KR102227709B1

KR102227709B1 - 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR102227709B1
Application number: KR1020190041283A
Authority: KR
Inventors: 최학주
Original assignee: 최학주
Priority date: 2019-04-09
Filing date: 2019-04-09
Publication date: 2021-03-12
Also published as: KR20200119011A

Abstract

본 발명은 바실러스 균주 배양 호소액과 식물성 효소액을 혼합한 것을 이용하여 녹용을 발효시킨 발효 녹용 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 녹용을 열수 추출한 것을 바실러스 균주 배양액과 혼균액을 혼합시킨 혼합효소액으로 발효시킨 것을 유효성분으로 포함하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 녹용을 세절한 후 열수 추출하는 과정으로 녹용 열수 추출물을 형성하는 과정(1과정),
바실러스 균주 배양액에 혼균액을 혼합한 혼합효소액을 준비하는 과정(2과정),
상기한 녹용 열수 추출물에 상기한 혼합효소액을 투입하여 20-40도씨 온도에서 24-72시간 배양하는 과정을 수행하여 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물을 제조하는 과정(3과정),
을 포함하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 바실러스 균주 배양액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)이고,
상기한 혼균액은 균주 유래 효소액과 식물 유래 효소액을 혼합한 효소액으로 구성되고,
상기한 균주 유래 효소액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis), 바실러스 카제이(Bacillus Casei), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryze)를 하나 또는 둘 이상을 혼합한 것이고,
식물성 효소액은 파인애플 효소액 또는 파파야 효소액을 단독 또는 혼합한 것을 특징으로 하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 제조방법을 제공한다.

Description

면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 및 이의 제조방법{a fermented antler composite with the function of the immunity boosting and the production method}

본 발명은 바실러스 균주 배양액과 식물성 효소액이 포함된 혼균액을 혼합한 것을 이용하여 녹용을 발효시킨 발효 녹용 조성물에 관한 것이다.

녹용(antler, Cervus cornu parvum)은 매화록(Cervus nippon Temminck) 또는 마록(Cervus elaphus Linnaeus)및 동속 근연동물의 털이 밀생되고 골질화되지 않은 어린 뿔로 동양의학의 중요 약재로 중국 및 일본 등의 동양권 국가에서 오래 전부터 활용되고 있는 양록산업의 주 생산물이다. 녹용은 전 세계 생산량의 80%를 한국에서 소비한다고 알려져 있는데(Choi et al., 2005), 현재 국내에서 이용되는 녹용(녹각도 포함한다)은 대부분 수입에 의존하고 있으며, 2000년에 의약용으로 녹용 159톤을 수입하여 1,600만 달러가 지출되었고, 국내 생산 생녹용은 75 kg에 불과한 실정이다. 한국은 전세계에서 가장 큰 녹용 수입국으로, 대부분 국내에서 소비되고 있다.

녹용은 인삼과 더불어 오래 전부터 가장 대표적인 강장 생약재로 한국, 중국, 일본을 중심으로 애용되어 왔으며, 현대에 와서 녹용에는 혈압강하, 조혈기능, 고콜레스테롤 혈증 개선, 항스트레스 효과가 있다는 것이 밝혀지고 있다(Kim and Park, 1982; Yong, 1976; Han 1970; Kang and Kim, 1989) 인삼, 녹용과 같이 강장효과를 가진 생약재의 약성은 특정 장기에만 선택적으로 작용하여 강한 효과를 나타내는 것이 아니라 비록 그 효과는 단일 성분 의약품에 비해 약하나 신체 전반에 걸쳐 복합적으로 효능을 나타내는 것이 특징이다(Kim et al.,1994)

최근들어 녹용의 생리활성 성분에 대한 활발한 연구가 진행되고 있는데, 녹용 추출물은 면역기능 증진, 항산화, 항피로, 항혈전, 항노화, 혈압강하, 항염증작용 등 매우 다양한 효능이 있는 것으로 보고되었다(Cho 등, 2005).

