KR102169899B1 - 지질단백질 리파제 결핍 (lpld) 모집단에서 아포지질단백질 c-iii (apociii) 발현의 조절 - Google Patents

지질단백질 리파제 결핍 (lpld) 모집단에서 아포지질단백질 c-iii (apociii) 발현의 조절 Download PDF

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Abstract

프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 환자에서 ApoCIII mRNA 및 단백질의 발현을 감소시키는 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에서 제공된다. 또한 환자에서 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 치료, 예방, 지연, 또는 개선하기 위한 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에서 제공된다. 추가로, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 환자에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하고 혈장 지질 및 혈장 글루코스를 감소시키기 위한 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에서 제공된다. 그와 같은 방법, 화합물, 및 조성물은 췌장염, 심혈관 질환 또는 대사성 장애, 또는 그것의 증상 중 임의의 하나 이상을 치료, 예방, 지연, 또는 개선하는데 유용하다.

Description

지질단백질 리파제 결핍 (LPLD) 모집단에서 아포지질단백질 C-III (APOCIII) 발현의 조절{MODULATION OF APOLIPOPROTEIN C-III (APOCIII) EXPRESSION IN LIPOPROTEIN LIPASE DEFICIENT (LPLD) POPULATIONS}
서열목록
본원은 전자 형태의 서열목록과 함께 출원 중이다. 서열목록은 그 크기가 16 Kb인 파일명 BIOL0218WOSEQ_ST25.txt(2014년 1월 28일 제작)으로서 제공된다. 서열목록의 전자 형태 내의 정보는 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있다.
발명의 분야
프레드릭슨 I형 이상지질혈증 환자에서 아포지질단백질 C-III (ApoCIII) mRNA 및 단백질의 발현을 감소시키고, 트리글리세라이드 수준을 감소시키고 그리고 고밀도 지질단백질 (HDL) 수준 또는 HDL 활성을 증가시키는 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에서 제공된다. 또한, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증 또는 그것의 연관된 장애를 치료하는데 사용하기 위한 화합물 및 조성물이 본원에서 제공된다.
지질단백질은 단백질, 인지질 및 콜레스테롤의 양친매성 코팅으로 둘러싸인 아실글리세롤 및 콜레스테릴 에스테르의 비극성 코어로 구성된 구상, 교질입자-유사(micelle-like) 입자이다. 지질단백질은 그것의 작용성 및 물리적 특성을 기준으로 5가지 광범위한 카테고리로 분류되었다: 카일로마이크론, 초저밀도 지질단백질 (VLDL), 중간밀도 지질단백질 (IDL), 저밀도 지질단백질 (LDL), 및 고밀도 지질단백질 (HDL). 카일로마이크론은 식이 지질을 창자로부터 조직으로 수송한다. VLDL, IDL 및 LDL 모두는 트리아실글리세롤 및 콜레스테롤을 간으로부터 조직으로 수송한다. HDL은 내인성 콜레스테롤을 조직으로부터 간으로 수송한다.
아포지질단백질 C-III (또한 소위 APOC3, APOC-III, ApoCIII, 및 APO C-III)은 HDL 및 트리글리세라이드 (TG)-풍부 지질단백질의 구성요소이다. 상승된 ApoCIII은 상승된 TG 수준 및 심혈관 질환, 대사성 증후군, 비만 및 당뇨병과 같은 질환과 연관된다 (Chan et al., Int J Clin Pract, 2008, 62:799-809; Onat et at., Atherosclerosis, 2003, 168:81-89; Mendivil et al., Circulation, 2011, 124:2065-2072; Mauger et al., J. Lipid Res, 2006. 47: 1212-1218; Chan et al., Clin. Chem, 2002.278-283; Ooi et al., Clin.Sci, 2008. 114: 611-624; Davidsson et al., J. Lipid Res. 2005. 46: 1999-2006; Sacks et al., Circulation, 2000. 102: 1886-1892; Lee et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2003.23: 853-858). ApoCIII은 지질단백질 리파제 (LPL)의 억제를 통해서 그리고 세포-표면 글리코사미노글리칸 매트릭스와 결합하는 지질단백질로의 간섭에 의해서, 지방 분해를 억제하고 TG-풍부 지질단백질의 청소능을 늦춘다(Shachter, Curr. Opin. Lipidol, 2001, 12, 297-304). ApoCIII이 LPL을 억제하여 TG의 지방분해를 감소시키기 때문에, ApoCIII의 억제가 LPL 결핍된 (LPLD) 대상체에게 유익한 효과를 가질 것이라는 것을 예기치못할 것이다.
LPLD는 병에 걸린 개체가 기능적으로 활성인 LPL을 생산하지 못하는 것으로 특징지워진다. LPL은 주로 골격 근육, 지방 조직, 및 심장 근육에서 생산되며, TG-풍부 지질단백질 (예를 들면 VLDL) 및 카일로마이크론 (CM)의 이화 작용을 포함하는 다중 주요 기능을 갖는다. CM (및 VLDL)으로부터 TG의 오프로딩(Off-loading)은 보통 CM 매스 및 TG의 식후 과도한 상승을 방지한다. LPLD에서, LPL은 기능 이상이고 식사하고 12 시간 초과 후 하이퍼TG 및 카일로마이크론혈증이 지방혈증으로서 여전히 존재하고 관찰된다.
프레드릭슨 시스템이 환자에서 이상지질혈증 예컨대 초고트리글리세라이드혈증의 일차적 (유전적) 원인을 분류하는데 사용된다. 프레드릭슨 I형 (LPLD 또는 가족성 카일로마이크론혈증 증후군 (FCS)으로도 공지됨)은 보통 LPL 유전자, 또는 유전자의 보조인자 ApoC-II 중 어느 하나의 돌연변이에 의해 야기되어, 병에 걸린 개체가 기능적으로 활성인 LPL (즉 LPLD)을 생산하지 못하게 한다. 환자는 동종접합 (각 대립유전자 상에 동일한 돌연변이를 가짐) 또는 복합 이종접합 (각 대립유전자 상에 상이한 돌연변이를 가짐) 중 어느 하나인 돌연변이를 갖는다. 유병률은 일반적인 모집단에서 대략 1,000,000 중의 1이고 창시자 효과의 결과로서 남아프리카 및 동부 퀘벡에서 훨씬 높다.
현재, 프레드릭슨 I형, FCS, LPLD, 환자는 TG-저하 약물 예컨대 스타틴, 피브레이트 및 니코틴산에 대해 최소로 반응하거나 전혀 반응하지 않는다 (Tremblay et al., J Clin Lipidol, 2011, 5:37-44; Brisson et al., Pharmacogenet Genom, 2010, 20:742-747). 프레드릭슨 I형, FCS, LPLD, 환자의 임상 관리는 일반적으로 모든 식이 지방을 칼로리 섭취 중 20% 훨씬 미만으로 엄격히 감소시키고 문맥계를 통해 흡수되고 따라서 혈장에 직접적으로 도입되지 않는 중간-사슬 TG를 사용하는 것으로 이루어진다. 그와 같은 평생 동안의 식이 요법은 환자에 대한 유의미한 수용상태 쟁점을 생기게 한다. 심지어 환자가 상기 식이법에 순응하고 영양사 및 의료 팀에 의한 지질 클리닉에서 엄격히 지켜질 때에도, TG는 흔히 증가된 췌장염 위험의 역치 아래로 감소하지 않는다. 최근에, 식이 지방 제한에도 불구하고 심각한 또는 다중 췌장염 발병으로 고생하는 성인 LPLD 환자를 치료하기 위한 유전자 요법 제품 (GlyberaR)이 유럽에서 승인되었다. 글리베라(GlyberaR)로 치료된 환자는 글리베라R 치료 전에 그리고 글리베라R 치료 후에 면역억제성 약물의 투여를 필요로 한다. 글리베라R는 진행중인 치료 안전성을 보장하기 위해 LPLD를 치료하는데 전문 기술을 갖고 특별히 전문교육을 받은 의사에 의해 전용 센터를 통해서만 제공될 것이다 (http://www.uniqure.com/products/glybera/).
따라서, 환자에게 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD, 신규 치료 선택을 제공할 필요성이 여전히 존재한다. 안티센스 기술은 어떤 유전자 생성물의 발현을 감소시키는데 효과적인 수단으로 떠오르고 있으며, ApoCIII의 조절을 위한 수많은 치료제, 진단제, 및 연구 적용에서 독특하게 유용한 것으로 입증될 수 있다. 본 발명자들은 US 20040208856 (US 특허 7,598,227), US 20060264395 (US 특허 7,750,141), WO 2004/093783 및 WO 2012/149495 (모두는 참조로 본원에 편입되어 있음)에서 ApoCIII을 안티센스 화합물에 의해 억제하기 위한 이전에 개시된 조성물 및 방법을 이전에 개시하였다. ApoCIII을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 I상 임상 시험에서 시험되었고 안전한 것으로 나타났다. 현재, ApoCIII을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 당뇨병 또는 초고트리글리세라이드혈증의 치료에 있어서 그것의 유효성을 평가하기 위해 II상 임상 시험 중에 있다.
발명의 요약
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 치료, 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 치료, 예방, 지연 또는 개선하는데 사용하기 위한 ApoCIII 특이적 억제제를 제공한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII의 발현을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 소분자 또는 다른 제제이다. 어떤 구현예에서, 핵산은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 ApoCIII를 표적으로 하는 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3의 핵염기 서열의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3의 핵염기 서열로 구성된다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 상기 동물에게 서열번호: 3의 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하는 것을 포함하고 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기: 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절, 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절, 및 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하고; 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메티옥시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예는 동물에게 서열번호: 3의 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 상기 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기: 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절, 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절, 및 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하고; 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메티옥시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예는 동물에게 서열번호: 3의 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 상기 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기: 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절, 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절, 및 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하고; 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메티옥시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예는 동물에게 서열번호: 3의 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 상기 동물에서 췌장염 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기: 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절, 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절, 및 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하고; 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메티옥시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII의 발현을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 소분자 또는 다른 제제이다. 어떤 구현예에서, 핵산은 ApoCIII를 표적으로 하는 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801, AGCTTCTTGTCCAGCTTTAT (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
발명의 상세한 설명
전술된 일반적인 설명 및 하기 상세한 설명은 청구된 대로 단지 예시적이고 설명적이며 본 발명을 제한하지 않음이 이해되어야 한다. 본원에서, 단수의 사용은 달리 구체적으로 언급되지 않으면 복수를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않으면 "및/또는"을 의미한다. 더욱이, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 다른 형태, 예컨대 "포함하다" 및 "포함된"의 사용은 제한적이지 않다. 또한, 용어들 예컨대 "요소" 또는 "성분"은 달리 구체적으로 언급되지 않으면 하나의 단위(unit)를 포함하는 요소들 및 성분들, 및 하나 초과의 소단위(subunit)를 포함하는 요소들 및 성분들 둘 다를 포함한다.
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정의
구체적 정의가 제공되지 않으면, 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 화학 및 약화학과 관련되어 이용되는 명명법이 당해기술에 잘 알려지고 통상적으로 사용되는 것이다. 화학 합성, 및 화학 분석을 위한 표준 기술이 사용될 수 있다. 허용되는 경우, 모든 특허들, 출원, 공개출원 및 다른 공보, 미국국립생물공학정보센터 (NCBI)와 같은 데이타베이스를 통해 수득되는 유전자은행 수납 번호 및 연관된 서열 정보 및 본원의 개시내용에 걸쳐 언급된 다른 데이타는 본원에 논의된 문서의 일부에 대해서, 뿐만 아니라 그 전체에서 참고로 편입된다.
달리 지적되지 않으면, 하기 용어들은 하기 의미를 갖는다:
"2'-O-메톡시에틸" (또한 2'-MOE, 2'-O(CH2)2-OCH3 및 2'-O-(2-메톡시에틸))은 푸로실 고리의 2' 위치의 O-메톡시-에틸 변형을 나타낸다. 2'-O-메톡시에틸 변형된 당이 변형된 당이다.
"2'-O-메톡시에틸 뉴클레오타이드"는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오타이드를 의미한다.
"3' 표적 부위"는 특정한 안티센스 화합물의 3'-최말단 뉴클레오타이드에 상보적인 표적 핵산의 뉴클레오타이드를 나타낸다.
"5' 표적 부위"는 특정한 안티센스 화합물의 5'-최말단 뉴클레오타이드에 상보적인 표적 핵산의 뉴클레오타이드를 나타낸다.
"5-메틸시토신"은 5' 위치에 부착된 메틸 그룹으로 변형된 시토신을 의미한다. 5-메틸시토신이 변형된 핵염기이다.
"약"은 값의 ±10% 이내를 의미한다. 예를 들면, "마커가 약 50%만큼 증가될 수 있다"라고 언급된다면, 이것은 마커가 45%-55% 사이에서 증가될 수 있음을 암시한다.
"활성 약제"는 개체에게 투여될 때 치료적 이점을 제공하는 약제학적 조성물 중 물질 또는 물질들을 의미한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서 ApoCIII에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 활성 약제이다.
"활성 표적 영역" 또는 "표적 영역"은 1 이상의 활성 안티센스 화합물이 표적화된 영역을 의미한다. "활성 안티센스 화합물"은 표적 핵산 수준 또는 단백질 수준을 감소시키는 안티센스 화합물을 의미한다.
"동시에 투여된"은 둘 모두의 약리학적 효과가 환자에게 동시에 나타나는 2 종의 제제를 임의의 방식으로 공-투여하는 것을 나타낸다. 동시 투여 용량은, 두 제제들이 동일한 복용 형태의 단일 약제학적 조성물로 또는 동일한 투여 경로에 의해 투여되는 것을 필요로 하지 않는다. 두 제제들의 효과는 그 자체가 동시에 나타날 필요는 없다. 상기 효과는 오직 일정 기간 동안만 겹쳐질 필요가 있고 동시에 존재할 필요는 없다.
"투여하는"은 개체에게 약제를 제공함을 의미하며, 비제한적으로, 의료 전문가에 의해 그리고 자가-투여에 의해 투여함을 포함한다.
"제제"는 동물에게 투여될 때 치료적 이점을 제공할 수 있는 활성 물질을 의미한다. "제 1 제제"는 본 발명의 치료 화합물을 의미한다. 예를 들면, 제 1 제제는 ApoCIII을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. "제 2 제제"는 본 발명의 제 2 치료 화합물 (예를 들면 ApoCIII을 표적으로 하는 제 2 안티센스 올리고뉴클레오타이드) 및/또는 비-ApoCIII 치료 화합물을 의미한다.
"개선"은 연관된 질환, 장애, 또는 병태의 적어도 하나의 인디케이터, 징후, 또는 증상의 완화를 나타낸다. 인디케이터의 중증도는 당해기술의 숙련가에게 공지된 주관적 또는 객관적 측정에 의해 결정될 수 있다.
"동물"은 비제한적으로, 마우스, 랫트, 토끼, 개, 고양이, 돼지를 포함하는 인간 또는 비-인간 동물, 및 비제한적으로, 원숭이 및 침팬지를 포함하는 비-인간 영장류를 나타낸다.
"안티센스 활성"은 안티센스 화합물의 그것의 표적 핵산으로의 하이브리드화에 기인하는 임의의 검출가능한 또는 측정가능한 활성을 의미한다. 어떤 구현예에서, 안티센스 활성은 표적 핵산 또는 그와 같은 표적 핵산으로 인코딩된 단백질의 양 또는 발현의 감소이다.
"안티센스 화합물"은 수소 결합을 통해 표적 핵산으로 하이브리드화될 수 있는 올리고머 화합물을 의미한다. 안티센스 화합물의 예는 단일-가닥 및 이중-가닥 화합물, 예컨대, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, ssRNAi 및 점유(occupancy)-기반 화합물을 포함한다.
"안티센스 억제"는 안티센스 화합물의 부재 하에서의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준과 비교하여 표적 핵산에 상보적인 안티센스 화합물의 존재 하에서의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준의 감소를 의미한다.
"안티센스 올리고뉴클레오타이드"는 표적 핵산의 상응하는 영역 또는 분절로의 하이브리드화를 가능케 하는 핵염기 서열을 갖는 단일-가닥 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "안티센스 올리고뉴클레오타이드"는 본원에서 기재된 화합물의 약제학적으로 허용가능한 유도체를 포함한다.
"ApoA5", "아포지질단백질 A-V" 또는 "ApoA-V"는 ApoA5를 인코딩하는 임의의 핵산 또는 단백질 서열을 의미한다.
"ApoCII", "아포지질단백질 C-II" 또는 "ApoC2"는 ApoCII를 인코딩하는 임의의 핵산 또는 단백질 서열을 의미한다. ApoCII 단백질은 카일로마이크론 및 VLDL 입자의 성분이며 LPL을 활성화시켜 TG를 가수분해시킨다.
"ApoCIII", "아포지질단백질 C-III" 또는 "ApoC3"은 ApoCIII을 인코딩하는 임의의 핵산 또는 단백질 서열을 의미한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, ApoCIII은 ApoCIII을 인코딩하는 DNA 서열, ApoCIII을 인코딩하는 DNA로부터 전사된 RNA 서열 (인트론 및 엑손을 포함하는 게놈 DNA 포함), ApoCIII을 인코딩하는 mRNA 서열, 또는 ApoCIII을 인코딩하는 펩타이드 서열을 포함한다.
"ApoCIII 특이적 억제제"는 ApoCIII mRNA의 발현 및/또는 ApoCIII 단백질의 발현 또는 활성을 분자 수준에서 특이적으로 억제할 수 있는 임의의 제제를 나타낸다. 예를 들면, ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII mRNA 및/또는 ApoCIII 단백질의 발현을 억제할 수 있는 핵산 (안티센스 화합물 포함), 펩타이드, 항체, 소분자, 및 다른 제제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 핵산은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 ApoCIII을 표적으로 하는 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, ApoCIII을 표적으로 하는 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII을 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, ApoCIII을 표적으로 하는 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3에서 나타낸 바와 같은 서열, 또는, 예를 들면, U.S. 특허 7,598,227, U.S. 특허 7,750,141, PCT 공보 WO 2004/093783 또는 WO 2012/149495 (모두는 참조로 본원에 편입되어 있음)에 개시된 것과 같은 또 하나의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, ApoCIII mRNA 수준 및/또는 ApoCIII 단백질 발현을 특이적으로 조절함으로써, ApoCIII 특이적 억제제가 지방생성 경로의 성분에 영향을 미칠 수 있다. 유사하게, 어떤 구현예에서, ApoCIII 특이적 억제제는 동물에서 다른 분자적 과정에 영향을 미칠 수 있다.
"ApoCIII mRNA"는 ApoCIII 단백질을 인코딩하는 mRNA를 의미한다.
"ApoCIII 단백질"은 ApoCIII을 인코딩하는 임의의 단백질 서열을 의미한다.
"죽상동맥경화증"은 거대-크기 및 중간-크기의 동맥에 영향을 미치는 동맥의 경화를 의미하며 지방 축적이 있음을 특징으로 한다. 지방 축적은, 주로 콜레스테롤 및 다른 지방, 칼슘 및 반흔 조직, 및 동맥 라이닝의 손상으로 이루어진 "죽종(atheroma)" 또는 "플라크"로 불린다.
"2환식 당"은 2개의 비-제미널(geminal) 고리 원자의 브릿징에 의해 변형된 푸로실 고리를 의미한다. 2환식 당은 변형된 당이다.
"2환식 핵산" 또는 "BNA"는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드를 나타내며 여기서 상기 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드는의 푸라노스 부분은 상기 푸라노스 고리 위에 2개의 탄소 원자를 연결하고, 그렇게함으로써 2환식 고리계를 형성하는 브릿지를 포함한다.
"캡 구조" 또는 "말단 캡 모이어티"는 안티센스 화합물의 양쪽 말단에 편입된 화학적 변형을 의미한다.
"심혈관 질환" 또는 "심혈관 장애"는 심장, 혈관, 또는 순환과 관련된 병태의 그룹을 나타낸다. 심혈관 질환의 예는, 비제한적으로, 동맥류, 협심증, 부정맥, 죽상동맥경화증, 뇌혈관 질환 (뇌졸중), 관상동맥 심장병, 고혈압, 이상지질혈증, 고지혈증, 초고트리글리세라이드혈증 및 고콜레스테롤혈증을 포함한다.
"화학적으로 뚜렷이 다른 영역"은 동일한 안티센스 화합물의 또 하나의 영역과 어떤 점에서 화학적으로 상이한 안티센스 화합물의 영역을 나타낸다. 예를 들면, 2'-O-메톡시에틸 뉴클레오타이드를 갖는 영역은 2'-O-메톡시에틸 변형이 없는 뉴클레오타이드를 갖는 영역과 화학적으로 뚜렷이 다르다.
"키메라 안티센스 화합물"은 적어도 2개의 화학적으로 뚜렷이 다른 영역을 갖는 안티센스 화합물을 의미한다.
"콜레스테롤"은 모든 동물 조직의 세포막에서 발견되는 스테롤 분자이다. 콜레스테롤은 초저밀도 지질단백질 (VLDL), 중간밀도 지질단백질 (IDL), 저밀도 지질단백질 (LDL), 및 고밀도 지질단백질 (HDL)을 포함하는 지질 단백질에 의해 동물의 혈장으로 수송되어야 한다. "혈장 콜레스테롤"은 혈장 또는 혈청에 존재하는 모든 지질단백질 (VDL, IDL, LDL, HDL) 에스테르화된 및/또는 비-에스테르화된 콜레스테롤의 총량을 나타낸다.
"콜레스테롤 흡수 억제제"는 식이로부터 수득된 외인성 콜레스테롤의 흡수를 억제하는 제제를 의미한다.
"공-투여"는 개체에게 2개 이상의 제제의 투여를 의미한다. 2개 이상의 제제는 단일 약제학적 조성물일 수 있거나, 별개의 약제학적 조성물로 존재할 수 있다. 각각의 2개 이상의 제제들은 동일한 또는 상이한 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 공-투여는 병행 투여 또는 순차적인 투여를 포함한다.
"상보성"은 제 1 핵산 및 제 2 핵산의 핵염기들 사이의 짝짓기하는 능력을 의미한다. 어떤 구현예에서, 제1 및 제 2 핵산 사이의 상보성은 2개의 DNA 가닥 사이에, 2개의 RNA 가닥 사이에, 또는 DNA 및 RNA 가닥 사이의 상보성일 수 있다. 어떤 구현예에서, 하나의 가닥 위의 핵염기의 일부는 다른 가닥 위의 상보적 수소 결합 염기와 매칭된다. 어떤 구현예에서, 하나의 가닥 위의 모든 핵염기는 다른 가닥 위의 상보적 수소 결합 염기와 매칭된다. 어떤 구현예에서, 제 1 핵산은 안티센스 화합물이고 제 2 핵산은 표적 핵산이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 제 1 핵산이고 표적 핵산은 제 2 핵산이다.
"인접 핵염기"는 서로 매우 인접한 핵염기를 의미한다.
"구속된 에틸" 또는 "cEt"는 4' 및 2' 탄소 원자 사이에 메틸(메틸렌옥시)(4'-CH(CH3)-O-2') 브릿지를 포함하는 푸라노실 당을 갖는 2환식 뉴클레오사이드를 나타낸다.
"교차-반응성"은, 하나의 핵산 서열을 표적으로 하는 올리고머 화합물이 상이한 핵산 서열에 하이브리드될 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 일부 예에서 인간 ApoCIII을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 쥣과(murine) ApoCIII과 교차-반응할 수 있다. 올리고머 화합물이 그것의 지정된 표적 이외의 핵산 서열과 교차-반응하는지는 비-표적 핵산 서열을 갖는 화합물과의 상보성 정도에 의해 결정된다. 올리고머 화합물 및 비-표적 핵산 사이의 상보성이 클수록, 올리고머 화합물은 상기 핵산과 더 교차-반응할 것이다.
"치유"는 건강을 회복하는 방법 또는 병에 대해 처방된 치료를 의미한다.
"관상동맥 심장병 (CHD)"은 심장에 혈액과 산소를 공급하는 소혈관이 좁아짐을 의미하며, 흔희 죽상동맥경화증의 결과이다.
"데옥시리보뉴클레오타이드"는 뉴클레오타이드의 당 부분의 2' 위치에서 수소를 갖는 뉴클레오타이드를 의미한다. 데옥시리보뉴클레오타이드는 다양한 치환체들 중 어느 것으로 변형될 수 있다.
"진성 당뇨병" 또는 "당뇨병"은 불충분한 수준의 인슐린 또는 감소된 인슐린 민감도에서 야기되는 교란된 대사 및 비정상적인 고혈당 (고혈당증)을 특징으로 하는 증후군이다. 특징적인 증상은 고혈당 수준으로 인한 과도한 소변 생산 (다뇨증), 증가된 배뇨를 보충하려고 하는 과도한 갈증 및 증가된 수분 섭취 (조갈증), 눈의 광학에 대한 고혈당 효과로 인한 흐릿한 시력, 원인불명 체중 감소, 및 무기력이다.
"당뇨병성 이상지질혈증" 또는 "이상지질혈증을 갖는 2형 당뇨병"은 2형 당뇨병, 감소된 HDL-C, 상승된 트리글리세라이드, 및 상승된 작은, 조밀한 LDL 입자를 특징으로 하는 병태를 의미한다.
"희석제"는 약리적 활성이 결핍되지만 약제학적으로 필요하거나 바람직한 조성물 중 성분을 의미한다. 예를 들면, 주입 조성물 중 희석제는 액체, 예를 들면 염수 용액일 수 있다.
"이상지질혈증"은 지질 및/또는 지질단백질 과잉 생산 또는 결핍을 포함하는 지질 및/또는 지질단백질 대사의 장애를 나타낸다. 이상지질혈증은 카일로마이크론, 콜레스테롤 및 트리글리세라이드와 같은 지질 뿐만 아니라 저-밀도 지질단백질 (LDL) 콜레스테롤과 같은 지질단백질의 상승의 의해 발현될 수 있다. 이상지질혈증의 예는 카일로마이크론혈증 또는 초고트리글리세라이드혈증이다.
"복용 단위"는 약제가 제공되는 형태, 예를 들면 알약, 정제, 또는 당해기술에 공지된 다른 복용 단위를 의미한다. 어떤 구현예에서, 복용 단위는 동결건조된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 바이알이다. 어떤 구현예에서, 복용 단위는 재구성된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 바이알이다.
"용량"은 단일 투여에 또는 명시된 기간에 제공되는 약제의 명시된 양을 의미한다. 어떤 구현예에서, 용량은 1, 2, 또는 그 이상의 볼러스, 정제, 또는 주사액으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 피하 투여를 원하는 어떤 구현예에서, 원하는 용량은 단일 주사에 의해 쉽게 수용되지 않는 용적을 필요로 하고, 따라서 2회 이상의 주사가 원하는 용량을 달성하는데 사용될 수 있다. 어떤 구현예에서, 약제는 장시간에 걸쳐 또는 연속적으로 주입에 의해 투여된다. 용량은 시간당, 일당, 주당, 또는 개월당 약제의 양으로서 언급될 수 있다. 용량은 또한 mg/kg 또는 g/kg으로 언급될 수 있다.
"효과적인 양" 또는 "치료적으로 효과적인 양"은 상기 제제를 필요로 하는 개체에서 원하는 생리적 결과를 일으키는데 충분한 활성 약제의 양을 의미한다. 효과적인 양은 치료되는 개체의 건강 및 신체 조건, 치료되는 개체의 분류학적 그룹, 조성물의 제형, 개체의 의학적 상태의 평가, 및 다른 관련된 인자에 따라 개체들마다 가변적일 수 있다.
"피브레이트"는 지질 및 지질단백질 대사의 다양한 단계를 조절하는 전사 인자를 통해 작용하는, 페록시솜 증식체-활성화된 수용체-α(PPAR-α)의 작용제이다. PPAR-α와의 상호작용에 의해, 피브레이트는 상이한 보조 인자를 채용하고 유전자 발현을 조절한다. 그 결과, 피브레이트는 공복 TG 수준 뿐만 아니라 식후 TG 및 TRL 잔여 입자를 낮추는데 효과적이다. 피브레이트는 또한 보통의 LDL-C 저하 효과 및 HDL-C 상승 효과를 갖는다. ApoC-III의 발현 및 수준의 감소는 PPAR-α작용제의 일치된 효과이다 (Hertz et al. J Biol Chem, 1995, 270(22):13470-13475). 혈장 ApoC-III 수준의 36% 감소는 대사성 증후군의 페노파이브레이트 치료로 보고되었다 (Watts et al. Diabetes, 2003, 52:803-811). 그러나, 피브레이트는 초고트리글리세라이드혈증을 갖는 LPLD 대상체를 치료하는데 비효과적이다.
"프레드릭슨" 시스템은 이상지질혈증의 일차 (유전적) 원인을 몇 개의 하위그룹 또는 유형으로 분류하는데 사용된다. 본원에 개시된 화합물로의 요법을 잘 받아들일 수 있는 이상지질혈증 유형은, 비제한적으로, 프레드릭슨 I형, FCS, LPLD를 포함한다.
"프레드릭슨 I형"은 "지질단백질 리파제 결핍", "LPLD", "가족성 카일로마이크론혈증 증후군" 또는 "FCS"로도 공지되고 하기의 몇 개의 형태들로 존재한다: 유형 1a (버거-그루에츠 증후군으로도 공지됨)는 통상적으로 LPL 또는 변경된 ApoC-II의 결핍으로 인한 지질단백질 리파제 결핍이고; 유형 Ib (가족성 아포단백질 CII 결핍으로도 공지됨)는 지질단백질 리파제 활성제 아포단백질 C-II의 결핍에 의해 야기된 병태이고; 유형 Ic는 지질단백질 리파제의 순환 억제제로 인한 카일로마이크론혈증이다. I형은 소아기에 보통 나타나는 희귀 장애이다. 그것은 복통, 반복되는 급성 췌장염, 발진성 피부 황색종, 및 간비장비대증의 에피소드와 함께, 카일로마이크론의 심각한 상승 및 극도로 상승된 TG 수준 (항상 1000 mg/dL를 훨씬 초과하여 도달하며 가끔 10,000 mg/dL 이상만큼 높게 상승함)을 특징으로 한다. 환자는 죽상동맥경화증이 거의 발병되지 않으며, 이것은 아마 이들의 혈장 지질단백질 입자가 너무 커서 동맥 내막으로 도입되지 못하기 때문일지도 모른다 (Nordestgaard et al., J Lipid Res, 1988, 29:1491-1500; Nordestgaard et al., Arteriosclerosis, 1988, 8:421-428). I형은 보통 LPL 유전자, 또는 유전자 보조인자 ApoC-II의 돌연변이에 의해 야기되어 병에 걸린 개체가 충분히 기능적으로 활성인 LPL을 생산하지 못하게 한다. 환자는 그와 같은 돌연변이에 대해 동종접합 또는 복합 이종접합 중 어느 하나이다. 프레드릭슨 I형은 또한 GPIHBP1, APOA5, LMF1 또는 기능이상 LPL을 야기하는 또 다른 유전자에서의 돌연변이에 기인할 수 있다( Brunzell, In: Pagon RA, Adam MP, Bird TD, Dolan CR, Fong CT, Stephens K, editors. GeneReviews™[인터넷]. Seattle (WA): University of Washington, Seattle; 1993-2013.1999 Oct 12 [2011년 12월 15일 업데이트됨]). 게다가, 프레드릭슨 I형은, 일부 예에서, 기능이상 LPL을 유발하는 개체에서의 LPL 억제제 (예를 들면, 항-LPL 항체)의 존재에 기인할 수 있다. 프레드릭슨 I형의 유병률은 일반적인 모집단에서 대략 1,000,000명 중 1명이며, 창시자 효과로서 남아프리카 및 동부 퀘벡에서 훨씬 높다. 환자는 TG-저하 약물에 최소로 반응하거나 전혀 반응하지 않고 (Tremblay et al., J Clin Lipidol, 2011, 5:37-44; Brisson et al., Pharmacogenet Genom, 2010, 20:742-747), 따라서 식이 지방을 20 그램/1일 이하로 제한하는 것이 이러한 희귀 장애의 증상을 관리하는데 사용된다.
