KR102196374B1 - Cxcr7 길항제 - Google Patents

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크리스토퍼 더블유. 랜지
레베카 엠. 루이
제프리 피. 맥마흔
제이 피. 파워스
이빈 젱
펜질 장
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Abstract

하기 화학식(I)을 갖는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 N-옥사이드가 제공되며, 이는 CXCR7에 결합하고, 적어도 부분적으로 CXCR7 활성에 의존적인 질병을 치료하는데 유용하다:
Figure 112015062207692-pct00308

따라서, 본 발명은 추가의 측면에서, 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께하나 이상의 상기 기재된 화합물을 함유하는 조성물을 제공한다.

Description

CXCR7 길항제 {CXCR7 ANTAGONISTS}
관련된 출원의 교차 참조
본 출원은 2012년 11월 29일에 출원된, 미국 가출원 제 61/731,463호에 대한 우선권을 청구하며, 이의 내용은 참조로서 본원에 통합되어 있다.
연방 정부에 의해 지원된 조사 및 개발 하에서 만들어진 발명에 대한 권리에 대한 사항
해당 없음
컴팩트 디스크로 제출되는 "서열 목록", 표 또는 어펜딕스를 열거하는 컴퓨터 프로그램에 대한 참조
아래 첨부됨
본 발명은 SDF-1 케모카인(또한 CXCL12 케모카인으로 알려짐) 또는 I-TAC (또한 CXCL11으로 알려짐)의 케모카인 수용체 CXCR7로의 결합을 억제하는 신규한 화합물 및 약제학적 조성물에 관한 것이다. 이 화합물들은 종약 세포 증식, 종양 형성, 종양 혈관신생, 전이, 염증성 질병 예를 들어, 제한됨 없이 관절염, 신장 염증 장애 및 다발성 경화증, 부적절한 혈관화의 질병의 예방, 예를 들어, 제한 없이, 상처 치유, HIV 염증의 치료 및 줄기 세포 분화 및 이동 장애의 치료(참조: 동시 계류중인 USSN 10/912,638, 11/407,729 및 11/050,345)에 유용하다.
케모카인은 세포골력 재배열, 내피 세포에의 강한 접착 및 지향성 유주능(directional migration)를 유발하고, 또한 세포 활성 및 증식할 수 있는 작은 시토카인 프로테인의 상과(superfamily)이다. 케모카인은 특이적 해부 사이트에 대한 세포의 여러 서브셋의 특이적 호밍(homing)을 나타내기 위해 세포 표면 단백질과 코디네이트된(coordinated) 방식으로 작용된다.
다수 군에 의해 초기 연구 노력들은 전이 및 종양 성장에서의 케모카인 수용체 CXCR4에 대한 역할을 가리켰다. [Muller, et al., "Involvement of Chemokine receptor in Breast Cancer Metastasis," Nature, 410:50-56 (2001)]은, 유방암 세포는 대사의 과정 중 케모카인 매개 기작, 예컨대 백혈구 트래피킹(trafficking)을 규정하는 것들을 사용함을 증명하였다. 종양 세포는 기능적 활성 케모카인 수용체의 독특한, 비-랜덤 패턴을 발현한다. CXCR4를 통한 신호는 유방암 세포에서 액틴 중합 및 수도포디아 형성(pseudopodia formation)을 매개하고 화학주성 및 침입 반응을 유발한다. 추가로, 유방암 전이의 주 부위를 나타내는 기관(예컨대 림프 노드, 골수, 및 폐)는 CXCR4 수용체에 대한 리간드의 가장 풍부한 소스이다.
면역결핍 마우스를 사용하여, Muller와 동료는 CXCR4를 결합하는 것으로 알려진 항체로 마우스를 치료함에 의해 주입된 인간 유방 암 세포의 전이를 감소시키는데 성공하였다. 이의 발견은, 유방암 전이가 CXCR4 길항제로 환자를 치료함에 의해 감소될 수 있었음을 제안한다.
[Bertolini, et al., "CXCR4 Neutralization, a Novel Therapeutic Approach for Non-Hodgkin's Lymphoma," Cancer Research, 62:3106-3112 (2002)]는 종양 부피의 감소뿐만 아니라 항-CXCR4 항체로 처리된 인간 림프종 세포로 주입된 면역 결핍 마우스의 늘어난 생존을 증명하였다. 이들은, 종양 부피가 그들의 발견을 CXCR4 길항제로 환자를 치료함에 의해 감소될 수 있었음을 의미하는 것으로 해석하였다.
더욱 최근 연구는 또 다른 케모카인 수용체 CXCR7가 또한 암의 치료에서 표적일 수 있음을 제안한다. CXCR7는 정상 세포보다 변형 세포에서 우선적으로 발현되고, 이는 많은 인간 암에서 탐지가능한 발현이다. 생체외 연구는 CXCR7 발현 세포의 급증은 CXCR7의 길항제에 의해 억제될 수 있음을 가리킨다. 마우스에서의 생체내 연구는 CXCR7 길항제가 종양 형성 및 종양 성장을 억제할 수 있음을 가리킨다.
CXCR7의 잠재적 중요성은 Bertolini과 동료에 의해 보여진 종양 크기의 감소의 대안적 해석에 의해 예시된다. 이 감소는 명백히 항체-매개 청소(clearance)의 결과일 수 있고, 기본적으로 여겨지는 바와 같은 항-CXCR4 항체의 결과가 아닐 수 있다. 항체-매개 청소에서, 림프종 세포의 세포 표면 상의 단백질을 인식했던 임의의 항체는 항-CXCR4 항체에 기여된 것과 동일한 효과를 가졌을 것이다. 불행하게도, Bertolini와 동료 연구는 관찰된 종양 반응이 항체-매개 청소 또는 CXCR4와의 상호작용 때문이었는지에 대한 결론에 이르지 못한다.
그러나 Bertolini과 동료에 의해 사용된 림프종 세포는 CXCR4 및 CXCR7 둘 모두를 발현하는 것으로 현재 알려져 있다. SDF-1는 CXCR4에 대한 유일한 리간드이다. SDF-1 및 I-TAC 둘 모두는 CXCR7에 결합한다. 항-SDF-1 항체를 사용하여, 이제 CXCR7의 길항제가 종양 로드의 감소 및 증가된 생존율에 책임이 있는 것으로 나타났다. SDF-1이 CXCR4에 대한 유일한 리간드이기 때문에, 항-SDF-1 항체를 이용한 SDF-1의 중화가 항-CXCR4 항체를 이용한 CXCR4의 중화와 동등할 것으로 예상된다. 그러나, 항-SDF-1 항체를 사용하는 실험은 종양 로드의 부분적 감소 및 증가된 생존율만을 증명하였다. 결과적으로, 계속된 활성이 제 2 리간드, I-TAC의 CXCR7와의 상호작용 때문인 것으로 보이기 때문에, CXCR7는 표적일 것이다.
최근까지, 종양 세포 증식, 종양 성장 및 전이에서 CXCR7의 가능한 중요성은 알려지지 않았다. 현재, 최근 증거는 특정 CXCR7 길항제의 암의 성장 및 확산을 차단하는 능력을 나타내고, 발현 패턴은 종양 형성과 관련된 CXCR7 수용체에 대한 제한된 조직 분포를 나타낸다.
더구나, 최근에 CXCR7가 특정 유전 분기(genetically divergent) 인간 면역 결핍 바이러스(HIV) 및 유인원 면역결핍 바이러스(SIV), 특히 HIV-2-ROD, X4-트로픽 분리물에 대한 공동-수용체로서 작용할 수 있음이 증명되고 있다(Shimizu, N. et al., J. Virol ., (2000) 74: 619-626; Balabanian, K., et al., J. Biol. Chem., in press; published on August 17, 2005 as Manuscript M508234200).
추가로, 골수를 포함하는 특이적 조혈 조직으로부터의, SDF-1(조혈 전구 세포 및 줄기 세포 및 특별히 CXCR4 수용체를 가지는 세포의 이동에 중요한 역할을 가지는 것으로 기재되어 있음)이 기재되어 있다(Hattori, K., et al., Blood, (2000) 97:3354-3360; WO 2005/000333, 그 내용이 본원에 참조로서 통합되어 있다). 더욱 최근 연구는 CXCR7 수용체가 줄기 세포 이동 과정에서 중요한 역할을 또한 할 수 있음을 제안한다.
상기의 관점에서, 특이적으로 CXCR7 수용체에 결합할 수 있는 화합물이 이러한 상호작용으로부터 이득이 될 수 있는 다른 생물학적 질명 및 질환을 치료하는데 유용할 수 있음은 명백하다. 본 발명은 치료를 위한 약제학적 조성물 및 관련된 방법과 함께 이러한 화합물을 제공한다.
발명의 요약
본 발명은 일 측면에서 하기 화학식(I)을 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 N-옥사이드를 제공한다:
Figure 112015062207692-pct00001
여러 기(예를 들어, R1, R2, R3, R4, Z, Xa, Xb, Xc 및 하첨자 n)은 본 발명의 상세한 설명에 기재되어 있다.
본 발명의 화합물은 CXCR7에 결합하는데 유용하고, CXCR7 활성에, 부분적으로 또는 전체적으로 의존하는 질병을 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 발명은 추가 측면으로, 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 상기 언급된 화합물의 하나 또는 그 초과를 함유하는 조성물을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 추가로 논의된 여러 질병을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 이 질병을 치료하는데 충분한 시간 동안 상기 화학식의 화합물의 치료 유효량을 이러한 치료가 필요로 하는 피검체에 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 개인의 질병을 진단하는 방법을 제공한다. 이 방법에서, 본원에서 제공된 이 화합물은 피검체에 표지된 형태로 투여되고 후속하여 CXCR7의 존재 또는 부재를 측정하기 위해 진단 이미징을 한다. 관련된 측면에서, 진단 이미징의 방법은 본원에 제공된 표지된 화합물을 가지는 조직 또는 혈액 샘플을 접촉함에 의해 그리고 샘플에서 CXCR7의 존재, 부재 또는 양을 측정함에 의해 수행된다.
일부 구체예에서, 소정 량의 화학치료제 또는 방사선이 본 발명의 화합물 전에, 이후에 또는 병용하여 피검체에 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 양은 화학치료제 또는 방사선이 단독으로 투여되는 경우보다 낮은 치료적 양이다.
도면의 간단한 설명
적용되지 않음
발명의 상세한 설명
I. 약어 및 정의
용어 "알킬"은 다르게 명시되지 않는다면, 자체로서 또는 다른 치환기의 일부로서 지정된 탄소 원자수(즉, C1-8은 1 내지 8개 탄소를 의미함)를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 의미한다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 2차-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸 등을 포함한다. 용어 "알케닐"은 하나 또는 그 초과의 이중 결합을 가지는 불포화된 알킬 기를 지칭한다. 유사하게, 용어 "알키닐"은 하나 또는 그 초과의 삼중 결합을 가지는 불포화된 알킬 기를 지칭한다. 이러한 불포화된 알킬 기의 예는 비닐, 2-프로펜일, 크로틸, 2-이소펜텐일, 2-(부타디에닐), 2,4-펜타디에닐, 3-(1,4-펜타디에닐), 에틴일, 1- 및 3-프로핀일, 3-부틴일, 및 더 고차의 상동체 및 이성질체를 포함한다. 용어 "사이클로알킬"은 지정된 고리 원자수(예를 들어, C3-6사이클로알킬)를 가지고 완전히 포화되거나 또는 고리 정점 사이에 하나 이하의 이중 결합을 가지는 탄화수소 고리를 지칭한다. "사이클로알킬"은 또한 바이사이클릭 및 폴리사이클릭 탄화수소 고리, 예를 들어, 바이사이클로[2.2.1]헵탄, 바이사이클로[2.2.2]옥탄 등을 지칭하는 것을 의미한다. 용어 "사이클로알케닐"은 고리 정점 사이에 적어도 하나의 이중 결합을 지닌 사이클로알킬기를 나타낸다. 사이클로알케닐의 예는 사이클로펜테닐 및 사이클로헥세닐이 있다. 용어 "스피로사이클로알킬"은 단일 고리 정점이 분자의 두개의 다른 비-수소 부분에 결합되어 있는 사이클로알킬기를 나타낸다. 스피로알킬로알킬 치환기는 알킬렌 사슬의 두 탄소 원자(전형적으로 알킬렌 사슬의 말단들)가 분자의 나머지에서 동일한 탄소 원자에 결합되는 것이다. 용어 "헤테로사이클로알킬"은 N, O, 및 S로부터 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 사이클로알킬 기를 지칭하며, 여기서 질소 및 황 원자는 임의로 산화되고, 상기 질소 원자(들)는 임의로 4차화(quaternized)된다. 헤테로사이클로알킬은 모노사이클릭, 바이사이클릭 또는 폴리사이클릭 고리 시스템일 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기의 비제한적인 예는 피롤리딘, 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 부티로락탐, 발레로락탐, 이미다졸리디논, 히단토인, 다이옥솔란, 프탈이미드, 피페리딘, 1,4-다이옥산, 모르폴린, 티오모르폴린, 티오모르폴린-S-옥사이드, 티오모르폴린-S,S-옥사이드, 피페라진, 피란, 피리돈, 3-피롤린, 티오피란, 피론, 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로티오펜, 퀴누클리딘, 등을 포함한다. 헤테로사이클로알킬 기는 고리 탄소 또는 헤테로원자를 통해 분자의 나머지에 결합될 수 있다.
용어 "알킬렌"은 그 자체 또는 또 다른 치환기의 일부로서, -CH2CH2CH2CH2-에 의해 예시된 바와 같이, 알칸으로부터 유도된 2가 라디칼을 의미한다. 통상적으로, 알킬(또는 알킬렌) 기는 1 내지 24개 탄소 원자를 가질 것이고, 10개 또는 그 미만의 탄소 원자를 가지는 이 기들은 본 발명에 바람직하다. "저급 알킬" 또는 "저급 알킬렌"은 일반적으로 4개 또는 그 미만의 탄소 원자를 가지는 더 짧은 사슬 알킬 또는 알킬렌 기이다. 유사하게, "알케닐렌" 및 "알키닐렌"은 각각 이중 또는 삼중 결합을 가지는 불포화된 형태의 "알킬렌"을 지칭한다.
본원에서 묘사된 어떠한 화학 구조식에서 단일, 이중 또는 삼중 결합을 가로지르는 본원에서 사용되는 파형선 "
Figure 112015062207692-pct00002
"은 분자의 나머지 부분에 단일, 이중 또는 삼중 결합의 포인트 결합을 나타낸다.
용어 "알콕시," "알킬아미노" 및 "알킬티오" (또는 티오알콕시)는 이의 통상적 의미로 사용되고, 각각 산소 원자, 아미노 기 또는 황 원자를 통해 분자의 나머지에 결합된 알킬 기를 지칭한다. 추가로, 디알킬아미노 기를 위해, 알킬 부분은 동일하거나 또는 상이할 수 있고, 또한 통합되어 각각이 결합된 질소 원자와 함께 3-7원 고리를 형성할 수 있다. 따라서, -NRaRb로 표현된 기는 피페리디닐, 피롤리디닐, 모르폴리닐, 아제티디닐 등을 포함하는 것을 의미한다.
용어 "할로" 또는 "할로겐"은 그 자체로 또는 또 다른 치환기의 일부로서, 다르게 명시되지 않는다면, 불소, 염소, 브롬, 또는 아이오드 원자를 의미한다. 또한, 예를 들어 용어 "할로알킬"은 모노할로알킬 및 폴리할로알킬을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 용어 "C1-4 할로알킬"은 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 4-클로로부틸, 3-브로모프로필 등을 포함하는 것을 의미한다.
용어 "아릴"은 다르게 명시되지 않는다면, 함께 융합되거나 공유 결합되는 단일 고리 또는 다중 고리(3개 이하 고리)일 수 있는 고도 불포화된, 일반적으로 방향족, 탄화수소 기를 의미한다. 용어 "헤테로아릴"은 N, O, 및 S로부터 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 아릴 기(또는 고리)를 지칭하며, 여기서 질소 및 황 원자는 임의로 산화되고, 질소 원자(들)는 임의로 4차화된다. 헤테로아릴 기는 헤테로원자를 통해 분자의 나머지에 결합될 수 있다. 아릴 기의 비제한적인 예는 페닐, 나프틸 및 바이페닐을 포함하고, 헤테로아릴 기의 비제한적인 예는 피리딜, 피리다지닐, 피라지닐, 피리민디닐, 트라이아지닐, 퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 벤조트라이아지닐, 푸리닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조피라졸릴, 벤조트라이아졸릴, 벤즈이속사졸릴, 아이소벤조푸릴, 아이소인돌릴, 인돌리지닐, 벤조트라이아지닐, 티에노피리디닐, 티에노피리미디닐, 피라졸로피리미디닐, 이미다조피리딘, 벤조티아졸릴, 벤조푸라닐, 벤조티에닐, 인돌릴, 퀴놀릴, 아이소퀴놀릴, 아이소티아졸릴, 피라졸릴, 인다졸릴, 프테리디닐, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아디아졸릴, 피롤릴, 티아졸릴, 푸릴, 티에닐 등을 포함한다. 상기 언급된 아릴 및 헤테로아릴 고리 시스템의 각각에 대한 치환기는 하기 기재된 허용가능한 치환기의 기로부터 선택된다.
용어 "아릴알킬"은 아릴기가 알킬기에 결합되어 있는 그러한 라디칼(예를 들어, 벤질, 페네틸, 피리딜메틸 등)을 포함하는 것을 의미한다. 유사하게, 용어 "헤테로아릴-알킬"은 헤테로아릴기가 알킬기에 결합되어 있는 그러한 라디칼(예를 들어, 피리딜메틸, 티아졸릴에틸 등)을 포함하는 것을 의미한다.
상기 용어(예를 들어, "알킬," "아릴" 및 "헤테로아릴")은 일부 구체예에서, 치환된 및 비치환된 형태의 상기 표시된 라디칼 둘 모두를 포함할 것이다. 라디칼의 각 타입에 대한 바람직한 치환기는 하기 제공된다.
알킬 라디칼(알킬렌, 알케닐, 알키닐 및 사이클로알킬로 종종 불리는 기를 포함)에 대한 치환기는 하기로부터 선택된 다양한 기일 수 있다: -할로겐, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R"', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN 및 -NO2의 0 내지 (2m'+1)의 범위 수, 여기서 m'은 이러한 라디칼에서 탄소 원자의 총 수이다. R', R" 및 R"' 각각은 독립적으로 수소, 비치환된 C1-8 알킬, 비치환된 아릴, 1 내지 3개 할로겐으로 치환된 아릴, 비치환된 C1-8 알킬, C1-8 알콕시 또는 C1-8 티오알콕시 기, 또는 비치환된 아릴-C1-4 알킬 기를 지칭한다. R' 및 R"가 동일한 질소 원자에 결합되는 경우에, 이들은 질소 원자와 결합되어 3-, 4-, 5-, 6-, 또는 7-원 고리를 형성할 수 있다. 예를 들어, -NR'R"은 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포함하는 것을 의미한다.
유사하게, 아릴 및 헤테로아릴 기에 대한 치환기는 다양하고, 일반적으로 0 내지 방향족 고리 시스템 상에서의 총 개방 원자가수의 범위의 수로 하기 기들로부터 선택된다: -할로겐, -OR', -OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2, -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R', -NR'-C(O)NR"R"', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -N3, 퍼플루오로(C1-C4)알콕시, 및 퍼플루오로(C1-C4)알킬. 여기서, R', R", 및 R"'은 수소, C1-8 알킬, C1-8 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, C2-8 알케닐, C2-8 알키닐, 비치환된 아릴 및 헤테로아릴, (비치환된 아릴)-C1-4 알킬 및 비치환된 아릴옥시-C1-4 알킬로부터 독립적으로 선택된다. 다른 적합한 치환기들은 1 내지 4개의 탄소 원자의 알킬렌 테터(tether)에 의해 고리 원자에 결합된 상기 아릴 치환기들 각각을 포함한다.
아릴 또는 헤테로아릴 고리의 인접 원자 위의 2개의 치환기는 화학식 -T-C(O)-(CH2)q-U-의 치환기로 임의로 대체될 수 있고, 여기서 T 및 U는 독립적으로 -NH-, -O-, -CH2- 또는 단일 결합이고, q는 0 내지 2의 정수이다. 대안적으로, 아릴 또는 헤테로아릴 고리의 인접 원자 상의 2개의 치환기는 화학식 -A-(CH2)r-B-의 치환기로 임의로 대체될 수 있고, 여기서 A 및 B는 독립적으로 -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- 또는 단일 결합이고, r은 1 내지 3의 정수이다. 형성된 새로운 고리의 단일 결합 중 하나는 임의로 이중 결합으로 대체될 수 있다. 대안적으로, 아릴 또는 헤테로아릴 고리의 인접 원자 상의 2개의 치환기는 화학식 -(CH2)s-X-(CH2)t-의 치환기로 치환되거나 비치환될 수 있고, 여기서 s 및 t는 독립적으로 0 내지 3의 정수이고, X는 -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, 또는 -S(O)2NR'-이다. -NR'- 및 -S(O)2NR'- 내 치환기 R'은 수소 또는 비치환된 C1-6 알킬로부터 선택된다.
본원에서 사용된 용어 "헤테로원자"는 산소(O), 질소(N), 황(S) 및 규소(Si)를 포함하는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "전구 세포" 및 "줄기 세포"는 서로 바꿔서 사용될 수 있다. "전구 세포" 및 "줄기 세포"는, 특정 자극에 반응하여, 분화된 세포 계통을 형성할 수 있는 세포이고, 예를 들어, 제한됨 없이, 조혈, 간엽세포, 상피, 신세포 또는 골수성 세포를 포함한다. 전구/줄기 세포의 존재는 예를 들어, CFU-GM (콜로니 형성 유닛, 그래뉼로사이트-마크로파지); CFU-GEMM(콜로니-형성 유닛, 멀티포텐셜); BFU-E(파열 형성 단위, 에리트로이드); HPP-CFC(높은 증식성 잠재 콜로니-형성 세포)을 포함하는 여러 타입; 또는 알려진 프로토콜을 사용하는 배양물에서 얻어질 수 있는 분화된 콜로니의 다른 타입의 콜로니 형성 유닛을 형성하는 샘플 내 세포의 능력에 의해 평가될 수 있다. 조혈 전구/줄기 세포는 CD34에 대해 종종 포지티브하다. 일부 줄기 세포는 그러나 이 마커를 함유하지 않는다. 이 CD34+ 세포는 FACS(fluorescence activated cell sorting)를 사용하여 분석될 수 있고, 이에 따라 이의 존재는 이 기술을 사용하는 샘플에서 평가될 수 있다. 대안적으로, 이러한 세포는 계통 특이적 마커(예를 들어, 마우스의 CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, NK1.1, B220, TER-119, 및 Gr-1 및 인간의 CD3, CD14, CD16, CD19, CD20 및 CD56)의 부재, c-kit 수용체 (CD117)의 존재에 대해 FACS로 분석될 수 있다.
용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 본원에서 개시되는 화합물에서 발견되는 특정 치환기에 따라, 상대적으로 비독성인 산 또는 염기로 제조되는 활성 화합물의 염을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물이 상대적으로 산성인 작용기를 함유할 경우, 순수하거나 적합한 불활성 용매 내의 충분한 양의 원하는 염기와 그러한 화합물의 중성 형태를 접촉시켜 염기 부가 염을 얻을 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 무기 염기에서 유래되는 염의 예는 알루미늄, 암모늄, 칼슘, 구리, 제2철, 제1철, 리튬, 마그네슘, 3가 망간, 2가 망간, 칼륨, 소듐, 아연 등을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 유기 염기에서 유도된 염은 치환된 아민, 사이클릭 아민, 천연 발생 아민 등을 비롯한 일차, 이차 및 삼차 아민의 염을 포함하며, 예를 들어, 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N,N'-다이벤질에틸렌다이아민, 다이에틸아민, 2-다이에틸아미노에탄올, 2-다이메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸렌다이아민, N-에틸모르폴린, N-에틸피페리딘, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 하이드라바민, 이소프로필아민, 리신, 메틸글루카민, 모르폴린, 피페라진, 피페라딘, 폴리아민 수지, 프로케인, 푸린, 테오브로민, 트라이에틸아민, 트라이메틸아민, 트라이프로필아민, 트로메타민 등이 있다. 본 발명의 화합물이 상대적으로 염기성인 작용기를 함유할 경우, 순수하거나 적합한 불활성 용매 내의 충분한 양의 원하는 산과 그러한 화합물의 중성 형태를 접촉시켜 산 부가 염을 얻을 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염의 예는 염산, 브롬산, 질산, 탄산, 모노하이드로젠카르본산, 인산, 모노하이드로젠포스포르산, 다이하이드로젠포스포르산, 황산, 모노하이드로젠황산, 아이오드화수소산, 또는 아인산 등과 같은 무기 산에서 유래한 것들, 및 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말론산, 벤조산, 석신산, 수베르산, 푸마르산, 만델산, 프탈산, 벤젠설폰산, p-톨릴설폰산, 시트르산, 타르타르산, 메탄설폰산 등과 같은 상대적으로 비독성인 유기산에서 유래한 염을 포함한다. 알기네이트 등과 같은 아미노산의 염, 및 글루쿠론산 또는 갈락투노르산 등과 같은 유기산의 염 또한 포함된다(참조예, Berge, S. M., et al, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). 본 발명의 일부 특정 화합물은 화합물이 염기 또는 산 부가 염으로 전환되도록 하는 염기성 및 산성 기능기 둘다를 함유한다.
화합물의 중성 형태는 상기 염을 염기 또는 산과 접촉시키고 통상적 방법으로 모 화합물을 분리함으로써 재생시킬 수 있다. 화합물의 모 형태는 극성 용매에서의 용해도와 같은 특정 물리적 특성에서 여러 염 형태와는 다르지만, 달리 상기 염은 본 발명의 목적을 위해 화합물의 모 형태와 등가이다.
염 형태에 더하여, 본 발명은 프로드러그 형태인 화합물을 제공한다. 본원에 기재된 화합물의 프로드러그는 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 생리적인 조건 하에서 쉽게 화학적 변화를 하는 화합물이다. 추가로, 프로드러그는 생체외 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 적합한 효소 또는 화학 시약과 함께 경피 패치 저장부에 위치되는 경우에, 프로드러그는 본 발명의 화합물로 천천히 전환될 수 있다.
본 발명의 특정 화합물은 비용매화된 형태뿐만 아니라 수화된 형태를 포함하는, 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화된 형태는 비용매화된 형태와 같고 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 본 발명의 특정 화합물은 다중 결정상 또는 무정형 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 발명에 의해 고려된 사용에 상당하고, 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.
본 발명의 특정 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합을 포함하고; 라세미체, 부분입체이성질체, 기하 이성질체, 위치이성질체(regioisomer) 및 개별 이성질체(예를 들어, 개별 거울상 이성질체)는 모두 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 거울상 이성질체적으로 풍부한 형태로 존재하며, 여기서 특정 거울상 이성질체에 대한 초과 거울상 이성질체의 양은 알려진 방법으로 계산된다. 거울상 이성질체적으로 풍부한 형태의 제조는, 또한 당업에 잘 알려져 있고 예를 들어, 크로마토그래피를 통한 또는 키랄 염 형성을 통한 키랄 리솔루션(chiral resolution)을 사용하여 달성될 수 있다. 추가로, 상이한 컨포머(conformer) 뿐만 아니라 차별되는 로타머가 본 발명에 의해 고려된다. 컨포머는 하나 이상의 σ 결합에 회전하는 것이 다를 수 있는 컨포메이션널한(conformational) 이성질체이다. 로타머는 단지 단일 σ 결합에 대해 회전하는 것이 다른 컨포머이다. 추가로, 본 발명의 화합물은 또한 이러한 화합물을 구성하는 하나 또는 그 초과의 원자에서 원자 동위원소의 비자연적 비율을 함유한다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 동위원소적으로 농축된 형태로 존재한다. 동위원소의 비자연적 비율은 자연에서 발견되는 양으로부터 당해 원자의 100%로 구성되는 양의 범위로 정의될 수 있다. 예를 들어, 본 화합물은 방사선 동위원소, 예컨대 예를 들어 트리튬(3H), 아이오딘-125 (125I) 또는 탄소-14 (14C), 또는 비-방사선 동위원소, 예컨대 중수소(2H) 또는 탄소-13(13C)를 통합할 수 있다. 이러한 동위 원소적 변이형은 본 출원으로 이외에 기재된 것으로 추가 활용성을 제공할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물의 동위원소적 변이형은 진단적 및/또는 이미징 시약 또는 세포독성/방사성 독성 치료제로서, 제한됨 없이, 추가 활용성을 찾을 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물의 동위원소적 변이형은 치료 중의 높아진 안전성, 내약성(tolerability) 또는 효능에 기여할 수 있는 약동학적 및 약력학적 특성을 바꿀 수 있다. 방사성인지 아닌지, 본 발명의 화합물의 모든 동위원소적 변이형은 본 발명의 범위 내에 포함되도록 의도된다.
"CXCR7"는 "RDC1"로서 지칭되거나 "CCXCKR2"은 7-트랜스맴브레인 도메인 프리줌드된 G-단백질 커플링된 수용체(GPCR)을 지칭된다. CXCR7 도그 오솔로그는 1991년에 일반적으로 식별되었다[참조 Libert et al. Science 244:569-572 (1989)]. 상기 도그 서열은 [Libert et al., Nuc. Acids Res. 18(7):1917 (1990)]에 기재되어 있다. 마우스 서열은 예를 들어, [Heesen et al., Immunogenetics 47:364-370 (1998)]에 기재되어 있다. 인간 서열은 예를 들어, [Sreedharan et al., Pr℃. Natl. Acad. Sci. USA 88:4986-4990 (1991)]에 기재되어 있고, 이는 혈관활성 장펩티드의 수용체로서 단백질을 실수로 기재했다. "CXCR7"은 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, 또는 SEQ ID NO:10의 보수적으로 변경된 변이 또는 이와 실제로 유사한 서열을 포함한다.
II. 일반
본 발명의 화합물은 리간드의 CXCR7 수용체의 결합을 억제할 수 있고 여러 질병, 예를 들어 암, 특별히 고체 종양 암 및 림파종의 치료에서 유용하다. 더욱 최근에, CXCR7에 결합하는 리간드의 억제는 동물 모델에서 류마티스성 관절염의 심각도를 줄임을 알려져 있다.
당업자들은 CCX-CKR2 활성 (CXCR7 활성)을 조절하는 제제가 그 밖의 항-혈관신생제 및/또는 화학치료제 또는 방사선 및/또는 그 밖의 항-관절염제와 함께 치료 섭생에 조합될 수 있음을 이해할 것이다. 몇몇 경우에, 화학치료제 또는 방사선의 양은 항-혈관신생제와 조합하지 않고 제공되는 경우 치료적 양 미만일 수 있는 양이다. 당업자들은 "조합"이 치료제에서의 조합을 포함할 수 있는 것으로 인지할 것이다(즉, 둘 이상의 약물이 혼합물로서 투여되거나, 적어도 동시에 또는 적어도 피검체에 상이한 시점으로 도입되나, 둘 모두가 피검체의 혈류에 동시에 존재하도록 투여될 수 있음). 추가로, 본 발명의 조성물은 제 2 치료 섭생 전에 또는 이후에, 예를 들어, 소정 투여량의 화학치료 또는 조사 전에 또는 이후에 투여될 수 있다.
