KR102233909B1 - 임신성 당뇨 및 임신 중 고혈압 예측을 위한 바이오마커 - Google Patents

임신성 당뇨 및 임신 중 고혈압 예측을 위한 바이오마커 Download PDF

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Abstract

본 발명은 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단용 조성물, 키트, 및 이를 이용한 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단 방법에 관한 것이다. 일 양상에 따른 셀레노단백질 P 측정 제제를 포함하는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단용 조성물, 키트, 및 이를 이용한 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단 방법에 따르면, 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환을 간편하게 진단할 수 있으며 높은 정확도 및 특이도로 진단할 수 있다.

Description

임신성 당뇨 및 임신 중 고혈압 예측을 위한 바이오마커{Biomarkers in predicting gestational diabetes mellitus and pregnancy associated hypertension}
임신성 당뇨 및 임신 중 고혈압 예측을 위한 바이오마커, 이를 이용한 임신성 당뇨 및 임신 중 고혈압 진단용 조성물, 키트, 및 임신성 당뇨 및 임신 중 고혈압 진단 방법에 관한 것이다.
임신 중 고혈압 질환(pregnancy associated hypertension)은 임신과 합병된 고혈압, 예를 들면, 자간전증, 자간증, 임신성 고혈압 등을 포함한다. 모태 및 태아의 주산기 사망의 주요한 원인이 되며, 전체 임산부의 5~8%를 차지할 정도로 큰 비중을 차지하고 있으며, 대표적인 주요 증상으로는 고혈압, 부종 및 임신중독성 요 단백질량의 증가, 심한 두통 및 갑작스런 체중 증가 등이 있다. 또한 임신성 당뇨병(gestational diabetes mellitus: GDM)은 임신 중 발병했거나 또는 처음 확인된 내당능 저하를 지칭한다.
이러한 임신 중 고혈압 질환은 대체로 20주 이후에 발생하고 조산의 주요한 원인이 되기도 한다. 그러나 현재까지 이의 정확한 발병원인과 치료방법은 명확하게 규명되어 있지 않으며, 분만 외에는 뚜렷한 치료 방법이 없다. 그러나 임신 초기에 임신 중 고혈압 질환이나 임신성 당뇨병이 발생하였을 경우, 이른 분만은 태아의 사망률을 높일 수 있기 때문에 조기에 진단하여 최대한 임신을 유지하면서 환자를 관리하는 것이 최선의 방법이 될 수 있을 것이다. 따라서, 이러한 질환으로 인해 유발되는 태아의 조산 및 이로 인한 태아의 사망률을 감소시키기 위해 조기 진단이 요구되고 있다.
임신 중 고혈압 질병이나 임신성 당뇨병을 예측하고 진단하기 위한 바이오마커를 찾기 위한 연구가 이루어지고 있으며, 최근까지 몇몇 마커가 제안된 바 있으나, 아직까지 임상적 예측 또는 진단의 유용성이 입증되지 않은 상태로, 지속적인 연구가 이루어질 필요가 있다.
일 양상은 셀레노단백질 P(selenoprotein P), 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 셀레노단백질 P, 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단용 키트를 제공하는 것이다.
다른 양상은 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환이 의심되는 개체로부터 분리된 생물학적 시료에서 셀레노단백질 P, 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 발현 수준을 정상 대조군의 단백질 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환을 진단하는 방법을 제공하는 것이다.
일 양상은 셀레노단백질 P(selenoprotein P) 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환의 발병 여부나 발병 가능성을 확인하는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "임신성 당뇨병"은 임산부의 약 3~14%에서 발생하는 질병으로, 그 정도에 상관없이 혈액 중의 포도당이 정상 범위보다 높은 상태로서, 임신 중 처음 발견되거나 시작되는 경우를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "임신 중 고혈압 질환(pregnancy associated hypertension)"은 전자간증(pre-eclampsia), 자간증(eclampsia), 임신성 고혈압(gestational hypertension), 만성 고혈압(chronic hypertension), HELLP 증후군(HELLP syndrome)으로 구성된 군에서 선택되는 것일 수 있다. 이외에도 상기 임신 중 고혈압 질환과 관련되어 발생하는 재태 기간에 비해 작은 태아(SGA)를 갖는 임신(pregnancy with a small for gestational age (SGA) infant)을 포함할 수 있다.
