KR102233425B1

KR102233425B1 - 비만의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR102233425B1
Application number: KR1020200157358A
Authority: KR
Inventors: 정재준; 성수현; 신창호; 장윤비
Original assignee: 주식회사 아리바이오
Priority date: 2020-11-23
Filing date: 2020-11-23
Publication date: 2021-03-30

Abstract

본 발명은 염지하수와, 댕댕이나무 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

Description

비만의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating obesity}

본 발명은 염지하수와, 댕댕이나무 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방, 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

비만은 심혈관계질환, 고혈압과 같은 다양한 치사성 대사 질환의 원인으로, 비만시 지방세포는 장기형 에너지원으로 지질을 저장할 뿐만 아니라 지방세포 및 비지방세포의 대사와 염증에 관여하는 다양한 아디포카인(adipokine)을 분비하여 만성 염증을 유발하고, 인슐린 저항성과 같은 관련 대사성 질환을 야기한다.

최근 들어, 전세계적으로 고열량의 식이 및 운동 부족으로 인한 비만으로 대사 증후군의 발병이 증가하고 있으며, 2025년에는 대사성 증후군 환자가 현재의 2배 즉, 대략 3억 명에 육박할 것으로 예측되고 있다.

복부 비만과 같이 비정상적인 국소 지방 축적에 의한 비만은 고혈압, 고지혈증, 혈액 응고 장애, 혈관 염증, 비정상적인 인슐린 분비증가를 동반한 인슐린 저항성과 같은 동맥 죽종상 병증을 심각하게 유발할 수 있는 다양한 원인을 제공하고, 최종적으로 치사적인 심혈관계 질환에 대한 유병율 증가의 요인이 된다.

한편, 염지하수란 물속에 녹아있는 염분 등 초용존고형물의 함량이 2,000mg/L이상인 암반대수층 안의 지하수로서 수질의 안전성을 계속 유지할 수 있는 자연 상태의 물을 먹는 용도로 사용할 원수를 말한다.(「먹는물관리법」 제3조제3의2호 및 「먹는물관리법 시행규칙」 제1조의2)

먹는 염지하수란 염지하수를 먹기에 적합하도록 물리적으로 처리하는 등의 방법으로 제조한 물을 말한다.(「먹는물관리법」 제3조제3의3호)

먹는 염지하수는 두 가지 공정을 거쳐 만들어지는데, 역삼투(RO) 방식으로 염분과 미네랄을 완전히 제거한 물에다 전기투석으로 염분만 제거한 물을 적당한 비율로 섞어 만들고 섞는 비율에 따라 미네랄 함량이 달라진다. 이 공정을 거치면 염분은 없어지고 미네랄은 남게 되는데, 이는 깊은 바닷물로 만든 해양심층수와 공정이 비슷하다. 염지하수는 일반적인 먹는 샘물보다는 미네랄 함량이 다소 많이 들어갈 예정이라 민감한 사람은 텁텁한 맛을 느낄 수 있다.

현재 본 발명의 출원인인 (주)아리바이오는 의료용 혼합음료 제조에 염지하수를 활용하고자 하는 연구를 수행하고 있고, 염지하수를 다양한 경도의 물로 제조하는 기술을 가지고 있으며, 미네랄을 농축하여 주입함으로서 기능성 물을 제조하는 기술을 가지고 있고, 최근에 댕댕이나무 열매 추출물의 항산화 및 비만 억제 효과에 관한 연구를 하여 개별인정형 기능성 원료로 승인을 받았으며, 댕댕이나무 열매 추출물의 효능으로는 비알콜성 간손상으로부터 간 건강에 도움을 주고, 항산화 효능과 좋은 콜레스테롤인 HDL도 증가 시킨다는 것을 확인하였다.

댕댕이 나무 열매에 대한 항산화 활성 및 성분 분석에 대한 연구가 많이 진행 되고 있지만 염지하수와 혼합하여 지방세포 분화 영향에 관련된 연구는 보고된 바가 없다.

