KR102217338B1 - 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물 - Google Patents

섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR102217338B1
KR102217338B1 KR1020190042911A KR20190042911A KR102217338B1 KR 102217338 B1 KR102217338 B1 KR 102217338B1 KR 1020190042911 A KR1020190042911 A KR 1020190042911A KR 20190042911 A KR20190042911 A KR 20190042911A KR 102217338 B1 KR102217338 B1 KR 102217338B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
beta
composition
active ingredient
present
extract
Prior art date
Application number
KR1020190042911A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20200120255A (ko
Inventor
최태호
윤태미
김진용
이진아
Original Assignee
주식회사 다인소재
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 다인소재 filed Critical 주식회사 다인소재
Priority to KR1020190042911A priority Critical patent/KR102217338B1/ko
Publication of KR20200120255A publication Critical patent/KR20200120255A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102217338B1 publication Critical patent/KR102217338B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/41—Crassulaceae (Stonecrop family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/43—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/43—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems
    • A61K31/431—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems containing further heterocyclic rings, e.g. ticarcillin, azlocillin, oxacillin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)에 대한 항균용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 섬기린초 추출물, 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 1종의 성분; 및 베타 락탐계 항생제;를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 상기 두 가지의 성분을 유효성분으로 함유함으로써 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 우수한 항균 활성을 나타낼 수 있다. 특히, 두 성분의 조합에 따른 시너지 효과로 인해 보다 강력한 항균 활성을 나타낼 수 있으며, 천연재료인 섬기린초에서 유래된 물질을 유효성분으로 사용하기 때문에 기존 항생제의 사용량을 줄이고 보다 안전한 물질로 대체할 수 있어 기존 항생제의 과도한 사용에 따른 부작용의 발생 가능성을 낮출 수 있을 것으로 기대된다.

Description

섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물{Anti-MRSA composition comprising element from Sedum takesimense Nakai and beta-lactam antibiotics as active ingredient}
본 발명은 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)에 대한 항균용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 섬기린초 추출물, 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 1종의 성분; 및 베타 락탐계 항생제;를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물에 관한 것이다.
황색포도상구균(Staphylococcus aureus)은 세계적으로 널리 알려진 식중독균 중의 하나로, 내열성인 외독소를 생산하여 식중독을 일으킨다. 세포집괴를 형성하는 그람양성의 통성혐기성 세균으로, 건강한 사람이나 가축의 피부와 비강 표면에 일반적으로 존재하고 있다(Nair et al., 2015, Antimicrob Agents Chemother 59(4):1876-1885). 또한 황금색 색소를 생성하고 식세포를 죽이는 독소(류코시딘, Leucocidin), 용혈소, 응고효소 등을 분비하여 감염숙주세포의 저항성에서 벗어나 화농성 질환이나 창상감염 등의 피부감염, 골관절염, 폐렴, 패혈증 등을 일으키는 병원성 높은 대표적인 유해세균으로 알려져 있다(Kim SK et al., 1993, The Journal of the Korean Society for Microbiology, 28(4):251-259).
이러한 박테리아 감염증의 처방약으로서 영국인 의사 알렉산더 플레밍(Alexander Fleming)이 제조한 페니실린(penicillin)이 대표적이며, 페니실린의 화학구조를 일부 변경하여 제조한 메티실린(methicillin)이 그 이후에 개발된 대표적인 항생제이다. 이러한 항생 물질의 오남용 등의 원인으로 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)의 오염이 1961년 영국에서 처음 발견된 후 세계 각처에서 보고되기 시작하였으며, 이후 지속적으로 유럽 여러 나라에서 1~2% 비율로 증가하였다(David and Daum, 2010, Clin Microbiol Rev 23(3):616-687). 병원이나 의료 기관에서 수술 후 외상을 통하여 감염되거나 입원해 있는 환자에게 원내 감염이 일어나면 사망률이 높아 심각한 문제로 대두되고 있다. (Grundmann et al. 2006, Lancet 368(9538):874-885).