상기 전자간증(Pre-eclampsia)은 고혈압, 부종(edema) 및 단백뇨(proteinuria)의 증상을 보이며 임신 5 내지 10%에 영향을 미치는데, 상당한 모체 및 태아의 질병률(morbidity) 및 사망률(mortality)을 야기할 수 있다. 전자간증은 전세계적으로 해마다 200,000명 이상의 모체의 사망을 일으킨다. 전자간증의 증상들은 전형적으로 임신 20주 후에 나타나며, 보통 여성의 혈압 및 소변의 정기적인 측정에 의해 검출된다. 그러나, 이러한 모니터링 방법들은 증상의 초기 단계에서의 진단에는 비효과적이기 때문에 조기 진단 마커가 필요하다. 전자간증은 임신중독증, 자간전증이라고도 지칭된다.
상기 자간증(eclampsia)은 고혈압, 단백뇨에 더해서 경련이 발생하는 경우이다. 임신 6~7개월경이나 혹은 분만이 임박하여 갑자기 현기증이 나고 졸도하여 인사불성이 되며, 팔다리가 경련하고 입을 악물며 입에서 거품을 토하는 증상이 나타난다.
상기 임신성 고혈압(gestational hypertension)은 임신 중(임신 20주 이후) 새로이 발생하고 출산 12주 안에 정상이 되는 경우를 지칭하는 것으로, 단백뇨를 동반하지 않는 고혈압을 말한다.
상기 만성 고혈압(chronic hypertension)은 고혈압이 임신 전 또는 임신 20주 이전에 발생한 경우를 의미한다.
상기 임신성 당뇨병이나 임신 중 고혈압 질환을 진단하기 위해서는 산모가 산부인과를 방문하여 정기검진 때마다 혈압을 측정하고, 소변 검사를 시행하게 된다. 그러나, 채취가 간편한 시료를 사용하여 빠르고 정확하게 진단할 수 있는 바이오마커에 대하여는 아직 개발된 바가 없다.
본 명세서에서 용어 "마커(marker)" 또는 바이오마커란 정상군 개체와 임신관련 고혈압 질환을 가진 개체를 구분하여 진단할 수 있는 물질로, 본 발명의 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환을 가지는 개체에서 증가를 보이는 폴리펩티드, 단백질 또는 핵산, 유전자, 지질, 당지질, 당단백질 또는 당 등과 같은 유기 생체 분자들을 모두 포함한다. 특히 본 명세서에서는 본 발명의 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환을 가지는 개체에서 변화되는 단백질 또는 유전자일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 셀레노단백질 P(selenoprotein P)는 혈장(plasma)에서 발견되는 당단백질로, 이의 정확한 기능은 알려져 있지 않으나, 항산화와 관련되어 있을 것으로 고려된다. 셀레노단백질 P와 임신 중 고혈압 질환과의 관계에 대한 선행 연구는 부족한 실정이다. 상기 셀레노단백질 P는 SeP; SELP; SEPP; SEPP1으로도 표시될 수 있다. 상기 셀레노단백질 P는 인간에서 GenBank Accession No. NM_001085486.2, NM_001093726.2, NM_005410.3 의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산으로부터 암호화된 단백질일 수 있다. 상기 셀레노단백질 P는 인간에서 GenBank Accession No. 　NP_001078955.1,　NP_001087195.1,　NP_005401.3의 아미노산 서열 또는 UniProt No. P49908.3의 아미노산 서열을 포함하는 단백질일 수 있다.
상기 셀레노단백질 P는 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 단백질일 수 있다. 상기 셀레노단백질 P단백질은 셀레노단백질 P의 동형 단백질일 수 있다. 용어 "동형(isoform)"은 동일한 단백질의 다른 형태를 말한다.
상기 셀레노단백질 P의 단편은 면역원성 단편일 수 있다. 상기 셀레노단백질 P에 대한 항체에 의해 인식될 수 있는 하나 이상의 에피토프(epitope)를 가지고 있는 단편일 수 있다.
상기 발현 수준(expression level)은 단백질 발현 수준일 수 있다. 발현 수준은 시료 중 단백질의 양 또는 농도를 측정함으로써 측정될 수 있다. 발현 수준은 상기한 단백질의 절대적(예: ㎍/㎖) 또는 상대적(예: 시그널의 상대 강도) 차이로 나타낼 수 있다.