III. 본 발명의 구체예
A. 화합물
본 발명은 일 측면에서 하기 화학식(I)을 갖는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, N-옥사이드, 동위원소 풍부 또는 거울상이성질체 풍부 형태 및 로타머를 제공한다:
Figure 112015062207692-pct00003
화학식(I)에서, 각각의 고리 정점, Xa, Xb 및 Xc는 독립적으로 N, NH, N(R2), O, CH 및 C(R2)로부터 선택된다. 추가로, 하첨자 n은 0, 1 또는 2이다. 기호 Z는 하기로부터 선택된 기를 나타낸다:
(i) 모노사이클릭 또는 융합된-바이사이클릭 아릴 및 헤테로아릴(여기서, 헤테로아릴기는 N, O 및 S로부터 선택된 고리원으로서 1 내지 4개의 헤테로원자를 지니고; 상기 아릴 및 헤테로아릴기는 1 내지 5개의 R5 치환기로 치환되거나 비치환됨).
(ii) 사이클로알칸, 및 헤테로사이클로알칸으로 이루어진 군으로부터 선택된 모노사이클릭 4-, 5-, 6- 또는 7원 고리(여기서, 헤테로사이클로알칸 고리는 N, O 및 S로부터 선택된 고리원으로서 1 내지 3개의 헤테로원자를 지니고; 각각의 상기 모노사이클릭 Z 고리는 1 내지 3개의 R5 치환기로 치환되거나 비치환됨).
R1은 H 및 C1-8 알킬로부터 선택된 일원이고, 여기서 알킬 부분은 할로겐, -NRaRb, -ORa, -CO2Ra, 및 -CONRaRb로 치환되거나 비치환된다.
각각의 R2는 독립적으로 H, 할로겐, CN, C1-8 알킬, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -ORa, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -NRaRb, -CONRaRb 및 -X-CONRaRb로부터 선택된다.
R3는 H, C1-8 알킬, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -CONRaRb 및 -X-CONRaRb로부터 선택된다.
각각의 R4는 존재하는 경우, 독립적으로 C1-8 알킬, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -ORa, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -NRaRb, -CONRaRb 및 -X-CONRaRb로부터 선택된다.
각각의 R5는 독립적으로 할로겐, CN, -X-CN, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C3-8 사이클로알케닐, C3-5 스피로사이클로알킬, C2-8 알케닐, C2-8 알키닐, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -ORa, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -NRaRb, -CONRaRb 및 -X-CONRaRb, 아릴, 5- 또는 6원 헤테로아릴, 및 3-, 4-, 5- 또는 6원 헤테로사이클릭으로부터 선택되며, 여기서 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭 고리의 고리 정점으로서 존재하는 헤테로원자는 N, O 및 S로부터 선택되고, R5의 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭 부분은 추가로 1 내지 3개의 Ra로 치환되거나 비치환된다.
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, 시아노, C1-8 알킬, C1-8 알콕시, C1-8 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, C3-6 사이클로알킬알킬, 아미노, C1-8 알킬아미노, 디 C1-8 알킬아미노, 카르복스아미드, 카르복시 C1-4 알킬 에스테르, 카르복실산, 및 -SO2-C1-8 알킬로부터 선택된다.
각각의 X는 C1-4 알킬렌 연결기 또는 화학식 -(CH2)mO(CH2)p를 갖는 연결기이고, 여기서 하첨자 m 및 p는 0 내지 5의 정수이고, m + p는 0 내지 6이고, X의 메틸렌 부분 중 어느 하나는 하나 또는 두개의 메틸기로 치환되거나 비치환된다. 일군의 구체예에서, 각각의 X는 독립적으로 -OCH2-, -OCH2CH2-, -OCH2CH2CH2-, -OC(CH3)2-, -OCH2C(CH3)2-, -OCH2CH2C(CH3)2-, -CH2-, -C(CH3)2- 및 - CH2CH2-으로부터 선택된다. 구체예의 또 다른 군에서, 각각의 X는 -O-, -CH2-, -OCH2-, -OCH2CH2-, -C(CH3)2- 및 -CH2CH2-로부터 선택된다.
다수의 구체예가 본 발명에 제공된다.
(A) 일 군의 구체예에서, Z는 N, O 및 S로부터 선택된 고리원으로서 1 내지 3개의 헤테로원자를 지닌, 모노사이클릭 또는 융합된-바이사이클릭 헤테로아릴이고, 상기 헤테로아릴기는 1 내지 5개의 R5 치환기에 의해 치환되거나 비치환된다.
(B) 또 다른 군의 구체예에서, Z는 이미다졸, 피라졸, 1,2,3-트리아졸, 1,2,4-트리아졸, 테트라졸, 티아졸, 옥사졸, 옥사디아졸, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 및 퀴나졸린으로 이루어진 군으로부터 선택된 모노사이클릭 또는 융합된-바이사이클릭 헤테로아릴이고, 각각은 1-2개의 R5 치환기에 의해 치환되거나 비치환된다.
(C) 또 다른 군의 구체예에서, Z는 치환되거나 비치환된 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬 고리로부터 선택된 하나의 R5 기로, 그리고 임의로, 할로겐, C1-4 알킬, C1-4 할로알킬, 및 CH2CN로부터 선택되는, 둘 이하의 추가의 R5 기로 치환된 5원 헤테로아릴기이다.
(D) 그 밖의 구체예에서, Z는 하기로부터 선택된다:
Figure 112015062207692-pct00004
(여기서, R5는 상기 화학식(I)과 관련하여 제시된 의미를 지닌다.)
(E) 또 다른 군의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 Z가
Figure 112015062207692-pct00005
인 화합물들이고, 여기서 각각의 Q는 독립적으로 N, CH, 및 C(R5)로 이루어진 군으로부터 선택되고, R5는 상기 화학식(I)과 관련하여 제시된 의미를 지닌다.
(A) 내지 (E)에서, 또는 화학식(I)과 관련하여 제시된 구체예 중 어느 하나중에서, 그 밖의 선택된 구체예가 포함된다.
(1) 일 군의 구체예에서, n은 0이다.
(2) 또 다른 군의 구체예에서, R1은 H이다.
또 다른 군의 구체예에서, 화학식(I)의 화합물은 하기 화학식(Ia)로 표현된다:
Figure 112015062207692-pct00006
화학식(Ia)의 선택된 구체예는 상기 (A) 내지 (E)로 확인된, Z에 대한 각각의 구체예를 포함한다.
화학식(I) 또는 (Ia)의 일 특정 군의 구체예에서,
(F) 고리 정점으로서 Xa, Xb 및 Xc를 지닌 바이시클릭 부분은 하기로부터 선택된다:
Figure 112015062207692-pct00007
화학식(Ia)의 또 다른 특정 군의 구체예에서,
(G) 고리 정점으로서 Xa, Xb 및 Xc를 지닌 바이시클릭 부분은 하기로부터 선택된다:
Figure 112015062207692-pct00008
화학식(Ia)의 또 다른 특정 군의 구체예에서,
(H) 고리 정점으로서 Xa, Xb 및 Xc를 지닌 바이시클릭 부분은 하기로부터 선택된다:
Figure 112015062207692-pct00009
화학식(Ia)의 일 특정 군의 구체예에서,
(I) 고리 정점으로서 Xa, Xb 및 Xc를 지닌 바이시클릭 부분은 하기로부터 선택된다:
Figure 112015062207692-pct00010
화학식(Ia)의 또 다른 특정 군의 구체예에서,
(J) 고리 정점으로서 Xa, Xb 및 Xc를 지닌 바이시클릭 부분은 하기로부터 선택된다:
Figure 112015062207692-pct00011
특정 선택된 구체예에서, 화학식(Ia)의 화합물, 및 (F), (G), (H), (I), 및 (J)로서 확인된 구체예는 Z가 상기 (A) 내지 (E)로서 확인된 구체예오부터 선택된 화합물들, 특히 Z가 치환되거나 비치환된 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬 고리로부터 선택된 하나의 R5 기, 그리고, 임의로 할로겐, C1-4 알킬, C1-4 할로알킬, 및 CH2CN으로부터 선택된 둘 이하의 추가의 R5기로 치환된 5원 헤테로아릴기인 것들이다.
또 다른 특정 군의 구체예에서, 화학식(I) 또는 (Ia), 및 (F), (G), (H), (I), 및 (J)로서 확인된 구체예에 있어서, Z는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure 112015062207692-pct00012
(상기 식에서, R5는 상기 화학식(I)과 관련하여 제시된 의미를 지닌다).
또 다른 특정 군의 구체예에서, 화학식(I) 또는 (Ia), 및 (F), (G), (H), (I), 및 (J)로서 확인 구체예와 관련하여, Z는 하기 식을 갖는다:
Figure 112015062207692-pct00013
(상기 식에서, 각각의 Q는 독립적으로 N, CH, 및 C(R5)로 이루어진 군에서 선택된다).
일 특정 군의 구체예에서, 화합물은 하기 식을 갖는다:
Figure 112015062207692-pct00014
상기 식에서, Ra 및 각각의 R2는 화학식(I)과 관련하여 제시된 의미를 지닌다.
(A) 내지 (J)로 제시된 구체예, 뿐만 아니라 조합된 구체예(예를 들어, (A)와 (F); (B)와 (G); (A) 와 (H) 등) 중 어느 하나 중에서, 하기의 다른 선택된 구체예가 포함된다:
(a) 하첨자 n이 0인 구체예;
(b) n이 0이고, R1이 H 또는 메틸인 구체예;
(c) n이 0이고, R1이 H 또는 메틸이고, R2가 H 또는 C1-8 알킬이고, R3가 수소인 구체예;
(d) n이 0이고, 각각의 R2 및 R3가 수소인 구체예;
(e) n이 0이고, 각각의 R2가 수소이고, R3가 메틸, 에틸, -CONH2, 및 -CH2OH로 이루어진 군으로부터 선택되는 구체예;
(f) 각각의 R2가 수소인 구체예.
당업자들은 본 발명의 특정 구체예가 화학식(I) 또는 (Ia)의 화합물이고, 이러한 화합물의 특징이 (A) + (F); (A) + (G); (A) + (H); (A) + (I); 및 (A) + (J)를 포함하는 구체예들의 조합에 의해 추가로 규정되는 것으로 인지할 것이며, 이들 각각은 추가의 선택된 구체예에서 독립적으로 각각의 선택된 구체예 (a) 내지 (f)와 조합된다. 유사하게, 화학식(I) 또는 (Ia)의 선택된 화합물은 그러한 화합물의 특징이 (B) + (F); (B) + (G); (B) + (H); (B) + (I); 및 (B) + (J)를 포함하는 구체예들의 조합에 의해 추가로 규정되는 것들이며, 이들 각각은 추가의 선택된 구체예에서 독립적으로 각각의 선택된 구체예 (a) 내지 (f)와 조합된다. 화학식(I) 또는 (Ia)의 다른 선택된 화합물은 그러한 화합물의 특징이 (C) + (F); (C) + (G); (C) + (H); (C) + (I); 및 (C) + (J)를 포함하는 구체예들의 조합에 의해 추가로 규정되는 것들이며, 이들 각각은 추가의 선택된 구체예에서 독립적으로 각각의 선택된 구체예 (a) 내지 (f)와 조합된다. 화학식(I) 또는 (Ia)의 다른 선택된 화합물은 그러한 화합물의 특징이 (D) + (F); (D) + (G); (D) + (H); (D) + (I); 및 (D) + (J)를 포함하는 구체예들의 조합에 의해 추가로 규정되는 것들이며, 이들 각각은 추가의 선택된 구체예에서 독립적으로 각각의 선택된 구체예 (a) 내지 (f)와 조합된다. 화학식(I) 또는 (Ia)의 다른 선택된 화합물은 그러한 화합물의 특징이 (E) + (F); (E) + (G); (E) + (H); (E) + (I); 및 (E) + (J)를 포함하는 구체예들의 조합에 의해 추가로 규정되는 것들이며, 이들 각각은 추가의 선택된 구체예에서 독립적으로 각각의 선택된 구체예 (a) 내지 (f)와 조합된다.
선택된 일 군의 구체예에서, 화합물은 하기 실시예에서, 또는 표 1에서 제시된 것들로부터 선택된다.
각 선택된 구체예에서, 명시된 화합물은 약제학적으로 허용가능한 염 또는 수화물 형태로 존재할 수 있다.
추가로, 입체 화학이 없는 상기 제시된 이 화합물에 대해, 본 발명은 또한 각 화합물의 키랄 형태, 뿐만 아니라 상기 명시된 화합물의 거울상 이상질체적으로 풍부한 형태에 대한 것이다. 거울상 이상질체적으로 풍부한 형태는 당업에서 사용된 잘 알려진 방법에 따른 키랄 크로마토그래피를 사용하여 제조될 수 있거나, 예를 들어, 키랄 염 형태로 키랄 분해에 의해 제조될 수 있다. 일부 구체예에서, 거울상 이상질체적으로 풍부한 형태에 대한 초과 거울상 이성질체는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 그 초과이다. 또 다른 구체예에서, 거울상 이상질체적으로 풍부한 형태는 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 그 초과로 제공된다.
화합물의 제조
본 발명의 특정 화합물은 아래 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다. 화합물은 또한 본 발명의 실시예 부분에서 제시된 합성 방법에 제시된 바와 같이 제조될 수 있다. 추가로 본 발명의 화합물의 제조에 유용한 특정 중간 화합물의 합성은 아래 기재되어 있다.
B. 조성물
상기 제공된 화합물들 이외에, 인간 및 동물에서 CCR7 활성을 조절하기 위한 조성물들은 통상적으로 약제학적 담체 또는 희석제를 함유할 것이다.
본원에서 사용된 용어 "조성물"은 특정 양의 특정 성분을 포함하는 생성물 뿐만 아니라 특정 양의 특정 성분의 조합으로부터 직접적으로 또는 간접적으로 얻어진 임의의 생성물을 포함하는 것으로 의도된다. "약제학적으로 허용되는"은 담체, 희석제 또는 부형제가 상기 제형의 다른 성분과 혼화성이 있어야 하고 이의 수혜자에 해롭지 않아야 함을 의미한다.
본 발명의 화합물의 투여를 위한 약제학적 조성물은 단위 투여 형태로 편리하게 존재할 수 있고 약제학 및 약 전달 분야에서 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 모든 방법은 활성 성분을 하나 또는 그 초과의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 약제학적 조성물은 활성 성분을 액체 담체 또는 세분된 고체 담체 또는 둘 모두와 균일하고 직접적으로 회합시킨 후 필요시 상기 생성물을 요망되는 제형으로 성형함에 의해 제조된다. 상기 약제학적 조성물에서, 활성 목적 화합물은 질환의 과정 또는 증상에 대해 목적하는 효과를 발생시키기에 충분한 양으로 포함된다.
상기 활성 성분을 함유하는 약제학적 조성물은 경구 사용에 적합한 형태, 예를 들어, 정제, 트로키, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼 및 자기 유화(미국 특허 출원 2002-0012680에 기재됨), 경질 또는 연질 캡슐, 시럽, 엘릭시르, 용액, 구강 패치, 경구 젤, 츄잉 검, 저작정, 거품이 이는 가루약(effervescent 분말) 및 거품이 이는 정제일 수 있다. 경구 사용을 위해 의도된 조성물은 약제학적 조성물의 제조를 위한 분야에 알려진 임의의 방법에 따라 제조될 수 있고 이러한 조성물은 약제학적으로 이취가 있고 풍미가 좋은 제형을 제공하기 위해 당미제, 향미제, 착색제, 항산화제 및 보존제로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 또는 그 초과의 제제를 함유할 수 있다. 정제는 정제의 제조에 적합한 비독성 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유한다. 이들 부형제는 예를 들어, 불활성 희석제, 예를 들어 셀룰로오스, 이산화규소, 산화알루미늄, 탄산칼슘, 탄산소듐, 글루코오스, 만니톨, 소르비톨, 락토오스, 인산칼슘 또는 인산소듐; 과립화 및 분해제, 예를 들어, 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어 PVP, 셀룰로오스, PEG, 전분, 젤라틴 또는 아카시아, 및 윤활제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 탈크일 수 있다. 이 정제는 코팅되지 않을 수 있거나 이들은 위장관에서 분해 및 흡수를 지연하기 위해 알려진 기술에 의해 장에 대해서 또는 달리 코팅될 수 있고 이로써 더 긴 기간에 걸쳐 지속된 작용을 제공할 수 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질 예를 들어 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 다이스테아레이트가 사용될 수 있다. 이들은 또한 제어 방출을 위한 삼투 치료 정제를 형성하기 위해 미국 특허 제4,256,108호; 제4,166,452호; 및 제4,265,874호에 기재된 기술에 의해 코팅될 수 있다.
또한, 경구 사용을 위한 제형은 경질 젤라틴 캡슐로서 제시될 수 있으며, 여기서 상기 활성 성분은 불활성 고체 희석제, 예를 들어, 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합될 수 있거나, 연질 젤라틴 캡슐로서 제시될 수 있으며, 여기서 상기 활성 성분은 물 또는 오일 매체, 예를 들어 피넛 오일, 액체 파라핀, 또는 올리브 오일과 혼합된다. 추가로, 에멀젼은 물에 섞이지 않는 성분, 예를 들어 오일로 제조될 수 있고 계면활성제, 예를 들어 모노-다이글리세리드, PEG 에스테르 등으로 안정화될 수 있다.
수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제는 현탁화제, 예를 들어 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 하이드록시-프로필메틸셀룰로오스, 소듐 알기네이트, 폴리비닐-피롤리돈, 검 트래거캔스(gum tragacanth) 및 검 아카시아이며; 분산 또는 습윤제는 자연 발생 포스파티드, 예를 들어 레시틴, 또는 알킬렌 옥사이드의 지방산과의 축합 생성물, 예를 들어 폴리옥시-에틸렌 스테아레이트, 또는 에틸렌 옥사이드의 장쇄 지방족 알코올과의 축합 생성물, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세탄올, 또는 에틸렌 옥사이드의 지방산 및 헥시톨로부터 유래된 부분 에스테르와의 축합 생성물, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트, 또는 에틸렌 옥사이드의 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르와의 축합 생성물, 예를 들어 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트일 수 있다. 상기 수성 현탁액은 또한 하나 또는 그 초과의 보존제, 예를 들어 에틸, 또는 n-프로필, p-하이드록시벤조에이트, 하나 또는 그 초과의 착색제, 하나 또는 그 초과의 향미제, 및 하나 또는 그 초과의 당미제, 예를 들어 수크로오스 또는 사카린을 함유할 수 있다.
오일 현탁액은 식물성 오일, 예를 들어 아라키스 오일, 올리브 오일, 참기름 또는 코코넛 오일에서, 또는 미네랄 오일, 예를 들어 액체 파라핀에서 활성 성분을 현탁시킴에 의해 제형화될 수 있다. 상기 오일 현탁액은 증점제, 예를 들어 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올을 함유할 수 있다. 당미제, 예를 들어 상기 제시된 것들 및 향미제는 맛있는 경구 제형을 제공하기 위해 첨가될 수 있다. 이 조성물들은 항산화제 예를 들어 아스코르브산의 첨가에 의해 보존될 수 있다.
물의 첨가에 의해 수성 현탁액의 제조에 적합한 분산성 분말 및 과립은 분산 또는 습윤제, 현탁제 및 하나 또는 그 초과의 보존제와 혼합한 활성 성분을 제공한다. 적합한 분산 또는 습윤제 및 현탁화제는 상기 이미 언급된 것들에 의해 예시된다. 추가 부형제, 예를 들어 당미, 향미 및 착색제가 또한 존재할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 수중유 에멀젼의 형태일 수 있다. 상기 오일 상은 식물성 오일, 예를 들어 올리브 오일 또는 아라키스 오일, 또는 미네랄 오일, 예를 들어 액체 파라핀 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는 자연 발생 검, 예를 들어 검 아카시아 또는 검 트래거캔스, 자연 발생 포스파티드, 예를 들어 소이빈, 레시틴, 및 에스테르, 또는 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르, 예를 들어 소르비탄 모노올레에이트, 및 상기 부분 에스테르의 에틸렌 옥사이드와의 축합 생성물 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트일 수 있다. 에멀젼은 또한 당미제 및 향미제를 함유할 수 있다.
시럽 및 엘릭시르는 당미제, 예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 또는 수크로오스로 제형화될 수 있다. 이러한 제형은 또한 완화제, 보존 및 당미 및 착색제를 함유할 수 있다. 경구 용액은 예를 들어, 사이클로덱스트린, PEG 및 계면활성제와 조합하여 제조될 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 이 현탁액은 적합한 분산 또는 습윤제 및 상기 언급되었던 현탁화제를 사용하여 알려진 기술에 따라 제형화될 수 있다. 상기 멸균 주사가능한 제형은 또한 비독성 비경구-허용가능한 희석제 또는 용매에서의 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어, 1,3-부탄 디올에서의 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 상기 허용가능한 비히클 및 용매 중에는, 물, 링거액 및 등장성 염화소듐 용액이 있다. 추가로, 멸균, 고정된 오일은 용매 또는 현탁 매체로서 통상적으로 사용된다. 이 목적을 위해, 합성 모노- 또는 다이글리세리드를 포함하는 임의의 부드러운 고정유가 사용될 수 있다. 추가로, 지방산, 예를 들어 올레산이 주입가능한 제제에서 사용된다.
본 발명의 화합물은 또한 약물의 직장 투여를 위해 좌약의 형태로 투여될 수 있다. 이들 조성물은 평상시 온도에서는 고체이지만 직장 온도에서는 액체이고 상기 약물의 방출을 위해 상기 직장에서 녹게 될 적합한 비자극성 부형제와의 상기 약물의 혼합에 의해 제조될 수 있다. 이러한 물질은 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 추가로, 상기 화합물은 용액 또는 연고에 의해 눈으로의 전달을 통해 투여될 수 있다. 추가로, 상기 화합물의 경피 전달은 이온 영동 패치 등에 의해 달성될 수 있다. 국소 용도를 위해, 본 발명의 화합물을 함유하는 크림, 연고, 젤리, 용액 또는 현탁액 등이 사용된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 국소 적용은 또한 구강세척제 및 가글의 사용을 포함하는 것을 의미한다.
본 발명의 화합물은 또한 표적화가능한 약물 담체로서 적합한 폴리머인 담체에 커플링될 수 있다. 이러한 폴리머는 폴리비닐피롤리돈, 피란 코폴리머, 폴리하이드록시-프로필-메트아크릴아미드-페놀, 폴리하이드록시에틸-아스파르트아미드-페놀, 또는 팔리토일 잔여물로 치환된 폴리에틸렌옥사이드-폴리라이신을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 약물의 제어된 방출을 달성하는데 유용한 부류의 생분해성 폴리머인 담체, 예를 들어, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리락트산 및 폴리글리콜산의 코폴리머, 폴리엡실론 카프로락톤, 폴리하이드록시 부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리아세탈, 폴리다이하이드로피란, 폴리시아노아크릴레이트 및 하이드로젤의 가교된 또는 양친매성 블록 코폴리머에 커플링될 수 있다. 폴리머 및 반투과성 폴리머 매트릭스는 성형된 물품, 예를 들어 밸브, 스텐트, 튜빙, 인공보철(prostheses) 등으로 형성될 수 있다.
C. 사용 방법
임의의 특별한 이론으로 제한하고자 함은 아니지만, 본 발명의 화합물 및 조성물은 SDF-1 및/또는 I-TAC의 CXCR7 수용체로의 결합을 억제함에 의해 치료 효과를 제공하는 것으로 여겨진다. 그래서, 본 발명의 화합물 및 조성물은 포유류의 질병 및 질환의 치료 또는 예방에서 사용될 수 있으며, 여기서 SDF-1 및/또는 I-TAC의 CXCR7 수용체에의 결합의 억제는 치료 효과를 제공할 것이다.
일 구체예에서, 케모카인 SDF-1 및/또는 I-TAC의 CXCR7 수용체로의 결합을 억제하는 바람직한 방법은 케모카인의 CXCR7 수용체로의 결합을 억제하기에 충분한 시간 동안 CXCR7 수용체를 발현시키는 세포와 하나 또는 그 초과의 상기 언급된 화합물을 접촉시키는 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 화합물 및 조성물은 암을 가진 피검체에 투여된다. 일부 경우에, CXCR7 조절자는 암, 예를 들어, 암종, 신경교종, 중피종, 흑색종, 림프종, 백혈병(급성 림프 백혈병 포함), 선암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 교아종, 백혈병, 림프종, 전립선암, 및 버킷 림프종, 두경부암, 결정암, 대장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 식도암, 위암, 췌장암, 간담도암(hepatobiliary cancer), 담낭암, 소장암, 직장암, 신장암, 신장암(renal cancer), 방광암, 전립선암, 성기암, 요도암, 고환암, 자궁경부암, 질암, 자궁암, 난소암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 췌장 내분비암, 유암선암, 뼈암(bone cancer), 피부암, 망막아종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종(추가 암에 대해 Cancer:Principles and Practice (DeVita, V.T. et al. eds 1997) 참조); 뿐만 아니라 뇌 및 신경 기능장애, 예컨대 알츠하이머 질병, 다발성 경화증 및 탈수성 질환; 폐동맥 고혈압과 같은 고혈압성 장애; 신장 기능 장애; 신장 기능장애(renal dysfunction); 류마티스 관절염; 동족이식 거부; 아테롬성 동맥 경화증(및 상승된 콜레스테롤 수준); 천식; 사구체 신염; 접촉 피부염; 염증성 장 질환; 대장염; 건선; 재관류 손상; 뿐만 아니라 본원에 기재된 다른 장애 및 질병을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구체예에서, 피검체는 카포지 육종, 다발성 캐슬만씨 질병 또는 AIDS-관련된 원발성 삼출성 림프종을 가지지 않는다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 및 조성물을 투여함에 의해 이를 필요로 하는 임의의 피검체에 혈관신생을 줄이는 것을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물과의 CXCR7를 접촉시킴에 의해 CXCR7 활성을 줄이고, 이로써 혈관신생을 줄이는 것은 암, 특별히 고체 암의 형성, 성장 및/또는 전이를 억제하는데 유용하다. 모듈화된 CXCR7 및 혈관신생과 관련된 구체예의 기재는 예를 들어, 미국 특허 출원 제 11/050,345호에 기재되어 있다.
원치않거나 문제되는 혈관신생을 포함하는 다른 질병은 류마티스성 관절염; 건선; 눈 혈관형성 질병, 예를 들어, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 시력감퇴, 각막이식거부, 신생혈관 녹내장, 후(後)수정체 섬유 증식, 피부홍조; 오슬러-웨버 증후군; 심근 혈관신생; 플라크 신혈관형성; 모세 혈관 확장증; 혈우병 관절; 혈관 섬유종; 내피 세포의 과다 또는 비정상 자극의 질병, 예를 들어, 장유착, 크론병, 피부병 예컨대 건선, 습진, 및 경피증, 당뇨병, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 노화 시력감퇴, 아테롬성 동맥 경화증, 경피증, 상처과립 및 비대 흉터, 즉, 켈로이드, 및 고양이 가려움 병 및 궤양(Helicobacter pylori)과 같은 병적 결과와 같은 혈관신생을 가진 질병을 포함하고, 또한 본 발명의 항체로 치료될 수 있는 질병이다. 혈관 생성 억제자는 유착, 특별히 내부복막 또는 골반 유착 예컨대 개심술 또는 복강경 수술 후의 결과인 것들 및 범 수축(bum contractions)을 억제하거나 예방하기 위해 사용될 수 있다. 혈관신생 억제자를 사용하여 이롭게 치료될 것인 다른 질환은 이식 후 흉터, 간경화, 급성 호흡 곤란 증후군 후 폐섬유증 또는 신생아의 다른 폐섬유증, 임시보철물의 이식, 및 뇌와 경뇌막(dura) 사이의 수술 후 유착의 예방을 포함한다. 자궁내막증, 용종증, 심장 비대, 뿐만 아니라 비만은 혈관신생의 억제에 의해 처리될 수 있다. 이 장애들은 자궁 근종, 전립선 비대, 및 아밀로이드증와 같은 다른 타입의 정상 조직의 성장 또는 크기의 증가를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물 및 조성물은 본원에 기재된 임의의 질병 또는 장애를 위해 예방 또는 치료 목적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물 및 조성물로 CXCR7 활성을 감소시키는 것은 또한 장애의 호스트를 효과적으로 치료하기 위해 신혈관 형성의 예방에서 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 혈관신생을 감소시키는 것은 혈관의 장애(예를 들어, 죽상 경화증 플라크 내 혈관종 및 모세관 증식), 근육 장애(예를 들어, 심근 혈관신생, 심근 경색 또는 평활근 내 혈관신생), 관절(예를 들어, 관절염, 혈우병 관절 등), 및 혈관신생과 관련된 다른 장애에 대한 치료의 일부로서 사용될 수 있다. 혈관신생의 증진은 또한 여러 생리 과정을 가속하고 상처의 치료, 골절, 및 화상과 같은 증가된 혈관화를 요구하는 질병, 염증성 질병, 허혈성 심장, 및 말초 혈관 질환의 치료에 도움이 될 수 있다.
본 발명의 화합물 및 조성물은 또한 상처 치료를 증진시키기 위해 사용될 수 있다. 특정 작용 기작에 본 발명을 제한함 없이, CXCR7의 길항작용이 내생 리간드가 더 낮은 친화력 수용체에 대신 결합하도록 할 수 있어서, 증진된 상처 치료를 조장할 수 있다. 예를 들어, SDF-1는 CXCR7 및 CXCR4 둘 모두에 결합하지만, CXCR4에는 더 낮은 친화력으로 결합한다. 유사하게, I-TAC는 I-TAC가 CXCR7에 결합하는 것보다 더 낮은 친화력으로 CXCR3에 결합한다. 이 리간드들의 CXCR7에의 결합을 차단시킴에 의해, CXCR7 길항제는 상기 리간드들이 다른 수용체에 결합하도록 할 수 있어서, 상처 치료를 증진시킬 수 있다. 따라서, 상처 치료를 높이기 위한 CXCR7의 길항 작용은 작용제로의 CXCR7 활성을 자극함에 의해 상처 치료를 높이는 것과는 다른 메커니즘에 의해 중개될 수 있다.
신혈관 형성과 관련한 장해 및 증상을 치료하는 것을 제외하고, 혈관신생의 억제는 신혈관 형성과 관련한 정상적 생리적 조건의 발생을 조정하거나 차단하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 화합물 및 조성물은 산아 제한(birth control)으로 사용될 수 있다. 본 발명에 따라, 난소 또는 자궁내막 내 CXCR7 활동을 감소시키는 것은, 배란, 태아(embryo)의 착상, 태반 형성 등과 관련한 신혈관 형성을 감소시킬 수 있다.
혈관신생의 억제자는 다른 치료 사용을 가진다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 조성물은 아래 것들을 위해 사용될 수 있다:
(a) 지방 조직 박리 및 비만 치료. 참조 예를 들어, Kolonin et al., Nature Medicine 10(6):625-632 (2004);
(b) 자간전증(preclampsia)의 치료. 참조 예를 들어, Levine et al., N. Engl. J. Med. 350(7): 672-683 (2004); Maynard, et al., J. Clin. Invest. 111(5): 649-658 (2003); 및
(c) 심장혈관 질병의 치료. 참조 예를 들어, March, et al., Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 287:H458-H463 (2004); Rehman et al., Circulation 109: 1292-1298 (2004).
암을 치료하는 방법
더욱 특이적으로, 본 발명은 또한 암을 치료하는 방법을 제공한다. 암을 치료하는 바람직한 방법은, 암을 치료하는데 충분한 시간 동안 암 환자에 치료 유효량의 하나 또는 그 초과의 상기 이미 언급된 화합물(또는 이의 염)을 투여하는 것을 포함한다.