그러나, 녹용은 설사 등의 부작용이 있어, 한방에서 수렴작용이 있는 한약과 병용하여 사용하게 되며, 이 경우 기대했던 효과가 상실되거나 감소될 수 있다. 또한, 한방의 유용한 자원인 녹용은 한약에 이용하기 위해 알코올에 담근 후, 이를 세절하여 사용하게 되는데, 이 과정에서 녹용의 많은 유효성분이 소실되는 문제점이 있다.

이와 같은 문제점으로 등록특허 (10-1184359, 이하 선행기술) "바실러스 서브틸리스 ＫＣＴＣ 11454 ＢＰ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 항산화 및 성장촉진용 조성물 및 그 제조방법"은 "바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용의 추출물을 유효성분으로 함유하는 성장촉진용 식품 조성물"을 제공한바 있다.

상기한 선행기술은 발효녹용의 유효성분 효율을 높이고 새로운 약리작용을 일으키기 위하여, 녹용을 발효시킬수 있는 바실러스 속 미생물을 분리하고자 본 연구를 수행한 결과, 된장으로부터 새롭게 분리한 균주인 바실러스 서브틸리스(Bacilllus subtilis) KCTC 11454BP로 녹용을 발효시킬 경우 종래의 바실러스 서브틸리스 균주에 비하여 발효추출물의 수율이 훨씬 높고 유효성분의 함량을 크게 증가시킬 수 있다는 것을 발견하였고, 또한 이러한 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 로 발효시킨 녹용 발효물에 대하여 연구를 계속한 결과, 상기 녹용 발효물이 자유 라디칼 소거능이 높고 환원형 글루타티온 함량을 증가시킨다는 것을 알아내었으며, 상기 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용 발효물이 성장호르몬 및 ALP 등을 증가시킴으로써, 성장촉진 효과가 있다는 것을 확인하였다고 보고 한바 있다.

상기한 선행기술은 항산화 활성 및 성장촉진 기능을 갖으며 그에 따라 이러한 조성물을 포함하는 식품 조성물 및 약학적 조성물은 항산화를 통한 노화 방지, 건강증진에 도움이 되며 성장기 어린이의 성장촉진에 효과가 있기는 하지만, 여전히 녹용을 발효시켜 추출한 조성물에 면역 기능성이 현저히 미흡한 점이 많이 있는 문제점이 있다.

따라서 본 발명은 바실러스 균주 배양액과 혼균액을 혼합한 새로운 형태의 발효 미생물을 이용하여 녹용을 발효시킴으로써 선행기술에 비하여 이질적인 면역효과가 있으며, 더불어 종래기술보다 면역효과가 현저히 높은 발효 녹용 조성물 및 이의 제조방법을 제공하고자 한다.

본 발명은 상기한 선행기술의 문제점 및 요구를 해결하기 위하여,

녹용을 열수 추출한 것을 바실러스 균주 배양액과 혼균액을 혼합시킨 혼합효소액으로 발효시킨 것을 유효성분으로 포함하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 녹용을 세절한 후 열수 추출하는 과정으로 녹용 열수 추출물을 형성하는 과정(1과정),

바실러스 균주 배양액에 혼균액을 혼합한 혼합효소액을 준비하는 과정(2과정),

상기한 녹용 열수 추출물에 상기한 혼합효소액을 투입하여 20-40도씨 온도에서 24-72시간 배양하는 과정을 수행하여 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물을 제조하는 과정(3과정),

을 포함하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 제조방법을 제공한다.

또한 본 발명은 상기한 바실러스 균주 배양액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)이고,

상기한 혼균액은 균주 유래 효소액과 식물 유래 효소액을 혼합한 효소액으로 구성되고,

상기한 균주 유래 효소액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis), 바실러스 카제이(Bacillus Casei), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryze)를 하나 또는 둘 이상을 혼합한 것이고,

식물성 효소액은 파인애플 효소액 또는 파파야 효소액을 단독 또는 혼합한 것을 특징으로 하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물은 바실러스 균주 배양액과 혼균액을 혼합한 새로운 형태의 발효 미생물을 이용하여 녹용을 발효시킴으로써 면역 기능 효과가 현저히 높게 나타나는바 이는 선행기술이 항산화 활성 및 성장촉진 기능을 가진 것에 비하여 면역 기능 효과가 있어 매우 이질적인 효과가 있고, 더불어 녹용을 발효시키지 않고 추출한 녹용 조성물에 비하여 면역 기능의 효과가 현저히 높은 특징을 가지고 있다.

