KR102159394B1 - 바다제비집에서 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 - Google Patents

바다제비집에서 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 바다제비집에서 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 MMP-1 단백질의 발현 억제하여 피부 주름에 효과가 있고, TARC(Thymus and activationregulated chemokine) 유전자의 발현 억제를 통해 아토피 피부염 개선에 우수한 효과가 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 염증매개 물질인 산화질소의 생성을 효과적으로 억제하여 우수한 항염증 활성을 나타내고, 히알루론산(Hyaluronic acid) 합성을 촉진하여 우수한 보습 효과가 있으며, 멜라닌 색소의 생성을 억제하여 피부미백 활성을 나타내며, 피부 재생에 우수한 효과가 있으므로, 화장품, 식품, 및 의약품 분야에서 피부상태의 개선 목적으로 유용하게 이용 가능하다.

Description

바다제비집에서 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물{Composition for Improving Skin Conditions Comprising Exosome Derived from Swallow's Nest as Active Ingredient}
본 발명은 바다제비집에서 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 바다제비집에서 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하고, 개선된 피부주름 개선, 항아토피, 항염증, 피부 보습, 피부 미백, 및 피부 재생 활성을 갖는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것이다.
대부분의 동물세포는 다양한 크기와 성분을 갖는 세포 내 기원의 소포체(extracellular vesicle)를 분비할 수 있는데, 이러한 소포체는 혈액, 소변, 타액 및 세포 배양액을 포함하는 모든 생물학적 유체(biological fluids)에서 발견된다.
소포체는 작게는 직경 약 20nm부터 크게는 직경 약 5㎛의 크기를 갖는 막 구조 소낭체로서, 그 크기와 구성에서 이질성이 있고, 엑소좀(exosome, 약 30~100 nm), 엑토좀(ectosome), 마이크로 소낭(microvesicle, 약 100~1,000 nm), 마이크로 입자(microparticle), 세포자멸체(apoptotic body, 약 1~5 ㎛) 등으로 분류된다.
상기 소포체의 상이한 유형은 이의 기원, 직경, 자당(sucrose)에서의 밀도, 형상, 침강 속도, 지질 조성물, 단백질 마커 또는 분비 방식 등에 기초하여 구별된다. 예컨대, 마이크로 소낭은 약 100 내지 1,000nm 크기의 불규칙한 형상을 갖는 막 소낭으로써 원형질막 바깥쪽을 향하여 분리되며, 인테그린, 셀렉틴, CD40 리간드 등을 포함하는 표지자(marker), 포스파티딜세린을 포함하는 인지질을 갖는 것으로 알려져 있다.
그리고, 엑소좀은 약 30 내지 100nm(<200 nm) 크기의 컵 형상을 갖는 가장 작은 막 소낭으로, 후기 엔도좀에서 기원하여 엔도좀의 안쪽으로 분리되며, 일반적으로 CD63, CD9의 테트라스파닌, TSG101, ESCRT 등을 포함하는 마커, 콜레스테롤, 스핑고미엘린, 세라마이드, 포스파티딜세린을 포함하는 지질을 갖는 것으로 알려져 있다.
한편, 중국 남부를 비롯해 말레이 반도, 자바, 수마트라 등 동남아시아 여러 나라의 바다주변의 산과 절벽에 사는 바다제비의 일종인 금사연은 목구멍 속의 침샘에서 끈적이는 분비물을 뱉어내어 바다제비집을 만들어 낸다. 산란기에 발달한 금사연의 침샘으로부터 분비되는 타액이 깃털 등과 굳혀지게 되어 약 1개월에 걸쳐 바다제비집이 만들어지게 된다.
본초강목에는 바다제비집이 “피부를 윤택하게 하며 혈액에 유익해서 생기가 나게 한다.”라고 소개되고 있다. 또한, 제비집은 보양효과에 탁월하며, 중국의 황태후는 자신의 미용과 젊음을 유지하기 위해 바다제비집과 진주가루를 섞어 피부 미용에 사용하기도 하였다. 제비집에는 피부에 자양분을 주는 단백질이 함유되어 있어 건조한 피부를 더욱 부드럽게 가꾸어주며, 지친 피부에 탄력을 주는 비타민 C, 비타민 E, 알부틴, 콜라겐이 함유되어 있다. 제비집 속에 함유된 주요 성분인 프로테오글리칸(proteoglycan)은 몸 전체, 피부, 장기 등 각각의 세포를 결합시키거나 지탱시키는데 큰 역할을 하여, 피부에서는 재생 효과가 뛰어나서 수분함유를 잃지 않게 함과 동시에 피부 노화 개선에 주요한 역할을 할 수 있다.