상기 셀레노단백질 P 또는 그의 단편의 양은 전기영동, 면역블롯팅(immunoblotting), ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay), 단백질 칩, 면역침전, 질량 분석, 또는 이들의 조합을 통해 측정할 수 있다.
상기 발현 수준을 측정하는 제제는 단백질 또는 그의 단편의 검출 또는 정량에 사용될 수 있는 물질을 말한다. 상기 제제는 셀레노단백질 P 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 용어 "항체(antibody)"는 용어 "면역글로불린(immunoglobulin)"과 상호교환적으로 사용될 수 있다. 상기 항체는 폴리클론 항체 또는 모노클론 항체일 수 있다. 상기 항체는 전장 항체일 수 있다. 상기 항원 결합 단편은 항원 결합 부위를 포함하는 폴리펩티드를 말한다. 상기 항원 결합 단편은 단일-도메인 항체(single-domain antibody), Fab, Fab' 또는 scFv일 수 있다. 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 상업적으로 판매되는 셀레노단백질 P 에 대한 항체 또는 항원 결합 단편일 수 있다.
또한 상기 발현 수준을 측정하는 제제는 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 정량에 사용될 수 있는 물질을 말한다. 상기 제제는 셀레노단백질 P, 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드일 수 있다.
용어 "프라이머(primer)"란 짧은 자유 3'말단 수산화기를 갖는 핵산 서열로 상보적인 주형과 염기쌍을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 중합효소 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다.
용어 "프로브"란 시료 내의 검출하고자 하는 표적 물질과 특이적으로 결합할 수 있는 물질을 의미하며, 상기 결합을 통하여 특이적으로 시료 내의 표적 물질의 존재를 확인할 수 있는 물질을 의미한다. 프로브 분자의 종류는 당업계에서 통상적으로 사용되는 물질로서 제한은 없으나, 바람직하게는 PNA (peptide nucleic acid), LNA (locked nucleic acid), 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, RNA 또는 DNA 일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 프로브는 바이오 물질로서 생물에서 유래되거나 이와 유사한 것 또는 생체외에서 제조된 것을 포함하는 것으로 예를 들어, 효소, 단백질, 항체, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 신경세포, DNA, 및 RNA일 수 있으며, DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, RNA는 게놈 RNA, mRNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, 단백질의 예로는 항체, 항원, 효소, 펩티드 등을 포함할 수 있다.
용어 "안티센스 올리고뉴클레오티드"는 특정 mRNA의 서열에 상보적인 핵산 서열을 함유하고 있는 DNA 또는 RNA 또는 이들의 유도체로서, mRNA 내의 상보적인 서열에 결합하여 mRNA의 단백질로의 번역을 저해하는 작용을 한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 서열은 mRNA에 상보적이고 상기 mRNA에 결합할 수 있는 DNA 또는 RNA 서열을 의미한다. 이는 상기 유전자 mRNA의 번역, 세포질 내로의 전위(translocation), 성숙(maturation) 또는 다른 모든 전체적인 생물학적 기능에 대한 필수적인 활성을 저해할 수 있다.
상기 조성물은 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단에 필요한 시료를 더 포함할 수 있다.
다른 양상은 셀레노단백질 P또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단용 키트를 제공한다.
셀레노단백질 P, 셀레노단백질 P의 단편, 발현 수준, 및 발현 수준의 측정은 전술한 바와 같다.
상기 키트는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단에 필요한 시료를 더 포함할 수 있다. 상기 키트는 항체, 항체의 면역학적 검출을 위하여 기질, 적합한 완충용액, 발색 효소 또는 형광물질로 표지된 2차 항체, 또는 발색 기질을 포함할 수 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 키트는 RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction) 키트, DNA 칩 키트, ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay) 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(Multiple reaction monitoring) 키트일 수 있다.
다른 양상은 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환이 의심되는 개체로부터 분리된 생물학적 시료에서 셀레노단백질 P 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 발현 수준을 정상 대조군의 단백질 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환의 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
셀레노단백질 P, 셀레노단백질 P의 단편, 발현 수준, 및 발현 수준의 측정은 전술한 바와 같다.
상기 방법은 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환이 의심되는 개체로부터 분리된 생물학적 시료에서 셀레노단백질 P 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함한다.