도 1 내지 도 17은 본 발명에 따른 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물의 면역 기능에 대한 실험 결과를 보여주는 도면이다.

이하 본 발명을 도면을 참고하여 상세히 설명하고자 한다.

본 발명은 녹용을 열수 추출한 것을 바실러스 균주 배양액과 혼균액을 혼합시킨 혼합효소액으로 발효시킨 것을 유효성분으로 포함하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기한 혼균액은 균주 유래 효소와 식물 유래 효소를 혼합한 효소액을 의미한다.

본 발명의 기술적 특징은 상기한 바실러스 균주 배양액과 혼균액을 혼합한 혼합효소액으로 녹용을 발효시킨 점에 있는 것으로서, 이와 같은 혼합효소액으로 발효시킨 녹용 조성물은 면역 기능을 현저히 증진시키는 기능을 수행한다.

본 발명의 상기한 혼합효소액은 바실러스 균주 배양액 100 중량부에 혼균액 5~110 중량부를 혼합한 것을 의미한다.

본 발명의 기술적 특징은 상기한 바실러스 균주 배양액에 있는 것으로서, 바실러스 균주 배양액은 본 발명의 발명자가 개발한 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)를 이용하여 배양한 균주 배양액을 의미한다.

상기한 바실러스 균주 배양액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)를 20~30도씨에서 24~72시간 배양한 것을 원심분리한 배양액을 의미한다.

상기한 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)는 국립농업과학원 미생물은행(KACC)에 기탁되어 있으며 수탁번호는 KACC92007P 이다.

또한 본 발명은 상기한 혼균액은 균주 유래 효소액과 식물 유래 효소액을 혼합한 효소액을 의미한다.

바람직하게는 균주 유래 효소 100중량부에 식물 유래 효소 50~150중량부를 혼합한 것이 효율적이다.

본 발명의 균주 유래 효소는 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis), 바실러스 카제이(Bacillus Casei), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryze)를 하나 또는 둘 이상을 혼합한 것을 의미한다.

바람직하게는 균주 유래 효소는 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) 100중량부에 바실러스 카제이(Bacillus Casei) 50~150중량부, 아스퍼질러스 카제이(Aspergillus casei) 50~150중량부를 혼합하여 사용하는 것이 좋다.

또한 상기한 식물성 효소액은 파인애플 효소액 또는 파파야 효소액을 하나 또는 둘 이상을 혼합한 것을 의미한다.

바람직하게는 식물성 효소액은 파인애플 효소액 100중량부에 파파야 효소액 50~150중량부를 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명은 녹용을 세절한 후 열수 추출하는 과정으로 녹용 열수 추출물을 형성하는 과정을 수행한다.(1과정)

본 발명은 바실러스 균주 배양액에 혼균액을 혼합한 혼합효소액을 준비하는 과정을 수행한다(2과정)

바람직하게는 바실러스 균주 배양액 100 중량부에 혼균액 5~110 중량부를 혼합한 혼합효소액을 준비하는 과정을 수행한다.

본 발명의 기술적 특징인 바실러스 균주 배양액은 본 발명의 발명자의 특허미생물인 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)를 이용한 것으로서 이와 같은 미생물을 포함하여 녹용을 발효시키는 경우 발효 하지 않은 녹용보다 면역 효과를 현저히 증진시키는 특징이 있다.

본 발명의 상기한 혼균액은 균주 유래 효소액과 식물 유래 효소액을 혼합한 효소액을 의미한다.

바람직하게는 균주 유래 효소액 100중량부에 식물 유래 효소액 50~150중량부를 혼합한 것이 효율적이다.

본 발명의 균주 유래 효소액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis), 바실러스 카제이(Bacillus Casei), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryze)를 하나 또는 둘 이상을 혼합한 것을 의미한다.

