したＶＣＥ－００４．８（式（ＶＩＩＩ）の化合物）の生成を示す。 カンナビジオール誘導体の生成のための改訂された合成手順を示す。 図３Ａおよび図３Ｂを含み、様々な液体製剤混合物の最適化研究を示す。図３Ａは、異なる液体製剤混合物を示す。図３Ｂは、５０：５０体積／体積のトウモロコシ油およびＭａｉｓｉｎｅ ＣＣの混合物を含む液体製剤を示す。 同上。 異なる液体製剤のバイオアベイラビリティを示す。 図５Ａおよび５Ｂを含み、ＥＨＰ－１０１液体およびプラセボの製造フローチャートを示す。図５Ａは、ＥＨＰ－１０１液体の製造フローチャートを示す。図５Ｂは、プラセボの製造フローチャートを示す。 同上。 ＶＣＥ－００４．８の動的溶解度スクリーニングを示す。 親油性の尺度として使用されるｌｏｇＤ（分配係数）を計算するために使用される式を示す。 フィトソーム化中、酢酸エチルでの還流で、異なる時間（４５分、６時間、および２４時間）でのＶＣＥ－００４．８の安定性を示す。 ｐＨ７．４での溶解度試験で得られる、ＶＣＥ－００４．８対２つのｐｈｙｔｏｓｏｍｅの複合体のＨＰＬＣプロファイルのオーバーレイを示す。 Ａｌｉｔｒａを使用したＶＣＥ－００４．８の製剤Ａ、Ｂ、およびＣの溶解プロファイルを示す。 様々な経口製剤の模擬胃液における溶媒シフト結果を示す。 様々な経口製剤の模擬腸液における溶媒シフト結果を示す。 アモルファス固体分散スクリーニングおよび安定性結果のグラフ表示を示す。 ＶＣＥ－００４．８およびＥＨＰ－１０１の特徴分析を示す。 図１５Ａ～図１５Ｈを含み、ＥＨＰ－１０１がＥＡＥモデルにおける臨床的重症度および神経病理を減弱することを示す例示的な結果を示す。図１５Ａは、ＥＨＰ－１０１がＥＡＥの臨床的兆候および進行を有意に改善したことを示す。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（群あたりｎ＝６匹の動物）。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ＶＥＨ（一元配置分散分析、それに続くテューキー検定）。図１５Ｂは、曲線下面積を測定することによって定量化された臨床活性の結果を示す。結果は、±ＳＥＭとして表される（群あたりｎ＝６～１１匹の動物）。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル（一元配置分散分析、それに続くテューキー検定）。図１５Ｃは、抗Ｉｂａ１での免疫蛍光が実施された、厚さ５０μｍの胸髄断面の断面画像を示す。図１５Ｄは、ＧＦＡＰでの免疫蛍光が実施された、厚さ５０μｍの胸髄断面の断面画像を示す。図１５Ｅは、ミエリン染色ＭＢＰでの免疫蛍光が実施された、厚さ５０μｍの胸髄断面の断面画像を示す。図１５Ｆは、平均±ＳＥＭとして示されるＩｂａ１マーカーの定量化の結果を示し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。図１５Ｇは、平均±ＳＥＭとして示されるＧＦＡＰマーカーの定量化の結果を示し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。図１５Ｈは、平均±ＳＥＭとして示されるＭＢＰマーカーの定量化の結果を示し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 図１６Ａ～図１６Ｈを含み、小膠細胞の持続的な活性化およびＯｌｉｇ２発現の喪失を伴う脱髄がＥＨＰ－１０１処理によって予防されたことを示す例示的な結果を示す。各マーカーの定量化は、平均±ＳＥＭとして示され、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。図１６Ａは、Ｉｂａ１について免疫標識された脳梁の代表的な共焦点顕微鏡画像を示す。図１６Ｂは、大脳皮質の代表的な共焦点顕微鏡画像を示しており、低減したＭＢＰ反応性がＥＨＰ－１０１処理によって回復したことを示す。図１６Ｃは、ＥＨＰ－１０１処理マウスにおいてＯｌｉｇ２陽性細胞の喪失が予防されたことを示す代表的な共焦点顕微鏡画像を示す。図１６Ｄは、ＥＨＰ－１０１処理が脳梁におけるＧＳＴｐｉの発現を増加させたことを示す代表的な共焦点顕微鏡画像を示す。図１６Ｅは、平均±ＳＥＭとして示されるＩｂａ１の定量化を示しており、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。図１６Ｆは、平均±ＳＥＭとして示されるＭＢＰの定量化を示しており、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。図１６Ｇは、平均±ＳＥＭとして示されるＯｌｉｇ２の定量化を示しており、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。図１６Ｈは、平均±ＳＥＭとして示されるＧＳＴｐｉの定量化を示しており、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。 同上。 同上。 同上。 同上。 図１７Ａ～図１７Ｅを含み、ＥＡＥモデルにおけるＥＨＰ－１０１の効果の遺伝子発現プロファイリングの例示的な結果を示す。図１７Ａは、ＥＡＥまたはＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対対照比較のＭＡプロット（ＭＡプロットはゲノムデータの視覚的表現のためのＢｌａｎｄ－Ａｌｔｍａｎプロットのアプリケーションである）を示す。Ｘ軸は、正規化されたカウントの平均としての平均化表現を表し、Ｙ軸は、ｌｏｇ２変換された倍率変化としての変化の大きさを示す。色は、調整されたＰ＜０．０５および倍率変化＜－２（青）または＞２（赤）のカットオフを超えた遺伝子を示す。図１７Ｂは、ＥＡＥ対対照およびＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１（２０ｍｇ／ｋｇ）対ＥＡＥ比較において前述のカットオフを超える遺伝子についての機能分析結果を示す。点の存在は、一連の上方または下方制御遺伝子（Ｘ軸）における遺伝子オントロジー（生物学的プロセス）ターム（Ｙ軸）の有意な過剰提示（調整されたＰ＜０．０５）を示す。図１７Ｃは、「サイトカイン媒介性シグナル伝達経路」に含まれる選択された遺伝子の発現レベルを示すヒートマップを示す。図１７Ｄは、ＣＦＡ、ＥＡＥ＋ビヒクル、およびＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１（２０ｍｇ／ｋｇ）のサイトカインのプロテオームプロファイルを示すヒートマップを示す。図１７Ｅは、ｑＰＣＲによって定量化され、ＧＡＰＤＨに対して正規化された脊髄における炎症マーカーのｍＲＮＡ発現を示す。データは、平均±ＳＥＭを表し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊ｐ＜０．０５、＊＊＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。 同上。 同上。 同上。 同上。 図１８Ａ～図１８Ｅを含み、ＥＨＰ－１０１処理が乏突起膠細胞機能に関連する遺伝子の発現を正常化したことを示す例示的な結果を示す。図１８Ａは、ＥＡＥ対対照比較での下方制御遺伝子とＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１（２０ｍｇ／ｋｇ）対ＥＡＥ比較での上方制御遺伝子とのセット間の重複を示すベン図を示す。図１８Ｂは、１９３個の重複遺伝子のセットの機能分析結果を示す。散布図は、－ｌｏｇ１０変換された調整されたＰ値として、上位１５個の過剰に表現された遺伝子オントロジー（生物学的プロセス）タームの富化の有意性を表す。図１８Ｃは、１９３個の重複する特徴のセットに含まれる「髄鞘形成」ＧＯタームでアノテートされた遺伝子の発現レベルを示すヒートマップを示す。図１８Ｄは、ｑＰＣＲによって定量化され、ＧＡＰＤＨに対して正規化された髄鞘再生関連遺伝子のｍＲＮＡ発現を示す。図１８Ｅは、テニューリン－４の脊髄の免疫組織化学標識の結果を示す。白質／灰白質におけるテニューリン－４の発現の定量化（下のパネル）。データは、平均±ＳＥＭを表し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊＊＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル。 同上。 同上。 同上。 同上。 図１９Ａ～図１９Ｅを含み、クプリゾン（ＣＰＺ）誘発性脱髄モデルにおける髄鞘再生に対する治療的ＥＨＰ－１０１処理の効果を示す。図１９Ａは、ＣＰＺ誘発性脱髄モデルにおける髄鞘再生に対する治療的ＥＨＰ－１０１処理の効果を評価するために使用される実験手順を示す。図１９Ｂは、脳梁におけるクリオミエリン染色によるミエリンの組織学的研究の結果を示す。図１９Ｃは、皮質におけるＭＢＰの免疫蛍光研究によって示された、ミエリン染色における有意な回復を示した結果を示す。図１９Ｄは、脳梁におけるクリオミエリン染色によるミエリンの組織学的研究の平均強度定量化結果を示す（群あたりｎ＝５匹の動物）。図１９Ｅは、皮質におけるＭＢＰの免疫蛍光研究によって示された、ミエリン染色における有意な回復を示したＭＢＰ免疫反応性の定量化を示す。データは、平均±ＳＥＭを表し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊＊＊ｐ＜０．００１ ＣＰＺ ６ＷまたはＣＰＺ ６Ｗ＋１またはＣＰＺ ６Ｗ＋２対対照、＃＃＃ｐ＜０．００１ ＣＰＺ ６Ｗ＋１＋ＥＨＰ－１０１対ＣＰＺ ６Ｗ＋１、＄＄＄ｐ＜０．００１ ＣＰＺ ６Ｗ＋２＋ＥＨＰ－１０１対ＣＰＺ ６Ｗ＋２。 同上。 同上。 同上。 同上。 図２０Ａ～図２０Ｄを含み、ＣＰＺ誘発性脱髄モデルにおける小膠細胞および星状細胞活性化に対する治療的ＥＨＰ－１０１処理の影響を示す。図２０Ａは、脳梁におけるＩｂａ１の免疫蛍光研究によって検出されたクプリゾン誘発性ミクログリオーシスの減少を示す。図２０Ｂは、脳梁におけるＧＦＡＰの免疫蛍光研究によって決定されたアストログリオーシスを示す。図２０Ｃは、脳梁におけるＩｂａ１の免疫蛍光研究によって検出されたクプリゾン誘発性ミクログリオーシスの定量化された減少を示す。図２０Ｄは、脳梁におけるＧＦＡＰの免疫蛍光研究によって決定されたアストログリオーシスの定量化された強度を示す。データは、平均±ＳＥＭを表し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された＊＊＊ｐ＜０．００１ ＣＰＺ ６ＷまたはＣＰＺ ６Ｗ＋１またはＣＰＺ ６Ｗ＋２対対照、＊＊ｐ＜０．０１ ＣＰＺ ６Ｗ＋２対対照、＃＃ｐ＜０．０１ ＣＰＺ ６Ｗ＋１＋ＥＨＰ－１０１対ＣＰＺ ６Ｗ＋１。 同上。 同上。 同上。 リアルタイムＰＣＲ分析で使用される代表的なプライマーを示す。 図２２Ａおよび図２２Ｂを含み、ＥＨＰ－１０１がニューロフィラメントライトポリペプチド（ＮＥＦＬ）の軸索変性および血漿レベルを低減することを示す代表的な結果を示す。図２２Ａは、異なる群の動物の脳梁におけるＳＭＩ－３２＋細胞の免疫染色の代表的な画像を示す。図２２Ｂは、異なる群の動物においてＥＬＩＳＡによって検出されたＮＥＦＬ血漿レベルを示す。値は、対照群に対して正規化され、平均±ＳＥＭに対応し、有意性は、一元配置分散分析、それに続くテューキー検定によって決定された。＊ｐ＜０．０５ ＣＰＺ ６ＷまたはＣＰＺ ６Ｗ＋１対対照、＃ｐ＜０．０５ ＣＰＺ ６Ｗ＋１＋ＥＨＰ－１０１対ＣＰＺ ６Ｗ＋１。 同上。 ＣＰＺ誘発性脱髄モデルにおける髄鞘再生に対する治療的経口ＥＨＰ－１０１処理の効果を評価するために使用される実験手順を示す。 図２４Ａ～図２４Ｄを含み、灰白質（海馬）髄鞘再生結果を示す。図２４Ａは、海馬におけるＰＬＰ染色を示す。図２４Ｂは、海馬におけるＰＬＰの定量化結果を示す。ＥＨＰ－１０１処理動物は、ビヒクル対照と比較して海馬におけるＰＬＰ染色の面積の変化を示さなかった。図２４Ｃは、海馬におけるＰＬＰの定量化結果を示す。外れ値は、ショウブネットの規準を使用して特定した。外れ値は、統計分析から除外しなかった。図２４Ｄは、ＰＬＰ染色の海馬統計を示す。 同上。 同上。 同上。 図２５Ａ～図２５Ｄを含み、灰白質（皮質）髄鞘再生結果を示す。図２５Ａは、皮質におけるＰＬＰ染色を示す。図２５Ｂは、皮質におけるＰＬＰの定量化結果を示す。すべての用量強度でのＥＨＰ－１０１処理動物は、ビヒクル対照と比較して皮質領域におけるＰＬＰ染色の面積の変化を示さなかった。図２５Ｃは、皮質におけるＰＬＰの定量化を示す。外れ値は、ショウブネットの規準を使用して特定した。外れ値は、統計分析から除外しなかった。図２５Ｄは、ＰＬＰ染色の統計を示す。 同上。 同上。 同上。 図２６Ａ～図２６Ｄを含み、白質（脳梁）髄鞘再生結果を示す。図２６Ａは、脳梁におけるＰＰＤ染色を示す。図２６Ｂは、脳梁（同齢（ＡＭ）試料なし）におけるＰＰＤ、脳梁における有髄軸索の定量化結果を示す。ＥＨＰ－１０１処理は、対照と比較して有髄軸索の有意な増加を示さなかったが、試験物品の最も低い試験群と比較される場合、２つのより高い群間に有意差があった。図２６Ｃは、脳梁におけるＰＰＤの定量化を示す。外れ値は、ショウブネットの規準を使用して特定した。試料４４は、統計分析から除外した。図２６Ｄは、脳梁統計（ＡＭ試料なし）における有髄軸索の数を示す。 同上。 同上。 同上。 図２７Ａおよび図２７Ｂを含み、白質（脳梁）髄鞘再生結果（ＡＭ試料あり）を示す。図２７Ａは、脳梁におけるＰＰＤ、脳梁（ＡＭ試料あり）における有髄軸索の定量化結果を示す。ＥＨＰ－１０１処理は、対照と比較して有髄軸索の有意な増加を示さなかったが、試験物品の最も低い試験群と比較される場合、２つのより高い群間に有意差があった。図２７Ｂは、脳梁統計（ＡＭ試料あり）における有髄軸索の数を示す。 同上。 図２８Ａおよび図２８Ｂを含み、白質（脳梁）髄鞘再生結果（ＡＭ試料なし）を示す。図２８Ａは、脳梁（ＡＭ試料なし）における有髄軸索の密度（ＰＰＤ密度）を示す。ＥＨＰ－１０１処理の試験されたより高い用量は、対照と比較して有髄軸索の密度の有意な増加を示し、試験物品の最も低い試験群と比較される場合、２つのより高い群間に有意差もあった。図２８Ｂは、脳梁（ＡＭ試料なし）における有髄軸索の密度の統計を示す。 同上。 図２９Ａおよび２９Ｂを含み、白質（脳梁）髄鞘再生結果（ＡＭ試料あり）を示す。図２９Ａは、脳梁（ＡＭ試料あり）における有髄軸索の密度（ＰＰＤ密度）を示す。ＥＨＰ－１０１処理の試験されたより高い用量は、対照と比較して有髄軸索の密度の有意な増加を示し、試験物品の最も低い試験群と比較される場合、２つのより高い群間に有意差もあった。図２９Ｂは、脳梁（ＡＭ試料あり）における有髄軸索の密度の統計を示す。 同上。

本発明の図および説明は、明確にすることを目的として、式（Ｉ）の化合物を使用してＣＢ_２活性の調節に応答する状態もしくは疾患、または脱髄に関連する状態もしくは疾患を治療する方法、ならびにそのような化合物、薬学的組成物、およびそれらの液体製剤を作製および使用する方法に見られる多くの他の要素を排除しながら、本発明の明確な理解のために適切な要素を例示するために簡略化されていることを理解されたい。当業者は、本発明を実施する際に他の要素および／またはステップが望ましく、および／または必要とされることを認識し得る。しかしながら、そのような要素およびステップは当該技術分野で周知であり、それらは本発明のより良い理解を容易にしないので、そのような要素およびステップの議論は本明細書では提供されない。本明細書の開示は、当業者に知られているそのような要素および方法に対するすべてのそのような変形および変更を対象とする。

定義
本明細書で使用される場合、以下の用語の各々は、このセクションにおいてそれに関連する意味を有する。他の場所で定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料が記載される。

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の文法的目的語のうちの１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。

「約」という用語は、当業者によって理解され、それが使用される文脈に応じてある程度変動するであろう。本明細書では量、持続時間などのような測定可能な値を指すときに使用される場合、「約」という用語は、そのような変動が開示方法を実施するために適切であるため、指定された値からの±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらにより好ましくは±１％、さらにより好ましくは±０．１％の変動を包含することを意味する。

疾患もしくは障害の兆候もしくは症状の重症度、そのような兆候もしくは症状が患者によって経験される頻度、またはその両方が低減する場合、疾患または障害は「軽減」される。

「疾患」とは、動物が恒常性を維持することができず、疾患が改善されない場合、動物の健康が悪化し続ける、動物の健康状態である。対照的に、動物における「障害」とは、動物が恒常性を維持することができるが、動物の健康状態が、障害がない場合よりも好ましくない、健康状態である。治療せずに放置されても、障害は、必ずしも動物の健康状態のさらなる低下を引き起こすわけではない。

本明細書で使用される「阻害する」という用語は、対照値と比較して、活性または機能を少なくとも約１０パーセント抑制または遮断することを意味する。好ましくは、活性は、対照値と比較して５０％、より好ましくは７５％、さらにより好ましくは９５％抑制または遮断される。

本開示の文脈において、「モジュレーター」とは、ＣＢ_２のアゴニスト、部分アゴニスト、インバースアゴニスト、またはアンタゴニストである化合物として定義される。モジュレーターは、ＣＢ_２受容体の活性を増加させ得るか、またはＣＢ_２受容体の活性を減少させ得る。本開示の文脈において、「アゴニスト」は、受容体の基礎活性（すなわち、受容体によって媒介されるシグナル伝達）を増加させる化合物として定義される。「アンタゴニスト」は、受容体に対するアゴニストの作用を遮断する化合物として定義される。「部分アゴニスト」は、インビトロで受容体を活性化することができず、インビボでアンタゴニストとして機能するような、限定された活性、または完全ではない活性を示すアゴニストとして定義される。「インバースアゴニスト」は、受容体の基礎活性を減少させる化合物として定義される。

「治療」、「治療すること」などの用語は、一般に、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを意味するために本明細書で使用される。効果は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に予防するという点で予防的であり得、ならびに／または疾患および／もしくは疾患に起因する有害効果を部分的もしくは完全に治癒するという点で治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」という用語は、対象における疾患の任意の治療をカバーし、（ａ）疾患の素因となり得る対象において望ましくない免疫応答に関連する疾患が発症するのを予防すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その進行を停止すること、または（ｃ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患の退行を引き起こすことを含む。

「誘導体」という用語は、参照分子とは構造が異なるが、参照分子の本質的な特性を保持または増強し得、追加の特性を有し得る小分子を指す。誘導体は、参照分子と比較して、特定の他の分子とのその相互作用を変化させ得る。誘導体分子はまた、参照分子の塩、付加物、互変異性体、異性体、または他の多様体を含み得る。

「互変異性体」という用語は、化学プロセス（互変異性化）によって容易に相互変換する有機化合物の構造異性体である。

「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間における原子または基の配置に関して異なる化合物を指す。

本明細書で使用される場合、「多形体」とは、同じ化学組成を有するが、結晶を形成する分子、原子、および／またはイオンの異なる空間配置を有する結晶形態を指す。

本明細書で使用される場合、「アルキル」は、完全に飽和した（二重結合または三重結合を有しない）炭化水素（すべて炭素）基の直鎖または分岐鎖を指す。本発明のアルキル基は、１～２０個の炭素原子、すなわち、「Ｃ_１～Ｃ_２０アルキル」として指定される、「ｍ」＝１および「ｎ」＝２０を含み得る。一実施形態では、「ｍ」＝１および「ｎ」＝１２（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）である。他の実施形態では、「ｍ」＝１および「ｎ」＝６（Ｃ_１～Ｃ_６アルキル）である。アルキル基の例には、限定なく、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、アミル、ｔｅｒｔ－アミル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、およびドデシルが含まれる。

本発明のアルキル基は、置換または非置換であり得る。置換される場合、置換基は、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、オキソ、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ－カルバミル、Ｎ－カルバミル、Ｏ－チオカルバミル、Ｎ－チオカルバミル、Ｃ－アミド、Ｎ－アミド、Ｓ－スルホンアミド、Ｎ－スルホンアミド、Ｃ－カルボキシ、Ｏ－カルボキシ、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、シリル、トリハロメタンスルホニル、－ＮＲａＲｂ、保護ヒドロキシル、保護アミノ、保護カルボキシ、および保護アミド基から独立して選択される１つ以上の基である。

置換アルキル基の例には、限定なく、２－オキソ－プロプ－１－イル、３－オキソ－ブト－１－イル、シアノメチル、ニトロメチル、クロロメチル、ヒドロキシメチル、テトラヒドロピラニルオキシメチル、ｍ－トリチルオキシメチル、プロピオニルオキシメチル、アミノメチル、カルボキシメチル、アリルオキシカルボニルメチル、アリルオキシカルボニルアミノメチル、メトキシメチル、エトキシメチル、ｔ－ブトキシメチル、アセトキシメチル、クロロメチル、ブロモメチル、ヨードメチル、トリフルオロメチル、６－ヒドロキシヘキシル、２，４－ジクロロブチル、２－アミノプロピル、１－クロロエチル、２－クロロエチル、１－ブロモエチル、２－クロロエチル、１－フルオロエチル、２－フルオロエチル、１－ヨードエチル、２－ヨードエチル、１－クロロプロピル、２－クロロプロピル、３－クロロプロピル、１－ブロモプロピル、２－ブロモプロピル、３－ブロモプロピル、１－フルオロプロピル、２－フルオロプロピル、３－フルオロプロピル、１－ヨードプロピル、２－ヨードプロピル、３－ヨードプロピル、２－アミノエチル、１－アミノエチル、Ｎ－ベンゾイル－２－アミノエチル、Ｎアセチル－２－アミノエチル、Ｎ－ベンゾイル－１－アミノエチル、およびＮ－アセチル－１－アミノエチルが含まれる。

本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、直鎖または分岐炭化水素鎖に１つ以上の二重結合を含有するアルキル基を指す。アルケニル基の例には、限定なく、ビニル（ＣＨ_２＝ＣＨ－）、アリル（ＣＨ_３ＣＨ＝ＣＨ_２－）、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－ペンテニル、４－ペンテニル、３－メチル－１－ブテニル、ならびにヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、ウンデセニル、およびドデセニルの様々な異性体が含まれる。