바다제비집의 채취는 현지에서도 허가받은 채취인에게만 채취를 허용할 만큼 엄중한 감시 아래 수행되며 연간 채취량도 제한되며, 매우 고가의 식재료로서 사용되고 있다. 바다제비집으로부터 추출한 추출물의 효능과 관련하여, 항바이러스 작용, 미백효과 등이 알려져 있다.
특허출원 제10-2015-0053874호 ‘바다제비집 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물’은 바다제비집, 해삼추출물 및 캐비어 추출물이 피부미백, 주름개선 등의 효과가 있어 기능성 화장료 조성물에 사용될 수 있음을 개시하고 있으나, 고가의 원료들을 조합하여 사용하는데 비해 그 효과가 충분하지 않아 경제성이 떨어지는 문제가 발생하는 단점이 있었다.
이에, 본 발명자들은 고가의 기능성 소재인 바다제비집의 기능성을 더욱 개선시켜 그 활용 가치를 제고하기 위해 예의 연구노력한 결과, 바다제비집 유래 엑소좀 성분이 피부 주름 및 아토피 피부염 개선에 우수한 효과가 있고, 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 및 손상된 피부의 재생 촉진에 효과가 있어, 피부상태를 개선시키는데 뛰어난 효과가 있음을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 피부 주름 및 아토피 피부염의 예방 또는 개선에 효과가 있고, 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 및 손상된 피부의 재생 촉진에 뛰어난 효과가 있는 바다제비집에서 유래된 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 고가인 바다제비집의 피부 상태 개선에 대한 기능성을 더욱 증대시켜 소재의 활용성을 증대시키기 위해 예의 연구노력한 결과, 바다제비집 유래 엑소좀 성분이 피부 주름 및 아토피 피부염 개선에 우수한 효과가 있고, 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 및 손상된 피부의 재생 촉진에 효과가 있어, 피부상태를 개선하는데 뛰어난 효과가 있음을 확인하였다.
본 발명의 용어 "바다제비집"은 바다제비의 일종인 금사연(Collocalia fuciphaga)이 지은 둥지를 의미하며, 상기 바다제비집은 해초와 생선 지느러미 등을 주재료로 금사연이 침샘에서 분비한 분비물로 엮어서 지어지게 된다. 상기 금사연은 해안 절벽 위에 둥지를 트는데 아직 소화되지 않은 음식물을 분비해 둥지를 만들고, 이때의 제비집은 새하얗고 빛나므로 백연이라고도 불린다.
본 발명에서 '엑소좀(exosome)'이란 바다제비집으로부터 분리되는 막 구조의 대략 200 내지 1000nm의 직경을 갖는 소낭을 의미하며, 다낭체와 원형질막의 융합이 일어나 세포 밖 환경으로 방출되는 소낭을 의미한다. 상기 엑소좀은 자연적으로 분비된 것이거나, 혹은 인공적으로 분비된 것을 포함한다. 본 발명의 바다제비집에서 유래한 엑소좀 성분은 270~800nm의 크기로 분포하며(도 1 참조), 인간 유래 엑소좀 마커인 CD9, CD63, 및 CD81의 마커 단백질을 함유하는 것을 특징으로 한다(도 2 참조).
본 발명에서 용어, "피부 상태 개선"은 피부 주름을 예방 및 개선하고, 아토피성 피부염과 염증성 피부 질환 증상을 개선시키며, 멜라닌 색소 총량을 감소시켜 미백 효과를 나타내고, 피부에 수분을 보충해주며, 피부조직 또는 피부세포의 재생을 촉진하는 것을 모두 포함하는 의미이다.