바람직하게는 균주 유래 효소액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) 100중량부에 바실러스 카제이(Bacillus Casei) 50~150중량부, 아스퍼질러스 카제이(Aspergillus casei) 50~150중량부를 혼합하여 사용하는 것이 좋다.

상기한 파인애플 효소액 또는 파파야 효소액은 파인애플 또는 파파야에 설탕을 혼합하여 발효시킨 액을 의미한다.

상기한 식물성 효소액을 제조하는 경우, 식물성 효소액 제조 원료인 파인애플 또는 파파야에 친환경 기능 첨가물을 포함시켜 파인애플 효소액 또는 파파야 효소액으로 발효되게 되는 겨우 효소의 기능과 작용을 현저히 상승시키는 작용을 하게 한다.

상기한 파앤애플 효소액 또는 파파야 효소액은 식물 유래 효소로서 균주 유래 효소와 혼합되어 혼균액을 형성하는 경우 발효 효능이 떨어지는 문제점이 발생할 수 있다.

따라서 이러한 파앤애플 또는 파파야에 친환경 기능 첨가물을 포함시켜 발효시켜 제조된 파인애플 효소액 또는 파파야 효소액은 발효 기능과 작용이 현저히 상승되는 작용을 하게 하여 결과적으로 균주 유래 효소 및 바실러스 균주 배양액과 혼합된 혼합효소액의 녹용 열수 추출물의 발효 효능을 현저히 상승시키는 작용을 하게 된다.

본 발명의 친환경 기능 첨가물은 파인애플 또는 파파야 100중량부에 2~5 중량부를 혼합하는 것이 좋다.

상기한 친환경 기능 첨가물은 삼초, 지부자, 황백, 방기, 백지, 교맥, 백선피를 혼합하여 추출한 조성물을 의미한다.

바람직하게는 친환경 기능 첨가물은 삼초 100중량부에 지부자 80~120중량부, 황백 80~120중량부, 방기 80~120중량부, 백지 80~120중량부, 교맥 80~120중량부, 백선피 80~120중량부를 혼합하여 추출한 조성물을 의미한다.

상기한 친환경 기능 첨가물을 추출하는 방법으로는 상기의 혼합한 원재료 100 중량부에 70~85%[질량%] 에탄올 800~1000중량부를 넣고, 2~4시간 동안 환류 추출 하고 난 후 그 여액을 rotary evaporator를 이용하여 감압, 농축하는 방법으로 추출할 수 있으며 원재료 100중량부를 기준으로 천연 첨가물을 약 30~120중량부 정도를 수득할 수 있다.

또한 본 발명은 상기한 식물성 효소액의 재료인 파인애플 또는 파파야에 천연 개선 첨가물을 첨가하여 식물성 효소액을 제조하는 경우 식물성 효소의 항균력과 면역력이 개선되어 식물성 효소액의 면역성 증진 및 효소 기능이 현저히 증진되게 된다.

본 발명의 천연 개선 첨가물은 파인애플 또는 파파야 100중량부에 2~5 중량부를 혼합하는 것이 좋다.

본 발명의 상기한 천연 개선 첨가물은 천궁, 형개, 방풍, 신이, 세신을 혼합하여 추출한 조성물을 의미한다.

상기한 천연 개선 첨가물은 천궁 100중량부에 형개 80~120중량부, 방풍 80~120중량부, 신이 80~120중량부, 세신 80~120중량부를 혼합하여 추출한 조성물을 의미한다.

상기한 천연 개선 첨가물을 추출하는 방법은 상기한 친환경 기능 첨가물을 추출하는 방법과 동일한 방법으로 수행할 수 있다.

본 발명은 상기한 녹용 열수 추출물에 상기한 혼합효소액을 투입하여 20-40도씨 온도에서 24-72시간 배양하는 과정을 수행하여 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물을 제조하는 과정을 수행한다.(3과정)

본 발명은 상기한 과정으로 추출한 발효 녹용 조성물을 아래와 같은 실시예와 실험으로 면역 증강 기능이 현저히 높음을 알 수 있다.