현재 축산에 사료첨가제로 사용되는 일부 항생제의 경우 내성률이 100%에 근접해 있을 정도로 심각한 수준에 있으며, 육계의 경우 클리닝 목적으로 7일에서 10일 사이에 정기적으로 사용되고 있다. 전국 도축장에 온 닭에게서 분리한 살모넬라, 장내구균 따위의 식중독균의 항생제 내성률을 조사한 결과 닭의 분변에서 나온 대장균은 퀴놀론계(quinolones) 항생제에 57%를 웃도는 내성률을 보였다. 이와 같이 현재 축산에 사용되고 항생제는 대부분 세균들이 내성을 지니고 있어 축산에 효과적으로 사용할 수 있는 새로운 항생제 개발이 시급한 실정이다.
따라서 황색포도상구균과 같은 유해세균에 대한 새로운 항균물질의 개발이 시급히 요구되고 있으며, 전통적으로 감염질환의 치료에 사용되어 온 약용식물을 바탕으로 알칼로이드(alkaloid), 플라보노이드(flavonoid), 테르페노이드(terpenoid), 페놀성 화합물(phenolic compound), 퀴논(quinone), 휘발유(volatile oil) 등의 2차 대사산물 또는 그 유도체들이 후보물질로 활발히 진행되고 있다(Kim NY et al., 2010, Journal of Life Science, 20:589).
한편, 섬기린초(Sedum takesimense Nakai)는 울릉도, 독도 자생식물로서 세덤속의 돌나무과에 속하며 다년생 초본식물로서 관목으로 자라는 다육식물이다. 줄기 밑 부분은 30㎝ 정도가 겨울에 살아 있다가 다음해 봄에 싹이 나오고 줄기는 옆으로 비스듬히 뻗는다. 야생에서 자랄 때 높이는 50㎝ 정도되며, 황색의 꽃은 지름 13㎜ 정도이고, 20 ~ 30개의 꽃이 산방상으로 7월경에 핀다. 세덤속 식물은 민간요법에서 암, 염증, 상처 및 저혈압과 같은 병의 치료제로 사용되었으며, 방사선 방호 효과 및 혈관 확장 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 하지만, 항생제 내성균에 대한 항균활성 및 항생제 병용투여에 있어서 사용은 알려져 있지 않다.
대한민국 등록특허 제10-0571582호 대한민국 등록특허 제10-1298184호 대한민국 등록특허 제10-1330591호 대한민국 등록특허 제10-1333516호 대한민국 등록특허 제10-1749497호
본 발명의 주된 목적은 섬기린초를 활용하여 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 우수한 항균력을 나타낼 수 있는 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 섬기린초 추출물, 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 1종의 성분; 및 베타 락탐계 항생제;를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 섬기린초 추출물은 섬기린초를 20 내지 80%(v/v)의 에탄올 용액으로 추출하여 수득한 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 베타 락탐계 항생제는 옥사실린 및 암피실린 중에서 선택된 1종의 항생제인 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 두 가지의 성분을 유효성분으로 함유함으로써 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 우수한 항균 활성을 나타낼 수 있다. 특히, 두 성분의 조합에 따른 시너지 효과로 인해 보다 강력한 항균 활성을 나타낼 수 있으며, 천연재료인 섬기린초에서 유래된 물질을 유효성분으로 사용하기 때문에 기존 항생제의 사용량을 줄이고 보다 안전한 물질로 대체할 수 있어 기존 항생제의 과도한 사용에 따른 부작용의 발생 가능성을 낮출 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 섬기린초 추출물의 제조과정을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 섬기린초 추출물로부터 본 발명의 화합물(1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스)을 분리하기 위하여 고속액체크로마토그래피를 수행한 크로마토그램이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 섬기린초 추출물로부터 본 발명의 화합물을 분리하기 위하여 고속액체크로마토그래피를 수행한 크로마토그램이다.
도 4는 섬기린초에서 분리한 본 발명 화합물의 1H-NMR 스펙트럼 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 섬기린초에서 분리한 본 발명 화합물의 구조를 나타낸 것이다.
본 발명의 항균용 조성물은 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)에 대한 항균용 조성물로, 섬기린초 추출물, 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 1종의 성분; 및 베타 락탐계 항생제;의 두 가지 성분을 유효성분으로 함유하여 상승적 항균 효과를 나타낼 수 있음을 특징으로 한다.