본 발명의 피부 상태 개선용 조성물에서, 상기 조성물은 MMP-1 단백질의 발현 억제를 통해 피부 주름의 생성을 억제하여 피부 주름을 예방 또는 개선하는 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서 용어, "피부 주름"이란, 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미하는데, 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐의 감소, 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있다. 본 발명에서 "피부 주름 예방 또는 개선"이란, 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다. 본 발명의 실시예에서는 바다제비집 유래의 엑소좀은 주름생성의 원인이 되는 MMP-1 단백질의 생성을 효과적으로 억제하여 피부 주름의 예방 및 개선에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인한 바 있다(도 3 참조),
또한, 본 발명의 피부 상태 개선용 조성물에서, 상기 조성물은 TARC(Thymus and activationregulated chemokine) 유전자의 발현 억제를 통해 아토피성 피부염의 치료 및 예방 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서 용어, "아토피성 피부염"은 만성적이고 재발성의 염증성 피부질환으로 가려움증(가려움증)과 피부건조증, 특징적인 습진을 동반하는 질병을 의미한다. 아토피성 피부염의 급성 병소에서는 혈청 면역글로불린 E(IgE)의 유의한 증가 현상이 특징으로 나타나며, 이에 부가하여 병소의 조직병리학적인 변화 및 피부염 병변에 대한 관능평가 등을 행하여 아토피성 피부염의 진단 및 심각도를 판정하기도 한다. 아토피성 피부염의 정확한 원인은 아직까지 완전히 이해되고 있지 않지만, 유전적 소인과 함께 면역학적, 비면역학적 기전이 관여한다고 보고 있다. 본 발명에서 용어, "아토피성 피부염의 예방"은 본 발명의 상기 조성물의 투여로 아토피성 피부염의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "아토피성 피부염의 치료"는 본 발명의 조성물에 의해 아토피성 피부염에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다. 본 발명의 실시예에서는 TNF-a 및 IFN-r에 의해 과발현된 TARC 단백질의 생성이 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀 처리에 의해 유의적으로 억제하는 것을 확인하였다(도 5 참조).
또한, 본 발명의 피부 상태 개선용 조성물에서, 상기 조성물은 상기 조성물은 산화질소(nitric oxide) 생성 억제를 통해 염증성 질환의 치료 및 예방 활성을 갖는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서 "염증성 질환"은 염증을 주병변으로 하는 질병을 총칭하는 의미로서, 본 발명에서 상기 염증성 질환은 산화질소 매개 염증성 질환인 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 상기 산화질소 매개 염증성 질환으로는 아토피 피부염, 건선, 부비동염, 비염, 결막염, 천식, 피부염, 염증성 콜라겐 혈관 질환 등이 있다. 본 발명에서 "염증성 질환의 치료"는 상기 조성물의 투여로 염증성 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미하며, "염증성 질환의 예방"은 상기 조성물의 투여로 염증성 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본 발명의 실시예에서는 바다제비집 유래의 엑소좀 처리에 의해 산화질소 생성이 효과적으로 억제됨을 확인하였다(도 6 참조),
또한, 본 발명의 피부 상태 개선용 조성물에서, 상기 조성물은 히알루론산(Hyaluronic acid) 합성을 촉진하여 피부 보습 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서, 용어 "피부 보습" 이란 피부에 수분감을 증가시켜주고, 촉촉한 상태를 유지시키는 것을 의미한다. 본 발명의 실시예에서는 바다제비집 유래의 엑소좀 처리에 의해 히알루론산 합성을 효과적으로 증가함을 확인하였다(도 7 참조).
또한, 본 발명의 피부 상태 개선용 조성물에서, 상기 조성물은 멜라닌 색소의 생성을 억제하여 피부미백 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 있어서, '피부미백'은 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 말한다. 이러한 미백 효과는 예를 들어, 멜라닌 색소의 총량을 감소시킴으로써 달성될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예에서는 바다제비집 유래의 엑소좀 처리에 의해 멜라닌 생성이 억제됨을 확인하였다(도 8 참조).
또한, 본 발명의 피부 상태 개선용 조성물에서, 상기 조성물은 피부 재생 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명에서, 용어 '피부상처'란, 표피, 진피 또는 피하조직의 결손을 포함하는 의미이다. 또한, 본 발명에서, '피부상처의 예방 또는 치료'란, 피부상처의 경감, 완화 및 증상의 개선을 포함하며, 피부상처가 생길 가능성을 낮추는 것을 포함하는 의미이다. 본 발명의 실시예에서는 바다제비집 유래의 엑소좀 성분은 피부세포에서 농도 의존적으로 피부 재생을 촉진시켜 피부 재생의 용도로 효과적으로 사용될 수 있음을 확인하였다(도 9 참조).