"프레드릭슨 II형"은 가장 공통된 일차 고지혈증 형태이다. 그것은 주로 LDL 콜레스테롤 (LDL-C) 이외에 VLDL의 상승이 있는지에 따라 유형 IIa 및 유형 IIb로 추가로 분류된다. 유형 IIa (가족성 고콜레스테롤혈증)는 염색체 19 상의 LDL 수용체 유전자에서의 돌연 변이 (모집단 중 0.2%) 또는 아포지질단백질 B (apoB) 유전자에서의 돌연 변이 (0.2%)의 결과로서 산발적 (식이 인자에 기인함), 다유전자성, 또는 진정 가족성일 수 있다. 가족성 형태는 힘줄 황색종, 황색판종 및 미성숙한 심혈관 질환을 특징으로 한다. 이 질환의 발생정도는 이형접합체의 경우 500 중 약 1, 동종접합체의 경우 1,000,000 중 1이다. 유형 IIb (가족성 결합성 고지질단백혈증으로도 공지됨)는 LDL-C 및 VLDL의 상승에 의해 야기된, 혼합된 고지혈증 (고 콜레스테롤 및 TG 수준)이다. 고 VLDL 수준은 TG, 아세틸 CoA를 포함하는 기질의 과잉생산, 및 B-100 합성의 증가에 기인한다. 이들은 또한 줄어든 LDL 청소능에 의해 야기될 수 있다. 모집단에서의 유병률은 약 10%이다.
"프레드릭슨 III형" (베타지질단백장애로도 공지됨)은 잔존물 제거 질환(remnant removal disease), 또는 광대-베타 질환이다 (Fern et al., J Clin Pathol, 2008, 61:1174-118). 그것은 콜레스테롤-풍부 VLDL (β-VLDL)에 기인한다. 전형적으로, 이러한 병태를 갖는 환자는 카일로마이크론 및 VLDL 잔존물 (예를 들면 IDL)의 손상된 청소능으로 인해 상승된 혈장 콜레스테롤 및 TG 수준을 나타낸다. 손상된 청소능은 아포지질단백질 E (apoE)의 결함에 기인한다. 보통 상기 잔존물에 포함된 apoE가 기능하여 LDL 수용체에 결합하게 하고 순환으로부터 제거하게 할 것이다. 병에 걸린 개체에서 상기 잔존물의 축적은 황색종증 및 미성숙한 관상동맥 및/또는 말초 혈관 질환을 야기할 수 있다. 유형 III의 대부분의 공통 원인은 apoE E2/E2 유전자형의 존재이다. 그것의 유병률은 10,000 중 대략 1인 것으로 추정된다.
"프레드릭슨 IV형" (가족성 초고트리글리세라이드혈증으로도 공지됨)은 모집단 중 대략 1%에서 일어나는 상염색체 지배적인 병태이다. TG 수준은 과잉의 VLDL 간 생산 또는 이종접합 LPL 결핍의 결과로서 상승되지만, 거의 항상 1000 mg/dL 미만이다. 혈청 콜레스테롤 수준은 보통 정상 한계 내에 있다. 장애는 이종성이고 표현형은 환경적인 인자, 특히 탄수화물 및 에탄올 소비에 의해 강하게 영향을 받는다.
"프레드릭슨 V형"은 고 VLDL 및 카일로마이크론을 갖는다. 그것은 적어도 20%의 LPL 활성 (즉 프레드릭슨 I형과 비교하여 부분 LPL 결핍)과 연관된 기능 상실 LPL 유전자 변이체의 보균자를 특징으로 한다. 이들 환자는 카일로마이크론 및 VLDL로 인해 유백색 혈장 및 심각한 초고트리글리세라이드혈증이 나타난다. TG 수준은 변함없이 1000 mg/dL보다 더 크고 총콜레스테롤 수준은 항상 상승된다. LDL-C 수준은 보통 낮다. 그것은 또한 급성 췌장염, 포도당 과민증 및 고요산혈증에 대한 위험 증가와 연관된다. 증상은 일반적으로 성인기 (> 35년)에 나타나고, 유병률이 비교적 드물더라도, 동종접합 또는 복합 이종접합 LPL 결핍된 환자보다 훨씬 더 흔하다.
"완전히 상보적" 또는 "100% 상보적"은 제 1 핵산의 핵염기 서열의 각 핵염기가 제 2 핵산의 제 2 핵염기 서열에서 상보적 핵염기를 가짐을 의미한다. 어떤 구현예에서, 제 1 핵산은 안티센스 화합물이고 제 2 핵산은 표적 핵산이다.
"갭머"는 RNase H 절단을 돕는 복수의 뉴클레오사이드를 갖는 내부 영역이 1 이상의 뉴클레오사이드를 갖는 외부 영역들 사이에 배치되는 키메라 안티센스 화합물을 의미하며, 여기서 내부 영역을 구성하는 상기 뉴클레오사이드는 외부 영역을 구성하는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드들과 화학적으로 뚜렷이 다르다. 내부 영역은 "갭" 또는 "갭 분절"로서 언급될 수 있고 외부 영역은 "윙" 또는 "윙 분절"로서 언급될 수 있다.
"갭-확장된"은 1 내지 6개의 뉴클레오사이드를 갖는 5' 및 3' 윙 분절 사이에 바로 인접하면서 배치된 12 이상의 인접 2'-데옥시리보뉴클레오사이드의 갭 분절을 갖는 키메라 안티센스 화합물을 의미한다.
"유전자 스크리닝"은 동물에서 유전자형 변화 또는 돌연변이에 대한 스크리닝함을 의미한다. 일부 예에서 돌연변이는 동물에서 표현형 변화를 야기할 수 있다. 어떤 예에서 표현형 변화는 동물에서 질환, 장애 또는 병태이거나 질환, 장애 또는 병태를 야기한다. 예를 들면, LPL 또는 ApoC-II 유전자에서의 돌연변이는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 야기할 수 있다. 유전자 스크리닝은 당해기술의 공지된 기술 중 어느 것, 예를 들면, 돌연변이를 검출하기 위한 LPL 또는 ApoC-II 유전자 또는 mRNA의 서열분석에 의해 수행될 수 있다. 서열 중 임의의 돌연변이가 있는지를 결정하기 위해 스크리닝된 동물의 서열을 정상 동물의 서열과 비교한다. 대안적으로, 예를 들면, LPL 또는 ApoC-II 유전자 또는 mRNA에서의 돌연변이의 확인은 PCR 증폭 및 겔 또는 칩 분석을 사용하여 수행될 수 있다.
"글루코오스"는 세포에 의해 에너지 공급원 및 염증성 증간체로서 사용되는 모노사카라이드이다. "혈장 글루코스"는 혈장에 존재하는 글루코오스를 나타낸다.
"고밀도 지질단백질" 또는 "HDL"은 지질 (콜레스테롤, 트리글리세라이드 및 인지질) 및 단백질 (아포지질단백질 (apo) 및 효소)의 거대분자 복합체를 나타낸다. HDL의 표면은 주로 아포지질단백질 A, C 및 E를 함유한다. 일부 이들 아포단백질의 기능은 HDL을 말초 조직에서 간으로 유도하기 위한 것이다. 혈청 HDL 수준은 근원적인 유전적 원인에 의해 영향을 받을 수 있다 (Weissglas-Volkov and Pajukanta, J Lipid Res, 2010, 51:2032-2057). 역학 연구는, 증가된 HDL 수준이 심혈관 질환 또는 관상동맥 심장병으로부터 보호됨이 지적된다 (Gordon et al., Am. J. Med. 1977. 62: 707-714). 이들 HDL 효과는 트리글리세라이드 및 LDL 농도와 독립적이다. 임상 실시에서, 낮은 혈장 HDL은, 혈장 트리글리세라이드를 증가시키는 다른 장애, 예를 들면, 중심부 비만, 인슐린 저항성, 2형 진성당뇨병 및 신장 질환 (만성적 신부전 또는 신장 단백뇨)과 통상적으로 더 연관된다 (Kashyap. Am. J. Cardiol. 1998. 82: 42U-48U).
"고밀도 지질단백질-콜레스테롤" 또는 "HDL-C"는 고밀도 지질단백질 입자와 연관된 콜레스테롤을 의미한다. 혈청 (또는 혈장) 중 HDL-C의 농도는 전형적으로 mg/dL 또는 nmol/L로 정량화된다. "HDL-C" 및 "혈장 HDL-C"는 각각 혈청 및 혈장 중 HDL-C를 의미한다.
"HMG-CoA 환원효소 억제제"는 효소 HMG-CoA 환원효소의 억제를 통해 작용하는 제제, 예컨대 아토르바스타틴, 로수바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 및 심바스타틴을 의미한다.
"하이브리드화"는 상보적 핵산 분자의 어닐링을 의미한다. 어떤 구현예에서, 상보적 핵산 분자는 안티센스 화합물 및 표적 핵산을 포함한다.
"고콜레스테롤혈증"은, 성인에서 고콜레스테롤의 검출, 치료 평가에 대한 미국 콜레스테롤 교육 프로그램 (National Cholesterol Educational Program; NCEP)의 전문가 패널 보고의 지침에 따라, 상승된 콜레스테롤 또는 순환 (혈장) 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 VLDL-콜레스테롤을 특징으로 하는 병태를 의미한다 (참고, Arch. Int. Med. (1988) 148, 36-39).
"고지혈증" 또는 "고지방혈증"은 상승된 혈청 지질 또는 순환 (혈장) 지질을 특징으로 하는 병태이다. 이 상태는 비정상적으로 고농도의 지방을 나타낸다. 순환 혈액에서 지질 분획은 콜레스테롤, 저밀도 지질단백질, 초저밀도 지질단백질, 카일로마이크론 및 트리글리세라이드이다. 고지혈증의 프레드릭슨 분류는, 전기영동 또는 초원심분리에 의해 측정되는 바와 같이, TG 및 콜레스테롤-풍부 지질단백질 입자의 패턴을 기준으로 하며, 통상적으로 고지혈증 예컨대 초고트리글리세라이드혈증의 일차 원인을 규정하는데 사용된다 (Fredrickson and Lee, Circulation, 1965, 31:321-327; Fredrickson et al., New Eng J Med, 1967, 276 (1): 34-42).
"초고트리글리세라이드혈증"은 상승된 트리글리세라이드 수준을 특징으로 하는 병태를 의미한다. 초고트리글리세라이드혈증은 트리글리세라이드 (TG)-풍부 지질단백질: VLDL 및, 보다 적게는, 카일로마이크론 (CM)의 증가된 생산 및/또는 감소된 또는 지연된 이화의 결과이다. 그것의 병인은 일차 (즉 유전적 원인) 및 2차 (다른 근본적인 원인 예컨대 당뇨병, 대사성 증후군/인슐린 저항성, 비만, 신체 활동 부족, 담배 흡연, 과잉의 알코올 및 탄수화물이 매우 높은 식이) 인자 또는, 가장 흔히, 이 둘의 조합을 포함한다 (Yuan et al. CMAJ, 2007, 176:1113-1120). 초고트리글리세라이드혈증은 심대사성 질환 (Hegele　et al. 2009, Hum Mol Genet, 18: 4189-4194;　Hegele and Pollex 2009, Mol Cell Biochem, 326: 35-43) 뿐만 아니라 가장 심각한 형태의 급성 췌장염의 발생 (Toskes　1990, Gastroenterol Clin North Am, 19: 783-791;　Gaudet　et al. 2010, Atherosclerosis Supplements, 11: 55-60;　Catapano　et al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44; Tremblay et al. 2011, J Clin Lipidol, 5: 37-44)의 증가된 위험과 연관된 공통 임상 특성이다. 심대사성 질환의 예는, 비제한적으로, 당뇨병, 대사성 증후군/인슐린 저항성, 및 유전 장애 예컨대 가족성 카일로마이크론혈증 증후군 (FCS), 가족성 결합성 고지혈증 및 가족성 초고트리글리세라이드혈증을 포함한다. 경계선 고 TG 수준 (150-199 mg/dL)은 통상적으로 일반적인 모집단에서 발견되며 대사성 증후군/인슐린 저항성 상태의 공통 성분이다. 고 TG 수준 (200-499 mg/dL)에 대해서도 마찬가지이지만, 단, 혈장 TG 수준이 증가하기 때문에, 근원적인 유전적 인자가 점점더 중요한 병인적 역할을 한다. 매우 높은 TG 수준 (≥500 mg/dL)은 대부분 흔히 마찬가지로 상승된 CM 수준과 연관되고, 급성 췌장염에 대한 위험 증가를 동반한다. 췌장염의 위험은, TG 수준이 880 mg/dL　(>10　mmol)을 초과한다면 임상적으로 유의미한 것으로 간주되며, 급성 췌장염을 예방하기 위한 조치를 서술하는 유럽 동맥경화 학회/유럽 심장 학회 (EAS/ESC) 2011 지침이 의무적이다 (Catapano　et al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44). EAS/ESC 2011 지침에 따라서, 초고트리글리세라이드혈증은 모든 췌장염 사례 중 대략 10%의 원인이며, 췌장염의 발달은 440-880 mg/dL 사이의 TG 수준에서 발생할 수 있다. 상승된 TG 수준이 죽상경화성 CVD의 독립적인 위험 인자임을 실증하는 임상 연구로부터의 증거를 토대로, 미국 콜레스테롤 교육 프로그램 성인 치료 패널 III (NCEP 2002, Circulation, 106: 3143-421) 및 미국 당뇨병 협회 (ADA 2008, Diabetes Care, 31: S12-S54.) 둘 모두로부터의 지침은 심혈관 위험을 감소시키기 위해 150 mg/dL 미만의 표적 TG 수준을 추천한다.
명명된 질환, 장애 또는 병태가 있는 동물을 "확인하는" 또는 "진단하는"은 명명된 질환, 장애 또는 병태에 걸리기 쉽게나 이를 갖는 대상체를 당해기술에 공지된 방법에 의해 확인함을 의미한다.
프레드릭슨 1형 이상지질혈증이 있는 동물을 "확인하는" 또는 "진단하는"은 프레드릭슨 I형 (a, b 또는 c) 이상지질혈증, FCS, LPLD에 걸리기 쉽게나 이를 갖는 대상체를 확인하는 것을 의미한다. 프레드릭슨 I형, FCS, LPLD를 갖는 대상체의 확인은, 임의의 당해기술의 공지된 스크리닝 기술, 예를 들면, 유전자 스크리닝 또는 LPL 억제제에 대한 스크리닝과 함께 대상체의 병력의 시험에 의해 수행될 수 있다. 예를 들면, 750mg/dL 초과의 공복 TG 병력이 문서로 기록된 환자는 이때 LPL 유전자 또는 ApoC2, ApoA5, GPIHBP1 또는 LMF1과 같은 LPL에 영향을 주는 LPL 유전자 또는 유전자들에서의 돌연변이에 대해 스크리닝된다.
대사성 또는 심혈관 질환이 있는 동물을 "확인하는" 또는 "진단하는"은 대사성 질환, 심혈관 질환, 또는 대사성 증후군에 걸리기 쉽거나 이를 갖는 대상체를 확인함; 또는 비제한적으로, 고콜레스테롤혈증, 고혈당증, 고지혈증, 초고트리글리세라이드혈증, 고혈압 증가된 인슐린 저항성, 줄어든 인슐린 민감도, 정상 체중 초과, 및/또는 정상 체지방 함량 초과 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 대사성 질환, 심혈관 질환, 또는 대사성 증후군 중 임의의 증상을 갖는 대상체를 확인함을 의미한다. 그와 같은 확인은, 비제한적으로, 표준 임상 시험 또는 평가를 포함하는 임의의 방법, 예컨대 혈청 또는 순환 (혈장) 콜레스테롤의 측정, 혈청 또는 순환 (혈장) 혈액-글루코오스의 측정, 혈청 또는 순환 (혈장) 트리글리세라이드의 측정, 혈압의 측정, 체지방 함량의 측정, 체중의 측정, 등에 의해 달성될 수 있다.
"개선된 심혈관 결과"는 부정적인 심혈관 사건 발생의 감소, 또는 그 위험의 감소를 의미한다. 부정적인 심혈관 사건의 예는, 비제한적으로, 사망, 재경색, 뇌졸중, 심장성 충격, 폐부종, 심장 정지, 및 심방 율동부정을 포함한다.
"바로 인접한"은 바로 인접한 요소들, 예를 들면, 영역, 분절, 뉴클레오타이드 및/또는 뉴클레오사이드 사이에 간섭 원소가 없음을 의미한다.
"증가 HDL" 또는 "상승 HDL"은 임의의 화합물이 투여되지 않은 동물에서의 HDL 수준과 비교하여 적어도 하나의 본 발명의 화합물의 투여 후 동물에서 HDL의 수준이 증가함을 의미한다.
"개체" 또는 "대상체" 또는 "동물"은 치료 또는 요법에 선택된 인간 또는 비-인간 동물을 의미한다.
"유도하다", "억제하다", "강력하게 하다", "상승시키다", "증가하다", "줄어든다", "감소하다" 등은 2가지 상태 사이의 정량적 차이를 나타낸다. 예를 들면, "ApoCIII의 활성 또는 발현을 억제하는데 효과적인 양"은 처리된 샘플에서의 ApoCIII의 활성 또는 발현 수준이 미처리된 샘플에서의 ApoCIII 활성 또는 발현 수준과 상이할 것임을 의미한다. 그와 같은 용어들은, 예를 들면, 발현 수준, 및 활성 수준에 적용된다.
"발현 또는 활성을 억제하는"은 RNA 또는 단백질의 발현 또는 활성의 감소 또는 봉쇄를 나타내며, 반드시 발현 또는 활성의 전체 제거를 지시하지는 않는다.
"인슐린 저항성"은 정상적 인슐린 양이 지방, 근육 및 간 세포로부터 정상 인슐린 반응을 산출하는데 부적절한 병태로서 규정된다. 지방 세포에서의 인슐린 저항성은 저장된 트리글리세라이드의 가수분해를 초래하며, 이것은 혈장 중 유리 지방산을 상승시킨다. 근육에서의 인슐린 저항성은 글루코오스 흡수를 감소시키고, 반면 간에서의 인슐린 저항성은 글루코오스 저장을 감소시키며, 두 가지 효과는 혈당을 상승시킨다. 인슐린 저항성으로 인한 인슐린 및 글루코오스의 고 혈장 수준은 흔히 대사성 증후군 및 2형 당뇨병을 야기한다.
"인슐린 민감도"는 얼마나 효과적으로 개체가 글루코오스를 처리하는지의 척도이다. 고 인슐린 민감도를 갖는 개체는 효과적으로 글루코오스를 처리하는 반면에 저 인슐린 민감도를 갖는 개체는 효과적으로 글루코오스를 처리하지 못한다.
"뉴클레오사이드간 연결(linkage)"은 뉴클레오사이드들 사이의 화학 결합을 나타낸다.
"정맥내 투여"는 정맥 내로 투여함을 의미한다.
"연결된 뉴클레오사이드"는 함께 결합된 인접한 뉴클레오사이드를 의미한다.
"지질-저하"는 대상체에서 1 이상의 지질의 감소를 의미한다. "지질-상승"은 대상체에서 지질 (예를 들면, HDL)의 증가를 의미한다. 지질-저하 또는 지질-상승은 경시적으로 1 이상의 용량으로 발생할 수 있다.
"지질-저하 요법" 또는 "지질 저하제"는 대상체에서 1 이상의 지질을 감소시키기 위한 대상체에 제공된 치료적 처방을 의미한다. 어떤 구현예에서, 지질-저하 요법은 대상체에서 CETP, ApoB, 총 콜레스테롤, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, 비-HDL-C, 트리글리세라이드, 작은 조밀한 LDL 입자, 및 Lp(a) 중 하나 이상을 감소시키기 위해 제공된다. 지질-저하 요법의 예는 스타틴, 피브레이트, MTP 억제제를 포함한다.
"지질단백질", 예컨대 VLDL, LDL 및 HDL은 혈청, 혈장 및 림프에서 발견되는 단백질 그룹을 나타내며, 지질 수송에 중요하다. 각 지질단백질의 화학 조성은, HDL이 더 높은 지질에 대한 단백질 비율을 가지며, 반면에 VLDL이 더 낮은 지질에 대한 단백질 비율을 갖는다는 점에서 다르다.
"지질단백질 리파제" 또는 "LPL"은 지질단백질, 예컨대 CM 또는 VLDL에서 발견되는 TG를 유리 지방산 및 모노아실글리세롤로 가수분해하는 효소를 나타낸다. LPL은 TG를 가수분해하는데 기능하기 위해 보조인자로서 apo C-II를 필요로 한다. LPL은 주로 골격 근육, 지방 조직, 및 심장 근육에서 생산된다. CM 및 VLDL로부터 TG의 가수분해 및 제거는 보통 CM 매스(mass) 및 TG의 과도한 식후 상승에 대해 보호한다.
"지질단백질 리파제 결핍된", "지질단백질 리파제 결핍", "LPL 결핍" 또는 "LPLD"는 "프레드릭슨 I형 이상지질혈증", "카일로마이크론혈증", "가족성 카일로마이크론혈증 증후군" 또는 "FCS"로도 공지된다. LPLD를 갖는 대상체가 일반적으로 지방산 예컨대 TG의 효과적인 분해에 필요한 LPL 또는 LPL 활성이 결핍되더라도, 이들 대상체는 여전히 최소 LPL 활성을 가질 수 있거나 최소 수준의 LPL을 발현시킬 수 있다. 일부 예에서, LPLD 대상체는, 최대 약, 또는 단지 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 활성의 LPL을 발현시킬 수 있거나, LPL 활성을 가질 수 있다. 다른 예에서, LPLD 대상체는 측정가능한 LPL 또는 LPL 활성을 갖지 않는다. LPLD의 하나의 구현예는 "고지질단백혈증 유형 Ia" ("프레드릭슨 유형 Ia"로도 공지됨)를 갖는 대상체를 포함하고, 대상체가 지방산 예컨대 TG의 효과적인 분해에 필요한 충분한 작용성 지질단백질 리파제 효소를 생산할 수 없음을 나타낸다. TG 분해 불능은 상기 대상체에서 초고트리글리세라이드혈증을 야기하고, 흔히 식사하고 12 시간 초과 후에도 하이퍼TG 및 카일로마이크론혈증이 여전히 존재하고 지방혈증으로 보인다. 유형 Ia는 통상적으로 LPL 유전자에서 1 이상의 돌연변이에 의해 야기된다. 본원에서 개시된 바와 같이, LPLD는 또한 기능이상 지질단백질 리파제를 갖는 대상체 예컨대 "고지질단백혈증 유형 Ib" ("프레드릭슨 유형 Ib"로도 공지됨)를 갖는 대상체 및 "고지질단백혈증 유형 Ic" ("프레드릭슨 유형 Ic"로도 공지됨)를 갖는 대상체를 포함한다. 유형 Ib는 지질단백질 리파제 활성제 아포단백질 C-II의 결핍에 의해 야기된다. 유형 Ic는 지질단백질 리파제의 순환 억제제에 기인한다. 유형 1a와 마찬가지로, 유형 1b/1c 대상체는 초고트리글리세라이드혈증을 야기하는 TG 분해 불능으로 고통을 받으며, 흔히 식사하고 12 시간 초과 후에도 하이퍼TG 및 카일로마이크론혈증이 여전히 존재하고 지방혈증으로 보인다. 어떤 구현예에서, LPLD는 LPL 유전자 예컨대 P207L, G188L 또는 D9N에서의 적어도 하나의 돌연변이 또는 LPL에 영향을 미치는 다른 돌연변이와 연관된다 (Brunzell, In: Pagon RA, Adam MP, Bird TD, Dolan CR, Fong CT, Stephens K, editors. GeneReviews™ [Internet]. Seattle (WA): University of Washington, Seattle; 1993-2013.1999 Oct 12 [2011년 12월 15일 업데이트됨]).
"저밀도 지질단백질-콜레스테롤 (LDL-C)"은 저밀도 지질단백질 입자에 지닌 콜레스테롤을 의미한다. 혈청 (또는 혈장) 중 LDL-C의 농도는 전형적으로 mg/dL 또는 nmol/L로 정량화된다. "혈청 LDL-C" 및 "혈장 LDL-C"는 각각 혈청 및 혈장에서 LDL-C를 의미한다.
"주요 위험 인자"는 특정한 질환 또는 병태에 대한 고위험에 기여하는 인자를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 관상동맥 심장병에 대한 주요 위험 인자는, 비제한적으로, 담배 흡연, 고혈압, 낮은 HDL-C, 관상동맥 심장병의 가족력, 연령, 및 본원에 개시된 다른 인자를 포함한다.
"대사성 장애" 또는 "대사성 질환"은 대사 기능의 변경 또는 방해를 특징으로 하는 병태를 나타낸다. "대사성" 및 "대사"는 당해기술에서 잘 알려진 용어들이고 일반적으로 살아있는 유기체 내에서 발생하는 전체 범위의 생화학적 과정들을 포함한다. 대사성 장애는, 비제한적으로, 고혈당증, 전당뇨병, 당뇨병 (1형 및 2형), 비만, 인슐린 저항성, 대사성 증후군 및 2형 당뇨병에 기인한 이상지질혈증을 포함한다.
"대사성 증후군"은 대사 기원의 지질 및 비-지질 심혈관 위험 인자의 클러스터링를 특징으로 하는 병태를 의미한다. 어떤 구현예에서, 대사성 증후군은 하기 인자 중 어느 3개의 존재로 확인된다: 남성에서 102 cm 초과의 허리둘레 또는 여성에서 88 cm 초과의 허리둘레; 적어도 150 mg/dL의 혈청 트리글리세라이드; 남성에서 40 mg/dL 미만의 HDL-C 또는 여성에서 50 mg/dL 미만의 HDL-C; 적어도 130/85 mmHg의 혈압; 및 적어도 110 mg/dL의 공복 혈당. 이들 결정 인자는 임상 실시로 쉽게 측정될 수 있다 (JAMA, 2001, 285: 2486-2497).
"미스매치" 또는 "비-상보적 핵염기"는 제 1 핵산의 핵염기가 제 2 또는 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 짝짓기할 수 없는 경우를 나타낸다.
"혼합된 이상지질혈증"은 상승된 콜레스테롤 및 상승된 트리글리세라이드를 특징으로 하는 병태를 의미한다.
"변형된 뉴클레오사이드간 연결"은 천연 발생 뉴클레오사이드간 결합으로부터의 치환 또는 임의의 변화를 나타낸다. 예를 들면, 포스포로티오에이트 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다.
"변형된 핵염기"는 아데닌, 시토신, 구아닌, 티미딘, 또는 우라실 이외의 임의의 핵염기를 나타낸다. 예를 들면, 5-메틸시토신은 변형된 핵염기이다. "비변형된 핵염기"는 퓨린 염기 아데닌 (A) 및 구아닌 (G), 및 피리미딘 염기 티민 (T), 시토신 (C), 및 우라실 (U)을 의미한다.
"변형된 뉴클레오사이드"는 적어도 하나의 변형된 당 모이어티, 및/또는 변형된 핵염기를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
"변형된 뉴클레오타이드"는 적어도 하나의 변형된 당 모이어티, 변형된 뉴클레오사이드간 연결 및/또는 변형된 핵염기를 갖는 뉴클레오타이드를 의미한다.
"변형된 올리고뉴클레오타이드"는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"변형된 당"은 천연 당으로부터의 치환 또는 변화를 나타낸다. 예를 들면, 2'-O-메톡시에틸 변형된 당이 변형된 당이다.
"모티프"는 안티센스 화합물에서 화학적으로 뚜렷이 다른 영역의 패턴을 의미한다.
"천연 발생 뉴클레오사이드간 연결"은 3' 내지 5' 포스포디에스테르 연결을 의미한다.
"천연 당 모이어티"는 DNA (2'-H) 또는 RNA (2'-OH)에서 발견되는 당을 의미한다.
"니코틴산" 또는 "니아신"은 간으로의 지방산 유입 및 간에 의한 VLDL의 분비를 감소시키는 것으로 보고되었다. 이 효과는 지방 조직에서 호르몬-민감성 리파제에 대한 영향에 의해 부분적으로 매개되는 것으로 나타난다. 니코틴산은 간 및 지방 조직 모두에서 주요 작용 부위를 갖는다. 간에서, 니코틴산은, 간으로부터 VLDL 입자의 분비를 감소시키고, 이것은 또한 IDL 및 LDL 입자 둘 모두의 감소를 나타내는 디아실글리세롤 아실전달효소-2 (DGAT-2)를 억제하는 것으로 보고되어 있으며, 또한 니코틴산은 간에서 apo A1 생산을 주로 촉진시켜 HDL-C 및 apo A1을 상승시키고 또한 고지혈증을 갖는 환자에서 VLDL-ApoCIII 농도를 감소시키는 것으로 나타났다 (Wahlberg et al. Acta Med Scand 1988; 224:319-327). 지방세포에서 지방분해 및 지방산 이동에 대한 니코틴산의 효과는 잘 확립되어 있다. 그러나, 니코틴산은 초고트리글리세라이드혈증을 갖는 LPLD 대상체를 치료하는데 효과적이지 않다.