치료를 위해, 본 발명의 조성물은, 경구, 비경구(예를 들어, 근육내, 복막내, 정맥내, ICV, 수조내 주입, 피하 주사, 또는 이식)에 의해, 흡입 스프레이, 코, 질, 직장, 설하, 또는 국소 경로 투여에 의해 투여될 수 있고, 투여의 각 경로를 위해 적합한 통상적 비독성 약제학적으로 허용가능한 담체, 애쥬번트 및 비히클을 함유하는 적합한 투여 단위 제형으로 단독으로 또는 함께 제형화될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 CXCR7 조절자는 예를 들어, 화학 치료제, 방사선 등을 포함하여 다른 적합한 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 이러한 투여는 제 2 치료제 전에, 이후에 또는 함께 투여됨으로써 제 2 치료제의 치료적 효과가 CXCR7 조절자 부재시의 제 2 치료제의 투여와 비교하여 증진되도록 할 수 있는 것으로 이해된다. 조합 치료시 사용되기에 적합한 제제의 선택은 통상적인 약제학적 이론에 따라 당업자들에 의해 이루어질 수 있다. 치료제의 조합은 예컨대, 암, 상처, 신장 이상, 뇌 이상, 또는 신경 이상과 같은 여러 질환의 치료 또는 예방에 형향을 미치는데 상승적으로 작용할 수 있다. 이러한 방법을 사용함으로써 보다 낮은 용량의 각각의 제제로 치료적 효능을 달성할 수 있고, 이로써 부작용의 가능성을 줄일 수 있다.
영장류, 예컨대 인간에 더하여, 다양한 다른 포유류가 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있다. 예를 들어, 비제한적으로 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 기니아 피그, 래트 또는 다른 소과, 양과, 말과, 개과, 고양이과, 설치류 또는 뮤린 종을 포함하는 포유류가 치료될 수 있다. 그러나, 이 방법은 또한 다른 종, 예컨대 조류 종(예를 들어, 닭)에서 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 암을 치료하는데 유용하다는 것을 증명하는 표준 생체내 검사는 문헌[Bertolini, F., et al., Endostatin , an antiangiogenic drug, induces tumor stabilization after chemotherapy or anti-CD20 therapy in a NOD/SCID mouse model of human high-grade non-Hodgkin lymphoma. Blood, No. 1, Vol. 96, pp. 282-87 (2000년 7월 1일); Pengnian, L., Antiangiogenic gene therapy targeting the endothelium-specific receptor tyrosine kinase Tie2. Pr℃. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 95, pp. 8829-34 (July 1998); 및 Pulaski, B. Cooperativity of Staphylococcal aureus Enterotoxin B Superantigen , Major Hist℃ompatibility Complex Class II, and CD80 for Immunotherapy of Advanced Spontaneous Metastases in a Clinically Relevant Postoperative Mouse Breast Cancer Model. Cancer Research, Vol. 60, pp. 2710-15 (2000년 5월 15일)]에 기재되어 있다.
케모카인 수용체 조절을 요구하는 질환의 치료 또는 예방에 있어서, 적당한 투여 수준은 일반적으로 단일 또는 다중 투여량(dosage)으로 투여될 수 있는, 하루당 환자의 kg 체중 당 약 0.001 내지 100 mg일 것이다. 바람직하게, 상기 투여량 수준은 하루당 약 0.01 내지 약 25 mg/kg일 것이고; 더욱 바람직하게 하루당 약 0.05 내지 약 10 mg/kg일 것이다. 적합한 투여량 수준은 하루당 약 0.01 내지 25 mg/kg일 수 있고, 하루당 약 0.05 내지 10 mg/kg, 또는 하루당 약 0.1 내지 5 mg/kg일 수 있다. 이 범위 내에서, 상기 투여량은 하루당 0.005 내지 0.05, 0.05 내지 0.5 또는 0.5 내지 5.0 mg/kg일 수 있다. 경구 투여를 위해, 상기 조성물은 치료를 요하는 환자로의 상기 투여량의 증상 조절을 위해 1.0 내지 1000 밀리그램의 활성 성분, 특히 1.0, 5.0, 10.0, 15.0. 20.0, 25.0, 50.0, 75.0, 100.0, 150.0, 200.0, 250.0, 300.0, 400.0, 500.0, 600.0, 750.0, 800.0, 900.0, 및 1000.0 밀리그램의 활성 성분을 함유하는 정제의 형태로 바람직하게 제공된다. 이 화합물은 하루당 1 내지 4번의 섭생으로, 바람직하게 하루당 1번 또는 두 번의 섭생으로 투여될 수 있다.
그러나, 임의의 특별한 환자에 대한 특이적 투여량 수준 및 투여 횟수는 다양할 수 있고, 사용되는 특이적 화합물의 활성, 화합물의 대사 안정성 및 활동기간, 피검체의 나이, 몸무게, 유전 특성, 일반 건강, 성별 및 식이, 뿐만 아니라 투여 모드 및 시간, 배설 속도, 약 병용 및 치료 받고 있는 피검체에 대한 특별한 증상의 심각성을 포함하는 여러 요인에 좌우될 것임이 이해될 것이다.
본 발명의 화합물 및 조성물은 CXCR7 신호전달과 관련한 질환 또는 질병 및 암을 치료하고 예방하기 위해 관련된 유용성을 가지는 다른 화합물 및 조성물과 배합될 수 있다. 이러한 다른 약은, 본 발명의 화합물 또는 조성물과 함께 또는 순차적으로, 이를 위해 일반적으로 사용되는 양 및 경로로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 조성물이 하나 또는 그 초과의 다른 약과 함께 사용되는 경우에, 본 발명의 화합물 또는 조성물에 더하여 이러한 다른 약을 함유하는 약제학적 조성물이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 본 발명의 화합물 또는 조성물에 더하여 하나 또는 그 초과의 다른 활성 성분 또는 치료제를 또한 함유하는 것들을 포함한다. 약제학적 조성물과 별도로 또는 동시에 투여되는 본 발명의 화합물 또는 조성물과 혼합될 수 있는 다른 치료제의 예는, 제한됨 없이: 시스플라틴(cisplatin), 파클리탁셀(paclitaxel), 메토트렉세이트(methotrexate), 사이클로포스파미드(cyclophosph아미드), 이포스파미드(ifosfamide), 클로람부실(chlorambucil), 카르무스틴(carmustine), 카르보플라틴(carboplatin), 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 티오테파(thiotepa), 로무스틴(lomustine), 세무스틴(semustine), 5-플루오로우라실 및 시타라빈(cytarabine)을 포함한다. 본 발명의 화합물의 제 2 활성 성분에 대한 중량 비율은 다양할 수 있고 각 성분의 효과적 적량에 의존할 것이다. 일반적으로 각 효과적은 적량은 사용될 것이다. 따라서, 예를 들어, 본 발명의 화합물이 제 2 항암제와 혼합되는 경우에, 본 발명의 화합물의 제 2 작용제에 대한 중량 비율은 일반적으로 약 1000:1 내지 약 1:1000, 바람직하게 약 200:1 내지 약 1:200의 범위일 것이다. 본 발명의 화합물과 다른 활성 성분의 조합은 또한 일반적으로 상기 언급된 범위 내에 있을 것이지만, 각 경우에, 각 활성 성분의 효과적인 적량은 사용되어져야 한다.
염증을 치료하는 방법
추가로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 염증의 치료에 유용하고, 본 발명의 화합물과 함께 암 또는 염증의 치료 전, 후 또는 동시에 치료를 필요로 할 수 있는 치료 효용을 가지는 다른 화합물 및 조성물과 혼합될 수 있다. 따라서, 조합 방법 및 조성물은 또한 관심 있는 질환 또는 질병, 예컨대 염증성 또는 자가면역성 질병, 질환 및 장애, 예를 들어 염증성 장질환, 류마티스성 관절염, 골관절염, 간경변 관절염, 다관절 관절염(polyarticular arthritis), 다발성 경화증, 알레르기 질환, 건선, 아토피성 피부염 및 천식, 및 상기 언급된 병리를 치료하고 예방하기 위한 본 발명의 성분이다.
예를 들어, 염증 또는 자가 면역 또는 예를 들어 관절염 관련 뼈 손실의 치료 또는 예방에 있어서, 본 발명의 화합물 및 조성물은 항염증제 또는 진통제 예를 들어 아편 작용제, 리폭시제나제 억제제, 예를 들어 5-리폭시제나제의 억제제, 사이클로옥시제나제 억제제, 예를 들어 사이클로옥시제나제-2 억제제, 인터루킨 억제제, 예를 들어 인터루킨-1 억제제, NMDA 길항제, 질산 옥사이드의 억제제 또는 질산 옥사이드의 합성의 억제제, 스테로이드성 항염증제, 또는 시토킨-억제 항염제, 예를 들어 아세트아미노펜, 아스피린, 코데인, 펜타닐, 이부프로펜, 인도메타신, 케토로락, 모르핀, 나프록센, 페나세틴, 피록시캄, 스테로이드 진통제, 수펜타닐, 술린닥, 데니답(tenidap), 등과 같은 화합물과 함께 사용될 수 있다. 유사하게, 본 발명의 화합물 및 조성물은 상기 열거된 진통제; 증강제 예를 들어 카페인, H2 길항제(예를 들어, 라니티딘), 시메치콘, 알루미늄 또는 마그네슘 하이드록사이드; 소염제 예를 들어 페닐에프린, 페닐프로파놀아민, 슈도에페드린, 옥시메타졸린, 에피네프린, 나파졸린, 키실로메타졸린, 프로필헥세드린, 또는 레보 데스옥시 에페드린(levo desoxy ephedrine); 진해제 예를 들어 코데인, 하이드로코돈, 캐러미펜, 카르베타펜탄, 또는 덱스트로메토판; 이뇨제; 및 진정 또는 비진정 항히스타민제와 함께 투여될 수 있다.
주지되는 바와 같이, 본 발명의 화합물 및 조성물은 본 발명의 화합물 및 조성물이 유용한 질병 또는 질환의 치료, 예방, 억제 또는 완화를 위해 사용되는 다른 약과 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 다른 약은 본 발명의 화합물 또는 조성물과 함께 또는 순차적으로, 이를 위해 일반적으로 사용되는 양 및 경로로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 조성물이 하나 또는 그 초과의 다른 약과 동시에 사용되는 경우에, 본 발명의 화합물 또는 조성물에 더하여 상기 다른 약을 함유하는 약제학적 조성물이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 또한 본 발명의 화합물 또는 조성물에 더하여 하나 또는 그 초과의 다른 활성 성분 또는 치료제를 함유하는 것들을 포함한다. 동시에 또는 별도로 투여되는 약제학적 조성물인 본 발명의 화합물 또는 조성물과 혼합될 수 있는 다른 치료제의 예는, 제한됨 없이: (a) VLA-4 길항제, (b) 코르티코스테로이드, 예를 들어 베클로메타손, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 프레드니손, 프레니솔론(prenisolone), 덱사메사손, 플루티카손, 하이드로코르티손, 부데소니드, 트리암시놀론, 살메테롤, 살메테롤, 살부타몰, 포메테롤; (c) 면역억제제 예를 들어 사이클로스포린 (사이클로스포린 A, Sandimmune®, Neoral®), 타크롤리르누스(tacrolirnus)(FK506, Prograf®), 라파마이신(시로리무스, Rapamune®) 및 다른 FK506 타입 면역억제제, 및 마이코페놀레이트, 예를 들어, 마이코페놀레이트 모페틸(CellCept®); (d) 항히스타민제(H1-히스타민 길항제) 예를 들어 브로모페니라민, 클로로페니라민, 덱스클로로페니라민, 트리프롤리딘, 클레마스틴, 디펜하이드라민, 디페닐피랄린, 트리펠렌아민, 하이드록시진, 메탈라진, 프로메타진, 트리메프라진, 아자타딘, 시프로헵타딘, 안타졸린, 페니르아민 피릴아민, 아스테미졸, 테르펜아딘, 로라타딘, 세티리진, 펙소펜아딘, 데스카르보에톡실로라타딘 등; (e) 비 스테로이드 항천식제(예를 들어, 테르부탈린, 메타프로테렌올, 페노테롤, 이소에타린, 알부테롤, 비톨테롤 및 피르부테롤), 테오필린, 크로몰린 소듐, 아트로핀, 이프라트로퓸 브로마이드, 류코트리엔 길항제(예를 들어, zafmlukast, montelukast, pranlukast, iralukast, pobilukast 및 SKB106,203), 류코트리엔 생합성 억제제(zileuton, BAY1005); (f) 비 스테로이드 항염증제(NSAID) 예를 들어 프로피온산 유도체(예를 들어, 알민오프로펜, 벤옥사프로펜, 부클록식 산, 카프로펜, 펜부펜, 펜오프로펜, 플루프로펜, 플루비프로펜, 이부프로펜, 인도프로펜, 케토프로펜, 네오프로펜, 나프로센, 옥사프로진, 피르프로펜, 프라노프로펜, 수프로펜, 트리아프로펜 산 및 티옥사프로펜), 아세트산 유도체(예를 들어, 인도메타신, 아세메타신, 알크로펜악, 클리다낙, 디클로펜악, 펜클로펜악, 펜클로즈 산, 펜티아작, 푸로펜악, 이부펜악, 이속세팍, 옥스피낙, 술린닥, 티오피낙, 톨메틴, 지도메타신 및 조메피락), 페남산 유도체(예를 들어, 플루페남산, 메클로페남산, 메페남산, 니플룸산 및 톨페남산), 바이페닐카르복실산 유도체(예를 들어, 디플루니살 및 플루페니살), 옥시캄(예를 들어, 이속시캄, 피록시캄, 수독시캄 및 테녹시칸), 살리실레이트(예를 들어, 아세틸 살리실산 및 술파살라진) 및 피라졸온(예를 들어, 아파존, 벤즈피페릴론, 페프라존, 모페부타존, 옥시펜부타존 및 페닐 부타존); (g) 사이클로옥시제나제2 (COX2) 억제제 예를 들어 셀레콕시브(Celebrex®) 및 Rofecoxib (Vioxx®); (h) 포스포디에스테라제 타입 IV (PDE IV)의 억제제; (i) 골드 화합물 예를 들어 아우라노핀 및 아우로티오글루코즈, (j) 에타네르셉트(etanercept)(Enbrel®), (k) 항체 치료제, 예컨대, 오르토클론(OKT3), 다클리주맙 (Zenapax®), 및 인플릭시맙 (Remicade®), (l) 케모카인 수용체의 다른 길항제, 특별히 CCR5, CXCR2, CXCR3, CCR2, CCR3, CCR4, CCR7, CX3CR1 및 CXCR6; (m) 윤활제 또는 완화제 예를 들어 광유(petrolatum) 및 라놀린, (n) 각질용해제(keratolytic agents)(예를 들어, 타자로텐), (o) 비타민 D3 유도체, 예를 들어, 칼시포트리엔 또는 칼시포트리올(Dovonex®), (p) PUVA, (q) 안스랄린(Drithrocreme®), (r) 에트레티네이트 (Tegison®) 및 이소트레틴오인 및 (s) 다중 경화증 치료제 예를 들어 인터페론 β-1β (Betaseron®), 인터페론 (β-1α (Avonex®), 아자티오프린(Imurek®, Imuran®), 글라티라머 아세테이트 (Capoxone®), 글루코코르티코이드(예를 들어, 프레드니솔론) 및 사이클로포스파미드 (t) DMARDS 예를 들어 메토트렉세이트, (u) 다른 화합물 예를 들어 5-아미노살리실산 및 이의 프로드러그; 하이드록사이클로로퀸; D페니실린아민; 안티메타볼리트 예를 들어 아자티오프린, 6-메르캅토푸린 및 테코트렉세이트; DNA 합성 억제제 예를 들어 하이드록시우레아 및 미소관 분열 예를 들어 콜히친을 포함한다. 본 발명의 화합물의 제 2 활성 성분에 대한 중량 비는 다양할 수 있고 각 성분의 유효 용량에 의존할 것이다. 일반적으로, 각각의 유효 용량이 사용될 것이다. 따라서, 예를 들어 본 발명의 화합물이 NSAID와 혼합되는 경우에, 본 발명의 화합물의 상기 NSAID에 대한 중량 비는 일반적으로 약 1000:1 내지 약 1:1000, 바람직하게 약 200:1 내지 약 1:200 범위일 것이다. 본 발명의 화합물 및 다른 활성 성분의 조합은 또한 일반적으로 상기 언급된 범위 내에 있을 것이지만, 각 경우에, 각 활성 성분의 효과적 용량이 사용되어야 한다.
전구/ 줄기 세포 이동을 유도하는 방법
추가로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 전구/줄기세포를 이동시키는데 유용할 수 있고 따라서 모든 목적을 위해 전체적으로 참조로서 본원에 통합된, WO05/000333에 기재된 방법 및 프로토콜에 따라 본 발명의 화합물을 임의로 사용하여, 전구/줄기세포 이동이 효과 있거나 바람직한 질병 또는 질환을 치료하고 완화하는데 유용할 수 있다. 완화되거나 달리 이롭게 될 수 있는 질환은, 예를 들어, 조혈 장애, 예컨대 무형성 빈혈, 백혈병, 약 유도된 빈혈, 및 화학 요법 또는 방사선 치료로부터의 조혈 결핍을 포함할 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 면역 억제 치료 중 또는 후 이식의 성공을 높임에 있어서 뿐만 아니라 더욱 효과적인 상처 치료를 달성함에 있어서 사용될 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 전구/줄기세포를 이동시키고 따라서 모든 목적을 위해 그대로 참조로서 본원에 통합된, WO05/000333에 기재된 방법 및 프로토콜에 따라 본 발명의 화합물을 임의로 사용하여, 전구/줄기세포 이동이 효과적이거나 바람직한 질병 또는 질환을 치료하거나 완화시키는데 유용할 수 있다. 완화되거나 달리 이익이 될 수 있는 질환은, 예를 들어, 조혈 장애, 예컨대 무형성 빈혈, 백혈병, 약-유도된 빈혈, 및 화학요법 또는 방사선 치료로부터의 조혈 결핍을 포함한다. 추가로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 면역억제 치료 중 및 후 이식의 성공을 높임에 있어서 뿐만 아니라 박테리아 감염의 치료 및 더욱 효과적인 상처 치료를 달성하는데 있어서 사용될 수 있다. 임의로 본 발명의 화합물의 투여 후, 그리고 전구/줄기세포 이동 후, 이동된 세포를 포함하는 혈액은 수집되고 임의로, 상기 이동된 세포는 정제되고 임의로 팽창되며, 바람직하다면 동일한 사람 또는 두 번째 사람(예를 들어, 매치된 도너)로 재도입된다.
많은 상이한 타입의 세포는 바람직하게 이동될 수 있다. 일부 구체예에서, 조혈 전구 세포(HSCs)는 본 발명의 화합물 또는 조성물의 투여 후 이동되고, 다른 혈액 성분으로부터 임의로 수확되고 정제된다. 임의로 HSC 이동은 하나 또는 그 초과의 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF) 또는 AMD3100(1,1'-[1,4-페닐렌비스(메틸렌)] 비스 [1,4,8,11-테트라아자사이클로테트라데칸] 옥토히드로브로마이드 디수화물) 또는 이의 염, 라세미체 또는 이성질체와 함께 본 발명의 하나 이상의 화합물의 투여에 의해 유도된다.
일부 구체예에서, 내피 전구 세포(EPCs)는 본 발명의 화합물 또는 조성물의 투여 후 이동되고, 임의로 다른 혈액 성분으로부터 수확되고 정제된다. 임의로, EPC 이동은 하나 또는 그 초과의 혈관 내피 성장 인자(VEGF), VEGF 작용제(제한됨 없이, VEGF 작용제 항체를 포함한다) 또는 AMD3100 또는 이의 염, 라세미체, 또는 이성질체와 함께 본 발명의 하나 이상의 화합물의 투여에 의해 유도된다.
일부 구체예에서, 간엽줄기세포(MSCs) 또는 간질성 전구 세포(SPCs)는 본 발명의 화합물 또는 조성물의 투여 후 이동되고, 임의로 다른 혈액 성분으로부터 수확되고 정제된다. 임의로, 이러한 이동은 하나 또는 그 초과의 G-CSF, VEGF, VEGF 작용제(제한됨 없이, VEGF 작용제 항체를 포함한다), AMD3100, 또는 이의 염, 라세미체 또는 이성질체와 함께 본 발명의 하나 이상의 화합물의 투여에 의해 유도된다.
전구 또는 줄기세포를 고정하기 위해, 적당한 복용 수준은 일반적으로 하루당 환자 몸무게 Kg 당 약 0.001 내지 100 mg일 것이며, 이는 단일 또는 다중 투여량으로 투여될 수 있다. 이 화합물은 단일 투여, 시간에 따른 투여, 예를 들어, i.v. 내, 또는 경피 투여 또는 다중 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 세포 배양을 준비하기 위해 생체 외 처리 프로토콜로 사용될 수 있으며, 이는 그 다음에 피검체의 혈액 세포를 보충하기 위해 사용된다. 생체외 처리는 말초 혈액 또는 골수로부터 또는 매치된 도너로부터의 동족이식편으로부터 수확된 자가 조직 세포에서 수행될 수 있다.
본 발명의 화합물은 전구/줄기 세포의 활성, 증식 또는 이동을 유도하는 다른 화합물 및 조성물과 함께 배합될 수 있다. 상기 기재된 것들을 추가하여, 이들은 제한됨 없이 Fms-관련된 티로신 키나제 3 리간드(Flt3 리간드), 인터루킨 3 (IL-3), 인터루킨 7 (IL-7), 인터루킨 20 (IL-20), 스틸 인자(SF) 및 과립구 마크로파지 콜로니-자극 인자(GM-CSF)을 포함하고, 전구/줄기세포의 이동과 동시에, 전, 또는 후에 치료로부터의 이익되거나 요구될 수 있는 치료적 유용성을 제공할 수 있다. 따라서, 조합 방법 및 조성물은 또한 당해 질병 또는 질환을 예방하고 치료하기 위한 본 발명의 성분이다. 추가로, 본 발명의 화합물은 줄기 세포 이동(stem cell mobilization)의 이상조절(disregulation)이 원인으로 작용할 수 있는 상태, 예컨대 심장병 및 폐고혈압에 이점을 제공할 수 있다.
CXCR7와 관련한 질병 및 장애를 진단하는 방법
추가로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 CXCR7와 관련한 질병 및 장애의 진단에 유용하다. 특별히, 본 발명의 화합물은 표지된 형태로 제조될 수 있고(예를 들어, 방사성 표지) 예를 들어 암의 진단을 위해 사용될 수 있다. CXCR7에 결합하는 본 발명의 표지된 화합물(예를 들어, 길항제 또는 작용제)은 포유류 피검체에서 CXCR7의 수준을 측정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, CXCR7 조절자는 암을 가진 피검체에 투여된다. 일부의 경우에, 표지된 화합물은 암, 예를 들어, 암종, 신경교종, 중피종, 흑색종, 림프종, 백혈병, 선암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 교아종, 백혈병, 림프종, 전립선암, 및 버킷 림프종, 두경부 암, 결장암, 대장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 식도암, 위암, 췌장암, 간담도 암, 쓸개의 암, 소장 암, 직장 암, 신장 암, 방광 암, 전립선 암, 성기 암, 요도 암, 고환암, 자궁 경부암, 질 암, 자궁 암, 난소 암, 갑상선 암, 부갑상선암, 부신 암, 췌장 내분비 암, 유암성 암, 뼈 암, 피부암, 망막아종, 호킨스 림프종(Hodgkin's lymphoma), 비-호킨스 림프종(참조, Cancer:Principles and Practice (DeVita, V.T. et al. eds 1997) for additional cancers); 뿐만 아니라 두뇌와의 연결 장애, 예컨대 알츠하이머 병 및 다발성 경화증; 신장 기능 장애; 류마티스성 관절염; 심장 이식 거부; 아테롬성 동맥 경화증(및 상승된 콜레스테롤 수준); 천식; 사구체신염; 접촉성 피부염; 염증성 장질환; 대장염; 건선; 재관류 손상; 뿐만 아니라 본원에 기재된 다른 장애 및 질병의 발달을 탐지하기 위해 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 피검체는 카포지 육종, 다발성 캐슬만 질병 또는 AIDS-관련한 원발성 삼출성림프종을 가지지 않는다. CXCR7이 암 세포에는 발현되지만, 암이 아닌 세포에는 발현되지 않기 때문에, CXCR7의 길항제를 암을 가질 위험에 처한 피검체에 투여하는 것은 일반적으로 바람직하다.
다양한 이미징 및 탐지 방법은 암의 탐지를 위해 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 직접적 방법은 자기공명화상법("MRI"), 양전자 방사 단층 촬영("PET"), 및 단일 광자 방출 전산화 단층 촬영("SPECT")과 같은 몸의 CXCR7 생물학적 분배를 평가하는데 이용될 수 있다. 이 방법들의 각각은, 적당한 핵 특성을 가지는 원자를 화합물이 함유한다면 몸 안에 적절히 표지된 화합물(일반적으로 CXCR7에 결합된)의 분배를 탐지할 수 있다. MRI는 상자 성체의 핵(paramagnetic nuclei)을 탐지하고; PET 및 SPECT는 방사성핵(radionuclei)의 붕괴로부터 입자의 방출을 탐지한다.
PET를 포함하는 방법을 위해, 적당한 위치-방출 방사선핵종(positron-emitting radionuclide)를 통합하는 것은 필요하다. 치료제를 표지하기에 적합한 상대적으로 적은 수의 양전자 방출 동위 원소가 있다. 탄소 동위원소, 11C는 PET에 대해 사용되었지만, 20.5분의 짧은 반감기를 가진다. 따라서, 합성 및 사용을 위한 시설은 전형적으로 사이클로트론에 근접하며, 여기서, 전구체 11C 출발 물질이 발생된다. 또 다른 유용한 동위 원소, 18F는 110분의 반감기를 가진다. 이는 인간 또는 동물 피검체로의 투여 및 정제에 대해 방사성 표지된 추적자로의 통합을 위한 충분한 시간을 제공한다. 다른 동소원소는 훨씬 더 짧은 반감기를 가진다. 13N은 10분의 반감기를 가지고 15O는 2분의 훨씬 더 짧은 반감기를 가진다. 상기 두 동소원소의 방출은 11C 보다 더욱 에너제틱하고, PET 연구는 이 동위원소들로 수행되고 있다(참조, Clinical Positron Emission Tomography, Mosby Year Book, 1992, K. F. Hubner, et al., Chapter 2).
SPECT 이미징은 γ-이미터(emitter)인 동위원소 추적자를 사용한다. 유용한 동소원소의 범위가 PET보다 더 크지만, SPECT로의 이미징은 더 낮은 3차원 해상도를 제공한다. 그러나, 일부 예에서, SPECT는 화합물 결합, 국소화 및 글래어런스 레이트(clearance rates)에 대한 임상적 중요한 정보를 얻기 위해 사용된다. SPECT 이미징을 위한 하나의 유용한 동위원소는 13.3 시간 반감기를 가진 γ-이미터인 123I이다. 123I 으로 표지된 화합물은 제조 부위로부터 약 1000마일 이하 쉽핑(shipping)될 수 있거나, 그 자체의 동위원소는 온사이트(on-site) 합성을 위해 이동될 수 있다. 85퍼센트의 동위원소의 방출은 159 KeV 프로톤이며, 이는 현재 사용중인 SPECT 기구에 의해 측정된다. 다른 할로겐 동위원소는 PET 또는 SPECT 이미징을 위해 제공될 수 있거나 통상적 트레이서(tracer) 표지를 위해 제공될 수 있다. 이는 사용가능한 반감기 및 방출 특성을 가지는 것으로서 75Br, 76Br, 77Br 및 82Br를 포함한다.
상기로부터, 본 발명은 종양, 기관 또는 조직을 이미징하는 방법을 제공하며, 이 방법은:
(a) 방사성 표지되거나 탐지가능한 형태의 화학식 I의 화합물의 이러한 이미징이 필요한 피검체에 투여하고;
(b) 상기 화합물은 상기 피검체 어디에서 농축되어 있는지를 알아내기 위해 상기 화합물을 탐지하는 것을 포함한다.
추가로, 본 발명은 샘플에서 CXCR7의 높아진 수준을 탐지하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은:
(a) CXCR7의 높아진 수준을 가질 것으로 의심되는 샘플을 방사성 표지되거나 탐지가능한 형태의 화학식 I의 화합물과 접촉시키고;
(b) 상기 샘플 중에 존재하는 CXCR7에 결합된 화합물의 수준을 알아내어 상기 샘플 중 존재하는 CXCR7의 수준을 알아내고;
(c) 단계 (b)에서 측정된 수준을 대조군 샘플과 비교하여 CXCR7의 높아진 수준이 상기 샘플에 존재하는지 알아내는 것을 포함한다.
본원에 기재된 치료 방법에 대해서, 표지된 화합물의 투여는 평가될 조직에 궁극적 접촉으로 화합물을 도입하는데 보통 사용되는 임의의 경로에 의해 사용될 수 있고 당업자에 잘 알려진 방법에 의할 수 있다. 하나 초과의 경로가 특별한 조성물을 투여하기 위해 사용되지만, 특별한 경로는 또 다른 경로보다 더욱 즉각 그리고 더욱 효과적인 진단을 제공할 수 있다.
조합 치료
CXCR7의 억제제는 단독으로, 또는 하나 이상의 다른 약물과 함께 공급될 수 있다. 가능한 조합 상대는 예를 들어, 추가의 항-혈관신생 인자 및/또는 화학치료제(예를 들어, 세포독성제) 또는 방사선, 암 백신, 면역조절제, 항-혈관제, 신호 전달 억제제, 항증식성 제제(antiproliferative agent), 또는 아폽토시스 유발자(apoptosis inducer)를 포함할 수 있다.
IV. 실시예
하기 예들은 청구된 본 발명을 제한하려는 것이 아니고 예시하려는 목적으로 제공된다.
아래에서 사용되는 시약 및 용매는 Aldrich Chemical Co.(미국 밀워키, 위스콘신)과 같은 화학 공급원으로부터 얻어질 수 있다. 1H-NMR 스펙트럼은 Varian Mercury 400 MHz NMR 스펙트로미터에서 기록되었다. 유의한 피크는 TMS에 비교하여 제공되고 순서: 다중도(s, 싱글렛(singlet); d, 더블렛(doublet); t, 트리플렛(triplet); q, 쿼텟(quartet); m, 멀티플렛(multiplet)) 및 프로톤의 수로 표로 만들어진다(tabulate). 질량 분석 결과는 변화에 대한 질량의 비율로서 기록되고, 후속하여 (괄호로) 각 이온의 상대적 양이 기록된다. 이 예에서, 단일 m/e 값은 가장 일반적 원자 동위원소를 함유하는 M+H (또는, 알려진 바와 같이, M-H) 이온에 대해 기록된다. 동위원소 패턴은 모든 경우에서 기대된 식에 상응한다. 전기 분무 이온화(ESI) 질량 분석 결과 분석은 샘플 전달을 위한 HP1100 HPLC를 사용하는 Hewlett-Packard MSD 전기 분무 질량 분석기에서 수행되었다. 일반적으로 분석물질은 0.1 mg/mL에서 메탄올에서 용해되었고 1 마이크로리터는 질량 분석기로 전달 용매와 함께 주입되었고, 이는 100 내지 1500 달톤으로 스캔된다. 모든 화합물은 전달 용매로서 1% 포름산과 아세토니트릴/물을 사용하여, 포지티브 ESI 모드에서 분석될 수 있었다. 아래 제공된 화합물은 또한 네거티브 ESI 모드에서 또한 전달 시스템으로서 아세토니트릴/물 내 2mM NH4OAc를 사용하여, 분석될 수 있었다.