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부 주름 및 아토피 피부염 개선에 우수한 효과가 있고, 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 및 손상된 피부의 재생 촉진에 효과가 있어 피부상태를 개선하는데 뛰어난 효과가 있으므로 주름 개선, 항아토피, 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 및 피부 재생 촉진용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로 상기 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome) 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들이 포함되며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센셜 오일, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸타, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸타 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장품의 구체예로서는 여성청결제, 손세정제, 세안크림, 세안폼, 클렌징크림, 클렌징밀크, 클렌징로션, 마사지크림, 콜드크림, 모이스처크림, 유액, 화장수, 팩, 에프터세이빙크림, 썬텐방지크림, 썬텐용 오일, 비누, 보디샴푸, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 양모료, 육모료, 헤어크림, 헤어리퀴드, 세트로션, 헤어스프레이, 헤어브리지, 컬러린스, 컬러스프레이, 퍼머넌트웨이브액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도, 핸드크림, 및 립스틱 등을 들 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 피부 주름 및 아토피 피부염 개선에 우수한 효과가 있고, 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 및 손상된 피부의 재생 촉진에 효과가 있어 피부상태를 개선하는데 뛰어난 효과가 있으므로 주름 개선, 항아토피, 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 및 피부 재생 촉진용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
한편, 본 발명의 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 제조될 수 있다.
구체적으로 산을 첨가함으로써 염을 형성할 수 있고, 예를 들어 무기산(예: 염산, 히드로브롬산, 인산, 질산, 황산 등), 유기 카르복실산(예: 아세트산, 트리플루오로아세트산과 같은 할로 아세트산, 프로피온산, 말레산, 숙신산, 말산, 시트르산, 타르타르산, 살리실산), 및 산성 당(글루쿠론산, 갈락투론산, 글루콘산, 아스코르브산), 산성 폴리사카리드(예: 히알우론산, 콘드로이틴 술페이트, 아르기닌산), 콘드로이틴 술페이트와 같은 술폰산 당 에스테르를 포함하는 유기 술폰산(예: 메탄, 술폰산, p-톨루엔 술폰산) 등을 첨가하여 염을 형성할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 세포 독성이 없는 천연 추출물에서 분리되는 물질로 임상투여시 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.
즉, 본 발명의 약학적 조성물은 실제로 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 리우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 카보하이드레이트, 아스코르브 산(ascorbic acid) 또는 글루타치온과 같은 항산화제(antioxidants), 킬레이트화제(chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 유효용량은 0.01 내지 10㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.1 내지 1㎎/㎏ 이며, 하루 1회 내지 3회 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 총 유효량은 볼루스(bolus) 형태 혹은 상대적으로 짧은 기간 동안 주입(infusion) 등에 의해 단일 투여량(single does)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple does)이 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기 농도는 약의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 나이 및 건강상태 등 다양한 요인들을 고려하여 환자의 유효 투여량이 결정되는 것이므로 이러한 점을 고려할 때, 이 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 본 발명의 약학적 조성물로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome) 성분은 상기에서 설명한 바와 같다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 포함하는 복합추출물, 이의 분획물 또는 이의 가공물의 형태로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 “기능성”이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법으로 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 피부주름 개선, 항아토피, 항염증, 미백, 보습, 및 피부 재생 촉진 등 피부 상태를 개선하는 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용이 가능하다. 아울러 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함된다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공한다.
(b) 본 발명의 피부 상태 개선용 조성물은 MMP-1 단백질의 발현 억제하여 피부 주름에 효과가 있고, TARC(Thymus and activationregulated chemokine) 유전자의 발현 억제를 통해 아토피 피부염 개선에 우수한 효과가 있다.
(c) 또한, 본 발명의 조성물은 염증매개 물질인 산화질소의 생성을 효과적으로 억제하여 우수한 항염증 활성을 나타내고, 히알루론산(Hyaluronic acid) 합성을 촉진하여 우수한 보습 효과가 있으며, 멜라닌 색소의 생성을 억제하여 피부미백 활성을 나타내며, 피부 재생에 우수한 효과가 있으므로, 화장품, 식품, 및 의약품 분야에서 피부상태의 개선 목적으로 유용하게 이용 가능하다.