<실시>

Ⅰ. 녹용 발효 조성물 제조

녹용을 세절한 후 열수 추출하여 여과한 후 바실러스 균주 배양액, 혼균액을 50 : 50비율로 혼합하여 20-40도씨 온도에서 24-72시간 배양한 후 발효 녹용 조성물을 만들었다.

상기한 바실러스 균주 배양액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)를 20~30도씨에서 24~72시간 배양한 것을 원심분리하여 수득한다.

상기한 혼균액은 균주 유래 효소액 100중량부에 식물 유래 효소액 100중량부를 혼합하여 조성한다.

상기한 균주 유래 효소액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis), 바실러스 카제이(Bacillus Casei), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryze)를 균등하게 혼합한 것이고,

식물성 효소액은 파인애플 효소액과 파파야 효소액을 균등하게 혼합한 것을 사용하였다.

상기의 발효 녹용 조성물로 아래의 동물 실험을 실시하였다.

Ⅱ. 실험 내용

1. 실험방법

1) 동물 및 사료

① 본 실험을 위하여 사용된 ICR mouse (6주령, 수컷, 23∼28 ｇ)는 ㈜샘타코 (Korea)에서 구입하여 사용하였다. 실험동물은 1주간의 안정기를 가지면서 순화를 시켰으며, 안정기 및 실험기간에 모든 실험군에는 일반 사료 (Altromin, Germany)를 자유식이 하며 물을 충분히 공급하였다. 1주간의 안정기 이후 7주령부터 동물 실험을 진행하였다. 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 22±2℃, 1일 중 12시간은 200-300 Lux로 조명하고, 12시간은 모든 빛을 차단하였다. 본 실험은 대전대 동물실험윤리 위원회의 승인 (승인번호 DJUARB2018-010)을 받아 동물윤리준칙에 의거하여 실험하였다.

② 시약

사용된 시약은 Cyclophosphamide (Sigma, U.S.A.), PBS (Welgene Inc., Korea), Ethyl ether (Samchun, Korea), Microtainer® tube with Dipotassium EDTA (BD Co., U.S.A.), Mouse immunoglobulin isotyping multiplex assay kit (Millipore Co., U.S.A.), Mouse cytokine milliplex map immunoassay kit (Millipore, U.S.A.) 등을 사용하였다.

③ 기기

사용된 기기는 deep freezer (Sanyo, Japan), autoclave (Sanyo, Japan), vortex mixer (Vision scientific, Korea), centrifuge (Sigma, U.S.A.), ice-maker (Vision scientific, Korea), plate shaker (Lab-Line, U.S.A.), Luminex (Millipore, U.S.A.) 등을 사용하였다.

2) 면역 억제 유도 및 시료 처리

7주령이 된 ICR mouse 복강에 면역억제제 (Cyclophosphamide)를 150 ㎎/㎏ 농도로 100 ㎕씩 실험 시작일과 시작 3일후에 주사하여 면역 억제를 유도하였다. 아무것도 처지하지 않는 정상군과 면역 억제제 처리 후 증류수를 투여하는 대조군, 면역 억제제 처리 후 S-0.5, 발효전, 발효후를 각각 200 ㎕씩 투여하는 실험군 등 총 5개의 그룹으로 나누어 매일 1회, 오후 2시에 oral zonde를 이용하여 14일간 경구 투여하였다.

3) 면역세포 측정

실험 종료 후 심장 천자법을 이용하여 혈액을 채취하여 EDTA 튜브에 담아 백혈구 및 호중구, 호산구, 호염기구, 단핵구, 림프구 수를 대전대학교 한방바이오 Fablab에 분석 의뢰 하였다.

4) 면역글로불린 측정

실험 종료 후 분리한 혈청과 standard를 96 well plate에 50 ㎕씩 분주하고 anti-mouse multi-immunoglobulin beads를 각 25 ㎕씩 가하여 혼합하여 15분 동안 실온에서 빛을 차단한 채 반응시키고 washing 완충 용액을 이용하여 2회 세척하였다. 이 후 25 ㎕의 anti-mouse κ*?*Light Chain, PE를 가하여 15분 동안 실온에서 빛을 차단한 채 반응시키고 PBS를 150 ㎕ 넣고 5분 간 shaking한 후 Luminex를 이용하여 측정하였다.