본 발명에서 상기 섬기린초 추출물은 섬기린초(학명 : Sedum takesimense Nakai)를 추출원료로 하는 추출방법을 통해 수득할 수 있다. 바람직하게는 섬기린초를 20 ~ 80%(v/v)의 에탄올 용액으로 추출하여 수득할 수 있으며, 보다 바람직하게는 30 ~ 50%(v/v)의 에탄올 용액으로 추출하여 수득할 수 있다. 이때 추출 온도는 0 ~ 50℃로 할 수 있으며, 바람직하게는 10 ~ 30℃로 할 수 있다. 이때 추출 시간은 10 ~ 50시간으로 할 수 있으며, 바람직하게는 15 ~ 30시간으로 할 수 있다. 이때 추출용매는 섬기린초의 건조 중량을 기준으로 1 ~ 20배 중량을 첨가할 수 있으며, 바람직하게는 5 ~ 12배 중량을 첨가할 수 있다. 상기와 같은 방법으로 추출한 이후 여과 및 농축과정을 거치면 농축된 상태의 추출물을 수득할 수 있다.
본 발명의 섬기린초 추출물을 제조하기 위해 사용되는 섬기린초는 재배한 것 또는 시판되는 것에 제한없이 사용할 수 있으며, 전초를 사용하는 것이 바람직하나 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 건조 또는 건조하지 않은 것에 제한없이 사용할 수 있다.
본 발명에서 유효성분 중 하나인 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스는 섬기린초에 함유된 성분 중 하나로, 섬기린초로부터 분리 및 정제 과정을 거쳐 수득할 수 있다. 예를 들어, 상기 섬기린초 추출물을 실리카겔 수지를 고정상으로 사용하고 클로로포름, 메탄올, 증류수 및 초산을 용리 용매로 사용하는 크로마토그래피로 1차 분취하고, Sephadex LH-20 수지를 고정상으로 사용하고 메탄올을 용리 용매로 사용하는 겔여과 크로마토그래피로 2차 분취하고, YMC ODS-A를 고정상으로 사용하고 물과 아세토나이트릴의 농도 구배를 이동상으로 사용하는 역상 크로마토그래피로 분취하여 도 2와 같은 패턴에서 분획물 5를 분취한 다음 이를 YMC ODS-A를 고정상으로 사용하고 TFA(trifluoroacetic acid) 수용액 및 메탄올을 이동상으로 사용하는 역상 크로마토그래피로 분취하는 방법으로 수득할 수 있다.
본 발명에서 상기 베타 락탐계 항생제로는 페니실린, 메티실린, 디클록사신, 옥사실린, 플루클록사신, 아목시실린, 암피실린 등 베타 락탐계 항생제로 알려진 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 옥사실린 및 암피실린 중에서 선택된 1종의 항생제를 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물에서 상기 섬기린초 추출물 및 베타 락탐계 항생제의 비율은 1 : 1 ~ 1 : 500의 중량비율일 수 있다. 상기 베타 락탐계 항생제가 옥사실린인 경우 바람직하게는 1 : 200 ~ 1 : 300의 중량비율일 수 있으며, 상기 베타 락탐계 항생제가 암피실린인 경우 바람직하게는 1 : 3 ~ 1 : 5의 중량비율일 수 있다.
본 발명의 조성물에서 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 1종의 성분; 및 베타 락탐계 항생제;의 비율은 1 : 0.1 ~ 1 : 5000의 중량비율일 수 있다. 상기 베타 락탐계 항생제가 옥사실린인 경우 바람직하게는 1 : 2000 ~ 1 : 3000의 중량비율, 1 : 3 ~ 1 : 5의 중량비율 또는 1 : 0.1 ~ 1 : 1의 중량비율일 수 있으며, 상기 베타 락탐계 항생제가 암피실린인 경우 바람직하게는 1 : 60 ~ 1 : 70의 중량비율 또는 1 : 7 ~ 1 : 9의 중량비율일 수 있다.
본 발명에서 상기 항균용 조성물이란 감염성 미생물의 발육과 생활 기능을 억제할 수 있는 물질을 의미하는 것으로 특별히 그 의미를 제한하지는 않으며, 항 미생물제를 총칭하는 의미인 항생제, 항균제, 살균제, 방부제, 보존제 또는 제균제와 같은 의미일 수 있다.
본 발명의 항균용 조성물은 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균 효과를 나타내어, 상기 메티실린 내성 황색포도상구균에 의한 감염의 예방 및 효과적인 제어가 가능하고, 동물에 적용하는 경우 감염된 동물에 의한 인간으로의 2차 감염을 예방할 수 있다.