따라서 본 발명의 출원인은 3T3-L1 지방세포에서 염지하수와 댕댕이나무 열매 추출물 혼합이 지방세포의 분화에 미치는 영향을 확인하여 비만의 예방 및 치료에 활용하기 위한 연구, 개발을 수행하였다.

대한민국 등록특허 제10-1813695호 대한민국 등록특허 제10-1896227호 대한민국 등록특허 제10-2038887호 대한민국 공개특허 제10-2019-0065084호 대한민국 공개특허 제10-2016-0052935호

본 발명은 상술한 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 염지하수와, 댕댕이나무 열매 추출물을 혼합함으로써, 염지하수와 댕앵이나무 열매 추출물을 단독으로 처리한 것에 비해 세포 내 지방 축적량을 줄일 수 있고, 지방세포의 분화를 억제할 수 있는 비만의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 염지하수와, 댕댕이나무 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방생성 억제용 조성물에 관한 것이다.

상기 염지하수에 함유된 칼슘 농도는 마그네슘 농도보다 높은 것을 특징으로 특징으로 하며, 일례로 칼슘과 마그네슘 농도비는 1 : 0.26~0.55인 것을 예시할 수 있다.

상기 조성물은 비만의 예방, 개선 또는 치료용 약제학적 조성물 또는 식품 조성물로 활용될 수 있다.

본 발명에서 "약제학적 조성물"은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이때, 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

또한, 본 발명은 염지하수와, 댕댕이나무 열매 추출물DMF 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은, 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 이 때 상기 건강기능식품 조성물은 비만의 예방 또는 개선을 위하여 해당 질환의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.

본 발명에서 "식품 조성물"은, 담체, 희석제, 부형제 및 첨가제 중 하나 이상을 포함하여 정제, 환제, 산제, 과립제, 분말제, 캡슐제 및 액제 제형으로 이루어진 군에서 선택된 하나로 제형된 것을 특징으로 한다.

본 발명은 염지하수와, 댕댕이나무 열매 추출물을 혼합함으로써, 염지하수와 댕앵이나무 열매 추출물을 단독으로 처리한 것에 비해 세포 내 지방 축적량을 줄일 수 있고, 지방세포의 분화를 억제함으로써, 비만의 예방 및 치료용도로 널리 쓰일 수 있다.

도 1a 내지 도 1d는 댕댕이 추출물에 의한 세포 생존률에 관한 것으로서, Differentiation 3T3-L1에 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독 처리와 댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합 후 48시간 처리하여 파장 450 nm에서의 흡광도 값을 백분율로 나타낸 것이다.(*p<0.05, **p<0.01처리군VS. 댕댕이 단독 처리군)
도 2a 내지 도 2d는 댕댕이 추출물에 의한 지방 생성 축적량을 나타낸 그래프로서, Differentiation 3T3-L1에 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독처리와 염지하수, 댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합 후 48시간 처리하여 파장 500 nm에서의 흡광도 값을 백분율로 나타낸 지방 생성 축적량에 관한 것이다. (*p<0.05, **p<0.01처리군 VS. 댕댕이 단독 처리군)
도 3a 내지 3d는 댕댕이 추출물에 의한 지방 생성 관련 유전자의 mRNA 발현 변화에 관한 그래프로서, Differentiation 3T3-L1에 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독 처리와 염지하수, 댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합 후 PPARγ의 mRNA발현을 ImageJ를 통해 산출한 양을 상대적으로 나타낸 것이다. (*p<0.05, ***p<0.001 처리군VS. 댕댕이 단독 처리군)
도 4a 내지 4d는 댕댕이 추출물에 의한 지방 생성 관련 유전자의 mRNA 발현 변화에 관한 그래프로서, Differentiation 3T3-L1에 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독 처리와 염지하수,댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합 후 C/EBPα의 mRNA발현을 ImageJ를 통해 산출한 양을 상대적으로 나타낸 것이다.(*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 처리군VS. 댕댕이 단독 처리군)
도 5a 내지 5d는 댕댕이 추출물에 의한 지방 생성 관련 유전자의 mRNA 발현 변화에 관한 그래프로서, Differentiation 3T3-L1에 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독 처리와 염지하수, 댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합 후 ADRP의 mRNA발현을 ImageJ를 통해 산출한 양을 상대적으로 나타낸 것이다.(*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 처리군VS. 댕댕이 단독 처리군)

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.