하기 약어는 본 발명의 상세한 설명을 통해 그리고 실시예에서 사용된다: rt, 실온; HPLC, 고압 액체 크로마토그래피; TFA, 트리플루오로아세트산; LC-MSD, 액체 크로마토그래프/질량 선택적 검출기; LC-MS, 액체 크로마토그래프/질량 분석기; Pd2dba3, 트리(디벤질리덴아세톤) 디팔라듐; THF, 테트라히드로푸란; DMF, 디메틸포름아미드 또는 N,N-디메틸포름아미드; DCM, 디클로로메탄; DMSO, 디메틸 술폭사이드; TLC, 박-층 크로마토그래피; KHMDS, 포타슘 헥사메틸디실라잔; ES, 전기 분무; sat. 포화.
본 발명의 범위 내의 화합물은 당업자에 알려진 다양한 반응을 사용하여, 아래 기재된 바와 같이 합성될 수 있다. 당업자는 또한 대안적 방법이 본 발명의 표적 화합물의 합성을 위해 사용될 수 있고 본원에 기재된 접근은 모든 것을 포괄하지 않고 넓게 이용가능하게 제공되고 당해 화합물에 실용적 경로를 제공하는 것임을 인식할 것이다.
본 특허에 청구된 특정 분자는 상이한 거울상 또는 입체상 형태로 존재할 수 있고 모든 이러한 변형된 화합물이 청구된다.
본 명세서에서 주요 화합물을 합성하는데 사용되는 실험적 과정의 상세한 설명은 이들을 식별하는 물리적 데이터에 의해 그리고 이들과 관련한 구조적 묘사에 의해 기재된 분자를 유도한다.
당업자는 또한, 유기 화학의 표적 작업 과정 중, 산 및 염기가 종종 사용됨을 인식할 것이다. 본 특허 화합물의 염은, 본 특허 내 기재된 실험 과정 중 이들이 필수의 본질적인 산성 또는 염기성을 가질 경우에 종종 생성된다.
실시예 1: 에틸 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00015
4-플루오로아닐린 (2.8 g, 26 mmol)을 10% HCl 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 이 용액에 10 mL 물 중에 용해된 NaNO2 (1.8 g, 26 mmol)을 조심스럽게 첨가하였다. 별도의 플라스크에서, NaOAc (13 g, 96 mmol), 및 물 (25 mL)을 메탄올 (80 mL) 중의 에틸 이소시아노아세테이트 (2.0 g, 18 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 용액을 0℃로 냉각시키고, 4-플루오로아닐린의 디아조늄 염을 15분 동안 조심스럽게 첨가하였다. 0℃에서 추가의 15분 동안 계속 교반하고, 이후 플라스크를 얼음조에서 제거하고, 추가의 2시간 동안 계속 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 500 mL 물에 첨가하고, 형성되는 갈색 침전물을 여과에 의해 수거하고, 진공 하에서 건조시켜 3.8 g의 요망하는 에스테르 (90% 수율)를 얻었다.
실시예 2: 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00016
1.84 g의 에틸 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (7.83 mmol)를 110 mL의 물 중의 0.63 g의 수산화나트륨 (2 당량)의 용액 중에 현탁시켰다. 혼합물을 격렬하게 교반하고, 서서히 50℃가 되게 하였으며, 이때 모든 고형물이 용해되었다. 용액을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하여 총 부피가 400 mL가 되게 하였다. 혼합물을 격렬하게 교반하면서 1.31 mL의 진한 HCl (2 당량)을 첨가하였다. 15분 동안 계속 교반하고, 모든 고형물이 균일하게 분산되게 하였다. 백색 고형물을 여과하고, 깔때기에서 15 mL의 물로 철저히 세척한 후, 50℃에서 진공 오븐에서 건조시켜 1.6 g의 산 생성물을 백색 분말 (99% 수율)로서 얻었다.
실시예 3: 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-아세틸 클로라이드의 합성
Figure 112015062207692-pct00017
1.71 g (8.24 mmol)의 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산을 15 mL의 1,2-디클로로에탄 중에 현탁시키고, 이후 1.24 mL (12.4 mmol)의 옥살릴 클로라이드를 실온에서 적가한 후, 1.6 ㎕ (0.021 mmol)의 DMF를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 교반한 후, 서서히 60℃ 이하가 되게 하였다. 또 다른 1.6 ㎕ 부분의 DMF를 첨가하자, 5분 후 물질이 완전히 용해되었다. 용액을 진공 하에 농축시켜 1.86 g의 요망하는 생성물을 연황색 고형물 (100% 수율)로서 얻었다. 생성물을 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
실시예 4: 에틸 1-(4-클로로-3-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00018
50 mL의 플라스크에 3.00 g의 4-클로로-3-플루오로벤젠브로마이드 (15 mmol), 1.40 g의 에틸 1-H-피라졸-3-카르복실레이트 (10 mmol), 400 mg의 CuI (2.0 mmol), 4.5 g의 K2CO3 (3.3 mmol) 및 0.9 mL의 트랜스-N,N'-디메틸사이클로헥사일디아민 (2.0 mmol)을 충전시켰다. 형성된 혼합물을 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 200 mL EtOAc로 희석하고, 이후 물 (2 x 50 mL), 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0 - 25% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (1.2g, 50%)을 얻었다.
실시예 5: 1-(4-클로로-3-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00019
THF 중의 에틸 1-(4-클로로-3-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실레이트 (268 mg, 1 mmol)의 용액에 3.0 mL의 1.0M의 LiOH ( 3.0 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이때에 1.0 M의 HCl를 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 유기물을 EtOAc (2x 100 mL)로 추출하고, 이후 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 백색 고형물 (230 mg, 96%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 6: 에틸 1-(4-클로로페닐)피라졸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00020
50 mL의 플라스크에 2.87 g의 4-클로로벤젠브로마이드 (15 mmol), 1.40 g의 에틸 1-H-피라졸-3-카르복실레이트 (10 mmol), 400 mg의 CuI (2.0 mmol), 4.5 g의 K2CO3 (3.3 mmol) 및 0.9 mL의 트랜스-N,N'-디메틸사이클로헥사일디아민 (2.0 mmol)을 충전하였다. 형성된 혼합물을 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 200 mL EtOAc로 희석한 후, 물 (2 x 50 mL) 및 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0 - 25% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (1.25 g, 50%)을 얻었다.
실시예 7: 1-(4-클로로페닐)피라졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00021
THF 중의 에틸 1-(4-클로로페닐)피라졸-3-카르복실레이트 (250 mg, 1 mmol)의 용액에 3.0 mL의 1.0 M의 LiOH (3.0 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이때에 1.0 M HCl를 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 유기물을 EtOAc (2x 100 mL)로 추출하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 백색 고형물 (213 mg, 96%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 8: 에틸 1-(3-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00022
50 mL의 플라스크에 2.62 g의 3-플루오로벤젠브로마이드 (15 mmol), 1.40 g의 에틸 1-H-피라졸-3-카르복실레이트 (10 mmol), 400 mg의 CuI (2.0 mmol), 4.5 g의 K2CO3 (3.3 mmol) 및 0.9 mL의 트랜스-N,N'-디메틸사이클로헥사일디아민 (2.0 mmol)을 충전하였다. 형성된 혼합물을 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 200 mL EtOAc로 희석하고, 이후 물 (2 x 50 mL), 및 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 0 - 25% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (1.17g, 50%)을 얻었다.
실시예 9: 1-(3-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00023
THF 중의 에틸 1-(3-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실레이트 (234 mg, 1 mmol)의 용액에 3.0 mL의 1.0M의 LiOH (3.0 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 1.0 M의 HCl를 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 유기물을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출한 후 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 백색 고형물 (198 mg, 96%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 10: 에틸 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-5-메틸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00024
4-플루오로하이드라진 하이드로클로라이드 (12.8 g, 7.7 mmol) 및 에틸 티오옥사메이트 (10g, 7.7mmol)를 물 (80ml) 중에 현탁시킨 후, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이 혼합물에 트리에틸아민 (10.77 ml, 7.7 mmol)을 적가하였다. 형성된 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 여과된 고형물을 물 (2 X 200ml)로 세척하여 황색 고형물 (13.8g, 6.1mmol)을 얻었다. 11.25 g의 이 황색 고형물 (50 mmol)을 EtOH (50 ml) 및 4 M HCl (0.5 ml) 중에 용해시킨 후, 트리에틸 오르쏘아세테이트(8.9 g, 55 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하고, 고형물 (10 g, 85%)을 수거하고, 이후 이를 실온으로 냉각시켰다.
실시예 11: 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-5-메틸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00025
1.94 g의 에틸 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-5-메틸-3-카르복실레이트 (7.83 mmol)를 110 mL의 물 중의 0.63 g의 수산화나트륨 (2 당량)의 용액 중에 현탁시켰다. 혼합물을 격렬하게 교반하고, 서서히 50℃ 이하가 되게 하였으며, 이때 모든 고형물이 용해되었다. 용액을 실온으로 냉각시키고, 총 부피 400 mL이 되도록 물로 희석하였다. 혼합물을 격렬하게 교반하면서 1.31 mL의 진한 HCl (2 당량)를 첨가하였다. 15분 동안 계속 교반하였다. 이후, 백색 고형물을 여과하고, 15 mL의 물로 철저히 세척한 후, 진공 오븐에서 50℃에서 건조시켜 1.7 g의 요망하는 산 생성물을 백색 분말 (99% 수율)로서 얻었다.
실시예 12: 에틸 2-피롤리딘티아졸-4-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00026
p-디옥산 (5 mL) 중의 에틸 2-클로로티아졸-4-카르복실레이트 (500 mg, 2.6 mmol), 피롤리딘 (210 mg, 2.98 mmol) 및 디에틸이소프로필 아민 (1 mL)의 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용액을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 화합물을 포움으로서 얻었다(400 mg, 68% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 227.1 (M+H+).
실시예 13: 2-피롤리딘티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00027
상기 에스테르 (400 mg, 1.8 mmol), MeOH (3 mL), THF (5 mL) 및 DI H2O (2 mL)의 혼합물에 LiOH 일수화물 (210 mg, 5 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 얼음-물로 희석하고, pH를 1 N HCl에 의해 3으로 조절하고, CH2Cl2 중의 20% MeOH로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(300 mg, 89% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 199.1 (M+H+).
실시예 14: 2-(4-하이드록시-피페리딘-1-일)-티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00028
a) 플라스크에 4-하이드록시피페리딘 (236 mg, 2.33 mmol), 에틸 2-브로모티아졸-4-카르복실레이트 (500 mg, 2.12 mmol), K2CO3 (879 mg, 6.36 mmol), 및 N-메틸피롤리딘 (3.5 mL)을 충전하였다. 반응 혼합물을 90℃로 가열시키고, 밤새 교반하였다. 이후, 반응물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고, 물 (5 × 30 mL)로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 미정제 물질을 실리카 겔 (95:5 - 20:80 헥산:EtOAc)로 정제하여 2 당량의 N-메틸피롤리딘 (883 mg)과 혼합된 생성물을 등명한 무색 오일로서 얻었다.
b) 단계 a로부터의 2-(4-하이드록시-피페리딘-1-일)-티아졸-4-카르복실산 에틸 에스테르 혼합물을 MeOH (10 mL) 중에 용해시켰다. 이것에 NaOH (2 M, 5.00 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반한 후, 1M NaHSO4 (30 mL)로 희석시켰다. 이 용액을 EtOAc (3 × 50 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물 (433 mg, 1.90 mmol, 90%)을 백색 고형물로서 얻었다.
실시예 15: 2-(피롤리딘-1-일)티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00029
a) p-디옥산 (5 mL) 중의 에틸 2-클로로티아졸-4-카르복실레이트 (500 mg, 2.6 mmol), 피롤리딘 (210 mg, 2.98 mmol) 및 디에틸이소프로필 아민 (1 mL)의 혼합물을 2시간 동안 60℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 화합물을 포움으로서 얻었다(400 mg, 68% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 227.1 (M+H+).
b) 상기 에스테르 (400 mg, 1.8 mmol), MeOH (3 mL), THF (5 mL) 및 DI H2O (2 mL)의 혼합물에 LiOH 일수화물 (210 mg, 5 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 얼음-물로 희석하고, pH를 1 N HCl에 의해 3으로 조절하고, 용액을 CH2Cl2 중의 20% MeOH로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(300 mg, 89% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 199.1 (M+H+).
실시예 16: 메틸 1-(o-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00030
a) 10 mL DMF 중의 메틸 1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (1.0 g, 7.9 mmol)의 용액에 o-플루오로페닐보론산 (1.1 g, 7.9 mmol), Cu(OAc)2 (1.6 g, 8.8 mmol), 및 피리딘 (0.70 mL, 8.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃ 오일조에 넣고, 3.5 시간 동안 격렬하게 교반하였다. 이후, 혼합물을 100 mL EtOAc로 희석하고, 여과하고, 1:3 v/v 진한 NH4OH - 포화된 NH4Cl로 세척하였다. 감압 하에서 용매를 제거한 후, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 20-80% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 280 mg의 백색 분말 (16% 수율)을 얻었다.
b) 4 mL MeOH 중에 용해된 단계 a로부터의 에스테르(280 mg, 1.3 mmol)의 용액에 2.5 mL의 1.0 M NaOH를 첨가하였다. 15분 교반한 후, 6.0 m HCl를 첨가하고(0.42 mmol, 2.5 mmol), MeOH를 감압 하에 제거하고, 백색 침전물을 여과에 의해 수거하고, 진공 하에서 건조시켜 150 mg의 요망하는 산 (57% 수율)을 얻었다.
실시예 17: 1-(o-톨릴)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00031
3 mL THF 중의 에틸 1-(o-톨릴)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (400 mg, 1.7 mmol)의 용액에 4 M LiOH (2 mL, 8 mmol)를 첨가한 후, 3 mL의 MeOH를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 50℃에서 교반하고, 이후 pH를 진한 HCl을 첨가하여 4로 조절하였다. 추출, 건조(MgSO4), 여과 및 감압 하 건조 후, 43 mg의 잔류물이 회수되었고(12%), 이를 추가의 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
실시예 18: 1-(p-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00032
4-플루오로아닐린 (2.8 g, 26 mmol)을 10% HCl 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 이 용액에 10 mL 물 중에 용해된 NaNO2 (1.8 g, 26 mmol)을 조심스럽게 첨가하였다. 별도의 플라스크에서, NaOAc (13 g, 96 mmol), 및 물 (25 mL)을 메탄올 (80 mL) 중의 에틸 이소시아노아세테이트 (2.0 g, 18 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 용액을 0℃로 냉각시키고, 4-플루오로아닐린의 디아조늄 염을 15분 동안에 걸쳐 조심스럽게 첨가하였다. 0℃에서 추가 15분 동안 계속 교반하고, 이후, 플라스크를 얼음조에서 제거하고, 추가 2시간 동안 계속 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 500 mL 물에 첨가하고, 형성되는 갈색 침전물을 여과에 의해 수거하고, 진공 하에서 건조시켜 3.8 g의 요망하는 에스테르 (90% 수율)를 얻었다.
실시예 19: N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-2-페닐-티아졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00033
a) 에틸 3-메틸-1H-피롤-2-카르복실레이트 (2.45 g, 16.0 mmol)를 8 mL의 NMP와 2-브로모-1,1-디에톡시에탄 (3.23 mL, 20.8 mmol)의 혼합물 중에 용해시켰다. 60% 수소화나트륨 (0.77 g, 19.2 mmol)을 실온에서 나누어 첨가하였다. 형성된 용액을 5시간 동안 130℃에서 가열한 후, 실온으로 냉각시켰다. 이후, 용액을 100 mL의 물로 희석하고, 형성된 혼합물을 100 mL의 MTBE로 한번에 추출하였다. 유기층을 진공 하에 증발시키고, 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 10-40% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 1.90 g의 요망하는 화합물을 무색 오일 (44% 수율)로서 얻었다.
b) 1.90 g (7.06 mmol)의 에틸 1-(2,2-디에톡시에틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실레이트 (상기 단계 a에서 제조됨)를 40 mL의 에탄올-물 혼합물 (1:1) 중에 용해시켰다. 1.48 g (35.3 mmol)의 수산화리튬 일수화물을 첨가한 후, 혼합물을 8시간 동안 75℃로 가열하였다. 냉각시킨 후, 대부분의 에탄올을 진공 하에 증발시켰다. 형성된 용액을 30 mL의 물로 희석하고, 2.33 g의 아세트산 (38.8 mmol)으로 중화시킨 후, 두 부분의 30 mL의 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 1.68 g의 무색 고형물 (99% 수율)을 얻었다.
c) 1.68 g (6.97 mmol)의 1-(2,2-디에톡시에틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복실산 (상기 단계 b에서 제조됨)을 15 mL의 NMP와 디옥산 중의 45 mL의 0.5 M 암모니아 가스 용액의 혼합물 중에 용해시켰다. 3.18 g의 HATU (8.36 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이 혼합물에 10 mL의 NMP를 첨가하고, 디옥산을 진공 하에 증발시켰다. 또 다른 부분의 HATU를 첨가하고(1.59 g, 4.18 mmol), 암모니아 가스를 혼합물을 통해 버블링시키고, 반응이 더 이상 진행하지 않을 때까지 관찰하였다. 이후, 혼합물을 300 mL의 염수로 희석하고, 150 mL의 MTBE로 한번에 추출하였다. 유기층을 진공 하에 증발시키고, 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 20-100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 1.26 g의 요망하는 화합물을 무색 오일 (75% 수율)로서 얻었다.
d) 1.25 g (5.21 mmol)의 1-(2,2-디에톡시에틸)-3-메틸-1H-피롤-2-카르복스아미드 (상기 단계 c에서 제조됨)를 30 mL의 빙초산 중에 용해시키고, 4시간 동안105℃로 가열한 후, 진공 하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 25 mL의 고온의 디클로로메탄 중에 용해시킨 후, 30 mL의 헥산으로 희석하고, 그 동안 대부분의 디클로로메탄이 증발하였다. 고형물을 여과하고, 5 mL의 헥산으로 세척하고, 건조시켜 730 mg의 순수한 요망하는 화합물을 황갈색 분말 (95% 수율)로서 얻었다.
e) 725 mg (4.90 mmol)의 8-메틸-2H-피롤로[1,2-a]피라진-1-온 (상기 단계 d에서 제조됨)을 7 mL의 포스포릴 클로라이드 중에 현탁시키고, 실온에서 밤새 교반한 후, 4시간 동안 35℃로 가열하였다. 이후, 형성된 용액을 진공 하에 증발 건조시켰다. 잔류물을 10 mL의 디클로로메탄 및 10 mL의 중탄산나트륨 수용액의 혼합물 중에 흡수시키고, 가스 발생이 중단될 때까지 교반하였다. 분리된 유기층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 9 mL의 고온의 n-헵탄 중에 용해시켰다. 용액에서 불용성 블랙 타르를 따라내고, 진공 하에 농축시켜 774 mg의 요망하는 생성물을 오프-화이트 고형물 (95% 수율)로서 얻었다.
f) 646 mg (3.87 mmol)의 1-클로로-8-메틸-피롤로[1,2-a]피라진 (상기 단계 e에서 제조됨), 2.16 g (11.6 mmol)의 (S)-3-(Boc-아미노)피롤리딘, 1 mL의 N,N-디이소프로필에틸아민 및 1 mL의 NMP을 합하고, 1시간 동안 120℃로 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 50 mL의 물로 희석하고, 세 부분의 50 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 고형물 중탄산나트륨을 수성층에 첨가하고, 이를 다시 50 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 중탄산나트륨 수용액으로 세척하고, 진공 하에 증발시키고, 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 20-60% EtOAc/헥산)를 사용하여 정제하여 872 mg의 요망하는 화합물을 무색 오일 (71% 수율)로서 얻었다.
g) 872 mg (2.75 mmol)의 3차-부틸 N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]카르바메이트 (상기 단계 f에서 제조됨)를 3.5 mL의 디옥산 중에 용해시켰다. 이 용액에 디옥산 중의 3.5 mL의 염화수소 용액(4 M)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 60℃에서 교반하자, 이 동안에 무색 고형물의 침전이 관찰되었다. 휘발물질을 진공 하에 제거하여 739 mg의 요망하는 화합물을 추가 정제 없이 얻었다(93% 수율).
h) 39 mg (0.135 mmol)의 (3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (상기 단계 g에서 제조됨) 및 28 mg (0.135 mmol)의 2-페닐티아졸-4-카르복실산을 0.5 mL의 NMP 중에 용해시켰다. 이 혼합물에 77 mg (0.203 mmol)의 HATU 및 0.117 mL (0.675 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 3 mL의 DMSO로 희석시키고, 상 반-분취용 HPLC 시스템 (5-60% 아세토니트릴/물, 0.1% TFA) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 66 mg의 요망하는 생성물을 TFA 염 (95% 수율)로서 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00034
실시예 20: 1-(4-클로로페닐)-N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00035
40 mg (0.138 mmol)의 (3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 및 31 mg (0.138 mmol)의 1-(4-클로로페닐)피라졸-3-카르복실산을 0.5 mL의 NMP 중에 용해시켰다. 이 혼합물에 79 mg (0.207 mmol)의 HATU 및 0.120 mL (0.690 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 3 mL의 DMSO로 희석시키고, 역상 반-분취용 HPLC 시스템 (5-60% 아세토니트릴/물, 0.1% TFA) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 진공 하에 농축시키고, 1 mL의 메탄올 중에 용해시키고, 바이카르보네이트 수지 카트리지 (PL-HCO3 MP SPE 500 mg/6 mL)를 통과시켰다. 형성된 용액에 15 ㎕의 진한 염산을 첨가하고, 휘발물질을 진공 하에 제거하여 49 mg의 요망하는 생성물을 HCl 염 (78% 수율)으로서 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00036
실시예 21: 6-메틸-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]퀴나졸린-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00037
43 mg (0.156 mmol)의 (3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 및 33 mg (0.156 mmol)의 6-메틸퀴나졸린-2-카르복실산 하이드로클로라이드를 0.4 mL의 NMP 중에 용해시켰다. 이 혼합물에 85 mg (0.224 mmol)의 HATU 및 155 ㎕ (0.892 mmol)의 N,N-디이소프로필에틸아민을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반한 후, 3 mL의 DMSO로 희석시키고, 역상 반-분취용 HPLC 시스템 (5-40% 아세토니트릴/물, 0.1% TFA) 상에 직접 주입하였다. 순수한 분획을 진공 하에 농축시켜 39 mg의 요망하는 생성물을 TFA 염 (51% 수율)로서 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00038
실시예 22: 1-(4-클로로페닐)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00039
0.80 mL DMSO 중의 1-(4-클로로페닐)피라졸-3-카르복실산 (49 mg, 0.22 mmol)의 용액에 (3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (74 mg, 0.27 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.12 mL, 0.86 mmol) 및 HATU (92 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 1.5 시간 후, 반응 혼합물을 1 mL 물로 희석하고, 여과하고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 22-36% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 생성물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00040
실시예 23: 1-(o-톨릴)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00041
0.80 mL DMSO 중의 1-(o-톨릴)피라졸-3-카르복실산 (35 mg, 0.17 mmol)의 용액에 (3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (46 mg, 0.17 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.10 mL, 0.70 mmol) 및 HATU (80 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 디클로로메탄 (70 mL)으로 희석하고, 물 (20 mL)로 세척하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-40% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00042
실시예 24: 1-(o-톨릴)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00043
1 mL DMSO 중의 1-(o-톨릴)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (43 mg, 0.21 mmol)의 용액에 (3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (60 mg, 0.22 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.12 mL, 0.89 mmol) 및 HATU (80 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 20분 후, 반응 혼합물을 10 mL 물로 켄칭시키고, 디클로로메탄로 추출하였다. 유기층을 분리시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-40% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 20 mg의 요망하는 화합물 (19% 수율)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00044
실시예 25: N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-5-페닐-피리미딘-2-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00045
a) 0.80 mL DMSO 중의 5-브로모피리미딘-2-카르복실산 (41 mg, 0.20 mmol)의 용액에 (3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (61 mg, 0.21 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.12 mL, 0.86 mmol) 및 HATU (81 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 20분 후, 반응 혼합물을 10 mL 물로 켄칭시키고, 디클로로메탄로 추출하였다. 유기층을 분리시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/디클로로메탄 중의 2% 7 M NH3)에 의해 정제하였다. MS: (ES) 402.2 (M+H+).
b) 4 mL 바이알에서, 단계 a로부터의 생성물을 페닐보론산 (24 mg, 0.2 mmol), Pd(PPh3)4 (23 mg, 0.020 mmol), 탈기된 톨루엔 (2 mL), 및 탈기된 2 M K2CO3 (0.3 mL, 0.6 mmol)과 합하였다. 바이알을 밀봉시키고, 반응 혼합물을 예열된 고온 플레이트에서 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 생성물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00046
실시예 26: N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-1-(o-톨릴)피라졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00047
0.60 mL DMSO 중의 1-(o-톨릴)피라졸-3-카르복실산 (27 mg, 0.13 mmol)의 용액에 (3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (39 mg, 0.13 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.080 mL, 0.58 mmol) 및 HATU (53 mg, 0.14 mmol)를 첨가하였다. 15분 후, 아세트산 (0.060 mL, 1 mmol)을 반응 혼합물에 첨가한 후, CH3OH (0.60 mL) 및 물 (0.70 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-40% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 생성물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00048
실시예 27: N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-2-페닐-옥사졸-4-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00049
0.5 mL DMSO 중의 2-페닐옥사졸-4-카르복실산 (24 mg, 0.13 mmol)의 용액에 (3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (41 mg, 0.14 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.080 mL, 0.58 mmol) 및 HATU (53 mg, 0.14 mmol)를 첨가하였다. 15분 후, 아세트산 (0.060 mL, 1 mmol)을 반응 혼합물에 첨가한 후, CH3OH (0.60 mL) 및 물 (0.70 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-40% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 생성물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00050
실시예 28: 5-페닐-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피리미딘-2-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00051
a) 2.0 mL DMSO 중의 5-브로모피리미딘-2-카르복실산 (120 mg, 0.59 mmol)의 용액에 (3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (160 mg, 0.58 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.30 mL, 2.2 mmol) 및 HATU (228 mg, 0.60 mmol)를 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 10 mL 물로 켄칭시키고, 디클로로메탄로 추출하였다. 유기층을 분리시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/디클로로메탄 중의 2% 7 M NH3)에 의해 정제하였다. MS: (ES) 388.2 (M+H+).
b) 4 mL 바이알에서, 단계 a로부터의 탈기된 생성물(80 mg, 0.21 mmol)을 페닐보론산 (29 mg, 0.24 mmol), Pd(PPh3)4 (25 mg, 0.021 mmol), 탈기된 톨루엔 (2 mL), 및 탈기된 2 M K2CO3 (0.35 mL, 0.7 mmol)과 합하였다. 바이알을 밀봉시키고, 반응 혼합물을 예열된 고온 플레이트에서 30분 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-40% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 생성물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00052
실시예 29: 5-페닐-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]-4H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00053
0.70 mL DMSO 중의 소듐 5-페닐-4H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (50 mg, 0.24 mmol)의 용액에 (3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (80 mg, 0.29 mmol)를 첨가한 후, 트리에틸아민 (0.14 mL, 1.0 mmol) 및 HATU (105 mg, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-30% 구배)에 의해 직접 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 생성물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00054
실시예 30: 5-(디메틸아미노)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피리미딘-2-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00055
4mL 바이알에서, 4-브로모-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]벤즈아미드 (57 mg, 0.15 mmol)를, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (26 mg, 0.023 mmol), 2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필바이페닐 ("X-Phos", 49 mg, 0.10 mmol), Cs2CO3 (250 mg, 0.77 mmol), 탈기된 톨루엔 (1.0 mL), 및 THF 중 2 M 디메틸아민(1 mL, 2 mmol)과 합하였다. 바이알을 밀봉시키고, 반응 혼합물을 22 시간 동안 100℃에서 교반하였다. 이를 실리카 겔 상에 흡수시키고, 플래시 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/디클로로메탄 중의 2-5% 7 M NH3)에 의해 정제한 후, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 생성물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00056
실시예 31: 5-(1-하이드록시에틸)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피리미딘-2-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00057
a) 15 mL 두꺼운 벽의 가압 용기에 4-브로모-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]벤즈아미드 (289 mg, 0.747 mmol), 트리-n-부틸(1-에톡시비닐)주석(0.35 mL, 1.0 mmol), 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(30 mg, 0.042 mmol), 및 탈기된 디옥산 (4 mL)을 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 예열된 (140℃) 오일조에 침지시켰다. 25분 후, 용기를 오일조에서 제거하고, 실온으로 냉각되게 하고, 6 M HCl (0.40 mL, 2.4 mmol)로 처리하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 200 mL 디클로로메탄 및 20 mL 물로 희석하였다. 유기층을 분리시켜, 따로 분리시키고, 반면에 수성상을 NaOH로 염기성화시키고, 디클로로메탄로 추출하였다. 합한 유기층을 감압 하에 농축시키고, 남아있는 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2; 2-5% CH3OH/디클로로메탄)에 의해 정제하여 209 mg의 요망하는 화합물(80% 수율)을 얻었다. MS: (ES) 351.2 (M+H+).
b) 단계 a에서 제조된 케톤(56 mg, 0.16 mmol)을 5 mL MeOH 중에 용해시키고, 얼음조 상에서 0℃로 냉각시켰다. 소듐 보로하이드라이드(7.2 mg, 0.19 mmol)를 첨가하고, 반응물을 20분 동안 0℃에서 교반하였다. 반응물을 6 M HCl로 켄칭시키고, 감압 하에 농축시키고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 20-30% 구배)에 의해 직접 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00058
실시예 32: N-[(3R)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00059
1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (1.2 g, 6.3 mmol), (3R)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (2.0 g, 7.4 mmol), 및 디이소프로필에틸아민 (13 mL, 75 mmol)을 50 mL DMF 중에서 함께 합쳤다. 이 혼합물에 HATU (2.5 g, 6.6 mmol)를 첨가하였다. 3분간 교반한 후, 분취물의 LCMS가 반응이 종결되었음을 나타내었다. DIPEA 및 대부분의 DMF를 갑압 하에 제거하였다. 잔류물을 400 mL EtOAc로 희석하고, 50 mL 포화된 NaH2PO4로 세척하였다. 다량의 요망하는 생성물이 유기 상으로 존재하는 것으로 나타났고, 이에 따라 이를 400 mL 10 vol% i-PrOH/CHCl3로 추출하였다. 합한 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 2-5% MeOH/디클로로메탄)에 의해 정제하여 936 mg의 요망하는 생성물 (39% 수율)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00060
실시예 33: N-[(3S)-1-(3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00061
a) 5 mL 아세톤 중의 2-(트리클로로아세틸)피롤 (380 mg, 1.79 mmol) 및 K2CO3 (780 mg, 5.7 mmol)의 슬러리에 2 mL 아세톤 중의 1-브로모-2-부타논(400 mg, 2.7 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 19 시간 동안 교반한 후, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 3-에틸-1H-피롤로[2,1-c][1,4]옥사진-1-온 (298 mg, 정량적)을 얻었으며, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
b) 150 mL의 두꺼운 벽의 유리 가압 용기에, 단계 a로부터의 락톤, 3-에틸-1H-피롤로[2,1-c][1,4]옥사진-1-온 (2.6 g, 16 mmol), NH4OAc (6.0 g, 78 mmol), 및 아세트산 (40 mL)을 첨가하였다. 용기를 밀봉하고, 160℃로 설정된 예열된 오일조에 침지시키고, 3 시간 동안 교반하였다. 이후, 아세트산을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 2% MeOH/디클로로메탄)에 의해 정제하여 3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1(2H)-온 (760 mg, 29% 수율)을 얻었다. MS: (ES) 163.1 (M+H+).