"핵산"은 모노머성 뉴클레오타이드로 구성된 분자를 나타낸다. 핵산은 리보핵산 (RNA), 데옥시리보핵산 (DNA), 단일-가닥 핵산 (ssDNA), 이중-가닥 핵산 (dsDNA), 작은 간섭 리보핵산 (siRNA), 및 마이크로RNA (miRNA)를 포함한다. 핵산은 또한 단일 분자에서 이들 요소들의 조합을 포함할 수 있다.
"핵염기"는 또 하나의 핵산의 염기와 짝짓기할 수 있는 복소환식 모이어티를 의미한다.
"핵염기 상보성"은 또 하나의 핵염기와 염기 짝짓기할 수 있는 핵염기를 나타낸다. 예를 들면, DNA에서, 아데닌 (A)은 티민 (T)에 상보적이다. 예를 들면, RNA에서, 아데닌 (A)은 우라실 (U)에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 상보적 핵염기는 그것의 표적 핵산의 핵염기와 염기 짝짓기를 할 수 있는 안티센스 화합물의 핵염기를 나타낸다. 예를 들면, 안티센스 화합물의 어떤 위치에서의 핵염기가 표적 핵산의 어떤 위치에서의 핵염기와 수소 결합을 할 수 있다면, 이때 올리고뉴클레오타이드 및 표적 핵산은 그 핵염기 쌍에서 상보적인 것으로 여겨진다.
"핵염기 서열"은 임의의 당, 연결, 또는 핵염기 변형과 독립적인 인접 핵염기의 순서를 의미한다.
"뉴클레오사이드"는 당에 연결된 핵염기를 의미한다.
"뉴클레오사이드 모방체"는 당 또는 당과 염기를 대체하는데 사용된 구조를 포함하며, 반드시 올리고머 화합물의 1 이상의 위치에서의 연결은 아니며; 예를 들면, 모폴리노, 사이클로헥세닐, 사이클로헥실, 테트라하이드로피라닐, 바이사이클로 또는 트리사이클로 당 모방체 예컨대 비-푸라노스 당 단위를 갖는 뉴클레오사이드 모방체이다.
"뉴클레오타이드"는 뉴클레오사이드의 당부에 공유 결합된 포스페이트 그룹을 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
"뉴클레오타이드 모방체"는 올리고머 화합물의 1 이상의 위치에서의 뉴클레오사이드 및 연결을 대체하는데 사용된 구조를 포함하며, 예를 들면 펩타이드 핵산 또는 모폴리노 (-N(H)-C(=O)-O- 또는 다른 비-포스포디에스테르 연결에 의해 연결된 모폴리노)이다.
"올리고머 화합물" 또는 "올리고머"는 핵산 분자의 영역에 하이브리드할 수 있는 연결된 모노머 서브유닛의 폴리머를 의미한다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 키메라 올리고뉴클레오타이드이다.
"올리고뉴클레오타이드"는 서로 독립적으로, 각각 변형되거나 비변형될 수 있는 연결된 뉴클레오사이드의 폴리머를 의미한다.
"비경구 투여"는 주사 또는 주입을 통한 투여를 의미한다. 비경구 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 복강내 투여, 또는 두개내 투여, 예를 들면 척추강내 또는 뇌심실내 투여를 포함한다. 투여는 연속적, 만성적, 단기간 또는 간헐적일 수 있다.
"펩타이드"는 적어도 2개의 아미노산을 아미드 결합에 의해 연결하여 형성된 분자를 의미한다. 펩타이드는 폴리펩타이드 및 단백질을 나타낸다.
"약제"는 개체에게 투여될 때 치료적 이점을 제공하는 물질을 의미한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, ApoCIII에 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 약제이다.
"약제학적 조성물" 또는 "조성물"은 개체에게 투여하기에 적합한 물질들의 혼합물을 의미한다. 예를 들면, 약제학적 조성물은 1 이상의 활성제 및 약제학적 담체, 예컨대 멸균된 수용액을 포함할 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 담체"는 화합물의 구조에 지장을 주지 않는 매질 또는 희석제를 의미한다. 몇몇 그와 같은 담체는 약제학적 조성물이, 예를 들면, 대상체의 경구 섭취를 위한 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 서스펜션 및 로젠지로 제형화되도록 만든다. 몇몇 그와 같은 담체는 약제학적 조성물이 주사, 주입 또는 국소 투여를 위해 제형화되도록 만든다. 예를 들면, 약제학적으로 허용가능한 담체는 멸균된 수용액일 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 유도체" 또는 "염"은 본원에서 기재된 화합물의 유도체 예컨대 용매화물, 수화물, 에스테르, 전구약물, 다형체, 이성질체, 동위원소로 라벨링된 변이체, 약제학적으로 허용가능한 염 및 당해기술에 공지된 다른 유도체를 포함한다.
"약제학적으로 허용가능한 염"은 안티센스 화합물의 생리학적으로 및 약제학적으로 허용가능한 염, 즉, 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하고 거기에 원하지 않는 독물학적 효과를 부여하지 않는 염을 의미한다. 용어 "약제학적으로 허용가능한 염" 또는 "염"은 무기 또는 유기 산 및 염기를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 비독성 산 또는 염기로부터 제조된 염을 포함한다. 본원에서 기재된 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염은 당해기술에 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염의 검토를 위해, 문헌(Stahl and Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002))를 참조한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 나트륨염은 인간으로의 치료적 투여에 유용하며 잘 수용된다. 따라서, 일 구현예에서 본원에서 기재된 화합물은 나트륨염의 형태이다.
"포스포로티오에이트 연결"은, 포스포디에스테르 결합이 비-브릿징 산소 원자 중 하나를 황 원자로 대체하여 변형되는, 뉴클레오사이드들 사이의 연결을 의미한다. 포스포로티오에이트 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다.
"부분"는 규정된 수의 핵산의 인접 (즉 연결된) 핵염기를 의미한다. 어떤 구현예에서, 부분은 규정된 수의 표적 핵산의 인접 핵염기이다. 어떤 구현예에서, 부분은 규정된 수의 안티센스 화합물의 인접 핵염기이다.
"예방하다"는 질환, 장애, 또는 병태의 개시 또는 발달을 수분에서 무기한의 기간 동안 지연시키거나 방지시킴을 나타낸다. 예방하다는 또한 질환, 장애, 또는 병태의 발달 위험을 감소시킴을 의미한다.
"전구약물"은 내인성 효소 또는 다른 화학 물질 또는 상태에 작용에 의해 체내 또는 그의 세포 내에서 활성 형태 (즉, 약물)로 전환되는, 불활성 형태로 제조되는 치료제를 의미한다.
"상승시키다"는 양의 증가를 의미한다. 예를 들면, 혈장 HDL 수준을 상승시키는 것은 혈장에서 HDL의 양을 증가시키는 것을 의미한다.
"TG 대 HDL의 비"는 HDL 수준에 대한 TG 수준을 의미한다. 고 TG 및/또는 저 HDL의 발생은 심혈관 질환 발생정도, 결과 및 사망률과 연결된다. "TG 대 HDL의 비의 증진"은 TG를 감소시키고/시키거나 HDL 수준을 상승시키는 것을 의미한다.
"감소시키다"는 더 작은 정도, 크기, 양, 또는 수로 낮추는 것을 의미한다. 예를 들면, 혈장 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 것은 혈장에서 트리글리세라이드의 양을 낮추는 것을 의미한다.
"영역" 또는 "표적 영역"은 적어도 하나의 확인가능한 구조, 기능, 또는 특징을 갖는 표적 핵산의 부위로서 규정된다. 예를 들면, 표적 영역은 3' UTR, 5' UTR, 엑손, 인트론, 엑손/인트론 접합부, 코딩 영역, 번역 개시 영역, 번역 종료 영역, 또는 다른 규정된 핵산 영역을 포함할 수 있다. ApoCIII에 대한 구조적으로 규정된 영역은 서열 데이타베이스 예컨대 NCBI로부터의 수납 번호에 의해 수득될 수 있으며, 그와 같은 정보는 본원에 참고로 편입되어 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은, 표적 영역 내의 하나의 표적 분절의 5' 표적 부위로부터 표적 영역 내의 또 하나의 표적 분절의 3' 표적 부위까지의 서열을 포함할 수 있다.
"리보뉴클레오타이드"는 뉴클레오타이드의 당부의 2' 위치에서 하이드록시를 갖는 뉴클레오타이드를 의미한다. 리보뉴클레오타이드는 다양한 치환체 중 어느 것으로 변형될 수 있다.
"제 2 제제" 또는 "제 2 치료제"는 "제 1 제제"와 조합하여 사용될 수 있는 제제를 의미한다. 제 2 치료제는, 비제한적으로, siRNA, 또는 ApoCIII을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 제 2 제제는 또한 항-ApoCIII 항체, ApoCIII 펩타이드 억제제, DGAT1 억제제, 콜레스테롤 저하제, 지질 저하제, 글루코오스 저하제 및 항-염증제를 포함할 수 있다.
"분절"은 핵산 내의 영역의 더 작은, 하위-부위로서 규정된다. 예를 들면, "표적 분절"은 1 이상의 안티센스 화합물이 표적화된 표적 핵산의 뉴클레오타이드 서열을 의미한다. "5' 표적 부위"는 표적 분절의 5'-최말단 뉴클레오타이드를 나타낸다. "3' 표적 부위"는 표적 분절의 3'-최말단 뉴클레오타이드를 나타낸다.
본원에 교시된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 표적 핵산의 "단축된" 또는 "끝이 잘린" 버전은 1, 2개 또는 그 초과의 뉴클레오사이드가 결실된다.
"부작용"은 원하는 효과 이외에 치료에 기인하는 생리적 반응을 의미한다. 어떤 구현예에서, 부작용은 주사 부위 반응, 간 기능 시험 이상, 신장 기능 이상, 간 독성, 신장 독성, 중추신경계 이상, 근병증, 및 권태감을 포함한다. 예를 들면, 혈청에서 증가된 아미노기전달효소 수준은 간 독성 또는 간 기능 이상을 가리킬 수 있다. 예를 들면, 증가된 빌리루빈은 간 독성 또는 간 기능 이상을 가리킬 수 있다.
"단일-가닥 올리고뉴클레오타이드"는 상보적 가닥에 하이브리드되지 않은 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"특이적으로 하이브리드가능한"은 원하는 효과를 유도하지만, 특이적 결합을 바람직한 조건하에서, 즉 생체내 검정 및 치료적 처치의 경우에 생리적 조건하에서 비-표적 핵산에 대한 효과를 최소로 나타내거나 효과가 없는, 표적 핵산에 충분한 상보성 정도를 갖는 안티센스 화합물을 나타낸다.
"스타틴"은 HMG-CoA 환원효소의 활성을 억제하는 제제를 의미한다. 스타틴은 간에서 HMG-CoA 환원효소 활성을 경쟁적으로 억제함으로써 콜레스테롤의 합성을 감소시킨다. 세포내 콜레스테롤 농도의 감소는 간세포 세표 표면에서 LDL 수용체 발현을 유도하여, 혈액으로부터 LDL-C의 추출을 증가시키고 TG-풍부 입자를 포함하는 지질단백질을 포함하는 다른 apo-B 및 순환 LDL-C의 농도를 감소시킨다. 스타틴의 LDL-C 및 LDL 수용체에 대한 효과와 독립적으로, 스타틴은 ApoC-III의 혈장 농도 및 세포성 mRNA 수준을 저하시킨다 (Ooi et al. Clinical Sci, 2008, 114:611-624). 스타틴이 사망률 뿐만 아니라 대부분의 심혈관 질환 결과 파라미터에 대해 유의미한 영향을 갖기 때문에, 이들 약물은 전체 심혈관 질환 위험 및 적당히 상승된 TG 수준 둘 모두를 감소시키기 위한 첫 번째 선택이다. 더 강한 스타틴 (아토르바스타틴, 로수바스타틴, 및 피타바스타틴)은, 특히 고용량에서 상승된 TG를 갖는 환자에서 TG 수준을 강력하게 저하시키는 것으로 실증된다. 그러나, 스타틴은 초고트리글리세라이드혈증이 있는 LPLD 대상체를 치료하는데 비효과적이었다.
"피하 투여"는 피부 바로 아래 투여를 의미한다.
"대상체"는 치료 또는 요법에 선택된 인간 또는 비-인간 동물을 의미한다.
"심혈관 질환 또는 장애의 증상"은 심혈관 질환 또는 장애에서 발생하고 심혈관 질환 또는 장애를 수반하고, 심혈관 질환 또는 장애의 조짐의 역할을 하는 현상을 의미한다. 예를 들면, 협심증; 가슴 통증; 숨가쁨; 심계항진; 약화; 현기증; 메스꺼움; 땀흘리기; 빈맥; 서맥; 부정맥; 심방 세동; 하지의 팽윤; 청색증; 피로; 실신; 얼굴의 저림; 팔다리의 저림; 근육의 파행 또는 경련; 복부의 팽만; 또는 열이 심혈관 질환 또는 장애의 증상이다.
"표적하는" 또는 "표적화된"은 표적 핵산에 특이적으로 하이브리드하여 원하는 효과를 유도할 안티센스 화합물의 디자인 및 선택 과정을 의미한다.
"표적 핵산", "표적 RNA" 및 "표적 RNA 전사체"는 모두 안티센스 화합물에 의해 표적화될 수 있는 핵산을 나타낸다.
"치료적 생활방식 변화"는 지방/지방 조직 질량 및/또는 콜레스테롤을 저하시키도록 의도된 식이 및 생활방식 변화를 의미한다. 그와 같은 변화는 심장병의 발병 위험을 감소시킬 수 있고, 총 1일 칼로리, 총 지방, 포화된 지방, 다중불포화된 지방, 단불포화된 지방, 탄수화물, 단백질, 콜레스테롤, 불용성 섬유의 식이 섭취에 대한 권고, 뿐만 아니라 신체 활동에 대한 권고를 포함할 수 있다.
"치료하다"는 질환, 장애, 또는 병태의 변경 또는 개선을 초래하기 위해 본 발명의 화합물을 투여함을 나타낸다.
"트리글리세라이드" 또는 "TG"는 3개의 지방산 분자와 조합된 글리세롤로 이루어진 지질 또는 중성 지방을 의미한다.
"2형 당뇨병" ("2형 진성당뇨병", "진성당뇨병, 2형", "비-인슐린-의존적 당뇨병 (NIDDM)", "비만 관련된 당뇨병", 또는 "성인형 당뇨병"으로도 공지됨)은 주로 인슐린 저항성, 상대적 인슐린 결핍, 및 고혈당증을 특징으로 하는 대사성 장애이다.
"비변형된 뉴클레오타이드"는 천연 발생 핵염기, 당 모이어티, 및 뉴클레오사이드간 연결로 구성된 뉴클레오타이드를 의미한다. 어떤 구현예에서, 비변형된 뉴클레오타이드는 RNA 뉴클레오타이드 (즉 β-D-리보뉴클레오사이드) 또는 DNA 뉴클레오타이드 (즉 β-D-데옥시리보뉴클레오사이드)이다.
"윙 분절"은 올리고뉴클레오타이드에 특성 예컨대 증대된 억제 활성, 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화도, 또는 생체내 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 저항성을 부여하도록 변형된 하나 또는 복수의 뉴클레오사이드를 의미한다.
어떤 구현예
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 ApoCIII 수준을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 수준은 간, 지방 조직, 심장, 골격 근육 또는 작은 창자에서 감소된다.
어떤 구현예는 동물에서 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 치료, 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD와 관련된 심혈관 및/또는 대사성 질환 또는 장애, 또는 그것의 증상 또는 위험이 개선된다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염을 치료, 예방, 지연 또는개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 췌장염, 또는 그것의 증상 또는 위험이 개선된다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 수준을 감소시키는 방법에 제공되고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예에서, 동물은 하기의 TG 수준을 갖는다: 적어도 ≥1200mg/dL, ≥1100mg/dL, ≥1000mg/dL, ≥900mg/dL, ≥880mg/dL, ≥850mg/dL, ≥800mg/dL, ≥750mg/dL, ≥700mg/dL, ≥650mg/dL, ≥600mg/dL, ≥550mg/dL, ≥500mg/dL, ≥450mg/dL, ≥440mg/dL, ≥400mg/dL, ≥350mg/dL, ≥300mg/dL, ≥250mg/dL, ≥200mg/dL, ≥150mg/dL. 어떤 구현예에서, 동물은 TG 수준 ≥880mg/dL, 공복 TG 수준 ≥750mg/dL 및/또는 다이어트한 후 TG 수준 ≥440mg/dL의 이력을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 기준선 TG 수준으로부터 하기까지 TGs (식후 또는 공복)를 감소시킨다: 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 적어도 50%, 적어도 45%, 적어도 40%, 적어도 35%, 적어도 30%, 적어도 25%, 적어도 20%, 적어도 15%, 적어도 10%, 적어도 5% 또는 적어도 1%. 어떤 구현예에서, TG (식후 또는 공복) 수준은 하기이다: ≤1900mg/dL, ≤1800mg/dL, ≤1700mg/dL, ≤1600mg/dL, ≤1500mg/dL, ≤1400mg/dL, ≤1300mg/dL, ≤1200mg/dL, ≤1100mg/dL, ≤1000mg/dL, ≤900mg/dL, ≤800mg/dL, ≤750mg/dL, ≤700mg/dL, ≤650mg/dL, ≤600mg/dL, ≤550mg/dL, ≤500mg/dL, ≤450mg/dL, ≤400mg/dL, ≤350mg/dL, ≤300mg/dL, ≤250mg/dL, ≤200mg/dL, ≤150mg/dL 또는 ≤100mg/dL.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 화합물은 기준선 HDL 수준으로부터 하기까지 HDL (식후 또는 공복)를 증가시킨다: 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 적어도 50%, 적어도 45%, 적어도 40%, 적어도 35%, 적어도 30%, 적어도 25%, 적어도 20%, 적어도 15%, 적어도 10%, 적어도 5% 또는 적어도 1%.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 ApoCIII를 약 81%까지 감소시키고, TG를 약 69%까지 감소시키고, VLDL ApoCIII를 약 80%까지 감소시키고, HDL을 약 78%까지 증가시키고, 비-HDL-C를 약 58%까지 감소시키고/시키거나 ApoB를 약 13%까지 감소시킨다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 화합물은 TG 수준을 감소시키고, 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 화합물은 TG 수준을 감소시키고, 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 화합물은 TG 수준을 감소시키고, 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 질환, 장애 또는 병태를 예방, 치료, 개선하고, 그것의 개시를 지연하거나, 그것의 위험을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 화합물은 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 질환, 장애 또는 병태를 예방,치료, 개선하고, 그것의 발병을 지연하거나, 그것의 위험을 감소시킨다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 CETP, VLDL, VLDL ApoCIII, 콜레스테롤, 카일로마이크론 및/또는 ApoB 수준을 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, ApoB는 ApoB-48 또는 ApoB-100이다. 어떤 구현예에서, ApoB-48의 양은 동물에서 카일로마이크론의 양을 나타낸다. 어떤 구현예에서, 콜레스테롤은 총 콜레스테롤 또는 비-HDL-콜레스테롤이다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 ApoA1, PON1, 지방 청소능, 카일로마이크론-트리글리세라이드 (CM-TG) 청소능 및/또는 HDL을 증가시키는 방법을 제공하고, 이 방법은, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공하고, 이 방법에서 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예는 심각한 또는 다중 췌장염 공격으로부터 고통받는, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 성인 환자를 치료하는 방법을 제공하고 이 방법은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 환자는 식이 지방 제한에도 불구하고 췌장염으로부터 고통받고 있다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD로부터 고통받고 있는 대상체를 확인하는 방법을 제공하고, 이 방법은 상기 대상체를 유전적으로 스크리닝하는 것을 포함한다. 어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD의 위험이 있는 대상체를 확인하는 방법을 제공하고, 이 방법은 상기 대상체를 유전적으로 스크리닝하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서 유전자 스크리닝은 LPL 또는 ApoC-II를 인코딩하는 유전자 또는 RNA 전사체의 서열 분석에 의해 수행된다. 어떤 구현예에서, 상기 대상체는 LPL 유전자 예컨대 P207L, G188L, D9N에서 적어도 하나의 돌연변이 또는 LPL에 영향을 주는 다른 돌연변이에 대해 유전적으로 스크리닝된다 (Brunzell, In: Pagon RA, Adam MP, Bird TD, Dolan CR, Fong CT, Stephens K, editors. GeneReviewsTM [Internet]. Seattle (WA): University of Washington, Seattle; 1993-2013.1999 Oct 12 [2011년 12월 15일 업데이트됨]).
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD로부터 고통받고 있는 대상체를 확인하는 방법을 제공하고, 이 방법은 LPL 억제 항체의 존재에서 스크리닝 상기 대상체를 스크리닝하는 것을 포함한다. 어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD의 위험이 있는 대상체를 확인하는 방법을 제공하고, 이 방법은 LPL 억제 항체의 존재에서 상기 대상체를 스크리닝하는 것을 포함한다.
어떤 구현예에서, LPLD 대상체에서 LPL 발현의 수준은 검출불가능하다. 어떤 구현예에서, LPLD 대상체에서 LPL의 수준은 검출가능하다. 어떤 구현예에서, LPLD 대상체에서 LPL의 수준은 비-LPLD 대상체의 LPL 수준의 많아야 25%, 많아야 24%, 많아야 23%, 많아야 22%, 많아야 21%, 많아야 20%, 많아야 19%, 많아야 18%, 많아야 17%, 많아야 16%, 많아야 15%, 많아야 14%, 많아야 13%, 많아야 12%, 많아야 11%, 많아야 10%, 많아야 9%, 많아야 8%, 많아야 7%, 많아야 6%, 많아야 5%, 많아야 4%, 많아야 3%, 많아야 2% 또는 많아야 1%이다.
어떤 구현예에서, LPLD 대상체에서 LPL 활성의 수준은 검출불가능하다. 어떤 구현예에서, LPLD 대상체에서 LPL 활성의 수준은 검출가능하다. 어떤 구현예에서, LPLD 대상체에서 LPL 활성의 수준은 비-LPLD 대상체의 LPL 활성 수준의 많아야 25%, 많아야 24%, 많아야 23%, 많아야 22%, 많아야 21%, 많아야 20%, 많아야 19%, 많아야 18%, 많아야 17%, 많아야 16%, 많아야 15%, 많아야 14%, 많아야 13%, 많아야 12%, 많아야 11%, 많아야 10%, 많아야 9%, 많아야 8%, 많아야 7%, 많아야 6%, 많아야 5%, 많아야 4%, 많아야 3%, 많아야 2% 또는 많아야 1%이다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산은 하기에서 제시된 임의의 서열이다: 유전자은행 수납 번호 NM_000040.1 (서열번호: 1로서 본원에서 편입됨), 뉴클레오타이드 20262640 내지 20266603로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_033899.8 (서열번호: 2로서 본원에서 편입됨), 및 뉴클레오타이드 6238608 내지 6242565로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_035088.1 (서열번호: 4로서 본원에서 편입됨).
어떤 구현예에서, ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII의 발현을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 소분자 또는 다른 제제이다. 어떤 구현예에서, 핵산은 ApoCIII를 표적으로 하는 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 상보적인 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII에 대해 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801 (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801의 핵염기 서열 (서열번호: 3)을 갖는다. 어떤 구현예에서, ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3 이외의 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기에서 개시된 임의의 서열로부터 선택된 서열의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다: U.S. 특허 7,598,227, U.S. 특허 7,750,141, PCT 공보 WO 2004/093783 또는 PCT 공보 WO 2012/149495(모두는 참조로 본원에 편입되어 있음). 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기에서 개시된 임의의 서열로부터 선택된 서열을 갖는다: U.S. 특허 7,598,227, U.S. 특허 7,750,141, PCT 공보 WO 2004/093783 또는 PCT 공보 WO 2012/149495(모두는 참조로 본원에 편입되어 있음).
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 단일가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성된다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 12-30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 개의 연결된 뉴클레오사이드 및 ISIS 304801의 핵염기 서열 (서열번호: 3)로 구성된다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다. 어떤 구현예에서, 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 변형된 당을 포함하는 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 적어도 하나의 변형된 당은 2환식 당이다. 어떤 구현예에서, 적어도 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸을 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 변형된 핵염기를 포함하는 적어도 하나의 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 상기 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 하기: (i) 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절; (ii) 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절; (iii) 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그들 사이에 배치되고 그리고 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 하기: (i) 8-12 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절; (ii) 1-5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절; (iii) 1-5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 하기: (i) 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절; (ii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절; (iii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예는 동물에게 12 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 상기 동물에서 심혈관 질환의 위험을 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII 핵산에 대해 상보적이고 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진한다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산은 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 100% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함한다. 추가 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801의 핵염기 서열 (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 질환의 적어도 하나의 증상을 예방, 치료, 개선 또는 감소시키는 방법을 제공하고, 이 방법은 상기 동물에게 12 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고 ApoCIII 핵산에 대해 상보적인 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산은 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 100% 상보적이다. 추가 구현예에서, 동물에게 투여된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여 심혈관 질환의 적어도 하나의 증상을 예방, 치료, 개선 또는 감소시킨다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함한다. 추가 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801 (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함한다.
추가 구현예에서, 심혈관 질환의 증상은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 협심증; 가슴 통증; 숨가쁨; 심계항진; 약화; 현기증; 메스꺼움; 땀흘리기; 빈맥; 서맥; 부정맥; 심방세동; 하지의 팽윤; 청색증; 피로; 실신; 얼굴의 저림; 팔다리의 저림; 근육의 파행 또는 경련; 복부의 팽만; 또는 열.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에게 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성된 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 상기 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 상승시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공한다. 추가 구현예는 동물에게 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성된 화합물을 투여함으로써, 상기 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여, 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상 중 적어도 하나의 증상을 예방, 치료, 개선 또는 감소시키는 방법을 제공한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에게 ISIS 304801의 핵염기 서열 (서열번호: 3)으로 구성된 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 상기 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 상승시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공한다. 추가 구현예는 동물에게 ISIS 304801의 핵염기 서열 (서열번호: 3)로 구성된 화합물을 투여함으로써, 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여, 상기 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상 중 적어도 하나의 증상을 예방, 치료, 개선 또는 감소시키는 방법을 제공한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에게 ISIS 304801의 서열 (서열번호: 3)을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 상기 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 상승시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기: (i) 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절; (ii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절; (iii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하고, 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에게 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 상기 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상 중 적어도 하나의 증상을 예방, 지연, 치료, 개선 또는 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 화합물의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기: (i) 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절; (ii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절; (iii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하고, 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에게 ISIS 304801의 서열 (서열번호: 3)을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여, 상기 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상 중 적어도 하나의 증상을 예방, 지연, 치료, 개선 또는 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 화합물의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기: (i) 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절; (ii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절; (iii) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하고, 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
어떤 구현예는 동물에게 12 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 투여하여 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 상기 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 상승시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 방법을 제공하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII 핵산에 대해 상보적이다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산은 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에게 12 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오타이드의 치료적으로 효과적인 양을 포함하는 화합물을 투여하여, 상기 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상 중 적어도 하나의 증상을 예방, 지연, 치료, 개선 또는 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ApoCIII 핵산에 대해 상보적이고, 동물에서 TG 수준을 감소시키고/시키거나 HDL 수준을 상승시킨다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산은 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
어떤 구현예에서, 동물은 인간이다.
어떤 구현예에서, 심혈관 질환은 동맥류, 협심증, 부정맥, 죽상동맥경화증, 뇌혈관 질환, 관상동맥 심장병, 고혈압, 이상지질혈증, 고지혈증, 초고트리글리세라이드혈증 또는 고콜레스테롤혈증이다. 어떤 구현예에서, 이상지질혈증은 초고트리글리세라이드혈증 또는 카일로마이크론혈증 (예를 들면, FCS)이다. 어떤 구현예에서, 대사성 질환은 당뇨병, 비만 또는 대사성 증후군이다.
어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물은, 췌장염의 위험이 있다. 어떤 구현예에서, 간 및/또는 작은 창자에서 ApoCIII 수준을 감소시키면 췌장염이 예방된다. 어떤 구현예에서, TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 상승시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하면 췌장염이 예방된다.
어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물의 간 및/또는 작은 창자에서 ApoCIII 수준을 감소시키면 식후의 TG의 청소능이 향상된다. 어떤 구현예에서, HDL 수준을 상승시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하면 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 식후의 TG의 청소능이 향상된다. 어떤 구현예에서, 간 및/또는 작은 창자에서 ApoCIII 수준을 감소시키면 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 식후의 트리글리세라이드가 저하된다. 어떤 구현예에서, HDL 수준을 상승시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하면 식후의 TG가 저하된다.
어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물의 간 및/또는 작은 창자에서 ApoCIII 수준을 감소시키면 HDL 대 TG의 비가 증진된다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 비경구로 투여된다. 추가 구현예에서, 비경구 투여는 피하이다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 제 2 제제 또는 요법과 함께 공-투여된다. 어떤 구현예에서, 제 2 제제는 ApoCIII 저하제, Apo C-II 저하제, DGAT1 저하제, LPL 상승제, 콜레스테롤 저하제, 비-HDL 지질 저하제, LDL 저하제, TG 저하제, 콜레스테롤 저하제, HDL 상승제, 어유, 니아신 (니코틴산), 피브레이트, 스타틴, DCCR (디아족사이드의 염), 글루코오스-저하제 또는 항-당뇨제이다. 어떤 구현예에서, 제 2 요법은 식이 지방 제한이다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 저하제는 제 1 제제, 피브레이트 또는 Apo B 안티센스 올리고뉴클레오타이드와는 상이한 ApoCIII 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, DGAT1 저하제는 LCQ908이다.
어떤 구현예에서, LPL 상승제는 LPL의 수준을 상승시키는 유전자 요법제를 포함한다 (예를 들면, GlyberaR, ApoC-II의 정상적인 복제물, GPIHBP1, APOA5, LMF1 또는, 돌연변이될 때, 기능이상 LPL으로 될 수 있는 다른 유전자).
어떤 구현예에서, 글루코오스-저하 및/또는 항-당뇨제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: PPAR 작용제, 디펩티딜 펩티다아제 (IV) 억제제, GLP-1 유사체, 인슐린 또는 인슐린 유사체, 인슐린 분비촉진제, SGLT2 억제제, 인간 아밀린 유사체, 바이구아나이드, 알파-글루코시다제 억제제, 메트포르민, 설포닐우레아, 로시글리타존, 메글리티나이드, 티아졸리딘디온, 알파-글루코시다제 억제제 등. 설포닐우레아는 아세토헥사마이드, 클로르프로파마이드, 톨부타마이드, 톨라자마이드, 글리메피라이드, 글리피자이드, 글리부라이드, 또는 글리클라자이드일 수 있다. 메글리티나이드는 나테글리나이드 또는 레파글리나이드일 수 있다. 티아졸리딘디온 피오글리타존 또는 로시글리타존일 수 있다. 알파-글루코시다제는 아카르보스 또는 미글리톨일 수 있다.