본 발명의 항균용 조성물은 본 발명의 유효성분 그 자체 혹은 약제학적, 식품학적, 사료학적 또는 화장품학적으로 허용 가능한 담체와 함께 혼합되어 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균 활성이 요구되는 다양한 용도로 사용될 수 있다. 상기 균의 감염에 의한 질병의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 상기 질병의 예방 또는 개선용 식품 조성물 및 식품 첨가제 조성물, 피부 외용제 조성물, 동물용 사료 조성물 및 사료 첨가제 조성물, 화장료 조성물 및 화장료 첨가제 조성물 등의 용도로 사용할 수 있다.
본 발명의 항균용 조성물은 바람직하게는 약학 조성물일 수 있다. 이 경우, 본 발명의 유효성분 그 자체를 사용하거나 약제학적으로 허용이 가능한 통상적인 방법으로, 투여방법, 투여형태 및 치료목적에 따라 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 혼합하여 희석하거나, 용기 형태의 담체 내에 봉입시켜 제형화할 수 있다.
이때 사용 목적에 따라 제형은 환, 액상, 과립, 분말, 캅셀, 정제 중 어느 하나의 형태로 구성될 수 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 또한 담체로는 염수, 완충제, 덱스트로스(dextrose), 물, 글리세롤(glycerol), 링거액, 락토즈(lactose), 수크로즈(sucrose), 칼슘 실리케이트(calcium silicate), 메틸 셀룰로오즈(methyl cellulose), 솔비톨(sorbitol), 만니톨(mannitol) 등을 포함할 수 있다.
상기 제형에 감미제, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제, 현탁제 등을 추가로 포함하여 포유동물에 투여된 후 활성성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 제형화할 수 있다.
그리고 본 발명의 투여량은 환자의 상태, 투여 경로 및 투여 형태에 따라 조절될 수 있어 한정되지 않으며 증상에 따라 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 자명하게 다양한 범위 내에서 사용할 수 있으나, 통상적으로 본 발명에서는 실험적인 유효량으로 본 발명의 유효성분을 체중 1㎏ 당 1 ~ 100㎎을 하루에 연속적 또는 간헐적으로 투여가 가능할 것으로 판단된다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
[실시예]
1. 섬기린초 추출물 및 화합물 분리
1-1. 섬기린초 추출물 제조
섬기린초 식물 전초를 70 ~ 90℃의 오븐에서 1 ~ 4일 동안 완전히 건조시킨 후, 상기 건조된 섬기린초 중량의 5 ~ 12배 중량의 20 ~ 80%(v/v) 에탄올 용액을 용매로 사용하여 15 ~ 30시간 동안 실온에서 추출하고, 생성된 추출물을 여과지로 여과하고 감압 농축하였다.
1-2. 화합물 분리 및 구조 동정
상기 1-1에서 수득한 고형분의 추출물 20g을 40%(v/v) 에탄올에 용해한 후 실리카겔(Kiesel gel 60) 수지 300g을 첨가하고 용매가 완전히 제거되도록 감압 농축한 다음 오픈 컬럼(open column)에 채우고 클로로포름(chloroform), 메탄올(methanol), 증류수(distilled water) 및 초산(acetic acid)을 55 : 36 : 8 : 1의 부피비로 혼합한 용액을 용리 용매로 하여 1차 분취하였다.
상기 1차 분취를 통해 수득한 분획물을 Sephadex LH-20 수지 300g이 담긴 오픈 컬럼에 로딩한 다음 메탄올로 용리하여 2차 분취하였다.
상기 2차 분취를 통해 수득한 분획물을 분취용 YMC ODS-A (250 x 20㎜, 5㎛) 역상컬럼을 장착한 Waters사의 고속액체크로마토그래피 시스템에 적용하여 물과 아세토나이트릴의 농도 구배로 분당 15㎖의 조건으로 용리하였다. 도 2에서와 같이 분획물 4는 35-45분, 분획물 5는 45-56분, 분획물 6는 56-69분 사이에 용리되는 것을 확인하였고 분획물 5를 분취하여 사용하였다.
상기 분획물 5를 YMC ODS-A (250 x 20㎜, 5㎛) 역상컬럼을 장착한 Waters사의 고속액체크로마토그래피 시스템에 적용하여 표 1과 같은 이동상으로 분당 15㎖의 조건으로 용리하면서 자외선 파장 254㎚로 검출한 결과, 도 3에서와 같이 화합물 1은 15.12분에 용리되는 것을 확인하였고, 이 피크(peak)를 분취하여 단일 화합물을 확보하였다.