c) 단계 b로부터의 3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1(2H)-온(760 mg, 4.7 mmol)을 POCl3 (20 mL)과 합하고, 80℃에서 20분 동안 교반하였다. POCl3를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 DCM 중에 흡수시키고, 포화된 중탄산나트륨으로 2회 세척하였다. 이후, 유기상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
d) 20 mL 바이알에서, 3차-부틸 N-[(3S)-피롤리딘-3-일]카르바메이트 (610 mg, 3.3 mmol), 단계 c로부터의 1-클로로-3-에틸피롤로[1,2-a]피라진(470 mg, 2.6 mmol), DIPEA (2.0 mmol, 11 mmol), 및 1-부틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트 (100 mg, 0.4 mmol)을 합하고, 및 혼합물을 45분 동안 110℃에서 가열하였다. 1-메틸피롤리디논(1 mL)을 첨가한 후, 추가의 3차-부틸 N-[(3S)-피롤리딘-3-일]카르바메이트 (200 mg, 1.1 mmol)를 첨가하고, 반응물을 추가 한 시간 동안 110℃에서 교반하였다. 이후, 추가의 400 mg (2.2 mmol)의 아미노피롤리딘을 첨가하고, 혼합물을 추가 20분 동안 110℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 건조시키고, 플래시 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/디클로로메탄 중의 2% 7 M NH3)에 의해 정제하였다. 요망하는 Boc-보호된 중간체를 건조 후에 얻었다. 잔류물을 최소량의 메탄올 및 디클로로메탄 중에 흡수시키고, 디옥산 중의 4 M HCl(3 mL, 12 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 50℃에서 가열하고, 30분 동안 교반하고, 이 시간 후 플라스크를 열로부터 제거하고, 실온으로 냉각되게 하고, 에테르를 첨가하였다. 형성된 갈색 침전물, (3S)-1-(3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드를 여과에 의해 수거하고, 진공 하에 건조시켰다; 638 mg, 86% 수율.
e) 1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (34 mg 0.18 mmol), (3S)-1-(3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (63 mg, 0.21 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL, 0.93 mmol)를 1 mL DMSO 중에서 합하였다. HATU (74 mg, 0.19 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 40분 동안 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00062
실시예 34: N-[(3S)-1-(3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00063
1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (35 mg 0.17 mmol), (3S)-1-(3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (60 mg, 0.20 mmol) 및 트리에틸아민 (0.12 mL, 0.86 mmol)을 1 mL DMSO 중에서 합하였다. HATU (72 mg, 0.19 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 50분 동안 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00064
실시예 35: N-[(3S)-1-(3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-2-(4-하이드록시-1-피페리딜)티아졸-4-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00065
2-(4-하이드록시-1-피페리딜)티아졸-4-카르복실산 (40 mg 0.18 mmol), (3S)-1-(3-에틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (60 mg, 0.20 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL, 0.93 mmol)을 1 mL DMSO 중에서 합하였다. HATU (77 mg, 0.20 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 40분 동안 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00066
실시예 36: 1-(4-플루오로페닐)-N-[(3R)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00067
1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (300 mg 1.4 mmol), (3R)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (400 mg, 1.4 mmol) 및 트리에틸아민 (1.5 mL, 11 mmol)의 혼합물을 8 mL DMF 중에서 합하였다. 혼합물을 30분 동안 교반한 후, HATU (576 mg, 1.5 mmol)를 첨가하고, 이후 혼합물을 1시간 동안 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 크로마토그래피하였다 (SiO2, 5-20% MeOH/EtOAc). 플래시 크로마토그래피로부터 회수된 잔류물의 일부를 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 70 mg의 요망하는 화합물의 TFA 염을 얻었다. TFA 염을, 이를 포화된 NaCl (1 mL) 중에 현탁시키고, 1 M NaOH (0.6 mL, 0.6 mmol)를 첨가하고, 디클로로메탄로 추출함으로써 유리 염기로 전환시켰다. 디클로로메탄을 제거하자 유리질 잔류물이 형성되었다. 샘플을 CH3CN/H20 중에 용해시키고, 건조시켜(동결건조제), 백색 분말 (28 mg, 5% 수율)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00068
실시예 37: N-[(3S)-1-(3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00069
a) 100 mL 아세톤 중의 2-(트리클로로아세틸)피롤 (5.3 g, 25 mmol) 및 K2CO3 (11g, 76 mmol)의 슬러리에 30 mL 아세톤 중의 1-브로모-3-메틸부탄-2-온 (4.5 g, 27 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 교반한 후, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 3-이소프로필-1H-피롤로[2,1-c][1,4]옥사진-1-온 (4.1 g, 93%)을 얻었으며, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
b) 150 mL 두꺼운 벽의 유리 가압 튜브에 단계 a로부터의 락톤, 3-이소프로필-1H-피롤로[2,1-c][1,4]옥사진-1-온 (4.1 g, 23 mmol), NH4OAc (9.4 g, 122 mmol), 및 아세트산 (25 mL)을 첨가하였다. 튜브를 테플론 부싱(teflon bushing)으로 밀봉하고, 160℃로 설정된 예열된 오일조에 침지시키고, 이 온도에서 9시간 동안 교반하였다. 튜브를 오일조로부터 제거하고, 추가의 10g(130mmol)의 NH4OAc를첨가하고, 반응물을 추가 3시간 동안 160℃에서 교반하였다. 이후, 아세트산을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 150 mL DCM 및 30 mL 포화된 NaHCO3 중에 흡수시켰다. 셀라이트를 통해 여과한 후, 수성상을 분리시키고, 폐기하고, 유기상을 농축시키고, 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 1% MeOH/디클로로메탄)에 의해 정제하여 2.0 그램의 3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1(2H)-온 (49% 수율)을 얻었다. MS: (ES) 177.2 (M+H+).
c) 단계 b로부터의 3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1(2H)-온(1.6 g, 4.7 mmol)을 POCl3 (20 mL)과 합하고, 20분 동안 70℃에서 교반하였다. POCl3을 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 DCM 중에 흡수시키고, 포화된 중탄산나트륨으로 2회 세척하였다. 이후, 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 5-10% MTBE/헥산)에 의해 정제하여 클로로-3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진 (1.09 g, 62% 수율)을 얻었다.
d) 20 mL 바이알에서, 3차-부틸 N-[(3S)-피롤리딘-3-일]카르바메이트 (2.06 g, 11.1 mmol), 단계 c로부터의 1-클로로-3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진(1.09 g, 5.6 mmol), DIPEA (4.0 mmol, 23 mmol), 및 1-메틸피롤리디논 (1 mL)을 합하고, 혼합물을 바이알에서 교반하면서 1시간 동안 110℃에서 가열하였다. 온도를 90℃로 감소시키고, 반응물을 추가 16시간 동안 교반하였다. 이후, 유기 반응 혼합물을 DCM (100 mL)로 희석하고, 물 (20 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/디클로로메탄 중의 2% 7 M NH3)에 의해 정제하였다. 요망하는 Boc-보호된 중간체를 건조 후에 얻었다. 이를 최소량의 메탄올 및 디클로로메탄 중에 흡수시키고, 디옥산 중의 4 M HCl(4 mL, 16 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 50℃에서 가열하고, 20분 동안 교반하고, 이 시간 후에 플라스크를 열로부터 제거하고, 실온으로 냉각되게 하고, 디옥산을 첨가하였다. 형성된 백색 침전물, (3S)-1-(3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드를 여과에 의해 수거하고, 진공 하에 건조시켰다; 925 mg, 52% 수율.
e) 1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (54 mg 0.29 mmol), (3S)-1-(3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (98 mg, 0.31 mmol) 및 트리에틸아민 (0.16 mL, 1.2 mmol)을 0.6 mL DMSO 중에서 합하였다. HATU (110 mg, 0.29 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00070
실시예 38: 1-(4-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-(3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00071
1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (53 mg 0.26 mmol), (3S)-1-(3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (91 mg, 0.29 mmol) 및 트리에틸아민 (0.16 mL, 1.15 mmol)을 0.6 mL DMSO 중에서합하였다. HATU (104 mg, 0.27 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00072
실시예 39: 2-(4-하이드록시-1-피페리딜)-N-[(3S)-1-(3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]티아졸-4-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00073
2-(4-하이드록시-1-피페리딜)티아졸-4-카르복실산 (54 mg, 0.24 mmol), (3S)-1-(3-이소프로필피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (81 mg, 0.26 mmol) 및 트리에틸아민 (0.14 mL, 1.0 mmol)을 0.6 mL DMSO 중에서 합하였다. HATU (104 mg, 0.27 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25분 동안 교반하였다. DMSO를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00074
실시예 40: 1-(2-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00075
1-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (41 mg 0.20 mmol), (3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (69 mg, 0.25 mmol), 및 트리에틸아민 (0.11 mL, 0.80 mmol)을 0.5 mL DMSO 중에서 합하였다. HATU (80 mg, 0.21 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 이것에 아세트산 (0.1 mL), MeOH (0.4 mL) 및 물 (1 mL)을 첨가하고, 여과하고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 40 mg의 요망하는 화합물 (40% 수율)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00076
실시예 41: N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1-(4-메틸설포닐페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00077
a) 100 mL 플라스크에 메틸 1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (2.8 g, 16 mmol), 4-아이오도페닐보론산 (4.0 g, 16 mmol), Cu(OAc)2 (3.3 g, 18 mmol), 피리딘 (1.5 mL, 19 mmol), 및 DMF (30 mL)를 충전하였다. 혼합물을 90℃로 설정된 예열된 오일조 상에서 30분 동안 교반하자, 이 시간 동안 용액이 진청색에서 연녹색으로 색상이 변하였다. 혼합물을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 여과하고, 3:1 v/v 포화된 NH4Cl·30% NH4OH로 세척하였다. 유기상을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 20%-60% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 메틸 1-(4-아이오도페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트의 백색 분말(830 mg, 16% 수율)을 얻었다.
b) 메틸 1-(4-아이오도페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (830 mg, 2.5 mmol)를 MeOH (20 mL) 및 THF (10 mL) 중에 용해시켰다. 1 M NaOH (2.5 mL, 2.5 mmol)를 첨가하고, 혼합물 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 추가의 1 M NaOH를 첨가하고(2.5 mL, 2.5 mmol), 반응물을 30분 동안 50℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 6 M HCl를 첨가하여 pH를 4로 조절하고, MeOH 및 THF를 감압 하에 제거하고, 형성된 백색 침전물을 여과에 의해 수거하고, 진공 하에서 건조시켜 680 mg (86% 수율)의 1-(4-아이오도페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산을 얻었다.
c) 1,2-디클로로에탄 (8 mL) 중의 1-(4-아이오도페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (680 mg, 2.15 mmol)의 현탁액에 옥살릴 클로라이드 (0.30 mL, 3.4 mmol)를 첨가한 후, DMF (0.020 mL, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 50℃ 오일조에서 5분 동안 교반하고, 이후 감압 하에 농축시키고, 진공 하에 건조시켰다. 얻어진 잔류물을 DCM (10 mL) 중에 현탁시키고, 이것에 (3S)-1-이미다조-[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (650 mg, 2.36 mmol)를 첨가한 후, DIPEA (1.5 mL, 8.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 잠시 비등되게 하고, 열원으로부터 제거하고, 추가 20분 동안 교반하였다. 감압 하에서 농축시킨 후, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2; 2% MeOH/디클로로메탄)에 의해 정제하여 886 mg의 백색 포움(82% 수율)을 얻었다.
d) 단계 c로부터의 N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1-(4-아이오도페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드(73 mg, 0.15 mmol), 소듐 메탄설피네이트 (31 mg, 0.30 mmol), CuI (5.4 mg, 0.028 mmol), 프롤린 (6.8 mg, 0.059 mmol), Cs2CO3 (23 mg, 0.70mmol) 및 DMSO (0.40mL)을 4 mL 바이알에서 함께 합하고, 3시간 동안 120℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00078
실시예 42: N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1-(p-톨릴)-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00079
4 mL 바이알에서, N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1-(4-아이오도페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 (64 mg, 0.13 mmol), 메틸보론산 (32 mg, 0.53 mmol), (1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)팔라듐(II) 디클로라이드 (9.5 mg, 0.013 mmol), CsF (67 mg, 0.44 mmol), 및 탈기된 디옥산 (0.80 mL)을 합하였다. 바이알을 밀봉시키고, 2시간 동안 90℃에서 교반하였다. 디옥산을 감압 하에 제거하고, 잔류물을 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00080
실시예 43: 1-(4-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 · 트리플루오로아세테이트 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00081
DCM (10 mL) 중의 1-(4-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르보닐 클로라이드 (70 mg, 0.31 mmol)의 현탁액에 (3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-아민 디하이드로클로라이드 (104 mg, 0.38 mmol)를 첨가한 후, DIPEA (0.70 mL, 4.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분간 교반하고, 감압 하에 농축시키고, 역상 분취용 HPLC (0.1% TFA 개질제 함께 CH3CN/H2O의 10-30% 구배)에 의해 정제하고, 건조시켜(동결건조제), 요망하는 화합물을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00082
실시예 44: 1-(4-시아노페닐)-N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00083
4 mL 바이알에 N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-1-(4-아이오도페닐)-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 (82 mg, 0.16 mmol), Zn(CN)2 (24 mg, 0.20 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (23 mg, 0.020 mmol), 및 탈기된 DMF를 첨가하였다. 바이알을 밀봉시키고, 혼합물 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. DMF를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/디클로로메탄 중의 7 M NH3)에 의해 정제하여 48 mg의 요망하는 생성물의 백색 분말(74% 수율)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00084
실시예 45: 1-(4-클로로페닐)-N-[(3S)-3-(하이드록시메틸)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00085
a) 1 (1.0 g , 4.6 mmol) 및 580 mg의 2 (580 mg, 3.8 mmol)의 혼합물에 1.7 mL의 후니그 염기(Hunig's base)(9.5 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 200 mL의 이소프로판올/클로로포름(1:2)을 첨가하고, 유기물을 포화된 NaHCO3 수용액 (2x20 ml) 및 염수 (2x 50 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc 중의 0-10% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 3을 갈색 분말(700 mg, 46%)로서 얻었다.
b) 디옥산 중의 3 (332 mg, 1.0 mmol) 및 3 mL의 4.0 M HCl(12 mmol)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 갈색 분말 (300 mg, 98%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
c) 10 mL 바이알에 중간체 A2 ( 92 mg, 0.417 mmol), 중간체 B1(122 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.437mmol), 후니그 염기 (146 mg, 1.12 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물(105 mg, 60%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00086
실시예 46: 1-(4-플루오로페닐)-N-[(3S)-3-(하이드록시메틸)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00087
10 mL 바이알에 중간체 A3 (83 mg, 0.417 mmol), 중간체 B1(122 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.437mmol), 후니그 염기 (146 mg, 1.12 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (120 mg, 71%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00088
실시예 47: N-[(3S)-3-(하이드록시메틸)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일]-2-(4-하이드록시-1-피페리딜)티아졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00089
10 mL 바이알에 중간체 A4 (90 mg, 0.395 mmol), 중간체 B1(122 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.437 mmol), 후니그 염기 (146 mg, 1.12 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (85 mg, 49%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00090
실시예 48: N-[(3S)-3-(하이드록시메틸)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일]-1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00091
10 mL 바이알에 중간체 A5 (76 mg, 0.40 mmol), 중간체 B1(122 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.437mmol), 후니그 염기 (146 mg, 1.12 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (110 mg, 62%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00092
실시예 49: 1-(4-플루오로페닐)-N-[(3S)-3-(하이드록시메틸)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00093
a) 1(1.0 g , 4.6 mmol) 및 580 mg의 2 (580 mg, 3.8 mmol)의 혼합물에 1.7 mL의 후니그 염기 (9.5 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 130℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 200 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)을 첨가하고, 유기물을 포화된 NaHCO3 수용액 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 50 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc 중의 0 - 10% MeOH)를 통해 정제하여 요망하는 생성물 3을 갈색 분말(900 mg, 58%)로서 얻었다.
b) 디옥산 중의 3 (333 mg, 1 mmol) 및 3 mL의 4.0 M HCl(12 mmol)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 갈색 분말 (300 mg, 98%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
c) 10 mL 바이알에 중간체 A3 (86 mg, 0.417 mmol), 중간체 B2 (120 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.437 mmol), 후니그 염기 (146 mg, 1.12 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (118 mg, 71%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00094
실시예 50: N-[(3S)-3-(하이드록시메틸)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일]-2-(4-하이드록시-1-피페리딜)티아졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00095
10 mL 바이알에 중간체 A4 (90 mg, 0.395 mmol), 중간체 B2 (120 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.437 mmol), 후니그 염기 (146 mg, 1.12 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석하고, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (81 mg, 49%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00096
실시예 51: N-[(3S)-3-(하이드록시메틸)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일]-1-페닐-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00097
10 mL 바이알에 중간체 A5 (76 mg, 0.40 mmol), 중간체 B2 (122 mg, 0.40 mmol), HATU ( 166 mg, 0.437 mmol), 후니그 염기 (146 mg, 1.12 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (110 mg, 62%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00098
실시예 52: 1-(4-플루오로페닐)-N-[(3R,4S)-4-하이드록시-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00099
a) 1 (120 mg, 0.59 mmol) 및 2 (90 mg, 0.59 mmol)의 혼합물에 1.0 mL의 후니그 염기 (5.5 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 200 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)을 첨가하고, 유기물을 포화된 NaHCO3 수용액 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 50 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc 중의 0 - 10% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 3을 갈색 분말 (150 mg, 79%)로서 얻었다.
b) 디옥산 중의 3 (150 mg, 0.47 mmol) 및 2 mL의 4.0 M HCl(8.0 mmol)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 갈색 분말 (130 mg, 95%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
c) 10 mL 바이알에 중간체 A3 (43 mg, 0.209 mmol), 중간체 B2 (60 mg, 0.20 mmol), HATU (83 mg, 0.218 mmol), 후니그 염기 (73 mg, 0.56 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (54 mg, 50%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00100
실시예 53: 중간체 A1의 합성
Figure 112015062207692-pct00101
a) 50 mL 플라스크에 1.89 g의 출발 물질 1 (15 mmol), 1.96 g의 출발 물질 2 (10 mmol), 400 mg의 CuI ( 2.0 mmol), 4.5g의 K2CO3 (3.3 mmol) 및 0.9 mL의 트랜스-N,N'-디메틸사이클로헥사일디아민 (2.0 mmol)을 충전하였다. 형성된 혼합물을 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 200 mL의 EtOAc를 첨가하고, 유기물을 물 (2 x 50 mL), 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피(헥산 중 0 - 25% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 3 (1.2 g, 50%)을 얻었다.
b) THF 중의 에스테르 3 (240 mg, 1 mmol)의 용액에 3.0 mL의 1.0 M LiOH (3.0 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 1.0 M HCl를 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하고, 유기물을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출한 후, MgSO4 상에서 건조시켰다. 감압 하에 농축시켜 생성물을 백색 고형물 (217 mg, 96%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
실시예 54: 1-[2-(시아노메틸)페닐]-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00102
10 mL 바이알에 중간체 A1 (45 mg, 0.20 mmol), 중간체 B4 (55 mg, 0.20 mmol), HATU (83 mg, 0.22 mmol), 후니그 염기 (73 mg, 0.6 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (56 mg, 68%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00103
실시예 55: 1-[2-(시아노메틸)페닐]-N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00104
10 mL 바이알에 중간체 A1 (45 mg, 0.20 mmol), 중간체 B5 (58 mg, 0.20 mmol), HATU (83 mg, 0.22 mmol), 후니그 염기 (78 mg, 0.6 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2 )으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (60 mg, 56%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00105
실시예 56: 1-(4-클로로-3-플루오로-페닐)-N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드 및 1-(3-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00106
10 mL 바이알에 중간체 A6 (48 mg, 0.20 mmol), 중간체 B5 (58 mg, 0.20 mmol), HATU (83 mg, 0.22 mmol), 후니그 염기 (78 mg, 0.6 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 클로로플루오로 (40 mg, 46%) 및 플루오로 (5 mg, 6%) 생성물을 얻었다. 1-(4-클로로-3-플루오로-페닐)-N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드:
Figure 112015062207692-pct00107
1-(3-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드:
Figure 112015062207692-pct00108
실시예 57: 2-(4-하이드록시-1-피페리딜)-N-[(3S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일]티아졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00109
10 mL 바이알에 중간체 A4 (45 mg, 0.20 mmol), 중간체 B5 (58 mg, 0.20 mmol), HATU (83 mg, 0.22 mmol), 후니그 염기 (78 mg, 0.6 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (35 mg, 41%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00110
실시예 58: 1-(4-클로로-3-플루오로-페닐)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드 및 1-(3-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00111
10 mL 바이알에 중간체 A6 (48 mg, 0.20 mmol), 중간체 B6 (58 mg, 0.20 mmol), HATU (83 mg, 0.22 mmol), 후니그 염기 (78 mg, 0.6 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물(2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 4-클로로-3-플루오로 생성물 (38 mg, 45%) 및 3-플루오로 생성물 (8 mg, 10%)을 얻었다.
1-(4-클로로-3-플루오로-페닐)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성:
Figure 112015062207692-pct00112
1-(3-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드:
Figure 112015062207692-pct00113
실시예 59: 2-(4-하이드록시-1-피페리딜)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]티아졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00114
10 mL 바이알에 중간체 A4 (45 mg, 0.20 mmol), 중간체 B6 (55 mg, 0.20 mmol), HATU (83 mg, 0.22 mmol), 후니그 염기 (78 mg, 0.6 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (65 mg, 79%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00115
실시예 60: 1-(5-클로로-2-피리딜)-N-[(3S)-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일피롤리딘-3-일]피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00116
10 mL 바이알에 중간체 A7 (45 mg, 0.20 mmol), 중간체 B6 (55 mg, 0.20 mmol), HATU ( 83 mg, 0.22 mmol), 후니그 염기 (78 mg, 0.6 mmol) 및 2 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (45 mg, 56%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00117
실시예 61: 2-(4-하이드록시-1-피페리딜)-N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]티아졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00118
10 mL 바이알에 중간체 A4 (90 mg, 0.40 mmol), 중간체 B7 (100 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.40 mmol), 후니그 염기 (156 mg, 1.2 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (80 mg, 48%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00119
실시예 62: 1-(4-플루오로페닐)-N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]-5-메틸-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00120
10 mL 바이알에 중간체 A8 (82mg, 0.30 mmol), 중간체 B7 (82 mg, 0.30 mmol), HATU (125 mg, 0.33 mmol), 후니그 염기 (160 mg, 1.23 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (65 mg, 53%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00121
실시예 63: 2-(4-하이드록시-1-피페리딜)-N-[(3S)-1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일피롤리딘-3-일]티아졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00122
10 mL 바이알에 중간체 A4 (90 mg, 0.40 mmol), 중간체 B8 (100 mg, 0.40 mmol), HATU (166 mg, 0.40 mmol), 후니그 염기 (156 mg, 1.2 mmol) 및 4 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)으로 희석한 후, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (75 mg, 45%)을 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00123
실시예 64: 3-[[1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르보닐]아미노]-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-카르복실산 및 N-3-카르바모일-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일 -1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00124
a) a (248 mg, 1.0 mmol) 및 b (152 mg, 1.0 mmol)의 혼합물에 2.0 mL의 후니그 염기 (9.5 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 130℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 100 mL의 이소프로판올/클로로포름 (1:2)을 첨가고, 이후, 혼합물을 포화된 NaHCO3 수용액 (2 x 20 mL) 및 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (EtOAc 중의 0 - 10% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 c를 갈색 분말 (250 mg, 67%)로서 얻었다.
b) 디옥산 중의 c (250 mg, 0.67 mmol) 및 2 mL의 4.0 M HCl(8 mmol)의 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 갈색 분말 (228 mg, 98%)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 중간 체 B9로서 사용하였다.
c) 10 mL 바이알에 중간체 A3 (136 mg, 0.66 mmol), 중간체 B9 (228 mg, 0.66 mmol), HATU (274 mg, 0.72 mmol), 후니그 염기 (257 mg, 1.98 mmol) 및 5 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고, 이후, 100 mL의 EtOAc로 희석하고, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(헥산 중의 50-100% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 d (220 mg, 72%)를 얻었다.
d) 10 mL 바이알에 d (230 mg, 0.50 mmol), 1 N LiOH (3 ml) 및 3 mL의 MeOH를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, pH를 3.0으로 조절하였다. 이후, 혼합물을 100 mL의 EtOAc로 추출하고, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피(헥산 중 100% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (205 mg, 95%)을 얻었다. 3-[[1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르보닐]아미노]-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-카르복실산:
Figure 112015062207692-pct00125
e) 10 mL 바이알에 3-[[1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르보닐]아미노]-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-카르복실산 (100 mg, 0.25 mmol), HATU (114 mg, 0.3mmol), DCM 중의 포화된 NH3 (2mL) 및 5 mL의 DMF를 충전하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 100 mL의 EtOAc로 희석하고, 물 (2 x 20 ml) 및 염수 (2 x 20 ml)로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (헥산 중의 50-100% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 생성물 (75 mg, 69%)을 얻었다. N-3-카르바모일-1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일-1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르복스아미드:
Figure 112015062207692-pct00126
실시예 65: 에틸 2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00127
0℃에서 9.2 mL의 EtOH/H2O (1:1) 중의 아닐린(0.58 g, 6.2 mmol)의 용액에 2.3 mL의 진한 HCl을 첨가한 후, NaNO2 (0.47 g, 6.8 mmol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 34 mL의 EtOH 중의 에틸글리옥살레이트 (1.74 g, 17 mmol, 3.1 eq)의 별도의 용액에 p-톨루엔설포닐하이드라지드 (1.0 g, 5.4 mmol, 1 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 농축시켰다. 잔류물을 34 mL의 피리딘 중에 재용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 냉각된 용액에 예비형성된 디아조늄 염을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후, H2O로 켄칭시켰다. 내용물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (hex: EtoAc 9:1)에 의해 정제하여 에틸 2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복실레이트 (0.84 g, 3.9 mmol, 71%)를 얻었다.
실시예 66: 2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00128
7.6 mL의 EtOH/H2O (1.5:1) 중의 에틸 2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복실레이트 (0.84 g, 3.9 mmol, 1 eq)의 용액에 NaOH (0.31 g, 7.8 mmol, 2 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 60℃로 가열시킨 후, 0.65 mL의 진한 HCl로 켄칭시켰다. 내용물을 여과하고, MeOH로 세척하고, 여액을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (100% EtoAc)에 의해 정제하여 2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복실산 (0.41 g, 2.2 mmol, 55%)을 얻었다.
실시예 67: (S)-3차-부틸 (1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00129
75 mL의 디이소프로필아민 및 34 mL의 NMP 중의 (S)-3차-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트 (80.2 g, 0.43 mol, 1.1 eq)의 용액에 8-클로로이미다조[1,2-a]피라진 (60 g, 0.39 mol, 1 eq)을 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 100℃로 가열시킨 후, 1.2 L의 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 (S)-3차-부틸 (1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (111.7 g, 0.37 mol, 94%)를 얻었다.
실시예 68: (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민의 합성
Figure 112015062207692-pct00130
0℃에서 290 mL의 MeOH 중의 아세틸 클로라이드 (114 mL, 1.6 mol)의 용액에 450 mL의 MeOH 중의 (S)-3차-부틸 (1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (111.7 g, 0.37 mol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 30분 동안 60℃에서 가열하였다. 생성물을 여과하고, 200 mL의 MeOH로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 (101.2 g, 1.6 mol, 100%)을 얻었다.
실시예 69: (S)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00131
1 mL의 DMSO 중의 2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복실산 (0.10 g, 0.53 mmol, 1 eq) 및 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 (0.15 g, 0.53 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (0.22 mL, 0.58 mmol, 1.1 eq) 및 HATU (0.22 g, 0.58 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-2-페닐-2H-테트라졸-5-카르복스아미드 (0.10 g, 0.26 mmol, 49%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00132
실시예 70: 메틸 6-(4-하이드록시피페리딘-1-일)피리다진-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00133
11 mL의 SOCl2 중의 6-클로로피리다진-3-카르복실산 (0.50 g, 3.2 mmol)의 용액을 2시간 동안 75℃에서 가열한 후, 농축시키고, 5 mL의 MeOH 중에 재용해시켰다. 용액에 MeOH 중의 25% 소듐 메톡사이드 (0.75 mL, 3.5 mmol, 1.1 eq) 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반한 후, H2O로 켄칭시키고, 디클로로메탄로 추출하였다. 잔류물의 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (EtOAc/MeOH 90:10)에 의해 6-클로로피리다진-3-카르복실산 및 6-메톡시피리다진-3-카르복실산의 2:1 혼합물(0.160 g)을 얻었다. 1.9 mL의 p-디옥산 중의 에스테르 및 클로라이드의 혼합물의 용액에 4-하이드록시 피페리딘 (0.094 g, 93 mmol)을 첨가한 후, 디이소프로필에틸아민 (0.49 mL, 2.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20시간 동안 100℃에서 가열한 후, 농축시켰다. 실리카 겔 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 메틸 6-(4-하이드록시피페리딘-1-일)피리다진-3-카르복실레이트 (0.15 g, 63 mmol)를 얻었다.
실시예 71: 6-(4-하이드록시피페리딘-1-일)피리다진-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00134
2.5 mL의 EtOH/H2O (1.5:1) 중의 에스테르 (0.15 g, 0.63 mmol, 1 eq)의 용액에 NaOH (0.08 g, 1.9 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 가열한 후, 0.16 mL의 진한 HCl로 켄칭시켰다. 내용물을 여과하고, MeOH로 세척하고, 여액을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 6-(4-하이드록시피페리딘-1-일)피리다진-3-카르복실산을 얻었다.
실시예 72: (S)-6-(4-하이드록시피페리딘-1-일)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)피리다진-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00135
1 mL의 DMSO 중의 6-(4-하이드록시피페리딘-1-일)피리다진-3-카르복실산 (0.10 g, 0.45 mmol, 1 eq) 및 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 (0.12 g, 0.44 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (0.19 mL, 0.49 mmol, 1.1 eq) 및 HATU (0.19 g, 0.49 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-6-(4-하이드록시피페리딘-1-일)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)피리다진-3-카르복스아미드 (0.12 g, 0.29 mmol, 66%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00136
실시예 73: 에틸 1-(3,4-디플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00137
0℃에서 5.4 mL의 H2O 중의 3,4-디플루오로아닐린 (1 mL, 10 mmol)의 용액에 2.8 mL의 진한 HCl를 첨가한 후, NaNO2 (1.0 g, 15 mmol, 1.5 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 추가량의 NaNO2 (0.35 g, 5 mmol, 0.5 eq)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 13 mL EtOH/H2O (12:1) 중의 NaOAc (8.9 g, 108 mmol, 11 eq)의 별개의 용액에 에틸-2-이소시아노아세테이트 (1.1 mL, 10 mmol, 1 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 디아조늄 염 혼합물을 적가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 H2O로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (hex: EtoAc 1:1)에 의해 정제하여 에틸 1-(3,4-디플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (0.30 g, 1.3 mmol, 13%)를 얻었다.
실시예 74: 1-(3,4-디플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00138
5 mL의 EtOH/H2O (1.5:1) 중의 에틸 1-(3,4-디플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실레이트 (0.30 g, 1.2 mmol, 1 eq)의 용액에 NaOH (0.095 g, 2.4 mmol, 2 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 가열한 후, 0.20 mL의 진한 HCl로 켄칭시켰다. 내용물을 여과하고, EtOAc로 세척한 후, MeOH로 세척하고, MeOH 여액을 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 1-(3,4-디플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (0.22 g, 0.98 mmol, 84%)을 얻었다.