상기 개체는 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
용어 "생물학적 시료"는 생물로부터 수득된 시료를 말한다. 상기 생물학적 시료는 혈액, 혈장, 혈소판, 혈청, 복수액, 골수액, 림프액, 타액, 누액, 점막액, 양수, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 생물학적 시료가 혈액 또는 혈장일 경우, 채취가 용이한 혈액, 혈장을 검체로 사용하기 때문에 생검을 이용하는 기존의 임신 중 당뇨병이나 임신 중 고혈압 질환 진단 방법과 달리 환자에게 부담을 주지 않으면서도 간편하게 분석할 수 있을 뿐만 아니라 진단의 정확도 및 민감도가 높아 임신성 당뇨병이나 임신 중 고혈압 질환의 조기 진단에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 생물학적 시료는 온전한(intact) 단백질을 포함할 수 있다. 온전한 단백질은 별도의 단백질의 변형 없이 생물학적 시료로부터 분리된 단백질일 수 있다. 온전한 단백질은, 예를 들어 단백질 분해 효소에 의한 단백질 분해 없이, 생물학적 시료로부터 분리된 단백질일 수 있다.
상기 측정하는 단계는 생물학적 시료와, 셀레노단백질 P, 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하는 항체를 인큐베이션시키는 단계를 포함할 수 있다. 인큐베이션은 인 비트로(in vitro)에서 수행될 수 있다. 측정 방법은 예를 들어, 면역블로팅(immunoblotting), ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay), 단백질 칩, 면역침전, 또는 이들의 조합일 수 있다.
상기 측정하는 단계는 상기 생물학적 시료를 질량분석하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 생물학적 시료를 질량분석하는 단계는 온전한 단백질을 질량분석하는 것일 수 있다.
상기 방법은 상기 측정된 발현 수준을 정상 대조군의 셀레노단백질 P 의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함한다.
상기 정상 대조군은 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 환자가 아닌 개체, 또는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환에 걸릴 위험이 없는 개체로부터 분리된 생물학적 시료일 수 있다.
상기 방법은 상기 측정된 셀레노단백질 P의 발현 수준이 정상 대조군 시료의 셀레노단백질 P 발현 수준보다 높은 경우 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환으로 판단하는 단계를 더 포함할 수 있다. 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환이 의심되는 개체로부터 분리된 생물학적 시료에서 측정된 셀레노단백질 P, 또는 이의 단편의 발현 수준이 정상 대조군 시료로부터 분리된 시료에서 측정된 셀레노단백질 P, 또는 이의 단편의 발현 수준보다 증가한 경우, 상기 개체를 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 환자 또는 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환에 걸릴 확률이 높은 것으로 결정할 수 있다. 예를 들어, 셀레노단백질 P가 90 퍼센타일(percentile) 이상으로 높은 경우, 약 3.4배 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환의 발병 위험이 높아진다.
일 양상에 따른 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단용 조성물, 키트, 및 이를 이용한 임신성 당뇨병 또는 임신 중 고혈압 질환 진단 방법에 따르면, 상기 질환을 간편하게 진단할 수 있고, 높은 정확도 및 특이도로 조기 진단하는데 이용할 수 있다.
도 1은 임신성 당뇨병이 있는 환자군과 임신성 당뇨병이 없는 정상군에서 셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 임신 10-14주의 초기에 임신 중 고혈압이 있는 환자군과 임신 중 고혈압이 없는 정상군에서 셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 임신 22-30주의 중기에 임신 중 고혈압이 있는 환자군과 임신 중 고혈압이 없는 정상군에서 셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 셀레노단백질 P의 임신성 당뇨병 진단 효과 확인
1.1. 환자 준비
연령, 산과력, 이전 임신 당뇨 과거력, 당뇨 가족력, 허리둘레, 채혈한 임신주수, 체질량지수가 비슷한 단태아 임산부를 대상으로 정상군 572명과 환자군을 36명을 분석하였다. 실험에서 환자군이었던 산모들은 24-28주사이에 두 단계의 방법(50g-100g OGTT(Glucose Tolerance Test))을 이용하여 임신성 당뇨로 진단하였으며 당뇨 진단 이전에 당뇨병 병력이 있거나 분만 후 경구당부하 검사에서 당뇨가 있는 경우는 제외하였다. 따라서 이 환자군들은 임신에 의해 일시적으로 당기능장애가 생긴 임신성 당뇨병 환자들이라고 할 수 있다.