5) 사이토카인 측정

실험 종료 후 분리한 혈청과 standard를 96 well plate에 25 ㎕씩 분주하고 assay buffer 및 matrix buffer, antibody-immobilized beads를 각 25 ㎕씩 가하여 혼합한 후 2시간 동안 실온에서 반응시키고 washing 완충 용액을 이용하여 2회 세척하였다. 세척 후 25 ㎕의 detection antibody을 가하여 1시간 동안 실온에서 반응시키고 추가로 25 ㎕의 Streptavidin-Phycoerythrin을 가하여 30분 동안 실온에서 반응시킨 뒤 washing 완충 용액을 이용하여 2회 세척하였다. 세척 후 PBS를 150 ㎕ 넣고 5분 간 shaking한 후 Luminex를 이용하여 측정하여 절대 값으로 나타내었다.

6) 통계처리

실험 결과는 SPSS 24.0의 independent two-sample t-test를 사용하여 통계처리 하였고 p＜0.05, p＜0.01 및 p＜0.001 수준에서 그 유의성을 검정하였다.

Ⅲ. 실험결과

1. 면역세포

1) 백혈구

정상군은 3.4±0.2 ×10³ cells/㎕, 대조군은 2.0±0.8 ×10³ cells/㎕로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 2.4±0.2 ×10³ cells/㎕, 2.5±0.4 ×10³ cells/㎕로 나타나 발효 후 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05) 증가가 나타났다(도. 1).

(도 1 도표 내용, 이하 동일함)

정상군 : Non treated ICR mice(정상적인 쥐)

대조군 : immunosuppression mice group was treated orally with DW(면역억제 처리된 쥐를 증류수로 처리한 군)

발효전 : cyclophosphamide-induced immunosuppression mice group was treated orally with 녹용추출물(면역억제 처리된 쥐를 녹용추출물로 처리한 군)

발효후 : cyclophosphamide-induced immunosuppression mice group was treated orally with 발효 녹용 조성물(면역억제 처리된 쥐를 발효 녹용 조성물로 처리한 군))

2) 호중구

정상군은 14.1±2.4%, 대조군은 23.9±1.9%로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 18.7±1.3%, 17.6±1.3%로 나타나 발효전, 발효후 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (** : p＜0.01) 감소가 나타났다(도 2).

3) 호산구

정상군은 2.2±0.5%, 대조군은 3.2±0.4%로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 27±0.3%, 2.5±0.2%로 나타나 발효후 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05,) 감소가 나타났다(도 3).

4) 호염기구

정상군은 0.5±0.1%, 대조군은 0.9±0.1%로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 0.8±0.1%, 0.5±0.1%로 나타나 발효후 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (** : p＜0.01) 감소가 나타났다(도 4).

5) 단핵구

정상군은 1.8±0.2%, 대조군은 1.2±0.2%로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 1.4±0.2%, 1.6±0.2%로 나타나 발효후 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05) 증가가 나타났다(도 5).

6) 림프구

정상군은 79.9±4.8%, 대조군은 59.1±4.2%로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 73.8±5.0%, 76.8±6.1%로 나타나 모든 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (** : p＜0.01, *** : p＜0.001) 증가가 나타났다(도 6).

2. 면역글로불린

1) IgA

정상군은 271.3±15.5 pg/㎖, 대조군은 112.9±7.4 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 138.3±16.8 pg/㎖, 171.0±17.9 pg/㎖로 나타나 모든 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05, *** : p＜0.001) 증가가 나타났다(도 7).

2) IgG

정상군은 164.3±34.7 pg/㎖, 대조군은 67.8±13.2 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 102.9±20.6 pg/㎖, 127.4±11.2 pg/㎖로 나타나 모든 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05, ** : p＜0.01, ** : p＜0.01) 증가가 나타났다(도 8).