어떤 구현예에서, 콜레스테롤 또는 지질 저하제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 스타틴, 담즙산 봉쇄제, 니코틴산 및 피브레이트. 스타틴은 아토르바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 및 심바스타틴 등일 수 있다. 담즙산 봉쇄제는 콜레세벨람, 콜레스티라민, 콜레스티폴 등일 수 있다. 피브레이트는 젬피브로질, 페노파이브레이트, 클로파이브레이트 등일 수 있다. 치료적 생활방식 변화는 식이 지방 제한일 수 있다.
어떤 구현예에서, HDL 증가제는 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 (CETP) 억제 약물 (예컨대 토르세트라핍), 페록시솜 증식 활성화된 수용체 작용제, 아포-A1, 피오글리타존 등을 포함한다.
어떤 구현예에서, 화합물 및 제 2 제제는 동시에 또는 순차적으로 투여된다.
어떤 구현예에서, 본 화합물은 염 형태이다. 추가 구현예에서, 본 화합물은 추가로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 치료, 예방, 지연 또는 개선하는 약제의 제조에서 사용하기 위한, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물을 제공한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 ApoCIII 수준을 증가시키는 약제의 제조에서의, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 수준은 간 또는 작은 창자에서 줄어든다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는 약제의 제조에서의, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여 심혈관 또는 대사성 질환 중 적어도 하나의 증상을 예방, 치료, 개선 또는 감소시키는 약제의 제조에서의, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 췌장염의 위험이 있거나, 그것을 가지고 있는, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물을 치료하는 약제의 제조에서의, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예에서, 약제의 제조에 사용된 ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII의 발현을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 소분자 또는 다른 제제이다. 어떤 구현예에서, 핵산은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801 (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 치료, 예방, 지연 또는 개선하는데 사용하기 위한 ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물을 제공한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 ApoCIII 수준을 감소시키는, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 수준은 간 또는 작은 창자에서 줄어든다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하는, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 수준을 감소시키고, HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하여 심혈관 질환의 적어도 하나의 증상을 예방, 치료, 개선 또는 감소시키는, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 췌장염의 위험이 있거나 그것을 가지고 있는, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물을 치료하기 위한, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예에서, 사용된 ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII의 발현을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 소분자 또는 다른 제제이다. 어떤 구현예에서, 핵산은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801 (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
어떤 구현예는 하기에서 사용하기 위한, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 조성물을 제공한다: 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 수준을 감소시킴; 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진함; 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선함; 및/또는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선함. 어떤 구현예에서, ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII의 발현을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 소분자 또는 다른 제제이다. 어떤 구현예에서, 핵산은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801 (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
어떤 구현예는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 TG 수준을 감소시키고; 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 HDL 수준을 증가시키고/시키거나 TG 대 HDL의 비를 증진하고, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 심혈관 및/또는 대사성 질환, 장애, 병태, 또는 그것의 증상을 지연 또는 개선하고/하거나; 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 동물에서 췌장염, 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 조성물을 제공하고, 이 조성물은 ApoCIII 특이적 억제제를 포함한다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 특이적 억제제는 ApoCIII의 발현을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 소분자 또는 다른 제제이다. 어떤 구현예에서, 핵산은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 ApoCIII를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 ISIS 304801 (서열번호: 3)의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 100% 상보적이다.
안티센스 화합물
올리고머 화합물은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 올리고뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오사이드, 올리고뉴클레오타이드 유사체, 올리고뉴클레오타이드 모방체, 안티센스 화합물, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 siRNA. 올리고머 화합물은 표적 핵산에 대해 "안티센스"일 수 있고, 이것은 표적 핵산에 수소 결합을 통해 하이브리드화할 수 있음을 의미한다.
본원에서 제공된 안티센스 화합물은 표적 핵산에 수소 결합을 통해 하이브리드화할 수 있는 올리고머 화합물을 나타낸다. 안티센스 화합물의 예는 단일-가닥 및 이중-가닥 화합물, 예컨대, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, 및 miRNA를 포함한다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은, 5'에서 3' 방향으로 쓰여질 때, 표적화된 표적 핵산의 표적 분절의 역 상보(reverse complement)를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 5'에서 3' 방향으로 쓰여질 때, 표적화된 표적 핵산의 표적 분절의 역 상보를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물은 12 내지 30개의 뉴클레오타이드 길이를 갖는다. 환언하면, 안티센스 화합물은 12 내지 30개의 연결된 핵염기를 갖는다. 다른 구현예에서, 안티센스 화합물은 8 내지 80, 10 내지 80, 12 내지 50, 15 내지 30, 18 내지 24, 19 내지 22, 또는 20개의 연결된 핵염기로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 안티센스 화합물은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80개의 연결된 핵염기 길이로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드, 또는 상기 값들 중 어느 2개에 의해 규정된 범위의 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 단축된 또는 끝이 잘린 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 단축된 또는 끝이 잘린 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5' 말단에서 결실된 1 이상의 뉴클레오사이드 (5' 절단), 3' 말단에서 결실된 1 이상의 뉴클레오사이드 (3' 절단) 또는 중심부에서 결실된 1 이상의 뉴클레오사이드를 가질 수 있다. 대안적으로, 결실된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 5' 말단에서 결실된 하나의 뉴클레오사이드 및 3' 말단에서 결실된 하나의 뉴클레오사이드를 갖는 안티센스 화합물에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드 전체에 걸쳐서 분산될 수 있다.
단일 추가의 뉴클레오사이드가 늘어난 올리고뉴클레오타이드에 존재하는 경우, 추가의 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 중심부, 5' 또는 3' 말단에 위치할 수 있다. 2개 이상의 추가의 뉴클레오사이드가 존재하는 경우, 부가된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 올리고뉴클레오타이드의 중심부에, 5' 말단에 (5' 부가), 또는 대안적으로 3' 말단에 (3' 부가) 부가된 2개의 뉴클레오사이드를 갖는 올리고뉴클레오타이드에서, 서로 인접할 수 있다. 대안적으로, 부가된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 5' 말단에 부가된 하나의 뉴클레오사이드 및 3' 말단에 부가된 하나의 소단위를 갖는 올리고뉴클레오타이드에서, 안티센스 화합물 전체에 걸쳐서 분산될 수 있다.
안티센스 화합물, 예컨대 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 길이를 증가시키거나 감소시키고/시키거나 활성을 없애지 않고 미스매치 염기를 도입하는 것이 가능하다. 예를 들면, 문헌(Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992))에서, 13-25개 핵염기 길이의 일련의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 난모세포 주사 모델에서 표적 RNA의 절단을 유도하는 그것의 능력에 대해 시험했다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 말단들 근처에서 8 또는 11개의 미스매치 염기를 갖는 25개의 핵염기 길이의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 미스매치가 없는 안티센스 올리고뉴클레오타이드보다는 적더라도, 표적 mRNA의 특이적 절단을 유도할 수 있었다. 유사하게, 표적 특이적 절단은 1 또는 3개의 미스매치를 갖는 것들을 포함하는, 13개의 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 달성되었다.
Gautschi 등 (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001)은, bcl-2 mRNA에 100% 상보성을 갖고 bcl-xL mRNA에 3개의 미스매치를 갖는 올리고뉴클레오타이드의, bcl-2 및 bcl-xL 모두의 시험관내 및 생체내 발현을 감소시키는 능력을 실증했다. 더욱이, 이 올리고뉴클레오타이드는 생체내 강력한 항종양 활성을 실증했다.
Maher 및 Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988)은, 일련의 탠덤 14개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 각각 2개 또는 3개의 상기 탠덤 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 서열로 구성된 28개 및 42개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드를, 토끼 망상적혈구 검정에서 인간 DHFR의 번역을 정지시키는 이들의 능력에 대해 시험했다. 각각의 3개의 14개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 단독으로, 28개 또는 42개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오타이드보다는 더 많지 않은 수준이지만, 번역을 억제할 수 있었다.
안티센스 화합물 모티프
어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물은 패턴, 또는 모티프에 배열된 화학적으로 변형된 소단위를 가져서 안티센스 화합물에게 증대된 억제 활성, 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화도, 또는 생체내 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 저항성과 같은 특성을 부여한다.
키메라 안티센스 화합물은 전형적으로 변형된 적어도 하나의 영역을 포함하여서 뉴클레아제 분해에 대한 증가된 저항성, 증가된 세포성 흡수, 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화도, 및/또는 증가된 억제 활성을 부여한다. 키메라 안티센스 화합물의 제 2 영역은 임의로 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포성 엔도뉴클레아제 RNase H에 대한 기질의 역할을 할 수 있다.
갭머 모티프를 갖는 안티센스 화합물은 키메라 안티센스 화합물로 여겨진다. 갭머에서, RNase H 절단을 돕는 복수의 뉴클레오타이드를 갖는 내부 영역은 내부 영역의 뉴클레오사이드와 화학적으로 뚜렷이 다른 복수의 뉴클레오타이드를 갖는 외부 영역들 사이에 배치된다. 갭머 모티프를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 경우에, 갭 분절은 일반적으로 엔도뉴클레아제 절단을 위한 기질의 역할을 하며, 한편 윙 분절은 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 갭머 영역은 각각의 뚜렷이 다른 영역을 포함하는 당 모이어티의 유형에 의해 식별된다. 갭머의 영역을 식별하는데 사용되는 당 모이어티의 유형은 일부 구현예에서 β-D-리보뉴클레오사이드, β-D-데옥시리보뉴클레오사이드, 2'-변형된 뉴클레오사이드 (그와 같은 2'-변형된 뉴클레오사이드는 그 중에서도 2'-MOE, 및 2'-O-CH3을 포함할 수 있다), 및 2환식 당 변형된 뉴클레오사이드 (그와 같은 2환식 당 변형된 뉴클레오사이드는 4'-(CH2)n-O-2'브릿지를 갖는 것들을 포함할 수 있으며, 여기서 n=1 또는 n=2이다)를 포함한다. 바람직하게는, 각각의 뚜렷이 다른 영역은 균일한 당 모이어티를 포함한다. 윙-갭-윙 모티프는 "X-Y-Z"로 자주 기재되며, 여기서 "X"는 5' 윙 영역의 길이를 나타내고, "Y"는 갭 영역의 길이를 나타내며, "Z"는 3' 윙 영역의 길이를 나타낸다. 본원에서 사용된 바와 같이, "X-Y-Z"로 기재된 갭머는, 갭 분절이 각각의 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하게 배치되도록 하는 입체배치를 갖는다. 따라서, 5' 윙 분절 및 갭 분절 사이에, 또는 갭 분절 및 3' 윙 분절 사이에 간섭 뉴클레오타이드가 존재하지 않는다. 본원에서 기재된 안티센스 화합물 중 어느 것은 갭머 모티프를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, X 및 Z는 동일하고; 다른 구현예에서 이들은 상이하다. 바람직한 구현예에서, Y는 8 내지 15개의 뉴클레오타이드이다. X, Y 또는 Z는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30개 또는 그 초과의 뉴클레오타이드 중 어느 것일 수 있다. 따라서, 갭머는, 비제한적으로, 예를 들면 하기를 포함한다: 5-10-5, 4-8-4, 4-12-3, 4-12-4, 3-14-3, 2-13-5, 2-16-2, 1-18-1, 3-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 2-8-2, 6-8-6, 5-8-5, 1-8-1, 2-6-2, 2-13-2, 1-8-2, 2-8-3, 3-10-2, 1-18-2 또는 2-18-2.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 윙-갭 또는 갭-윙 입체배치, 즉 갭머 입체배치에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 X-Y 또는 Y-Z 입체배치를 갖는 "윙머(wingmer)" 모티프로 기재된다. 따라서, 윙머 입체배치는, 비제한적으로, 예를 들면 하기를 포함한다: 5-10, 8-4, 4-12, 12-4, 3-14, 16-2, 18-1, 10-3, 2-10, 1-10, 8-2, 2-13 또는 5-13.
어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물은 5-10-5 갭머 모티프를 보유한다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물은 갭-확장된 모티프를 갖는다.
표적 핵산, 표적 영역 및 뉴클레오타이드 서열
ApoCIII을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 유전자은행 수납 번호 NM_000040.1 (서열번호: 1로서 본원에 편입됨), 뉴클레오타이드 20262640 내지 20266603으로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_033899.8 (서열번호: 2로서 본원에 편입됨) 및 뉴클레오타이드 6238608 내지 6242565로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_035088.1 (서열번호: 4로서 본원에 편입됨).
본원에 포함된 실시예에서 각 서열번호에 기재된 서열은 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 연결, 또는 핵염기에 대한 임의의 변형과 독립적인 것으로 이해된다. 이와 같이, 서열번호에 의해 규정된 안티센스 화합물은, 독립적으로, 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 연결, 또는 핵염기에 대한 1 이상의 변형을 포함할 수 있다. Isis 번호 (Isis No)로 기재된 안티센스 화합물은 핵염기 서열 및 모티프의 조합을 나타낸다.
어떤 구현예에서, 표적 영역은 표적 핵산의 구조적으로 규정된 영역이다. 예를 들면, 표적 영역은 3' UTR, 5' UTR, 엑손, 인트론, 엑손/인트론 접합부, 코딩 영역, 번역 개시 영역, 번역 종료 영역, 또는 다른 규정된 핵산 영역을 포함할 수 있다. ApoCIII에 대한 구조적으로 규정된 영역은 서열 데이타베이스 예컨대 NCBI로부터 수납 번호에 의해 수득될 수 있으며 그와 같은 정보는 본원에 참고로 편입되어 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 표적 영역 내의 하나의 표적 분절의 5' 표적 부위로부터 표적 영역 내의 또 하나의 표적 분절의 3' 표적 부위까지의 서열을 포함할 수 있다.
어떤 구현예에서, "표적 분절"은 핵산 내의 표적 영역의 더 작은, 하위-부위이다. 예를 들면, 표적 분절은 1 이상의 안티센스 화합물이 표적화된 표적 핵산의 뉴클레오타이드 서열일 수 있다. "5' 표적 부위"는 표적 분절의 5'-최말단 뉴클레오타이드를 나타낸다. "3' 표적 부위"는 표적 분절의 3'-최말단 뉴클레오타이드를 나타낸다.
표적 영역은 1 이상의 표적 분절을 함유할 수 있다. 표적 영역 내의 다중 표적 분절은 중첩될 수 있다. 대안적으로, 이들은 비-중첩될 수 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 약 300 뉴클레오타이드 이하만큼 분리된다. 어떤 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 수많은 뉴클레오타이드만큼 분리되며, 즉, 표적 핵산 상에서 약 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 또는 10개의 뉴클레오타이드, 이들 각각의 갯수의 뉴클레오타이드 이하, 약 이들 각각의 갯수의 뉴클레오타이드 이하이거나, 이전의 값들 중 어느 2개에 의해 규정된 범위이다. 어떤 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 표적 핵산 상에서 5개의 뉴클레오타이드 이하, 또는 약 5개의 뉴클레오타이드 이하만큼 분리된다. 어떤 구현예에서, 표적 분절은 인접하다. 본원에서 열거된 5' 표적 부위 또는 3' 표적 부위 중 어느 것인 개시 핵산을 갖는 범위에 의해 규정된 표적 영역이 고려된다.
표적화는 원하는 효과가 일어나도록 안티센스 화합물이 하이브리드화되는 적어도 하나의 표적 분절의 결정을 포함한다. 어떤 구현예에서, 원하는 효과는 mRNA 표적 핵산 수준의 감소이다. 어떤 구현예에서, 원하는 효과는 표적 핵산에 의해 인코딩된 단백질 수준의 감소 또는 표적 핵산과 연관된 표현형 변화이다.
적합한 표적 분절은 5' UTR, 코딩 영역, 3' UTR, 인트론, 엑손, 또는 엑손/인트론 접합부 내에서 발견될 수 있다. 시작 코돈 또는 정지 코돈을 포함하는 표적 분절이 또한 적합한 표적 분절이다. 적합한 표적 분절은 특이적으로 어떤 구조적으로 규정된 영역 예컨대 시작 코돈 또는 정지 코돈을 제외할 수 있다.
적합한 표적 분절의 결정은 게놈 전체에 걸쳐 표적 핵산 서열의 다른 서열과의 비교를 포함할 수 있다. 예를 들면, BLAST 알고리즘은 상이한 핵산 사이의 유사성 영역을 확인하는데 사용될 수 있다. 이 비교는 선택된 표적 핵산 이외의 서열 (즉, 비-표적 또는 표적이탈 서열)에 비-특이적 방식으로 하이브리드화할 수 있는 안티센스 화합물 서열의 선택을 방지할 수 있다.
활성 표적 영역 내에서 안티센스 화합물의 활성의 변화가 (예를 들면, 표적 핵산 수준의 퍼센트 감소에 의해 규정된 바와 같이) 일어날 수 있다. 어떤 구현예에서, ApoCIII mRNA 수준의 감소는 ApoCIII 발현의 억제를 가리킨다. ApoCIII 단백질 수준의 감소는 표적 mRNA 발현의 억제를 가리킬 수 있다. 게다가, 표현형 변화는 ApoCIII 발현의 억제를 가리킬 수 있다. 예를 들면, HDL 수준의 증가, LDL 수준의 감소, 또는 TG 수준의 감소는 ApoCIII 발현의 억제에 대해 검정될 수 있는 표현형 변화들 중 하나다. 다른 표현형 징후는, 예를 들면, 심혈관 또는 대사성 질환과 연관된 증상이 또한 평가될 수 있으며; 예를 들면, 협심증; 가슴 통증; 숨가쁨; 심계항진; 약화; 현기증; 메스꺼움; 땀흘리기; 빈맥; 서맥; 부정맥; 심방 세동; 하지의 팽윤; 청색증; 피로; 실신; 얼굴의 저림; 팔다리의 저림; 근육의 파행 또는 경련; 복부의 팽만; 또는 열이다.
하이브리드화
일부 구현예에서, 하이브리드화는 본원에 개시된 안티센스 화합물과 ApoCIII 핵산 사이에서 일어난다. 하이브리드화의 가장 공통인 기전은 핵산 분자들의 상보적 핵염기들 사이의 수소 결합 (예를 들면, 왓슨-크릭(Watson-Crick), 휴그스틴(Hoogsteen) 또는 역전된 휴그스틴 수소 결합)을 수반한다.
하이브리드화는 다양한 조건하에서 일어날 수 있다. 엄격한 조건은 서열-의존적이며 하이브리드화되는 핵산 분자의 성질 및 조성에 의해 결정된다.
서열이 표적 핵산에 특이적으로 하이브리드화 가능여부를 결정하는 방법은 당해기술에 잘 알려져 있다 (Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001, CSHL Press). 어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물은 ApoCIII 핵산과 특이적으로 하이브리드화 가능하다.
상보성
안티센스 화합물 및 표적 핵산은, 충분한 수의 안티센스 화합물의 핵염기가 상응하는 표적 핵산의 핵염기와 수소 결합할 수 있을 때 서로 상보적이어서 원하는 효과가 일어나게 될 것이다 (예를 들면, 표적 핵산, 예컨대 ApoCIII 핵산의 안티센스 억제).
안티센스 화합물은 ApoCIII 핵산의 하나 이상의 분절에 대해 하이브리드화할 수 있어서 간섭 또는 인접 분절들이 하이브리드화 사건에 포함되지 못한다 (예를 들면, 루프 구조, 미스매치 또는 헤어핀 구조).
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물, 또는 그의 명시된 부분은, ApoCIII 핵산, 표적 영역, 표적 분절, 또는 이들의 명시된 부분에 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 상보적이거나 적어도 이들 각각의 퍼센트로 상보적이다. 안티센스 화합물의 표적 핵산과의 퍼센트 상보성은 일상적인 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
예를 들면, 안티센스 화합물의 20개 핵염기 중 18개가 표적 영역에 상보적이고 따라서 특이적으로 하이브리드화할 안티센스 화합물은, 90 퍼센트 상보성을 나타낼 것이다. 이 예시에서, 잔여 비-상보적 핵염기는 군집 형태를 이루거나 상보적 핵염기들 사이에 배치될 수 있고 서로 또는 상보적 핵염기에 인접할 필요는 없다. 이와 같이, 2개의 표적 핵산과의 완전한 상보성 영역의 측면에 배치된 4개 (네개)의 비-상보적 핵염기를 갖는 18개의 핵염기 길이의 안티센스 화합물은 표적 핵산과 77.8% 전체 상보성을 가질 것이며 따라서 본 발명의 범위 내에 속할 것이다. 안티센스 화합물의 표적 핵산의 영역과의 퍼센트 상보성은 당해기술에 공지된 BLAST 프로그램 (basic local alignment search tools) 및 파워BLAST 프로그램을 사용하여 일상적으로 결정될 수 있다 (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). 퍼센트 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은, 예를 들면, 스미스 앤드 워터맨(Smith and Waterman) 알고리즘을 사용하는, 디폴트 세팅을 사용하여 Gap 프로그램 (위스콘신 서열 분석 패키지, 유닉스용 버전 8, 유전학 컴퓨터 그룹, 대학 연구 단지, Madison Wis.)에 의해 결정될 수 있다 (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482-489).
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물, 또는 그것의 명시된 부분은, 표적 핵산, 또는 그것의 명시된 부분에 완전히 상보적 (즉 100% 상보적)이다. 예를 들면, 안티센스 화합물은 ApoCIII 핵산, 또는 그의 표적 영역, 또는 표적 분절 또는 표적 서열에 완전히 상보적일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "완전히 상보적"은 안티센스 화합물의 각 핵염기가 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 정확한 염기 짝짓기를 할 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 20개의 핵염기 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물에 완전히 상보적인 상응하는 20개의 표적 핵산의 핵염기 부분이 존재하는 한, 400개의 핵염기 길이의 표적 서열과 완전히 상보적이다. 완전히 상보적은 또한 제 1 핵산 및/또는 제 2 핵산의 명시된 부분과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들면, 30개의 핵염기 안티센스 화합물 중 20개의 핵염기 부분은 400개 핵염기 길이의 표적 서열에 "완전히 상보적"일 수 있다. 30개의 핵염기 올리고뉴클레오타이드 중 20개의 핵염기 부분은, 표적 서열이 상응하는 20개의 핵염기 부분을 갖는다면 표적 서열에 완전히 상보적이며, 여기서 각 핵염기는 안티센스 화합물의 20개의 핵염기 부분에 상보적이다. 동시에, 전체 30개의 핵염기 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물의 잔여 10개의 핵염기가 또한 표적 서열에 상보적인지의 여부에 따라, 표적 서열에 완전히 상보적일 수 있거나 완전히 상보적이지 않을 수 있다.
비-상보적 핵염기(들)의 위치는 안티센스 화합물의 5' 말단 또는 3' 말단에 위치할 수 있다. 대안적으로, 비-상보적 핵염기(들)는 안티센스 화합물의 내부 위치에 있을 수 있다. 2개 이상의 비-상보적 핵염기가 존재하는 경우, 이들은 인접할 수 있거나 (즉, 연결됨) 비-인접할 수 있다. 일 구현예에서, 비-상보적 핵염기는 갭머 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 윙 분절에 위치한다.
어떤 구현예에서, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 핵염기 길이이거나 최대 이들 각각의 갯수의 핵염기 길이인 안티센스 화합물은, 표적 핵산, 예컨대 ApoCIII 핵산, 또는 그것의 명시된 부분에 대해 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 비-상보적 핵염기(들)를 포함한다.
어떤 구현예에서, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 핵염기 길이이거나 최대 이들 각각의 갯수의 핵염기 길이인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 예컨대 ApoCIII 핵산, 또는 그것의 명시된 부분에 대해 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 비-상보적 핵염기(들)를 포함한다.
본원에서 제공된 안티센스 화합물은 또한 표적 핵산의 일부에 상보적인 것들을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "부분"은 표적 핵산의 영역 또는 분절 내의 규정된 수의 인접 (즉, 연결된) 핵염기를 나타낸다. "부분"은 또한 규정된 수의 안티센스 화합물의 인접 핵염기를 나타낼 수 있다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 8개의 핵염기 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 10개의 핵염기 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 12개의 핵염기 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 15개의 핵염기 부분에 상보적이다. 표적 분절의 적어도 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 그 초과의 핵염기 부분, 또는 이들 값 중 어느 2개에 의해 규정된 범위에 상보적인 안티센스 화합물이 또한 고려된다.
동일성
본원에서 제공된 안티센스 화합물은 또한 특정한 뉴클레오타이드 서열, 서열번호, 또는 특이적 Isis 번호로 기재된 화합물의 서열, 또는 그것의 부분에 대해 규정된 퍼센트 동일성을 가질 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 안티센스 화합물은, 그것이 동일한 핵염기 짝짓기 능력을 갖는다면, 본원에 개시된 서열과 동일하다. 예를 들면, 개시된 DNA 서열에서 티미딘 대신에 우라실을 포함하는 RNA는, 우라실 및 티미딘 모두가 아데닌과 쌍을 이루기 때문에 DNA 서열에 대해 동일한 것으로 여겨질 것이다. 본원에서 기재된 안티센스 화합물의 단축된 그리고 늘어난 버전 뿐만 아니라 본원에서 제공된 안티센스 화합물에 대해 비-동일한 염기를 갖는 화합물도 또한 고려된다. 비-동일한 염기는 서로 인접하거나 안티센스 화합물 전체에 걸쳐 분산될 수 있다. 안티센스 화합물의 퍼센트 동일성은 비교될 서열에 대해 동일한 염기 짝짓기를 갖는 염기의 수에 따라서 계산된다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물, 또는 그것의 부분은, 본원에 개시된 안티센스 화합물 또는 서열번호, 또는 그것의 부분 중 1 이상에 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다.
변형
뉴클레오사이드는 염기-당 조합이다. 뉴클레오사이드의 핵염기 (염기로도 공지됨) 부분은 보통 복소환식 염기 모이어티이다. 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드의 당부에 공유 결합된 포스페이트 그룹을 추가로 포함하는 뉴클레오사이드이다. 펜토푸라노실 당을 포함하는 뉴클레오사이드의 경우, 포스페이트 그룹은 당의 2', 3' 또는 5' 하이드록실 모이어티에 연결될 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 선형 폴리머 올리고뉴클레오타이드를 형성하기 위해 서로 인접한 뉴클레오사이드의 공유 결합을 통해 형성된다. 올리고뉴클레오타이드 구조 내에서, 포스페이트 그룹은 통상적으로 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 연결을 형성한다고 지칭된다.
안티센스 화합물의 변형은 뉴클레오사이드간 연결, 당 모이어티, 또는 핵염기에 대한 치환 또는 변화를 포함한다. 변형된 안티센스 화합물은 흔히, 바람직한 특성 예컨대, 증대된 세포 흡수, 증대된 핵산 표적에 대한 친화성, 뉴클레아제의 존재 하에서 증가된 안정성, 또는 증가된 억제 활성 때문에 원상태 형태에 비해 바람직하다.
화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 또한 그것의 표적 핵산에 대해 단축된 또는 끝이 잘린 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 결합 친화도를 증가시키는데 이용될 수 있다. 결과적으로, 비교할만한 결과가 그와 같은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 갖는 더 짧은 안티센스 화합물에 의해 흔히 수득될 수 있다.
변형된 뉴클레오사이드간 연결
RNA 및 DNA의 천연 발생 뉴클레오사이드간 연결은 3' 내지 5' 포스포디에스테르 연결이다. 1 이상의 변형된, 즉 비-천연 발생, 뉴클레오사이드간 연결을 갖는 안티센스 화합물은, 바람직한 특성 예컨대, 증대된 세포성 흡수, 표적 핵산에 대한 증대된 친화성, 및 뉴클레아제의 존재에서의 증가된 안정성 때문에 천연 발생 뉴클레오사이드간 연결을 갖는 안틴센스 화합물을 넘어서 종종 선택된다.
변형된 뉴클레오사이드간 연결을 갖는 올리고뉴클레오타이드는 인 원자를 보유하는 뉴클레오사이드간 연결 뿐만 아니라 인 원자를 갖지 않는 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 대표적인 인 함유 뉴클레오사이드간 연결은, 비제한적으로, 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트, 및 포스포로티오에이트를 포함한다. 인-함유 및 비-인-함유 연결의 제조 방법은 잘 알려져 있다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물은 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
변형된 당 모이어티
본 발명의 안티센스 화합물은 1 이상의 뉴클레오사이드를 임의로 함유할 수 있고, 상기 당 그룹은 변형되었다. 그와 같은 당 변형된 뉴클레오사이드는 증대된 뉴클레아제 안정성, 증가된 결합 친화도, 또는 안티센스 화합물에 대한 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 부여할 수 있다. 어떤 구현예에서, 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 리보푸라노스 고리 모이어티를 포함한다. 화학적으로 변형된 리보푸라노스 고리의 예는 비제한적으로, (5' 및 2' 치환체 그룹을 포함하는) 치환체 그룹의 부가, 2환식 핵산 (BNA)를 형성하도록 비-제미널(geminal) 고리 원자의 브릿징, 리보실 고리 산소 원자의 S, N(R), 또는 C(R1)(R2) (R, R1 및 R2 각각은 독립적으로 H, C1-C12 알킬 또는 보호 그룹임)에 의한 교체 및 이들의 조합을 포함한다. 화학적으로 변형된 당류의 예는 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오사이드 (참고, 다른 개시된 5',2'-비스 치환된 뉴클레오사이드에 대한 PCT 국제 출원 WO 2008/101157(8/21/08 공개)) 또는 2'-위치에서의 추가 치환(참고, 공개된 미국 특허 출원 US2005-0130923(2005년 6월 16일 공개)) 또는 대안적으로 BNA의 5'-치환 (참고, PCT 국제 출원 WO 2007/134181(11/22/07 공개), 여기서 LNA는 예를 들면 5'-메틸 또는 5'-비닐 그룹으로 치환됨)과 함께 S에 의한 리보실 고리 산소 원자의 교체를 포함한다.