[실험예]

1. 실험 개요

(1) 실험 목적

본 실험은 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수를 단독 처리한 군과 염지하수와 댕댕이나무 열매 추출물 혼합 처리한 군에 의한 지방세포 분화에 미치는 영향을 확인하는 것을 목적으로 한다.

(2) 분석 조건

- Cell Viability Test : Colorimetric Analysis, Wave Length: 450 nm

- Oil Red O Staining : Colorimetric Analysis, Wave Length: 500 nm

- Real-time PCR : QuantStudio5 (Applied Biosystems) PCR

(3) 필요 시약

- Cell Viability Test: Cell Counting Kit-8 (Dojindo Molecular Technologies, Cat# CK04-11)

- Oil Red O Staining: Oil Red O (Sigma-Aldrich, Cat# O0625).

- Real-time PCR: Easy-BLUE™ Total RNA Extraction Kit (iNtRON, Cat# 17061), PrimeScript™II 1st strand cDNA Synthesis Kit (TaKaRa, Cat# 6110A), Power SYBR Green PCR Master Mix (Thermo, Cat# 4367659)

(4) 처리군은 아래 표 1에 기재된 바와 같다.

아래 표 1에서 염지하수는 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 서로 다르게 구성하였다.

아래 표 1에서 댕댕이나무 열매 추출물은 댕댕이나무열매를 45 내지 55℃에서 3분 동안 가열하고 분쇄기로 분쇄하고, 댕댕이나무열매의 0.05 중량%의 펙티네이즈(pectinase, 독일 Weissbiotch)를 처리한 다음, 4,000rpm으로 연속원심분리하여 껍질과 씨를 제거하고, 원심분리액에 키토산 및 구아검을 각각 0.005% 비율로 첨가하였다. 그 다음, 1500 rpm/분 조건으로 필터프레스 여과하고, 50℃ 및 0.092MPa의 조건에서 1분 간 65brix로 감압농축하였다. 그 다음, 90 내지 95℃에서 15 내지 30초 살균하고, -40℃, 5 내지 10mmHg, 48시간 동결건조한 것을 사용하였다.

2. 실험 방법

2.1. 세포 계대 배양

① 3T3-L1세포를 T175 Flask에 접종하고 페니실린 (100 U/mL) 및 스트렙토마이신 (100 μg/mL), 10% BCS (Newborn Calf Serum, Hyclone, Cat# SH30401.01, USA) 를 함유하는 DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium) 배지를 이용하였다.

② 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기내에서 37 ℃를 유지하여 배양하였다.

2.2. 3T3-L1 지방세포의 분화

① T25 Flask에 1.5x10⁵개/well의 수로 접종함. 세포 배양조건에서 48 시간 배양하였다.

② 100% Confluency에 도달하면 그 후 48 시간을 더 배양하였다.

③ 피펫을 이용하여 배지를 제거하고 세포를 1XDPBS로 세척한 다음 10% FBS (Fetal Bovine Serum Hyclone, Cat# SH30109.03, USA)을 함유하는 DMEM/F12 (1:1) (Hyclone, Cat# SH30023.01) 배지에 5 μg/mL Insulin, 1 μM Dexamethasone 및 0.5 mM 3-Isobutyl-1-Methylxanthin (IBMX)를 넣은 분화 배지로 교환하여 3일간 배양하였다.

④ 그 후 2일 동안 5 μg/mL Insulin이 포함된 배지로 배양하였고, 다시 2일 동안 Maintenance 배지 (DMEM/F12 (1:1), FBS 10%, P/S 1%)로 교체하였다.

2.3. 염지하수 및 댕댕이 추출물의 준비 및 처리 방법

① DMEM/F12 Powder(Hyclone, Cat# SH30004.04) 780 mg 에 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수와 D.W를 각 50 mL Tube에 넣어 녹였다.

② pH 7 을 맞추기 위해 NaHCO₃ 300 mg 을 첨가하였다.