3) IgM

정상군은 72.1±10.0 pg/㎖, 대조군은 43.5±8.1 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 58.2±6.7 pg/㎖, 68.9±4.8 pg/㎖로 나타나 발효전, 발효후 그룹은 각각 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05, *** : p＜0.001) 증가가 나타났다(도 9).

2. 사이토카인

1) IL-1β

정상군은 24.4±2.3 pg/㎖, 대조군은 10.2±1.8 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 17.3±3.1 pg/㎖, 18.3±2.1 pg/㎖로 나타나 발효전, 발효후 그룹은 각각 대조군에 비해 유의성 있는 (** : p＜0.01, *** : p＜0.001) 증가가 나타났다(도 10).

2) IL-2

정상군은 9.5±0.5 pg/㎖, 대조군은 3.9±1.4 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 6.0±1.3 pg/㎖, 6.2±0.9 pg/㎖로 나타나 발효전과 발효후 그룹은 각각 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05, ** : p＜0.01) 증가가 나타났다(도 11).

3) IL-4

정상군은 14.8±1.8 pg/㎖, 대조군은 6.1±1.4 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 9.6±1.1 pg/㎖, 11.9±1.1 pg/㎖로 나타나 발효전과 발효후 그룹은 각각 대조군에 비해 유의성 있는 (** : p＜0.01) 증가가 나타났다(도 12).

4) IL-5

정상군은 9.6±1.2 pg/㎖, 대조군은 7.1±0.5 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 8.4±1.3 pg/㎖, 8.1±1.3 pg/㎖로 나타나 두 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05, ** : p＜0.01) 증가가 나타났다(도 13).

5) IL-6

정상군은 131.7±17.1 pg/㎖, 대조군은 73.7±15.0 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 93.3±16.4 pg/㎖, 102.0±15.0 pg/㎖로 나타나 두 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05, ** : p＜0.01) 증가가 나타났다(도 14).

6) IL-10

정상군은 26.0±2.0 pg/㎖, 대조군은 20.7±2.4 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후그룹은 각각 23.4±1.3 pg/㎖, 25.0±2.0 pg/㎖로 나타나 발효 후 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (* : p＜0.05) 증가가 나타났다(도 15).

7) TNF-α

정상군은 257.2±26.8 pg/㎖, 대조군은 107.0±13.4 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 204.8±13.7 pg/㎖, 229.1±21.6 pg/㎖로 나타나 모든 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (** : p＜0.01, *** : p＜0.001) 증가가 나타났다(도 16).

8) IFN-γ

정상군은 104.4±9.1 pg/㎖, 대조군은 49.5±10.0 pg/㎖로 나타났을 때, 발효전과 발효후 그룹은 각각 70.3±6.6 pg/㎖, 83.2±8.1 pg/㎖로 나타나 모든 그룹은 대조군에 비해 유의성 있는 (** : p＜0.01, *** : p＜0.001) 증가가 나타났다(도 17).

본 발명은 상기와 같이 발효전, 발효후의 면역증진 효능을 객관적으로 검증하기 위하여 면역억제제 (Cyclophosphamide)를 통해 면역력을 저하시킨 ICR mouse를 통해 다양한 인자를 확인한 결과 다음과 같은 면역 기능에 현저한 효능이 있다는 결론을 얻었다.

특히 발효전보다는 발효후의 면역증진 효능이 현저히 높음을 알 수가 있는바 바실러스 균주 배양 효소액 및 식물성 효소액을 혼합한 혼합효소액로 녹용을 발효시킨 발효 녹용 조성물은 면역 기능에 현저한 효능이 있음을 알 수가 있다.

면역세포 수를 측정한 결과, 발효전, 발효후는 림프구 수를 대조군에 비해 유의성 있게 증가시켰으며, 발효전, 발효후는 백혈구와 단핵구 수를 유의성 있게 증가시켰고 호중구, 호산구, 호염기구 수를 유의성 있게 감소시켰다.

특히 발효전보다는 발효후의 면역증진 효능이 현저히 높음을 알 수가 있다.