本発明のアルケニル基は、非置換または置換であり得る。置換される場合、置換基は、アルキル基置換に関して上に開示されたものと同じ基から選択され得る。置換アルケニル基の例には、限定なく、スチレニル、３－クロロ－プロペン－１－イル、３－クロロ－ブテン－１－イル、３－メトキシ－プロペン－２－イル、３－フェニル－ブテン－２－イル、および１－シアノ－ブテン３－イルが含まれる。

本明細書で使用される場合、「アルキニル」は、直鎖または分岐炭化水素鎖に１つ以上の三重結合を含有するアルキル基を指す。

本発明のアルキニル基は、非置換または置換であり得る。置換される場合、置換基は、アルキル基置換に関して上に開示されたものと同じ基から選択され得る。

本明細書で使用される場合、「アリール」は、完全に非局在化されたパイ電子系を有する炭素環（全炭素）環または２つ以上の縮合環（２つの隣接する炭素原子を共有する環）を指す。アリール基の例には、これらに限定されないが、ベンゼン、および置換ベンゼン、例えば、トルエン、アニリン、キシレンなど、ナフタレンおよび置換ナフタレン、ならびにアズレンが含まれる。

「薬学的に許容される塩」という用語は、患者への投与時に、本明細書に記載される化合物を（直接的または間接的に）提供することができる任意の薬学的に許容される塩を指す。そのような塩は、好ましくは、生理学的に許容される有機酸または無機酸を含む酸付加塩である。酸付加塩の例としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸付加塩、ならびに例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、およびｐ－トルエンスルホン酸塩などの有機酸付加塩が含まれる。アルカリ付加塩の例としては、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、およびアンモニウム塩などの無機塩、ならびに例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、Ｎ，Ｎ－ジアルキルエタノールアミン、トリエタノールアミン、および塩基性アミノ酸塩などの有機アルカリ塩が挙げられる。しかしながら、それらが薬学的に許容される塩の調製に有用であり得るので、非薬学的に許容される塩もまた本発明の範囲内に該当することが理解されるであろう。塩形成の手順は、当該技術分野では従来通りである。

本発明による「溶媒和物」という用語は、当該化合物が非共有結合によって別の分子（通常は極性溶媒）に結合している、本発明による活性化合物の任意の形態を意味し、水和物およびアルコラートを含むと理解されるべきである。

「有効量」および「薬学的に有効な量」という用語は、所望の生物学的結果を提供するのに十分な薬剤の量を指す。その結果は、疾患もしくは障害の兆候、症状、もしくは原因の低減および／もしくは軽減、または生物学的システムの任意の他の望ましい変化であり得る。任意の個別の症例における適切な有効量は、日常的な実験を使用して当業者によって決定され得る。

「治療有効量」とは、所与の状態および投与レジメンについて治療効果を提供する量を指す。特に、「治療有効量」とは、疾患の症状を予防、軽減、もしくは改善するか、またはヒトもしくは非ヒト動物であり得る、治療される対象の生存を延長するのに有効な量を意味する。治療有効量の決定は、当業者の技能の範囲内である。

本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」という用語は、本発明の少なくとも１つの化合物の、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、および／または賦形剤などの他の化学成分および物質との混合物を指す。薬学的組成物は、生物への化合物の投与を容易にする。化合物を投与する複数の技法が当該技術分野に存在し、これらに限定されないが、静脈内、経口、エアロゾル、非経口、眼、肺、および局所投与を含む。

「薬学的に許容される」とは、薬理学的／毒物学的観点から患者にとって、ならびに組成、製剤、安定性、患者の承諾、およびバイオアベイラビリティに関する物理的／化学的観点から製造薬剤師にとって許容可能である、それらの特性および／または物質を指す。「薬学的に許容される担体」とは、活性成分の生物学的活性の有効性を妨げず、それが投与される宿主に対して毒性ではない培地を指す。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、その意図された機能を実施し得るように、本発明内で有用な化合物を患者内または患者に運搬または輸送することに関与する、液体もしくは固体充填剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、希釈剤、賦形剤、増粘剤、溶媒、または封入材料などの、薬学的に許容される材料、組成物、または担体を意味する。典型的には、そのような構築物は、１つの臓器、または体の部分から、別の臓器、または体の部分に運搬または輸送される。各担体は、本発明内で有用な化合物を含む、製剤の他の成分と適合性があり、患者に有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。薬学的に許容される担体として役立ち得る材料のいくつかの例には、ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；界面活性剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸塩緩衝溶液；ならびに薬学的製剤に使用される他の非毒性適合性物質が含まれる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」はまた、本発明内で有用な化合物の活性と適合性であり、患者に生理学的に許容される、任意およびすべてのコーティング、抗菌剤および抗真菌剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。補足的な活性化合物はまた、組成物に組み込まれ得る。「薬学的に許容される担体」は、本発明内で有用な化合物の薬学的に許容される塩をさらに含み得る。本発明の実施に使用される薬学的組成物に含まれ得る他の追加の成分は、当該技術分野で知られており、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｇｅｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１９８５，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に記載されている。

「栄養組成物」という用語は、ヒトが消費することを意図した食品製品、例えば、飲料、ドリンク、バー、スナック、アイスクリーム、乳製品、例えば、チルドもしくは常温保存可能な乳製品、発酵乳製品、ドリンク、例えば、ミルクベースのドリンク、乳児用フォーミュラ、グローイングアップミルク、菓子製品、チョコレート、朝食用シリアルなどのシリアル製品、ソース、スープ、インスタントドリンク、電子レンジもしくはオーブンで加熱後の消費を意図した冷凍製品、すぐに食べられる製品、ファストフード、または栄養フォーミュラであり得る。

「患者」、「対象」、「個体」などの用語は、本明細書で交換可能に使用され、インビトロでもインサイチュでも、本明細書に記載される方法に適した、任意の動物またはその細胞を指す。特定の非限定的な実施形態では、患者、対象、または個体は、ヒトである。

本開示を通して、本発明の様々な態様は、範囲形式で提示することができる。範囲形式での記載は、単に便宜上および簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の記載は、すべての考えられる部分範囲およびその範囲内の個別の数値を具体的に開示しているとみなされるべきである。例えば、１～６などの範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などのような部分範囲、ならびにその範囲内の個別の数、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、および６を具体的に開示しているとみなされるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

説明
製剤／薬剤
本発明は、薬学的ビヒクルに可溶化された少なくとも１つのカンナビジオール誘導体を含む組成物を提供する。一実施形態では、組成物は、増加したバイオアベイラビリティを有する。一実施形態では、組成物は、非製剤化混合物における同じカンナビジオール誘導体のバイオアベイラビリティと比較される場合、増加したバイオアベイラビリティを有する。一実施形態では、組成物は、増加した溶解度を有する。一実施形態では、組成物は、非製剤化混合物における同じカンナビジオール誘導体の溶解度と比較される場合、改善された溶解度を有する。

一実施形態では、組成物は、乾燥粉末製剤である。一実施形態では、組成物は、錠剤であり、カンナビジオール誘導体を含む錠剤は、２つの製造ステップ：造粒ステップおよび錠剤調製ステップを通して調製される。一実施形態では、造粒ステップは、中間生成物（ＩＰ）の調製である。一実施形態では、造粒ステップは、エタノール中に賦形剤を含有する造粒流体を含み、これは一次粉末粒子に添加され、続いて溶媒蒸発される。一実施形態では、得られる材料の粒径は、粉砕によって低減される。一実施形態では、錠剤調製ステップは、薬物製品（ＤＰ）の調製である。一実施形態では、中間生成物（ＩＰ）であって、造粒ステップから得られる、中間生成物（ＩＰ）は、賦形剤とブレンドされる。一実施形態では、薬物製品（ＤＰ）は、錠剤プレスでの直接圧縮によって錠剤圧縮される。

一実施形態では、組成物は、懸濁液である。一実施形態では、組成物は、ナノ懸濁液である。一実施形態では、組成物は、エマルジョンである。一実施形態では、組成物は、溶液である。一実施形態では、組成物は、液体製剤である。一実施形態では、組成物は、クリームである。一実施形態では、組成物は、ゲルである。一実施形態では、組成物は、ローションである。一実施形態では、組成物は、ペーストである。一実施形態では、組成物は、軟膏である。一実施形態では、組成物は、皮膚軟化剤である。一実施形態では、組成物は、リポソームである。一実施形態では、組成物は、ナノスフェアである。一実施形態では、組成物は、皮膚強壮剤である。一実施形態では、組成物は、洗口液である。一実施形態では、組成物は、含嗽液である。一実施形態では、組成物は、ムースである。一実施形態では、組成物は、スプレーである。一実施形態では、組成物は、パックである。一実施形態では、組成物は、カプセルである。一実施形態では、組成物は、錠剤である。一実施形態では、組成物は、粉末である。一実施形態では、組成物は、顆粒である。一実施形態では、組成物は、パッチである。一実施形態では、組成物は、閉塞性皮膚剤である。

一実施形態では、組成物は、酸化およびアミノ化を通して合成または天然カンナビジオール（ＣＢＤ）から化学的に誘導される、化学的に安定な、非向精神性アミノキノイドを含む新薬候補を含む。一実施形態では、カンナビジオール誘導体は、合成カンナビジオール誘導体である。一実施形態では、合成カンナビジオール誘導体は、酸化およびアミノ化を通して合成カンナビジオール（ＣＢＤ）から化学的に誘導される、化学的に安定な、非向精神性アミノキノイドを含む。一実施形態では、合成カンナビジオール誘導体は、酸化およびアミノ化を通して天然カンナビジオール（ＣＢＤ）から化学的に誘導される、化学的に安定な、非向精神性アミノキノイドを含む。一実施形態では、合成カンナビジオール誘導体は、非反応性合成カンナビジオール誘導体である。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、化学的に安定な合成カンナビジオール誘導体である。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＣＢ１受容体について検出可能な親和性を有しない合成カンナビジオール誘導体である。

一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む組成物は、神経炎症を軽減し、神経保護を選好し、軸索損傷を予防し、ミエリン構造を保存し、髄鞘再生を潜在的に促進する相補的シグナル伝達経路を標的とすることによる新規作用機序（ＭＯＡ）を有する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む組成物は、ＣＢ_２受容体シグナル伝達のモジュレーターである。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む組成物は、ＰＰＡＲγおよびＣＢ_２受容体シグナル伝達のモジュレーターである。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む組成物は、ＰＰＡＲγおよびＣＢ_２受容体シグナル伝達のモジュレーターであり、ＨＩＦ－１αを安定化し、よってエリスロポエチン（ＥＰＯ）および血管内皮成長因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）を含むいくつかの関連因子の発現を上方制御する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む組成物は、おそらく、増強された神経保護およびＨＩＦ経路を通した潜在的な髄鞘再生と併せて、ＰＰＡＲγ／ＣＢ_２受容体に作用することによって神経炎症を低減する。

一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体を含む組成物は、ＣＢ_２に結合する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、カンナビノイド受容体タイプ１（ＣＢ_１）と比較してＣＢ_２受容体に優先的に結合する。したがって、これらの実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＣＢ_２について選択的である。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体のアミン基は、ＣＢ_２に結合する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体のアミン基は、ＣＢ_１受容体に対してＣＢ_２受容体に選択的に結合する。一実施形態では、ＣＢ_２受容体活性は、インビトロで調節されるが、他の実施形態では、ＣＢ_２受容体活性は、インビボで調節される。

一実施形態では、カンナビジオール誘導体は、式（Ｉ）の化合物である。

一実施形態では、Ｒは、直鎖もしくは分岐アルキルアミン、アリールアミン、アリールアルキルアミン、ヘテロアリールアミン、ヘテロアリールアルキルアミン、直鎖もしくは分岐アルケニルアミン、直鎖もしくは分岐アルキニルアミン、またはＮＨ_２から独立して選択される基の窒素原子である。

一実施形態では、カンナビジオール誘導体は、以下からなる群から選択される。

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（エチルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（ペンチルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）－［１，１’ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（イソブチルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（ブチルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（メチルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（イソプロピルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）－［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（ベンジルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、

（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（ネオペンチルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－）－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２イル）－［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン、および

（１’Ｒ，６’Ｒ）３－（イソペンチルアミン）－６－ヒドロキシ－アミン－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）－［１，１’－ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン。

一実施形態では、薬学的ビヒクルは、水性緩衝液、溶媒、共溶媒、シクロデキストリン複合体、脂質ビヒクル、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、任意に少なくとも１つの安定剤、乳化剤、ポリマー、抗酸化剤、およびそれらの任意の組み合わせをさらに含む。

一実施形態では、水性緩衝液は、水性ＨＣｌ、水性クエン酸塩－ＨＣｌ緩衝液、水性ＮａＯＨ、水性クエン酸塩－ＮａＯＨ緩衝液、水性リン酸塩緩衝液、水性ＫＣｌ、水性ホウ酸塩－ＫＣｌ－ＮａＯＨ緩衝液、ＰＢＳ緩衝液、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝０．５～１０のｐＨ範囲を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝０．５のｐＨ範囲を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝１．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝２．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝３．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝４．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝５．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝５．５を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝６．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝７．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝７．４を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝８．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝９．０を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝９．５を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、ｐＨ＝１０．０を有する。

一実施形態では、水性緩衝液は、０．０５Ｎ～１．０Ｎの濃度範囲を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．０５Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．１Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．１５Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．２Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．３Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．４Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．５Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．６Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．７Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．８Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、０．９Ｎの濃度を有する。一実施形態では、水性緩衝液は、１．０Ｎの濃度を有する。

一実施形態では、溶媒は、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、水、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ＰＥＧ４００、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ（ジエチルグリコモノエチルエーテル）、ＭＣＴ ７０、Ｌａｂｒａｓｏｌ（ＰＥＧ－８カプリル／カプリン酸グリセリド）、Ｌａｂｒａｆｉｌ Ｍ１９４４ＣＳ（オレイン酸ＰＥＧ５）、プロピレングリコール、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ、ＰＥＧ４００、プロピレングリコール、グリセロール、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｔｗｅｅｎ ８５、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、トウモロコシ油、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、共溶媒は、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、水、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ＰＥＧ４００、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ（ジエチルグリコモノエチルエーテル）、ＭＣＴ ７０、Ｌａｂｒａｓｏｌ（ＰＥＧ－８カプリル／カプリン酸グリセリド）、Ｌａｂｒａｆｉｌ Ｍ１９４４ＣＳ（オレイン酸ＰＥＧ５）、プロピレングリコール、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ、ＰＥＧ４００、プロピレングリコール、グリセロール、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｔｗｅｅｎ ８５、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、トウモロコシ油、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、シクロデキストリン複合体は、メチル－β－シクロデキストリン、メチル－γ－シクロデキストリン、ＨＰ－β－シクロデキストリン、ＨＰ－γ－シクロデキストリン、ＳＢＥ－β－シクロデキストリン、α－シクロデキストリン、γ－シクロデキストリン、６－Ｏ－グルコシル－β－シクロデキストリン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、脂質ビヒクルは、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｔｗｅｅｎ ８５、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、トウモロコシ油、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、脂質ビヒクルは、油である。一実施形態では、脂質ビヒクルは、油混合物である。一実施形態では、油混合物は、少なくとも２つの油を含む。一実施形態では、油は、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｔｗｅｅｎ ８５、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、トウモロコシ油、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、油混合物は、１０：９０体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、２０：８０体積／体積の混合物である。一実施形態では、油混合物は、３０：７０体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、４０：６０体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、４２：５８体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、５０：５０体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、５５：４５体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、６０：４０体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、７０：３０体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、８０：２０体積／体積の油混合物である。一実施形態では、油混合物は、９０：１０体積／体積の油混合物である。

一実施形態では、安定剤は、Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ ６０３、ＳＬＳ、Ｎｉｓｓｏ ＨＰＣ－ＳＳＬ、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ、ＰＶＰ Ｋ３０、ＰＶＰ ＶＡ ６４、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、安定剤は、水溶液である。

一実施形態では、ポリマーは、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＭＧ、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＬＧ、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＨＧ、ＨＰＭＣ、ＨＰＭＣ－Ｐ－５５Ｓ、ＨＰＭＣ－Ｐ－５０、メチルセルロース、ＨＥＣ、ＨＰＣ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００、ＰＥＯ １００Ｋ、ＰＥＧ ６０００、ＰＶＰ ＶＡ６４、ＰＶＰ Ｋ３０、ＴＰＧＳ、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ ＩＲ、Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９８０ＮＦ、Ｐｏｖｏｃｏａｔ ＭＰ、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ、Ｓｕｒｅｔｅｒｉｃ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、抗酸化剤は、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、コエンザイムＱ１０、マンガン、ヨウ化物、メラトニン、アルファ－カロチン、アスタキサンチン、ベータ－カロチン、カンタキサンチン、クリプトキサンチン、ルテイン、リコペン、ゼアキサンチン、ポリフェノール抗酸化剤、フラボノイド、フラボン、アピゲニン、ルテオリン、タンゲリチン、フラボノール、イソラムネチン、ケンフェロール、ミリセチン、プロアントシアニジン、ケルセチン、フラバノン、エリオジクチオール、ヘスペレチン、ナリンゲニン、フラバノール、カテキン、ガロカテキン、ガレートエステル、エピカテキン、エピガロカテキン、テアフラビン、テアルビジン、イソフラボンフィトエストロゲン、ダイゼイン、ゲニステイン、グリシテイン、スチルベノイド、レスベラトロール、プテロスチルベン、アントシアニン、シアニジン、デルフィニジン、マルビジン、ペラルゴニジン、ペオニジン、ペツニジン、チコール酸、カフェイン酸、クロロゲン酸、フェルラ酸、ケイ皮酸、エラグ酸、エラジタンニン、没食子酸、ガロタンニン、ロスマリン酸、サリチル酸、クルクミン、フラボノリグナン、シリマリン、キサントン、オイゲノール、カプサイシン、ビリルビン、クエン酸、シュウ酸、フィチン酸、ｎ－アセチルシステイン、Ｒ－アルファ－リポ酸、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、薬学的ビヒクルに可溶化されたカンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．００１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｇ／ｍＬの溶解度範囲を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．００１ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．００５ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．００６ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．００８ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．０１ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．０３ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、０．０６ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、１．０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、２．０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、２．５ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、６．１ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、１０．０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、１０．２ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、１００．０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、２５０．０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、５００．０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、７５０．０ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、１．０ｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、１．５ｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、５．０ｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、８．０ｇ／ｍＬの溶解度を有する。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、１０．０ｇ／ｍＬの溶解度を有する。

式Ｉ－Ｘの化合物は、ＣＢ_２受容体リガンドであるが、それらはまた、神経保護特性を有する。よって、式Ｉ－Ｘの化合物を含む組成物および製剤は、脳卒中、片頭痛、群発性頭痛を含むが、これらに限定されない、神経学的障害の治療に有用である。本明細書に開示される組成物および製剤はまた、漸進的な選択的ニューロン喪失を特徴とする特定の慢性変性疾患の治療において有効である。これに関連して、本組成物および製剤は、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、および刑務所関連神経変性の治療において有効である。ＣＢ_２受容体アゴニストによって付与される神経保護は、神経ガスなどの神経毒性薬剤の保護および／または処理、ならびに化学的または生物学的薬剤による脳または神経組織への他の損傷においても有効であり得る。

それらの鎮痛特性のおかげで、本発明による組成物および製剤は、末梢、内臓、神経因性、炎症性、および関連痛を含む疼痛の治療に有用であろうことが認識されるであろう。本明細書に開示される組成物および製剤はまた、筋痙攣および振戦の治療においても有効である。

本明細書に記載される薬学的組成物および製剤は、対象に、それ自体で、またはそれらが併用療法のように、他の活性成分、または適切な担体もしくは賦形剤と混合される薬学的組成物で投与することができる。本出願の化合物の製剤化および投与のための技法は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０に見られ得る。

適切な投与経路には、例えば、局所、経口、直腸、経粘膜、または腸投与；筋肉内、皮下、静脈内、髄内注射、および髄腔内、直接脳室内、腹腔内、鼻腔内、または眼内注射を含む、非経口送達が含まれ得る。

あるいは、例えば、直接的に疼痛の領域への化合物の注射を介して、しばしばデポまたは徐放性製剤で、全身的ではなく局所的に化合物を投与し得る。さらに、標的化された薬物送達システムで、例えば、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームで、薬物を投与し得る。リポソームは、臓器を標的とし、臓器によって選択的に取り込まれるであろう。

本明細書に開示される薬学的組成物および製剤は、それ自体知られている方法で、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、水簸、乳化、カプセル化、捕捉、または打錠プロセスによって製造され得る。

よって、本開示に従った使用のための薬学的組成物および製剤は、活性化合物の、薬学的に使用することができる調製物への加工を容易にする、賦形剤および助剤を含む１つ以上の生理学的に許容される担体を使用して従来の方法で製剤化され得る。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。周知の技法、担体、および賦形剤のいずれも、適切であり、当該技術分野で、例えば、上記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓで理解されるものとして使用され得る。

注射について、本明細書に開示される薬剤は、水溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合性のある緩衝液で製剤化され得る。経粘膜投与について、製剤において浸透するバリアに適した浸透剤が使用される。そのような浸透剤は、当該技術分野で一般的に知られている。

経口投与の場合、固体または液体の単位剤形のいずれかが調製され得る。錠剤などの固体組成物の調製のために、本明細書で上記に開示される、式（Ｉ）の化合物またはその誘導体は、タルク、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、硫酸カルシウム、デンプン、ラクトース、アカシア、メチルセルロース、および薬学的希釈剤または担体と機能的に類似した材料などの従来の成分と製剤に混合される。経口投与の場合、化合物はまた、活性化合物を当該技術分野で周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって容易に製剤化することができる。そのような担体は、本明細書に開示される化合物が、治療される患者による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化されることを可能にする。経口使用のための薬学的調製物は、１つ以上の固体賦形剤を本明細書に開示される薬学的組み合わせと混合し、任意に得られた混合物を粉砕し、必要に応じて、適切な助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理して、錠剤またはドラジェコアを得ることによって得ることができる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む、糖などの充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのセルロース調製物である。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤が添加され得る。

カプセルは、化合物を不活性薬学的希釈剤と混合し、混合物を適切なサイズの硬ゼラチンカプセルに充填することによって調製される。軟ゼラチンカプセルは、化合物のスラリーを許容可能な植物油、軽流動ワセリンまたは他の不活性な油で機械的にカプセル化することによって調製される。シロップ、エリキシル剤、および懸濁液などの経口投与用の液体単位剤形が調製され得る。水溶性剤形は、糖、芳香性の香味剤および防腐剤と一緒に水性ビヒクル中に溶解されて、シロップを形成することができる。エリキシル剤は、芳香性の香味剤と一緒に、糖およびサッカリンなどの適切な甘味剤を有する水アルコール性（例えば、エタノール）ビヒクルを使用することによって調製される。懸濁液は、アカシア、トラガカントゴム、メチルセルロースなどの懸濁化剤の助けと共に、水性ビヒクルで調製され得る。