③ 분화시작 2일째, DMEM/F12 Powder에 5 μg/mL Insulin, 1 μM Dexamethasone 및 0.5 mM 3-Isobutyl-1-Methylxanthin (IBMX) 넣은 분화 배지를 만들었다.

④ 염지하수로 만든 배지에 댕댕이 추출물을 750 μg/mL로 녹였다.

⑤ 기존 세포 배양액은 버리고 염지하수로 만든 배지와 댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합하여 세포에 처리하였다.

⑥ 그리고 48시간 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다.

⑦ 그 후 3T3-L1 지방세포의 분화 방법에 따라 실험을 진행하였고, 세포 독성을 확인 후 농도 설정을 하여 다음 실험에 적용하였다.

2.4. 세포 생존률 측정: CCK-8 (WST-8) Assay

① 분화시작 2일째 되는 날에 DMEM/F12 Powder를 사용해서 만들어 놓은 배양액에 5 μg/mL Insulin, 1 μM Dexamethasone 및 0.5 mM 3-Isobutyl-1-Methylxanthin (IBMX) 넣은 분화 배지로 교체하였다.

② 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독 처리와 염지하수, 댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합하여 세포에 처리하였다.

③ 그리고 48시간이 되면 각 Group의 배양액을 제거하였다.

④ DMEM/F12 Medium (1% Penicillin/Streptomycin) 100 μL + CCK-8 Solution 10 μL 을 넣고 2시간 동안 배양기에서 배양하였다.

⑤ Varioskan LUX Multimode Microplate Reader (Thermo Fisher Scientific)기를 통해, 450 nm에서 흡광도를 측정하고 흡광도 값을 통해 세포 생존율을 계산하였다.

2.5. 세포 내 지방량 측정: Oil Red O Staining

① 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독 처리와 염지하수, 댕댕이 추출물 750 μg/mL을 혼합하여 Differentiation 3T3-L1 Cell에 처리하였다.

② 분화가 완료된 Cell을 PBS로 두 번 세척한 후 10% Formalin (Sigma-Aldrich, Korea)으로 1시간동안 고정하였다.

③ 증류수로 두 번 세척한 이후 60% Iso-Propanol에 5분간 처리하고, 증류수로 두 번 세척한 이후 Oil Red O Solution을 30분간 실온에서 염색하였다.

④ 증류수를 이용하여 4번 이상 세척하고 현미경을 통해 관찰하였다.

⑤ 이후 지질 축적량을 측정하기 위해 60% Iso-Propanol을 이용하여 2번 이상 세척해준 뒤 100% Iso-Propanol 100 μL에 30분간 추출하였다.

⑥ 96 Well Plate에 옮겨 담아 Plate Reader기를 이용하여 500 nm에서 흡광도를 측정하였다.

2.6. 지방세포 분화 (Adipogenesis) 관련 유전자의 mRNA 발현 변화 확인: Real-time PCR

① Differentiation 3T3-L1 Cell에 T25 Flask 1개당 1 mL의 Trizol을 처리 후 1.5 ml E-Tube에 옮겨 0.2 mL의 Chloroform 첨가한 후 1분간 Vortexing한 뒤 상온에서 2분간 보관하였다.

② 12,000g, 4℃에서 15분간 원심 분리 한 이후 상등액 400 μL를 분리하였다.

③ 분리한 상등액에 Iso-Propanol 0.5 mL를 첨가한 후 상온에서 10분간 처리한 이후 12,000g, 4 ℃에서 원심 분리하여 상등액을 버리고 Pellet을 취하였다.

④ Pellet에 75% EtOH 1 mL를 넣어준 후 7,500g, 4 ℃에서 원심 분리하는 Washing 과정을 2회 반복하였다.

⑤ 상등액은 모두 버리고 RNA Pellet을 건조 시킨 이후 10 μL DEPC Water에 녹여 PrimeScript™ 1^st, 2^st Strand cDNA Synthesis Kit를 이용하여 cDNA를 합성하였다.