용리시간(분) 이동상A(%) 이동상B(%)
0 70 30
20 40 60
21 0 100
26 0 100
28 70 30
30 70 30
이동상A : 0.05% TFA(trifluoroacetic acid) 수용액
이동상B : 100% 메탄올
상기와 같이 분리된 화합물은 다음 실험을 위하여 냉장 보관하였다.
분리한 화합물을 LC-MS, 1H-NMR, 13C-NMR과 같은 스펙트럼(spectrum) 분석을 수행하였으며, 이 결과와 문헌자료에서 보고한 분석 값을 비교하여 구조를 확인한 결과, 도 4에서와 같이 분리된 화합물들은 갈릭산(gallic acid)과 그 유도체로서 가수분해 가능한 탄닌(tannin)류에 속하며, 유도체는 2 ~ 4개가 갈로일화(galloylation)된 갈로일알부틴(galloyarbutin)과 갈로일글루코스(galloylglucose)로 구성되는 것을 확인할 수 있었으며, 최종 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-β-글루코스(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-glucose)임을 확인하였다(도 5 참조).
2. MRSA에 대한 최소저해농도 측정
상기 1에서 수득한 섬기린초 추출물 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스(화합물 1), 그리고 베타 락탐 계열의 항균제인 옥사실린과 암피실린의 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin resistant Staphylococcus aureus, MRSA)에 대한 최소저해농도를 측정하였다. 각 추출물 및 화합물은 DMSO(Dimethylsulfoxide)를 용매로 농도 10.24 ㎎/㎖에 이르도록 희석하여 사용하였다. MRSA KCCM 40511 표준균주는 한국미생물보존센터로부터 분양받아 사용하였다.
상기 균주는 -70℃ 딥 프리즈(deep freeze)에서 보관하였고, 37℃의 배양기에서 24시간 배양하여 실험에 사용하였다.
최소억제농도(MIC)는 CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute)의 기준에 따라 측정하였으며, 2단 연속액체배지희석법(two-fold serial dilutions)을 사용하였다.
MRSA 배양액을 96웰 플레이트(96-well plate)의 첫 번째 웰에 180㎕, 나머지 웰에 100㎕씩 접종한 후 1×105 CFU/㎖이 되도록 희석하였다. 그 다음 최저농도 1㎍/㎖에서 최고농도 1,024㎍/㎖의 농도로 맞춘 각 추출물 및 화합물을 96웰 플레이트 첫 번째 웰에 각각 20㎕로 주입한 뒤 연속희석을 실시하였다. 이후, 37℃의 배양기에서 24시간 배양하여 육안으로 관찰하였을 때 미생물이 증식되지 않는 가장 낮은 농도를 최소억제농도(MIC)로 정하고, 그 결과를 표 2에 나타내었다.
MRSA 최소억제농도 (㎍/㎖)
섬기린초 추출물 화합물 1 옥사실린 암피실린
KCCM 40511 256 16 128 256
3. 병용에 따른 상승효과 측정
상기 1에서 수득한 섬기린초 추출물 및 화합물 1을 기존 베타 락탐 계열의 항균제와 병용하였을 때의 상승효과를 측정하기 위해, 체커보드(checkerboard) 희석법을 사용하였다. 베타 락탐 계열의 항균제로는 옥사실린과 암피실린을 사용하였으며, 체커보드 실험은 상기 실시한 최소억제농도 실험을 바탕으로 실시하였다.
먼저, MRSA 균주를 1×109 CFU/㎖ 기준으로 배양하여, 96웰 플레이트의 첫 번째 웰에 180㎕, 나머지 웰에 100㎕씩 접종한 후 1×105 CFU/㎖이 되도록 희석하였다. 그 다음, 상기 2의 최소억제농도(MIC) 실험에서와 동일한 방법으로 96웰 플레이트에 섬기린초 추출물, 화합물 1 및 베타 락탐 계 항균제를 적용하였다. 섬기린초 추출물 또는 화합물 1을 가로 방향으로 순차적 희석하여 적용하였고 세로 방향으로는 베타 락탐 계 항균제를 각 웰에 동일한 양으로 섬기린초 추출물 또는 화합물 1 위에 주입하여 순차적 희석한 후, 37℃의 배양기에서 18시간 배양하였다.