1.2. 시료 준비 및 보관
임신 10-14주, 임신 22-30주에 내원한 임신부들의 말초혈액을 채취하여 원심분리한 후 상층액을 취해 혈장을 얻었으며 이를 폴리프로필렌 튜브에 담아 -70℃에서 실험 전까지 보관하였다. 보관된 시료를 이용하여 임신부군에서 임신성 당뇨군은 인슐린, 공복 혈청 글루코오스(fasting serum glucose)를 Roche/Hitachi 911 (Roche diagnostics) chemistry analyzer 를 이용하여 효소적 방법(Glucose HK, Roche diagnostics, IN)을 통해 측정하였다. 이후 혈장 인슐린 농도는 immunometric assay (IRMA) in duplicate using the same batch of a kit (INS-Irma, DIAsource ImmouAssays S.A., Belgium)를 이용하여 분석하였다.
1.3. 셀레노단백질 P 발현 수준 측정을 통한 임신성 당뇨병 진단
셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정하여 임신성 당뇨병을 진단할 수 있는지 ELISA로 확인하였다.
구체적으로, ELISA 키트(cat No. SEB809Hu, cloud-clone corp. # SEB809Hu)를 사용하였다. 상기 1.2에서 준비한 혈장 시료는 1000배 희석하여 사용한다. 세척 완충액(Wash buffer) 600ml의 조성은 증류수 580ml, 농축된 세척 완충액 (concentrated wash buffer) 20ml를 혼합 제조하여 사용하였다.
인간 셀레노단백질 P1 표준(Human selenoprotein P1 standard) 중 표준 희석물(standard diluent) 500ng/ml을 만들기 위해서, 표준 희석물 1ml으로 셀레노단백질 P 표준을 만들어 부드럽게 10분 동안 흔들어주었다. 표준 희석물을 만든 이후 순차적 희석(serial dilution)을 시행하였다. 표준(standard), 블랭크(blank), 시료는 웰 당 100μl씩 넣어주었다. 커버를 덮고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 하였다. 인큐베이션 후, 4웰 안의 용액을 버리고, 세척은 하지 않는다. 검출 시약 A를 웰 당 100μl씩 넣어 준 후, 커버를 덮어 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 하였다. 세척을 3회 진행하고, 마지막 세척 시 400μl의 세척 완충액으로 깨끗하게 웰을 세척하였다. 검출 시약 B를 웰 당 100μl씩 넣어준 후, 커버를 덮어 37℃에서 30분간 인큐베이션 하였다. 세척은 상기와 같은 방법으로 5회 반복하였다. 기질 용액을 웰 당 90μl씩 넣어 준 뒤, 커버를 덮어 37℃에서 10분간 인큐베이션 하였다. 이때 차광을 유지하도록 하였다. 반응 후, 종료 용액(stop solution)을 웰 당 50μl 넣어주었다. 이후, 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
하기 표 1에 임신성 당뇨병이 있는 환자군과 임신성 당뇨병이 없는 정상군에서 셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정한 결과를 나타내었다. 또한 도 1에 표 1의 결과를 그래프로 나타내었다.
특징 정상군(n=572) 환자군(n=36) P-value
Selenoprotein P(mg/mL) 5.83
(2.9014.51)		 10.01
(6.7234.86)		 <.005
표 1 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 임신성 당뇨병 환자군에서는 정상군에 비하여 약 2배 정도 셀레노단백질 P 수준이 높게 측정되었다. 또한, 셀레노단백질 P의 수준에 따른 임신성 당뇨병 발현 가능성을 표 2에 나타내었다.
셀레노단백질 P (mg/ml) Odds ratio (95% CI) P-value
= 6.08 1.00 (reference) -
> 6.08 3.40 (1.08-10.69) <0.05
표 2에 나타낸 바와 같이, 셀레노단백질 P가 90 퍼센타일(percentile) 이상일 때, 임신성 당뇨병이 나타날 가능성이 정상군에 비하여 약 3.4배 증가함을 확인하였다(OR(Odds ratio), 3.40; 95% CI, 1.08-10.69; P<.05).따라서, 셀레노단백질 P 수준을 측정함으로써 임신성 당뇨병을 진단할 수 있다.