⑥ 그 후 cDNA는 Power SYBRTM Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, USA)와 아래의 Primer를 사용하여 Mouse PPAR-γ, C/EBP-α, ADRP 및 β-Actin PCR을 진행하였다.

⑦ QuantStudio5 (Applied Biosystems) PCR 기계를 사용하였으며, 총 3 Step Method로 설정하여 진행하였다.

⑧ 가장 먼저 Hold Stage에서 50.0℃에서 2분간 두어 Polymerase를 활성화 시킨 후 95.0℃에서 10분 동안 Pre-denaturation 단계를 거쳤다.

⑨ PCR Stage에서는 95.0℃에서 15초간 Denaturation, PPAR-γ, C/EBP-α, ADRP 및 β-Actin 은 62.0℃에서 30초간 Annealing 그리고 72℃에서 30초간 Extension을 진행시키며 총 40 cycle을 반복하였다.

⑩ 이때 시료의 형광을 Extension 단계에서 확인하고 모든 cycle이 완료된 후에는 Melt Curve Stage를 거치며 이는 72℃에서부터 초당 1.6℃로 95℃까지 형광을 계속 측정하였다.

⑪ 결과는 QuantStudio5 Design and Analysis Software을 사용하였다.

아래 표 2는 Real-time PCR을 위한 지방 생성 관련 유전자의 프라이머 서열을 나타낸 것이다.

Gene	FORWARD PRIMER (5'→ 3')	REVERSED PRIMER (5'→ 3')	Tm	Size
PPAR-γ	CAG GCC TCA TGA AGA ACC TTC T	GCT TCA ATC GGA TGG TTC TTC G	62℃	140
C/EBP-α	GAC ATC AGC GCC TAC ATC GA	CCC GGG TAG TCA AAG TCA CC	62℃	143
ADRP	GGT GGA TAA GAC CAA AGG AGC A	CCT CCT GAG TGA GAG GGA AGT A	62℃	179
β-Actin	AGA AGC TGT GCT ATG TTG CTC T	AGT TTC ATG GAT GCC ACA GGA T	62℃	191

2.7. 통계 처리

본 실험은 3회 반복을 시행하였으며 통계학적 분석방법은 Student's T-Test를 사용하였다. 모든 유의성 검증은 P < 0.05, P < 0.01 그리고 P < 0.001 수준에서 이루어졌다.

3. 실험 결과

(1) Cell Viability Test

1) 1차 실험 결과는 아래 표 3 및 도 1a에 나타내었다.

2) 2차 실험 결과는 아래 표 4 및 도 1b에 나타내었다.

3) 3차 실험 결과는 아래 표 5 및 도 1c에 나타내었다.

4) 1차 내지 3차 실험에 대한 종합 결과는 아래 표 6 및 도 1d에 나타내었다.

표 3 내지 표 6 및 도 1에 나타난 바와 같이 염지하수와 댕댕이 혼합물의 칼슘 농도가 높고 마그네슘 농도가 낮은 곳에서 세포 생존률은 p<0.05 수준에서 댕댕이 단독 처리군과의 유의미한 차이가 없음을 확인하였다. 그리고 염지하수 단독 처리 및 댕댕이 혼합물에서는 세포 독성이 보이지 않았다.

(2) Oil Red O Staining: Lipid Accumulation Measurement

1) 1차 실험 결과는 아래 표 7 및 도 2a에 나타내었다.

2) 2차 실험 결과는 아래 표 8 및 도 2b에 나타내었다.

3) 3차 실험 결과는 아래 표 9 및 도 2c에 나타내었다.

4) 1차 내지 3차 실험에 대한 종합 결과는 아래 표 10 및 도 2d에 나타내었다.

표 7 내지 표 10 및 도 2을 참조하면, 칼슘 농도와 마그네슘 농도가 다른 염지하수 단독 처리한 처리군과 염지하수와 댕댕이 추출물 750 μg/mL 혼합 후 처리한 처리군에 지방분화를 유도한 결과, 칼슘 농도가 높을 수록 마그네슘 농도가 낮을수록 지방 생성이 억제된다는 것을 확인할 수 있었다.