도 1은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 전자현미경 사진이다.
도 2는 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)에 포함된 CD9, CD63, 및 CD81의 마커 단백질을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 처리에 따른 MMP-1 단백질의 발현 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 처리에 따른 피부각질세포주의 세포 생존률 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 처리에 따른 아토피성 피부염 특이인자인 TARC(thymus and activation-regulated chemokine)의 발현 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 대식세포주인 RAW 264.7 세포에서 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 처리에 따른 산화질소 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 7은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 처리에 따른 히알루론산 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 처리에 따른 멜라닌 색소 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 9는 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)의 처리에 따른 디프 퀵 스테인(Diff quic stain) 방법을 이용하여 측정한 피부 재생 정도를 정상세포와 비교 정량하여 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1. 바다제비집 유래 엑소좀의 분리
바다제비집 500g을 정제수로 세척한 후, 혼합 및 건조하여 혼합 시료를 준비하였다. 준비된 혼합시료를 분쇄하고 세말화하여 분말을 얻었다. 건조 분말에 10배 부피의 EXO-BB 버퍼(system biosciences, Palo Alto, CA, USA)를 가한 후, 5분 동안 볼텍싱 하여 용해하였다.
상기 용해된 용액을 2mL 컬렉션 튜브에 담아 필터 카트리지에 장전한 후, 18,000G 조건에서 2분간 원심분리하였다. 원심분리된 튜브의 펠렛이 떨어져나가지 않게 주의하면서 하층액(down layer)을 1.5mL 용량의 마이크로튜브(microfuge tube)로 옮겨 담았다.
상기 마이크로튜브에 엑소좀 분리 용액을 2배 부피로 가하고, 엑소좀 수율을 높이기 위해 4℃에서 48시간 동안 인큐베이션 한 후, 10,000G 조건에서 60분간 원심분리하였다. 원심분리된 튜브에서 상층액을 제거하여 펠릿 형태의 바다제비집 유래의 엑소좀 성분을 분리하였다.
엑소좀 펠렛을 소니케이터를 이용하여 EXO-BB 버퍼에 재용해한 후 4℃에서 보관하면서 이후 실험에 사용하였다.
실시예 2. 바다제비집 유래의 엑소좀의 확인
상기 실시예 1에서 분리한 바다제비집 유래의 엑소좀 성분을 투과전자현미경(transmission electron microscope)(JEM1010, JEOL, 일본)과 DLS(Dynamic light scattering)(JEM1010, JEOL, 일본)을 이용하여 분석하였다.
바다제비집 유래 엑소좀 성분의 형태와 크기를 분석한 결과, 대체로 구형을 이루고 직경이 약 0.27 내지 0.8um 사이의 크기인 것을 확인하였다(도 1 참조).
또한, 효소결합 면역흡수 분석법(ELISA, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 키트(system biosciences, Palo Alto, CA, USA)를 사용하여 바다제비집 유래 엑소좀에 존재하는 CD9, CD63, 및 CD81 단백질의 함량을 분석하였다. CD9, CD63, 및 CD81 단백질은 대표적인 엑소좀 마커이다. 비교 실험을 위해 종래 피부상태 개선에 효과가 있는 것으로 알려진 병풀, 녹차, 및 인삼을 원료로 하여 실시예 1과 동일한 방법으로 추출 처리하여 제조한 병풀추출물(sample 1), 녹차추출물(sample 2), 인삼추출물(sample 3)을 대조군으로 사용하였다.
그 결과, 실시예 1에서 제조된 바다제비집 유래 엑소좀은 병풀, 녹차 및 인삼 추출물들(sample 1 내지 3)에 비해 월등하게 많은 엑소좀 마커들을 함유하고 있는 것으로 확인되었고, 이를 통해 종래 피부상태 개선에 효과가 있는 것으로 알려진 풀, 녹차, 및 인삼 성분들에 비해 본 발명의 원료인 바다제비집이 월등하게 많은 엑소좀 성분을 함유한 것을 확인할 수 있었다(도 2 참조).