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오사이드의 예는 5'-비닐, 5'-메틸 (R 또는 S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2'-OCH2CH3, 2'-OCH2CH2F 및 2'-O(CH2)2OCH3 치환체 그룹을 포함하는 뉴클레오사이드를 비제한적으로 포함한다. 2' 위치에 있는 치환체는 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), 및 O-CH2-C(=O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn)로부터 또한 선택될 수 있고, 여기서 각각의 Rl, Rm 및 Rn는, 독립적으로, H 또는 치환 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "2환식 뉴클레오사이드"는 2환식 당 모이어티를 포함하는 변형된 뉴클레오사이드를 의미한다. 2환식 핵산 (BNA)의 예는 4'와 2' 리보실 고리 원자 사이에 브릿지를 포함하는 뉴클레오사이드를 비제한적으로 포함한다. 어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 안티센스 화합물은 1 이상의 BNA 뉴클레오사이드를 포함하고, 상기 브릿지는 하기 식 중 하나를 포함한다: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' (및 그것의 유사체, 참고 U.S. 특허 7,399,845(2008년 7월 15일 발행)); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (및 그것의 유사체, 참고, WO/2009/006478(2009년 1월 8일 공개)로 공개된 PCT/US2008/068922); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (및 그것의 유사체, 참고 WO/2008/150729(2008년 12월 11일 공개)로 공개된 PCT/US2008/064591); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (참고, 공개된 미국 특허 출원 US2004-0171570(2004년 9월 2일 공개)); 4'-CH2-N(R)-O-2' (여기서 R는 H, C1-C12 알킬, 또는 보호 그룹임, 참고 U.S. 특허 7,427,672(2008년 9월 23일 발행)); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (참고 Chattopadhyaya 등, J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); 및 4'-CH2-C(=CH2)-2' (및 그것의 유사체, 참고 WO 2008/154401(2008년 12월 8일 공개)로 공개된 PCT/US2008/066154).
추가의 2환식 뉴클레오사이드는 공개된 문헌에서 보고되었다 (참고, 예를 들면: Srivastava 등, J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Frieden 등, Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372; Elayadi 등, Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch 등, Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; Orum 등, Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; Wahlestedt 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Singh 등, Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin 등, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Kumar 등, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh 등, J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; 미국 특허들 번호: 7,399,845; 7,053,207; 7,034,133; 6,794,499; 6,770,748; 6,670,461; 6,525,191; 6,268,490; U.S. 특허 공보 번호: US2008-0039618; US2007-0287831; US2004-0171570; 미국 특허 출원, 시리즈 번호: 12/129,154; 61/099,844; 61/097,787; 61/086,231; 61/056,564; 61/026,998; 61/026,995; 60/989,574; 국제 출원 WO 2007/134181; WO 2005/021570; WO 2004/106356; WO 94/14226; 및 PCT 국제 출원 번호: PCT/US2008/068922; PCT/US-2008/-06-6154; 및 PCT/US2008/064591). 예를 들면 α-L-리보푸라노스 및 β-D-리보푸라노스를 포함하는 1 이상의 입체화학적 당 입체배치를 갖는 각각의 전술된 2환식 뉴클레오사이드가 제조될 수 있다 (참고, PCT 국제 출원 PCT/DK98/00393, WO 99/14226로서 1999년 3월 25일 공개됨).
본원에서 사용된 바와 같이, "단환식 뉴클레오사이드"는 2환식 당 모이어티가 아닌 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 어떤 구현예에서, 뉴클레오사이드의 당 모이어티, 또는 당 모이어티 유사체는 임의의 위치에서 변형 또는 치환될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "4'-2' 2환식 뉴클레오사이드" 또는 "4' 내지 2' 2환식 뉴클레오사이드"는, 푸라노스 고리의 2 개의 탄소 원자를 연결하는 브릿지를 포함하는 푸라노스고리를 포함하는 2환식 뉴클레오사이드가 당 고리의 2' 탄소 원자 및 4' 탄소 원자를 연결한다는 것을 의미한다.
어떤 구현예에서, BNA 뉴클레오사이드의 2환식 당 모이어티는, 비제한적으로 펜토푸라노실 당 모이어티의 4' 및 2' 탄소 원자 사이세 적어도 하나의 브릿지를 갖는 화합물을 비제한적으로 포함하고, 상기 브릿지는 -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, 및 -N(Ra)-로부터 독립적으로 선택된 1 또는 1 내지 4 개의 연결된 그룹을 포함한다; 여기서: x는 0, 1, 또는 2이고; n은 1, 2, 3, 또는 4이고; 각각의 Ra 및 Rb는, 독립적으로, H, 보호 그룹, 하이드록실, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, C5-C7 지환식 라디칼, 치환된 C5-C7 지환식 라디칼, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, CN, 설포닐 (S(=O)2-J1), 또는 설폭실 (S(=O)-J1)이고; 그리고
각 J1 및 J2는, 독립적으로, H, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, C1-C12 아미노알킬, 치환된 C1-C12 아미노알킬 또는 보호 그룹이다.
어떤 구현예에서, 2환식 당 모이어티의 브릿지는, -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- 또는 -C(RaRb)-O-N(R)-이다. 어떤 구현예에서, 상기 브릿지는 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' 및 4'-CH2-N(R)-O-2'-이고, 여기서 각각의 R는, 독립적으로, H, 보호 그룹 또는 C1-C12 알킬이다.
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 이성질체 입체배치에 의해 추가로 규정된다. 예를 들면, 4'-(CH2)-O-2' 브릿지를 포함하는 뉴클레오사이드는, α-L 입체배치 또는 β-D 입체배치일 수 있다. 이전에, α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA는 안티센스 활성을 보여준 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 편입되었다 (Frieden 등, Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 4' 내지 2' 브릿지를 갖는 것들을 포함하고, 여기서 그와 같은 브릿지는 비제한적으로, α-L-4'-(CH2)-O-2', β-D-4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2', 4'-CH2-N(R)-O-2', 4'-CH(CH3)-O-2', 4'-CH2-S-2', 4'-CH2-N(R)-2', 4'-CH2-CH(CH3)-2', 및 4'-(CH2)3-2'를 포함하고, 여기서 R는 H, 보호 그룹 또는 C1-C12 알킬이다.
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 아래의 식을 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00001
여기서:
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
-Qa-Qb-Qc-는 -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O- 또는 -N(Rc)-O-CH2이고;
Rc는 C1-C12 알킬 또는 아미노 보호 그룹이고; 그리고
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티 또는 지지 매질(support medium)에 대한 공유 결합이다.
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 아래의 식을 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00002
여기서:
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티 또는 지지 매질에 대한 공유 결합이고;
Za는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1-C6 알킬, 치환된 C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알키닐, 아실, 치환된 아실, 치환된 아미드, 티올 또는 치환된 티올이다.
일 구현예에서, 각각의 상기 치환된 그룹은, 독립적으로, 할로겐, 옥소, 하이드록실, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, 및 NJeC(=X)NJcJd로부터 독립적으로 선택된 치환체 그룹으로 단일 또는 다중 치환되고, 여기서 각 Jc, Jd 및 Je는, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬이고 X는 O 또는 NJc이다.
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 아래의 식을 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00003
여기서:
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티 또는 지지 매질에 대한 공유 결합이고;
Zb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1-C6 알킬, 치환된 C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 치환된 아실 (C(=O)-)이다.
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 아래의 식을 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00004
여기서:
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티 또는 지지 매질에 대한 공유 결합이고;
Rd는 C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
각 qa, qb, qc 및 qd는, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐, C1-C6 알콕실, 치환된 C1-C6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1-C6 아미노알킬 또는 치환된 C1-C6 아미노알킬이다.
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 아래의 식을 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00005
여기서:
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티 또는 지지 매질에 대한 공유 결합이고;
qa, qb , qe 및 qf 각각은, 독립적으로, 수소, 할로겐, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1-C12 알콕시, 치환된 C1-C12 알콕시, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)-NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)-NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이고;
또는 qe 및 qf는 함께 =C(qg)(qh)이고;
qg 및 qh 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12 알킬 또는 치환된 C1-C12 알킬이다.
4'-CH2-O-2' 브릿지를 갖는 아데닌, 시토신, 구아닌, 5-메틸-시토신, 티민 및 우라실 2환식 뉴클레오사이드의, 그것의 올리고머화와 함께 제조 및 합성, 및 핵산 인식 특성이 기재되었다 (Koshkin 등, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). 2환식 뉴클레오사이드의 합성은 WO 98/39352 및 WO 99/14226에서 또한 기재되었다.
4' 내지 2' 브릿징(bridging) 그룹 예컨대 4'-CH2-O-2' 및 4'-CH2-S-2'을 갖는 다양한 2환식 뉴클레오사이드의 유사체가, 또한 기재되었다 (Kumar 등, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). 핵산 중합효소용 치환체로서 사용하기 위한 2환식 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고데옥시리보뉴클레오타이드 듀플렉스의 제조가 또한 기재되었다 (Wengel 등, WO 99/14226). 더욱이, 2'-아미노-BNA, 신규 형태적으로 제한된 고-친화성 올리고뉴클레오타이드 유사체의 합성은 당해기술에서 기재되었다 (Singh 등, J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). 또한, 2'-아미노- 및 2'-메틸아미노-BNA가 제조되었고 상보적 RNA 및 DNA 가닥을 갖는 그것의 듀플렉스의 열적 안정성이 이전에 보고되었다.
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는 아래의 식을 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00006
여기서:
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티 또는 지지 매질에 대한 공유 결합이고;
각 qi, qj, qk 및 ql는, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1-C12 알콕실, 치환된 C1-C12 알콕실, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이고; 그리고
qi 및 qj 또는 ql 및 qk는 함께 =C(qg)(qh)이고, 여기서 qg 및 qh 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12 알킬 또는 치환된 C1-C12 알킬이다.
4'-(CH2)3-2' 브릿지 및 알케닐 유사체 브릿지 4'-CH=CH-CH2-2'를 갖는 하나의 탄소환식 2환식 뉴클레오사이드가 기재되었다 (Frier 등, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 및 Albaek 등, J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). 탄소환식 2환식 뉴클레오사이드의, 그것의 올리고머화와 함께, 합성 및 제조 및 생화학적 연구가 기재되었다 (Srivastava 등, J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).
어떤 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, 이하에서 묘사된 바와 같이 하기를 포함한다: (A) α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, (B) β-D-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, (C) 에틸렌옥시 (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) 아미노옥시 (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (E) 옥시아미노 (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, (F) 메틸(메틸렌옥시) (4'-CH(CH3)-O-2') BNA (또한 일명 구속된 에틸 또는 cEt), (G) 메틸렌-티오 (4'-CH2-S-2') BNA, (H) 메틸렌-아미노 (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) 메틸 탄소환식 (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNA, (J) 프로필렌 탄소환식 (4'-(CH2)3-2') BNA, 및 (K) 비닐 BNA.
Figure 112015085604362-pct00007
여기서 Bx는 염기 모이어티이고 R는, 독립적으로, H, 보호 그룹, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 알콕시이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "변형된 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드" 또는 "변형된 THP 뉴클레오사이드"는 노말 뉴클레오사이드에서 펜토푸라노실 잔기에 대해 치환된 6-원 테트라하이드로피란 "당"를 갖는 뉴클레오사이드를 의미하고 당 대용물로서 또한 불릴 수 있다. 변형된 THP 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, 헥시톨 핵산 (HNA), 아니톨 핵산 (ANA), 마니톨 핵산 (MNA) (참고 Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854) 또는 아래에서 예시된 바와 같은 테트라하이드로피라닐 고리계를 갖는 플루오로 HNA (F-HNA)로서 당해기술에서 언급되는 것들을 포함한다.
Figure 112015085604362-pct00008
어떤 구현예에서, 당 대용물은 하기 식을 갖도록 선택된다:
Figure 112015085604362-pct00009
여기서:
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
T3 및 T4 각각은, 독립적으로, 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 올리고머 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이거나 T3 및 T4 중 하나는 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 올리고머 화합물 또는 올리고뉴클레오타이드에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이고 T3 및 T4 중 다른 것은 H, 하이드록실 보호 그룹, 연결된 콘주게이트 그룹 또는 5' 또는 3'-말단기이고;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 각각은 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고; 그리고
R1 및 R2 중 하나는 수소이고 다른 것은 할로겐, 치환 또는 비치환된 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 및 CN으로부터 선택되고, 여기서 X은 O, S 또는 NJ1이며 그리고 각 J1, J2 및 J3는, 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이다.
어떤 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 각각은 H이다. 어떤 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 H 이외의 것이다. 어떤 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 메틸이다. 어떤 구현예에서, THP 뉴클레오사이드가 제공되고 R1 및 R2 중 하나는 F이다. 어떤 구현예에서, R1은 플루오로이고 R2는 H이고; R1은 메톡시이고 R2는 H이고, 그리고 R1은 메톡시에톡시이고 R2는 H이다.
어떤 구현예에서, 당 대용물은 5 개 초과의 원자 및 1 개 초과의 헤테로원자를 갖는 고리를 포함한다. 예를 들면 모폴리노 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드 및 올리고머 화합물 중 그것의 용도가 보고되었다 (참고, 예를 들면: Braasch 등, Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; 및 미국 특허들 5,698,685; 5,166,315; 5,185,444; 및 5,034,506). 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "모폴리노"는 하기 식을 갖는 당 대용물을 의미한다:
Figure 112015085604362-pct00010
.
어떤 구현예에서, 모폴리노는, 예를 들면 상기 모폴리노 구조로부터 다양한 치환체 그룹을 부가 또는 변경시켜서 변형될 수 있다. 그와 같은 당 대용물은 "변형된 모폴리노"로서 본원에서 불린다.
조합된 변형으로서, 예컨대 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오사이드 (참고, 다른 개시된 5',2'-비스 치환된 뉴클레오사이드에 대해서는 PCT 국제 출원 WO 2008/101157(8/21/08 공개)) 및 S에 의한 리보실 고리 산소 원자의 교체와 2'-위치에서의 추가 치환 (참고, 공개된 미국 특허 출원 US 2005-0130923(2005년 6월 16일 공개)) 또는 대안적으로 2환식 핵산의 5'-치환 (참고, PCT 국제 출원 WO 2007/134181(11/22/07 공개), 여기서 4'-CH2-O-2' 2환식 뉴클레오사이드는 5' 위치에서 5'-메틸 또는 5'-비닐 그룹으로 추가로 치환됨)이 또한 비제한적으로 제공된다. 탄소환식 2환식 뉴클레오사이드의, 그것의 올리고머화와 함께, 합성 및 제조 및 생화학적 연구가 또한 기재되었다 (참고, 예를 들면, Srivastava 등, J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 천연 발생 뉴클레오사이드 중 펜토푸라노실 잔기 대신에 6-원 사이클로헥세닐을 갖는 뉴클레오사이드인, 1 이상의 변형된 사이클로헥세닐 뉴클레오사이드를 포함한다. 변형된 사이클로헥세닐 뉴클레오사이드는 당해기술에서 기재된 것들을 비제한적으로 포함한다 (참고, 예를 들면 공공 소유물로서, 공개된 PCT 출원 WO 2010/036696(2010년 4월 10일 공개), Robeyns 등, J. Am. Chem. Soc., 2008, 130(6), 1979-1984;
Figure 112015085604362-pct00011
등, Tetrahedron Letters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts 등, J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(30), 9340-9348; Gu 등, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts 등, Nucleic Acids Research, 2005, 33(8), 2452-2463; Robeyns 등, Acta Crystallographica, Section F: Structural Biology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586; Gu 등, Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu 등, Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang 등, J. Org. Chem., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure 등, Nucleic Acids Research, 2001, 29(24), 4941-4947; Wang 등, J. Org. Chem., 2001, 66, 8478-82; Wang 등, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 785-788; Wang 등, J. Am. Chem., 2000, 122, 8595-8602; 공개된 PCT 출원, WO 06/047842; 및 공개된 PCT 출원 WO 01/049687; 이들 각각의 본문은 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있다). 어떤 변형된 사이클로헥세닐 뉴클레오사이드는 하기 식 X를 갖는다.
Figure 112015085604362-pct00012
여기서 독립적으로 상기 식 X의 각각에 대하여 그리고 상기 식 X의 사이클로헥세닐 뉴클레오사이드 유사체의 적어도 하나에 대하여,
Bx는 복소환식 염기 모이어티이고;
T3 및 T4 각각은, 독립적으로, 사이클로헥세닐 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이거나 T3 및 T4 중 하나는 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이고 T3 및 T4 중 다른 것은 H, 하이드록실 보호 그룹, 연결된 콘주게이트 그룹, 또는 5' 또는 3'-말단기이고; 그리고
q1, q2, q3, q4, q5, q6, q7, q8 및 q9 각각은, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 다른 당 치환체 그룹이다.
많은 다른 단환식, 2환식 및 트리사이클릭 고리 시스템은 당해기술에 공지되어 있고 본원에서 제공된 바와 같은 올리고머 화합물에 편입하기 위해 뉴클레오사이드를 변형시키기 위해 사용될 수 있는 당 대용물로서 적합하다 (참고, 예를 들면 검토 논문: Leumann, Christian J. Bioorg. & Med. Chem., 2002, 10, 841-854). 그와 같은 고리계는 그것의 활성을 추가로 향상시키도록 다양한 추가의 치환을 수행할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "2'-변형된 당"은 2' 위치에서 변형된 푸라노실 당을 의미한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 변형은 하기를 비제한적으로 포함하는 할라이드로부터 선택된 치환체를 포함한다: 치환 및 비치환된 알콕시, 치환 및 비치환된 티오알킬, 치환 및 비치환된 아미노 알킬, 치환 및 비치환된 알킬, 치환 및 비치환된 알릴, 및 치환 및 비치환된 알키닐. 어떤 구현예에서, 2' 변형은 O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nF, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3, 및 O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2를 비제한적으로 포함하는 치환체로부터 선택되고, 여기서 n 및 m은 1 내지 약 10이다. 다른 2'- 치환체 그룹은 하기로부터 또한 선택될 수 있다: C1-C12 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 알키닐, 알카릴, 아랄킬, O-알카릴 또는 O-아랄킬, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알카릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단 그룹, 리포터 그룹, 삽입제, 약동학적 특성을 개선하는 그룹, 또는 안티센스 화합물의 약동학적 특성을 개선하는 그룹, 및 유사한 특성을 갖는 다른 치환체. 어떤 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드는 2'-MOE 측쇄를 포함한다 (Baker 등, J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). 그와 같은 2'-MOE 치환은 비변형된 뉴클레오사이드와 비교하고 다른 변형된 뉴클레오사이드, 예컨대 2'- O-메틸, O-프로필, 및 O-아미노프로필과 비교하여 개선된 결합 친화도를 갖는 것으로 기재되었다. 2'-MOE 치환체를 갖는 올리고뉴클레오타이드는 생체내 사용에 대한 유망한 특징과 함께 유전자 발현의 안티센스 억제제인 것으로 또한 보여졌다 (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann 등, Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann 등, Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; 및 Altmann 등, Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
본원에서 사용된 바와 같이, "2'-변형된" 또는 "2'-치환된"는 H 또는 OH 이외의 2' 위치에서 치환체를 포함하는 당을 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 2'-변형된 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, 2환식 뉴클레오사이드를 포함하고, 여기서 당 고리의 2 개의 탄소 원자를 연결하는 상기 브릿지는 당 고리의 2' 탄소 및 또 하나의 탄소; 및 비-브릿징 2'치환체, 예컨대 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, -OCF3, O-(CH2)2-O-CH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), 또는 O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)를 갖는 뉴클레오사이드를 연결하고, 여기서 각각의 Rm 및 Rn는, 독립적으로, H 또는 치환 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다. 2'-변형된 뉴클레오사이드는, 예를 들면 당의 다른 위치에서 그리고/또는 핵염기에서 다른 변형을 추가로 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "2'-F"는 당 고리의 2' 위치에서 플루오로 그룹을 포함하는 당을 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "2'-OMe" 또는 "2'-OCH3", "2'-O-메틸" 또는 "2'-메톡시" 각각은 당 고리의 2' 위치에서 -OCH3 그룹을 포함하는 당을 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "MOE" 또는 "2'-MOE" 또는 "2'-OCH2CH2OCH3 " 또는 "2'-O-메톡시에틸" 각각은 당 고리의 2' 위치에서 -OCH2CH2OCH3 그룹을 포함하는 당을 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
변형된 당류의 제조 방법은 당해기술의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 그와 같은 변형된 당류의 제조를 교시하는 일부 대표적인 미국 특허들은 비제한적으로, U.S.: 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,670,633; 5,700,920; 5,792,847 및 6,600,032 및 국제 출원 PCT/US2005/019219(2005년 6월 2일 출원 및 WO 2005/121371로 공개(2005년 12월 22일 공개)를 포함하고, 이들 각각은 그 전체가 참고로 본원에 편입되어 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "올리고뉴클레오타이드"는 복수의 연결된 뉴클레오사이드를 포함하는 화합물을 의미한다. 어떤 구현예에서, 복수의 뉴클레오사이드 중 하나 이상은 변형된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 리보뉴클레오사이드 (RNA) 및/또는 데옥시리보뉴클레오사이드 (DNA)를 포함한다.
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오타이드에서, 핵염기 모이어티 (천연, 변형된 또는 이들의 조합)은 적절한 핵산 표적과의 하이브리드화를 위하여 유지된다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 변형된 당 모이어티를 갖는 1 이상의 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 2'-MOE이다. 어떤 구현예에서, 2'-MOE 변형된 뉴클레오사이드는 갭머 모티프에서 배열된다. 어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 (4'-CH(CH3)-O-2') 브릿징 그룹을 갖는 2환식 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, (4'-CH(CH3)-O-2') 변형된 뉴클레오사이드는 갭머 모티프의 윙 도처에 배열된다.
변형된 핵염기
핵염기 (또는 염기) 변형 또는 치환은 천연 발생 또는 합성 비변형된 핵염기로부터 구조적으로 구별할 수 있지만, 그것과 기능적으로 교환가능하다. 천연 및 변형된 핵염기 둘 모두는 수소 결합에 참여할 수 있다. 그와 같은 핵염기 변형은 뉴클레아제 안정성, 결합 친화도 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 안티센스 화합물에 부여할 수 있다. 변형된 핵염기는 합성 및 천연 핵염기 예컨대, 5-메틸시토신 (5-me-C)을 포함한다. 5-메틸시토신 치환을 포함하는 어떤 핵염기 치환은, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 결합 친화도를 증가시키는데 특히 유용하다. 예를 들면, 5-메틸시토신 치환은 0.6-1.2 ℃까지 핵산 듀플렉스 안정성을 증가시키는 것으로 보여졌다 (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. 및 Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
추가의 변형된 핵염기는 하기를 포함한다: 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 (-C≡C-CH3) 우라실 및 시토신 및 피리미딘 염기의 다른 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌.
복소환식 염기 모이어티는, 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클로 대체된 것들, 예를 들면 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈을 포함할 수 있다. 안티센스 화합물의 결합 친화도를 증가시키는데 특히 유용한 핵염기는 2 아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함하여 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린을 포함한다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물은 1 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 갭-확장된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 1 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 어떤 구현예에서, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다. 어떤 구현예에서, 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
RNAi 화합물
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 간섭 RNA 화합물 (RNAi)이고, 이 화합물은 이중-가닥 RNA 화합물 (또한 일명 단-간섭 RNA 또는 siRNA) 및 단일가닥 RNAi 화합물 (또는 ssRNA)을 포함한다. 그와 같은 화합물은 및/또는 격리제 표적 핵산을 분해 및/또는 격리하기 위해 RISC 경로을 통해 적어도 부분적으로 기능한다 (따라서, microRNA/microRNA-모방체 화합물을 포함한다). 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 그와 같은 기전에 특히 적합하도록 하는 변형을 포함한다.
i. ssRNA 화합물
어떤 구현예에서, 단일가닥 RNAi 화합물 (ssRNA)로서 사용하기에 특히 적합한 것들을 포함하는 안티센스 화합물은 변형된 5'-말단을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 5'-말단은 변형된 포스페이트 모이어티를 포함한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 변형된 포스페이트는 안정된다 (예를 들면, 비변형된 5'-포스페이트와 비교하여 분해/절단에 대해 내성이 있다). 어떤 구현예에서, 그와 같은 5'-말단 뉴클레오사이드는 5'-인 모이어티를 안정시킨다. 어떤 변형된 5'-말단 뉴클레오사이드는 당해기술, 예를 들면 WO/2011/139702에서 발견될 수 있다.
어떤 구현예에서, ssRNA 화합물의 5'-뉴클레오사이드는 식 IIc를 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00013
(IIc)
여기서:
T1은 임의로 보호된 인 모이어티이고;
T2는 식 IIc의 화합물을 올리고머 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이고;
A는 아래의 식 중 하나를 가지며:
Figure 112015085604362-pct00014
또는
Figure 112015085604362-pct00015
Q1 및 Q2 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 N(R3)(R4)이고;
Q3은 O, S, N(R5) 또는 C(R6)(R7)이고;
각각의 R3, R4 R5, R6 및 R7는, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬 또는 C1-C6 알콕시이고;
M3은 O, S, NR14, C(R15)(R16), C(R15)(R16)C(R17)(R18), C(R15)=C(R17), OC(R15)(R16) 또는 OC(R15)(Bx2)이고;
R14는 H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
R15, R16, R17 및 R18 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
Bx1는 복소환식 염기 모이어티이고;
또는 만일 Bx2가 존재하면, 이때 Bx2는 복소환식 염기 모이어티이고 Bx1는 H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
J4, J5, J6 및 J7 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
또는 J4는 J5 또는 J7 중 하나와 함께 브릿지를 형성하고 상기 브릿지는 O, S, NR19, C(R20)(R21), C(R20)=C(R21), C[=C(R20)(R21)] 및 C(=O)로부터 선택된 1 내지 3 개의 연결된 2가 라디칼 그룹을 포함하고 J5, J6 및 J7 중 다른 2 개 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
각각의 R19, R20 및 R21는, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
G는 H, OH, 할로겐 또는 O-[C(R8)(R9)]n-[(C=O)m-X1]j-Z이고;
각각의 R8 및 R9는, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬 또는 치환된 C1-C6 알킬이고;
X1은 O, S 또는 N(E1)이고;
Z는 H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 N(E2)(E3)이고;
E1, E2 및 E3 각각은, 독립적으로, H, C1-C6 알킬 또는 치환된 C1-C6 알킬이고;
n은 1 내지 약 6이고;
m은 0 또는 1이고;
j은 0 또는 1이고;
각 치환된 그룹은 할로겐, OJ1, N(J1)(J2), =NJ1, SJ1, N3, CN, OC(=X2)J1, OC(=X2)-N(J1)(J2) 및 C(=X2)N(J1)(J2)로부터 독립적으로 선택된 1 이상의 임의로 보호된 치환체 그룹을 포함하고;
X2은 O, S 또는 NJ3이고;
각 J1, J2 및 J3는, 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이고;
j가 1일 때, Z는 할로겐 또는 N(E2)(E3) 이외의 것이고; 그리고
상기 올리고머 화합물은 8 내지 40 개의 모노머 소단위를 포함하고 표적 핵산의 적어도 부분과 혼화가능하다.
어떤 구현예에서, M3은 O, CH=CH, OCH2 또는 OC(H)(Bx2)이다. 어떤 구현예에서, M3은 O이다.
어떤 구현예에서, J4, J5, J6 및 J7 각각은 H이다. 어떤 구현예에서, J4는 J5 또는 J7 중 하나와 함께 브릿지를 형성한다.
어떤 구현예에서, A는 아래의 식 중 하나를 가지며:
Figure 112015085604362-pct00016
또는
Figure 112015085604362-pct00017
여기서:
Q1 및 Q2 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시 또는 치환된 C1-C6 알콕시이다. 어떤 구현예에서, Q1 및 Q2 각각은 H이다. 어떤 구현예에서, Q1 및 Q2 각각은, 독립적으로, H 또는 할로겐이다. 어떤 구현예에서, Q1 및 Q2는 H이고 Q1 및 Q2 중 다른 것은 F, CH3 또는 OCH3이다.
어떤 구현예에서, T1는 아래의 식을 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00018
여기서:
Ra 및 Rc 각각은, 독립적으로, 보호된 하이드록실, 보호된 티올, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, 보호된 아미노 또는 치환된 아미노이고; 그리고
Rb는 O 또는 S이다. 어떤 구현예에서, Rb는 O이고 Ra 및 Rc 각각은, 독립적으로, OCH3, OCH2CH3 또는 CH(CH3)2이다.
어떤 구현예에서, G는 할로겐, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, OCH2CH3, O(CH2)2F, OCH2CHF2, OCH2CF3, OCH2-CH=CH2, O(CH2)2-OCH3, O(CH2)2-SCH3, O(CH2)2-OCF3, O(CH2)3-N(R10)(R11), O(CH2)2-ON(R10)(R11), O(CH2)2-O(CH2)2-N(R10)(R11), OCH2C(=O)-N(R10)(R11), OCH2C(=O)-N(R12)-(CH2)2-N(R10)(R11) 또는 O(CH2)2-N(R12)-C(=NR13)[N(R10)(R11)]이고, 여기서 R10, R11, R12 및 R13 각각은, 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이다. 어떤 구현예에서, G는 할로겐, OCH3, OCF3, OCH2CH3, OCH2CF3, OCH2-CH=CH2, O(CH2)2-OCH3, O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2, OCH2C(=O)-N(H)CH3, OCH2C(=O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2 또는 OCH2-N(H)-C(=NH)NH2이다. 어떤 구현예에서, G는 F, OCH3 또는 O(CH2)2-OCH3이다. 어떤 구현예에서, G는 O(CH2)2-OCH3이다.
어떤 구현예에서, 5'-말단 뉴클레오사이드는 식 IIe를 갖는다:
Figure 112015085604362-pct00019
어떤 구현예에서, ssRNA에 특히 적합한 것을 포함하는 안티센스 화합물은 규정된 패턴 또는 당 변형 모티프에서 올리고뉴클레오타이드 또는 그것의 영역을 따라 배열되어진 변형된 당 모이어티 및/또는 천연 발생 당 모이어티 중 1 이상을 유형을 포함한다. 그와 같은 모티프는 본원에서 논의된 임의의 당 변형 및/또는 다른 공지된 당 변형을 포함할 수 있다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일한 당 변형을 갖는 역역을 포함하거나 그것으로 구성된다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 영역의 각 뉴클레오사이드는 동일한 RNA-유사 당 변형을 포함한다. 어떤 구현예에서, 영역의 각 뉴클레오사이드는 2'-F 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 영역의 각 뉴클레오사이드는 2'-OMe 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 영역의 각 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 영역의 각 뉴클레오사이드는 cEt 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 영역의 각 뉴클레오사이드는 LNA 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 균일한 영역은 모든 또는 본질적으로 모든 올리고뉴클레오타이드를 구성한다. 어떤 구현예에서, 영역은 1-4 말단 뉴클레오사이드를 제외하고 전체 올리고뉴클레오타이드를 구성한다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 교대 당 변형 중 1 이상의 영역을 포함하고, 상기 뉴클레오사이드는 제 1 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오타이드와 제 2 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오타이드 사이를 오고간다. 어떤 구현예에서, 둘 유형 모두의 뉴클레오사이드는 RNA-유사 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서 교대 뉴클레오사이드는 하기로부터 선택된다: 2'-OMe, 2'-F, 2'-MOE, LNA, 및 cEt. 어떤 구현예에서, 교대 변형은 2'-F 및 2'-OMe이다. 그와 같은 영역은 인접할 수 있거나 상이하게 변형된 뉴클레오사이드 또는 접합된 뉴클레오사이드에 의해 방해될 수 있다.