糖衣錠コアには適切なコーティングが施されている。この目的のために、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を任意に含有し得る、濃縮糖溶液が使用され得る。染料または顔料は、同定のために、または活性化合物用量の異なる組み合わせを特徴付けるために、錠剤または糖衣錠コーティングに添加され得る。

デンプンミクロスフェアは、例えばジャガイモデンプンの温かい水性デンプン溶液を、水中のポリエチレングリコールの加熱した溶液に撹拌しながら添加することによって調製され、エマルジョンを形成することができる。（内相としてのデンプン溶液を用いて）二相系が形成された場合、混合物は撹拌を続けながら室温まで冷却され、その上で、内相はゲル粒子に変換される。次いで、これらの粒子は、室温で濾別され、エタノールなどの溶媒中でスラリー状にされ、その後、粒子は再度濾別され、空気中で乾燥するように静置される。ミクロスフェアは、熱処理などの周知の架橋結合手順によって、または化学的架橋結合剤の使用によって、硬化され得る。好適な薬剤としては、グリオキサール、マロンジアルデヒド、スクシンアルデヒド、アジポアルデヒド、グルタルアルデヒド、およびフタルアルデヒドを含むジアルデヒド、ブタジオン、エピクロロヒドリン、ポリリン酸塩、およびホウ酸塩などのジケトンが挙げられる。ジアルデヒドは、アミノ基との相互作用によってアルブミンなどのタンパク質を架橋結合するために使用され、ジケトンは、アミノ基を有するシッフ塩基を形成する。エピクロロヒドリンは、アミノまたはヒドロキシルなどの求核試薬を持つ化合物をエポキシド誘導体に活性化する。

経口で使用することができる薬学的調製物には、ゼラチンで作製されたプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤で作製された、封止された軟カプセルが含まれる。プッシュフィットカプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、ならびに任意に安定剤と混合した活性成分を含有することができる。軟カプセルでは、活性化合物は、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解または懸濁され得る。加えて、安定剤および／または抗酸化剤が添加され得る。経口投与用のすべての製剤は、そのような投与に適した投与量であるべきである。

頬側投与について、組成物は、従来の方法で製剤化された錠剤またはロゼンジの形態をとり得る。

化合物は、注射による、例えば、ボーラス注射または持続注入による、非経口投与のために製剤化され得る。注射用製剤は、防腐剤が添加された、単位剤形、例えば、アンプルまたは多用量容器で提示され得る。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンなどの形態をとり得、懸濁剤、安定剤、および／または分散剤などの製剤化剤を含有し得る。

多数の生体高分子のいずれかを含む遅延放出または徐放性送達システム（生物学ベースのシステム）、リポソーム、コロイド、樹脂を利用するシステム、および他のポリマー送達システム、または区画化されたリザーバは、治療用化合物の連続的または長期的なソースを提供するために、本明細書に記載される組成物と共に利用される。そのような遅延放出システムは、局所、眼内、経口、および非経口経路を介した送達のための製剤に適用可能である。

非経口投与用の薬学的製剤には、水溶性形態の活性化合物の水溶液が含まれる。加えて、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射懸濁液として調製され得る。適切な親油性溶媒またはビヒクルには、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが含まれる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる、物質を含有し得る。任意に、懸濁液はまた、化合物の溶解度を増加させて、高度に濃縮された溶液の調製を可能にする、適切な安定剤または薬剤を含有し得る。

あるいは、活性成分は、使用前に、適切なビヒクル、例えば、無菌パイロジェンフリー水での構成のための粉末形態であり得る。

前述の製剤に加えて、化合物はまた、デポ調製物として製剤化され得る。そのような長時間作用型製剤は、移植（例えば、皮下もしくは筋肉内）または筋肉内注射によって投与され得る。よって、例えば、化合物は、適切なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂で、あるいは難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として製剤化され得る。

本明細書に開示される疎水性化合物のための薬学的担体は、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、および水相を含む共溶媒系である。使用される一般的な共溶媒系は、絶対エタノール中で一定の体積を構成する、３％重量／体積のベンジルアルコール、８％重量／体積の非極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５％重量／体積のポリエチレングリコール３００の溶液を含む、共溶媒系である。当然のことながら、共溶媒系の割合は、その溶解度および毒性特性を損なうことなく大幅に変動され得る。さらに、共溶媒成分の同一性は、様々であり得る：例えば、ポリソルベート８０の代わりに他の低毒性非極性界面活性剤が使用され得、ポリエチレングリコールの画分サイズは様々であり得、他の生体適合性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンでポリエチレングリコールを置換し得、他の糖類または多糖類が使用され得る。

あるいは、疎水性薬学的化合物のための他の送達システムが使用され得る。リポソームおよびエマルジョンは、疎水性薬物の送達ビヒクルまたは担体の周知の例である。通常はより高い毒性という犠牲を払うが、ジメチルスルホキシドなどの特定の有機溶媒も使用され得る。加えて、化合物は、治療剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスなどの、徐放性システムを使用して送達され得る。様々な徐放性材料が確立されており、当業者によって周知である。徐放性カプセルは、それらの化学的性質に応じて、数週間～最大１００日超にわたって化合物を放出し得る。治療試薬の化学的性質および生物学的安定性に応じて、安定化のための追加戦略が採用され得る。

本明細書に開示される薬学的組み合わせで使用される化合物の多くは、薬学的に適合性のある対イオンを有する塩として提供され得る。薬学的に適合性のある塩は、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などを含むが、これらに限定されない多くの酸で形成され得る。塩は、対応する遊離酸または塩基形態である水性または他のプロトン性溶媒においてより可溶性である傾向がある。

本明細書に開示される方法における使用に適した薬学的組成物には、その意図された目的を達成するために有効な量で活性成分が含有される組成物が含まれる。より具体的には、治療有効量とは、疾患の症状を予防、軽減、もしくは改善するか、または治療される対象の生存を延長するのに有効な化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。

本明細書に開示される薬学的組成物の正確な製剤、投与経路、および投与量は、患者の状態を考慮して個別の医師によって選択することができる。（例えば、Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ．１９７５，ｉｎ “Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”，Ｃｈ．１ ｐ．１を参照されたい）。典型的には、患者に投与される組成物についての用量は、患者の体重の約０．５～１０００ｍｇ／ｋｇ、または患者の体重の１～５００ｍｇ／ｋｇ、もしくは１０～５００ｍｇ／ｋｇ、もしくは５０～１００ｍｇ／ｋｇであり得る。投与量は、患者によって必要とされるように、１日以上の期間に与えられる単一または一連の２つ以上であり得る。本開示で言及されるほとんどすべての特定の化合物について、少なくともいくつかの状態の治療のためのヒト投与量が確立されていることに留意されたい。よって、ほとんどの場合、本明細書に開示される方法は、それらの同じ投与量、または確立されたヒト投与量の約０．１％～５００％、もしくは約２５％～２５０％、もしくは５０％～１００％である投与量を使用するであろう。新たに発見された薬学的化合物の場合であるように、ヒト投与量が確立されていない場合、適切なヒト投与量は、動物における毒性研究および有効性研究によって定量化されるように、ＥＤ５０もしくはＩＤ５０値、またはインビトロもしくはインビボ研究から誘導される他の適切な値から推測することができる。

正確な投与量は薬剤毎に決定されるが、ほとんどの場合、投与量に関するいくつかの一般化を行うことができる。成人ヒト患者の１日投与量レジメンは、例えば、本明細書で開示される薬学的組成物または遊離塩基として計算されるその薬学的に許容される塩の、０．１ｍｇ～２０００ｍｇの各成分、好ましくは１ｍｇ～２５０ｍｇ、例えば、５～２００ｍｇの経口用量、または０．０１ｍｇ～５００ｍｇ、好ましくは０．１ｍｇ～６０ｍｇ、例えば、０．１～４０ｍｇの各成分の静脈内、皮下、もしくは筋肉内用量であり得、組成物は１日あたり１～４回投与される。あるいは、本明細書に開示される組成物は、好ましくは１日あたり４００ｍｇまでの各成分の用量で、継続的な静脈内注入によって投与され得る。よって、各成分の経口投与による総１日投与量は、典型的には、１～２０００ｍｇの範囲であり、非経口投与による総１日投与量は、典型的には、０．１～５００ｍｇの範囲であろう。好適には、化合物は、例えば、１週間以上、または数か月もしくは数年の継続的な療法の期間にわたって投与されるであろう。

投与量および間隔は、調節効果を維持するために十分である、活性部分の血漿レベル、または最小有効濃度（ＭＥＣ）を提供するために個別に調整され得る。ＭＥＣは、各化合物について変動するであろうが、インビトロデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投与量は、個別の特徴および投与経路に依存するであろう。しかしながら、ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを使用して、血漿濃度を決定することができる。

投与間隔は、ＭＥＣ値を使用して決定することもできる。組成物は、測定時の１０～９０％、好ましくは３０～９０％、最も好ましくは５０～９０％でＭＥＣを超える血漿レベルを維持するレジメンを使用して投与されるべきである。

局所投与または選択的摂取の場合、薬物の有効局所濃度は、血漿濃度に関連しない場合がある。

もちろん、投与される組成物の量は、治療される対象、対象の体重、苦痛の重症度、投与の方法、および処方する医師の判断に依存するであろう。

薬学的組成物および製剤は、例として、担体または希釈剤であり得る、薬学的に許容される賦形剤で調製され得る。そのような組成物は、カプセル、小袋、紙または他の容器の形態であり得る。組成物を作製する際に、薬学的組成物を調製するための従来の技術を使用してもよい。例えば、本明細書において上記で開示される式（Ｉ）の化合物は、担体と混合、または担体によって希釈、または担体内に封入され得、アンプル、カプセル、小袋、紙、または他の容器の形態であり得る。担体が希釈剤として機能する場合、それは、活性化合物のビヒクル、賦形剤、または培地として作用する固体、半固体、または液体の物質であり得る。本明細書における上記のような使用のための、式（Ｉ）の化合物およびそれを含む組成物は、例えば、小袋において、粒状固体容器上に吸着させることができる。好適な担体のいくつかの例は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシエトキシル化ヒマシ油、ピーナッツ油、オリーブ油、ラクトース、白土、スクロース、シクロデキストリン、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸またはセルロース、ケイ酸、脂肪酸、脂肪酸アミン、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリドの低級アルキルエーテル、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン、ヒドロキシメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンである。同様に、担体または希釈剤は、単独でまたはワックスと混合した、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルなどの、当該技術分野で既知の任意の徐放物質を含み得る。当該組成物はまた、湿潤剤、乳化および懸濁化剤、保存剤、甘味剤、または香味剤を含み得る。本発明に記載される、ＣＢ_２受容体活性の調節に応答する状態または疾患の治療における使用のための組成物は、当該技術分野で周知の手順を採用することによる患者への投与後、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物の迅速、持続、または遅延放出を提供するように製剤化され得る。

薬学的組成物および製剤は、滅菌し、必要に応じて、本明細書において上記で開示される化合物と有害に反応しない、助剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝液、および／または着色物質などと混合することができる。

薬学的組成物および製剤は、無菌の注射可能な水性または油性懸濁液または溶液の形態で調製、包装、または販売され得る。この懸濁液または溶液は、既知の技術に従って製剤化され得、活性成分に加えて、本明細書に記載される分散剤、湿潤剤、または懸濁剤などの追加の成分を含み得る。そのような無菌の注射可能な製剤は、例えば、水または１，３ブタンジオールなどの非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒を使用して調製され得る。他の許容される希釈剤および溶媒には、リンゲル液、等張塩化ナトリウム溶液、および合成モノグリセリドまたはジグリセリドなどの固定油が含まれるが、これらに限定されない。有用な他の非経口投与可能な製剤には、微結晶形態で、リポソーム調製物で、または生分解性ポリマーシステムの成分として活性成分を含むものが含まれる。徐放または移植のための組成物は、エマルジョン、イオン交換樹脂、難溶性ポリマー、または難溶性塩などの薬学的に許容されるポリマーまたは疎水性材料を含み得る。

本発明の組成物は、必要に応じて、活性成分を含有する１つ以上の単位剤形を含有し得るパックまたはディスペンサーデバイスで提示され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を含み得る。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与の指示が添付され得る。パックまたはディスペンサーには、薬剤の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形態の容器に関連する通知が添付され得、この通知は、ヒトまたは獣医学的投与用の薬物の形態の機関による承認を反映している。そのような通知は、例えば、処方薬について米国食品医薬品局によって承認された表示、または承認された製品添付文書であり得る。適合性の薬学的担体に製剤化された本明細書に開示される化合物を含む組成物もまた、調製され、適切な容器に入れられ、示された状態の治療についてラベル付けされ得る。

治療
本発明はまた、部分的に、脱髄に関連する状態または疾患の治療を必要とする対象における脱髄に関連する状態または疾患を治療する方法に関する。一実施形態では、方法は、治療有効量の少なくとも１つのカンナビジオール誘導体またはその製剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。本発明の一態様では、脱髄に関連する状態または疾患を治療する方法は、髄鞘再生を含む。本発明はさらに、部分的に、髄鞘再生を必要とする対象における髄鞘再生の方法に関する。本発明の一態様では、方法は、治療有効量の少なくとも１つのカンナビジオール誘導体またはその製剤を対象に投与することを含む。一実施形態では、対象は、脱髄に関連する状態または疾患を有する。一実施形態では、対象は、ＣＢ_２受容体活性の調節に応答する状態または疾患を有する。一実施形態では、対象は、脱髄に関連する状態または疾患、およびＣＢ_２受容体活性の調節に応答する状態または疾患を有する。本発明はまた、部分的に、脱髄疾患を治療する方法に関する。

いくつかの実施形態では、脱髄に関連する状態または疾患は、自己免疫疾患、脱髄性疾患、炎症関連障害、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、脱髄に関連する状態または疾患は、ＳＳｃ、髄鞘破壊性障害、無痛症、急性および慢性疼痛、炎症性疼痛、術後疼痛、神経因性疼痛、筋弛緩、免疫抑制、抗炎症剤として、アレルギー、緑内障、気管支拡張、神経保護、骨粗鬆症および骨格系の障害、癌、これらに限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病（ＰＤ）、およびハンチントン病を含む神経変性障害、ＭＳ、筋痙直、振戦、線維筋痛、狼瘡、リウマチ性関節炎、重症筋無力症、他の自己免疫障害、刺激性腸症候群、間質性膀胱炎、片頭痛、心因性掻痒症、湿疹、脂漏症、乾癬、帯状疱疹、脳虚血、脳溢血、頭蓋脳外傷、脳卒中、脊髄損傷、肝硬変、アテローム性動脈硬化症、鎮咳剤として、喘息、悪心、嘔吐、胃潰瘍、視神経脊髄炎、中枢神経系ニューロパチー、橋中心髄鞘崩壊、脊髄症、白質脳症、白質ジストロフィー、末梢性ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、進行性炎症性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、髄鞘再生を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、髄鞘再生を誘発する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、髄鞘再生を増強する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、脱髄を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、脱髄を予防する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、脱髄を低減する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、脱髄を加速する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、脱髄を終結させる。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、神経炎症を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、神経炎症を軽減する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ミクログリオーシスを調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ミクログリオーシスを予防する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ミクログリオーシスを軽減する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、アストログリオーシスを調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、アストログリオーシスを予防する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、アストログリオーシスを軽減する。

一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、遺伝子発現を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、遺伝子発現を予防する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、遺伝子発現を低減する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、遺伝子発現を増強する。

いくつかの実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＭＳ病態生理に関連する遺伝子、乏突起膠細胞機能に関連する遺伝子、ＥＡＥにおける下方制御に関連する遺伝子、Ｏｌｉｇ２の発現に関連する遺伝子、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される遺伝子発現を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、テニューリンの発現を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、テニューリン４（Ｔｅｎｍ ４）の発現を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、Ｔｅｎｍ ４の発現を増強する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、Ｔｅｎｍ ４の発現を正常化する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、Ｏｌｉｇ２の発現を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、Ｏｌｉｇ２の発現を回復させる。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、Ｏｌｉｇ２の発現を増強する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼパイ（ＧＳＴｐｉ）の発現を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＧＳＴｐｉの発現を増強する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＧＳＴｐｉの発現を回復させる。

一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、対象における脱髄の減弱に有効である。「脱髄の減弱」とは、疾患の結果としての、もしくは疾患の症状としての対象における脱髄の量が、他の同じ状態と比較される場合に低減すること、および／または対象における髄鞘再生の量が他の同じ状態と比較される場合に増加することを意味する。「低減した」とは、脱髄の量または脱髄に起因する脱髄疾患の任意の症状における任意の測定可能または検出可能な低減を意味する。同様に、「増加した」という用語は、脱髄に起因する脱髄疾患の症状における低減としても現れるであろう、髄鞘再生の量における任意の測定可能または検出可能な増加を意味する。本発明の実施形態では、対象における脱髄の減弱は、対照と比較される。脱髄に起因する症状は、疾患に応じて異なるが、例えば、これらに限定されないが、認知障害（記憶、注意、概念化、問題解決能力を含む）および情報処理などの神経学的欠損；１つ以上の肢、体幹、もしくは顔の片側における異常感覚；脚もしくは手の弱さもしくは不器用さ；または視覚障害、例えば、片眼における部分的失明および疼痛（球後視神経炎）、視界の暗さ、もしくは暗点を含み得る。脱髄を減弱する化合物の能力は、当該技術分野で知られているアッセイ、例えば、本明細書に記載されるクプリゾン誘発性脱髄モデルを使用して検出または測定され得る。

一実施形態では、脱髄疾患は、脳および脊髄における神経を取り囲む保護被覆（髄鞘）に損傷をもたらす任意の疾患または状態である。本発明のさらなる実施形態では、脱髄疾患は、多発性硬化症、横断性脊髄炎、ギランバレー症候群、進行性多巣性白質脳症、横断性脊髄炎、フェニルケトン尿症および他のアミノ酸尿症、テイ－サックス病、ニーマン・ピック病、ゴーシェ病、ハーラー症候群、クラッベ病および他の白質ジストロフィー、急性散在性脳脊髄炎、感染後脳脊髄炎、副腎白質ジストロフィー、副腎脊髄ニューロパチー、視神経炎から選択される。デビック病（視神経脊髄炎）、レーバー遺伝性視神経萎縮および関連ミトコンドリア障害、ならびにＨＴＬＶ関連脊髄症または脱髄疾患は、局所損傷、虚血、毒剤、または代謝障害の結果である。一実施形態では、脱髄疾患は、多発性硬化症である。

ＣＢ_２モジュレーター（すなわち、アゴニスト、部分アゴニスト、アンタゴニスト、またはインバースアゴニスト）は、無痛症、急性および慢性疼痛、炎症性疼痛、術後疼痛、神経因性疼痛、筋弛緩、免疫抑制、抗炎症剤として、アレルギー、緑内障、気管支拡張、神経保護、骨粗鬆症および骨格系の障害、癌、これらに限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病（ＰＤ）、およびハンチントン病を含む神経変性障害、多発性硬化症（ＭＳ）、筋痙直、振戦、線維筋痛、狼瘡、リウマチ性関節炎、重症筋無力症、他の自己免疫障害、刺激性腸症候群、間質性膀胱炎、片頭痛、心因性掻痒症、湿疹、脂漏症、乾癬、帯状疱疹、脳虚血、脳溢血、頭蓋脳外傷、脳卒中、脊髄損傷、肝硬変、アテローム性動脈硬化症、鎮咳剤として、喘息、悪心、嘔吐、胃潰瘍、全身性硬化症、髄鞘破壊性障害、視神経脊髄炎、中枢神経系ニューロパチー、橋中心髄鞘崩壊、脊髄症、白質脳症、白質ジストロフィー、末梢性ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、進行性炎症性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ならびに下痢のための治療的有用性を有する。

よって、一態様では、本発明はさらに、対象におけるＣＢ_２受容体活性の調節に応答する疾患または状態を治療する方法に関し、方法は、それを必要とする対象を特定することと、対象に治療有効量のカンナビジオール誘導体またはその製剤を投与することと、を含む。一態様では、本発明は、酸化およびアミノ化を通して合成または天然カンナビジオール（ＣＢＤ）から化学的に誘導される、化学的に安定な、非向精神性アミノキノイドを含む新薬候補に関する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、神経炎症を軽減し、神経保護を選好し、軸索損傷を予防し、ミエリン構造を保存し、髄鞘再生を潜在的に促進する相補的シグナル伝達経路を標的とすることによって新規ＭＯＡを有する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＣＢ_２受容体シグナル伝達のモジュレーターである。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＰＰＡＲγおよびＣＢ_２受容体シグナル伝達のモジュレーターである。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＰＰＡＲγおよびＣＢ_２受容体シグナル伝達のデュアルモジュレーターであり、ＨＩＦ－１αを安定化することによってＨＩＦ経路を活性化し、エリスロポエチン（ＥＰＯ）および血管内皮成長因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）を含むいくつかの関連因子の発現を上方制御する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、おそらく、増強された神経保護およびＨＩＦ経路を通した潜在的な髄鞘再生と併せて、ＰＰＡＲγ／ＣＢ_２受容体に作用することによって神経炎症を低減する。

一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＣＢ_２の活性を調節する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＣＢ_１と比較してＣＢ_２受容体に優先的に結合する。したがって、これらの実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体は、ＣＢ_２について選択的である。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体のアミン基は、ＣＢ_２へのその結合を増強する。一実施形態では、非反応性合成カンナビジオール誘導体のアミン基は、ＣＢ_１受容体に対してＣＢ_２受容体に選択的に結合する。一実施形態では、ＣＢ_２受容体活性は、インビトロで調節されるが、他の実施形態では、ＣＢ_２受容体活性は、インビボで調節される。

一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、別の治療剤と組み合わせて投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、経口投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、局所投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、直腸投与を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、経粘膜投与を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、腸内投与を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、非経口送達を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、筋肉内注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、皮下注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、静脈内注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、髄内注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、髄腔内注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、直接脳室内注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、腹腔内注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、鼻腔内注射を使用して投与される。一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、眼内注射を使用して投与される。

一実施形態では、カンナビジオール誘導体またはその製剤は、食物または飲料と共に投与される。

一実施形態では、ＣＢ_２受容体活性の調節に応答する状態または疾患は、自己免疫疾患、脱髄性疾患、炎症関連障害、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、ＣＢ_２受容体活性の調節に応答する状態または疾患は、ＳＳｃ、髄鞘破壊性障害、無痛症、急性および慢性疼痛、炎症性疼痛、術後疼痛、神経因性疼痛、筋弛緩、免疫抑制、抗炎症剤として、アレルギー、緑内障、気管支拡張、神経保護、骨粗鬆症および骨格系の障害、癌、これらに限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病（ＰＤ）、およびハンチントン病を含む神経変性障害、ＭＳ、筋痙直、振戦、線維筋痛、狼瘡、リウマチ性関節炎、重症筋無力症、他の自己免疫障害、刺激性腸症候群、間質性膀胱炎、片頭痛、心因性掻痒症、湿疹、脂漏症、乾癬、帯状疱疹、脳虚血、脳溢血、頭蓋脳外傷、脳卒中、脊髄損傷、肝硬変、アテローム性動脈硬化症、鎮咳剤として、喘息、悪心、嘔吐、胃潰瘍、視神経脊髄炎、中枢神経系ニューロパチー、橋中心髄鞘崩壊、脊髄症、白質脳症、白質ジストロフィー、末梢性ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、進行性炎症性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