실시예 75: (S)-1-(3,4-디플루오로페닐)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00139
1 mL의 DMSO 중의 1-(3,4-디플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (0.10 g, 0.44 mmol, 1 eq) 및 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 (0.12 g, 0.44 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (0.19 mL, 0.49 mmol, 1.1 eq) 및 HATU (0.19 g, 1.3 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-1-(3,4-디플루오로페닐)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 (0.046 g, 0.11 mmol, 25%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00140
실시예 76: (S)-3차-부틸 (1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00141
0.2 mL의 NMP 중의 (S)-3차-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트 (0.50 g, 2.7 mmol, 1 eq) 및 디이소프로필아민 (0.66 mL, 3.8 mmol, 1.4 eq)의 용액에 4-클로로피라졸로[1,5-a]피라진 (0.47 mL, 3.1 mmol, 1.1 eq)을 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (100% EtOAc)에 의해 정제하여 (S)-3차-부틸 (1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (0.740 g, 2.4 mmol, 91%)를 얻었다.
실시예 77: (S)-1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-아민의 합성
Figure 112015062207692-pct00142
3 mL의 디옥산 중의 (S)-3차-부틸 (1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (0.74 g, 2.4 mmol, 1 eq)의 용액에 디옥산 중의 4.0 M HCl (3 mL, 20 mmol, 4 eq)의 용액을 첨가하였다. 3시간 동안 60℃에서 가열한 후, 혼합물을 농축시켜 (S)-1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-아민 (0.670 g, 2.4 mmol, 100%)을 얻었다.
실시예 78: (S)-1-페닐-N-(1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00143
1 mL의 DMSO 중의 1-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (0.093 g, 0.49 mmol, 1.4 eq) 및 (S)-1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-아민 (0.10 g, 0.36 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (0.20 mL, 1.4 mmol, 2.6 eq) 및 HATU (0.21 g, 0.55 mmol, 1.5 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-1-페닐-N-(1-(피라졸로[1,5-a]피라진-4-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드 (0.095 g, 0.25 mmol, 52%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00144
실시예 79: (S)-3차-부틸 N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00145
2.6 mL의 DIPEA 중의 (S)-3차-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트 (0.91 g, 4.9 mmol, 1 eq)의 용액에 1-클로로피롤로[1,2-a]피라진 (0.75 g, 4.9 mmol, 1 eq) 및 1 방울의 1-부틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오르보레이트를 첨가하였다. 3시간 동안 110℃에서 가열한 후, 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (100% EtOAc)에 의해 정제하여 (S)-3차-부틸 N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (0.88 g, 2.9 mmol, 59%)를 얻었다.
실시예 80: (S)-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민의 합성
Figure 112015062207692-pct00146
3.6 mL의 디옥산 중의 (S)-3차-부틸 N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (0.88 g, 2.9 mmol, 1 eq)의 용액에 디옥산 중의 4.0 M HCl의 용액(3.6 mL, 14.5 mmol, 5 eq)을 첨가하였다. 1시간 동안 60℃에서 가열한 후, 혼합물을 농축시켜 (S)-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 (0.79 g, 2.9 mmol, 100%)을 얻었다.
실시예 81: (S)-5-브로모-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00147
20 mL의 DMSO 중의 5-브로모피리미딘-2-카르복실산 (2.0 g, 9.9 mmol, 1 eq) 및 (S)-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 (2.7 g, 9.9 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (5.4 mL, 39 mmol, 3.9 eq) 및 HATU (4.1 g, 11 mmol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (EtoAc:MeOH 2:3)에 의해 정제하여 (S)-5-브로모-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (5.0 g, 1.3 mmol, 13%)를 얻었다.
실시예 82: (S)-5-(사이클로펜트-1-엔-1-일)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00148
1.8 mL의 DMF 중의 (S)-5-브로모-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.10 g, 0.27 mmol, 1 eq)의 용액에 2-(사이클로펜트-1-엔-1-일)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.15 g, 0.77 mmol, 2.8 eq)를 첨가한 후, 0.2 mL의 H2O 중의 K2CO3 (0.18 g, 1.3 mmol, 4.8 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.02 g, 0.03 mmol, 0.09 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 120℃에서 가열한 후, 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (EtoAc:MeOH 1:1)에 의해 정제한 후 HPLC에 의해 정제하여 (S)-5-(사이클로펜트-1-엔-1-일)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.070 g, 0.19 mmol, 69%)를 얻었다.
실시예 83: (S)-5-사이클로펜트yl-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00149
1 mL의 MeOH 중의 (S)-5-(사이클로펜트-1-엔-1-일)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.07 g, 0.19 mmol, 1 eq)의 용액에 10% Pd/C (0.02 g, 0.02 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물에 H2 벌룬을 갖추고, 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 내용물을 여과하고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-5-사이클로펜틸-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.005 g, 0.013 mmol, 7%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00150
실시예 84: (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-6-메틸퀴나졸린-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00151
1 mL의 DMSO 중의 6-메틸퀴나졸린-2-카르복실산 (0.040 g, 0.21 mmol, 1.2 eq) 및 (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 (0.49 g, 0.18 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (0.10 mL, 0.7 mmol, 4 eq) 및 HATU (0.075 g, 0.20 mmol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-6-메틸퀴나졸린-2-카르복스아미드 (0.028 g, 0.07 mmol, 42%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00152
실시예 85: (S)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-6-메틸퀴나졸린-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00153
1 mL의 DMSO 중의 6-메틸퀴나졸린-2-카르복실산 (0.040 g, 0.21 mmol, 1.2 eq) 및 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 (0.49 g, 0.18 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (0.10 mL, 0.7 mmol, 4 eq) 및 HATU (0.075 g, 0.20 mmol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-6-메틸퀴나졸린-2-카르복스아미드 (0.057 g, 0.15 mmol, 86%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00154
실시예 86: 에틸 2-(4-클로로-2-포르밀-아닐리노)-2-옥소-아세테이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00155
0℃에서 1.6 mL의 DCM 중의 2-아미노-5-클로로-벤즈알데하이드 (0.10 g, 0.65 mmol, 1 eq)의 용액에 에틸클로로아세테이트 (0.09 mL, 0.85 mmol, 1.3 eq) 및 피리딘 (0.16 mL, 2.0 mmol, 3 eq)을 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응물을 H2O로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 10% 시트르산으로 세척한 후, 포화된 NaHCO3로 세척하고, 이후 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (hex:EtoAc 3:2)에 의해 정제하여 에틸 2-(4-클로로-2-포르밀-아닐리노)-2-옥소-아세테이트 (0.14 g, 0.55 mmol, 84%)를 얻었다.
실시예 87: 에틸 6-클로로퀴나졸린-2-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00156
5.5 mL의 아세트산 중의 에틸 2-(4-클로로-2-포르밀-아닐리노)-2-옥소-아세테이트 (0.14 g, 0.55 mmol, 1 eq)의 용액에 암모늄 아세테이트 (0.42 g, 5.4 mmol, 10 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 115℃에서 가열한 후, 혼합물을 농축시키고, 이후 H2O로 희석시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (hex:EtoAc 3:2)에 의해 정제하여 에틸 6-클로로퀴나졸린-2-카르복실레이트 (0.11 g, 0.48 mmol, 88%)를 얻었다.
실시예 88: (S)-3차-부틸 3-(6-클로로퀴나졸린-2-카르복스아미도)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00157
0.42 mL의 NMP 중의 에틸 6-클로로퀴나졸린-2-카르복실레이트 (0.200 g, 0.85 mmol, 1 eq)의 용액에 (S)-3차-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (0.16 g, 0.86 mmol, 1 eq) 및 디이소프로필에틸아민 (0.6 mL, 3.4 mmol, 4 eq)을 첨가하였다. 150℃에서 20시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 플래시 크로마토그래피를 통해 정제하여 (S)-3차-부틸 3-(6-클로로퀴나졸린-2-카르복스아미도)피롤리딘-1-카르복실레이트 (0.08 g, 0.21 mmol, 25%)를 얻었다.
실시예 89: (S)-6-클로로-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)퀴나졸린-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00158
1 mL의 p-디옥산 중의 (S)-3차-부틸 3-(6-클로로퀴나졸린-2-카르복스아미도)피롤리딘-1-카르복실레이트 (0.086 g, 0.23 mmol, 1 eq)의 용액에 디옥산 중의 4.0 M HCl 용액(0.29 mL, 1.2 mmol, 5 eq)을 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시켜 (S)-6-클로로-N-(피롤리딘-3-일)퀴나졸린-2-카르복스아미드를 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 수행되었다.
0.16 mL의 디이소프로필에틸아민 중의 미정제 아민의 용액에 1-클로로피롤로[1,2-a]피라진 (0.047 g, 0.31 mmol)을 첨가한 후, 1-부틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오르보레이트 한방울을 첨가하였다. 반응물을 20시간 동안 90℃에서 가열하였다. 잔류물을 HPLC에 의해 정제하여 (S)-6-클로로-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)퀴나졸린-2-카르복스아미드 (0.05 g, 0.013 mmol, 6%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00159
실시예 90: (S)-5-메틸-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00160
1 mL의 DMSO 중의 5-메틸피리미딘-2-카르복실산 (0.03 g, 0.22 mmol, 1 eq) 및 (S)-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 (0.060 g, 0.22 mmol, 1 eq)의 용액에 트리에틸아민 (0.12 mL, 0.86 mmol, 4 eq) 및 HATU (0.09 g, 0.24 mmol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 실온에서 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-5-메틸-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.029 g, 0.09 mmol, 41%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00161
실시예 91: (S)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-5-비닐피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00162
1 mL의 DMF 중의 (S)-5-브로모-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.10 g, 0.26 mmol, 1 eq)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (0.13 g, 0.84 mmol, 3.2 eq)을 첨가한 후, 0.2 mL의 H2O 중의 K2CO3 (0.18 g, 1.3 mmol, 5 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.02 g, 0.02 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 120℃에서 가열한 후, 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (EtoAc:MeOH 1:1)에 의해 정제한 후 HPLC에 의해 정제하여 (S)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-5-비닐피리미딘-2-카르복스아미드 (0.040 g, 0.12 mmol, 46%)를 얻었다.
실시예 92: (S)-5-에틸-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00163
1 mL의 MeOH 중의 (S)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-5-비닐피리미딘-2-카르복스아미드 (0.04 g, 0.12 mmol, 1 eq)의 용액에 10% Pd/C (0.013 g, 0.01 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물에 H2 벌룬을 갖추고, 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 내용물을 여과하고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-5-에틸-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.009 g, 0.25 mmol, 22%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00164
실시예 93: (S)-5-사이클로프로필-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00165
2 mL의 톨루엔 중의 (S)-5-브로모-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.25 g, 0.65 mmol, 1 eq)의 용액에 2-사이클로프로필-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.16 g, 1.86 mmol, 2.8 eq)을 첨가한 후, PCy3 (0.033 g, 0.11 mmol, 0.2 eq), 0.1 mL의 H2O 중의 K3PO4 (0.48 g, 2.3 mmol, 3.5 eq) 및 Pd(OAc)2 (0.013 g, 0.06 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 120℃에서 가열한 후, 혼합물을 여과하고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-5-사이클로프로필-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.009 g, 0.026 mmol, 4%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00166
실시예 94: (S)-5-(4-플루오로페닐)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00167
1.8 mL의 DMF 중의 (S)-5-브로모-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.036 g, 0.093 mmol, 1 eq)의 용액에 (4-플루오로페닐)보론산 (0.10 g, 0.71 mmol, 7.7 eq)을 첨가한 후, 0.2 mL의 H2O 중의 K2CO3 (0.18 g, 1.3 mmol, 14 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.02 g, 0.03 mmol, 0.3 eq)를 첨가하였다. 1시간 동안 120℃에서 가열한 후, 혼합물을 여과하고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-5-(4-플루오로페닐)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.014 g, 0.035 mmol, 37%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00168
실시예 95: (S)-5-(프로프-1-엔-2-일)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00169
1.8 mL의 DMF 중의 (S)-5-브로모-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.075 g, 0.19 mmol, 1 eq)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (0.10 g, 0.6 mmol, 3 eq)을 첨가한 후, 0.2 mL의 H2O 중의 K2CO3 (0.14 g, 0.99 mmol, 5 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.02 g, 0.02 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 2시간 동안 120℃에서 가열한 후, 혼합물을 여과하고, 농축시키고, 다음 단계로 넘기었다.
실시예 96: (S)-5-이소프로필-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00170
1 mL의 MeOH 중의 (S)-5-(프로프-1-엔-2-일)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.090 g, 0.26 mmol, 1 eq)의 용액에 10% Pd/C (0.027 g, 0.03 mmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물에 H2 벌룬을 갖추고, 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 내용물을 여과하고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-5-이소프로필-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)피리미딘-2-카르복스아미드 (0.048 g, 0.14 mmol, 53%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00171
실시예 97: 에틸 1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실레이트의 합성
Figure 112015062207692-pct00172
15 mL의 톨루엔 중의 1-플루오로-4-아이오도-벤젠 (1.47 g, 6.6 mmol, 1.3 eq) 및 에틸 1H-피라졸-3-카르복실레이트 (0.71 g, 5.1 mmol, 1 eq)의 용액에 CuI (0.19 g, 1.0 mmol, 0.2 eq), 트랜스-N,-N-디메틸사이클로헥산 1,2-디아민 (0.4 mL, 2.5 mmol, 0.2 eq), 및 탄산칼륨 (1.4 g, 10 mmol, 2 eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2일 동안 110℃에서 가열한 후, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (hex:EtoAc 4:1)에 의해 정제하여 에틸 1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실레이트 (0.92 g, 3.9 mmol, 77%)를 얻었다.
실시예 98: 1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00173
18 mL의 EtOH/H2O (1.5:1) 중의 에틸 1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실레이트 (0.92 g, 3.9 mmol, 1 eq)의 용액에 NaOH (0.47 g, 11.8 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 가열한 후, H2O로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (EtoAc:MeOH 3:1)에 의해 정제하여 1-(4-플루오로페닐)피라졸-3-카르복실산 (0.42 g, 2.0 mmol, 52%)을 얻었다.
실시예 99: (S)-1-(4-플루오로페닐)-N-(1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00174
1 mL의 DCM 중의 1-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 (0.04 g, 0.19 mmol, 1.5 eq)의 용액에 (S)-1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 (0.036 g, 0.13 mmol, 1 eq), 프로필포스폰산 무수물 (0.3 mL, 0.47 mmol, 2.5 eq), 및 N-메틸모르폴린 (0.15 mL, 1.36 mmol, 10.5 eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, H2O로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 농축시키고, HPLC에 의해 정제하여 (S)-1-(4-플루오로페닐)-N-(1-(8-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드 (0.030 g, 0.074 mmol, 57%)를 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00175
실시예 100: (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00176
a) 디에틸이소프로필 아민 (3 mL) 중의 8-클로로-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진 (620 mg, 4.0 mmol) 및 (S)-3차-부틸 피롤리딘-3-일 카르바메이트 (1.2 g, 6.5 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 120℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 EtOAc 중 10% MeOH로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 화합물을 포움으로서 얻었다(1.15 g, 95% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 305.2 (M+H+).
b) 상기 Boc-아민을 실온에서 CH2Cl2 (4 mL) 및 MeOH (3 mL) 중에 용해시킨 후, 디옥산 중의 4 N HCl (9 mL, 36 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 형성된 현탁액을 EtOAc로 희석시켰다. 여과 및 공기-건조에 의해 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(1.05 g, 정량적, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 205.1 (M+H+).
c) DMF (5 mL) 중의 상기 (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (90 mg, 0.32 mmol), 1-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (58 mg, 0.30 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 23 mg의 표제 화합물 (20% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00177
실시예 101: (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1-(4-플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00178
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (63 mg, 0.23 mmol), 1-(4-플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (42 mg, 0.2 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (76 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 32 mg의 표제 화합물 (40% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 394.2.
실시예 102: (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00179
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (94 mg, 0.34 mmol), 1-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 (63 mg, 0.3 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 50 mg의 표제 화합물 (42% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 393.2.
실시예 103: (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1-페닐-1H-이미다졸-4-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00180
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (109 mg, 0.4 mmol) 및 1-페닐-1H-이미다졸-4-카르복실산 (76 mg, 04 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (160 mg, 0.41 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 100 mg의 표제 화합물 (67% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 375.1.
실시예 104: (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-5-이소프로필피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00181
a) DMF (5 mL) 및 물 (1 mL) 중의 에틸 5-브로모피리미딘-2-카르복실레이트 (700 mg, 3 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (1.5 g, 9 mmol), 및 K2CO3 (2.1 g, 15 mmol)의 현탁액에 Pd(dppfCl2) (250 mg, 0.3 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 2분 동안 탈기시킨 후(N2), 1시간 동안 120℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 MeOH로 희석시키고, 셀라이트를 통해 여과시켰다. 여액을 다음 단계에 직접 사용하였다. MS: (ES) m/z 165.2 (M+H+).
b) 상기 여액에 10% Pd/C (습윤, 300 mg)를 첨가하고, 혼합물을 H2-벌룬 하에 밤새 교반하였다. 고형물을 여과시켜 냈다. 여액을 CH2Cl2 로 희석시키고, 1N HCl 및 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시켜 300 mg의 표제 화합물 (60% 수율)을 연갈색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 167.2 (M+H+).
c) DMF (5 mL) 중의 (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (84 mg, 0.3 mmol), 5-이소프로필피리미딘-2-카르복실산 (51 mg, 0.3 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 6 mg의 표제 화합물 (5% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 353.1.
실시예 105: (S)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-5-이소프로필피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00182
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (84 mg, 0.3 mmol) 및 5-이소프로필피리미딘-2-카르복실산 (85 mg, 0.5 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (190 mg, 0.5 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)의해 정제하여 35 mg의 표제 화합물 (32% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 352.1.
실시예 106: (±)-N-(3-(하이드록시메틸)-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-5-이소프로필피리미딘-2-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00183
DMF (5 mL) 중의 (±)-(3-아미노-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)메탄올 하이드로클로라이드 염 (62 mg, 0.2 mmol) 및 5-이소프로필피리미딘-2-카르복실산 (40 mg, 0.22 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (76 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)의해 정제하여 25 mg의 표제 화합물 (32% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 381.1.
실시예 107: (S)-N-(1-([1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00184
a) 톨루엔 중의 2-아미노피라진 (1.9 g, 20 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈 (2.62 g, 22 mmol)의 혼합물을 6시간 동안 가열 환류시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 다음 단계에 직접 사용하였다.
b) 얼음조에서 냉각된 MeOH (30 mL) 중의 상기 화합물의 용액에 NaOAc 삼수화물(3.65 g, 25 mmol)을 첨가한 후, NH2OH ·HCl (1.74 g, 25 mmol)을 서서히 첨가하였다. 혼합물을 6시간에 걸쳐 실온으로 서서히 가온되게 한 후, DCM 및 MeOH 중의 20% 7 N 암모니아 용액으로 희석하였다. 고형물을 여과하고, 여액을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOH로 분쇄시켰다. 여과 및 공기-건조에 의해 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(1.9 g, 69% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 139.1 (M+H+).
c) 상기 고형물 (1.9 g, 13.8 mmol) 및 PPA (15 mL)의 혼합물을 6시간 동안 90℃로 가열한 후, 얼음-물로 희석시키고, pH를 암모니아 수용액 및 NaHCO3에 의해 8로 조절하였다. 이후, 혼합물을 CH2Cl2 중 10% MeOH으로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(1.2 g, 75% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 121.1 (M+H+).
d) AcOH 중의 상기 고형물 (600 mg, 5 mmol)의 혼합물에 30% H2O2 수용액(1.8 mL, 19 mmol)을 실온에서 서서히 첨가하였다. 형성된 혼합물을 6시간 동안 90℃로 가열한 후, 얼음-물에 붓고, pH를 1 N NaOH에 의해 8로 조절하였다. 혼합물을 CH2Cl2 중 10% MeOH으로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 포움으로서 얻었다(120 mg, 17 % 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 137.2.1 (M+H+).
e) 상기 포움 (120 mg, 0.9 mmol) 및 POCl3 (5 mL)의 혼합물을 6시간 동안 120℃로 가열한 후, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석시키고, 포화된 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 황갈색 고형물로서 얻었다(50 mg, 36% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 155.0 (M+H+).
f) 디에틸이소프로필 아민 (2 mL) 중의 상기 8-클로로-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진 (50 mg, 0.32 mmol) 및 (S)-3차-부틸 피롤리딘-3-일 카르바메이트 (100 mg, 0.53 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 120℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 EtOAc 중 10% MeOH로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 화합물을 포움으로서 얻었다(80 mg, 82% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 305.2 (M+H+).
g) 상기 Boc-아민을 실온에서 CH2Cl2 (3 mL) 및 MeOH (1 mL) 중에 용해시킨 후, 디옥산 중의 4 N HCl(4 mL, 16 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 연황색 고형물로서 얻었다(72 mg, 정량적, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 205.1 (M+H+).
h) DMF (5 mL) 중의 상기 아민 하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol) 및 1-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 (46 mg, 0.22 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (86 mg, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제한 후 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 28 mg의 표제 화합물 (32% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00185
실시예 108: (S)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00186
a) 디에틸이소프로필 아민 (3 mL) 중의 8-클로로이미다조[1,2-a]피라진 (500 mg, 3.25 mmol) 및 (S)-3차-부틸 피롤리딘-3-일 카르바메이트 (1.0 g, 5.38 mmol)의 혼합물을 3시간 동안 120℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 EtOAc 중 10% MeOH로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래시 크로마토그래피 (SiO2, 용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제하여 요망하는 화합물을 포움으로서 얻었다(985 mg, 정량적, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 304.1 (M+H+).
b) 상기 Boc-아민을 실온에서 CH2Cl2 (5 mL) 및 MeOH (3 mL) 중에 용해시킨 후, 디옥산 중의 4 N HCl(9 mL, 16 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 형성된 현탁액을 EtOAc로 희석시켰다. 여과 및 공기-건조에 의해 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(895 mg, 정량적, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 204.1 (M+H+).
c) DMF (5 mL) 중의 상기 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (84 mg, 0.3 mmol) 및 1-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (57 mg, 0.3 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제한 후, 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 60 mg의 표제 화합물 (54% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00187
실시예 109: (S)-1-(4-플루오로페닐)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00188
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (55 mg, 0.2 mmol) 및 1-(4-플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (42 mg, 0.2 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가하고, HATU (76 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 45 mg의 표제 화합물 (57% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 393.1.
실시예 110: (S)-1-(3-플루오로페닐)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00189
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (84 mg, 0.3 mmol) 및 1-(3-플루오로페닐)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (63 mg, 0.3 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가하고, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 88 mg의 표제 화합물 (75% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 393.1.
실시예 111: (S)-N-(1-(이미다조[1,2-a]피라진-8-일)피롤리딘-3-일)-5-페닐-1,2,4-옥사디아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00190
a) -15℃에서 CH2Cl2 (30 mL) 중의 에틸 2-옥시미녹사메이트 (1.32 g, 10 mmol) 및 디에틸이소프로필 아민 (4 mL, 23 mmol)의 혼합물에 벤조일 클로라이드 (1.41 g, 10 mmol)를 2시간에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 혼합물을 5시간에 걸쳐 실온까지 서서히 가온되게 한 후, 얼음-물에 붓고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켜 요망하는 화합물을 백색 고형물로서 얻었다(2.36 g, 정량적, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다).
b) 상기 고형물 (1.2 g, 5 mmol) 및 피리딘 (6 mL)의 혼합물을 10시간 동안 120℃에서 가열하였다. 용매를 증발시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (용리액으로서 헥산 중 10 내지 25% EtOAc)에 의해 정제하여 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(900 mg, 83% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 219.1 (M+H+).
c) 상기 에스테르 (900 mg, 4.1 mmol), MeOH (5 mL), THF (5 mL) 및 DI H2O (5 mL)의 혼합물에 LiOH 일수화물 (420 mg, 10 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이후, 혼합물을 얼음-물로 희석하고, pH를 1 N HCl에 의해 3으로 조절한 후, 혼합물을 CH2Cl2 중 10% MeOH로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(900 mg, 83% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 219.1 (M+H+).
d) DMF (5 mL) 중의 상기 5-페닐-1,2,4-옥사디아졸-3-카르복실산 (58 mg, 0.3 mmol), (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-5-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (90 mg, 0.32 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 26 mg의 표제 화합물 (23% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 376.2.
실시예 112: (S)-1-(4-클로로페닐)-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00191
a) -5℃에서 H2O (30 mL) 중의 4-클로로아닐린 (2.56 g, 20 mmol) 및 con HCl (15 mL)의 혼합물에 H2O (5 mL) 중의 NaNO2 (1.38 g, 20 mmol)의 용액을 적가하고, 이후 이를 0℃에서 10분 동안 교반하여 디아조늄 염을 형성시켰다.
b) 상기 혼합물을 얼음조 하에 MeOH (100 mL) 및 H2O (10 mL) 중의 에틸 이소시아노아세테이트 (2.26 g, 20 mmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 5시간에 걸쳐 실온까지 서서히 가온되게 하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 중 10% MeOH로 희석시키고, NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 감압 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 황색 고형물로서 얻었다(1.5 g, 29% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 252.2 (M+H+).
c) 상기 에스테르 (1.5 g, 6 mmol), MeOH (30 mL), THF (50 mL) 및 DI H2O (15 mL)의 혼합물에 LiOH 일수화물 (2.5 g, 60 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 얼음-물로 희석하고, pH를 1 N HCl에 의해 3으로 조절한 후, 혼합물을 CH2Cl2 중의 15% iPrOH로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공 하에 농축시켜 요망하는 화합물을 오프-화이트 고형물로서 얻었다(900 mg, 83% 수율, 이를 다음 단계에 직접 사용하였다). MS: (ES) m/z 219.1 (M+H+).
d) DMF (5 mL) 중의 상기 5-페닐-1,2,4-옥사디아졸-3-카르복실산 (58 mg, 0.3 mmol), (S)-1-([1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피라진-5-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (90 mg, 0.32 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 26 mg의 표제 화합물 (23% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 376.2.
실시예 113: (S)-5-페닐-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-1,2,4-옥사디아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00192
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (90 mg, 0.32 mmol) 및 5-페닐-1,2,4-옥사디아졸-3-카르복실산 (58 mg, 0.3 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (120 mg, 0.31 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 플래시 크로마토그래피 (용리제로서 CH2Cl2 중의 2 내지 5% MeOH)에 의해 정제한 후, 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 15 mg의 표제 화합물 (18% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 374.1.
실시예 114: (S)-1-페닐-N-(1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복스아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00193
DMF (5 mL) 중의 (S)-1-(피롤로[1,2-a]피라진-1-일)피롤리딘-3-아민 하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.21 mmol) 및 1-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (40 mg, 0.21 mmol)의 현탁액에 디에틸이소프로필 아민 (650 mg, 5 mmol)을 첨가한 후, HATU (80 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 형성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, KH2PO4 및 NaHCO3의 포화된 수용액으로 세척한 후, 염수로 세척하였다. 유기층을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (용리제로서 0.1% TFA와 함께 아세토니트릴-H2O)에 의해 정제하여 15 mg의 표제 화합물 (18% 수율)을 백색 고형물로서 얻었다. MS: (ES) m/z 실측치 374.1
실시예 115: 1-(4-플루오로-페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00194
DMSO (0.5 mL)를 1-(4-플루오로-페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 (41 mg, 0.20 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (55 mg, 0.20 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.112 mL, 0.80 mmol)을 첨가한 후, HATU (84 mg, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시킨 후, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(9.5 mg, 0.02 mmol, 9% 수율).
Figure 112015062207692-pct00195
실시예 116: 2-페닐-옥사졸-4-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00196
2-페닐-옥사졸-4-카르복실산 에틸 에스테르 (500 mg, 2.30 mmol)를 THF (2.3 mL)과 MeOH (2.3 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 이것에 NaOH (10% 수성, 2.3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, EtOAc로 희석시키고, 1N HCl로 세척하였다. 수성층을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기물질을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물을 백색 고형물 (366 mg, 84%)을 얻었다.
실시예 117: 2-페닐-옥사졸-4-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00197
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐-옥사졸-4-카르복실산 (38 mg, 0.20 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (55 mg, 0.20 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.112 mL, 0.80 mmol)을 첨가한 후, HATU (84 mg, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 미정제 물질을 얻었다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(27 mg, 0.06 mmol, 28% 수율).
Figure 112015062207692-pct00198
실시예 118: 2-페닐-티아졸-4-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00199
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐-티아졸-4-카르복실산 (41 mg, 0.20 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (55 mg, 0.20 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물에 트리에틸아민 (0.112 mL, 0.80 mmol)을 첨가한 후, HATU (84 mg, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(34 mg, 0.07 mmol, 34% 수율).
Figure 112015062207692-pct00200
실시예 119: 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00201
DMSO (0.4 mL)를 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산 (15 mg, 0.07 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (19 mg, 0.07 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.039 mL, 0.28 mmol)을 첨가한 후, HATU (30 mg, 0.08 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(12 mg, 0.02 mmol, 34% 수율).
Figure 112015062207692-pct00202
실시예 120: 2-(4-플루오로-페닐)-티아졸-4-카르복실산 [1-(8-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00203
DMSO (0.5 mL)를 2-(4-플루오로-페닐)-티아졸-4-카르복실산 (31 mg, 0.14 mmol) 및 1-(8-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (40 mg, 0.14 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이 혼합물에 트리에틸아민 (0.078 mL, 0.56 mmol)을 첨가한 후, HATU (57 mg, 0.15 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 분획을 농축시키고, CH2Cl2 중에 흡수시키고, NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이후, 형성된 오일을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH 구배 99:1 내지 90:10)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 농축시킨 후, MeCN과 1M HCl의 혼합물로부터 동결시켜 생성물의 HCl 염을 백색 고형물로서 얻었다(32 mg, 0.06 mmol, 43% 수율).
Figure 112015062207692-pct00204
실시예 121: 2-(4-플루오로페닐)-티아졸-4-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00205
DMSO (0.5 mL)를 2-(4-플루오로-페닐)-티아졸-4-카르복실산 (56 mg, 0.25 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (70 mg, 0.25 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.139 mL, 1.0 mmol)을 첨가한 후, HATU (106 mg, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시킨 후, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 황색 고형물로서 얻었다(67 mg, 0.13 mmol, 51% 수율).
Figure 112015062207692-pct00206
실시예 122: 1-(테트라하이드로-피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00207
a) 플라스크에 4-하이드록시테트라하이드로피란 (3.00g, 29.4 mmol), 메탄설포닐 클로라이드 (2.39 mL, 30.9 mmol), 트리에틸아민 (8.20 mL, 58.8 mmol), 및 CH2Cl2를 충전하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 포화된 NaHCO3 수용액 (100 mL) 및 물 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이에 따라 얻어진 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
b) 바이알에 에틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트 (3.74 g, 26.7 mmol), 미정제 메탄설폰산 테트라하이드로-피란-4-일 에스테르 (29.4 mmol), Cs2CO3 (17.4 g, 53.4 mmol), 및 DMF (100 mL)를 충전하였다. 반응 혼합물을 80℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 CH2Cl2 (250 mL)과 물 (250 mL) 사이에 분배시키고, 유기층을 물 (5 × 250 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 2개의 레지오이성질체(regioisomer)를 함유하는 미정제 생성물을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (95:5 - 50:50 헥산:EtOAc)에 의해 정제하고, 나중에 용리되는 이성질체를 분리시켰다. 이를 실리카 겔 상에서 재차 정제하여(85:15 - 60:40 헥산:EtOAc) 순수한 요망하는 생성물 (1.14 g, 19%)을 얻었다.
c) 1-(테트라하이드로-피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산 에틸 에스테르 (1.14 g, 5.09 mmol)를 THF (5.0 mL)와 MeOH (5.0 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 이것에 NaOH (20% 수성, 5.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반시킨 후, EtOAc로 희석시키고, 1 M NaHSO4로 세척하였다. 수성층을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기물질을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 생성물을 백색 고형물(802 mg, 80%)로서 얻었다.