혼합 효과는 체커보드 딜루션(checkerboard dilution) 법을 통해 확인하고, 분할저해농도지수(Fractional Inhibitory Concentration Index, FICI)를 이용하여 평가하였다. 섬기린초 추출물 또는 화합물 1을 베타 락탐 계 항균제와 병용하였을 때 가장 효율적으로 나타난 배합농도의 결과를 하기 계산식 1에 대입하여 FICI를 산출하였다. 산출된 FICI 값에 따라, FICI < 0.5인 경우 상승효과(synergy), 0.5 ≤ FICI < 1.0인 경우 부분적 상승효과(partial synergy), 1.0 ≤ FICI < 2.0인 경우 상가효과(indifference), FICI = 2.0인 경우 무효, FICI > 2인 경우 길항효과(antagonism)로 판정하였고, 그 결과는 하기 표 3 및 4와 같다.
[계산식 1]
Figure 112020112003104-pat00001
상기 수학식에서, MICA와 MICB는 단일성분 A와 B의 MIC(최소억제농도)이고, A와 B는 병용한 A와 B약물의 MIC(최소억제농도)이다.
MRSA 약물 최소억제농도
(㎍/㎖)		 FICI 결과
단독 병용
KCCM
40511		 섬기린초 추출물 256 0.25 0.501 부분적 상승효과
옥사실린 128 64
화합물 1 16 0.0156 0.251 상승효과
옥사실린 128 32
화합물 1 16 2 0.188 상승효과
옥사실린 128 8
화합물 1 16 4 0.266 상승효과
옥사실린 128 2
상기 표 3과 같이, MRSA에 대하여 본 발명의 유효성분인 섬기린초 추출물 또는 화합물 1과 기존 베타 락탐 계열의 항균제인 옥사실린의 병용 시 부분적 상승효과 또는 상승효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
MRSA 약물 최소억제농도
(㎍/㎖)		 FICI 결과
단독 병용
KCCM
40511		 섬기린초 추출물 256 32 0.625 부분적 상승효과
암피실린 256 128
화합물 1 16 2 0.625 부분적 상승효과
암피실린 256 128
화합물 1 16 8 0.75 부분적 상승효과
암피실린 256 64
상기 표 4와 같이, MRSA에 대하여 본 발명의 유효성분인 섬기린초 추출물 또는 화합물 1과 기존 베타 락탐 계열의 항균제인 암피실린의 병용 시 부분적 상승효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

Claims (4)

  1. 섬기린초 추출물, 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스 및 1,2,4,6-테트라-O-갈로일-베타-글루코스의 약학적으로 허용 가능한 염 중에서 선택된 1종의 성분; 및 베타 락탐계 항생제;를 유효성분으로 함유하고,
    상기 섬기린초 추출물은 섬기린초를 20 내지 80%(v/v)의 에탄올 용액으로 추출하여 수득한 것이며,
    상기 베타 락탐계 항생제는 옥사실린 및 암피실린 중에서 선택된 1종의 항생제인 것을 특징으로 하는, 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 조성물은 약학 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
KR1020190042911A 2019-04-12 2019-04-12 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물 KR102217338B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190042911A KR102217338B1 (ko) 2019-04-12 2019-04-12 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190042911A KR102217338B1 (ko) 2019-04-12 2019-04-12 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20200120255A KR20200120255A (ko) 2020-10-21
KR102217338B1 true KR102217338B1 (ko) 2021-02-18

Family

ID=73034852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190042911A KR102217338B1 (ko) 2019-04-12 2019-04-12 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102217338B1 (ko)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060235076A1 (en) 2003-01-29 2006-10-19 Alps Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. Medicinal composition for treating infection with drug-resistant staphylococcus aureus
JP2007084477A (ja) 2005-09-21 2007-04-05 Institute Of National Colleges Of Technology Japan 抗菌性組成物及びそれを含有する抗菌剤並びにガロイルグルコースの抽出方法
KR101330591B1 (ko) 2013-01-21 2013-11-18 한국화학연구원 섬기린초 추출물을 유효성분으로 하는 식물병원성 세균에 항균성을 가지는 조성물

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100571582B1 (ko) 2004-08-31 2006-04-17 한국생명공학연구원 섬기린초로부터 분리한 아폽토시스 저해 활성을 가지는화합물 및 이의 분리방법
KR101298184B1 (ko) 2010-08-19 2013-08-20 제주대학교 산학협력단 어류의 세균성 병원균에 대한 항균 조성물
KR101359668B1 (ko) * 2010-11-23 2014-02-07 대한민국 돌나물 추출물을 포함하는 항균 조성물
KR101333516B1 (ko) * 2011-06-16 2013-11-28 주식회사 에스앤텍 기린초류 추출물을 유효성분으로 하는 항균 및 항산화 조성물