本開示の精神から逸脱することなく、多数の様々な修飾を行うことができることは、当業者によって理解されるであろう。したがって、本明細書に開示される形式は例示にすぎず、本開示の範囲を限定することを意図しないことを明確に理解されたい。

実験例
本発明は、以下の実験例を参照することによってさらに詳細に説明される。これらの例は、例示のみを目的として提供されており、特に明記されない限り、限定することを意図しない。よって、本発明は、以下の例に限定されると決して解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになるいずれかおよびすべての変形を包含すると解釈されるべきである。

さらなる説明なしに、当業者は、前述の説明および以下の例示的な例を使用して、本発明の化合物を作製および利用し、特許請求される方法を実施することができると考えられる。したがって、以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を具体的に指摘するものであり、本開示の残りの部分をいかなる方法でも制限するものとして解釈されるべきではない。

実施例１：化合物の合成
ＶＣＥ－００４．８の現在の製造プロセスは、図１Ａ～１Ｂおよび２に示されるように３つのステップを含む。要するに、これらのステップは次の通りである。
ステップ１：ＣＢＤを、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）中のＣＢＤの溶液に安定化された２－ヨードキシ安息香酸（ＳＩＢＸ）の添加によって酸化させる。不均一混合物を高温で撹拌し、完了後、混合物を濾過する。濾液を炭酸カリウム（Ｋ_２ＣＯ_３）溶液で２回、塩酸（ＨＣｌ）溶液で１回洗浄する。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）（ａｑ、ｓａｔ）を、層分離を容易にするために最後の洗浄に追加する。有機層を濃縮してＶＣＥ－００４を得る。

ステップ２：水中の過酸化物溶液を、ＥｔＯＡｃ中のＶＣＥ－００４の溶液に添加する。混合物を冷却し、ベンジルアミンをゆっくりと添加する。反応の完了後、水性ＨＣｌ（１５％）を添加し、有機層を水で数回洗浄する。有機層を濃縮し、生成物をメタノールおよび水の溶液（ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ）から沈殿させ、濾過し、乾燥させて、ＶＣＥ－００４．８を生成する。

ステップ３：ＶＣＥ－００４．８を高温のＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ ８５：１５中での懸濁によってさらに精製する。得られた混合物を冷却し、生成物を濾過する。固体を乾燥させ、ふるいにかけて、精製されたＶＣＥ－００４．８を産生する。

最終的な原薬をふるいにかけ、二重の低密度ポリエチレンバッグおよびクラフトドラムに包装し、ラベルを付ける。

次いで様々な薬学的塩を高収率で合成した。

実施例２：原薬
ＶＣＥ－００４．８は、ＰＣＴ－ＥＰ２０１４－０５７７６７に記載される新しい化学物質である。化合物の活性は、ＰＣＴ－ＥＰ２０１７－０５７３８９にも記載される。ＰＣＴ－ＥＰ２０１４－０５７７６７およびＰＣＴ－ＥＰ２０１７－０５７３８９は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

アミノキノイドＶＣＥ－００４．８は、合成カンナビジオール（ＣＢＤ）に由来する新しい化学物質である。特徴分析研究は、ＶＣＥ－００４．８が４３３．６ｇ／ｍｏｌの分子量を有する無水および非溶媒和結晶性固体であることを示した。融点は、９０．７℃である。ＶＣＥ－００４．８の構造解明は、赤外分光法（ＡＴＲ－ＩＲ）、元素分析（ＣＨＮ）、高分解能エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）、プロトン核磁気共鳴（１Ｈ－ＮＭＲ）、炭素核磁気共鳴（１３Ｃ－ＮＭＲ）、他のＮＭＲ技法、すなわち、分極移動による無歪増強（ＤＥＰＴ１３５）、異核単一量子相関（ＨＳＱＣ）、異核多結合相関（ＨＭＢＣ）、および２Ｄ研究によって実施した。これらの構造解明研究が完了し、分子の構造が適合された。

ＶＣＥ－００４．８原薬の放出および安定性試験の分析試験方法は、同一性、個別不純物および総不純物、クロマトグラフィー純度、ならびにアッセイについて開発された（表１）。潜在的なキラル不純物も評価した。原材料ＣＢＤは高純度であり、合成中にエナンチオマー形態がほとんど～まったく得られないため、原薬製造中のキラル不純物形成の可能性は、非常に低いと考えられる。それにもかかわらず、原薬ロットを評価するためにキラル法が開発された。

ストレス試験を実施し、ＶＣＥ－００４．８原薬はガラスバイアルにおいて６５℃＋／－５℃で３日間安定であると結論付けた。６５℃超の温度で製品の劣化が観察された。４０℃での短期安定性研究は、不純物方法の開発初期段階のために決定的ではない結果で完了した。

実施例３：液体製剤
溶解度スクリーニング研究は、ＥＨＰ－１０１液体の活性成分であるＶＣＥ－００４．８（ＶＣＥ－００４．８製剤としても知られる前臨床開発中）は、異なるｐＨの水溶液およびシクロデキストリン複合体に実質的に不溶性であることを示した（図３Ａ、３Ｂ、および４）。グリセロールなどの共溶媒にも実質的に不溶性であり、ＰＥＧ４００のような共溶媒には難溶性である。ＶＣＥ－００４．８は、ｎ－ヘプタンおよびメタノールのような有機溶媒にわずかに溶解し、ＤＭＳＯおよびＤＣＭのような有機溶媒に自由に溶解する。溶解度研究、短期安定性研究、ならびにラットおよびマウスにおけるインビボバイオアベイラビリティ研究に基づいて、経口製剤について表２に示されるＥＨＰ－１０１の組成を選択した。

図５Ａの製造フローチャートでは、ＧＭＰ ＤＰバッチ（２０ｍｇ／ｇ）の現在の製造プロセスが、製剤ＥＨＰ－１０１液体およびプラセボ／ビヒクルのこれまでの経験に基づいて記載される。プロセスは、以下のステップを含む：
１．Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣおよびトウモロコシ油を５０：５０体積／体積の比で混合する
２．ＶＣＥ－００４．８をＭａｉｓｉｎｅ ＣＣ：トウモロコシ油混合物に可溶化する
３．ＤＰをＮ２ブランケッティングを備えるバルク容器に充填する。

Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣおよびトウモロコシ油（５０：５０体積／体積）ビヒクルのバルク混合物は、臨床研究においてプラセボに使用されるであろう（図５Ｂ）。

ＥＨＰ－１０１液体およびプラセボの管理のために開発および使用される分析試験方法を表３に要約する。開発の経過において、分析試験方法は、引き続き最適化および改訂されるであろう。

６か月安定性研究のデータが入手可能であり、製剤は、３つの異なる濃度、すなわち、２０ｍｇ／ｇ、２５ｍｇ／ｇ、および３０ｍｇ／ｇで含まれた。油製剤組成は、臨床研究において使用される製剤の選択された組成と同一である。したがって、これらの製剤は、臨床研究において使用される製剤の代表である。安定性研究は、以下の条件：５℃±３℃、２５℃±２℃／６０％ＲＨ±５％ＲＨ、および４０℃±２℃／７５％ＲＨ±５％ＲＨで実施した。

この研究の結果は、製品が、窒素ブランケッティングなしで、琥珀色ガラスボトルにおいて５℃、２５℃／６０％ＲＨで少なくとも６か月間化学的に安定であることを示した。

実施例４：第１相研究の製剤
この脂質製剤では、異なる濃度、すなわち、２０ｍｇ／ｇ、２５ｍｇ／ｇ、および３０ｍｇ／ｇの原薬を試験した。２０ｍｇ／ｇの濃度は、追加の加熱または撹拌なしに室温で可溶化されたままであるため、この濃度を、臨床研究において使用するために選択した。

ＥＨＰ－１０１液体およびプラセボは、バルクボトルにおいて充填、保存、および出荷される。

本発明に開示される液体製剤、ＥＨＰ－１０１液体は、トウモロコシ油／Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ（５０／５０体積／体積）の混合物中のＶＣＥ－００４．８の２０ｍｇ／ｇ溶液からなる。同様の製剤（最大濃度３０ｍｇ／ｇ）がインビボ非臨床研究に使用されている。液体油性製剤の選択は、ＶＣＥ－００４．８の可溶化効率、および＞２０の製剤プロトタイプのバイオアベイラビリティのインビボスクリーニング研究に基づいた。

単一用量製剤の製造は、バルクＥＨＰ－１０１をバルクビヒクルで希釈することによって調製されるであろう。一致するプラセボは、バルクプラセボへの着色剤の添加によって調製されるであろう。単一用量製剤および一致するプラセボを放出し、これらの製剤の安定性研究を実施するために、分析方法が移されるであろう。

溶解度スクリーニングおよび製剤コンセプトの製造
経口投与のための最良のＶＣＥ－００４．８の製剤（ＥＨＰ－１０１）を選択するために、２つの主要なパラメータ：溶解度および経口バイオアベイラビリティを考慮した。

化合物の溶解度は、胃腸管からのその吸収、および最終的にはその経口バイオアベイラビリティを決定する際に重要な因子である。まず、一連の異なる溶媒（例えば、水性、脂質、有機など）におけるＶＣＥ－００４．８の溶解度を決定した。加えて、選択された溶媒におけるＶＣＥ－００４．８の安定性の試験も、最良の溶媒の選択のための基準として使用した。脂質溶媒における溶解度研究に基づいて、ＶＣＥ－００４．８は、個別のトウモロコシ油またはＭａｉｓｉｎｅ ＣＣ単独よりも、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ：トウモロコシ油の混合物により可溶性であることが示された（表４および図６）。

選択された溶媒を使用して、ＶＣＥ－００４．８のいくつかの製剤コンセプトを製造し、経口摂取による薬物動態（ＰＫ）プロファイルを評価した。

バイオアベイラビリティは、薬物の主要なＰＫ特性のうちの１つである。これは、体循環に到達する未変化薬物の投与用量の割合を説明するために使用される。定期的な時間間隔での血漿中の薬物の量の測定は、活性薬学的成分が薬物製品から吸収され、作用部位で利用可能になる速度および程度を間接的に示す。

実施例５：比濁水溶解度
ＶＣＥ－００４．８の水溶解度評価は、生理学的温度で実施した。ＶＣＥ－００４．８（ＤＭＳＯに１０ｍＭで溶解）を３７℃でＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４と混合して、１μＭの最終ＶＣＥ－００４．８濃度および０．３３％体積／体積の最終ＤＭＳＯ濃度を達成した。インキュベーションは、ＰＴＦＥ（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標））で実施した。ＰＴＦＥとポリプロピレンとの間の非特異的結合の任意の違いを評価するために、ポリプロピレンプレートでも並行インキュベーションを実施した。次いで、ＰＴＦＥでのインキュベーションのために、５、１５、３０、４５、および１２０分で２時間にわたって連続試料を採取した。ポリプロピレンでのインキュベーションについて、試料を０分および１２０分でのみ取り出した。化学分解を停止するために、すべての試料を、ドライアイスで冷却したマイクロタイタープレートにおいて２体積のメタノールに直ちに添加した。サンプリングが完了したら、サンプリングプレートを室温に到達させた。次いで、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる親化合物の定量分析のために試料を取り出した。分析差異を補正するために、内部標準が含まれた（ニカルジピンおよびピレン）。次いで、０分試料に対して各時点で残っている親化合物のパーセンテージ、およびＰＴＦＥと比較してポリプロピレンに結合した親化合物のパーセンテージを、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳピーク面積比（化合物ピーク面積／内部標準ピーク面積）から計算した。ＰＴＦＥインキュベーションについて３７℃でインキュベーションを開始した後０、５、１５、３０、４５、および１２０分で存在する親化合物のパーセントを報告した。加えて、ＰＴＦＥと比較してポリプロピレンに結合した試験化合物のパーセンテージを計算した。推定溶解度範囲（下限および上限、ならびに計算された中間範囲μＭ）を表５に示し、これはＶＣＥ－００４．８の低い水溶解度を示す。

実施例６：Ｌｏｇ Ｄ決定
親油性は、薬物のＰＫ挙動の重要な決定因子である。それは、薬物の組織への分布、吸収、および結合特性に影響を与えることができ、化合物の溶解度を決定する際の重要な因子でもある。Ｌｏｇ Ｄ（分配係数）は、親油性の尺度として使用される。有機溶媒（典型的にはオクタノール）と水性緩衝液との間の化合物の配分を決定することは、このパラメータを決定するための最も一般的な方法のうちの１つである。

ｌｏｇ Ｄを決定するために、０．１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４（オクタノールで飽和）を、ＶＣＥ－００４．８を含有するバイアルに添加し、溶液を混合し、約１５分間超音波処理した。溶液をチューブに移し、遠心分離し、上清を上部から取り除き、任意の固体化合物を下部に残した。次いで、この上清を０．２μｍフィルターを通してシリンジ濾過して、初期溶液を生成した。ｌｏｇ Ｄ値の範囲をカバーするために、リン酸塩緩衝液中に異なる比のオクタノールおよび化合物を含有する３つのバイアルを調製した。ケトコナゾールおよびカンナビジオール（ＣＢＤ）を対照として使用した。バイアルを混合して平衡にし、次いで遠心分離して、２つの相が完全に分離したことを確認してから、オクタノールを除去し、緩衝液試料を分析した。定量分析のために、水溶液をＬＣ ＭＳ／ＭＳによって分析した。各バイアルにおけるＶＣＥ－００４．８の量は、初期溶液を段階希釈することによって生成された６点標準曲線に対して定量化した。Ｌｏｇ Ｄは、図７に示される、式を使用して計算し、式中、ＣｏｎｃＩＮＩＴＩＡＬは初期水溶液中の化合物の濃度であり、ＣｏｎｃＦＩＮＡＬは最終水相中の化合物の濃度であり、Ｖａｑは水相の体積であり、Ｖｏｃｔはオクタノール相の体積である。

表６に示される結果は、ＶＣＥ－００４．８が高度に親油性の化合物であり、親分子カンナビジオール（ＣＢＤ）と同じ範囲にあることを示した。

実施例７：溶解度スクリーニング
ＶＣＥ－００４．８で定量的熱力学的溶解度決定を実施した。ＶＣＥ－００４．８の懸濁液は、異なる薬学的ビヒクルおよび有機溶媒で調製した。有機溶媒、脂質、および共溶媒ビヒクルは、純粋な溶媒または脂質で構成されたが、シクロデキストリン溶液は、リン酸塩緩衝液ｐＨ７．０で調製した。懸濁液を２５℃で２４時間撹拌した後、溶解度決定のために、少量アリコートの母液を懸濁液から取り出した。溶液中のＶＣＥ－００４．８の濃度は、ＨＰＬＣ分析によって決定した。この溶解度決定の結果を表７に示す。

これらの結果は、ＶＣＥ－００４．８が水性緩衝液において非常に低く、ｐＨに依存しない、溶解度を示すことを確認するが、すべての脂質ビヒクルおよびほとんどの共溶媒において、化合物は、難溶性であることがわかった。さらに、シクロデキストリン溶解度結果は、メチル－β－シクロデキストリンについて、ＶＣＥ－００４．８との複合体形成が起こることを示すが、シクロデキストリンの使用は、溶解度を有意に改善しない。

実施例８：脂質溶媒における溶解度および安定性の追加評価
脂質溶媒における溶解度の追加試験を実施した。したがって、ＶＣＥ－００４．８を室温で溶解し、表７に示されるように６つの異なる脂質溶媒に最大１６時間中に撹拌した。異なる溶解度試験のアッセイは、以下のパラメータ：カラムＣ１５０７２４ＮＣ００４７、Ｋｉｎｅｔｅｘ、Ｃ１８：１５０ｍｍ、４．６ｍｍ、２．６μＭ、アイソクラティックアセトニトリル：０．２％ギ酸（９０：１０）、流量０．３５ｍＬ／分、波長３１４ｎｍ、カラム温度２５℃、実行時間２０分、注入体積１０μＬを使用してＨＰＬＣによって実施した。濃度０．１ｍｇ／ｍＬは、技法の理論上１００％とみなされた。結果を表８に示す。

アッセイおよび不純物パーセンテージに基づいて、コンセプトＰ０３、Ｐ０４、およびＰ０５を予備安定性研究のために選択した。ＶＣＥ－００４．８は、Ｐ０７、Ｐ０８、およびＰ０９に２ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解することもわかった。どの溶液もいかなる沈殿物または目に見える固体粒子を示さなかった。安定性研究条件およびアッセイ結果を表９に示し、３１日間の溶解度および安定性の両方に基づいて、Ｐ０３が最良の製剤であることを示す。結果として、Ｋｏｌｌｉｓｏｌｖ（登録商標）ＭＣＴ ７０－中鎖トリグリセリド（Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１２またはＭｙｒｉｔｏｌ（登録商標）３１８としても知られる）を、ラットにおける経口投与によるＶＣＥ－００４．８ ＰＫプロファイルを評価するために選択した。ＰＫ分析のために１０ｍｇ／ｍＬのＶＣＥ－００４．８の製剤を調製した（製剤番号１）。

実施例９：脂質製剤
表７に示される結果に基づいて、１０の異なるプロトタイプ脂質製剤コンセプトが開発された。脂質ビヒクルの組成は、脂質分類システムからのすべてのクラスが確実に表されるように選択した。調製は、以下のように行い、７５ｍｇのＶＣＥ－００４．８を適切な容器に量り入れ、これに６．７５ｇの賦形剤を撹拌しながら添加した。必要に応じて、賦形剤を液体にするために４５℃に加熱した。表１０は、開発された１０の異なる脂質製剤コンセプトの概要を示す。

開発された各コンセプトについて、試料を５℃および２５℃／６０％ＲＨで４週間保存した。その後、安定性をＨＰＬＣによって評価した（表１１）。コンセプト８および１０を除く、すべてのコンセプトは、時間０（Ｔ０）で許容されるアッセイを示した。２５℃／６０％ＲＨでの４週間の保存（Ｔ４Ｗ）後、コンセプト２、３、５、６、７、および９は、アッセイの大幅な減少（５～１０％）を示す。

ＰＫ供給について、脂質製剤コンセプト１、３、４、および６を、ＰＫ評価のために選択した（それぞれ製剤番号２、３、４、５）。製剤番号２および３を以下のように新たに調製し、３５０ｍｇのＶＣＥ－００４．８を適切な容器に量り入れ、これに３４．６５ｇの賦形剤を撹拌しながら添加して、１０ｍｇ／ｇの濃度を得た。必要に応じて、賦形剤を液体にするために４５℃に加熱した。濃度を１０ｍｇ／ｇから４ｍｇ／ｇに調節した。したがって、各製剤番号２および３の３つのバイアルを磁気撹拌によってプールし、その後、各製剤をそれぞれの賦形剤混合物で２．５倍に希釈した。必要に応じて、賦形剤を液体にするために４５℃に加熱した。一方、製剤番号４および５を以下のように新たに調製し、１４０ｍｇのＶＣＥ－００４．８を適切な容器に量り入れ、これに３４．８６ｇの賦形剤を撹拌しながら添加して、４ｍｇ／ｇの濃度を得た。

実施例１０：ゴマ油
新たに承認された薬物Ｓａｔｉｖｅｘ（登録商標）では、ＣＢＤは、無水アルコール、ゴマ種子油、ストロベリーフレーバー、およびスクラロースを含む経口溶液中に１００ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤化されている。ＣＢＤはＶＣＥ－００４．８の親分子であるため、ラットに経口投与される場合、ＶＣＥ－００４．８のＰＫプロファイルを評価するためにゴマ油を選択した。ゴマ油中の４ｍｇ／ｍＬのＶＣＥ－００４．８の製剤（製剤番号６）、およびゴマ油（９７．５％）－エタノール（２．５％）を含む４ｍｇ／ｍＬのＶＣＥ－００４．８での別の製剤（製剤番号７）を、ラットにおけるＰＫ分析のために調製した。

実施例１１：ＩＮＤＥＮＡ ＰＨＹＴＯＳＯＭＥ
Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ（登録商標）は、薬物および栄養補助食品の主要な製造業者である、Ｉｎｄｅｎａ Ｓｐａ（Ｉｔａｌｙ）によって開発された特許技術である。Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅは、リン脂質、主にホスファチジルコリンに結合した活性成分を含有する小細胞様構造である。リン脂質分子構造には、水溶性ヘッドおよび２つの脂溶性テールが含まれる。この二重溶解性のために、リン脂質は、脂質適合性分子複合体を産生する効果的な乳化剤として機能する。このｐｈｙｔｏｓｏｍｅ技術は、バイオアベイラビリティの際立った増強、顕著により大きな臨床的利益、組織への確実な送達のための、栄養安全性を損なうことのない画期的なモデルである。

ＶＣＥ－００４．８から開始するＶＣＥ－００４．８ｐｈｙｔｏｓｏｍｅの調製のための実験室プロセスを開発した。まず溶媒スクリーニングを実施し、エタノール、メタノール、アセトン、ジクロロメタン、および酢酸エチルとの比較のために酢酸エチルを選択した。２つのＰｈｙｔｏｓｏｍｅ－ＶＣＥ－００４．８プロトタイプを調製した：
１）Ｅｍｕｌｐｈｕｒ／ＳＦ（２ｇ）、ＶＣＥ－００４．８（１ｇ）、およびマルトデキストリンＭＤ０５（０．９２ｇ）が４０ｍｌの酢酸エチルに懸濁された、Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ１：２比。懸濁液を１時間撹拌しながら還流した。軟質の塊が得られるまで、溶媒を減圧下（３００～４００ｍｂａｒ、６０℃の外部浴）で除去した。軟質の残留物を真空下５０℃で１６時間乾燥させた。乾燥した固体に２％重量／重量のＳｙｌｏｉｄ ２４４ ＦＰを添加した。固体を粗く粉砕し、６００μｍでふるいにかけて、ＶＣＥ－００４．８リン脂質／ＳＦを得た。出発粉末の重量収率対合計は、約９８％重量／重量であった。
２）Ｅｍｕｌｐｈｕｒ／ＳＦ（１ｇ）、ＶＣＥ－００４．８（１ｇ）、およびマルトデキストリンＭＤ０５（１．９２ｇ）が４０ｍｌの酢酸エチルに懸濁された、Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ１：１比。懸濁液を１時間撹拌しながら還流した。軟質の塊が得られるまで、溶媒を減圧下（３００～４００ｍｂａｒ、６０℃の外部浴）で除去した。軟質の残留物を真空下５０℃で１６時間乾燥させた。乾燥した固体に２％重量／重量のＳｙｌｏｉｄ ２４４ ＦＰを添加した。固体を粗く粉砕し、６００μｍでふるいにかけて、ＶＣＥ－００４．８リン脂質／ＳＦを得た。出発粉末の重量収率対合計は、約９８％重量／重量であった。