어떤 구현예에서, 교대 변형의 교대 영역 각각은 단일 뉴클레오사이드로 구성된다 (즉, 패턴은 (AB)xAy이고, 여기서 A는 제 1 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오사이드이고 B는 제 2 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오사이드이며; x는 1-20이고 y는 0 또는 1임). 어떤 구현예에서, 교대 모티프 중 1 이상의 교대 영역은 유형의 단일 뉴클레오사이드보다 더 많이 포함한다. 예를 들면, 올리고뉴클레오타이드는 하기 뉴클레오사이드 모티프 중 임의의 것의 1 이상의 영역을 포함할 수 있다:
AABBAA;
ABBABB;
AABAAB;
ABBABAABB;
ABABAA;
AABABAB;
ABABAA;
ABBAABBABABAA;
BABBAABBABABAA; 또는
ABABBAABBABABAA;
여기서 A는 제 1 유형의 뉴클레오사이드이고 B는 제 2 유형의 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, A 및 B 각각은 2'-F, 2'-OMe, BNA, 및 MOE로부터 선택된다.
어떤 구현예에서, 그와 같은 교대 모티프를 갖는 올리고뉴클레오타이드는 변형된 5' 말단 뉴클레오사이드, 예컨대 식 IIc 또는 IIe의 것들을 또한 포함한다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 2-2-3 모티프를 갖는 영역을 포함한다. 그와 같은 영역은 하기 모티프를 포함한다:
-(A)2-(B)x-(A)2-(C)y-(A)3-
여기서: A는 변형된 뉴클레오사이드의 제 1 유형이고;
B 및 C는, A보다 상이하게 변형된 뉴클레오사이드이고, 그러나, B 및 C는 서로 동일 또는 상이한 변형을 가질 수 있고;
x 및 y는 1 내지 15이다.
어떤 구현예에서, A는 2'-OMe 변형된 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, B 및 C 둘 모두는 2'-F 변형된 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, A는 2'-OMe 변형된 뉴클레오사이드이고 B 및 C 둘 모두는 2'-F 변형된 뉴클레오사이드이다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오사이드는 하기 당 모티프를 갖는다:
5'- (Q)- (AB)xAy-(D)z
여기서:
Q는 안정된 포스페이트 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, Q는 식 IIc 또는 IIe를 갖는 뉴클레오사이드이고;
A는 변형된 뉴클레오사이드의 제 1 유형이고;
B는 변형된 뉴클레오사이드의 제 2 유형이고;
D는 그것에 인접한 뉴클레오사이드와는 상이한 변형을 포함하는 변형된 뉴클레오사이드이다. 따라서, 만일 y가 0이면, 이때 D는 B보다 상이하게 변형되어야 하고 y가 1이면, 이때 D는 A보다 상이하게 변형되어야 한다. 어떤 구현예에서, D는 A 및 B 둘 모두와 상이하다.
X는 5-15이고;
Y는 0 또는 1이고;
Z는 0-4이다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오사이드는 하기 당 모티프를 갖는다:
5'- (Q)- (A)x-(D)z
여기서:
Q는 안정된 포스페이트 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, Q는 식 IIc 또는 IIe를 갖는 뉴클레오사이드이고;
A는 변형된 뉴클레오사이드의 제 1 유형이고;
D는 A와 상이한 변형을 포함하는 변형된 뉴클레오사이드이다.
X는 11-30이고;
Z는 0-4이다.
어떤 구현예에서 상기 모티프 중 A, B, C, 및 D는 하기로부터 선택된다: 2'-OMe, 2'-F, 2'-MOE, LNA, 및 cEt. 어떤 구현예에서, D는 말단 뉴클레오사이드를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 말단 뉴클레오사이드는, (1 이상이 우연히 하이브리드화될 수 있을 지라도) 표적 핵산을 하이브리드화하도록 설계되지 않는다. 어떤 구현예에서, 각 D 뉴클레오사이드는의 핵염기는, 표적 핵산의 상응하는 위치에서 핵염기의 동일성과는 무관하게 아데닌이다. 어떤 구현예에서 각 D 뉴클레오사이드의 핵염기는 티민이다.
어떤 구현예에서, ssRNA로서 사용하기에 특히 적합한 것들을 포함하는 안티센스 화합물은 규정된 패턴 또는 변형된 뉴클레오사이드간 연결 모티프에서 올리고뉴클레오타이드 또는 그것의 영역을 따라 배열된 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 교대 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 갖는 영역을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 균일하게 변형된 뉴클레오사이드간 연결의 영역을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결에 의해 균일하게 연결된 영역을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결에 의해 균일하게 연결된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트로부터 선택된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포디에스테르 및 포스포로-티오에이트로부터 선택되고 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트이다.
어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 6 개의 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 8 개의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 6 개의 연속되는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 8 개의 연속되는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 10 개의 연속되는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 적어도 12 개의 연속되는 포스포로-티오에이트 뉴클레오사이드간 연결의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 적어도 하나의 그와 같은 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단에서 위치한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 적어도 하나의 그와 같은 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단의 3 개의 뉴클레오사이드 내에 위치한다.
본원에서 기재된 다양한 당 모티프의 임의의 것을 갖는 올리고뉴클레오타이드는, 임의의 연결 모티프를 가질 수 있다. 예를 들면, 비제한적으로 상기에서 기재된 것들을 포함하는 올리고뉴클레오타이드는, 아래의 표로부터 비제한적으로 선택된 연결 모티프를 가질 수 있다:
Figure 112015085604362-pct00020
ii. siRNA 화합물
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 이중-가닥 RNAi 화합물 (siRNA)이다. 그와 같은 구현예에서, 하나 또는 둘 모든 가닥은 ssRNA에 대해 상기에서 기재된 임의의 변형 모티프를 포함할 수 있다. 어떤 구현예에서, ssRNA 화합물은 비변형된 RNA일 수 있다. 어떤 구현예에서, siRNA 화합물은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이 아니라 비변형된 RNA 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다.
몇 개의 구현예는 이중-가닥 조성물에 관한 것이고, 여기서 각 가닥은 1 이상의 변형된 또는 비변형된 뉴클레오사이드의 위치에 의해 규정된 모티프를 포함한다. 어떤 구현예에서, 완전히 또는 적어도 부분적으로 하이브리드화되어 듀플렉스 영역을 형성하는 제 1 및 제 2 올리고머 화합물을 포함하고 핵산 표적에 상보적이고 하이브리드화되는 영역을 추가로 포함하는 조성물이 제공된다. 그와 같은 조성물이 핵산 표적에 완전 또는 부분 상보성을 갖는 안티센스 가닥인 제 1 올리고머 화합물, 및 제 1 올리고머 화합물에 1 이상의 상보성 영역을 갖고 제 1 올리고머 화합물과 적어도 하나의 듀플렉스 영역을 형성하는 센스 가닥인 제 2 올리고머 화합물을 포함하는 것이 적합하다.
몇 개의 구현예의 조성물은, 핵산 표적에 하이브리드화함으로써 유전자 발현을 조절하여 이의 정상 기능의 손실을 초래한다. 일부 구현예에서, 표적 핵산은 ApoCIII이다. 어떤 구현예에서, 표적화된 ApoCIII의 분해는 본 발명의 조성물과 함께 형성된 활성화된 RISC 복합체에 의해 촉진된다.
몇 개의 구현예는 이중-가닥 조성물에 관한 것이며, 여기서 상기 가닥 중 하나는, 예를 들면, RISC (또는 절단) 복합체 내로 반대 가닥의 우선적인 로딩을 촉구하는데 유용하다. 상기 조성물은 선택된 핵산 분자를 표적화하고 1 이상의 유전자의 발현을 조절하는데 유용하다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 표적 RNA의 일부에 하이브리드화되어 표적 RNA의 정상 기능 손실을 초래한다.
어떤 구현예는 이중-가닥 조성물에 관한 것이며, 여기서 모든 두 가닥은 헤미머(hemimer) 모티프, 완전히 변형된 모티프, 위치 변형된 모티프 또는 교대 모티프를 포함한다. 본 발명의 조성물의 각 가닥은 예를 들면 siRNA 경로에서 특정한 역할을 실행하기 위해 변형될 수 있다. 각 가닥에서의 상이한 모티프 또는 각 가닥에서 상이한 화학적 변형을 갖는 동일한 모티프를 사용하여 RISC 복합체에 대한 안티센스 가닥의 표적화를 가능하게 하면서 센스 가닥의 편입을 억제한다. 이 모델 내에서, 각 가닥은 그것의 특정한 역할이 증대되도록 독립적으로 변형될 수 있다. 안티센스 가닥은 RISC의 한 영역에서 그것의 역할을 증대시키기 위해 5'-말단에서 변형될 수 있으며, 한편 3'-말단은 RISC의 상이한 영역에서 그것의 역할을 증대시키기 위해 차별적으로 변형될 수 있다.
이중-가닥 올리고뉴클레오타이드 분자는 자가-상보적 센스 및 안티센스 영역을 포함하는 이중-가닥 폴리뉴클레오타이드 분자일 수 있으며, 여기서 상기 안티센스 영역은 표적 핵산 분자 또는 그것의 일부에서 뉴클레오타이드 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 센스 영역은 표적 핵산 서열 또는 그것의 일부에 상응하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는다. 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드 분자는 2개의 별개의 올리고뉴클레오타이드로부터 조립될 수 있으며, 여기서 하나의 가닥은 센스 가닥이고 다른 가닥은 안티센스 가닥이며, 여기서 상기 안티센스 및 센스 가닥은 자가-상보적이다 (즉, 각 가닥은 다른 가닥에서 뉴클레오타이드 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하고; 예컨대 안티센스 가닥 및 센스 가닥이 듀플렉스 또는 이중-가닥 구조를 형성하는 경우, 예를 들면 여기서 상기 이중-가닥 영역은 약 15 내지 약 30개, 예를 들면, 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 염기쌍을 갖고; 안티센스 가닥은 표적 핵산 분자 또는 그것의 일부에서 뉴클레오타이드 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하고 센스 가닥은 표적 핵산 서열 또는 그것의 일부에 상응하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다 (예를 들면, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드 분자의 약 15 내지 약 25개 또는 그 초과의 뉴클레오타이드는 표적 핵산 또는 그것의 일부에 상보적이다). 대안적으로, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 단일 올리고뉴클레오타이드로부터 조립되고, 여기서 siRNA의 자가-상보적 센스 및 안티센스 영역은 핵산 기반 또는 비-핵산-기반 링커(들)에 의해 연결된다.
이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 자가-상보적 센스 및 안티센스 영역을 갖는, 듀플렉스, 비대칭 듀플렉스, 헤어핀 또는 비대칭 헤어핀 2차 구조를 나타내는 폴리뉴클레오타이드일 수 있으며, 여기서 상기 안티센스 영역은 별개의 표적 핵산 분자 또는 그것의 일부에서 뉴클레오타이드 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하고 센스 영역은 표적 핵산 서열 또는 그것의 일부에 상응하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는다. 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 자가-상보적 센스 및 안티센스 영역을 포함하는 2 이상의 루프 구조 및 줄기(stem)를 갖는 원형 단일-가닥 폴리뉴클레오타이드일 수 있으며, 여기서 상기 안티센스 영역은 표적 핵산 분자 또는 그것의 일부에서 뉴클레오타이드 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 센스 영역은 표적 핵산 서열 또는 그것의 일부에 상응하는 뉴클레오타이드 서열을 가지며, 상기 원형 폴리뉴클레오타이드는 생체내 또는 시험관내 중 어느 하나에서 처리되어 RNAi를 매개할 수 있는 활성 siRNA 분자를 생산할 수 있다
어떤 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 별개의 센스 및 안티센스 서열 또는 영역을 포함하며, 여기서 상기 센스 및 안티센스 영역은 당해기술에 공지된 바와 같이 뉴클레오타이드 또는 비-뉴클레오타이드 링커 분자에 의해 공유 결합되거나 대안적으로 이온성 상호작용, 수소 결합, 반데르발스 상호작용, 소수성 상호작용, 및/또는 적층(stacking) 상호작용에 의해 비-공유 결합된다. 어떤 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 표적 유전자의 뉴클레오타이드 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 표적 유전자의 뉴클레오타이드 서열과 표적 유전자의 발현 억제를 유발하는 방식으로 상호작용한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 RNA만을 포함하는 분자에 제한될 필요는 없지만, 추가로 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드 및 비-뉴클레오타이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 짧은 간섭 핵산 분자는 2'-하이드록시 (2'-OH) 함유 뉴클레오타이드가 결핍된다. 어떤 구현예에서 짧은 간섭 핵산은 임의로 임의의 리보뉴클레오타이드 (예를 들면, 2'-OH 그룹을 갖는 뉴클레오타이드)를 포함하지 않는다. 그러나, RNAi를 돕기 위한 분자 내에 리보뉴클레오타이드의 존재를 필요로 하지 않는 그와 같은 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 2'-OH 그룹을 갖는 1 이상의 뉴클레오타이드를 포함하는 부착된 링커 또는 링커들 또는 다른 부착된 또는 연관된 그룹들, 모이어티들, 또는 사슬들을 가질 수 있다. 임의로, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 뉴클레오타이드 위치의 약 5, 10, 20, 30, 40, 또는 50%에서 리보뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 siRNA는 서열 특이적 RNAi, 예를 들면 짧은 간섭 RNA (siRNA), 이중-가닥 RNA (dsRNA), 마이크로-RNA (miRNA), 짧은 헤어핀 RNA (shRNA), 짧은 간섭 올리고뉴클레오타이드, 짧은 간섭 핵산, 짧은 간섭 변형된 올리고뉴클레오타이드, 화학적으로 변형된 siRNA, 후-전사 유전자 침묵 RNA (ptgsRNA), ssRNAi 등을 매개할 수 있는 핵산 분자를 기술하는데 사용된 다른 용어들과 동등한 것으로 의도된다. 또한, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 RNAi는 서열 특이적 RNA 간섭, 예컨대 후 전사 유전자 침묵, 번역 억제, 또는 후생유전학을 기술하는데 사용된 다른 용어들에 동등한 것으로 의도된다. 예를 들면, 이중-가닥 올리고뉴클레오타이드는 후-전사 수준 및 전-전사 수준 둘 모두에서 유전자를 후생유전적으로 침묵시키는데 사용될 수 있다. 비-제한적인 예에서, 본 발명의 siRNA 분자에 의한 유전자 발현의 후생유전적 조절은 유전자 발현을 변경시키는 염색질 구조 또는 메틸화 패턴의 siRNA 매개된 변형으로부터 초래될 수 있다 (참고, 예를 들면, Verdel et al., 2004, Science, 303, 672-676; Pal-Bhadra et al., 2004, Science, 303, 669-672; Allshire, 2002, Science, 297, 1818-1819; Volpe et al., 2002, Science, 297, 1833-1837; Jenuwein, 2002, Science, 297, 2215-2218; and Hall et al., 2002, Science, 297, 2232-2237).
예를 들면, 자가-상보적 서열을 갖는 단일 RNA 가닥이 이중-가닥 형태를 취할 수 있는 "헤어핀" 또는 줄기-루프 이중-가닥 RNA 효과기 분자, 또는 2개의 별개의 RNA 가닥을 포함하는 듀플렉스 dsRNA 효과기 분자를 포함하는, 본원에 제공된 몇 개의 구현예의 화합물 및 조성물은 dsRNA-매개된 유전자 침묵 또는 RNAi 기전에 의해 ApoCIII을 표적화할 수 있음이 고려된다. 다양한 구현예에서, dsRNA는 오로지 리보뉴클레오타이드로 이루어지거나, 예를 들면, WO 00/63364(2000년 4월 19일 출원), 또는 U.S. 시리즈 번호 60/130,377(1999년 4월 21일 출원)에 개시된 RNA/DNA 하이브리드와 같은 리보뉴클레오타이드 및 데옥시뉴클레오타이드의 혼합물로 이루어진다. dsRNA 또는 dsRNA 효과기 분자는 자가-상보성 영역을 갖는 단일 분자여서 분자의 한 분절에서의 뉴클레오타이드는 분자의 또 하나의 분절에서의 뉴클레오타이드와 염기 쌍을 이루게 할 수 있다. 다양한 구현예에서, 단일 분자로 구성된 dsRNA는 오로지 리보뉴클레오타이드로 구성되거나 데옥시리보뉴클레오타이드의 영역에 상보적인 리보뉴클레오타이드의 영역을 포함한다. 대안적으로, dsRNA는 서로 상보성 영역을 갖는 2개의 상이한 가닥을 포함할 수 있다.
다양한 구현예에서, 두 가닥 모두는 오로지 리보뉴클레오타이드로 구성되며, 하나의 가닥은 오로지 리보뉴클레오타이드로 구성되고 하나의 가닥은 오로지 데옥시리보뉴클레오타이드로 구성되거나, 하나 또는 두 가닥 모두는 리보뉴클레오타이드와 데옥시리보뉴클레오타이드와의 혼합물을 함유한다. 어떤 구현예에서, 상보성 영역은 서로 그리고 표적 핵산 서열에 대해 적어도 70, 80, 90, 95, 98, 또는 100% 상보적이다. 어떤 구현예에서, 이중-가닥 형태로 존재하는 dsRNA의 영역은 적어도 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 50, 75,100, 200, 500, 1000, 2000 또는 5000개의 뉴클레오타이드를 포함하거나 dsRNA에서 나타내어질 cDNA 또는 다른 표적 핵산 서열에서의 모든 뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, dsRNA는 임의의 단일 가닥 영역, 예컨대 단일 가닥 말단을 포함하지 않거나, dsRNA는 헤어핀이다. 다른 구현예에서, dsRNA는 1 이상의 단일 가닥 영역 또는 오버행을 갖는다. 어떤 구현예에서, RNA/DNA 하이브리드는 안티센스 가닥 또는 영역인 DNA 가닥 또는 영역 (예를 들면, 표적 핵산에 대해 적어도 70, 80, 90, 95, 98, 또는 100% 상보성을 가짐), 및 센스 가닥 또는 영역인 RNA 가닥 또는 영역 (예를 들면, 표적 핵산에 대해 적어도 70, 80, 90, 95, 98, 또는 100% 동일성을 가짐), 및 그 반대를 포함한다.
다양한 구현예에서, RNA/DNA 하이브리드는 본 명세서에서 기재된 방법 또는 WO 00/63364(2000년 4월 19일 출원), 또는 U.S. 시리즈 번호 60/130,377(1999년 4월 21일 출원)에 기재된 방법과 같은 효소 또는 화학적 합성 방법을 사용하여 시험관내 제조된다. 다른 구현예에서, 시험관내 합성된 DNA 가닥은 DNA 가닥의 세포 내로의 형질전환 전, 후 또는 동시에 생체내 또는 시험관내 제조된 RNA 가닥과 복합된다. 또 다른 구현예에서, dsRNA는 센스 및 안티센스 영역을 포함하는 단일 원형 핵산이거나, dsRNA는 원형 핵산과, 제 2 원형 핵산 또는 선형 핵산 중 하나를 포함한다 (참고, 예를 들면, WO 00/63364(2000년 4월 19일 출원), 또는 U.S. 시리즈 번호 60/130,377(1999년 4월 21일 출원)). 예시적인 원형 핵산은, 뉴클레오타이드의 유리 5' 포스포릴 그룹이 또 하나의 뉴클레오타이드의 2' 하이드록실 그룹에 루프 백(loop back) 방식으로 연결되는 래리엇(lariat) 구조를 포함한다.
다른 구현예에서, dsRNA는, dsRNA의 시험관내 또는 생체내 반감기가, 상응하는 2' 위치에 수소 또는 하이드록실 그룹을 함유하는 상응하는 dsRNA와 비교하여 증가하는, 당의 2' 위치에서 할로겐 (예컨대 불소 그룹)을 포함하거나 알콕시 그룹 (예컨대 메톡시 그룹)을 포함하는 1 이상의 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, dsRNA는 천연 발생 포스포디에스테르 연결 이외에 인접한 뉴클레오타이드들 사이에 1 이상의 연결을 포함한다. 그와 같은 연결의 예는 포스포르아미드, 포스포로티오에이트, 및 포스포로디티오에이트 연결을 포함한다. dsRNA는 또한 미국 특허 번호 6,673,661에서 교시된 바와 같은 화학적으로 변형된 핵산 분자일 수 있다. 다른 구현예에서, dsRNA는, 예를 들면, WO 00/63364(2000년 4월 19일 출원), 또는 U.S. 시리즈 번호 60/130,377(1999년 4월 21일 출원)에 의해 개시된 바와 같이, 1 또는 2개의 캡핑된 가닥을 포함한다.
다른 구현예에서, dsRNA는 WO 00/63364에 개시된 적어도 부분적으로 dsRNA 분자 중 어느 것, 뿐만 아니라 미국 가출원 60/399,998; 및 미국 가출원 60/419,532, 및 PCT/US2003/033466 (이들의 교시는 이로써 참고로 편입됨)에 기재된 dsRNA 분자 중 어느 것일 수 있다. dsRNA 중 어느 것은 본원에 기재된 방법 또는 표준 방법, 예컨대 WO 00/63364에 기재된 표준 방법을 사용하여 시험관내 또는 생체내 발현될 수 있다.
약제학적 조성물을 제형화하기 위한 조성물 및 방법
안티센스 화합물은 약제학적 조성물 또는 제형의 제조를 위한 약제학적으로 허용가능한 활성 또는 불활성 물질과 혼합될 수 있다. 약제학적 조성물의 제형을 위한 조성물 및 방법은, 비제한적으로, 투여 경로, 질환 정도, 또는 투여되는 용량을 포함하는 수많은 기준에 의존적이다.
ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물을 적합한 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 조합하여 약제학적 조성물에 이용될 수 있다.
어떤 구현예에서, "약제학적 담체" 또는 "부형제"는, 1 이상의 핵산을 동물에게 전달하기 위한 약제학적으로 허용가능한 용매, 현탁화제 또는 임의의 다른 약리적으로 불활성 비히클이다. 부형제는 액체 또는 고체일 수 있고, 계획된 투여 방식을 염두에 두면서, 핵산 및 주어진 약제학적 조성물의 다른 성분과 조합될 때 원하는 벌크, 점조도 등을 제공하도록 선택될 수 있다. 전형적인 약제학적 담체는, 비제한적으로, 결합제 (예를 들면, 예비젤라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 등); 충전제 (예를 들면, 락토오스 및 다른 당, 미세결정성 셀룰로오스, 펙틴, 젤라틴, 칼슘 설페이트, 에틸 셀룰로오스, 폴리아크릴레이트 또는 칼슘 수소 포스페이트, 등); 윤활유 (예를 들면, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 실리카, 콜로이드 실리콘 디옥사이드, 스테아르산, 금속 스테아레이트, 수소화된 식물성 오일, 옥수수 전분, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 아세테이트, 등); 붕해제 (예를 들면, 전분, 나트륨 전분 글라이콜레이트, 등); 및 습윤제 (예를 들면, 나트륨 라우릴 설페이트, 등)를 포함한다.
비경구 또는 비-비경구 투여에 적합한, 핵산과 유해하게 반응하지 않는 약제학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 부형제가 또한 본 발명의 조성물을 제형화하는데 사용될 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 담체는, 비제한적으로, 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토오스, 아밀로오스, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 규산, 점성 파라핀, 하이드록시메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈 등을 포함한다.
약제학적으로 허용가능한 희석제는 포스페이트-완충된 염수 (PBS)를 포함한다. PBS는 비경구로 전달되는 조성물에 사용하기에 적합한 희석제이다. 따라서, 일 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 희석제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 기재된 방법에 이용된다. 어떤 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 희석제는 PBS이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 임의의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 그와 같은 에스테르의 염, 또는 인간을 포함하는 동물에게 투여시, 생물학적 활성 대사물 또는 그의 잔기를 (직접적으로 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 따라서, 예를 들면, 상기 개시내용은 또한 안티센스 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 그와 같은 전구약물의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 다른 생물동등물에 관한 것이다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 염은, 비제한적으로, 나트륨 및 칼륨 염을 포함한다.
전구약물은 활성 안티센스 화합물을 형성하기 위해 체내에서 내인성 뉴클레아제로 절단되는 안티센스 화합물의 하나 또는 둘 모두의 말단에서 추가의 뉴클레오사이드의 편입을 포함할 수 있다.
접합된 안티센스 화합물
안티센스 화합물은 수득한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 증대시키는 1 이상의 모이어티 또는 콘주게이트에 공유 결합될 수 있다. 전형적인 콘주게이트 그룹은 콜레스테롤 모이어티 및 지질 모이어티를 포함한다. 추가의 콘주게이트 그룹은 탄수화물, 인지질, 바이오틴, 펜아진, 폴레이트, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레신, 로다민, 쿠마린, 및 염료를 포함한다.
안티센스 화합물은 또한, 예를 들면, 뉴클레아제 안정성과 같은 특성을 증대시키기 위해 일반적으로 안티센스 화합물의 하나 또는 둘 모두의 말단에 부착된 1 이상의 안정화 그룹을 갖도록 변형될 수 있다. 캡 구조가 안정화 그룹에 포함된다. 이들 말단 변형은 안티센스 화합물이 엑소뉴클레아제 분해되는 것을 방지하고 세포 내에서의 전달 및/또는 국재화를 도울 수 있다. 캡은 5'-말단 (5'-캡), 또는 3'-말단 (3'-캡)에서 존재할 수 있거나, 양쪽 말단에서 존재할 수 있다. 캡 구조가 당해기술에서 잘 알려져 있고, 예를 들면, 역전된 데옥시 무염기성 캡을 포함한다. 뉴클레아제 안정성을 부여하기 위해 안티센스 화합물의 하나 또는 양쪽 말단을 캡핑하는데 사용될 수 있는 추가의 3' 및 5'-안정화 그룹은 2003년 1월 16일자로 공개된 WO 03/004602에 개시된 것들을 포함한다.
세포 배양 및 안티센스 화합물 치료
ApoCIII 핵산 또는 단백질의 수준, 활성 또는 발현에 대한 안티센스 화합물의 효과를 다양한 세포 유형에서 시험관내 시험할 수 있다. 그와 같은 분석에 사용된 세포 유형은 상업적 판매사 (예를 들면, American Type Culture Collection, Manassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD)로부터 입수가능하고, 세포를 상업적으로 이용가능한 시약 (예를 들면 Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)을 사용하여 판매사의 지침에 따라서 배양한다. 예시적인 세포 유형은, 비제한적으로, HepG2 세포, Hep3B 세포, Huh7 (간세포 암종) 세포, 일차 간세포, A549 세포, GM04281 섬유아세포 및 LLC-MK2 세포를 포함한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 시험관내 시험
다른 안티센스 화합물과의 치료를 위해 적절하게 변형될 수 있는 세포의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 처리를 위한 방법이 본원에 기재된다.
일반적으로, 세포는, 배양시 세포가 대략 60-80% 밀집도에 도달할 때 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 처리된다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포 내로 도입하는데 통상적으로 사용되는 하나의 시약은 양이온성 지질 형질감염 시약 LIPOFECTIN®(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) 중에서 LIPOFECTIN®과 혼합하여 원하는 최종 농도의 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드당 2 내지 12 ug/mL의 전형적인 범위의 LIPOFECTIN® 농도를 달성한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 시약은 LIPOFECTAMINE 2000® (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 매질 (Invitrogen, Carlsbad, CA) 중에서 LIPOFECTAMINE 2000®과 혼합하여 원하는 농도의 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드당 2 내지 12 ug/mL의 전형적인 범위의 LIPOFECTAMINE® 농도를 달성한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 시약은 Cytofectin® (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 매질 (Invitrogen, Carlsbad, CA) 중에서 Cytofectin®과 혼합하여 원하는 농도의 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드당 2 내지 12 ug/mL의 전형적인 범위의 Cytofectin® 농도를 달성한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 시약은 Oligofectamine™ (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 Opti-MEM™-1 감소된 혈청 매질 (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) 중에서 Oligofectamine™과 혼합하여 원하는 농도의 올리고뉴클레오타이드를, 100 nM당 대략 0.2 내지 0.8 μL의 올리고뉴클레오타이드에 대한 Oligofectamine™의 비로 달성한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 시약은 FuGENE 6 (Roche Diagnostics Corp., Indianapolis, IN)을 포함한다. 안티센스 올리고머 화합물을 1 ml의 무혈청 RPMI 중에서 FuGENE 6과 혼합하여 원하는 농도의 올리고뉴클레오타이드를, 100 nM당 1 내지 4 μL의 FuGENE 6의 올리고머 화합물에 대한 FuGENE 6 비로 달성했다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 기술은 전기천공을 포함한다 (Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001).
세포를 일상적인 방법에 의해 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 처리한다. 세포는 전형적으로 안티센스 올리고뉴클레오타이드 처리 후 16-24 시간에 수확되고, 그때 표적 핵산의 RNA 또는 단백질 수준을 당해기술에서 공지되고 본원에 기재된 방법에 의해 측정된다 (Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). 일반적으로, 처리가 다중 복제물에서 수행되는 경우, 데이타는 복제물 처리의 평균으로서 제공된다.
사용되는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 농도는 세포주별로 가변적이다. 특정한 세포주를 위한 최적의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 농도를 결정하는 방법은 당해기술에서 잘 알려져 있다 (Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 LIPOFECTAMINE 2000® (Invitrogen, Carlsbad, CA), Lipofectin® (Invitrogen, Carlsbad, CA) 또는 CytofectinTM (Genlantis, San Diego, CA)으로 형질감염되는 경우 1 nM 내지 300 nM 범위의 농도에서 전형적으로 사용된다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 전기천공을 사용하여 형질감염되는 경우 625 내지 20,000 nM 범위의 고 농도에서 사용된다.
RNA 단리
RNA 분석을 총 세포성 RNA 또는 폴리(A)+ mRNA에 대해 수행할 수 있다. RNA 단리 방법은 당해기술에서 잘 알려져있다 (Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). RNA는 당해기술에서 잘 알려진 방법을 사용하여, 예를 들면, 제조자의 권고된 프로토콜에 따라서 TRIZOL®시약 (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 사용하여 제조된다.
표적 수준 또는 발현의 억제 분석
ApoCIII 핵산의 수준 또는 발현의 억제는 당해기술에 공지된 다양한 방식으로 검정될 수 있다 (Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). 예를 들면, 표적 핵산 수준을, 예를 들면, 노던 블랏 분석, 경쟁적 중합효소 연쇄 반응 (PCR), 또는 정량적 실시간 PCR에 의해 정량화할 수 있다. RNA 분석을 총 세포성 RNA 또는 폴리(A)+ mRNA에 대해 수행할 수 있다. RNA 단리 방법은 당해기술에 잘 알려져 있다. 노던 블랏 분석은 또한 당해기술에 일상적이다. 정량적 실시간 PCR은, 회사(PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)로부터 입수가능한, 상업적으로 이용가능한 ABI PRISM® 7600, 7700, 또는 7900 서열 검출 시스템을 사용하여 편리하게 달성되고 제조자의 지침에 따라서 사용될 수 있다.