또한, Control과 비교할 때 염지하수, 댕댕이 추출물 750 μg/mL혼합에서의 지방 생성 억제 p<0.05, p<0.01 수준에서 유의미한 차이를 확인하였다.

결론적으로 염지하수 단독 처리군 및 댕댕이 단독 처리군 보다 염지하수와 댕댕이 추출물 750 μg/mL 혼합한 처리군에서의 지방 생성 억제 효과가 크다는 것을 확인할 수 있었다.

(3) Real-time PCR

1) PPARγ Real-time PCR

- 1차 실험 결과는 아래 표 11 및 도 3a에 나타내었다.

- 2차 실험 결과는 아래 표 12 및 도 3b에 나타내었다.

- 3차 실험 결과는 아래 표 13 및 도 3c에 나타내었다.

- 1차 내지 3차 실험에 대한 종합 결과는 아래 표 14 및 도 3d에 나타내었다.

표 11 내지 표 14 및 도 3을 참조하면, PPARγ의 mRNA 발현양이 가장 적은 것은 염지하수와 댕댕이 추출물을 혼합한 것이라는 것을 확인할 수 있었다.

2) C/EBPα Real-time PCR

- 1차 실험 결과는 아래 표 15 및 도 4a에 나타내었다.

- 2차 실험 결과는 아래 표 16 및 도 4b에 나타내었다.

- 3차 실험 결과는 아래 표 17 및 도 4c에 나타내었다.

- 1차 내지 3차 실험에 대한 종합 결과는 아래 표 18 및 도 4d에 나타내었다.

표 15 내지 표 18 및 도 4를 참조하면, C/EBPα의 mRNA 발현양이 가장 적은 것은 염지하수와 댕댕이 추출물을 혼합한 것이라는 것을 확인할 수 있었다.

3) ADRP Real-time PCR

- 1차 실험 결과는 아래 표 19 및 도 5a에 나타내었다.

- 2차 실험 결과는 아래 표 20 및 도 5b에 나타내었다.

- 3차 실험 결과는 아래 표 21 및 도 5c에 나타내었다.

- 1차 내지 3차 실험에 대한 종합 결과는 아래 표 22 및 도 5d에 나타내었다.

표 19 내지 표 22 및 도 6을 참조하면, ADRP의 mRNA 발현양이 가장 적은 것은 염지하수와 댕댕이 추출물을 혼합한 것이라는 것을 확인할 수 있었다.

결론적으로, Real-time PCR을 통한 지방세포 분화와 관련된 유전자의 mRNA 발현 변화를 확인한 결과, 지방 세포 분화를 조절하는 인자들인 PPARγ, C/EBPα 그리고 ADRP의 mRNA 발현이 칼슘 농도가 높을수록, 마그네슘 농도가 낮을수록 지방 생성 억제되는 것을 확인할 수 있었다.

그리고 Control과 비교하였을 시, 염지하수, 댕댕이 추출물 750 μg/mL 혼합 처리한 처리군에서의 지방 생성 억제 성능이 p<0.05, p<0.01, p<0.001 수준에서 유의미한 차이를 확인하였다.

염지하수 단독 처리군 및 댕댕이 단독 처리군 보다 염지하수와 댕댕이 추출물 750 μg/mL 혼합한 처리군에서의 지방 생성 억제 효과가 가장 컸다.

이상에서 설명된 본 발명은 예시적인 것에 불과하며, 본 발명이 속한 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 잘 알 수 있을 것이다. 그러므로 본 발명은 상기의 상세한 설명에서 언급되는 형태로만 한정되는 것은 아님을 잘 이해할 수 있을 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호 범위는 첨부된 특허청구범위의 기술적 사상에 의해 정해져야 할 것이다. 또한, 본 발명은 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 정신과 그 범위 내에 있는 모든 변형물과 균등물 및 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

Claims

염지하수와 댕댕이나무 열매 추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 염지하수에 함유된 칼슘 농도는 1.5 내지 2.5mM이고 상기 염지하수에 함유된 마그네슘 농도는 4.5 내지 5.5mM인 것을 특징으로 하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물.
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