化合物安定性の予備調査は、活性成分がプロセス条件で安定であることが示したが、不純物ピークは、図８に示されるように、出発材料では検出されず、４５分ではほとんど無視でき、６時間後に増加し（面積％で１．７％）、２４時間後に成長した（面積％で６．２％）。

Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ－ＶＣＥ－００４．８の溶解度は、様々なｐＨ（１．２、４．５、６．８、および８．０）で緩衝液において試験した。各ｐＨについて、ＶＣＥ－００４．８およびそのｐｈｙｔｏｓｏｍｅの独立した過飽和溶液を調製した。懸濁液を１０分間超音波処理し、水浴において３７℃で２時間保持した。次いで、最終懸濁液を濾過し（０．４５ＰＴＦＥ使い捨てフィルターで）、溶液をＨＰＬＣ分析のために注入した。表１２および図９に示される結果は、ＶＣＥ－００４．８の親水性（水溶解度として表される）が実質的にゼロであることを示した。しかしながら、フィトソーム化プロセスは、化合物の溶解度を大幅に増加させる。１：２比は、１：１比よりもわずかにより可溶性であり、中性および塩基性ｐＨで最も良好な挙動が示された。したがって、ラットにおけるＰＫプロファイルの以下の評価のためにＰｈｙｔｏｓｏｍｅ １：２を選択した（製剤番号８）。Ｐｈｙｔｏｓｏｍｅ １：２は、２４％のＶＣＥ－００４．８を含有し、経口投与のために水中のメチルセルロース１％で調製した。

実施例１２：Ｅｃｈｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＡＬＩＴＲＡ（登録商標）
Ａｌｉｔｒａ（登録商標）は、Ｅｃｈｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＢＶによって特許取得された薬物送達技術である。Ａｌｉｔｒａ（登録商標）は、水溶液中のカンナビノイドの放出を改善するためにＥｃｈｏによって成功裏に開発され、使用された乳化技術である。

ＶＣＥ－００４．８の製剤には、ベース製剤としての経口使用のために設計された賦形剤の混合物である、ＥＣＰ０１２Ａを使用した。これは、その一貫性を評価するために錠剤化されたＶＣＥ－００４．８の乾燥粉末製剤を与える。さらなる調査目的で、３つの最終的なＶＣＥ－００４．８製剤を粉末として送達した。

ＶＣＥ－００４．８ ＥＣＰ０１２Ａ錠剤は、活性成分ＶＣＥ－００４．８からの２つの製造ステップ：造粒ステップおよび錠剤調製ステップを通して調製した。第１のステップは、中間生成物（ＩＰ）の調製であった：エタノール中に賦形剤を含有する造粒流体を一次粉末粒子に添加し、続いて溶媒を蒸発させた。得られた材料の粒径は、粉砕によって低減した。これは、錠剤化の準備ができた顆粒であるＩＰをもたらした。第２の製造ステップは、薬物製品（ＤＰ）の調製であった。ＩＰは、賦形剤とブレンドし、錠剤は、錠剤プレスでの直接圧縮によって圧縮した。表１３に記載されるように、３つの異なる製剤を調製した。

ＤＰのＶＣＥ００４．８含有量は、ＨＰＬＣ分析によって二通りに測定した。Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００システムは、Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウェア下で動作する。使用されるＨＰＬＣ方法は、ドロナビノール（デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール、ＴＨＣ）についての米国薬局方（ＵＳＰ）方法に基づき、ＣＢＤおよび他のカンナビノイドの測定のために開発された。

溶解試験を使用して、ＡＰＩのバイオアベイラビリティを間接的に決定し、異なる製剤におけるＡＰＩのバイオアベイラビリティの考えられる差を測定した。溶解は、英国薬局方（ＢＰ）のセクション２．９．３に従って測定した。選択された溶出溶媒は、水中の２％ＳＤＳ、ｐＨ７で構成された。ビーカーを、撹拌しながら３５℃～４０℃の温度で制御された加熱マントル上に置いた。溶出溶媒の温度が３７℃（ｔ＝０）に達すると、錠剤と撹拌子との間に物理的な障壁を形成するステンレス鋼スクリーンを備えた溶解ビーカーに１つの錠剤を落とすことによって実験を開始した。試料は、様々な時点で使い捨てシリンジで採取し、ＨＰＬＣ分析のためにバイアルに移した。溶解は、指定された時間枠で溶解される活性物質のパーセンテージとして表される。試料は、様々な時点：ｔ＝０、５、１０、１５、３０、６０、９０、および１２０分で採取した。３つの製剤についての試験の結果を図１０に示す。

製剤試験の結果は、製剤Ａが最も高い溶解率を有し（４２％に達した）、それに製剤ＢおよびＣが続くことを示した。溶解率の順序は、乳化剤に対するＡＰＩ比の予想される効果と一致し、乳化剤対ＡＰＩ比が高いほど、溶解度が良好である。製剤Ａは、より良好な溶解率を示したが、ラットにおけるＰＫプロファイルを評価するために、３つの製剤Ａ、Ｂ、およびＣを選択した（それぞれ製剤番号９、１０、１１）。

それらの製剤の調製について、製剤番号９は１３．１３％のＶＣＥ－００４．８を含有し、製剤番号１０は１３．７５％のＶＣＥ－００４．８を含有し、製剤番号１１は１２．９３％のＶＣＥ－００４．８を含有したことが考慮された。水中の１５ｍｇ／ｍｌの懸濁液を調製した。

実施例１３：ナノ懸濁液
１０の異なるプロトタイプ水性ナノ懸濁液コンセプトを以下のように調製した：２５０ｍｇのＶＣＥ－００４．８を適切な容器に量り入れ、それに４．７５０ｇの安定剤溶液を添加した。均質な懸濁液が形成されるまで、磁気撹拌子を使用して各コンセプトを撹拌した。次に、各容器に、３０ｇのビーズ（ＺＹＰサイズ１ｍｍ）を添加して、その後、容器を封止し、８０ｒｐｍでローラーミル上に配置した。２日および５日後、各コンセプトの粒径分布（ＰＳＤ）をレーザー回折によって測定した。５日の粉砕後、すべてのコンセプトを採取し、１０ｍｇ／ｇに希釈して、粉砕容器およびビーズの十分なすすぎを確保した。すべての１０個のコンセプトを２５℃／６０％ＲＨ安定性条件に２週間配置し、その後、ＰＳＤを再度評価した。結果を表１４に示す。これらの結果から、安定剤として１％Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ ６０３＋０．１％ＳＬＳを含有するコンセプト２、および１％ＨＰＣ－ＳＳＬ＋０．１％ＳＬＳを有するコンセプト４は、これらの製剤コンセプトについて、得られたｄ１０－ｄ５０－ｄ９０粒径結果がすべて＜１μｍであるため、ＰＫ試験に考慮されると結論付けられる。

ナノ懸濁液コンセプト２およびコンセプト４を、ＰＫ供給のために選択し（それぞれ、製剤番号１２および１３）、したがって以下のように新たに調製した：５００ｍｇのＶＣＥ－００４．８を適切な容器に量り入れ、それに９．５ｇのそれぞれ安定剤を添加した。均質な懸濁液が形成されるまで、磁気撹拌子を使用して各コンセプトを撹拌した。次に、各容器に、３０ｇのビーズ（ＺＹＰサイズ１ｍｍ）を添加して、その後、容器を封止し、８０ｒｐｍでローラーミル上に配置した。２４時間および４５時間後、各コンセプトの粒径分布（ＰＳＤ）をレーザー回折によって測定した。４５時間の粉砕後、すべてのコンセプトを採取し、１０ｍｇ／ｇに希釈して、粉砕容器の十分なすすぎを確保した。用量を１０ｍｇ／ｇから４ｍｇ／ｇに調整した。したがって、各コンセプトの３つのバイアルを磁気撹拌によってプールし、その後、各製剤をそれぞれの安定剤で２．５倍に希釈した。

実施例１４：固体分散物
固体分散物形成の開発は、アモルファスＡＰＩの安定化のためのポリマーの選択で開始した。したがって、溶媒シフト法を使用して複数のポリマーをスクリーニングした（表１５）。

これらの実験は、ＤＭＳＯ中のＶＣＥ－００４．８の５ｍｇ／ｍＬ溶液に適用され、そのうち８０μＬを模擬腸液（ＳＩＦ）および模擬胃液（ＳＧＦ）で調製された４ｍＬポリマー溶液に添加した。その後、試料を連続的な撹拌下で２５℃でインキュベートし、０．５、１、２、および４時間後、アリコートを採取し、濾過し、ＨＰＬＣによって分析して、溶液中のＶＣＥ－００４．８濃度を決定した。結果を図１１（ＳＧＦ）および図１２（ＳＩＦ）に示す。

ＳＧＦでは、４時間後に約０．０３ｍｇ／ｍＬのＶＣＥ－００４．８の濃度を測定することができた、ＴＧＰＳ溶液を除いて、ほとんどのポリマーは、持続的な過飽和状態を維持することができなかった。しかしながら、ＳＩＦで実施される実験では、有望な抗沈殿特性を有するいくつかのポリマーを示した。一般に、すべてのＨＰＭＣ誘導体（そのままのＨＰＭＣを除く）は、０．５～１時間で高いＡＰＩ濃度（約６０μｇ／ｍＬ）を示す。さらに、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００およびＰＶＰ Ｋ３０も、少なくとも１時間の過飽和（約６０μｇ／ｍＬ）を維持する。したがって、これらのポリマーは、アモルファス固体分散物の調製において考慮されるべきである。

良好なアモルファス分散物の背景にある原理は、ＡＰＩ分子の移動度が低減し、核形成が予防されるように、ポリマーマトリックスにおけるＡＰＩの均質な分散物を調製することである。薬物負荷は、重要なパラメータであり、高い薬物負荷は、ＡＰＩの結晶化をもたらし得るが、低い薬物負荷は、薬物製品サイズに影響を与え得る。

アモルファス固体分散物スクリーニング（ＡＳＤ）は、１０、２５、および５０％の異なる薬物負荷で実施する。溶媒シフト法によって観察されるポリマー－ＡＰＩ相互作用に基づいて、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＭＧ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＨＧ、およびＰＶＰ Ｋ３０をさらなる調査のために選択した。均質な分散物は、凍結乾燥によって調製され、４０℃／７０％ＲＨ安定性条件に配置される。調製時（Ｔ０）ならびに２日後（Ｔ２Ｄ）および１４日後（Ｔ１４Ｄ）に、試料は、ＨＴ－ＸＲＰＤによって分析される。結果を図１３に示す。

ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＨＧ分散物は、４０℃／７５％ＲＨで少なくとも１４日間、１０％および２５％薬物負荷を安定させることができると結論付けられる。Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ－１００は、２日間で１０％薬物負荷のみ安定させることができる。ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＭＧおよびＰＶＰ Ｋ３０は、安定性試験中に安定化を示さない。

溶媒シフト結果およびアモルファス固体分散安定性スクリーニングの両方に基づいて、２つの最良の性能を発揮するポリマーは、ＨＰＭＣ ＡＳ ＨＧおよびＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００（製剤番号１４）である。しかしながら、胃での放出はほとんどない（またはまったくない）ことが望ましいが、近位の小腸での急速な放出を標的とし、ＨＰＭＣ ＡＳ ＨＧは６．８というかなり高いｐＨ値で溶解するが、ＬＧグレードはｐＨ５．５で既に溶解するため、ＨＰＭＣ ＡＳ ＨＧの代わりにＨＰＭＣ ＡＳ ＬＧ（製剤番号１５）を使用することが選択された。

選択された２つの固体分散物は、ＰｒｏＳｅｐＴ ４Ｍ８－ＴｒｉＸ装置でスプレー乾燥することによって調製した。製造前に、最適なスプレー乾燥条件は、最初にプラセボ材料のスプレー乾燥によって（すなわち、ＶＣＥ－００４．８なしで）決定した。各ポリマーに使用される最終設定を表１６に要約する。スプレー乾燥プロセスの終了後、固体分散物材料を真空オーブンにおいて２５℃および２０ｍｂａｒで１６時間乾燥させた。分散媒として、０．５％Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ｅ４Ｍ＋０．２％Ｔｗｅｅｎ２０を調製した。

実施例１５：ラットにおけるバイオアベイラビリティ評価
ＰＫ研究は、Ｊａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓから供給された約６週齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットおよび雄Ｂａｌｂ／Ｃ（Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｊ）マウスで実施した。部屋には、１２時間の明、１２時間の暗の制御されたサイクルを有する完全に人工的な照明があった。通常の条件を維持するように設計されたシステムによって空調した。各動物は、耳タグによって特定した。インビボ試験の前に、動物を一般的な健康および福祉について調査した。実験中、すべての動物は、食餌および水を自由に摂取した（自由）。標準的なプロセス、処理、および安楽死を行った。製剤あたりいくつかの時点を選択した（典型的には、ｉｖには５分、２０分、３０分、１時間、３時間、４時間、８時間、２４時間、および経口投与には３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１８時間、２４時間）。通常、時点あたり少なくとも３匹の動物を使用した。

試験製剤は、インビボ試験が（通常、製造後４～６日で）実施されるまで、暗所に４℃で保存した。Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１を含有する製剤を、投与前に、水浴中で３７℃～４０℃に温め、撹拌し（磁気撹拌）、光から保護した。製剤を動物に経口投与し、ＤＭＳＯに２ｍｇ／ｍＬで溶解し、１ｍＬ／ｋｇの体積で２～１０ｍｇ／Ｋｇの用量で投与されるＶＣＥ－００４．８の静脈内投与と比較した。マウスでは、経口投与のために選択された用量は、５ｇ／ｋｇの投与体積で２０ｍｇ／Ｋｇであった。ラットでは、選択された用量は、２０～５０ｍｇ／ｋｇであった。

採血について、所定の時間に、毛細管を用いて眼窩後洞において血液を収集した。時点あたり約０．５ｍＬを収集した。抗凝固剤としてリチウムヘパリンを使用した。正確なサンプリング時間は、各採血について記録した。血液試料を２５００ｒｐｍ、約１０℃で遠心分離し、次いで血漿を取り出し、ラベルを付けたポリプロピレンチューブに入れた。個別の血漿試料は、分析まで凍結保存（－２０℃±５℃）した。

血漿試料の分析では、１００μＬの血漿試料を採取し、３００μＬのアセトニトリルを添加した。タンパク質沈殿後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを使用して分析を実施した。分析段階について、物質ＶＣＥ－００４．８を適切な溶媒ＤＭＳＯで１ｍｇ／ｍＬで溶解した。分析試験のために、ＭＳ－ＭＳシステムへの直接注入後、分子および娘イオンを分子に選択した。分析方法は、アセトニトリルの添加によるタンパク質の沈殿、それに続くＣ１８カラムでのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析で構成された。予想される感度に応じて、血漿中のキャリブレーション曲線の作成には、少なくとも８つのキャリブレーション標準を使用した。対応する相関係数は、計算し、インビボ試験を継続するには０．７５よりも高くなければならなかった。試験されるキャリブレーション範囲は、１～２０００ｎｇ／ｍＬの血漿であった。

ＰＫパラメータの推定は、ＫＩＮＥＴＩＣＡ（登録商標）（バージョン４．３、Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＵＳＡ）を使用して実施した。以下のパラメータが推定された：最大血漿濃度（Ｃｍａｘ（ｎｇ／ｍＬ））、Ｃｍａｘに初めて到達する時間（Ｔｍａｘ（時））、投与から時間ｔでの最後の定量化可能な濃度までの血漿濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣｔ（ｎｇ／ｍＬ＊時））、および絶対バイオアベイラビリティ

ラットでは、選択された製剤で得られ、表１７に示されるＰＫパラメータは、トウモロコシ油およびＭａｉｓｉｎｅ ３５－１（０．４：４９．８：４９．８）を含むＶＣＥ－００４．８の製剤が最良のバイオアベイラビリティ結果をもたらしたことを示した。このバイオアベイラビリティは、表１８に示されるようにマウスにおいて確認された。同様の製剤（Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１の代わりにＭａｉｓｉｎｅ ＣＣを含む）を第Ｉ相臨床試験に選択し、ＥＨＰ－１０１液体製剤と名付けた。

実施例１６：非臨床経験
いくつかのインビトロ生物学的アッセイに基づいて、ＥＨＰ－１０１はＰＰＡＲγシグナル伝達の活性化因子であり、ＣＢ_２受容体についての機能的リガンドアゴニストであり、ＨＩＦ経路の活性化を調節する非反応性アミノキノイドであると前臨床的に結論付けられた。さらに、受容体スクリーニング研究は、ＶＣＥ－００４．８特異性を示し、ＣＢ１受容体についての検出可能な親和性はなく、向精神効果の欠如をさらに裏付けた。よって、初期薬理学研究は、２つの標準的な多発性硬化症（ＭＳ）マウスモデルを使用してＭＳの治療におけるＥＨＰ－１０１の活性を示すために実施した：
１）ヒト再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）を模倣する実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル、および
２）進行型のＭＳを模倣するタイラーマウス脳脊髄炎ウイルス誘発性脱髄性疾患モデル（ＴＭＥＶ）。ＥＨＰ－１０１は、腹腔内および経口投与の両方の場合で、これら２つのモデルにおいて持続的な活性を示している。

ブレオマイシンによって誘発される皮膚線維症のマウスモデルを使用して、全身性硬化症（ＳＳｃ）の治療におけるＥＨＰ－１０１の活性を示すために、一次薬理学研究も実施した。ＳＳｃは、血管および免疫学的異常を特徴とする病因不明の慢性多臓器自己免疫疾患である。数連の証拠は、内因性カンナビノイドシステムがＳＳｃの病態生理学において役割を果たし得ることを示している。デュアルＰＰＡＲγ／ＣＢ_２アゴニストが、ＨＩＦ経路の活性化と一緒に、ＳＳｃにおいて疾患修飾剤として強い潜在能力を有することを考慮して、ＥＨＰ－１０１を、それらの標的におけるその活性について調査した。

ＥＨＰ－１０１液体の薬物代謝および薬物動態（ＤＭＰＫ）ならびに安全性を評価するために、インビトロおよびインビボ安全性薬理学研究（心臓血管、呼吸器、およびＣＮＳ）、インビトロ代謝、血漿タンパク結合、インビトロおよびインビボ遺伝子毒性研究、ならびに齧歯類および非齧歯類種における最大２８日の期間の一般的な反復用量毒性研究を包含する研究は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ（ＩＣＨ）Ｍ３ガイドラインに従って実施されている。

ＥＡＥモデルは、ＶＣＥ－００４．８の前臨床有効性を示し、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、および２０ｍｇ／ｋｇの用量で非常に有意な治療効果を示した。ＶＣＥ－００４．８はまた、ＥＡＥ動物におけるミエリン構造を保存しながら、小膠細胞反応性および炎症細胞の浸潤を有意に低減した。ＶＣＥ－００４．８は、アクチメーター試験によって測定されるように、ＭＳのＴＭＥＶモデルにおいて臨床的重症度および神経病理を減弱させた。ＶＣＥ－００４．８による処理は、タイラーウイルスに感染したマウスにおける運動障害を改善した。ＶＣＥ－００４．８は、小膠細胞反応性および炎症細胞の浸潤を有意に低減し、ＴＭＥＶ感染マウスにおけるミエリン構造を保存する。ＶＣＥ－００４．８処理はまた、ＴＭＥＶマウスの脊髄における浸潤ＣＤ４^＋Ｔ細胞および免疫細胞の数を低減した。ＴＭＥＶマウスの脊髄に見られた激しい脱髄は、ＶＣＥ－００４．８による処理によって有意に低減した。ＴＭＥＶマウスにおける軸索組織崩壊は、ＶＣＥ－００４．８による処理によって予防されたことがわかった。

研究はまた、ＥＨＰ－１０１の活性が、インビボで小膠細胞活性化、軸索変性、および脱髄を予防するデュアルＰＰＡＲγ／ＣＢ_２リガンドアゴニストと一致していることを示すために行った。加えて、ＥＨＰ－１０１で実施されたインビトロ研究は、分子が小膠細胞、乏突起膠細胞、および内皮微小血管細胞株におけるＨＩＦ－１αおよびＨＩＦ－２αタンパク質の発現を安定化させることを示した。ＨＩＦ－１α安定化は、神経保護作用があり、髄鞘再生の可能性を有することが知られている、エリスロポエチン（ＥＰＯ）および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）Ａの放出を誘発した。

ＳＳｃに関連する線維症を予防し、血管形態を回復するＥＨＰ－１０１能力を、ＳＳｃの実験モデルにおいて評価した。ＥＨＰ－１０１の活性成分物質であるＶＣＥ－００４．８は、インビトロでＴＧＦβ誘発性Ｃｏｌ１Ａ２遺伝子転写およびコラーゲン合成を阻害した。さらに、ＶＣＥ－００４．８は、ＴＧＦβ媒介性筋線維芽細胞分化を阻害し、創傷治癒活性を損傷した。ＥＨＰ－１０１は、皮膚厚み、血管コラーゲン蓄積を低減し、マスト細胞脱顆粒および皮膚におけるマクロファージ浸潤を予防した。ＥＨＰ－１０１はまた、皮膚線維症に典型的な血管ＣＤ３１の低減した発現を予防した。加えて、皮膚生検のＲＮＡｓｅｑ分析は、炎症性および上皮間葉転換トランスクリプトミクスシグネチャーにおけるＥＨＰ－１０１の明らかな効果を示し、ＥＨＰ－１０１をＳＳｃの管理のための候補として認定した。

向精神効果および乱用の可能性
ＥＨＰ－１０１（すなわち、ＶＣＥ－００４．８）は、ＣＢ１受容体に結合して活性化しないため、鎮静およびカタレプシーを含む、向精神効果を誘発しない。現時点では、特定の乱用関連研究はない。乱用関連ＡＥは、この研究についての特に注目すべきＡＥ（ＡＥＳＩ）であり、研究全体を通して発生が監視されるであろう（セクション１０．４．１．１）。

いくつかの研究を実施し、ＶＣＥ－００４．８がカンナビノイドＣＢ１受容体について親和性を有しなかったことが示された。スクリーニング研究では、化合物が１０μＭ（４３３６ｎｇ／ｍＬ）の濃度でＣＢ１受容体について親和性を示さなかったことが示された。ＶＣＥ－００４．８の高い血漿タンパク質結合（＞９９％）および血漿中１％の保存遊離画分推定値を考慮すると、ＶＣＥ－００４．８は、少なくとも最大１ｍＭ（４３３６００ｎｇ／ｍＬ）の合計（非結合＋結合）血漿濃度で、インビボでの任意の臨床的に関連するＣＢ_１受容体親和性をもたらす可能性が非常に低い。この血漿濃度は、４週間の処理後にラットおよびイヌにおいて無毒性量（ＮＯＡＥＬ）で観察されたＣ_ｍａｘ値よりも約５０倍高い。したがって、臨床状況では、ＣＢ１受容体に対する臨床的に関連する効果は予想されない。さらに、合成における唯一の中間体は、ＶＣＥ－００４（ＨＵ３３１とも呼ばれる）であり、これはＣＢ１に結合するか、またはマウスにおいて精神活性効果を誘発することは報告されていない。