실시예 2. 셀레노단백질 P의 임신 중 고혈압 질환 진단 효과 확
2.1. 실험군
연령, 산과력, 임신 전 고혈압 병력, 허리둘레, 채혈한 임신주수, 체질량지수가 비슷한 단태아 임산부를 대상으로 정상군 857명과 환자군 20명을 분석하였다. 실험에서 환자군으로 정의한 대상군 중 임신성 고혈압(gestational hypertension)은 임신 20주 전 정상혈압이었으며 임신 20주 이후 새롭게 확인된 수축기 혈압이 140mmHg 이상 또는 확장기 혈압이 90mmHg 이상이고 단백뇨를 동반하지 않는 경우로, 분만 후 12주 이내에 정상 혈압이 되는 경우로 정의하였고 전자간증(preeclampsia)은 임신 20주 이후 새롭게 확인된 수축기 혈압이 140mmHg 이상 또는 확장기 혈압이 90mmHg 이상이고 단백뇨가 동반되거나 혈소판감소, 혈중 크레아티닌상승, 간수치 상승 등의 증상이 동반된 경우를 말하며 자간증(eclampsia)는 전자간증에서 경련이 동반된 경우로 정의하였다.
2.2. 시료 준비 및 보관
임신 10-14주, 임신 22-30주에 내원한 임신부들의 말초혈액을 채취하여 원심분리한 후 상층액을 취해 혈장을 얻었으며 이를 폴리프로필렌 튜브에 담아 -70℃에서 실험 전까지 보관하였다.
2.3. 셀레노단백질 P 발현 수준 측정을 통한 임신 중 고혈압 진단
셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정하여 임신 중 고혈압 질환을 진단할 수 있는지 ELISA로 확인하였다. 방법은 상기 1.3과 동일하게 수행하였고, 하기 표 2에 임신 10-14주의 초기에 임신 중 고혈압이 있는 환자군과 임신 중 고혈압이 없는 정상군에서 셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정한 결과를 나타내었다. 또한 도 2에 표 3의 결과를 그래프로 나타내었다.
특징 정상군(n=633) 환자군(n=17) P-value
Selenoprotein P(ng/mL) 5820 16764 <0.01
하기 표 4에 임신 22-30주의 중기에 임신 중 고혈압이 있는 환자군과 임신 중 고혈압이 없는 정상군에서 셀레노단백질 P의 발현 수준을 측정한 결과를 나타내었다. 또한 도 3에 표 3의 결과를 그래프로 나타내었다.
특징 정상군(n=633) 환자군(n=17) P-value
Selenoprotein P(ng/mL) 12616 75023 <0.01
표 3-4 및 도 2-3에 나타낸 바와 같이, 임신 초기와 중기에 각각 측정한 셀레노단백질 P는 임신 중 고혈압 환자군에서 유의하게 높게 측정되는 것을 확인하였다. 따라서, 셀레노단백질 P 수준을 측정함으로써 임신 초기, 중기 모두의 산모에서 임신 중 고혈압 질환을 진단할 수 있다.
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Claims (12)

  1. 셀레노단백질 P(selenoprotein P) 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 임신성 당뇨병 진단용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 셀레노단백질 P는 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 제제는 셀레노단백질 P 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 것인 조성물.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 항체는 폴리클론 항체 또는 모노클론 항체인 것인 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 제제는 셀레노단백질 P를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드인 것인 조성물.
  6. 셀레노단백질 P 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 임신성 당뇨병 진단용 키트.
  7. 임신성 당뇨병이 의심되는 개체로부터 분리된 생물학적 시료에서 셀레노단백질 P 또는 이의 단편의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    상기 측정된 발현 수준을 정상 대조군의 단백질 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 임신성 당뇨병의 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 생물학적 시료는 혈액, 혈장, 혈소판, 혈청, 복수액, 골수액, 림프액, 타액, 누액, 점막액, 양수, 또는 이들의 조합인 것인 방법.
  9. 청구항 7에 있어서, 상기 측정하는 단계는 상기 생물학적 시료와 셀레노단백질 P 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하는 항체를 인큐베이션시키는 단계를 포함하는 것인 방법.
  10. 청구항 7에 있어서, 상기 측정하는 단계는 상기 생물학적 시료를 질량분석하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 생물학적 시료를 질량분석하는 단계는 온전한 단백질을 질량분석하는 것인 방법.
  12. 청구항 7에 있어서, 상기 측정된 셀레노단백질 P 또는 이의 단편의 발현 수준이 정상 대조군 시료의 단백질 발현 수준보다 높은 경우 임신성 당뇨병으로 판단하는 단계를 포함하는 방법.
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