KR101749497B1 (ko) 2015-11-30 2017-06-21 주식회사 다인소재 섬기린초에서 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 또는 피부 과색소성 질환의 예방 및 개선용 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060235076A1 (en) 2003-01-29 2006-10-19 Alps Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. Medicinal composition for treating infection with drug-resistant staphylococcus aureus
JP2007084477A (ja) 2005-09-21 2007-04-05 Institute Of National Colleges Of Technology Japan 抗菌性組成物及びそれを含有する抗菌剤並びにガロイルグルコースの抽出方法
KR101330591B1 (ko) 2013-01-21 2013-11-18 한국화학연구원 섬기린초 추출물을 유효성분으로 하는 식물병원성 세균에 항균성을 가지는 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR20200120255A (ko) 2020-10-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Adeshina et al. Phytochemical and antimicrobial studies of the ethyl acetate extract of Alchornea cordifolia leaf found in Abuja, Nigeria
Aires et al. Phytochemical composition and antibacterial activity of hydroalcoholic extracts of Pterospartum tridentatum and Mentha pulegium against Staphylococcus aureus isolates
US20100292318A1 (en) Antibacterial composition comprising salvia extracts
CA2104114C (en) Benzopyran phenol derivates for use as antibacterial, antiviral or immunostimulating agents
KR102059392B1 (ko) 정향, 히비스커스, 및 코코넛 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 조성물
KR102217338B1 (ko) 섬기린초 유래 성분 및 베타 락탐계 항생제를 유효성분으로 함유하는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균용 조성물
KR101390084B1 (ko) 슈퍼박테리아에 대한 항균 활성 및 항염증 활성을 나타내는 냉이 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물
KR100729182B1 (ko) 로즈마리 정유 및 기존 항생제를 함유한 내성균 억제용항균 조성물
KR101625891B1 (ko) 수련 추출물을 유효성분으로 포함하는 정족수 인식 억제용 조성물 또는 항균용 조성물
KR100976927B1 (ko) 오배자로부터 천연항균제인 메틸갈레이트를 분리하여 기존항생제인 시프로플록삭신을 함유한 살모넬라 억제용항균조성물
CN100471851C (zh) 蒲公英中的木质素及其抗菌活性和医药用途
KR102367027B1 (ko) 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물
KR102142370B1 (ko) 소포라플라바논 g를 유효성분으로 포함하는 항균 조성물
KR20140079610A (ko) 오미자 추출물을 함유하는 항균 조성물
KR20130048109A (ko) 부처손 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 폐렴 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101253279B1 (ko) 먼나무 잎 추출물 또는 이로부터 분리된 페닐프로파노이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 항균 조성물
KR101129354B1 (ko) 좀사방오리나무 수피 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
Ojo et al. Phytochemical and antibacterial properties of Diodia scandens and Phyllanthus amarus on staphylococci isolated from patients in tertiary hospitals in Nigeria
Kryvtsova et al. Antimicrobial, antibiofilm-forming properties of Equisetum arvense L. shoot extracts
KR102472263B1 (ko) 소포라플라바논 g 및 레인을 포함하는 구강균에 대한 항균용 조성물
KR100585487B1 (ko) 복분자 나무 추출물 또는 이로부터 유래한 화합물을포함하는 항-헬리코박터 조성물
Bunu et al. Determination of Phytochemicals and Anti-Bacterial Properties Evaluation of the Leaves Extracts of Psidium guajava (L) Myrtaceae
KR20090124397A (ko) 메티실린 내성 황색 포도상 구균에 대해 기존 항생제인젠타마이신과 고량강 으로부터 분리한 천연항균제인갈란진을 혼합하여 개발한 항균조성물
Al-Terehi et al. Synergism effect of antibacterial activity of some medicinal plants
WO2016182158A1 (ko) 가시상추 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right