실시예 123: 1-(테트라하이드로-피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00208
DMSO (0.5 mL)를 1-(테트라하이드로피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산 (31 mg, 0.16 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (45 mg, 0.16 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.089 mL, 0.64 mmol)를 첨가한 후, HATU (68 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 담황색 고형물로서 얻었다(29 mg, 0.06 mmol, 37% 수율).
Figure 112015062207692-pct00209
실시예 124: 1-(테트라하이드로-피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산 (1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00210
DMSO (0.5 mL)를 1-(테트라하이드로피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산 (35 mg, 0.18 mmol) 및 1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 (50 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.100 mL, 0.72 mmol)을 첨가한 후, HATU (76 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제물을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(16 mg, 0.03 mmol, 18% 수율).
Figure 112015062207692-pct00211
실시예 125: 1-(테트라하이드로-피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산 (1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00212
DMSO (0.5 mL)를 1-(테트라하이드로-피란-4-일)-1H-피라졸-3-카르복실산 (35 mg, 0.18 mmol) 및 1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (50 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.100 mL, 0.72 mmol)을 첨가한 후, HATU (76 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 담황색 오일로서 얻었다(35 mg, 0.07 mmol, 39% 수율).
Figure 112015062207692-pct00213
실시예 126: 2-o-톨릴옥사졸-4-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00214
a) 플라스크에 에틸 2-클로로옥사졸-4-카르복실레이트 (500 mg, 2.85 mmol), 2-메틸벤젠보론산 (387 mg, 2.85 mmol), Pd(PPh3)4 (132 mg, 0.114 mmol), K2CO3 (787 mg, 5.7 mmol), 및 톨루엔 (29 mL)을 충전하였다. 반응 혼합물을 N2 스트림 하에 탈기시킨 후, 1시간 동안 90℃로 가열하였다. 이후, 반응물을 EtOAc로 희석시키고, 1M NaOH 수용액으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (헥산:EtOAc)에 의해 정제하여 생성물 대 에틸 2-클로로옥사졸-4-카르복실레이트 (360 mg)의 2:1 혼합물을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 수행하였다.
b) 2-o-톨릴-옥사졸-4-카르복실산 에틸 에스테르:에틸 2-클로로옥사졸-4-카르복실레이트 (360 mg)의 2:1 혼합물을 THF (1.0 mL)와 MeOH (1.0 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 이것에 NaOH (20% 수성, 1.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반시킨 후, EtOAc (50 mL)로 희석시키고, 1M NaHSO4 (50 mL)로 세척하였다. 수성층을 EtOAc (2 × 50 mL)로 추출하고, 합한 유기물질을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물:2-클로로-옥사졸-4-카르복실산의 2:1 혼합물(360 mg)을 얻었다.
c) 단계 b로부터의 산들의 2:1 혼합물(37 mg)을 DMSO (0.5 mL) 중에 용해시키고, 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (50 mg, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.100 mL, 0.72 mmol)을 첨가한 후, HATU (76 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 미정제물을 얻었다. 미정제물을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 황색 고형물로서 얻었다(26 mg, 0.05 mmol, 29% 수율).
Figure 112015062207692-pct00215
실시예 127: 2-페닐옥사졸-4-카르복실산 (1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00216
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐옥사졸-4-카르복실산 (42 mg, 0.22 mmol) 및 1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(62 mg, 0.13 mmol, 58% 수율).
Figure 112015062207692-pct00217
실시예 128: 2-페닐옥사졸-4-카르복실산 (1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00218
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐옥사졸-4-카르복실산 (42 mg, 0.22 mmol) 및 1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(58 mg, 0.12 mmol, 54% 수율).
Figure 112015062207692-pct00219
실시예 129: 2-페닐티아졸-4-카르복실산 (1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00220
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐티아졸-4-카르복실산 (45 mg, 0.22 mmol) 및 1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 크로마토그래피 (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 담황색 고형물로서 얻었다(74 mg, 0.15 mmol, 67% 수율).
Figure 112015062207692-pct00221
실시예 130: 2-페닐티아졸-4-카르복실산 (1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00222
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐티아졸-4-카르복실산 (45 mg, 0.22 mmol) 및 1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄으로 희석시키고, 물 (3 X)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 MeCN로 분쇄시키고, 여과하고, 고형물을 MeCN로 세척하였다. 형성된 고형물을 MeCN 및 1 M HCl 중에 흡수시킨 후, 동결시켜 생성물의 HCl 염을 백색 고형물로서 얻었다(17 mg, 0.04 mmol, 18% 수율).
Figure 112015062207692-pct00223
실시예 131: 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00224
a) 플라스크에 2-아이오도톨루엔 (0.964 mL, 7.57 mmol), 에틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트 (1.00 g, 7.14 mmol), CuI (272 mg, 1.43 mmol), 트랜스-N,N'-디메틸사이클로헥산-1,2-디아민 (0.451 mL, 2.86 mmol), 및 K2CO3 (3.15 g, 22.8 mmol)를 충전하였다. 이후, 반응 혼합물을 3시간 동안 140℃로 가열하였다. 이후, 반응물을 CH2Cl2과 포화된 NH4Cl 수용액 사이에 분배시키고, 분리시켰다. 유기층을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (90:10 - 70:30 헥산:메틸 3차-부틸 에테르)에 의해 정제하여 생성물 (238 mg, 1.03 mmol, 14%)을 무색 오일로서 얻었다.
b) 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산 에틸 에스테르 (238 mg, 1.03 mmol)를 THF (2.0 mL)와 MeOH (2.0 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 이것에 NaOH (20% 수성, 1.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, EtOAc로 희석시키고, 1M HCl로 세척하였다. 수성층을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기물질을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물을 백색 고형물로서 얻었다(164 mg, 0.81 mmol, 79%).
실시예 132: 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산 (1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00225
DMSO (0.5 mL)를 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산 (44 mg, 0.22 mmol) 및 1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피 (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 황색 고형물로서 얻었다(29 mg, 0.06 mmol, 26% 수율).
Figure 112015062207692-pct00226
실시예 133: 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산 (1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00227
DMSO (0.5 mL)를 1-o-톨릴-1H-피라졸-3-카르복실산 (44 mg, 0.22 mmol) 및 1-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄으로 희석시키고, 물 (3 X)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 MeCN로 분쇄시키고, 여과하고, 고형물을 MeCN로 세척하였다. 형성된 고형물을 MeCN 및 1M HCl 중에 흡수시키고, 동결시켜 생성물의 HCl 염을 백색 고형물로서 얻었다(13 mg, 0.03 mmol, 12% 수율).
Figure 112015062207692-pct00228
실시예 134: 2-o-톨릴-티아졸-4-카르복실산의 합성
Figure 112015062207692-pct00229
a) 플라스크에 2-메틸벤젠보론산 (500 mg, 3.68 mmol), 에틸 2-브로모티아졸-4-카르복실레이트 (869 mg, 3.68 mmol), Pd(PPh3)4 (173 mg, 0.150 mmol), K2CO3 (2 M 수성, 3.68 mL, 7.36 mmol), 및 톨루엔 (37 mL)을 충전하였다. 반응 혼합물을 N2 스트림 하에 탈기시킨 후, 90℃로 가열시키고, 밤새 교반하였다. 이후, 반응물을 EtOAc로 희석시키고, 1M NaOH 수용액으로 세척하였다. 수성층을 EtOAc (2 × 100 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (95:5 - 70:30 헥산:EtOAc)에 의해 정제하여 생성물 (550 mg, 2.22 mmol, 60%)을 담황색 오일로서 얻었다.
b) 2-o-톨릴-티아졸-4-카르복실산 에틸 에스테르 (550 mg, 2.22 mmol)를 THF (1.0 mL)와 MeOH (1.0 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 이것에 NaOH (20% 수성, 0.444 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반시킨 후, CH2Cl2 (30 mL)로 희석하고, 1M NaHSO4 (30 mL)로 세척하였다. 수성층을 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 추출한 후, 합한 유기층을 물 (1 × 30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 생성물 (434 mg, 1.98 mmol, 89%)을 백색 고형물로서 얻었다.
실시예 135: 2-o-톨릴티아졸-4-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00230
DMSO (0.5 mL)를 2-o-톨릴티아졸-4-카르복실산 (48 mg, 0.22 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시킨 후, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 황색 고형물로서 얻었다(10 mg, 0.02 mmol, 9% 수율).
Figure 112015062207692-pct00231
실시예 136: 2-o-톨릴티아졸-4-카르복실산 (1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00232
DMSO (0.5 mL)를 2-o-톨릴티아졸-4-카르복실산 (48 mg, 0.22 mmol) 및 1-이미다조[1,2-a]피라진-8-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물 함유 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 황색 고형물로서 얻었다(58 mg, 0.11 mmol, 51% 수율).
Figure 112015062207692-pct00233
실시예 137: 1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염의 합성
Figure 112015062207692-pct00234
a) 아세톤 (50 mL) 중의 클로로아세톤 용액(2.81 mL, 35.3 mmol)을 2-(트리클로로아세틸)피롤 (5.00 g, 23.5 mmol), 아세톤 (70 mL) 및 K2CO3 (9.74 g, 70.5 mmol)의 슬러리에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 여과하고, 고형물을 아세톤으로 세척하였다. 여액을 농축시키고, 잔류물을 물 (100 mL)과 에틸 아세테이트(100 mL) 사이에 분배시켰다. 층을 분리시키고, 수성층을 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (3 × 100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 헥산:에틸 아세테이트를 사용하는 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 생성물 (2.35 g, 15.8 mmol, 67%)을 얻었다.
b) 3-메틸-피롤로[2,1-c][1,4]옥사진-1-온 (2.35 g, 15.8 mmol), NH4OAc (5.32 g, 69.0 mmol) 및 AcOH (13.8 mL)의 혼합물을 밀봉된 바이알에서 48시간 동안 160℃로 가열하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 미정제물을 CH2Cl2 중에 흡수시켰다. 이를 포화된 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 플래시 크로마토그래피 (헥산:EtOAc을 사용하는 실리카 겔)에 의해 정제하여 생성물 (710 mg, 4.79 mmol, 35%)을 얻었다.
c) POCl3 (2 mL)를 3-메틸-2H-피롤로[1,2-a]피라진-1-온 (710 mg, 4.79 mmol)에 첨가하고, 용액을 3시간 동안 105℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 형성된 오일을 CH2Cl2 중에 흡수시키고, 포화된 NaHCO3 수용액으로 세척한 후, 물로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (95:5 - 70:30 헥산: EtOAc)에 의해 정제하여 생성물 (798 mg, 4.79 mmol, 정량적 수율)을 황색 고형물로서 얻었다.
d) 바이알에 1-클로로-3-메틸피롤로[1,2-a]피라진 (798 mg, 4.79 mmol), (S)-3-(Boc-아미노)피롤리딘 (901 mg, 4.84 mmol), iPr2NEt (2.52 mL, 14.52 mmol), 및 1-부틸-3-메틸-1H-이미다졸륨 테트라플루오로보레이트 (촉매적)를 충전하고, 15시간 동안 110℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (99:1 - 90:10 CH2Cl2:MeOH)에 의해 정제하여 생성물 (965 mg, 3.05 mmol, 64%)을 얻었다.
e) HCl (디옥산 중 4 M, 3.80 mL, 15.2 mmol)을 MeOH (10 mL) 중의 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-카르밤산 3차-부틸 에스테르 (965 mg, 3.04 mmol)에 첨가하였다. 이를 밤새 교반한 후, 농축시켜 생성물 (860 mg, 2.97 mmol, 98%)을 백색 고형물로서 얻었다.
실시예 138: 1-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00235
DMSO (0.5 mL)를 1-(4-플루오로페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 (50 mg, 0.24 mmol) 및 1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (69 mg, 0.29 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.134 mL, 0.96 mmol)을 첨가한 후, HATU (99 mg, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 한 후, 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(31 mg, 0.06 mmol, 25% 수율).
Figure 112015062207692-pct00236
실시예 139: 1-페닐-1H-[1,2,4]트리아졸-3-카르복실산 [1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00237
DMSO (0.5 mL)를 1-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산 (50 mg, 0.26 mmol) 및 1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (74 mg, 0.26 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.145 mL, 1.04 mmol) 을 첨가한 후, HATU (110 mg, 0.29 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 갈색 고형물로서 얻었다(66 mg, 0.13 mmol, 51% 수율).
Figure 112015062207692-pct00238
실시예 140: 1-페닐-1H-이미다졸-4-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00239
DMSO (0.5 mL)를 1-페닐-1H-이미다졸-4-카르복실산 (34 mg, 0.18 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (50 mg, 0.18 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.100 mL, 0.72 mmol)을 첨가한 후, HATU (76 mg, 0.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 담황색 고형물로서 얻었다(49 mg, 0.10 mmol, 56% 수율).
Figure 112015062207692-pct00240
실시예 141: 2-(4-하이드록시피페리딘-1-일)-티아졸-4-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00241
DMSO (0.5 mL)를 2-(4-하이드록시피페리딘-1-일)-티아졸-4-카르복실산 (48 mg, 0.21 mmol) 및 1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.117 mL, 0.84 mmol)을 첨가한 후, HATU (87 mg, 0.23 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 혼합물을 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 분획을 농축시키고, CH2Cl2 중에 흡수시키고, NaHCO3로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이후, 형성된 오일을 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH 구배 99:1 내지 90:10)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 농축시킨 후, MeCN 및 1 M HCl의 혼합물로부터 동결건조시켜 생성물의 HCl 염을 황색 고형물로서 얻었다(22 mg, 0.04 mmol, 19% 수율).
Figure 112015062207692-pct00242
실시예 142: 1-페닐-1H-이미다졸-4-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00243
DMSO (0.5 mL)를 1-페닐-1H-이미다졸-4-카르복실산 (32 mg, 0.17 mmol) 및 1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (50 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.095 mL, 0.68 mmol)을 첨가한 후, HATU (72 mg, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 연갈색 고형물로서 얻었다(33 mg, 0.07 mmol, 39% 수율).
Figure 112015062207692-pct00244
실시예 143: 1-(4-클로로페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00245
DMSO (0.5 mL)를 1-(4-클로로페닐)-1H-피라졸-3-카르복실산 (38 mg, 0.17 mmol) 및 1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (50 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.095 mL, 0.68 mmol)을 첨가한 후, HATU(72 mg, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 백색 고형물로서 얻었다(50 mg, 0.09 mmol, 55% 수율).
Figure 112015062207692-pct00246
실시예 144: 2-피롤리딘-1-일-티아졸-4-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00247
DMSO (0.5 mL)를 2-피롤리딘-1-일-티아졸-4-카르복실산 (34 mg, 0.17 mmol) 및 1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (50 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.095 mL, 0.68 mmol)을 첨가한 후, HATU (72 mg, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 붉은 색을 띠는 고형물로서 얻었다(20 mg, 0.04 mmol, 23% 수율).
Figure 112015062207692-pct00248
실시예 145: 2-페닐옥사졸-4-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00249
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐옥사졸-4-카르복실산 (32 mg, 0.17 mmol) 및 1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (50 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.095 mL, 0.68 mmol)을 첨가한 후, HATU (72 mg, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 연갈색 고형물로서 얻었다(42 mg, 0.08 mmol, 49% 수율).
Figure 112015062207692-pct00250
실시예 146: 2-페닐티아졸-4-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00251
DMSO (0.5 mL)를 2-페닐티아졸-4-카르복실산 (43 mg, 0.21 mmol) 및 1-(3-메틸피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.117 mL, 0.84 mmol)를 첨가한 후, HATU (87 mg, 0.23 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 회색 고형물로서 얻었다(30 mg, 0.06 mmol, 28% 수율).
Figure 112015062207692-pct00252
실시예 147: 1-(4-플루오로페닐)-1H-[1,2,4]트리아졸-3-카르복실산 [1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일]-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00253
DMSO (0.5 mL)를 1-(4-플루오로페닐)-1H-[1,2,4]트리아졸-3-카르복실산 및 1-(3-메틸-피롤로[1,2-a]피라진-1-일)-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.150 mL, 1.05 mmol)을 첨가한 후, HATU (87 mg, 0.23 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 황색 고형물로서 얻었다(11 mg, 0.02 mmol, 10% 수율).
Figure 112015062207692-pct00254
실시예 148: 6-메틸퀴나졸린-2-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00255
DMSO (0.5 mL)를 6-메틸퀴나졸린-2-카르복실산·HCl (27 mg, 0.12 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (33 mg, 0.12 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.084 mL, 0.60 mmol)을 첨가한 후, HATU (49 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 크로마토그래피 (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 붉은 색을 띠는 고형물 (13 mg, 0.03 mmol, 22% 수율)로서 얻었다.
Figure 112015062207692-pct00256
실시예 149: 1-페닐-1H-[1,2,3]트리아졸-4-카르복실산 (1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일)-아미드의 합성
Figure 112015062207692-pct00257
DMSO (0.5 mL)를 1-페닐-1H-[1,2,3]트리아졸-4-카르복실산 (42 mg, 0.22 mmol) 및 1-피롤로[1,2-a]피라진-1-일-피롤리딘-3-일아민 디하이드로클로라이드 염 (60 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이것에 트리에틸아민 (0.123 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, HATU (91 mg, 0.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반되게 하고, 이 시간 후 디클로로메탄 (1.0 mL)로 희석시키고, 물 (3 × 1.0 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 물질을 역상 HPLC (10:90 - 95:5 MeCN:H2O + 0.1% TFA)에 의해 정제하였다. 합한 생성물 분획을 동결시켜 생성물의 TFA 염을 담황색 고형물로서 얻었다(68 mg, 0.14 mmol, 63% 수율).
Figure 112015062207692-pct00258
실시예 150
하기 표의 화합물들은 상기 기술된 바와 같이 제조되었다. 특징화 데이터(NMR)가 각각 제공된다.
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생물학적 실시예 1
상기 기재된 화합물이 CXCR7에 결합하는 케모카인에 대한 유용한 조절제임을 증명하기 위해, 이 화합물을 다중 농도에서 CXCR7 수용체로부터 SDF-1를 대체하는 이의 능력을 측정하기 위해 생체외 조건에서(in vitro) 스크리닝하였다. 이 화합물을 [Determination of IC 50 values, Reagents and Cells]에 상세히 기재된 125 I-표지된 SDF-1케모카인의 존재에서 CXCR7 수용체를 발현하는 세포(예를 들어, MCF 세포 또는 CXCR7를 발현하도록 트랜스펙션된 세포)와 결합시켰다(하기 참조). 다중 농도에서 CXCR7 수용체 사이트로부터 표지된 케모카인을 대체하는 화합물의 능력을 그 다음에 스크린 과정으로 측정하였다.
효과적인 조절제인 것으로 간주되었던 화합물은 15 마이크로몰 (μM) 또는 그 미만 그러나 > 2500 nM (+)의 농도; 및 더욱 바람직하게 > 500 nM 내지 ≤ 2500 nM (++)의 농도에서, CXCR7 수용체로부터 50% 이상의 SDF-1를 대체할 수 있었다. 현재, 특별히 바람직한 화합물은 500 nM (+++) 또는 그 미만의 농도에서 CXCR7수용체로부터 50% 이상의 SDF-1를 대체할 수 있다. 이 기준을 충족했던 예시적인 화합물은 표 1 및 상기 실시예들에서 재생성된다. 표 1에서 Avg Bind IC50는 하기 기술되는 완충제 결합 분석(Buffer Binding Analysis)을 나타내는 반면, Avg Ser IC50은 하기 기술되는 혈청 결합 분석(Serum Binding Analysis)을 나타낸다. 모든 화합물을 상기 실시예에 또는 쉽게 이용가능한 출발 물질로 대체한 관련된 방법에 의해 기재된 바와 같이 제조하였다.
1. IC 50 값의 측정
시약 및 세포. 125 I-표지된 SDF-1를 Perkin-Elmer Life Sciences, Inc. (Boston, MA)로부터 구입하였다. 이 MCF-7(선암종; 유선) 세포주를 American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA)으로부터 얻었고 5% CO2/공기 혼합물에서 습한 인큐베이터에서 37℃에서 10% 태아소혈청(FBS)(HyClone Logan, UT) 및 소 인슐린(0.01 mg/mL)(Sigma, St. Louis, MO)으로 보충된 DMEM (Mediatech, Herndon, VA)에서 배양하였다. CXCR7 세포 트랜스펙션된(transfected) MDA-MB-435S를 아래 기재된 바와 같이 생성하였다. MDA-MB-435S 인간 유방암 세포주를 ATCC로부터 구입하였고, DMEM/10% FBS 배지에서 배양하였다. CXCR7 (a.k.a.CCXCKR2, hRDC1)를 엔코딩하는 유전자의 그 완전한 코딩 서열을 μMACs mRNA 분리 키트(Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 사용하여 MCF-7 세포로부터 분리하였다. DNA 오염을 RNeasy 칼럼(Qiagen, Inc., Valencia, CA)을 통해 DNase 분해에 의해 제거하였고, cDNA를 GeneAmp RNA PCR Core Kit(Applied Biosystems, Foster City, CA)를 사용하여 생성하였다. cDNA 샘플의 PCR를 Taq PCR Master Mix kit (Qiagen, Inc.), 및 5' 및 3' Not I 부위를 갖는 hRDC1 프라이머(hRDC1F 5'-GAATGCGGCCGCTATGGATCTGCATCTCTTCGACT-3', hRDC1R 5'-GAATGCGGCCGCTCATTTGGTGCTCTGCTCCAAG-3')를 사용하여 수행하였다. Not I 분해된 PCR 생성물을 Not I 분해된 pcDNA3.1(+)(Invitrogen, Carlsbad, CA)으로 라이게이션시키고, 배향에 대해 스크린하였고, 서열을 확인하였다. 플라스미드 DNA를 그 다음에 Maxiprep (Qiagen, Inc.)에 의해 밤새 박테리아 배양으로부터 분리하였다. 플라스미드 DNA(10μg)를 MDA-MB-435s 세포에 더하였고, Gene Pulser (Biorad laboratories, Hercules, CA)를 통해 세포를 전기 천공(electroporated)(0.22kV, 960uF)하였다. 48 시간 전기 천공 후, 세포를 선택 배지(600ug/ml G418)로 옮겼다.
완충제 결합 분석. 표적 화합물을 MCF-7 및/또는 MDA-MB-435S CXCR7 트랜스펙션된 세포에 CXCR7 사이트와의 결합하는 이의 능력을 측정하기 위해 시험하였다. 문헌[Dairaghi DJ, et al., HHV8 -encoded vMIP -I selectively engages chemokine receptor CCR5. Agonist and antagonist profiles of viral chemokines ., J. Biol. Chem. 1999 Jul 30; 274(31): 21569-74] 및 [Gosling J, et al., Cutting edge: identification of a novel chemokine receptor that binds dendritic cell- and T cell-active chemokines including ELC , SLC , and TECK., J. Immunol. 2000 Mar 15; 164(6):2851-6]에 기재된 여과 프로토콜을 사용하여 효능-최대화 라디오리간드 결합(efficiency-maximized radioligand binding)을 사용하였다.
이들 분석에서, MCF-7 및/또는 MDA-MB-435S 세포를 표적 화합물로 인터로게이트(interrogate)하였고, 이 화합물의 125 I 방사성 표지된 SDF-1를 대체하는 능력을 [Dairaghi 및 Gosling.]에 기재된 프로토콜을 사용하여 평가하였다. 이 표적 화합물을 표시된 농도의 플레이트에 더하였고 그 다음에 세포로 배양하였고 후속하여 아래의 결합 배지(25 mM HEPES, 140 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2 및 0.2% 소혈청 알부민, pH 7.1로 조절됨)에서 4℃에서 3시간 동안 방사성 표지된 케모카인 (125I SDF-1)을 첨가하였다. 모든 분석물을 그 다음에 순한 교반으로 4℃에서 3시간 동안 배양하였다. 모든 결합 분석에서 배양 후, 반응물을 세포 수확기(Packard)를 사용하여 PEI-처리된 GF/B 유리 필터(Packard)에서 흡인(aspirate)하였고, 두 번 세척하였다(25 mM HEPES, 500 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, pH 7.1로 조절됨). 신틸란트(Scintillant)(MicroScint 10, Packard)를 웰에 더하였고, 여과를 Packard Topcount 신틸레이션 카운터로 셈하였다. GraphPad Prism(GraphPad Software)를 사용하여 데이터를 분석하였고 플로팅하였다.
혈청 결합 분석. 화합물의 결합 효능을 보다 적절히 평가하기 위해, 라디오리간드 결합 평가를 생체내 환경을 더욱 정확히 반영하도록 100% 인간 혈청의 존재 하에 수행하였다. 관찰된 IC50 값이 전형적으로 완충제 결합 검정에 대해 기록된 것들보다 낮았지만, 화합물 효능의 등급화를 평가하기 위한 검정 관련성은 증진된다. 표적 화합물을 MCF-7 및/또는 MDA-MB-435S CXCR7 트랜스펙션된 세포에 CXCR7 사이트와의 결합하는 이의 능력을 측정하기 위해 시험하였다. 문헌[Dairaghi DJ, et al., HHV8-encoded vMIP-I selectively engages chemokine receptor CCR5. Agonist and antagonist profiles of viral chemokines., J. Biol. Chem. 1999 Jul 30; 274(31): 21569-74] 및 [Gosling J, et al., Cutting edge: identification of a novel chemokine receptor that binds dendritic cell- and T cell-active chemokines including ELC, SLC, and TECK., J. Immunol. 2000 Mar 15; 164(6):2851-6]에 기재된 여과 프로토콜을 사용하여 효능-최대화 라디오리간드 결합을 사용하였다.
이들 분석에서, MCF-7 및/또는 MDA-MB-435S 세포를 표적 화합물로 인터로게이트하였고, 이 화합물의 125 I 방사성 표지된 SDF-1를 대체하는 능력을 [Dairaghi 및 Gosling.]에 기재된 프로토콜을 사용하여 평가하였다. 이 표적 화합물을 표시된 농도의 플레이트에 더하였고 그 다음에 둘 모두 다음의 배지(pH 7.4에서 안정화시키도록 첨가된 10 mM HEPES와 함께 인간 AB 혈청)에서 세포 및 방사성 표지된 케모카인(125I SDF-10을 첨가하였다. 모은 분석물을 그 다음에 순한 교반으로 4℃에서 3시간 동안 배양하였다. 모든 결합 분석에서 배양 후, 반응물을 세포 수확기(Packard)를 사용하여 PEI-처리된 GF/B 유리 필터(Packard)에서 흡인하였고, 두 번 세척하였다(25 mM HEPES, 500 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, pH 7.1로 조절됨). 신틸란트(Scintillant)(MicroScint 10, Packard)를 웰에 더하였고, 여과를 Packard Topcount 신틸레이션 카운터로 셈하였다. GraphPad Prism(GraphPad Software)를 사용하여 데이터를 분석하였고 플로팅하였다.
내피세포사이 통과 분석(Transendothelial migration assay): 본 발명의 화합물은 내피세포사이 통과 분석에서 세포의 이동을 억제하는 이의 능력에 의해 추가 평가될 수 있다. 이 분석에서, 케모카인 소스를 향한 내피 세포의 층을 통한 이동하는 세포의 능력을 분석하였다. 이 분석의 예에서, 100,000 인간 제대 정맥 내피 세포(human umbillic vein endothelial cells)(HUVECs, Lonza로부터 입수)를 5uM 필터 포어 크기를 가진 트랜스웰 배양 디쉬(Corning Costar)의 상부 챔버에 두었다. 배지를 더하였고 플레이트를 밤새 37℃에서 5% CO2를 가진 인큐베이터에 두었다. HUVECs가 단층을 형성하도록 밤새 필터에 부착시킨 후에, 케모카인을 함유하는 배지(예를 들어, SDF-1, 최종 농도 10nM)를 하부 챔버에 더하였다. 그 다음에 500,000 NC-37 세포(ATCC로부터 입수)를 시험 화합물의 존재 또는 부재에서 상부 챔버에 더하였고, 플레이트를 3시간 내지 밤새 인큐베이터로 되돌렸다. 여러 농도의 화합물은 용량 반응(dose response)을 발생시키기 위해 다양한 웰에 첨가하였다. 이 배양의 끝에, 상부 챔버를 제거하고 하부 챔버의 세포를 정량하였다. 이 세포를 예를 들어, 형광 염료 예컨대 Cyquant®(Invitrogen, CA)로 표지함에 의해 정량하였고, 그 다음에 적절한 플레이트 리더에서 형광 정량하였다. GraphPad Prism (GraphPad Software)를 사용하여 데이터를 분석하고 플로팅하였다. 이 화합물의 효능은 더 낮은 챔버로 세포들의 이동을 억제하는 이의 능력으로 측정된다.
생체내 효능
a) 파괴적 관절 염증의 래빗 모델
래빗 LPS 연구는 [Podolin, et al. ibid.,]에 기재된 바와 같이 실제로 수행하였고, 암컷 뉴질랜드 래빗(약 2 킬로그램)을 LPS (10 ng)으로 두 무릎에 관절내 처리하였다. 당해 화합물(예를 들어 1% 메토셀(methocel)로 제형화됨) 또는 비히클(1% methocel)을 두 번 5 ml/kg 투여량 용량으로 경구 투여하였다(관절내 LPS 주사 2시간 전 및 내부 관절 LPS 주사 4시간 후). LPS 주사의 16시간 후, 무릎을 세척하였고 세포 셈을 수행하였다. 치료의 이로운 효과를 무릎 관절의 염증 활액(inflamed synovial fluid)으로 얻어진 염증 세포의 수의 감소에 의해 측정하였다. 당해 화합물로의 치료는 보충되는 염증 세포에서의 큰 감소를 유도하였다.
b) 콜라겐 유도된 관절염의 래트 모델에서의 당해 화합물의 평가
17 일 발달되는 타입 II 콜라겐 관절염 연구를 관절염 유도된 임상 발목 부종에서의 당해 화합물의 효과를 평가하기 위해 수행하였다. 래트 콜라겐 관절염은 많은 항-관절염 치료제의 전임상 시험을 위해 널리 사용되었던 다발성 관절염의 실험 모델이다(참조 Trentham, et al., J. Exp. Med. 146(3) :857-868 (1977), Bendele, et al., Toxicologic Pathol. 27 :134-142 (1999), Bendele, et al., Arthritis Rheum. 42 :498-506 (1999)). 이 모델의 성질(hallmarks)은 강하고 쉽게 측정가능한 다관절성 염증, 판누스 형성 및 경도(mild) 내지 중도(moderate)의 골 흡수와 관련한 현저한 연골 파괴 및 골막 뼈 증식의 확실한 개시 및 진행이다.
암컷 루이스(Lewis) 래트(약 0.2 킬로그램)를 이소플루란으로 마취시켰고 꼬리의 기저부에 2 mg/mL 소 타입 II 콜라겐을 함유하는 프로인트 불완전 애쥬번트로 주입하였고, 이 17일 연구의 0일 및 6일날에 등에 두 지점에 주입하였다. 당해 화합물을 효능적 투여량으로 0일 내지 17일로부터 매일 피하 투여하였다. 발목 관절 직경의 칼리퍼 측정을 하였고 감소된 관절 부종을 효능의 척도로서 취하였다.