実施例１７：ＥＨＰ－１０１治療薬
ＭＳの実験モデルにおけるＥＨＰ－１０１の治療可能性。ＥＨＰ－１０１は、神経保護も提供し、ＨＩＦ経路を通した髄鞘再生を潜在的に誘発しながら、ＰＰＡＲγ／ＣＢ_２受容体に作用することによって神経炎症を低減することが示された。ＥＨＰ－１０１処理は、ＭＳの実験モデルにおける疾患の臨床症状の発生率および重症度の両方を低減した。これらのデータを総合すると、ＥＨＰ－１０１は、潜在的に疾患修飾性であることによって、ＭＳ患者に臨床的利益を提供し得ることが示される。

加えて、ＳＳｃにおけるＥＨＰ－１０１（ＶＣＥ－００４．８）の治療可能性も示され、ブレオマイシンマウスモデルにおける皮膚炎症、血管損傷、および皮膚線維症を軽減する有効性の証拠を提供した。

実施例１８：ＭＳのマウスモデルにおける炎症および髄鞘再生に対するＥＨＰ－１０１の効果
ＭＳは、疾患の異なる段階で優勢な炎症および神経変性プロセスの組み合わせを特徴とする。よって、免疫抑制は、炎症段階に対処するためのゴールドスタンダードであり、喪失された機能を回復するために新規髄鞘再生療法が追求されている。ＶＣＥ－００４－８は、ＨＩＦ経路も活性化するデュアルＰＰＡＲγ／ＣＢ２リガンドアゴニストとして作用する多標的化合成カンナビノイド誘導体である。ＶＣＥ－００４．８は、ＭＳの２つの異なるモデル（ＥＡＥおよびタイラーマウス脳炎ウイルス誘発性脱髄性疾患）において神経炎症を予防することが示された。経口ＥＨＰ－１０１（ＶＣＥ－００４．８の脂質製剤）は、ＥＡＥモデルにおいて神経炎症の予防を伴う用量依存的有効性プロファイルを示した（図１４）。

ＥＡＥでは、ＲＮＡ－ＳｅｑおよびｑＰＣＲによるトランスクリプトミクス分析は、ＥＨＰ－１０１が脊髄におけるＭＳ病態生理に密接に関連する多数の遺伝子の発現を予防したことを示した。加えて、ＥＨＰ－１０１は、ＥＡＥにおいて下方制御されたテニューリン４（Ｔｅｎｍ４）などの、乏突起膠細胞機能に関連するいくつかの遺伝子の発現を正常化した。免疫組織化学分析は、脊髄におけるＴｅｎｍ４発現の回復を確認した。共焦点分析は、ＥＨＰ－１０１処理が、脊髄および脳の両方において小膠細胞活性化（Ｉｂａ１染色）、および脱髄（ＭＢＰ染色）を予防したことを明らかにした。さらに、ＥＡＥは、乏突起膠細胞分化のマーカーである脳梁におけるＯｌｉｇ２の発現の喪失に関連し、これはＥＨＰ－１０１処理によって回復した。加えて、ＥＨＰ－１０１は、脳における成熟乏突起膠細胞のマーカーとして使用される細胞質性アイソエンザイムである、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼパイ（ＧＳＴｐｉ）の発現を増強した。これらのデータは、ＭＳマウスモデルにおいて脱髄を予防するＥＨＰ－１０１の可能性を示す（図１５～図１８）。

ＥＨＰ－１０１の可能性をさらに評価するために、脱髄のクプリゾンモデルにおけるＥＨＰ－１０１の効果を調査した。マウスに０．２％クプリゾンを含有する食餌を６週間与え、次いで動物を通常の食餌に切り替え、ＥＨＰ－１０１（１０および２０ｍｇ／ｋｇ）で２週間処理したか、または処理しなかった（対照）。クプリゾンは、クリオミエリン染色およびＭＰＢ発現によって測定された脳におけるミエリンの明らかな喪失を誘発した。脱髄からの自発的な回復は、１週間および２週間後にはごくわずかであったが、髄鞘再生は、ＥＨＰ－１０１処理によって有意に加速された。さらに、ＥＨＰ－１０１はまた、それぞれ、Ｉｂａ１およびＧＦＡＰ染色によって検出されたクプリゾン誘発性小膠細胞活性化およびアストログリオーシスを予防した（図１９～図２０）。

結論として、ＥＨＰ－１０１は、異なる形態のＭＳおよび他の脱髄性疾患などの、さまざまな疾患および障害の治療のための考えられる薬物候補を表す。

実施例１９：ＥＨＰ－１０１および髄鞘再生
実施例１９の方法
化合物
ＥＨＰ－１０１は、ＶＣＥ－００４．８［（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（ベンジルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）［１，１’ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン）］の脂質ベース製剤である。ＥＨＰ－１０１中のＶＣＥ－００４．８のクロマトグラフィー純度は、９７．６％であった。

クプリゾン誘発性脱髄モデル
脱髄を誘発するために、８週齢Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスに０．２％クプリゾンＴＤ．１４０８００食餌（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）を６週間与えた。対照群（脱髄なし）には、対照マウスＴＤ．００２１７食餌（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）を全期間にわたって与えた。髄鞘再生に対する効果を研究するために、ＥＨＰ－１０１を６週目から２０ｍｇ／ｋｇで強制経口投与によって連日投与した。比較のために、脱髄後のクプリゾン対照群の動物は、強制経口投与によって同体積のビヒクルを受けた。髄鞘再生に対するＥＨＰ－１０１の動的効果を研究するために、各群の動物をさらなる分析のために処理後６、７（６＋１Ｗ）、８（６＋２Ｗ）週に犠死させた。

組織処理
マウスをケタミン－キシラジン溶液のｉ．ｐ．投与によって麻酔し、それらを０．９％生理食塩水で経心腔的に灌流した。脳を固定し、凍結保護し、さらなる分析のために－８０℃で凍結した。

免疫組織化学分析
抗原回収のために、脳切片をクエン酸ナトリウム緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６．０）またはＴｒｉｓ－ＥＤＴＡ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ Ｂａｓｅ、１ｍＭ ＥＤＴＡ ０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ９．０）（Ｓｉｇｍａ－ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）において１０分間沸騰させた。切片をＰＢＳで３回洗浄した。非特異的抗体結合部位は、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ、ＰＢＳ中）で室温で１時間ブロックした。次に、切片を、３％ＢＳＡを含むＰＢＳで希釈された以下の一次抗体と４℃で一晩インキュベートした：小膠細胞はウサギ抗Ｉｂａ－１抗体（１：１，０００、Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｕｒｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、Ｏｓａｋａ、Ｊａｐａｎ）で染色し、星状細胞はマウス抗ＧＦＡＰ抗体（１：５００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）で染色し、ミエリン塩基性タンパク質はウサギ抗ミエリン塩基性タンパク質抗体（１：１０００、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）でマークした。ＰＢＳで十分に洗浄した後、スライドを二次抗体と暗所において室温で１時間インキュベートした。免疫反応は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍｍ、ＭＡ、ＵＳＡから入手した抗ウサギＴｅｘａｓ Ｒｅｄ（１：１００）、抗マウス／ウサギＡｌｅｘａ ４８８（１：１００）を使用して明らかにした。次いで、スライドは、ＤＡＰＩを含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ Ａｎｔｉｆａｄｅ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、Ｃａ、ＵＳＡ）を使用してマウントした。ミエリン完全性は、Ｈｉｔｏ ＣｒｙｏＭｙｅｌｉｎＳｔａｉｎ（商標）キット（金リン酸塩複合体ミエリン染色キット）を製造業者の推奨事項（Ｈｉｔｏｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ．、Ｋｉｎｇｓｐｏｒｔ、ＴＮ、ＵＳＡ）に従って使用して分析した。すべての画像は、２０×／０．８ Ｐｌａｎ－Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔレンズを備えたスペクトル共焦点レーザー走査顕微鏡ＬＳＭ７１０（Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して取得し、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ｒｓｂｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を使用して９～１５のランダムに選択された視野で定量化した。

データ分析
すべてのインビボデータは、平均±ＳＥＭとして表される。一元配置分散分析に続いて、パラメトリック分析のためのテューキーの事後検定、またはノンパラメトリック分析検定の場合はクラスカル・ウォリス事後検定を使用して、統計的有意性を決定した。有意水準は、ｐ＜０．０５に設定した。統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８．００（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して実施した。

実施例１９の結果：ＥＨＰ－１０１はクプリゾンチャレンジマウスモデルにおいて髄鞘再生を加速させる
ＣＰＺ誘発性脱髄モデル（図１９Ａ）においてミエリン損傷に対するＥＨＰ－１０１の効果を評価するために、６週間のＣＰＺ ０．２％食餌および２週間のＥＨＰ－１０１処理後の動物からの脳冠状切片を分析した。このモデルでは、ＥＨＰ－１０１処理は、ＣＰＺ食餌除去後に開始し、髄鞘再生に対する製剤の効果をより直接的に評価した。まず、ＭＢＰ（皮質）の評価は、免疫組織化学およびクリオミエリン（脳梁）（それぞれ、図１９Ｃおよび図１９Ｂ）染色の両方で決定し、染色された調製物において、ミエリンは金リン酸塩複合体ミエリン染色キットを使用して染色され、ミエリンは真っ黒である。脱髄からの自発的な回復は、１週間および２週間後には取るに足らなかったが、髄鞘再生は、ＥＨＰ－１０１処理によって有意に加速された。興味深いことに、両方の研究は、染色の場合には脳梁（図１９Ｄ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ、ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照、ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６＋１Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋１Ｗ、ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６＋２Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋２Ｗ）および免疫組織化学研究全体を通して皮質（図１９Ｅ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ、ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照、ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６＋１Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋１Ｗ）においてＥＨＰ－１０１が髄鞘再生を増強することを示した。さらに、脳梁におけるＩｂａ－１およびＧＦＡＰの免疫蛍光染色を使用することによって、神経炎症関連神経膠活性化に対するＥＨＰ－１０１の効果も調査した。対照マウスでは、小膠細胞および星状細胞が低レベルで検出された。ＣＰＺに曝露されたマウスは、小膠細胞および星状細胞肥大を示し、これはＥＨＰ－１０１治療によって減弱された（図２０Ａおよび図２０Ｂ）。定量的評価は、ＣＰＺ中毒時の脳梁におけるＩｂａ１＋およびＧＦＡＰ＋細胞の数の有意な増加も示した。ミクログリオーシスおよび星状細胞再活性化は、ＥＨＰ－１０１処理の１週間後に改善された（図２０Ｃ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ、ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照、ｐ＝０．００１７ ＣＰＺ６＋１Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋１Ｗ、図２０Ｄ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ対対照、ｐ＝０．００１７ ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照）。

実施例２０：多発性硬化症のマウスモデルにおける炎症および髄鞘再生に対するＥＨＰ－１０１の効果
ＭＳは、ＣＮＳに影響を与える自己免疫疾患であり、神経炎症、脱髄、および軸索損傷を含む病理学的変化を特徴とする。損傷した髄鞘および軸索の自発的修復は、古典的な再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）の寛解期間中に説明されており、脱髄した軸索は、再生された髄鞘によって包み直され、よって軸索機能障害を改善し得る。この意味で、寛解期間は、髄鞘再生の期間ともみなされ、これは、炎症を予防し、髄鞘再生を増強する薬物でのＲＲＭＳ患者の治療のための重要な時点になり得るため、重要である。

内因性カンナビノイドシステム（ＥＣＳ）の創薬可能な標的で作用するカンナビノイドを含む小分子は、ＭＳを含むＣＮＳ病理の管理のために調査されている。この意味で、数連の証拠は、ＭＳにおける乏突起膠細胞機能および髄鞘再生活性におけるＥＣＳの役割を示した。ＥＣＳは、Ｇタンパク質共役受容体ＣＢ１およびＣＢ２、内因性カンナビノイド、ならびにそれらの合成および異化を制御する酵素によって構成される。加えて、異なる性質のカンナビノイドは、ＴＲＰファミリーのイオンチャネル型受容体およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）などの核内受容体も標的とする。ＣＢ１受容体は、主にＣＮＳにおいて神経終末で発現し、神経伝達物質放出および精神活性プロセスを制御する。対照的に、ＣＢ２受容体は、主に末梢免疫系に位置し、ＣＮＳにおける活性化小膠細胞に対する神経炎症中に存在する。ＣＢ２受容体アゴニストを開発するための重要な考慮事項には、精神活性効果の不在、持続的な抗炎症活性、組織／細胞保護、心血管系有害効果の欠如、およびＭＳを含む神経炎症のいくつかの疾患モデルにおける有効性が含まれる。

ＰＰＡＲは、脂質およびグルコースの恒常性ならびに脂肪細胞分化において十分に同定された制御的役割を有するリガンド活性化転写因子の核内ホルモン受容体スーパーファミリーのメンバーである。脂肪細胞および肝細胞に加えて、ＰＰＡＲγは、異なるＣＮＳ細胞および免疫細胞において発現することが示されている。さらに、ＰＰＡＲγは、免疫応答の制御における重要な因子として記載されている。この意味で、ＰＰＡＲγ活性化は、星状細胞およびマクロファージ／小膠細胞における炎症性サイトカインの発現を抑制することが示されている。さらに、ＰＰＡＲγは、神経幹細胞からの乏突起膠細胞分化を刺激し、インビトロで乏突起膠細胞前駆細胞の分化を促進および加速し、抗酸化防御をさらに増加させ、培養された乏突起膠細胞の脂質産生および終末分化を増加させ、よって、髄鞘再生のメディエーターとしてのＭＳにおけるＰＰＡＲγの追加の可能な保護的役割を示した。ＰＰＡＲγを含む、ＰＰＡＲの神経保護効果はまた、神経変性の様々な実験的パラダイムにおいてインビトロで広く文書化されており、ＭＳにおけるその潜在的な治療の展望を広げている。

ＭＳのためのほとんど現在の療法は、悪化した免疫応答の調節に向けられているが、軸索髄鞘再生を目的とした新規療法が緊急に必要とされている。これを達成するための新規近似は、低酸素症プレコンディショニングプロセスであり、これは、軽度酸素枯渇によって誘発され、ＭＳを含む、多数の神経障害において有益である。重度または軽度低酸素症への細胞順応は、非常に速く、低酸素誘導因子－１α（ＨＩＦ）の活性化を伴い、その活性化は、ＭＳの炎症期および寛解期において役割を果たし得る。加えて、ＨＩＦ経路の活性化が神経保護およびおそらく髄鞘再生にも関連し得ることを示す証拠がある。例えば、その遺伝子がＨＩＦ活性化に依存しているエリスロポエチン（ＥＰＯ）は、ＭＳの異なる動物モデルにおいて神経保護作用がある。

ＶＣＥ－００４．８は、ＨＩＦ経路も活性化するＰＰＡＲγおよびＣＢ２のデュアルアゴニストとして作用する有望なカンナビジオール誘導体であることが以前に示された。実際、ＶＣＥ－００４．８は、ＥＡＥおよびタイラーウイルス誘発性脳症などのＭＳの２つの異なるマウスモデルにおいて神経炎症および脱髄を予防した。ＥＨＰ－１０１は、全身性硬化症のマウスモデルにおいて有効性を示したＶＣＥ－００４．８の経口製剤である。より重要なことに、ＥＨＰ－１０１は、第Ｉ相臨床試験（ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌ．ｇｏｖ：ＮＣＴ０３７４５００１）を完了し、ＳＳｃおよびＭＳ患者における第ＩＩ相試験の開始が計画される。本例は、ＥＡＥにおける神経炎症および脱髄の予防において、および脱髄のクプリゾンモデルにおいて髄鞘再生を増強するための、ＥＨＰ－１０１の有効性を示す。

実施例２０の方法
化合物
ＥＨＰ－１０１は、ＶＣＥ－００４．８［（１’Ｒ，６’Ｒ）－３－（ベンジルアミン）－６－ヒドロキシ－３’－メチル－４－ペンチル－６’－（プロプ－１－エン－２－イル）［１，１’ビ（シクロヘキサン）］－２’，３，６－トリエン－２，５－ジオン）］の脂質ベース製剤である。ＥＨＰ－１０１中のＶＣＥ－００４．８のクロマトグラフィー純度は、９７．６％であった。

動物
すべての実験は、ＥＵおよび政府規制に厳密に従って実施した。動物の取り扱いは、欧州連合ガイドライン８６／６０９／ＥＥＣによって設定された動物飼育のガイドラインに従って実施し、Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ Ｃａｊａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＳＩＣ、Ｍａｄｒｉｄ）およびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｒｄｏｂａ（ＵＣＯ、Ｃｏｒｄｏｂａ、Ｓｐａｉｎ）は、この研究において記載されるすべての手順を承認した（Ｃａｊａｌ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＥＡＥのプロトコル番号：９６ ２０１３／０３ ＣＥＥＡ－ＩＣおよびＵＣＯのクプリゾンモデルのプロトコル番号：２０１８ＰＩ／０２（ＵＣＯ）。苦痛を最小限に抑え、動物福祉を確保するために、福祉支援および臨床状態、ならびにエンドポイント基準を改善するための手段を確立した。簡潔には、食物摂取および水分補給を容易にするために、動物が臨床的兆候を示し始めると、湿った食物ペレットをベッドケージに置く。ＥＡＥモデルについて、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＨａｒｌａｎ（Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）から購入し、クプリゾンモデルの場合、雄Ｃ５６ＢＬ／６マウスをＪａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓ（Ｌｅ Ｇｅｎｅｓｔ－Ｓａｉｎｔ－Ｉｓｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）から購入した。すべての動物は、以下の制御された条件：１２時間明／暗サイクル、標準的な食物および水の自由摂取での温度２０℃（±２℃）および４０～５０％相対湿度下の動物施設に収容した。

ＥＡＥの誘導および評価
ＥＡＥは、不完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ、Ｓｉｇｍａ）との１：１混合物中のＭＯＧ３５－５５（３００μｇ：ペプチド合成切片、ＣＢＭ、ＣＳＩＣ、Ｍａｄｒｉｄ、Ｓｐａｉｎ）および２００μｇのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｈ３７Ｒａ Ｄｉｆｃｏ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）による皮下免疫化により、６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６雌マウスに誘導した。同日および２日後、マウスに０．１ｍＬのＰＢＳ中の２００ｎｇの百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ）を腹腔内注射した。対照動物（ＣＦＡ）は、ＭＯＧを含まない同じエマルジョンが接種され、百日咳毒素を受けなかった。処理は、動物が疾患の最初の症状を示した免疫後８日目に開始し、その後２１日間にわたる連日経口ＥＨＰ－１０１（１、５、１０、および２０ｍｇ／ｋｇ）で構成した。ＥＡＥの臨床的兆候についてマウスを連日調査し、疾患スコアを以下のように測定した：０、疾患なし、１、四肢尾、２、四肢尾および後肢虚弱、３、後肢麻痺、４、後肢および前肢麻痺、５、瀕死および死亡。さらなる分析のために、２８日目にすべての動物を犠死させた。

クプリゾン誘発性脱髄
脱髄を誘発するために、８週齢Ｃ５７ＢＬ／６雄マウスに０．２％クプリゾンＴＤ．１４０８００食餌（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）を６週間与えた。対照群（脱髄なし）には、対照マウスＴＤ．００２１７食餌（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）を全期間にわたって与えた。髄鞘再生に対する効果を研究するために、ＥＨＰ－１０１を６週目から２０ｍｇ／ｋｇで強制経口投与によって連日投与した。比較のために、クプリゾン対照群（最大脱髄）の動物は、強制経口投与によって同体積のビヒクルを受けた。髄鞘再生に対するＥＨＰ－１０１の動的効果を研究するために、各群の動物をさらなる分析のために６、７（６＋１Ｗ）、８（６＋２Ｗ）週に犠死させた。

組織処理
マウスをケタミン－キシラジン溶液のｉ．ｐ．投与によって麻酔し、それらを０．９％生理食塩水で経心腔的に灌流した。脊髄は、生理食塩水での押出によって得た。脳および頸部脊髄を直ちに凍結し、ＲＴ－ＰＣＲ分析のために－８０℃で保ち、残った脳および脊髄を０．１ＭのＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドで固定し、０．１ＭのＰＢＳで洗浄し、０．１ＭのＰＢＳ中のスクロースの１５％、次いで３０％溶液で凍結保護し、－８０℃で凍結した。次いで、自由浮動脳および胸髄切片（厚さ５０μｍ：Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ ＣＭ１９００クライオスタット、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）を免疫組織化学または免疫蛍光のために処理した。クプリゾンモデルの場合、脳全体を固定し、凍結保護し、さらなる分析のために－８０℃で凍結した。

免疫組織化学分析
ＩＨＣ分析のために、自由浮動胸髄（５０μｍ）切片を０．１ＭのＰＢで洗浄した。内因性ペルオキシダーゼ活性を、メタノール中の３．３％過酸化水素で阻害した。切片を２．５％正常ウマ血清でブロックし、次いでウサギ抗テニューリン４抗体含むブロッキング緩衝液（１：５０：Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、Ｃｏｌｏｒａｄｏ、ＵＳＡ）において４℃で一晩インキュベートした。スライドをＩｍｍＰＲＥＳＳ試薬（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、Ｃａ、ＵＳＡ）とインキュベートし、次いでジアミノベンジジンクロモゲン（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で発色させた。試料は、Ｌｅｉｃａ ＤＦＣ４２０ｃカメラを使用して撮影、デジタル化し、Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアを使用して分析した。ミエリン完全性は、Ｈｉｔｏ ＣｒｙｏＭｙｅｌｉｎＳｔａｉｎ（商標）キット（金リン酸塩複合体ミエリン染色キット）を製造業者の推奨事項（Ｈｉｔｏｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ．、Ｋｉｎｇｓｐｏｒｔ、ＴＮ、ＵＳＡ）に従って使用して分析した。

共焦点顕微鏡分析
抗原回収のために、脊髄または脳切片をクエン酸ナトリウム緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６．０）またはＴｒｉｓ－ＥＤＴＡ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ Ｂａｓｅ、１ｍＭ ＥＤＴＡ ０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ９．０）（Ｓｉｇｍａ－ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）において１０分間沸騰させた。切片をＰＢＳで３回洗浄した。非特異的抗体結合部位は、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ、ＰＢＳ中）で室温で１時間ブロックした。次に、切片を、３％ＢＳＡを含むＰＢＳで希釈された以下の一次抗体と４℃で一晩インキュベートした：小膠細胞はウサギ抗Ｉｂａ－１抗体（１：１，０００、Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｕｒｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、Ｏｓａｋａ、Ｊａｐａｎ）で染色し、星状細胞はマウス抗ＧＦＡＰ抗体（１：５００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）で染色し、ミエリン塩基性タンパク質はウサギ抗ミエリン塩基性タンパク質抗体（１：１０００、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）でマークし、乏突起膠細胞はマウス抗Ｏｌｉｇ２（１：１００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）でマークし、ウサギ抗ＧＳＴＰｉ（１：２５０、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）軸索損傷はマウス抗ニューロフィラメントＨ（ＮＦ－Ｈ）非リン酸化抗体（ＳＭＩ－３２）（１：５０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）で決定した。ＰＢＳで十分に洗浄した後、スライドを二次抗体と暗所において室温で１時間インキュベートした。免疫反応は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍｍ、ＭＡ、ＵＳＡから入手した抗ウサギＴｅｘａｓ Ｒｅｄ（１：１００）、抗マウス／ウサギＡｌｅｘａ ４８８（１：１００）を使用して明らかにした。次いで、スライドは、ＤＡＰＩを含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ Ａｎｔｉｆａｄｅ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、Ｃａ、ＵＳＡ）を使用してマウントした。すべての画像は、２０×／０．８ Ｐｌａｎ－Ａｐｏｃｈｒｏｍａｔレンズを備えたスペクトル共焦点レーザー走査顕微鏡ＬＳＭ７１０（Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して取得し、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ｒｓｂｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を使用して９～１５のランダムに選択された視野で定量化した。