면역글로불린을 측정한 결과, 발효전, 발효후는 IgA와 IgG를 대조군에 비해 유의성 있게 증가시켰으며, 발효전, 발효후는 IgM을 유의성 있게 증가시켰다.

사이토카인을 측정한 결과, 발효전, 발효후는 TNF-α와 IFN-γ를 대조군에 비해 유의성 있게 증가시켰으며, 발효전, 발효후는 IL-1β를 유의성 있게 증가시켰다. 또한 발효후는 IL-2, 4, 5, 6, 10을 유의성 있게 증가시켰다.

이상의 결과를 종합해 볼 때, 발효전, 발효후는 면역억제제 (Cyclophosphamide)를 통해 면역력을 저하시킨 ICR mouse에서 면역세포 수, 면역글로불린 및 사이토카인의 증가 효능이 실험적으로 규명되었다.

다만, 호중구, 호산구, 호염기구의 감소는 면역반응에 중추적인 역할을 하는 림프구의 증가에 의해 비율이 감소된 것이라 사료된다.

하지만 항원의 유입을 막는 IgA와 병원체에 대해 방어 작용을 하는 IgG, 특이적 항원에 대해 면역반응을 일으키는 IgM의 유의적인 증가를 바탕으로 발효전, 발효후는 체액성 면역 증강에 효과가 있고 특히 발효전보다는 발효후의 체액성 면역 증강에 효과가 있음을 알 수가 있는바, 이와 같은 체내 면역반응을 담당하는 림프구의 분화 및 활성에 관여하는 사이토카인들을 증가시켜 면역력을 현저히 증가시키는 기능이 있음을 알 수가 있다.

특히 선행기술인 "바실러스 서브틸리스 ＫＣＴＣ 11454 ＢＰ로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 항산화 및 성장촉진용 조성물 및 그 제조방법"은 항산화 활성 및 성장촉진 기능이 있는 것으로서, 그 효과 여부도 S-GAG와 sialic acid 함량 변화 및 총 당과 uronic acid 함량 변화 정도로 측정하는 것에 불과하지만, 본 발명은 상기한 바와 같이 켜 면역력을 현저히 증가시키는 기능이 있음을 알 수가 있는바 매우 이질적인 효과가 있음을 알 수가 있다.

본 발명은 상기한 구성과 기능으로 이루어진 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 면역 기능이 있는 조성물을 생산, 제조, 판매, 유통, 연구하는 산업에 매우 유용하다.

특히 본 발명은 녹용을 이용하여 면역 기능이 있는 조성물을 생산, 제조, 판매, 유통, 연구하는 산업에 매우 유용하다.

Claims

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녹용을 세절한 후 열수 추출하는 과정으로 녹용 열수 추출물을 형성하는 과정(1과정),
바실러스 균주 배양액에 혼균액을 혼합한 혼합효소액을 준비하는 과정(2과정),
상기한 녹용 열수 추출물에 상기한 혼합효소액을 투입하여 20-40도씨 온도에서 24-72시간 배양하는 과정을 수행하여 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물을 제조하는 과정(3과정)을 포함하되,
상기한 바실러스 균주 배양액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis CHJ014, KACC92007P)이고,
상기한 혼균액은 균주 유래 효소액과 식물 유래 효소액을 혼합한 효소액으로 구성되고,
상기한 균주 유래 효소액은 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis), 바실러스 카제이(Bacillus Casei), 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryze)를 하나 또는 둘 이상을 혼합한 것이고,
식물성 효소액은 파인애플 효소액 및 파파야 효소액을 혼합하되,
상기한 파인애플 효소액은 파인애플에 친환경 기능 첨가물을 포함시켜 발효시켜 제조된 파인애플 효소액이고,
상기한 파파야 효소액은 파파야에 친환경 기능 첨가물을 포함시켜 발효시켜 제조된 파인애플 효소액으로서,
상기한 친환경 기능 첨가물은 삼초, 지부자, 황백, 방기, 백지, 교맥 및 백선피를 혼합하여 추출한 조성물인 것을 특징으로 하는 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 제조방법.
제2항의 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물 제조방법으로 제조된 면역 증강 기능이 있는 발효 녹용 조성물.