(c) 상처 치료의 마우스 모델에서의 당해 화합물의 평가
상처 치료 연구에서, ICR 유도된 수컷 마우스(24 ± 2 g)를 사용하였다. 시험 기간 중, 동물들을 단독으로 개별 우리에서 수용시켰다. 헥소바르비탈(90 mg/kg, IP) 마취 하에서, 각 동물의 어깨 및 등 영역을 면도하였다. 날카로운 펀치(ID 12 mm)를 적용하여 피부근층(panniculus carnosus)를 포함하는 피부 및 인접 조직을 제거하였다. 시험 화합물 또는 비히클을 10일 연속일 동안 매일 한번 피부 손상 후 즉시 국소적으로 각각 투여하였다. 양성 대조군, 예를 들어 A2 아데노신 수용체 작용제(CGS-21680; 10㎍/마우스)를 실험 과정에 걸쳐 매일 국소적으로 또한 투여될 수 있다. 투명 플라스틱 시트에 트래싱(traced)된 상처 영역을 1, 3, 5, 7, 9 및 11일에 Image Anaㅇlyzer(Life Science Resources Vista, Version 3.0)를 사용하여 측정하였다. 상처 봉합 백분율(%)을 계산하고, 상처 반-봉합 시간(CT50)을 측정하고, Graph-Pad Prism(Graph Pad Software)을 사용하여 선형 회귀에 의해 분석하였다. 언페어드 스튜던트 t 시험(Unpaired Student's t test)를 각 측정 시간 지점에서 치료된 그룹과 비히클 그룹 사이의 비교에 적용하였다. 차이는 P<0.05 수준에서 통계적 유의성이 있는 것으로 간주된다.
(d) 폐 암종의 마우스 모델에서 당해 화합물의 평가
동물에서 많은 종양 모델은 알려져 있고, 본 발명의 화합물을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 폐 암종 이종 이식 연구에서, A549 종양 단편(30-40mg)을 누드 마우스에서 피하 공간으로 이식하였다. 종양은 약 150mg의 크기(100 내지 200mg) 될 때까지 성장하도록 두었고, 이 시점에서, 마우스를 연구에 등록하고, 치료를 시작하였다. 마우스에 본 발명의 화합물 또는 비히클 대조군을 처리하였다. 멜팔란(Melphalan)을 양성 대조군으로서 포함시켰다(9mpk/dose, ip 투여, Q4Dx3). 종양을 2차원으로 캘리퍼스로 매주 두 번 측정하고, 장형 타원체에 대한 공식(a x b2/2)을 사용하여 종양 질량으로 전환하였고, 여기서, a는 더 긴 치수이고 b는 더 짧은 치수이며, 단위 밀도(1 mm3 = 1mg)를 가정하였다. 몸무게는 또한 화합물 투여의 역 효과를 평가하기 위해 매주 두 번 측정할 수 있다. 항종양 활성은, 비히클-처리된 대조군에 대해, 처리된 그룹의 종양 성장의 지연에 의해 평가하였다.
(e) 실험적 자가 면역 뇌염(experimental autoimmune encephalomyelitis)의 설치류 입양 전달 모델(Rodent adoptive transfer model)
설치류 EAE는 재발 완화반복성 및 진행성 다발성 경화증(multiple sclerosis) (MS)의 치료를 위한 다수의 제제를 임상전 시험하기 위해 광범위하게 사용되어 온 MS의 실험적 모델이다. 이 모델의 특징은 신뢰성있는 발병, 안정적인 진행, 꼬리 및 사지에 대한 용이하게 조치가능한 마비, 신경세포 염증화, 신경 항원에 반응하는 현저한 탈수화(marked demyelination)이다.
마우스에 완전 프로인트 애쥬번트(Freunds adjuvant) 중의 적합한 신경세포 항원(예로, 미엘린 베이직 단백질(myelin basic protein), 미엘린 올리고덴드로사이트 글리코단백질(myelin oligodendrocyte glycoprotein), 단백지질 단백질(proteolipid protein))을 0일째에 주입하였다. 면역 세포를 CFA/항원 주입 후 수거하고, 사이토카인 및 신경세포 항원으로 생체 외 자극시켜 신경세포 항원에 대해 특이성을 갖는 T-세포주를 생성시켰다. 이후, 이들 세포를 수혜 마우스로 옮기었다. 당해 화합물을 피하, 복강내, 또는 경구 방식으로 0일로부터 연구 종결시까지 효능적인 투여량으로 매일 투여하였다. 마비 정도를 매일 관찰하여 효능의 척도로서 취하였다.
(f) 교모세포종( glioblastoma )의 마우스 모델에서 당해 화합물의 평가
동물에서 많은 종양 모델은 당 분야에 알려져 있고, 본 발명의 화합물을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 뮤린 교모세포종 모델에서, 1x106 개의 U251MG 세포를 누드 마우스의 뇌에 정위 주입(stereotactic injection)에 의해 이식하였다. 20일 후, 종양에 1-15Gy의 방사선을 조사하였다. 조사 후, 마우스를 화합물 또는 비히클 대조군으로 처리하고(예를 들어, 피하, 복강내, 경구, 비경구, 또는 그 밖의 경로를 통해), 종양이 진행되게 하였다. 종양 성장 및/또는 치사율을 연구 나머지 기간 동안 모니터링하였다. 종양을 2차원으로 캘리퍼스로 매주 두 번 측정하고, 장형 타원체에 대한 공식(a x b2/2)을 사용하여 종양 질량으로 전환하였고, 여기서, a는 더 긴 치수이고 b는 더 짧은 치수이며, 단위 밀도(1 mm3 = 1mg)를 가정하였다. 또한, 몸무게를 화합물 투여의 어떠한 역 효과를 평가하기 위해 매주 두 번 측정할 수 있다. 항종양 활성은, 비히클-처리된 대조군과 비교하여, 처리된 그룹의 종양 성장에서의 지연에 의해 평가하였다.
(g) 교모세포종의 래트 모델에서의 당해 화합물의 평가
동물에서 많은 종양 모델은 당 분야에 알려져 있고, 본 발명의 화합물을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 래트 C6 교모세포종 모델에서, 1x106 개의 C6 세포를 스프라그-도울리(Sprague-Dowley) 래트의 뇌에 정위 주입에 의해 이식하였다. 7일 후, 종양에 5-20Gy의 방사선을 조사하였다. 조사 후, 마우스를 화합물 또는 비히클 대조군으로 처리하고(예를 들어, 피하, 복강내, 경구, 비경구, 또는 그 밖의 경로), 종양이 진행되게 하였다. 동물들이 사망 또는 20% 초과의 몸무게 손실까지 이르게 하거나, 적절한 규제 및 표준에 따라 종양 유도된 신경결손, 예를 발작 및 무운동에 대해 분리시켰다. 화합물 활성을 카플란 마이어의 생존률 분석(Kaplan Meier analysis of survival)에 의해 측정하였으며, 표 1의 화합물 1.090은 비히클 처리된 대조군과 비교하여 처리된 그룹의 종양 성장에서의 지연에 의해 평가되는 경우 엄청난 항종양 활성을 지녔다.
(h) 고혈압의 마우스 모델에서의 당해 화합물의 평가
동물에서 많은 폐 기능이상 및 고혈압 모델이 당 분야에 알려져 있고, 본 발명의 화합물을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 만성 저산소증-유도된 폐동맥 고혈압 모델에서, 신생 마우스(FVB/NJ)에 무작위로 표준기압 정상 산소 상태(normobaric normoxia)(Room Air (RA)) 또는 산소결핍 상태(HA) (FiO2= 0.12)에 2주 동안 노출시켰다. RA 또는 HA의 1주일 후, 마우스를 출생후 7일 내지 14일에 비히클 또는 화합물의 예를 들어, 매일 피하 주입에 의해 당해 화합물로 처리하였다. 폐동맥 고혈압 정도는 우실 수축기압(right ventricular systolic pressure)(RVSP)에 의해 측정될 수 있다. 간략히 하면, 개흉이 수행되고, 변압기(Gould Instruments, OH)에 연결된 25게이지 니들이 우심실에 삽입되고, RSVP를 기록하였다. RVSP 측정 직후, 마우스를 희생시키고, 심장을 분리시키고, 절개하였다. 우심실 비대(RVH)를 좌심실 + 격막에 대한 우심실의 중량비(RV/LV +S)에 의해 평가하였다. RSVP 및 RVH의 측정에서의 개선은 후보 화합물이 치료적 능력을 가짐을 나타낸다.
입증(Validation)
임의의 이전 스크링 방법에 의해 관심있는 것으로서 초기에 식별된 화합물은 생체 내 명백한 활성을 입증하기 위해 추가로 시험될 수 있다. 바람직하게 이러한 연구는 적합한 동물 모델로 수행된다. 이러한 방법의 기본적 포맷은 인간에 대한 질병 모델로서 제공된 동물에 초기 스크린 중 식별된 리드(lead) 화합물을 투여하고 그 다음에 질병(예를 들어, 암, 심근경색, 상처 치료, 염증성 질병 또는 CXCR7와 관련한 다른 질병)이 사실 모듈레이트되고/거나 질병 또는 질환이 완화되는지를 측정하는 것을 포함한다. 입증 연구에서 활용된 동물 모델은 일반적으로 임의의 종류의 포유류이다. 적합한 동물의 특이적 예는 제한됨 없이 영장류, 마우스, 래트 및 제브라피쉬를 포함한다.
서열 목록
SEQ ID NO:1 CXCR7 코딩 서열
Figure 112015062207692-pct00291
SEQ ID NO:2 CXCR7 아미노 산 서열
Figure 112015062207692-pct00292
SEQ ID NO:3 CXCR7.2 코딩 서열
Figure 112015062207692-pct00293
SEQ ID NO:4 CXCR7.2 아미노 산 서열
Figure 112015062207692-pct00294
SEQ ID NO:5 CXCR7.3 코딩 서열
Figure 112015062207692-pct00295
SEQ ID NO:6 CXCR7.3 아미노 산 서열
Figure 112015062207692-pct00296
SEQ ID NO:7 CXCR7.4 코딩 서열
Figure 112015062207692-pct00297
SEQ ID NO:8 CXCR7.4 아미노 산 서열
Figure 112015062207692-pct00298
SEQ ID NO:9 CXCR7.5 코딩 서열
Figure 112015062207692-pct00299
Figure 112015062207692-pct00300
SEQ ID NO:10 CXCR7.5 아미노 산 서열
Figure 112015062207692-pct00301
당업자들은 제시된 상세한 설명, 도면, 및 실시예로부터 하기 청구범위 및 이들의 등가물에 의해 정의되는 본 발명의 범위에서 벗어나지 않고 본 발명의 여러 구체예에 대한 변형 및 변경이 이루어질 수 있음을 인지할 것이다.
본원에서 인용된 모든 공개문, 특허, 및 특허출원들은 모든 목적을 위하여 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 본원에서 인용되는 어떠한 문헌과 본 명세서의 교시 간에 어떠한 분쟁은 후자를 지지하도록 해결되어야 한다. 유사하게, 당분야에서 용인되는 용어 또는 어구의 정의와 본 명세서에서 제시된 용어 또는 어구의 정의 간에 어떠한 분쟁도 후자를 지지하도록 해결되어야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> Fan, Junfu Krasinski, Antoni Lange, Christopher W. Lui, Rebecca M. McMahon, Jeffrey P. Powers, Jay P. Zeng, Yibin Zhang, Penglie <120> CXCR7 Antagonists <130> 85236-892759 <140> US 14/091,641 <141> 2013-11-27 <150> US 61/731,463 <151> 2012-11-29 <160> 12 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 1089 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)...(1089) <223> G-protein coupled receptor (GPCR) chemokine receptor CXCR7, hRDC1, CCXCKR2 <400> 1 atg gat ctg cat ctc ttc gac tac tca gag cca ggg aac ttc tcg gac 48 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 atc agc tgg cca tgc aac agc agc gac tgc atc gtg gtg gac acg gtg 96 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 atg tgt ccc aac atg ccc aac aaa agc gtc ctg ctc tac acg ctc tcc 144 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 ttc att tac att ttc atc ttc gtc atc ggc atg att gcc aac tcc gtg 192 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 gtg gtc tgg gtg aat atc cag gcc aag acc aca ggc tat gac acg cac 240 Val 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cag gag aag cac agc agc cgg aag atc atc ttc tcc 768 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 tac gtg gtg gtc ttc ctt gtc tgc tgg ttg ccc tac cac gtg gcg gtg 816 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 ctg ctg gac atc ttc tcc atc ctg cac tac atc cct ttc acc tgc cgg 864 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 ctg gag cac gcc ctc ttc acg gcc ctg cat gtc aca cag tgc ctg tcg 912 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 ctg gtg cac tgc tgc gtc aac cct gtc ctc tac agc ttc atc aat cgc 960 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 aac tac agg tac gag ctg atg aag gcc ttc atc ttc aag tac tcg gcc 1008 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 aaa aca ggg ctc acc aag ctc atc gat gcc tcc aga gtc tca gag acg 1056 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 gag tac tct gcc ttg gag cag agc acc aaa tga 1089 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys * 355 360 <210> 6 <211> 362 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CXCR7.3 <400> 6 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 Phe Gly Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 Phe Ser Ile Val Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys 355 360 <210> 7 <211> 1089 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)...(1089) <223> G-protein coupled receptor (GPCR) chemokine receptor CXCR7.4, hRDC1, CCXCKR2 <400> 7 atg gat ctg cat ctc ttc gac tac tca gag cca ggg aac ttc tcg gac 48 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 atc agc tgg cca tgc aac agc agc gac tgc atc gtg gtg gac acg gtg 96 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 atg tgt ccc aac atg ccc aac aaa agc gtc ctg ctc tac acg ctc tcc 144 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 ttc att tac att ttc atc ttc gtc atc ggc atg att gcc aac tcc gtg 192 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 gtg gtc tgg gtg aat atc cag gcc aag acc aca ggc tat gac acg cac 240 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 tgc tac atc ttg aac ctg gcc att gcc gac ctg tgg gtt gtc ctc acc 288 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 atc cca gtc tgg gtg gtc agt ctc gtg cag cac aac cag tgg ccc atg 336 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 ggc gag ctc acg tgc aaa gtc aca cac ctc atc ttc tcc atc aac ctc 384 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 ttc ggc agc att ttc ttc ctc acg tgc atg agc gtg gac cgc tac ctc 432 Phe Gly Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 tcc atc acc tac ttc acc aac acc ccc agc agc agg aag aag atg gta 480 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 cgc cgt gtc gtc tgc atc ctg gtg tgg ctg ctg gcc ttc tgc gtg tct 528 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 ctg cct gac acc tac tac ctg aag acc gtc acg tct gcg tcc aac aat 576 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 gag acc tac tgc cgg tcc ttc tac ccc gag cac agc atc aag gag tgg 624 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 ctg atc ggc atg gag ctg gtc tcc gtt gtc ttg ggc ttt gcc gtt ccc 672 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 ttc tcc att atc gct gtc ttc tac ttc ctg ctg gcc aga gcc atc tcg 720 Phe Ser Ile Ile Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 gcg tcc agt gac cag gag aag cac agc agc cgg aag atc atc ttc tcc 768 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 tac gtg gtg gtc ttc ctt gtc tgc tgg ctg ccc tac cac gtg gcg gtg 816 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 ctg ctg gac atc ttc tcc atc ctg cac tac atc cct ttc acc tgc cgg 864 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 ctg gag cac gcc ctc ttc acg gcc ctg cat gtc aca cag tgc ctg tcg 912 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 ctg gtg cac tgc tgc gtc aac cct gtc ctc tac agc ttc atc aat cgc 960 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 aac tac agg tac gag ctg atg aag gcc ttc atc ttc aag tac tcg gcc 1008 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 aaa aca ggg ctc acc aag ctc atc gat gcc tcc aga gtc tca gag acg 1056 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 gag tac tct gcc ttg gag cag agc acc aaa tga 1089 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys * 355 360 <210> 8 <211> 362 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CXCR7.4 <400> 8 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 Phe Gly Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 Phe Ser Ile Ile Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys 355 360 <210> 9 <211> 1089 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)...(1089) <223> G-protein coupled receptor (GPCR) chemokine receptor CXCR7.5, hRDC1, CCXCKR2 <400> 9 atg gat ctg cat ctc ttc gac tac tca gag cca ggg aac ttc tcg gac 48 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 atc agc tgg ccg tgc aac agc agc gac tgc atc gtg gtg gac acg gtg 96 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 atg tgt ccc aac atg ccc aac aaa agc gtc ctg ctc tac acg ctc tcc 144 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 ttc att tac att ttc atc ttc gtc atc ggc atg att gcc aac tcc gtg 192 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 gtg gtc tgg gtg aat atc cag gcc aag acc aca ggc tat gac acg cac 240 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 tgc tac atc ttg aac ctg gcc att gcc gac ctg tgg gtt gtc ctc acc 288 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 atc cca gtc tgg gtg gtc agt ctc gtg cag cac aac cag tgg ccc atg 336 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 ggc gag ctc acg tgc aaa gtc aca cac ctc atc ttc tcc atc aac ctc 384 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 ttc agc agc att ttc ttc ctc acg tgc atg agc gtg gac cgc tac ctc 432 Phe Ser Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 tcc atc acc tac ttc acc aac acc ccc agc agc agg aag aag atg gta 480 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 cgc cgt gtc gtc tgc atc ctg gtg tgg ctg ctg gcc ttc tgc gtg tct 528 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 ctg cct gac acc tac tac ctg aag acc gtc acg tct gcg tcc aac aat 576 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 gag acc tac tgc cgg tcc ttc tac ccc gag cac agc atc aag gag tgg 624 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 ctg atc ggc atg gag ctg gtc tcc gtt gtc ttg ggc ttt gcc gtt ccc 672 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 ttc tcc att atc gct gtc ttc tac ttc ctg ctg gcc aga gcc atc tcg 720 Phe Ser Ile Ile Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 gcg tcc agt gac cag gag aag cac agc agc cgg aag atc atc ttc tcc 768 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 tac gtg gtg gtc ttc ctt gtc tgc tgg ttg ccc tac cac gtg gcg gtg 816 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 ctg ctg gac atc ttc tcc atc ctg cac tac atc cct ttc acc tgc cgg 864 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 ctg gag cac gcc ctc ttc acg gcc ctg cat gtc aca cag tgc ctg tcg 912 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 ctg gtg cac tgc tgc gtc aac cct gtc ctc tac agc ttc atc aat cgc 960 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 aac tac agg tac gag ctg atg aag gcc ttc atc ttc aag tac tcg gcc 1008 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 aaa aca ggg ctc acc aag ctc atc gat gcc tcc aga gtc tca gag acg 1056 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 gag tac tcc gcc ttg gag cag agc acc aaa tga 1089 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys * 355 360 <210> 10 <211> 362 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CXCR7 <400> 10 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 Phe Ser Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 Phe Ser Ile Ile Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys 355 360 <210> 11 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic hRDC1 primer hRCD1F <400> 11 gaatgcggcc gctatggatc tgcatctctt cgact 35 <210> 12 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic hRDC1 primer hRCD1R <400> 12 gaatgcggcc gctcatttgg tgctctgctc caag 34

Claims (29)

  1. 하기 화학식(I)을 갖는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, N-옥사이드, 동위원소 함유 형태, 거울상이성질체 또는 로타머:
    Figure 112020110492676-pct00302

    상기 식에서,
    각각의 고리 정점, Xa, Xb 및 Xc는 독립적으로 N, CH 및 C(R2)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    하첨자 n은 0, 1 또는 2이고;
    Z는 모노사이클릭 또는 융합된-바이사이클릭 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서, 헤테로아릴기는 N, O 및 S로부터 선택된 고리원으로서 1 내지 4개의 헤테로원자를 지니고; 상기 헤테로아릴기는 1 내지 5개의 R5 치환기로 치환되거나 비치환되고;
    R1은 H 및 C1-8 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 일원이고, 여기서 알킬 부분은 할로겐, -NRaRb, -ORa, -CO2Ra, 및 -CONRaRb로 치환되거나 비치환되고;
    각각의 R2는 독립적으로 H, 할로겐, CN, C1-8 알킬, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -ORa, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -NRaRb, -CONRaRb 및 -X-CONRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3는 H, C1-8 알킬, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -CONRaRb 및 -X-CONRaRb로 이루어진 군으로부터 선택된 일원이고;
    각각의 R4는 존재하는 경우, 독립적으로 C1-8 알킬, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -ORa, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -NRaRb, -CONRaRb 및 -X-CONRaRb로 이루어진 군으로부터 선택된 일원이고;
    각각의 R5는 독립적으로 할로겐, CN, -X-CN, C1-8 알킬, C3-8 사이클로알킬, C3-8 사이클로알케닐, C3-5 스피로사이클로알킬, C2-8 알케닐, C2-8 알키닐, C1-8 할로알킬, C1-8 하이드록시알킬, -ORa, -CO2Ra, -X-CO2Ra, -NRaRb, -CONRaRb, -X-CONRaRb, 아릴, 5- 또는 6원 헤테로아릴, 및 3-, 4-, 5- 또는 6원 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택된 일원이고, 여기서 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭 고리의 고리 정점으로서 존재하는 헤테로원자는 N, O 및 S로부터 선택되고, R5의 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭 부분은 추가로 1 내지 3개의 Ra로 치환되거나 비치환되고;
    각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 수소, 하이드록실, 할로겐, 시아노, C1-8 알킬, C1-8 알콕시, C1-8 할로알킬, C3-6 사이클로알킬, C3-6 사이클로알킬알킬, 아미노, C1-8 알킬아미노, 디 C1-8 알킬아미노, 카르복스아미드, 카르복시 C1-4 알킬 에스테르, 카르복실산, 및 -SO2-C1-8 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 X는 C1-4 알킬렌 연결기 또는 화학식 -(CH2)mO(CH2)p-를 갖는 연결기이고, 여기서 하첨자 m 및 p는 0 내지 5의 정수이고, m + p는 0 내지 6이고, X의 임의의 메틸렌 부분은 하나 또는 두개의 메틸기로 치환되거나 비치환된다.
  2. 제 1항에 있어서, Z가 N, O 및 S로부터 선택된 고리원으로서 1 내지 3개의 헤테로원자를 지닌, 모노사이클릭 또는 융합된-바이사이클릭 헤테로아릴이고, 상기 헤테로아릴기는 1 내지 5개의 R5 치환기에 의해 치환되거나 비치환된 화합물.
  3. 제 1항에 있어서, Z가 이미다졸, 피라졸, 1,2,3-트리아졸, 1,2,4-트리아졸, 테트라졸, 티아졸, 옥사졸, 옥사디아졸, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 및 퀴나졸린으로 이루어진 군으로부터 선택된 모노사이클릭 또는 융합된-바이사이클릭 헤테로아릴이고, 각각은 1 내지 2개의 R5 치환기에 의해 치환되거나 비치환된 화합물.
  4. 제 2항에 있어서, n이 0인 화합물.
  5. 제 4항에 있어서, R1이 H인 화합물.
  6. 제 1항에 있어서, 각각의 R2가 독립적으로 H 및 C1-4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  7. 제 1항에 있어서, R3가 H, CH2OH 및 C(0)NH2로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  8. 제 1항에 있어서, 하기 구조식을 갖는 화합물:
    Figure 112018117198415-pct00303
    .
  9. 제 8항에 있어서, 고리 정점으로서 Xa, Xb 및 Xc를 지닌 바이사이클릭 부분이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    Figure 112018117198415-pct00304
  10. 제 8항에 있어서, Z가 치환되거나 비치환된 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬, 또는 헤테로사이클로알킬 고리로부터 선택된 하나의 R5 기, 그리고, 임의로 할로겐, C1-4 알킬, C1-4 할로알킬, 및 CH2CN으로부터 선택된 둘 이하의 추가의 R5기로 치환된 5원 헤테로아릴기인 화합물.
  11. 제 10항에 있어서, Z가
    Figure 112015062207692-pct00305

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  12. 제 8항에 있어서, Z가 하기 화학식을 갖는 화합물:
    Figure 112018117198415-pct00306

    상기 식에서, 각각의 Q는 독립적으로 N, CH 및 C(R5)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  13. 제 1항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure 112018117198415-pct00309
    .
  14. 제 13항에 있어서, Ra는 수소, 할로겐, 시아노, C1-8 알킬 및 -SO2-C1-8 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  15. 제 13항에 있어서, R2가 H 및 C1-4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  16. 제 13항에 있어서, Ra가 수소, 할로겐, 시아노, C1-8 알킬 및 -SO2-C1-8 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; R2가 H 및 C1-4 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  17. 제 1항에 있어서, 하기 화합물들로부터 선택되는 화합물:
    Figure 112020087581364-pct00310
    ,
    Figure 112020087581364-pct00311
    ,
    Figure 112020087581364-pct00312
    ,
    Figure 112020087581364-pct00313
    ,
    Figure 112020087581364-pct00314
    ,
    Figure 112020087581364-pct00315
    ,
    Figure 112020087581364-pct00316
    ,
    Figure 112020087581364-pct00317
    ,
    Figure 112020087581364-pct00318
    ,
    Figure 112020087581364-pct00319
    ,
    Figure 112020087581364-pct00320
    ,
    Figure 112020087581364-pct00321
    ,
    Figure 112020087581364-pct00322
    ,
    Figure 112020087581364-pct00323
    ,
    Figure 112020087581364-pct00324
    ,
    Figure 112020087581364-pct00325
    ,
    Figure 112020087581364-pct00326
    ,
    Figure 112020087581364-pct00327
    ,
    Figure 112020087581364-pct00328
    ,
    Figure 112020087581364-pct00329
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    Figure 112020087581364-pct00330
    ,
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    ,
    Figure 112020087581364-pct00332
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    Figure 112020087581364-pct00333
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    Figure 112020087581364-pct00334
    ,
    Figure 112020087581364-pct00335
    ,
    Figure 112020087581364-pct00336
    ,
    Figure 112020087581364-pct00337
    ,
    Figure 112020087581364-pct00338
    ,
    Figure 112020087581364-pct00339
    ,
    Figure 112020087581364-pct00340
    ,
    Figure 112020087581364-pct00341
    ,
    Figure 112020087581364-pct00342
    ,
    Figure 112020087581364-pct00343
    ,
    Figure 112020087581364-pct00344
    ,
    Figure 112020087581364-pct00345
    ,
    Figure 112020087581364-pct00346
    ,
    Figure 112020087581364-pct00347
    ,
    Figure 112020087581364-pct00348
    ,
    Figure 112020087581364-pct00349
    ,
    Figure 112020087581364-pct00350
    ,
    Figure 112020087581364-pct00351
    ,
    Figure 112020087581364-pct00352
    ,
    Figure 112020087581364-pct00353
    ,
    Figure 112020087581364-pct00354
    ,
    Figure 112020087581364-pct00355
    ,
    Figure 112020087581364-pct00356
    ,
    Figure 112020087581364-pct00357
    ,
    Figure 112020087581364-pct00358
    ,
    Figure 112020087581364-pct00359
    ,
    Figure 112020087581364-pct00360
    ,
    Figure 112020087581364-pct00361
    ,
    Figure 112020087581364-pct00362
    ,
    Figure 112020087581364-pct00363
    ,
    Figure 112020087581364-pct00364
    ,
    Figure 112020087581364-pct00365
    ,
    Figure 112020087581364-pct00366
    ,
    Figure 112020087581364-pct00367
    ,
    Figure 112020087581364-pct00368
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    Figure 112020087581364-pct00369
    ,
    Figure 112020087581364-pct00370
    ,
    Figure 112020087581364-pct00371
    ,
    Figure 112020087581364-pct00372
    ,
    Figure 112020087581364-pct00373
    ,
    Figure 112020087581364-pct00374
    ,
    Figure 112020087581364-pct00375
    ,
    Figure 112020087581364-pct00376
    ,
    Figure 112020087581364-pct00377
    ,
    Figure 112020087581364-pct00378
    ,
    Figure 112020087581364-pct00379
    ,
    Figure 112020087581364-pct00380
    ,
    Figure 112020087581364-pct00381
    ,
    Figure 112020087581364-pct00382
    ,
    Figure 112020087581364-pct00383
    ,
    Figure 112020087581364-pct00384
    ,
    Figure 112020087581364-pct00385
    ,
    Figure 112020087581364-pct00386
    ,
    Figure 112020087581364-pct00387
    ,
    Figure 112020087581364-pct00388
    ,
    Figure 112020087581364-pct00389
    ,
    Figure 112020087581364-pct00390
    ,
    Figure 112020087581364-pct00391
    ,
    Figure 112020087581364-pct00392
    ,
    Figure 112020087581364-pct00393
    ,
    Figure 112020087581364-pct00394
    ,
    Figure 112020087581364-pct00395
    ,
    Figure 112020087581364-pct00396
    ,
    Figure 112020087581364-pct00397
    ,
    Figure 112020087581364-pct00398
    ,
    Figure 112020087581364-pct00399
    ,
    Figure 112020087581364-pct00400
    ,
    Figure 112020087581364-pct00401
    ,
    Figure 112020087581364-pct00402
    ,
    Figure 112020087581364-pct00403
    ,
    Figure 112020087581364-pct00404
    ,
    Figure 112020087581364-pct00405
    ,
    Figure 112020087581364-pct00406
    ,
    Figure 112020087581364-pct00407
    ,
    Figure 112020087581364-pct00408
    ,
    Figure 112020087581364-pct00409
    ,
    Figure 112020087581364-pct00410
    ,
    Figure 112020087581364-pct00411
    ,
    Figure 112020087581364-pct00412
    ,
    Figure 112020087581364-pct00413
    ,
    Figure 112020087581364-pct00414
    ,
    Figure 112020087581364-pct00415
    ,
    Figure 112020087581364-pct00416
    ,
    Figure 112020087581364-pct00417
    ,
    Figure 112020087581364-pct00418
    ,
    Figure 112020087581364-pct00419
    ,
    Figure 112020087581364-pct00420
    ,
    Figure 112020087581364-pct00421
    ,
    Figure 112020087581364-pct00422
    ,
    Figure 112020087581364-pct00423
    ,
    Figure 112020087581364-pct00424
    ,
    Figure 112020087581364-pct00425
    ,
    Figure 112020087581364-pct00426
    ,
    Figure 112020087581364-pct00427
    ,
    Figure 112020087581364-pct00428
    ,
    Figure 112020087581364-pct00429
    ,
    Figure 112020087581364-pct00430
    ,
    Figure 112020087581364-pct00431
    ,
    Figure 112020087581364-pct00432
    ,
    Figure 112020087581364-pct00433
    ,
    Figure 112020087581364-pct00434
    ,
    Figure 112020087581364-pct00435
    ,
    Figure 112020087581364-pct00436
    , 및
    Figure 112020087581364-pct00437
    .
  18. 제 1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure 112020087581364-pct00438
    .
  19. 제 1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure 112020087581364-pct00439
    .
  20. 제 1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure 112020087581364-pct00440
    .
  21. 제 1항의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 암, 염증 및 신경 또는 전구/줄기 세포 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 약제학적 조성물.
  22. 제 17항의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 암, 염증 및 신경 또는 전구/줄기 세포 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 약제학적 조성물.
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 종양, 기관 또는 조직을 이미징하는 방법으로서, 상기 방법이
    (a) 이러한 이미징이 필요한 피검체에 방사성 표지되거나 탐지가능한 형태의 제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하고;
    (b) 상기 화합물이 상기 피검체 어디에서 농축되어 있는지를 알아내기 위해 상기 화합물을 탐지하는 것을 포함하는 방법.
  26. 제 25항에 있어서, 상기 화합물이 방사성 표지되는 방법.
  27. 샘플에서 CXCR7의 높아진 수준을 탐지하는 방법으로서, 상기 방법이
    (a) CXCR7의 높아진 수준을 가질 것으로 의심되는 샘플을 방사성 표지되거나 탐지가능한 형태의 제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항의 화합물과 접촉시키고;
    (b) 상기 샘플 중에 존재하는 CXCR7에 결합된 화합물의 수준을 알아내어 상기 샘플 중 존재하는 CXCR7의 수준을 알아내고;
    (c) 단계(b)에서 알아낸 수준을 대조군 샘플과 비교하여 상기 샘플에 CXCR7의 높아진 수준이 존재하는 지를 알아내는 것을 포함하는 방법.
  28. 제 27항에 있어서, 상기 화합물이 방사성 표지되는 방법.
  29. 삭제
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