ＲＮＡ－Ｓｅｑおよびバイオインフォマティクス分析
トータルＲＮＡは、ＱＩＡｚｏｌ溶解試薬（Ｑｉａｇｅｎ、Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して脊髄組織から単離し、ＲＮｅａｓｙ Ｌｉｐｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）で精製した。次いで、試料をＴｒｕＳｅｑ Ｓｔｒａｎｄｅｄ ｍＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ（Ｃａｔ．Ｎｏ．ＲＳ－１２２－２１０１、Ｉｌｌｕｍｉｎａ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）でのポリ－Ａ選択を使用した高スループット配列決定のために処理した。簡単には、各試料からの１μｇのトータルＲＮＡを使用してｃＤＮＡライブラリーを構築し、続いてＩｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ２５００システム上でシングルエンド５０ｂｐリードおよび試料あたり約４０００万リードでの配列決定を行った（群あたりｎ＝３）。ＦＡＳＴＱファイルは、Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ（ｖ０．３６）で前処理し、ＨＩＳＡＴ２（ｖ２．１．０）を使用してマウスゲノムアセンブリｍｍ１０にアラインした。次いで、ｍｍ１０ゲノムアセンブリの固有ＲｅｆＳｅｑアノテーションを使用してｆｅａｔｕｒｅＣｏｕｎｔｓ（ｖ１．６．１）で遺伝子マトリックスあたりのカウントを取得し、ＤＥＳｅｑ２（ｖ１．２０．０）を使用して差次的発現分析を行って、すべての試料にかけて１５カウント未満を有する遺伝子を除外した。機能的過剰提示分析は、ＥｎｒｉｃｈＲおよびｃｌｕｓｔｅｒＰｒｏｆｉｌｅｒを使用して実施した。すべてのＰ値は、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ ａｎｄ Ｈｏｃｈｂｅｒｇアプローチを使用して、偽発見率（ＦＤＲ）を制御するように調整した。ＲＮＡ－ｓｅｑデータは、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｍｎｉｂｕｓデータバンク（アクセッション番号ＧＳＥ１３１８５４）に寄託されている。

定量的逆転写酵素－ＰＣＲ
トータルＲＮＡ（１μｇ）は、ｉＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して逆転写し、ｃＤＮＡは、ｉＱＴＭ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）およびＣＦＸ９６リアルタイムＰＣＲ検出システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用したリアルタイムＰＣＲによって分析した。ＧＡＰＤＨ遺伝子を使用して、各試料におけるｍＲＮＡ発現を標準化した。遺伝子発現は、２－ΔΔＣｔ法を使用して定量化し、対照に対する相対的発現のパーセンテージを表した。この研究で使用されるプライマーを図２１に示す。

ニューロフィラメント、ライトポリペプチド（ＮＥＦＬ）の決定
全身麻酔下で血液試料を採取し、リチウム－ヘパリン血漿を収集した。試料を収集の３０分以内に２０００×ｇで２０分間遠心分離し、ニューロフィラメントライトポリペプチド（ＮＥＦＬ）の循環レベルを、ニューロフィラメントライトポリペプチド（ＮＥＦＬ）用の酵素結合免疫吸着アッセイキット（Ｃｌｏｕｄ Ｃｌｏｎｅ Ｃｏｒｐ．／ＵＳＣＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）で製造業者の指示に従って定量化した。値は、対照群に対して正規化し、群あたり４～６匹の動物の平均±ＳＥＭに対応する。

データ分析
すべてのインビボデータは、平均±ＳＥＭとして表される。一元配置分散分析に続いて、パラメトリック分析のためのテューキーの事後検定、またはノンパラメトリック分析検定の場合はクラスカル・ウォリス事後検定を使用して、統計的有意性を決定した。有意水準は、ｐ＜０．０５に設定した。統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８．００（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して実施した。

実施例２０の結果
ＥＨＰ－１０１はＥＡＥにおいて臨床的重症度および神経炎症を軽減する
ＭＳにおけるＥＨＰ－１０１の有効性は、ＥＡＥにおいて最初に評価され、マウスがｐ．ｉ．（免疫後）８日目にＥＨＰ－１０１の漸増用量を受けたため、疾患の初期段階で処理を実施した。 ＭＯＧ３５－５５での皮下免疫化は、ビヒクル単独を受けたすべてのマウスにおいてＥＡＥを誘発した。すべてのビヒクル処理マウスは、疾患を発症し、ｐ．ｉ．１６日目までにピークに達し、ｐ．ｉ．２８日目で維持された。対照的に、動物のスコアは、試験されたすべての用量でＥＨＰ－１０１の治療有効性を示し、より高用量（２０ｍｇ／ｋｇ）では症状を完全に予防することができた（図１５Ａ ｐ＝０．０００２ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、ｐ＝０．００４６ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ １０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、ｐ＝０．００６８ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ５ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）。図１５Ａからの臨床スコアデータを使用して曲線下面積を決定し、図１５Ｂ（ｐ＜０．０００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ １／５／１０／２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）では、ＥＨＰ－１０１が用量依存的に症候を改善したことが示される。

ＥＨＰ－１０１がＥＡＥにおいて神経炎症を標的化することができるかを決定するために、脊髄においてミクログリオーシスおよびアストログリオーシスを評価した。組織病理学的分析は、Ｉｂａ－１およびＧＦＡＰの両方の染色によって証明されたＥＡＥマウスの脊髄における広範な小膠細胞／マクロファージ活性化（図１５Ｃ～図１５Ｆ ｐ＝０．０００３ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．０００６ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）および星状細胞活性化（図１５Ｃ～図１５Ｅ、図１５Ｇ ｐ＜０．０００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．００５１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）がＥＨＰ－１０１によって大幅に低減したことを示した。ＭＳ病理は、脊髄および脳の両方のレベルでのＣＮＳにおける限局性脱髄病変を特徴とする。したがって、脱髄の程度を決定するために、ミエリンをＭＢＰ免疫標識によって評価した。明確な脱髄は、ＥＡＥマウスの脊髄で見られ、ＥＨＰ－１０１処理によって有意に予防された（図１５Ｃ～図１５Ｅ、図１５Ｈ ｐ＝０．０００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＜０．０００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル）。

大脳皮質脱髄および脳梁病理は、ＭＳの広く認識された特徴である。加えて、大脳皮質は、半球間伝達において中心的な役割を果たしており、ＭＳ患者における脳梁萎縮は、障害状態と相関することが示されている。したがって、これらの構造がＥＡＥマウスでも影響を受け得るかも調査された。炎症性病変の増加は、ＥＡＥ前脳全体に見られた（図１６Ａ～図１６Ｄ）。具体的には、ＥＡＥマウスの脳梁で小膠細胞反応性が増加し、ＥＨＰ－１０１での処理がミクログリオーシスプロセスを元に戻したことが観察された（図１６Ｅ ｐ＝０．０００２ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．０３９５ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）。さらに、ＥＡＥの影響を受けたマウスの脳切片もＭＢＰ反応性の分布について分析された。ＭＢＰ免疫反応性は、大脳皮質で有意に低減したようであり（図１６Ｆ ｐ＝０．０１５９ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．００２４ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）、このミエリン発現の喪失は、ＥＨＰ－１０１処理によって強く元に戻された。さらに、ＥＡＥは、乏突起膠細胞分化のマーカーである脳梁におけるＯｌｉｇ２の発現の喪失に関連しており、これはＥＨＰ－１０１処理によって回復した（図１６Ｇ ｐ＜０．０００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．０００８ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）。加えて、ＥＨＰ－１０１は、脳における成熟乏突起膠細胞のマーカーとして使用される細胞基質アイソエンザイムであるグルタチオンＳ－トランスフェラーゼパイ（ＧＳＴｐｉ）の発現を増強した（図１６Ｈ ｐ＝０．０２２２ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）。これらのデータは、ＭＳマウスモデルにおける脱髄を予防するＥＨＰ－１０１の可能性を示す。

ＥＨＰ－１０１は脊髄でのＥＡＥトランスクリプトミクスシグネチャーを正常化する
ＥＨＰ－１０１処理によって生成される全体的な発現変化を評価するために、マウスからの脊髄のＲＮＡ－Ｓｅｑ分析を、以下の条件：対照、ＥＡＥ、およびＥＡＥとＥＨＰ－１０１処理（２０ｍｇ／ｋｇ）で実施した。３つの生物学的複製の配列決定データを各実験群について得た。次いで、トランスクリプトミクスプロファイルを異なる条件間で比較して、処理の有無にかかわらず、モデルで発生する変化についての最初の洞察を得た。予想通り、ＥＨＰ－１０１で処理された群と比較して、ＥＡＥマウスでは大きさおよび重要性の両方で、多くの変化が見られた（図１７Ａ）。次いで、生物学的レベルでこれらの変化を評価するために、ＥＡＥ対対照およびＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ比較で調整されたＰ＜０．０５および絶対倍率変化＞２のカットオフを超えた遺伝子を使用して過剰提示分析を実施した。より重要な富化は、ＥＡＥによる上方制御された遺伝子および処理による下方制御された遺伝子の群で見られた。「好中球媒介性免疫」、「炎症反応」、または「サイトカイン媒介性シグナル伝達経路」などの用語が出現した、これらの２つの群間で補完的シグネチャーが観察され、脊髄でのＥＨＰ－１０１処理の抗炎症効果を強調した（図１７Ｂ）。図１７Ｃのヒートマップは、ＥＡＥによって誘導され、ＥＨＰ－１０１によって下方制御される「サイトカイン媒介性シグナル伝達経路」からの遺伝子を表す。さらに、脊髄におけるＥＨＰ－１０１のこの抗炎症効果を確認するために、Ｉｌ６、Ｔｉｍｐ１、Ｖｃａｍ、Ｉｌ１ｂ、Ｃｃｌ４、およびＣｃｌ２などのいくつかの遺伝子のＲＴ－ＰＣＲによる遺伝子発現を決定した。図１７Ｅは、ＥＨＰ－１０１処理がＥＡＥマウスにおける上方制御されたこれらの遺伝子の発現を下方制御したことを示し（Ｉｌ６：ｐ＝０．０３６０ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．０４５１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、Ｔｉｍｐ１：ｐ＝＜０．０００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．０００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、ＶＣＡＭ：ｐ＝０．００５８ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．０３８１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、ＩＬ１ｂ：ｐ＝０．００１８ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．００２７ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、Ｃｃｌ４：ｐ＝＜０．０００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝＜０．０００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、Ｃｃｌ２：ｐ＝０．０００３ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．００５４ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ＋ビヒクル）、よってＲＮＡ－Ｓｅｑ分析で見られる結果を検証する。

次に、炎症誘発性遺伝子によって示されるパターンとは反対の方向の変化を調査するために、第２の分析を実施した。よって、下方制御された遺伝子は、ＥＡＥ対対照比較で選択され、ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１対ＥＡＥ比較で上方制御された。遺伝子の両方の群を交差させて、それらの間の重複を評価し、未処理モデルにおいて下方制御された合計１９３個の遺伝子をもたらし、処理に応じてそれらの発現を増加させた（図１８Ａ）。次いで、重複する遺伝子のリストをインプットとして使用して、第２の機能分析を実施し、最も有意に富化されたＧＯタームを調査した。図１８Ｂに示されるように、ステロールおよびヒドロキシ化合物の代謝プロセスに関連するいくつかの用語は、リストの上位に見られた。しかしながら、疾患の背景を考え、「髄鞘形成」プロセスに焦点が当てられた。このアノテーションに属する特徴の変化を調査するために、ヒートマップにおいてこの結果を生成した遺伝子の発現レベルを示し、図１８Ｃに示す。これによって、我々は、ＥＨＰ－１０１処理でそれらのレベルを回復させていた髄鞘形成プロセスのいくつかの重要な遺伝子を特定することができた。興味深いことに、これらの結果は、ＥＨＰ－１０１が、ＥＡＥにおいて下方制御された、コネキシン２９とも呼ばれる、ギャップジャンクションガンマ－３（Ｇｊｃ３）、およびテニューリン－４（Ｔｅｎｍ４）などの、乏突起膠細胞機能に関連するいくつかの遺伝子の発現を正常化したことを示した。Ｔｅｎｍ４は、乏突起膠細胞分化およびＣＮＳ髄鞘形成の重要な制御因子として記載されているため、これらの結果は関連性がある。トランスクリプトミクス分析を検証するために、Ｇｊｃ４およびＴｅｎｍ４の発現をＲＴ－ＰＣＲによって（図１８Ｄ Ｔｅｎｍ４：ｐ＝０．００２０ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．００３２ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル、Ｇｊｃ３：ｐ＝０．０００６ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ、ｐ＝０．０４６２ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）、タンパク質レベルをＩＨＣによって研究した。図１８Ｅ（ｐ＝＜０．０００１ ＥＡＥ＋ビヒクル対ＣＦＡ：ｐ＝＜０．０００１ ＥＡＥ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＥＡＥ＋ビヒクル）に示されるように、脊髄の白質では、ＥＨＰ－１０１処理によって予防されたＣＦＡ群と比較して、Ｔｅｎｍ４発現の減少が観察された。まとめると、これらの結果は、ＥＡＥモデルにおける脱髄を予防するＥＨＰ－１０１の可能性を示す。

ＥＨＰ－１０１はクプリゾンチャレンジマウスの髄鞘再生を加速させる
急性ＣＰＺ誘発性脱髄プロトコル（図１９Ａ）中の髄鞘再生に対するＥＨＰ－１０１の効果を評価するために、６週間のＣＰＺ ０．２％食餌および２週間のＥＨＰ－１０１処理後の動物からの脳冠状切片を評価した。このモデルでは、自発的な髄鞘再生に対するＥＨＰ－１０１の効果を研究するために、ＣＰＺ食餌の除去後にＥＨＰ－１０１処理を開始した。最初に、ＭＢＰの評価は、ＣｒｙｏＭｙｅｌｉｎおよびＩＨＣ染色によって決定した（それぞれ、図１９Ｂおよび図１９Ｃ）。脱髄からの自発的回復は、未処理マウスでは１週間後および２週間後にはわずかであったが、髄鞘再生は、脳梁（図１９Ｄ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ、ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照、ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６＋１Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋１Ｗ、ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６＋２Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋２Ｗ）および大脳皮質（図１９Ｅ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ、ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照、ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６＋１Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋１Ｗ）の両方においてＥＨＰ－１０１処理によって有意に加速された。さらに、脳梁におけるＩｂａ－１＋およびＧＦＡＰ＋細胞を染色することにより、神経炎症関連神経膠活性化に対するＥＨＰ－１０１の効果が調査された。対照マウスでは、Ｉｂａ－１＋およびＧＦＡＰ＋細胞の低レベルの発現が検出されたが、ＣＰＺに曝露されたマウスは、小膠細胞および星状細胞活性化を示し、これはＥＨＰ－１０１処理によって減弱された（図２０Ａおよび図２０Ｂ）。定量的評価は、ＣＰＺ中毒時の脳梁におけるＩｂａ１＋およびＧＦＡＰ＋細胞の数の有意な増加も示した。ミクログリオーシスおよび星状細胞活性化は、ＥＨＰ－１０１処理の１週間後に改善された（図２０Ｃ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ、ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照、ｐ＝０．００１７ ＣＰＺ６＋１Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋１Ｗ、図２０Ｄ ｐ＝＜０．０００１ ＣＰＺ６Ｗ、ＣＰＺ６＋１Ｗ対対照、ｐ＝０．００１７ ＣＰＺ６＋２Ｗ対対照）。脳梁における軸索に対するクプリゾン誘発性脱髄に対するＥＨＰ－１０１の効果を調査するために、非リン酸化形態のニューロフィラメントタンパク質（ＳＭＩ－３２染色）を調査した。ＳＭＩ－３２免疫反応性は通常軸索で見られるが、軸索スフェロイドでの蓄積は軸索病理の特徴である。ＣＰＺ中毒の６週間および７週間後の増加したＳＭＩ－３２標識は、軸索に対して有意な効果があり、この効果がＥＨＰ－１０１処理の１週間後に改善されたことを示した（図２２Ａ）。さらに、ニューロフィラメントライトポリペプチド（ＮＥＦＬ）の血漿レベルを決定した。図２２Ｂに示されるように、クプリゾン誘発性ＮＥＦＬ血漿レベルの増加は、対照マウスと比較して、ＣＰＺ曝露の６週間後および７週間後のＥＬＩＳＡ研究によって検出された。ＥＨＰ－１０１による１週間の処理が、クプリゾンによって誘発されるＮＥＦＬの血漿レベルを低減したことも示された（図２２Ｂ ｐ＝０．０１１３ ＣＰＺ ６Ｗ対対照、ｐ＝０．０１５１ ＣＰＺ６＋１Ｗ対対照、ｐ＝０．０１２５ ＣＰＺ６＋１Ｗ＋ＥＨＰ－１０１ ２０ｍｇ／ｋｇ対ＣＰＺ６＋１Ｗ）。

フィトカンナビノイドを含む、天然生成物は、改善された生物活性を有する合成および半合成誘導体の開発に成功裏に使用されてきた。本明細書に記載される実験は、カンナビジオールの半合成誘導体である化合物ＶＣＥ－００４．８の開発を開示し、これは、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ（ＰＨＤ）の活性も阻害するＰＰＡＲγ／ＣＢ２のデュアルアゴニストである。したがって、ＶＣＥ－００４．８は、ＥＡＥおよびタイラーマウス脳脊髄炎ウイルス誘発性脱髄性疾患の神経炎症および髄鞘再生においてプラスの効果を有し得るいくつかの経路を標的としている。本明細書に記載される研究は、ＥＡＥおよびクプリゾンを介した毒性的に誘発された脱髄である脱髄の２つの最も一般的に使用されるモデルにおいて、ＶＣＥ－００４．８の経口脂質製剤であるＥＨＰ－１０１の効果を開示する。

Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＥＡＥは一般に、主に脊髄を標的とし、感覚および運動障害を引き起こすと考えられてきた。それにもかかわらず、ＥＡＥが小脳および海馬を含む他のＣＮＳ構造に関与することも認識されている。データは、ＥＨＰ－１０１が脊髄、大脳皮質、および脳梁（ＣＣ）において神経炎症を緩和するために効果的であることを明確に示す。ＥＡＥモデルでは、ＥＨＰ－１０１の効果が末梢免疫系、ＣＮＳ、または両方で発生するかを区別することはできなかった。脳血液関門（ＢＢＢ）がＥＡＥで破壊され、自己免疫細胞および分子の脳への遊走を可能にすることが示されている。しかしながら、ＥＨＰ－１０１は、末梢免疫系およびＣＮＳの両方で作用することによって、抗炎症効果を発揮し得る可能性がある。例えば、ＥＨＰ－１０１は、ＢＢＢが影響を受けない全身性硬化症などの別の自己免疫疾患において抗炎症活性を示し、ここでは、ＥＨＰ－１０１がＣＰＺ中毒マウスにおいて神経炎症も軽減することが示された。ＣＰＺ誘発性脱髄性病変は、重度の乏突起膠細胞喪失ならびに小膠細胞および星状細胞の同時活性化を伴う脱髄を特徴とするが、ＢＢＢ損傷を誘発せず、特徴的なＴ細胞浸潤、および結果として疾患の末梢自己免疫成分を欠く。

髄鞘再生プロセスにおけるＥＨＰ－１０１の作用機序は、まだ不明であるが、おそらくＨＩＦ経路に関連し得る。広範な実験的研究は、ＰＨＤの活性化を阻害することによってＨＩＦ－１を活性化することが、主にＨＩＦ－１標的遺伝子の増加した発現からの神経保護およびおそらく髄鞘再生を提供することができ、これは酸化ストレスと戦い、血中酸素およびグルコース供給を改善し、グルコース代謝を促進し、鉄恒常性を制御し、細胞死シグナル経路を遮断することを明らかにした。ＨＩＦ－１活性を増加させることは、神経変性疾患の発症を予防するか、またはその病因を改善するための重要な潜在的戦略であり得る。興味深いことに、髄鞘形成指数の改善は、ＯＰＣ増殖、ＰＤＧＦα受容体発現、およびＣＣ正中線から外側部への前駆体遊走、それに続くミエリンタンパク質の発現の誘導の増強と平行していた。加えて、脱髄領域における初期アストログリオーシスは、ＩＧＦ－１発現の中程度の刺激と平行した。ＩＧＦ－１は、ＦＧＦ－２と相乗作用して、乏突起膠細胞前駆細胞が細胞周期に入ることを刺激する。脳におけるＶＣＥ－００４．８によって模倣することができるＩＧＦ－１誘発性ＨＩＦ－１活性化、ならびにＰＤＧＦαおよびＦＧＦ２もＨＩＦ経路のＶＣＥ－００４．８媒介性活性化によって制御されるため、これは特に興味深い。

ＭＳ病変における脱髄および部分的な軸索損傷は、軸索と密接に接触して見られる小膠細胞の反応性活性化と密接に関連しており、軸索スフェロイドの形成または高速軸索輸送の障害などの急性軸索損傷を明らかにする。反応性小膠細胞は、ミエリン破壊、乏突起膠細胞劣化、軸索損傷、およびさらにはニューロン喪失を引き起こす、多数の毒性および炎症誘発性分子を産生する。ここで、経口ＥＨＰ－１０１は、脊髄および脳の両方で小膠細胞活性化および脱髄も予防したことがわかり、経口吸収後、ＶＣＥ－００４．８がＥＡＥマウスにおいて脳に浸透することを示した。さらに、ＥＨＰ－１０１は、ＣＰＺ中毒マウスにおける軸索損傷のマーカーとして使用されるＳＭＩ－３２のスフェロイド上での典型的な蓄積を改善する軸索構造を保存することもわかった。同様に、この結果は、ＶＣＥ－００４．８がＣＰＺモデルで影響を受けないＢＢＢも通過することができることを示す。