표적 RNA 수준의 정량적 실시간 PCR 분석
표적 RNA 수준의 정량화는 제조자의 지침에 따라서 ABI PRISM® 7600, 7700, 또는 7900 서열 검출 시스템 (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)을 사용한 정량적 실시간 PCR에 의해 달성될 수 있다. 정량적 실시간 PCR 방법은 당해기술에 잘 알려져 있다.
실시간 PCR 전에, 단리된 RNA를 역전사효소 (RT) 반응에 적용시켜 상보적 DNA (cDNA)를 생산하고 이후 실시간 PCR 증폭을 위한 기질로서 사용한다. RT 및 실시간 PCR 반응을 동일한 샘플에서 마찬가지로 순차적으로 수행한다. RT 및 실시간 PCR 시약은 Invitrogen (Carlsbad, CA)으로부터 입수된다. RT 및 실시간-PCR 반응을 당해기술의 숙련가에게 잘 알려져 있는 방법으로 수행한다.
실시간 PCR에 의해 수득된 유전자 (또는 RNA) 표적 양은, 발현이 일정한 유전자, 예컨대 사이클로필린 A의 발현 수준을 사용하거나, RIBOGREEN® (Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA)을 사용하여 총 RNA를 정량함으로써 정규화될 수 있다. 사이클로필린 A 발현은, 표적과 동시에 실행하거나, 다중화하거나, 또는 별도로, 실시간 PCR에 의해 정량된다. 총 RNA는 RIBOGREEN® RNA 정량화 시약 (Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA)을 사용하여 정량된다. RIBOGREEN®에 의한 RNA 정량화 방법은 문헌(Jones, L.J., et al, Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)에 교시되어 있다. RIBOGREEN® 형광을 측정하는데 CYTOFLUOR® 4000 기기 (PE Applied Biosystems, Foster City, CA)를 사용한다.
프로브 및 프라이머를 ApoCIII 핵산에 하이브리드화되도록 설계한다. 실시간 PCR 프로브 및 프라이머를 설계하는 방법은 당해기술에 잘 알려져 있으며, PRIMER EXPRESS® 소프트웨어 (Applied Biosystems, Foster City, CA)와 같은 소프트웨어를 사용함을 포함할 수 있다.
RT, 실시간 PCR에 의해 수득된 유전자 표적 양은 유전자 발현이 일정한 GAPDH 또는 사이클로필린 A의 발현 수준을 사용하거나, 총 RNA를 RiboGreenTM (Molecular Probes, Inc. Eugene, OR)을 사용하여 정량함으로써 얻을 수 있다. GAPDH 또는 사이클로필린 A 발현은, 표적과 동시에 실행되거나, 다중화되거나, 또는 별도로 실행되어, RT, 실시간 PCR에 의해 정량될 수 있다. 총 RNA는 RiboGreenTM RNA 정량화 시약 (Molecular Probes, Inc.Eugene, OR)을 사용하여 정량되었다.
단백질 수준의 분석
ApoCIII 핵산의 안티센스 억제를 ApoCIII 단백질 수준을 측정하여 평가할 수 있다. ApoCIII의 단백질 수준을 당해기술에서 잘 알려진 다양한 방식 예컨대 면역침전, 웨스턴 블랏 분석 (면역블로팅), 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA), 정량적 단백질 검정, 단백질 활성 검정 (예를 들면, 카스파제 활성 검정), 면역조직화학, 면역세포화학 또는 형광-활성화된 세포 분류 (FACS) (Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)으로 평가되거나 정량될 수 있다. 표적으로 유도되는 항체는, 항체의 MSRS 카탈로그 (Aerie Corporation, Birmingham, MI)와 같은 다양한 공급원으로부터 확인되고 입수될 수 있거나 당해기술에서 잘 알려진 종래의 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 발생 방법을 통해 제조될 수 있다. 인간 및 마우스 ApoCIII의 검출에 유용한 항체는 상업적으로 이용가능하다.
안티센스 화합물의 생체내 시험
안티센스 화합물, 예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, ApoCIII의 발현을 억제하고 표현형 변화를 야기하는 그것의 능력을 평가하기 위해 동물에서 시험된다. 시험은 정상 동물, 또는 실험적인 질환 모델에서 수행될 수 있다. 동물에 대한 투여를 위해, 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 약제학적으로 허용가능한 희석제, 예컨대 포스페이트-완충된 염수에서 제형화한다. 투여는 비경구 투여 경로를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드 복용량 및 투여 빈도의 계산은 투여 경로 및 동물 체중과 같은 인자에 의해 좌우된다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 처리 기간 후, RNA를 조직으로부터 단리하고 ApoCIII 핵산 발현에서의 변화를 측정한다. ApoCIII 단백질 수준에서의 변화를 또한 측정한다.
특정한 징후
프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 환자에서 신규한 ApoCIII 억제 효과가 본원에 확인되고 개시된다. 하기에 개시된 예시는, 검출가능한 LPL 활성이 거의 없거나 아예 없는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD, 환자에서 기타 바이오마커 중에서도 TG에서의 놀라운 감소 및 HDL에서의 증가를 개시한다.
임의의 특정한 이론에 결부시키고자 하지 않고, 놀라운 결과에 대한 2가지 잠재적 설명이 논의된다. 첫번째로, ApoCIII의 억제는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD, 환자에서 잔류 LPL 활성을 활성화시킬 수 있다. 이것은, ApoCIII 억제가 TG 및 HDL 수준에 완전히 영향을 주더라도 이들 환자는 검출가능한 LPL 활성이 거의 없거나 아예 없기 때문에 매우 확실한 설명이 아니다. 둘째는, 더 가능성이 있는 것으로, ApoCIII이 apoE-매개된 수용체　예컨대 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 1 (LRP1) 또는 신데칸 1에 의해 매개된 TG 입자의 청소능을 억제하는 것이다. ApoCIII이 일단 VLDL 및 카일로마이크론 입자로부터 제거되면, 그것은 간에 의한 흡수에 대해 더 잘 받아들여지게 된다. 사실상, 이들 수용체 매개된 청소능 기전은 유의미하게, ApoCIII 억제제로 처리된 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD, 환자에서 관측된 임상적으로 관측된 표현형 (예를 들면, 실질적인 TG 저하)의 원인이 될 수 있다.
어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체를 치료하는 방법이 본원에서 제공되고, 이 방법은 본원에 기재된 바와 같은 1 이상의 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 ApoCIII에 대해 표적화된 안티센스 화합물을 포함한다.
어떤 구현예에서, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물의 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체에의 투여로, ApoCIII 발현이 적어도 약 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%, 또는 이들 값의 임의의 2 개에 의해 규정된 범위까지 감소된다. 어떤 구현예에서, ApoCIII 발현은 ≤ 50 mg/L, ≤ 60 mg/L, ≤ 70 mg/L, ≤ 80 mg/L, ≤ 90 mg/L, ≤ 100 mg/L, ≤ 110 mg/L, ≤ 120 mg/L, ≤ 130 mg/L, ≤ 140 mg/L, ≤ 150 mg/L, ≤ 160 mg/L, ≤ 170 mg/L, ≤ 180 mg/L, ≤ 190 mg/L 또는 ≤ 200 mg/L로 감소된다.
어떤 구현예에서, 상기 대상체는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD와 관련된 질환 또는 장애를 갖는다. 어떤 구현예에서 질환 또는 장애는 심혈관 또는 대사성 질환 또는 장애이다. 어떤 구현예에서, 질환은 췌장염이다.
어떤 구현예에서, 심혈관 질환은, 비제한적으로, 동맥류, 협심증, 부정맥, 죽상동맥경화증, 뇌혈관 질환, 관상동맥 심장병, 고혈압, 이상지질혈증, 고지혈증, 초고트리글리세라이드혈증, 고콜레스테롤혈증, 뇌졸중 등을 포함한다. 어떤 구현예에서, 이상지질혈증은 카일로마이크론혈증 (예를 들면, FCS) 또는 초고트리글리세라이드혈증. 어떤 구현예에서, 질환은 이상지질혈증에 의해 야기된 췌장염이다.
어떤 구현예에서, 대사성 질환 또는 장애는, 비제한적으로, 고혈당증, 전당뇨병, 당뇨병 (I형 및 II형 ), 비만, 인슐린 저항성, 대사성 증후군 및 당뇨병성 이상지질혈증을 포함한다.
어떤 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 ApoCIII에 대해 표적화된 화합물은 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체에서 췌장염, 심혈관 또는 대사성 질환 또는 장애의 생리적 마커 또는 표현형을 조절한다. 어떤 실험에서, 본 화합물은 미처리된 동물과 비교하여 생리적 마커 또는 표현형을 증가 또는 감소시킬 수 있다. 어떤 구현예에서, 생리적 마커 또는 표현형의 증가 또는 감소는 본원에서 기재된 화합물에 의한 ApoCIII의 억제와 연관된다.
어떤 구현예에서, 심혈관 질환 또는 장애의 생리적 마커 또는 표현형은 정량화가능할 수 있다. 예를 들면, TG 또는 HDL 수준은, 예를 들면, 표준 지질 시험에 의해 측정 및 정량화될 수 있다. 어떤 구현예에서, 생리적 마커 또는 표현형 예컨대 HDL은 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%, 또는 이들 값의 임의의 2 개에 의해 규정된 범위까지 증가될 수 있다. 어떤 구현예에서, 생리적 마커 표현형 예컨대 TG (식후 또는 공복)은 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%, 또는 이들 값의 임의의 2 개에 의해 규정된 범위까지 줄어들 수 있다. 어떤 구현예에서, TG (식후 또는 공복)는 ≤ 100 mg/dL, ≤ 110 mg/dL, ≤ 120 mg/dL, ≤ 130 mg/dL, ≤ 140 mg/dL, ≤ 150 mg/dL, ≤ 160 mg/dL, ≤ 170 mg/dL, ≤ 180 mg/dL, ≤ 190 mg/dL, ≤ 200 mg/dL, ≤ 210 mg/dL, ≤ 220 mg/dL, ≤ 230 mg/dL, ≤ 240 mg/dL, ≤ 250 mg/dL, ≤ 260 mg/dL, ≤ 270 mg/dL, ≤ 280 mg/dL, ≤ 290 mg/dL, ≤ 300 mg/dL, ≤ 350 mg/dL, ≤ 400 mg/dL, ≤ 450 mg/dL, ≤ 500 mg/dL, ≤ 550 mg/dL, ≤ 600 mg/dL, ≤ 650 mg/dL, ≤ 700 mg/dL, ≤ 750 mg/dL, ≤ 800 mg/dL, ≤ 850 mg/dL, ≤ 900 mg/dL, ≤ 950 mg/dL, ≤ 1000 mg/dL, ≤ 1100 mg/dL, ≤ 1200 mg/dL, ≤ 1300 mg/dL, ≤ 1400 mg/dL, ≤ 1500 mg/dL, ≤ 1600 mg/dL, ≤ 1700 mg/dL, ≤ 1800 mg/dL 또는 ≤ 1900 mg/dL로 감소된다.
어떤 구현예에서, 대사성 질환 또는 장애의 생리적 마커 또는 표현형은 정량화가능할 수 있다. 예를 들면, 글루코오스 수준 또는 인슐린 저항성은 당해기술에서 공지된 표준 시험에 의해 측정 및 정량화될 수 있다. 어떤 구현예에서, 생리적 마커 또는 표현형 예컨대 글루코오스 수준 또는 인슐린 저항성은 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%, 또는 이들 값의 임의의 2 개에 의해 규정된 범위까지 줄어들 수 있다. 어떤 구현예에서, 생리적 마커 표현형 예컨대 인슐린 민감도는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%, 또는 이들 값의 임의의 2 개에 의해 규정된 범위까지 줄어들 수 있다.
또한, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체의 질환 또는 장애와 연관된 증상을 본원에서 기재된 화합물로 예방, 치료 또는 개선하는 방법이 본원에서 제공된다. 어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD와 연관된 질환과 연관된 증상의 발병률을 감소시키는 방법이 제공된다. 어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD와 연관된 증상의 중증도를 감소시키는 방법이 제공된다. 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 프레드릭슨 I형 이상지질혈증이 있는 개체에게 치료적으로 효과적인 양의 ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서 질환 또는 장애는 췌장염 또는 심혈관 또는 대사성 질환 또는 장애이다.
심혈관 질환 또는 장애는 수많은 물리적 증상을 특징으로 한다. 심혈관 질환과 연관될, 당해기술의 숙련가에게 공지된 임의의 증상은 본원에서 기재된 방법에서 제시된 바와 같이 예방, 치료, 개선되거나 또는 그렇지 않으면 조절될 수 있다. 어떤 구현예에서, 증상은, 비제한적으로, 하기 중 임의의 것일 수 있다: 협심증, 가슴 통증, 숨가쁨, 심계항진, 약화, 현기증, 메스꺼움, 땀흘리기, 빈맥, 서맥, 부정맥, 심방세동, 하지의 팽윤, 청색증, 피로, 실신, 얼굴의 저림, 팔다리의 저림, 근육의 파행 또는 경련, 복부의 팽만 또는 열.
대사성 질환 또는 장애는 수많은 물리적 증상을 특징으로 한다. 대사성 장애 와 연관될, 당해기술의 숙련가에게 공지된 임의의 증상은 본원에서 기재된 방법에서 제시된 바와 같이 예방, 치료, 개선되거나 또는 그렇지 않으면 조절될 수 있다. 어떤 구현예에서, 증상은, 비제한적으로, 하기 중 임의의 것일 수 있다: 과도한 소변 생산 (다뇨증), 과도한 갈증 및 증가된 수분 섭취 (조갈증), 흐릿한 시력, 원인불명 중량 감소 및 무기력.
췌장염은 수많은 물리적 증상을 특징으로 한다. 췌장염과 연관될, 당해기술의 숙련가에게 공지된 임의의 증상은 본원에서 기재된 방법에서 제시된 바와 같이 예방, 치료, 개선되거나 또는 그렇지 않으면 조절될 수 있다. 어떤 구현예에서, 증상은, 비제한적으로, 하기 중 임의의 것일 수 있다: 복통, 구토, 메스꺼움, 및 압력에 대한 복부 민감도.
어떤 구현예에서, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체를 치료하는 방법이 제공되고, 이 방법은 치료적으로 효과적인 양의, 본원에 기재된 바와 같은 1 이상의 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 치료적으로 효과적인 양의, ApoCIII 핵산에 대해 표적화된 안티센스 화합물의 투여는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD와 연관된 ApoCIII 수준 또는 질환 마커의 모니터링이 동반되어, 안티센스 화합물에 대한 대상체의 반응을 결정한다. 안티센스 화합물의 투여에 대한 대상체의 반응은 치료적 개입의 양 및 지속 시간을 결정하도록 의사에 의해 사용된다.
어떤 구현예에서, ApoCIII에 대해 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체를 치료하기 위한 약제의 제조를 위해 사용된다.
투여
본 발명의 화합물 또는 약제학적 조성물은 국소 또는 전신 치료의 선호 여부 및 치료될 부분에 따라 수많은 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 경구 또는 비경구일 수 있다.
어떤 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물 및 조성물은 투여된 비경구로 투여된다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사 또는 주입을 포함한다.
어떤 구현예에서, 비경구 투여는 주입에 의한 것이다. 주입은 만성적 또는 연속적 또는 짧은 또는 간헐적일 수 있다. 어떤 구현예에서, 주입된 약제는 펌프로 전달된다. 어떤 구현예에서, 주입은 정맥내에 의한다.
어떤 구현예에서, 비경구 투여는 주사에 의한다. 주사는 주사기 또는 펌프로 전달될 수 있다. 어떤 구현예에서, 주사는 볼러스 주사이다. 어떤 구현예에서, 주사는 조직 또는 장기에 직접적으로 투여된다. 어떤 구현예에서, 비경구 투여는 피하에 의한다.
어떤 구현예에서, 비경구 투여용 제형은 멸균된 수용액을 포함할 수 있고, 이 수용액은 또한 버퍼, 희석제 및 다른 적합한 첨가물 예컨대, 비제한적으로, 침투 향상제, 담체 화합물 및 다른 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 함유할 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물의 경구 투여용 제형은, 비제한적으로, 하기를 포함할 수 있다: 약제학적 담체, 부형제, 분말 또는 과립, 미세미립자, 나노미립자, 물 중 서스펜션 또는 용액 또는 비-수성 매질, 캡슐, 겔 캡슐, 샤세트, 정제 또는 소형 정제. 증점제, 풍미제, 희석제, 유화제, 분산 조제 또는 결합제가 바람직할 수 있다. 어떤 구현예에서, 경구 제형은, 본 발명의 화합물이 1 이상의 침투 향상제, 계면활성제 및 킬레이터와 함께 투여되는 것이다.
투여
어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 투여 처방 (예를 들면, 용량, 투여 빈도, 및 지속시간)에 따라서 투여되며, 여기서 상기 투여 처방은 원하는 효과가 달성되도록 선택될 수 있다. 원하는 효과는, 예를 들면, ApoCIII의 감소, 또는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD와 연관된 질환 또는 병태의 예방, 감소, 개선 또는 진행의 둔화일 수 있다.
어떤 구현예에서, 투여 처방의 변수는 대상체에서 원하는 농도의 약제학적 조성물을 초래하도록 조정된다. 용량 처방과 관련하여 사용되는 "약제학적 조성물의 농도"는 약제학적 조성물 중의 화합물, 올리고뉴클레오타이드, 또는 활성 성분을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, 용량 및 투여 빈도는 원하는 효과를 달성하기에 충분한 양으로 약제학적 조성물의 조직 농도 또는 혈장 농도를 제공하도록 조정된다.
투여는, 며칠에서 몇 개월까지 지속되는 치료 과정에 걸쳐서 또는 치유를 가져오거나 질환 상태의 축소가 달성될 때까지, 치료되는 질환 상태의 중증도 및 반응성에 의존적이다. 투여는 또한 약물 효력 및 대사에 의존적이다. 어떤 구현예에서, 복용량은 0.01μg 내지 100mg / kg의 체중이거나, 0.001mg - 1000mg 투여의 범위 내에 있으며, 매일, 매주, 매달 또는 매년 1회 이상, 또는 심지어 2년 내지 20년마다 1회로 주어질 수 있다. 성공적인 치료 후, 환자가 질환 상태의 재발을 예방하기 위한 유지 요법을 진행하게 하는 것이 바람직할 수 있으며, 여기서 상기 올리고뉴클레오타이드는 유지 용량으로 0.01μg 내지 100mg / kg의 체중의 범위에서 매일 1회 이상에서 20년마다 1회까지 또는 0.001mg 내지 1000mg 투여 범위에서 투여된다.
특정 병용 요법
어떤 구현예에서, 본원에서 기재된 화합물을 포함하는 제 1 제제는 1 이상의 제 2 제제와 공-투여된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 제 2 제제는 본원에서 기재된 제 1 제제와 동일한 질환, 장애, 또는 병태를 치료하도록 설계된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 제 2 제제는 본원에서 기재된 제 1 제제와 상이한 질환, 장애, 또는 병태를 치료하도록 설계된다. 어떤 구현예에서, 제 1 제제는 제 2 제제의 원하지 않는 부작용을 치료하도록 설계된다. 어떤 구현예에서, 제 2 제제는 제 1 제제의 원하지 않는 효과를 치료하기 위해 제 1 제제와 공-투여된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 제 2 제제는 본원에 기재된 바와 같은 1 이상의 약제학적 조성물의 원하지 않는 부작용을 치료하도록 설계된다. 어떤 구현예에서, 제 2 제제는 병용 효과를 야기하기 위해 제 1 제제와 공-투여된다. 어떤 구현예에서, 제 2 제제는 상승작용 효과를 야기하기 위해 제 1 제제와 공-투여된다. 어떤 구현예에서, 제 1 제제 및 제 2 제제의 공-투여는, 상기 제제가 독립적인 요법으로서 투여된다면 치료 또는 예방 효과를 달성하는데 필요할 복용량보다 더 낮은 복용량의 사용을 허용한다. 어떤 구현예에서, 제 1 제제는, 제 2 제제에 실패하거나 제 2 제제에 비-반응성인 대상체에게 투여된다. 어떤 구현예에서, 제 1 제제는 제 2 제제 대신에 대상체에게 투여된다.
어떤 구현예에서, 본원에서 기재된 1 이상의 조성물 및 1 이상의 다른 약제는 동시에 투여된다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 1 이상의 조성물 및 1 이상의 다른 약제는 상이한 시간에 투여된다. 어떤 구현예에서, 본원에서 기재된 1 이상의 조성물 및 1 이상의 다른 약제는 단일 제형으로 함께 제조된다. 어떤 구현예에서, 본원에서 기재된 1 이상의 조성물 및 1 이상의 다른 약제는 별도로 제조된다.
어떤 구현예에서, 제 2 제제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: ApoCIII 저하제, DGAT1 억제제, LPL 상승제, 콜레스테롤 저하제, 비-HDL 지질 저하 (예를 들면, LDL) 제제, HDL 상승제, 어유, 니아신 (니코틴산), 피브레이트, 스타틴, DCCR (디아족사이드의 염), 글루코오스-저하제 및/또는 항-당뇨제. 어떤 구현예에서, 제 1 제제는 제 2 제제의 최대 내성 용량과 조합하여 투여된다. 어떤 구현예에서, 제 1 제제는 제 2 제제의 최대 내성 용량에 반응하는데 실패한 대상체에게 투여된다.
ApoCIII 저하제의 예로는 제 1 제제와 상이한 ApoCIII 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 피브레이트 또는 Apo B 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
DGAT1 억제제의 예로는 가족성 카일로마이크론혈증 증후군 (FCS)을 치료하기 위해 현재 3상 임상 시험에서 시험중인 LCQ908 (Novartis Pharmaceuticals)이다.
LPL 상승제는 LPL의 수준을 상승시키는 유전자 요법제를 포함한다. 그와 같은 제제들의 예로는 정상 유전자의 결핍을 보충하는 정상 유전자의 카피들을 포함한다. 예를 들면, GlyberaR는 정상 LPL 유전자의 결핍을 보충하는 LPL 유전자의 정상 카피들을 제공함으로써 LPL 수준을 상승시킨다. 다른 예에서, LPL 상승제는, 돌연변이될 때, 기능이상 LPL을 야기할 수 있는 ApoC-II, GPIHBP1, APOA5, LMF1 또는 다른 유전자의 정상 카피들을 포함한다. 어떤 구현예에서, 제 1 제제 (예를 들면, ApoCIII ASO) 및 제 2 제제 (예를 들면, Glybera)의 조합은 부가 또는 상승 효과를 제공한다. 어떤 구현예에서, 제 1 제제 (예를 들면, ApoCIII ASO)는 제 2 제제 (예를 들면, GlyberaR)에 실패하거나 상기 제 2 제제에 비-반응성인 대상체에게 투여된다.
글루코오스-저하제 및/또는 항-당뇨제의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 치료적 생활방식 변화, PPAR 작용제, 디펩티딜 펩티다아제 (IV) 억제제, GLP-1 유사체, 인슐린 또는 인슐린 유사체, 인슐린 분비촉진제, SGLT2 억제제, 인간 아밀린 유사체, 바이구아나이드, 알파-글루코시다제 억제제, 메트포르민, 설포닐우레아, 로시글리타존, 메글리티나이드, 티아졸리딘디온, 알파-글루코시다제 억제제 등. 설포닐우레아는 아세토헥사마이드, 클로르프로파마이드, 톨부타마이드, 톨라자마이드, 글리메피라이드, 글리피자이드, 글리부라이드, 또는 글리클라자이드일 수 있다. 메글리티나이드는 나테글리나이드 또는 레파글리나이드일 수 있다. 티아졸리딘디온은 피오글리타존 또는 로시글리타존일 수 있다. 알파-글루코시다제는 아카르보스 또는 미글리톨일 수 있다.
콜레스테롤 또는 지질 저하 요법은, 비제한적으로, 치료적 생활방식 변화, 스타틴, 담즙산 봉쇄제, 니코틴산 및 피브레이트를 포함할 수 있다. 스타틴은 아토르바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 및 심바스타틴 등일 수 있다. 담즙산 봉쇄제는 콜레세벨람, 콜레스티라민, 콜레스티폴 등일 수 있다. 피브레이트는 젬피브로질, 페노파이브레이트, 클로파이브레이트 등일 수 있다. 치료적 생활방식 변화는 식이 지방 제한일 수 있다.
HDL 증가제는 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 (CETP) 억제 약물 (예컨대 토르세트라핍), 페록시솜 증식 활성화된 수용체 작용제, Apo-A1, 피오글리타존 등을 포함한다.
특정 치료 모집단
초고트리글리세라이드혈증의 일부 유형은 프레드릭슨 분류 시스템 또는 Tremblay (Tremblay et al.,J Clin Lipidol, 2011, 5:37-44)에 의해 기재된 분류 시스템에 의해 확인될 수 있다. 어떤 구현예에서, 본원에 기재된 화합물, 조성물 및 방법은 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체를 치료하는데 유용하다.
프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 대상체는 췌장염, 심혈관 및 대사성 질환의 유의미한 위험이 있는 대상체이다. 이들 대상체의 경우, 반복되는 췌장염이 가장 쇠약하게 하고 잠재적으로 치명적인 합병증이며; 다른 후유증은 죽상동맥경화증 및 당뇨병에 대한 증가된 경향을 포함한다.
프레드릭슨 I형, FCS, LPLD, 대상체는 유의미한 양의 기능적으로 활성인 LPL이 결핍되어 있다. ApoCIII은 TG 대사에서 중요한 역할을 하고 작용성 또는 부분적으로 작용성 LPL을 갖는 대상체에서의 심혈관 질환에 대해 독립적인 위험 인자이다. ApoCIII은 현재 비-프레드릭슨 I형 초고트리글리세라이드혈증 대상체를 치료하기 위해 임상 시험중이다. 그러나, ApoCIII 경로가 LPL 경로를 거쳐 작용하는 것으로 생각되기 때문에, ApoCIII의 억제는 프레드릭슨 I형, FCS, LPLD, 대상체에 대한 치료 선택인 것으로 간주되지 않는다.
ApoCIII 억제는, 본 명세서에서 보여진 바와 같이, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD, 대상체에서 예상외로 TG 수준을 감소시키고/시키거나 HDL 수준을 상승시킨다. TG의 감소 및/또는 HDL의 증가는, 결국, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD와 연관된, 그것의 질환, 장애, 또는 증상을 예방하거나, 치료하거나, 지연시키거나 개선시킬 수 있다.
특정 화합물
본 발명자들은 US 20040208856 (US 특허 7,598,227), US 20060264395 (US 특허 7,750,141), WO 2004/093783 및 WO 2012/149495 (모두는 참조로 본원에 편입되어 있음)에서 ApoCIII을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함하는 조성물, 및 상기 안티센스 화합물의 의해 ApoCIII을 억제하는 방법을 이전에 개시했다. 이들 적용에서, 일련의 안티센스 화합물은 공개된 서열 (서열번호: 4로서 본원에 편입된 게놈 서열을 나타내는 유전자은행 수납 번호 NT_035088.1, 및 서열번호: 1로서 본원에 편입된 유전자은행 수납 번호 NM_000040.1의 뉴클레오타이드 6238608 내지 6242565)을 사용하여, 인간 ApoCIII RNA의 상이한 영역을 표적화하도록 설계되었다. 화합물은, 5-뉴클레오타이드 "윙"이 양 측면에 (5' 및 3' 방향) 배치된, 10개의 2'-데옥시뉴클레오타이드로 이루어진 중심 "갭" 영역으로 구성된, 20개의 뉴클레오타이드 길이의 키메라 올리고뉴클레오타이드 ("갭머")였다. 윙은 (2'-MOE) 뉴클레오타이드로도 공지된 2'-O-(2-메톡시에틸) 뉴클레오타이드로 구성된다. 뉴클레오사이드간 (골격) 연결은 올리고뉴클레오타이드 전체에 결쳐 포스포로티오에이트 (P=S)이다. 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
안티센스 화합물을 HepG2 세포에서 인간 ApoCIII mRNA 수준에 대한 그것의 효과에 대해 정량적 실시간 PCR로 분석했다. 몇 개의 화합물은 적어도 45%의 ApoCIII mRNA 억제를 실증했고 따라서 바람직하다. 몇 개의 화합물은 적어도 50%의 인간 ApoCIII mRNA 억제를 실증했고 따라서 바람직하다. 몇 개의 화합물은 적어도 60%의 인간 ApoCIII mRNA 억제를 실증했고 따라서 바람직하다. 몇 개의 화합물은 적어도 70%의 인간 ApoCIII mRNA 억제를 실증했고 따라서 바람직하다. 몇 개의 화합물은 적어도 80%의 인간 ApoCIII mRNA 억제를 실증했고 따라서 바람직하다. 몇 개의 화합물은 적어도 90%의 인간 ApoCIII mRNA 억제를 실증했고 따라서 바람직하다.
이들 바람직한 안티센스 화합물이 상보적인 표적 영역은 "바람직한 표적 분절"로 지칭되며 따라서 안티센스 화합물에 의한 표적화에 바람직하다.
실시예
비제한적인 개시내용 및 참고에 의한 편입
본원에 기재된 특정 화합물, 조성물 및 방법이 특정 구현예에 따라서 구체적으로 기재되더라도, 하기 실시예는 본원에서 기재된 화합물을 단지 설명하기 위해 제공되며 본원에서 기재된 화합물을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에 인용된 각각의 참조는 그 전체가 참고로 본원에 편입된다.
실시예 1: ISIS 304801 임상 시험
본원에 기재된 바와 같이, 개방 표지 연구는, 연구 약물 ISIS 304801에 대한 반응, 및 연구 약물 ISIS 304801의 약동학적 효과를 평가하기 위하여, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD가 있는 환자에서 수행되었다. ISIS 304801은 US 특허 7,598,227에 이전에 개시되었고 서열번호: 1 (유전자은행 수납 번호 NM_000040.1) 상의 위치 508에서 개시하거나 서열번호: 2 (뉴클레오타이드 20262640 내지 20266603으로부터 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_033899.8) 상의 위치 3139에서 개시하는 서열 5'- AGCTTCTTGTCCAGCTTTAT-3' (서열번호: 3)을 갖는다. ISIS 304801은 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절, 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절, 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절을 포함하는 5-10-5 MOE 갭머 모티프를 가지며, 여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절 및 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메티옥시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸 시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. ISIS 304801은 대상체에게 투여될 때 ApoC-III을 억제하는데 강력하며 내성이 있는 것으로 나타났다.