乏突起膠細胞前駆細胞（ＯＰＣ）は、神経上皮幹細胞から産生され、その後増殖し、脊髄全体に遊走する。分化中、乏突起膠細胞は、ＣＮＳの適切な機能の達成に重要なミエリンタンパク質の発現を開始する。テニューリン－４（Ｔｅｎｍ４）は、ＣＮＳで高度に発現し、小胞体ストレスに応答してその発現が誘発されるＩＩ型膜貫通タンパク質であり、ヒトにおける双極性障害に関与していることが示されている。振戦および小径軸索の重度髄鞘低形成をもたらす、ｆｕｒｕｅと呼ばれるマウス突然変異は、特にＣＮＳの脊髄における乏突起膠細胞分化を低減し、Ｔｅｎｍ４発現の不在と関連している。よって、Ｔｅｎｍ４は、乏突起膠細胞分化およびＣＮＳ髄鞘形成の重要な制御因子である。本明細書では、ＥＡＥマウスにおいて、Ｔｅｎｍ４の発現が脊髄で下方制御され、ＥＨＰ－１０１による処理がおそらくＶＣＥ－００４．８の抗炎症活性の結果としてこの下方制御を逆転させることが初めて示された。

加えて、乏突起膠細胞は、コネキシンＣｘ２９、Ｃｘ３２、およびＣｘ４７で構成されるギャップ結合（ＧＪ）と呼ばれる細胞間チャネルを通して、他の乏突起膠細胞および星状細胞と電気的および代謝的に結合している。この神経膠の伝達ネットワークは、脳機能の恒常性において重要な役割を果たす。いくつかの研究はまた、後天性脱髄ＣＮＳ障害、特に、ＭＳおよび関連する実験モデルにおける乏突起膠細胞コネキシンの役割を提供する。それらの不在が炎症性脱髄をさらに悪化させるので、それらはまた、神経炎症において制御的役割を有するように思われる。同様に、結果は、ＥＨＰ－１０１がＥＡＥマウス対対照マウスにおけるＧｊｃ３（コネキシン２９）発現の下方制御を予防したことを示した。乏突起膠細胞機能およびミエリン保存についてのＴｅｎｍ４およびＧｊｃ３の関連性に照らして、結果は、ＭＳの新規治療として開発されるＥＨＰ－１０１の可能性をさらに支持する。

結論として、開示された研究は、脱髄に対するＥＨＰ－１０１の保護効果および髄鞘再生を増強するその能力を提供する。軸索髄鞘再生を目的とした新規療法が緊急に必要とされているため、これらの結果は、多発性硬化症の治療のための新たな戦略を開く。

要約すると、ＭＳは、脊髄および脳における炎症および神経変性プロセスの組み合わせを特徴とする。ＶＣＥ－００４．８などの天然および合成カンナビノイドは、ＭＳの前臨床モデルで研究されており、したがって、薬物開発の有望な候補を表す。ＶＣＥ－００４－８は、ＨＩＦ経路も活性化するデュアルＰＰＡＲγ／ＣＢ２リガンドアゴニストとして作用する多標的合成カンナビジオール誘導体である。ＥＨＰ－１０１は、ＶＣＥ－００４．８の経口脂質製剤であり、自己免疫疾患の他の前臨床モデルで有効性を示した。

インビボでのＥＨＰ－１０１の有効性を、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）およびクプリゾン誘発性脱髄などのＭＳの２つのマウスモデルで評価した。ＥＡＥでは、トランスクリプトミクス分析を、ＲＮＡ－ＳｅｑおよびｑＰＣＲによって実施し、炎症および髄鞘形成マーカーを、ＭＳの両方のモデルで免疫組織化学（ＩＨＣ）および共焦点顕微鏡によって検出した。

ＥＨＰ－１０１は、ＥＡＥの臨床症候を緩和し、トランスクリプトミクス分析は、ＥＨＰ－１０１が脊髄におけるＭＳ病態生理に密接に関連する多くの炎症性遺伝子の発現を予防したことを示した。ＥＨＰ－１０１は、ＥＡＥにおいて下方制御されたテニューリン４（Ｔｅｎｍ４）およびギャップジャンクションガンマ－３（Ｇｊｃ３）などの乏突起膠細胞機能に関連するいくつかの遺伝子の発現を正常化した。ＥＨＰ－１０１処理は、脊髄および脳の両方で小膠細胞活性化および脱髄を予防した。さらに、ＥＡＥは、乏突起膠細胞分化のマーカーである脳梁におけるＯｌｉｇ２の発現の喪失に関連し、これはＥＨＰ－１０１処理によって回復した。加えて、ＥＨＰ－１０１は、脳における成熟乏突起膠細胞のマーカーである、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼパイ（ＧＳＴｐｉ）の発現を増強した。また、６週間の０．２％のクプリゾンを含有する食餌は、クリオミエリン染色およびＭＰＢ発現によって測定される脳におけるミエリンの明らかな喪失を誘発したことがわかった。さらに、ＥＨＰ－１０１はまた、クプリゾン誘発性小膠細胞活性化およびアストログリオーシスを予防し、軸索損傷を低減し、ニューロフィラメントライトポリペプチド（ＮＥＦＬ）の血漿レベルを低下した。

本明細書に開示される結果は、ＥＨＰ－１０１が強力な抗炎症活性を示し、脱髄を予防し、髄鞘再生を増強したという証拠を提供する。したがって、ＥＨＰ－１０１は、異なる形態のＭＳの潜在的な治療のための有望な薬物候補を表す。

実施例２１：灰白質および白質におけるミエリン評価
灰白質および白質におけるミエリン評価は、（１）海馬および皮質におけるＰＬＰ染色および密度、ならびに（２）脳梁におけるＰＰＤ染色および手動カウントを介して評価した。灰白質および白質モデル要約におけるミエリン評価を表１９に示す。ＶＣＥ－００４．８をＥＨＰ－１０１に製剤化し、ＥＨＰ－１０１の連日ＰＯ投与を構築した。

灰白質髄鞘再生
図２４に示されるように、海馬におけるＰＬＰ染色および海馬におけるＰＬＰの定量化は、ＥＨＰ－１０１処理動物が、ビヒクル対照と比較して海馬におけるＰＬＰ染色の面積の変化を示さなかったことを示した。さらに、皮質におけるＰＬＰ染色および皮質におけるＰＬＰの定量化は、すべての用量強度でのＥＨＰ－１０１処理動物が、ビヒクル対照と比較して皮質領域におけるＰＬＰ染色の面積の変化を示さなかったことを示した（図２５）。

白質髄鞘再生
図２６～図２９に示されるように、脳梁におけるＰＰＤ染色および脳梁における有髄軸索は、ＥＨＰ－１０１処理は対照と比較して有髄軸索の有意な増加を示さなかったが、試験物品の最も低い試験群と比較される場合、２つのより高い群間に有意な差があったことを示した。さらに、図２６Ａ、図２８Ａ、および図２８Ｂは、ＥＨＰ－１０１処理の試験されたより高い用量が、対照と比較して有髄軸索の密度の有意な増加を示したことを示した。また、試験物品の最も低い試験群と比較される場合、２つのより高い群間に有意差があった。

要約すると、Ｃｕｐ－Ｒａｐ処理パラダイムにおける１２＋０時点でのミエリンの欠如によって示されるように、動物は非常によく、予想通りに脱髄した。ＶＣＥ－００４．８の任意の用量で海馬領域における髄鞘形成に有意な増加はなかった。ＶＣＥ－００４．８の任意の用量で皮質髄鞘形成の有意な増加は見られなかった。ＶＣＥ－００４．８は、脳梁の観察された領域において白質の髄鞘形成に対する用量関連効果を有するようであった。有髄軸索の増加したレベルは、より高い用量で観察された。

実施例２２：ＥＨＰ－１０１の経口投与は、多発性硬化症のクプリゾン／ラパマイシンマウスモデルにおける白質の髄鞘再生を促進する
上記のように、ＥＨＰ－１０１は、ＶＣＥ－００４．８の経口脂質製剤、第Ｉ相臨床試験を最近完了した合成カンナビジオールの新規非向精神性アミノキノン誘導体である。ＶＣＥ－００４．８は、強力な抗炎症活性を有するＰＰＡＲγおよびＣＢ_２受容体の二重アゴニストである。ＶＣＥ－００４．８は、ヒト微小血管内皮細胞、乏突起膠細胞、および小膠細胞におけるＨＩＦ経路の活性化も示す。インビボでは、ＥＨＰ－１０１は、ＭＳの異なるマウスモデルで脱髄を予防することが示され、また完全な脱髄が少なく、髄鞘再生が速く、治療期間がわずか２週間のマウスクプリゾンモデルにおいて脳の脱髄を誘発することが示された。

そのようなものとして、本例は、自発的な髄鞘再生が遅く、治療期間が６週間の広範囲の脱髄のクプリゾン／ラパマイシン（Ｃ／Ｒ）マウスモデルにおいて灰白質および白質の髄鞘再生を促進するＥＨＰ－１０１の経口投与の可能性の評価に注目する。

雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ｎ＝５または１２／群）をＣ／Ｒで１２週間処理して、脳の白質および灰白質領域の脱髄を引き起こした。次いで、マウスにＥＨＰ－１０１を０、５、１０、および２０ｍｇ／ｋｇ／日で６週間経口投与した（図２３）。その後、脳を採取し、免疫組織化学的染色ならびにプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）染色による灰白質（海馬（ＨＩＰ）、大脳皮質（ＣＴＸ））およびパラフェニレンジアミン（ＰＰＤ）染色による白質（脳梁ＣＣ））における有髄軸索の定量化について処理した。

Ｃ／Ｒ投与の１２週間後、同齢対照と比較される場合、ミエリンプロテオリピドタンパク質染色の減少によって定量化される皮質および海馬ならびにパラフェニレンジアミン染色によって定量化される脳梁においてほぼ完全な軸索組織脱髄があった。ＥＨＰ－１０１処理後、海馬および大脳皮質におけるＰＬＰ染色の面積に有意な変化はなかった。ＥＨＰ－１０１の≧５ｍｇ／ｋｇ／日の経口投与後のビヒクル対照と比較される場合、灰白質髄鞘形成の有意な増加はなかった。白質では、脳梁における有髄軸索のレベルの用量依存的な増加があった。対照と比較して、ＥＨＰ－１０１の１０（ｐ＜０．００５）および２０ｍｇ／ｋｇ／日（ｐ＜０．００１）での投与後、有髄軸索の密度の統計的に有意な増加が観察された。

要約すると、脱髄の増強されたクプリゾンモデルにおいて、ＥＨＰ－１０１の経口投与は、灰白質ではなく白質において脱髄軸索の有意な髄鞘再生を誘発した。ＥＨＰ－１０１は、脳梁におけるＰＰＤ染色の密度における有意な用量関連増加を誘発した。これらのデータは、ＭＳ患者を治療するための療法としてのＥＨＰ－１０１の第２相臨床試験への進展を支持する。

本明細書で引用されるすべての特許、特許出願、および刊行物の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本発明は、特定の実施形態を参照して開示されたが、本発明の他の実施形態および変形が、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、当業者によって考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、すべてのそのような実施形態および同等の変形を含むと解釈されることが意図される。

Claims (53)

1. 式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物を含む組成物、またはその誘導体であって、
   

   

   式中、Ｒが、直鎖もしくは分岐アルキルアミン、アリールアミン、アリールアルキルアミン、ヘテロアリールアミン、ヘテロアリールアルキルアミン、直鎖もしくは分岐アルケニルアミン、直鎖もしくは分岐アルキニルアミン、またはＮＨ_２から独立して選択される基の窒素原子であり、
   薬学的ビヒクルに可溶化され、
   前記薬学的ビヒクルが、水性緩衝液、溶媒、共溶媒、シクロデキストリン複合体、脂質ビヒクル、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、組成物。
2. 前記組成物が、液体製剤である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物が、懸濁液製剤である、請求項１に記載の組成物。
4. 前記製剤が、ナノ懸濁液製剤である、請求項３に記載の組成物。
5. 前記組成物が、エマルジョン製剤である、請求項１に記載の組成物。
6. 前記組成物が、乾燥粉末製剤である、請求項１に記載の組成物。
7. 前記粉末が、錠剤に圧縮される、請求項５に記載の組成物。
8. 前記組成物が、溶液、ゲル、ローション、ペースト、軟膏、皮膚軟化剤、リポソーム、ナノスフェア、皮膚強壮剤、洗口液、含嗽液、ムース、スプレー、パック、カプセル、顆粒、パッチ、閉塞性皮膚剤、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１に記載の組成物。
9. 式（Ｉ）の前記化合物が、
   

   

   

   からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
10. 前記薬学的ビヒクルが、水性緩衝液、溶媒、共溶媒、シクロデキストリン複合体、脂質ビヒクル、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、少なくとも１つの安定剤、乳化剤、ポリマー、およびそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
11. 前記水性緩衝液が、水性ＨＣｌ、水性クエン酸塩－ＨＣｌ緩衝液、水性ＮａＯＨ、水性クエン酸塩－ＮａＯＨ緩衝液、水性リン酸塩緩衝液、水性ＫＣｌ、水性ホウ酸塩－ＫＣｌ－ＮａＯＨ緩衝液、ＰＢＳ緩衝液、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
12. 前記溶媒が、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、水、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ＰＥＧ４００、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ（ジエチルグリコモノエチルエーテル）、ＭＣＴ ７０、Ｌａｂｒａｓｏｌ（ＰＥＧ－８カプリル／カプリン酸グリセリド）、Ｌａｂｒａｆｉｌ Ｍ１９４４ＣＳ（オレイン酸ＰＥＧ５）、プロピレングリコール、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ、ＰＥＧ４００、プロピレングリコール、グリセロール、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｔｗｅｅｎ ８５、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、トウモロコシ油、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
13. 前記共溶媒が、アセトン、酢酸エチル、アセトニトリル、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、水、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ＰＥＧ４００、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ（ジエチルグリコモノエチルエーテル）、ＭＣＴ ７０、Ｌａｂｒａｓｏｌ（ＰＥＧ－８カプリル／カプリン酸グリセリド）、Ｌａｂｒａｆｉｌ Ｍ１９４４ＣＳ（オレイン酸ＰＥＧ５）、プロピレングリコール、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ、ＰＥＧ４００、プロピレングリコール、グリセロール、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｔｗｅｅｎ ８５、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、トウモロコシ油、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
14. 前記シクロデキストリン複合体が、メチル－β－シクロデキストリン、メチル－γ－シクロデキストリン、ＨＰ－β－シクロデキストリン、ＨＰ－γ－シクロデキストリン、ＳＢＥ－β－シクロデキストリン、α－シクロデキストリン、γ－シクロデキストリン、６－Ｏ－グルコシル－β－シクロデキストリン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
15. 前記安定剤が、Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ ６０３、ＳＬＳ、Ｎｉｓｓｏ ＨＰＣ－ＳＳＬ、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ、ＰＶＰ Ｋ３０、ＰＶＰ ＶＡ ６４、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
16. 前記ポリマーが、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＭＧ、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＬＧ、ＨＰＭＣ－ＡＳ－ＨＧ、ＨＰＭＣ、ＨＰＭＣ－Ｐ－５５Ｓ、ＨＰＭＣ－Ｐ－５０、メチルセルロース、ＨＥＣ、ＨＰＣ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｅ１００、ＰＥＯ １００Ｋ、ＰＥＧ ６０００、ＰＶＰ ＶＡ６４、ＰＶＰ Ｋ３０、ＴＰＧＳ、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ ＩＲ、Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９８０ＮＦ、Ｐｏｖｏｃｏａｔ ＭＰ、Ｓｏｌｕｐｌｕｓ、Ｓｕｒｅｔｅｒｉｃ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８からなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
17. 抗酸化剤が、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、コエンザイムＱ１０、マンガン、ヨウ化物、メラトニン、アルファ－カロチン、アスタキサンチン、ベータ－カロチン、カンタキサンチン、クリプトキサンチン、ルテイン、リコペン、ゼアキサンチン、ポリフェノール抗酸化剤、フラボノイド、フラボン、アピゲニン、ルテオリン、タンゲリチン、フラボノール、イソラムネチン、ケンフェロール、ミリセチン、プロアントシアニジン、ケルセチン、フラバノン、エリオジクチオール、ヘスペレチン、ナリンゲニン、フラバノール、カテキン、ガロカテキン、ガレートエステル、エピカテキン、エピガロカテキン、テアフラビン、テアルビジン、イソフラボンフィトエストロゲン、ダイゼイン、ゲニステイン、グリシテイン、スチルベノイド、レスベラトロール、プテロスチルベン、アントシアニン、シアニジン、デルフィニジン、マルビジン、ペラルゴニジン、ペオニジン、ペツニジン、チコール酸、カフェイン酸、クロロゲン酸、フェルラ酸、ケイ皮酸、エラグ酸、エラジタンニン、没食子酸、ガロタンニン、ロスマリン酸、サリチル酸、クルクミン、フラボノリグナン、シリマリン、キサントン、オイゲノール、カプサイシン、ビリルビン、クエン酸、シュウ酸、フィチン酸、ｎ－アセチルシステイン、Ｒ－アルファ－リポ酸、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
18. 前記脂質ビヒクルが、Ｃａｐｔｅｘ ３００、Ｔｗｅｅｎ ８５、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、Ｍａｉｓｉｎｅ ３５－１、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、トウモロコシ油、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
19. 前記脂質ビヒクルが、油である、請求項１０に記載の組成物。
20. 前記脂質ビヒクルが、少なくとも２つの油を含む油混合物である、請求項１０に記載の組成物。
21. 前記油混合物が、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣおよびトウモロコシ油の混合物である、請求項２０に記載の組成物。
22. Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣおよびトウモロコシ油の前記混合物が、５０Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ：５０トウモロコシ油体積／体積を含む、請求項２１に記載の組成物。
23. 前記薬学的ビヒクルが、油である、請求項２に記載の製剤。
24. 前記薬学的ビヒクルが、油混合物である、請求項２に記載の製剤。
25. 前記油混合物が、Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣおよびトウモロコシ油の混合物である、請求項２４に記載の製剤。
26. Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣおよびトウモロコシ油の前記混合物が、５０Ｍａｉｓｉｎｅ ＣＣ：５０トウモロコシ油体積／体積を含む、請求項２５に記載の製剤。
27. カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）活性の調節に応答する状態または疾患の治療を必要とする対象においてＣＢ_２活性の調節に応答する状態または疾患を治療する方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、もしくはその製剤をそれを必要とする対象に、またはその誘導体を投与することを含み、
    

    

    式中、Ｒが、直鎖もしくは分岐アルキルアミン、アリールアミン、アリールアルキルアミン、ヘテロアリールアミン、ヘテロアリールアルキルアミン、直鎖もしくは分岐アルケニルアミン、直鎖もしくは分岐アルキニルアミン、またはＮＨ_２から独立して選択される基の窒素原子である、方法。
28. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、
    

    

    

    からなる群から独立して選択される、請求項２７に記載の方法。
29. 式（Ｉ）の前記化合物が、カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）に選択的に結合する、請求項２７に記載の方法。
30. Ｒが、カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）に結合する、請求項２７に記載の方法。
31. カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）活性の調節に応答する前記状態または疾患が、自己免疫疾患、脱髄性疾患、炎症関連障害、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
32. カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）活性の調節に応答する前記状態または疾患が、全身性硬化症、ミエリン分解性障害、多発性硬化症、視神経脊髄炎、中枢神経系ニューロパチー、橋中心髄鞘崩壊症、脊髄症、白質脳症、白質ジストロフィー、末梢性ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、進行性炎症性ニューロパチー、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
33. カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）活性の調節に応答する前記状態または疾患が、多発性硬化症である、請求項２７に記載の方法。
34. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、経口投与される、請求項２７に記載の方法。
35. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、局所投与される、請求項２７に記載の方法。
36. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、筋肉内注射を介して投与される、請求項２７に記載の方法。
37. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、静脈内注射を介して投与される、請求項２７に記載の方法。
38. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、食品または飲料と共に投与される、請求項２７に記載の方法。
39. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、別の治療剤と組み合わせて投与される、請求項２７に記載の方法。
40. 薬学的ビヒクルに可溶化された、式（ＶＩＩＩ）の化合物またはその誘導体を含む、液体製剤であって、前記薬学的ビヒクルが、５０：５０体積／体積のＭａｉｓｉｎｅ ＣＣ：トウモロコシ油混合物である、液体製剤。
    

    
41. ＣＢ_２受容体活性の調節に応答する多発性硬化症または全身性硬化症の治療を必要とする対象においてＣＢ_２受容体活性の調節に応答する多発性硬化症または全身性硬化症を治療する方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の式（ＶＩＩＩ）の化合物もしくはその製剤、またはその誘導体を投与することを含む、方法。
    

    
42. 脱髄に関連する状態または疾患の治療を必要とする対象において脱髄に関連する状態または疾患を治療する方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、もしくはその製剤をそれを必要とする対象に、またはその誘導体を投与することを含み、
    

    

    式中、Ｒが、直鎖もしくは分岐アルキルアミン、アリールアミン、アリールアルキルアミン、ヘテロアリールアミン、ヘテロアリールアルキルアミン、直鎖もしくは分岐アルケニルアミン、直鎖もしくは分岐アルキニルアミン、またはＮＨ_２から独立して選択される基の窒素原子である、方法。
43. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、
    

    

    

    からなる群から独立して選択される、請求項４２に記載の方法。
44. 前記対象が、カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）活性の調節に応答する状態または疾患をさらに有する、請求項４２に記載の方法。
45. 脱髄に関連する前記状態または疾患が、自己免疫疾患、脱髄性疾患、炎症関連障害、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
46. 脱髄に関連する前記状態または疾患が、全身性硬化症、ミエリン分解性障害、多発性硬化症、視神経脊髄炎、中枢神経系ニューロパチー、橋中心髄鞘崩壊症、脊髄症、白質脳症、白質ジストロフィー、末梢性ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、進行性炎症性ニューロパチー、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
47. 脱髄に関連する前記状態または疾患が、多発性硬化症である、請求項４２に記載の方法。
48. 髄鞘再生を必要とする対象における髄鞘再生の方法であって、前記方法が、前記対象に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物もしくはその製剤をそれを必要とする対象に、またはその誘導体を投与することを含み、
    

    

    式中、Ｒが、直鎖もしくは分岐アルキルアミン、アリールアミン、アリールアルキルアミン、ヘテロアリールアミン、ヘテロアリールアルキルアミン、直鎖もしくは分岐アルケニルアミン、直鎖もしくは分岐アルキニルアミン、またはＮＨ_２から独立して選択される基の窒素原子である、方法。
49. 式（Ｉ）の前記化合物またはその製剤が、
    

    

    

    からなる群から独立して選択される、請求項４８に記載の方法。
50. 前記対象が、カンナビノイド受容体タイプ２（ＣＢ_２）活性の調節に応答する状態または疾患、脱髄に関連した状態または疾患、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される状態または疾患を有する、請求項４８に記載の方法。
51. 前記対象が、自己免疫疾患、脱髄性疾患、炎症関連障害、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される状態または疾患を有する、請求項４８に記載の方法。
52. 前記対象が、全身性硬化症、ミエリン分解性障害、多発性硬化症、視神経脊髄炎、中枢神経系ニューロパチー、橋中心髄鞘崩壊症、脊髄症、白質脳症、白質ジストロフィー、末梢性ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパチー、シャルコー・マリー・トゥース病、進行性炎症性ニューロパチー、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される状態または疾患を有する、請求項４８に記載の方法。
53. 前記対象が、多発性硬化症を有する、請求項４８に記載の方法。

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