이 연구에 선발된 많은 환자는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD를 갖는 것으로 진단되었다. 본 연구를 위한 스크리닝 동안 TG 수준≥880mg/dL, 공복 TG 수준≥750mg/dL의 이력이 있고/있거나 식이 후이지만 치료 시작 전에 TG 수준≥440mg/dL의 이력이 있는 프레드릭슨 I형, FCS, LPLD, 환자를 본 연구에 포함시킨다.
연구 모집단을 확장시키기 위해, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD로 진단되지 않았지만 하이퍼TG를 겪고 있는 일부 환자를 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD에 대해 스크리닝할 수 있다. 일례로, 하이퍼TG가 있는 환자는 TG 수준≥880mg/dL을 갖는 이들의 병력을 통해 및/또는 공복 TG 수준≥750mg/dL에 대한 혈액 중 지질의 원심분리에 의해 확인될 것이다. 공복 TG 수준≥750mg/dL을 갖는 환자는 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD의 진단을 확증하기 위해 하기 파라미터 중 적어도 하나에 대해 추가로 스크리닝될 것이다:
(1) 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD을 유발하는 것으로 공지된 LPL (예를 들면, P207L, G188L, D9N), ApoC2, GPIHBP1, ApoC5 또는 LMF1과 같은 유전자에서의 동종접합 또는 복합 이종접합 기능 손실 돌연변이;
(2) LPL 활성 ≤ 정상의 20%; 및
(3) 항-LPL 항체.
프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD로 진단된 각 환자의 경우, 참여 기간은, 연구 참여 총 35주 동안, ≤8-주 스크리닝 기간 (4-주 엄격한 식이 조절 런-인(run-in) 자격 기간을 포함함), 1-주 연구 자격/기준선 평가 기간, 13-주 치료 기간, 및 13주의 후처리 평가 기간으로 이루어진다. 식이 조절된 TG 수준≥440mg/dL을 갖는 환자도 본 연구에 포함된다. 수반되는 약물치료 및 부작용 (AE)은 본 연구의 전체 기간에 걸쳐 기록된다.
환자는 연구 참여 지속시간 동안 엄격히 조절된 식이 (스크리닝 절차가 수행된 후)에 두었다. 조절된 식이 28일 후, 환자는 기준선 측정치를 갖고 본 연구의 치료 단계로의 등록 자격에 대해 평가된다.
평가를 위한 종료점은 하기를 포함한다: 공복 지질단백질, 총 ApoC-III, TG,　ApoC-II (총 및 VLDL과 연관됨), 아포지질단백질 B-100 (apoB-100 및/또는 apoB-48), 아포지질단백질 A-1 (apoA-1), 아포지질단백질 A-2 (apoA-2), 아포지질단백질 E (apoE), 총 콜레스테롤 (TC), 저-밀도 지질단백질-콜레스테롤 (LDL-C), LDL-TG, VLDL-C, VLDL-TG, 비-고-밀도 지질단백질-콜레스테롤 (비-HDL-C), 비-HDL-TG, HDL-C, HDL-TG, 카일로마이크론-콜레스테롤 (CM-C), 카일로마이크론-트리글리세라이드 (CM-TG), 유리 지방산 (FFA), 및 글리세롤 수준에 의해 측정된 ISIS 304801의 약동학적 (PD) 효과; 식후　지질, 아포지질단백질 및 지질단백질 특성 및 동력학, 및 글루코오스 수준; 및, ISIS 304801의 안전성, 내성 및 약동학 (PK). 평가되는 추가의 종료점은 CETP의 감소 또는 ApoA1, PON1, 지방 청소능 및 트리글리세라이드 청소능의 증가, 및 HDL 대 TG 비의 증진을 포함할 수 있다.
연구 약물 및 치료
2-mL　마개를 한　유리 바이알에 포함된 연구 약물 ISIS 304801 (200 mg/mL, 1.0 mL)의 용액을 제공한다. 바이알은 1회용이다. ISIS 304801 용액 및 위약은 약사 (또는 자격을 갖춘 대리인)에 의해 제조된다. 훈련된 전문가는 각 투여일에 300mg의 연구 약물을 단일 SC 주사로서 복부, 허벅지, 또는 팔 상부의 외부 영역에 투여한다.
환자는 13주 동안 1주 1회 (1, 8, 15, 22, 29, 36, 43, 50, 57, 64, 71, 78, 및 85일) SC 주사에 의해 투여되는 13개의 연구 약물 용량을 투여받는다. 환자는 1일 ±0일 및 8, 15, 22, 29, 36, 43, 50, 57, 64, 71, 78, 및 85일 ±1일 내에 치료 방문을 완료한다. 광범위한 PK 그룹의 환자도 또한 각각 1일 및 85일에 대해 2일 및 86일 ±0일에 24 시간 채혈 동안 클리닉에 체류한다. 환자는 계획된 방문일 중 92일 및 99일 ±1일 내에, 127일 ±3일 내에, 및 176일 ±5일 내에 후속 방문을 완료한다. 식후　평가 그룹의 환자도 또한 103일 ±2일 내에 및 103일 방문 다음날에 24시간 채혈 동안 클리닉에 체류한다.
PD 측정 (8, 15, 29, 43, 57, 71, 및 85일)을 위한 채혈을 포함하는 각 방문에 앞서, 환자에게 그들의 방문 이전 저녁에 저녁식사를 위해 표준화된 미리-조리된 식사 (환자당 그리고 시점당 동일하게 알맞은 지방 섭취를 보장하기 위해)를 제공하고 그후 그들은 단식을 유지한다. 알코올 소비는 이들 임상 방문 전 48시간 동안 허용되지 않는다.
혈액을 8, 15, 29, 43, 57, 71, 및 85일 (연구 약물 투여 전)에 VLDL,　ApoC-III 및 다른 PD 마커의 측정을 위해 공복 후 및/또는 식후 수집한다.
식후　평가 그룹의 환자는 식후　평가 전 2일 동안 표준화된 미리-조리된 식사 (점심 및 저녁식사(제공된) 그리고 아침식사 및 스낵에 대한 지침)를 섭취한다. 각각의 식후　평가일에, 채혈 후, 환자는 안정한 방사선동위원소 추적자가 포함된 1일 칼로리 요건의 약 1/3을 나타내는 표준화된 액체 식사를 섭취하고, 그 다음 연속하는 혈액 샘플링이 뒤따른다. 환자는 액체 식사를 소비하고 9시간 후 표준화된 미리-조리된 식사를 제공받고, 그 후 이들은 다음날 24 시간 채혈 때까지 단식한다.
트러프(trough) 샘플 수집에 더하여, 광범위한 PK 평가 그룹의 환자는 연구 약물의 처음 (1-2일) 및 마지막 (85-86일) 투여 후 24시간 동안 연속하는 혈액 샘플링을 진행한다. PK 파라미터 예컨대 곡선하 면적 (AUC), 트러프 농도 (Cmin) 및 다른 파라미터들이 평가될 것이다.
후처리 평가 기간
환자를 연구 일수 176일까지 추적한다. 이 시간 동안, 환자는 안전성 및 임상 실험실 평가 (채혈), 식이 상담 및 모니터링, 수반되는 약물치료 용법 기록, 및 AE 사례 수집을 위해 연구 일수 92, 99, 127, 및 176일 (및 식후 평가 그룹의 환자에 대해서는 103일)에 외래환자 임상 방문을 위한 연구 센터에 다시 방문한다.
PK 및 PD 분석을 위한 혈액 샘플을 후처리 평가 기간 전체에 걸쳐서 주기적으로 수집한다. 혈청 화학, 요검사, 응고, 보체, 혈액학, 면역 기능, 갑상선 기능, 및 전체 지질 패널의 실험실 측정을 본 연구 전체에 걸쳐서 다양한 시점에 수행한다.
식후　평가를 아래에서 기재된 바와 같이 환자의 서브셋에서 수행한다.
식후　식사, 샘플링 계획, 및 평가
지질단백질 대사에 대한 식후 평가를, 라벨링된 추적자,　3H-팔미테이트 (300μCi, Perkin Elmer Inc., Woodbridge, ON, Canada)로 보강되고, 액체 식사 내로 초음파처리된 방사선표지된 식사를 사용하여 수행한다. 팔미테이트는 임의의 식이의 공통 구성요소인 지방산이다. 3H-팔미테이트 추적자는 X-선에 상응하는 약한 방사능을 방출한다. 식이 팔미테이트는, 그것이 소화관의 장세포에서 형성됨으로써, 카일로마이크론 내로 편입되기 때문에, 이것은 새로-형성된　카일로마이크론의 순환으로부터의 출현 및 청소능의 모니터링을 가능하게 한다. 카일로마이크론 출현 및 청소능의 식후　동력학을 연구하기 위해 적용되는 방법론은 익히 확립되어 있다 (Mittendorfer　et al. 2003, Diabetes, 52: 1641-1648;　Bickerton　et al. 2007; Normand-Lauziere　et al. 2010, PLoS. One, 5: e10956).
소량 (300μCi)의 방사선표지된 지방산 (3H-팔미테이트)을 포함하는 액체 식사 (밀크셰이크와 유사함)가 제공될 것이다. 액체 식사는 1일 칼로리 요건의 약 1/3을 제공할 것이다. 상기 식사의 섭취 9시간 후 이전 1시간부터, [U-13C]-K 팔미테이트　(100 ml 25% 인간 혈청 알부민 중 0.01 μmol/kg/min; Cambridge Isotopes Laboratories Inc., Andover, MA)의 일정한 주입물, 및 [1,1,2,3,3-2H]-글리세롤 (Cambridge Isotopes Laboratories Inc.)의 감작된(primed) (1.6　μmol/kg) 연속적 (0.05 μmol/kg/min) 주입물을 이전에 기재된 바와 같이 투여한다 (Normand-Lauziere　et al. 2010, PLoS. One, 5: e10956). 혈장 팔미테이트 및 글리세롤 출현율을, 각각 90ml/kg 및 230ml/kg의 분표 용적이라 가정하고, 스틸의 비-정상 상태 방정식을 사용하여 계산한다 (Gastaldelli　et al. 1999, J Appl. Physiol, 87: 1813-1822).
혈액 샘플을 하기 표에서 표시된 바와 같이 치료 단계 전 및 후 날짜에 방사선표지된　식사의 섭취 전 및 후에 간격을 두고 채취한다. 표준화된 식사가 채혈 9시간 후 참가자에게 주어진다. 혈액을 Na2 EDTA 및 오를리스타트　(30　μg/ml, Roche, Mississauga, Canada)를 포함하는 튜브에 수집하여 시험관내 트리아실글리세롤　지방분해를 방지하고, 별개의 샘플을 혈장 글루코스 결정을 위해 NaF　튜브에서 수집할 것이다.
하기를 각 시점에서 측정한다:
ㆍ 3H-추적자에 대한 혈장 및 CM 분획 수준
ㆍ 혈장 [U-13C]-K　팔미테이트 및 [1, 1, 2, 3, 3-2H]-글리세롤 출현율
ㆍ TG, TC, 및 apoB에 대한 혈장 및 CM 분획 수준
ㆍ apo CIII, apo CII, 및 apo E에 대한 혈장 및 VLDL 분획 수준
ㆍ 글루코오스에 대한 혈장 수준
혈장 샘플은 또한 약물 결합 단백질의 프로파일링, 생분석적　방법 검증 목적, 안정성 및 대사물 평가에 사용되거나 ISIS 304801의 혈장 구성요소와의 다른 작용을 평가하기 위해 사용될 수 있다.
결과
본 연구에 채용된, 프레드릭슨 I형 이상지질혈증, FCS, LPLD로 진단된 3명의 환자에 대한 결과가 하기에 주어진다. 2명의 환자는 P207L 결핍(null) LPL 유전자 돌연변이에 대해 동종접합이고, 1명의 환자는 P207L 및 G188E 결핍 LPL 유전자 돌연변이에 대해 복합 이종접합이다. 모든 환자는 LPL 매스를 갖지만 아예 없거나 극도로 낮은 수준 (<5%)의 LPL 활성을 갖는다. 환자는 식이 제공 후 TG 수준 ≥440mg/dL을 가졌지만 치료 시작 전에는 아니다. 상기 환자 중 2명은 과거 급성 췌장염 이력을 가졌고 1명은 2007년 12월에 GlyberaR에 의한 유전자 요법을 경험했다.
공복 ApoCIII 수준의 퍼센트 변화에 대한 데이타가 아래의 표에서 제공된다. 상기 결과는, ISIS 304801에 의한 처리가 ApoC-III의 공복 수준을 감소시켰음을 나타낸다. 'n.d.'는 특정한 시점에 대해 아직 수집되지 않았던 데이타를 나타낸다.
표 1
공복 ApoCIII 수준의 퍼센트 변화
Figure 112015085604362-pct00021
공복 트리글리세라이드 수준의 수준을 또한 측정했다. 공복 트리글리세라이드 수준의 퍼센트 변화, 뿐만 아니라 절대 수준에 대한 데이타도 아래의 표에서 제공된다. 상기 결과는, ISIS 304801에 의한 처리가 트리글리세라이드의 공복 수준을 감소시켰음을 나타낸다.
표 2
공복 트리글리세라이드 수준의 퍼센트 변화
Figure 112015085604362-pct00022
표 3
공복 트리글리세라이드 수준 (mg/dL)
Figure 112015085604362-pct00023
공복 비-HDL 콜레스테롤 수준의 수준을 또한 측정했다. 공복 비-HDL 콜레스테롤 수준의 퍼센트 변화, 뿐만 아니라 절대 수준에 대한 데이타도 아래의 표에서 제공된다. 상기 결과는, ISIS 304801에 의한 처리가 비-HDL 콜레스테롤의 공복 수준을 감소시켰음을 나타낸다.
표 4
공복 비-HDL 콜레스테롤 수준의 퍼센트 변화
Figure 112015085604362-pct00024
표 5
공복 비-HDL 콜레스테롤 수준 (mg/dL)
Figure 112015085604362-pct00025
ApoB-48의 수준, 카일로마이크론의 치수를 또한 측정했다. ApoB-48 수준의 퍼센트 변화, 뿐만 아니라 절대 수준에 대한 데이타도 아래의 표에서 제공된다. 상기 결과는, ISIS 304801에 의한 처리가 ApoB-48의 공복 수준을 감소시켰음을 나타낸다.
표 6
ApoB-48 수준의 퍼센트 변화
Figure 112015085604362-pct00026
표 7
ApoB-48 수준 (mg/dL)
Figure 112015085604362-pct00027
공복 FCS 환자의 전체 지질 프로파일을 처리의 종료시 측정하고 기준선과 비교했다. 데이타는 하기 표에 주어지고 ISIS 304801에 의한 처리가 환자의 전체 지질 프로파일을 개선시켰음을 나타낸다.
표 8
지질 프로파일의 퍼센트 변화 (평균)
Figure 112015085604362-pct00028
표 9
개별 환자 프로파일
Figure 112015085604362-pct00029
안전성 평가
ISIS 304801에 의한 처리는 ULN 3회 초과의 간 효소 상승, 신장 기능 이상, 다른 실험실 값에서의 유의미한 임상 변화, 또는 관련된 SAE 또는 유의미한 AE 중 어떠한 사안도 갖지 않았다.
처리는, 치료 없이 해결되는, 감기-유사(flu-like) 증상이 없고 드문 약한 부위 반응을 갖는 모든 환자에게 용인되었다. 주사 부위 반응으로 인한 중단은 없었다.
SEQUENCE LISTING <110> Isis Pharmaceuticals, Inc. <120> MODULATION OF APOLIPOPROTEIN CIII (APOCIII) EXPRESSION IN LIPOPROTEIN LIPASE DEFICIENT (LPLD) POPULATIONS <130> BIOL0218WO <150> 61/880,779 <151> 2013-09-20 <150> 61/764,969 <151> 2013-02-14 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 533 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (47)..(346) <400> 1 tgctcagttc atccctagag gcagctgctc caggaacaga ggtgcc atg cag ccc 55 Met Gln Pro 1 cgg gta ctc ctt gtt gtt gcc ctc ctg gcg ctc ctg gcc tct gcc cga 103 Arg Val Leu Leu Val Val Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala Ser Ala Arg 5 10 15 gct tca gag gcc gag gat gcc tcc ctt ctc agc ttc atg cag ggt tac 151 Ala Ser Glu Ala Glu Asp Ala Ser Leu Leu Ser Phe Met Gln Gly Tyr 20 25 30 35 atg aag cac gcc acc aag acc gcc aag gat gca ctg agc agc gtg cag 199 Met Lys His Ala Thr Lys Thr Ala Lys Asp Ala Leu Ser Ser Val Gln 40 45 50 gag tcc cag gtg gcc cag cag gcc agg ggc tgg gtg acc gat ggc ttc 247 Glu Ser Gln Val Ala Gln Gln Ala Arg Gly Trp Val Thr Asp Gly Phe 55 60 65 agt tcc ctg aaa gac tac tgg agc acc gtt aag gac aag ttc tct gag 295 Ser Ser Leu Lys Asp Tyr Trp Ser Thr Val Lys Asp Lys Phe Ser Glu 70 75 80 ttc tgg gat ttg gac cct gag gtc aga cca act tca gcc gtg gct gcc 343 Phe Trp Asp Leu Asp Pro Glu Val Arg Pro Thr Ser Ala Val Ala Ala 85 90 95 tga gacctcaata ccccaagtcc acctgcctat ccatcctgcg agctccttgg 396 gtcctgcaat ctccagggct gcccctgtag gttgcttaaa agggacagta ttctcagtgc 456 tctcctaccc cacctcatgc ctggcccccc tccaggcatg ctggcctccc aataaagctg 516 gacaagaagc tgctatg 533 <210> 2 <211> 3964 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 ctactccagg ctgtgttcag ggcttggggc tggtggaggg aggggcctga aattccagtg 60 tgaaaggctg agatgggccc gaggcccctg gcctatgtcc aagccatttc ccctctcacc 120 agcctctccc tggggagcca gtcagctagg aaggaatgag ggctccccag gcccaccccc 180 agttcctgag ctcatctggg ctgcagggct ggcgggacag cagcgtggac tcagtctcct 240 agggatttcc caactctccc gcccgcttgc tgcatctgga caccctgcct caggccctca 300 tctccactgg tcagcaggtg acctttgccc agcgccctgg gtcctcagtg cctgctgccc 360 tggagatgat ataaaacagg tcagaaccct cctgcctgtc tgctcagttc atccctagag 420 gcagctgctc caggtaatgc cctctgggga ggggaaagag gaggggagga ggatgaagag 480 gggcaagagg agctccctgc ccagcccagc cagcaagcct ggagaagcac ttgctagagc 540 taaggaagcc tcggagctgg acgggtgccc cccacccctc atcataacct gaagaacatg 600 gaggcccggg aggggtgtca cttgcccaaa gctacacagg gggtggggct ggaagtggct 660 ccaagtgcag gttcccccct cattcttcag gcttagggct ggaggaagcc ttagacagcc 720 cagtcctacc ccagacaggg aaactgaggc ctggagaggg ccagaaatca cccaaagaca 780 cacagcatgt tggctggact ggacggagat cagtccagac cgcaggtgcc ttgatgttca 840 gtctggtggg ttttctgctc catcccaccc acctcccttt gggcctcgat ccctcgcccc 900 tcaccagtcc cccttctgag agcccgtatt agcagggagc cggcccctac tccttctggc 960 agacccagct aaggttctac cttaggggcc acgccacctc cccagggagg ggtccagagg 1020 catggggacc tggggtgccc ctcacaggac acttccttgc aggaacagag gtgccatgca 1080 gccccgggta ctccttgttg ttgccctcct ggcgctcctg gcctctgccc gtaagcactt 1140 ggtgggactg ggctgggggc agggtggagg caacttgggg atcccagtcc caatgggtgg 1200 tcaagcagga gcccagggct cgtccagagg ccgatccacc ccactcagcc ctgctctttc 1260 ctcaggagct tcagaggccg aggatgcctc ccttctcagc ttcatgcagg gttacatgaa 1320 gcacgccacc aagaccgcca aggatgcact gagcagcgtg caggagtccc aggtggccca 1380 gcaggccagg tacacccgct ggcctccctc cccatccccc ctgccagctg cctccattcc 1440 cacccgcccc tgccctggtg agatcccaac aatggaatgg aggtgctcca gcctcccctg 1500 ggcctgtgcc tcttcagcct cctctttcct cacagggcct ttgtcaggct gctgcgggag 1560 agatgacaga gttgagactg cattcctccc aggtccctcc tttctccccg gagcagtcct 1620 agggcgtgcc gttttagccc tcatttccat tttcctttcc tttccctttc tttctctttc 1680 tatttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt 1740 tctttctttc ctttctttct ttcctttctt tctttccttt ctttctttct ttcctttctt 1800 tctctttctt tctttctttc ctttttcttt ctttccctct cttcctttct ctctttcttt 1860 cttcttcttt tttttttaat ggagtctccc tctgtcacct aggctggagt gcagtggtgc 1920 catctcggct cactgcaacc tccgtctccc gggttcaacc cattctcctg cctcagcctc 1980 ccaagtagct gggattacag gcacgcgcca ccacacccag ctaatttttg tatttttagc 2040 agagatgggg 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gaggggagga ggatgaagag 480 gggcaagagg agctccctgc ccagcccagc cagcaagcct ggagaagcac ttgctagagc 540 taaggaagcc tcggagctgg acgggtgccc cccacccctc atcataacct gaagaacatg 600 gaggcccggg aggggtgtca cttgcccaaa gctacatagg gggtggggct ggaagtggct 660 ccaagtgcag gttcccccct cattcttcag gcttagggct ggaggaagcc ttagacagcc 720 cagtcctacc ccagacaggg aaactgaggc ctggagaggg ccagaaatca cccaaagaca 780 cacagcatgt tggctggact ggacggagat cagtccagac cgcaggtgcc ttgatgttca 840 gtctggtggg ttttctgctc catcccaccc acctcccttt gggcctcgat ccctcgcccc 900 tcaccagtcc cccttctgag agcccgtatt agcagggagc cggcccctac tccttctggc 960 agacccagct aaggttctac cttaggggcc acgccacctc cccagggagg ggtccagagg 1020 catggggacc tggggtgccc ctcacaggac acttccttgc aggaacagag gtgccatgca 1080 gccccgggta ctccttgttg ttgccctcct ggcgctcctg gcctctgccc gtaagcactt 1140 ggtgggactg ggctgggggc agggtggagg caacttgggg atcccagtcc caatgggtgg 1200 tcaagcagga gcccagggct cgtccatagg ccgatccacc ccactcagcc ctgctctttc 1260 ctcaggagct tcagaggccg aggatgcctc ccttctcagc ttcatgcagg gctacatgaa 1320 gcacgccacc aagaccgcca aggatgcact gagcagcgtg caggagtccc aggtggccca 1380 gcaggccagg tacacccgct ggcctccctc cccatccccc ctgccagctg cctccattcc 1440 cacccacccc tgccctggtg agatcccaac aatggaatgg aggtgctcca gcctcccctg 1500 ggcctgtgcc tcttcagcct cctctttcct cacagggcct ttgtcaggct gctgcgggag 1560 agatgacaga gttgagactg cattcctccc aggtccctcc tttctcccca gagcagtcct 1620 agggcgcgcc gttttagccc tcatttccat tttcctttcc tttccctttc tttccctttc 1680 tatttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt 1740 tctttctttc ctttctttct ttcttttctt ctttctttct ttcctttctt tctctttctt 1800 tctttctttc tttccttttt ctttctttcc ctctcttcct ttctctcttt ctttcttctt 1860 cttttttttt taatggagtc tccctctgtc acccaggctg gagtgcagtg gtgccatctc 1920 ggctcactgc aacctccgtc tcccgggttc aacccattct cctgcctcag cctcccaagt 1980 agctgggatt acaggcacgc gccaccacac ccagctaatt tttgtatttt tagcagagat 2040 ggggtttcac catgttggcc aggttggtct tgaattcctg acctcagggg atcctcctgc 2100 ctcggcctcc caaagcgctg ggattacagg catgagccac tgcgcctggc cccattttcc 2160 ttttctgaag gtctggctag agcagtggtc ctcagccttt ttggcaccag ggaccagttt 2220 tgtggtggac aatttttcca tgggccagcg gggatggttt tgggatgaag ctgttccacc 2280 tcagatcatc aggcattaga ttctcataag gagccctcca cctagatccc tggcatgtgc 2340 agttcacaac agggttcaca ctcctatgag aatgtaaggc cacttgatct gacaggaggc 2400 ggagctcagg cggtattgct cactcaccca ccactcactt cgtgctgtgc agcccggctc 2460 ctaacagtcc atggaccagt acctatctat gacttggggg ttggggaccc ctgggctagg 2520 ggtttgcctt gggaggcccc acctgaccta attcaagccc gtgagtgctt ctgctttgtt 2580 ctaagacctg gggccagtgt gagcagaagt gtgtccttcc tctcccatcc tgcccctgcc 2640 catcagtact ctcctctccc ctactccctt ctccacctca ccctgactgg cattagctgg 2700 catagcagag gtgttcataa acattcttag tccccagaac cggctttggg gtaggtgtta 2760 ttttctcact ttgcagatga gaaaattgag gctcagagcg attaggtgac ctgccccaga 2820 tcacacaact aatcaatcct ccaatgactt tccaaatgag aggctgcctc cctctgtcct 2880 accctgctca gagccaccag gttgtgcaac tccaggcggt gctgtttgca cagaaaacaa 2940 tgacagcctt gacctttcac atctccccac cctgtcactt tgtgcctcag gcccaggggc 3000 ataaacatct gaggtgacct ggagatggca gggtttgact tgtgctgggg ttcctgcaag 3060 gatatctctt ctcccagggt ggcagctgtg ggggattcct gcctgaggtc tcagggctgt 3120 cgtccagtga agttgagagg gtggtgtggt cctgactggt gtcgtccagt ggggacatgg 3180 gtgtgggtcc catggttgcc tacagaggag ttctcatgcc ctgctctgtt gcttcccctg 3240 actgatttag gggctgggtg accgatggct tcagttccct gaaagactac tggagcaccg 3300 ttaaggacaa gttctctgag ttctgggatt tggaccctga ggtcagacca acttcagccg 3360 tggctgcctg agacctcaat accccaagtc cacctgccta tccatcctgc cagctccttg 3420 ggtcctgcaa tctccagggc tgcccctgta ggttgcttaa aagggacagt attctcagtg 3480 ctctcctacc ccacctcatg cctggccccc ctccaggcat gctggcctcc caataaagct 3540 ggacaagaag ctgctatgag tgggccgtcg caagtgtgcc atctgtgtct gggcatggga 3600 aagggccgag gctgttctgt gggtgggcac tggacagact ccaggtcagg caggcatgga 3660 ggccagcgct ctatccacct tctggtagct gggcagtctc tgggcctcag tttcttcatc 3720 tctaaggtag gaatcaccct ccgtaccctg ccttccttga cagctttgtg cggaaggtca 3780 aacaggacaa taagtttgct gatactttga taaactgtta ggtgctgcac aacatgactt 3840 gagtgtgtgc cccatgccag ccactatgcc tggcacttaa gttgtcatca gagttgagac 3900 tgtgtgtgtt tactcaaaac tgtggagctg acctccccta tccaggccac ctagccct 3958

Claims (34)

  1. i) 동물에서 FCS를 치료, 예방, 지연 또는 개선하는 방법; 또는 ii) FCS가 있는 동물에서 췌장염 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법에 사용하기 위한, ApoCIII 특이적 억제제를 포함하는 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 ApoCIII 특이적 억제제가 ApoCIII의 발현 또는 활성을 억제할 수 있는 핵산, 펩타이드, 항체, 또는 소분자를 포함하는 것인 제약 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 동물이 LPL 활성을 거의 또는 아예 갖지 않는 것인 제약 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 ApoCIII 특이적 억제제가 ApoCIII을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함하며, 여기서 상기 안티센스 화합물은 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 것인 제약 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 서열번호: 3의 핵염기 서열의 적어도 8 개의 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 임의로 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 서열번호: 3을 포함하거나 또는 이로 구성된 핵염기 서열을 갖는 것인 제약 조성물.
  6. 제4항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열이 서열번호: 1, 서열번호: 2 또는 서열번호: 4의 핵염기 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 상보적인 것인 제약 조성물.
  7. 제4항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 단일-가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 이중-가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성되는 것인 제약 조성물.
  8. 제4항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 12 내지 30 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되고, 임의로 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 20 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 것인 제약 조성물.
  9. 제4항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결, 변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기를 갖는 것인 제약 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된 뉴클레오사이드간 연결이 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고, 상기 변형된 당이 2환식 당 또는 2'-O-메톡시에틸이고, 상기 변형된 핵염기가 5-메틸시토신인 제약 조성물.
  11. 제4항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 하기:
    (a) 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절;
    (b) 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절;
    (c) 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절
    을 포함하며, 여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그들 사이에 배치되고 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는 것이거나; 또는 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 하기:
    (a) 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절;
    (b) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절;
    (c) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절
    을 포함하며, 여기서 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 그리고 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 제약 조성물.
  12. i) 동물에서 FCS를 치료, 예방, 지연 또는 개선하는 방법; 또는 ii) FCS가 있는 동물에서 췌장염 또는 그것의 증상을 예방, 지연 또는 개선하는 방법에 사용하기 위한, 서열번호: 3의 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 포함하는 제약 조성물이며, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기:
    (a) 10 개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 구성된 갭 분절;
    (b) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 5' 윙 분절;
    (c) 5 개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된 3' 윙 분절
    을 포함하고, 상기 갭 분절은 상기 5' 윙 분절 및 상기 3' 윙 분절에 바로 인접하면서 그것들 사이에 배치되고, 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하고, 각 시토신은 5'-메틸시토신이고, 각 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 제약 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 동물이 LPL 활성을 거의 또는 아예 갖지 않는 것인 제약 조성물.
  14. 제1항에 있어서,
    a) 조성물이 비경구로 투여되며, 여기서 비경구 투여는 임의로 피하 투여이고/거나,
    b) 조성물이 제 2 제제와 조합하여 사용하기 위한 것이며, 여기서 임의로 제 2 제제는 ApoCIII 저하제, 콜레스테롤 저하제, 비-HDL 지질 저하제, LDL 저하제, TG 저하제, 콜레스테롤 저하제, HDL 상승제, 어유, 니아신, 피브레이트, 스타틴, DCCR (디아족사이드의 염), 글루코오스-저하제 또는 항-당뇨제로부터 선택되고, 추가로 임의로 제 2 제제는 조성물과 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인
    제약 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, ApoCIII 억제제 또는 화합물이 염 형태인 제약 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  17. 제1항에 있어서, FCS가 유전자 스크리닝에 의해 확인되는 것인 제약 조성물.
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