실시예 3. 피부주름 개선: MMP-1 단백질의 합성 저해
40mm 세포배양 접시에 2㎖의 DMEM 배양액을 넣고, 인간섬유아세포를 약 1.2x105의 농도로 접종한 후, 37℃, 5% CO2 환경에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 실시예 1에서 제조된 바다제비집 유래의 엑소좀을 0.01, 0.1, 및 1%(v/v) 농도로 희석한 시료를 포함한 배지로 교체하여 3일간 배양하였다. 이후 배양액을 회수(harvest)하여 4℃, 7500rpm 환경에서 5분간 원심분리(centrifuge)하여 ELISA 방법을 이용하여 MMP-1(Human Total MMP-1 kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)의 단백질 발현량 변화를 확인하였다(도 3 참조).
비교실험을 위해 음성대조군(vehicle)은 EXO-BB 버퍼 용액을 1%(v/v) 농도로 사용하였고, 양성대조군은 TGF-β 10ng/ml 농도로 사용하였다.
MMP-1 단백질의 발현은 바다제비집 유래의 엑소좀의 처리에 의해서 농도 의존적으로 감소하였으며, 모든 처리 구간에서 음성대조군에 비해 MMP-1 단백질의 발현이 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 바다제비집 유래의 엑소좀을 1%(v/v) 농도로 처리한 군에서는 양성대조군으로 TGF-β를 10ng/ml 농도로 처리한 대조군과 동등한 효과를 나타내었다.
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀은 주름생성의 원인이 되는 MMP-1 단백질의 생성을 효과적으로 억제하여 피부 주름의 예방 및 개선에 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 4. 아토피 개선: 아토피성 피부염 특이인자 TARC 발현 감소
피부각질세포주(HaCaT, 5×105/well)를 FBS DMEM 배지에서 24시간 배양 후, FBS 없는 DMEM에 바다제비집 유래의 엑소좀을 0.1%, 1% 및 10%(v/v) 농도로 하여 각각 TNF-a 및 IFN-r(10ng/mL)과 희석하여 동시 처리하고, 추가적으로 배양하였다. 24시간 경과 후, 각 well의 상층액을 human TARC ELISA kit를 사용하여 정량하였다. 동량의 증류수를 처리한 군을 음성대조군으로 하였고, 타크롤리머스(tacrolimus)를 처리한 군을 양성대조군으로 하였다. 상기 타크롤리머스는 칼시뉴린의 억제제로 칼시뉴린에 내재된 인산가수분해효소(phosphatase) 활성을 억제하는 것으로 알려져 있으며(Sieber, M., Karanik, M., Brandt, C., Blex, C., et al., 2007, Inhibition of calcineurin NFAT signaling by the pyrazolopyrimidine compound NCI3., European Journal of Immunology, 37, 2617-2626), 최근에는 코티코스테로이드의 처방에 내성이 있는 아토피 환자에게, 타크롤리머스의 투여가 효과가 있다는 연구 결과가 알려져 있다(Russell, J. J., 2002, Topical tacrolimus: a new therapy for atopic dermatitis. American Family Physician, 66, 1899-1902).
도 4를 참조하면, 증류수 처리 음성대조군, 타크롤리머스 처리 양성대조군, 그리고, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀 처리 시험군 모두에서 세포 생존률에 유의미한 변화가 없는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 도 5를 참조하면, TNF-a 및 IFN-r에 의해 과발현된 TARC 생성량이 바다제비집 유래의 엑소좀 처리에 따라 유의적으로 억제됨을 확인할 수 있었고, 1% 및 10%(v/v) 농도로 처리한 시험군에서는 타크롤리머스 처리 양성대조군에 비해 월등하게 개선된 효과가 있는 것으로 확인되었다.
상기와 같은 결과를 통해 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀 성분은 아토피성 피부염에 특이인자인 TARC(thymus and activation-regulated chemokine)의 발현을 억제하여 아토피성 피부염을 예방하고 효과적으로 개선시킬 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 5. 피부 염증 개선: 산화질소 생성 억제
본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀의 항염증 효과를 확인하기 위해, 염증 유발에 관여하는 대표적인 세포 독성물질인 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생성 억제율을 측정하였다.
먼저, 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 한국세포주은행(KTCC, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 구체적으로, 10% FBS(Fetal bovine serum)를 함유한 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)에 10% FBS, 100㎍/㎖ 페니실린 및 100㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 배지를 이용하였고, 상기 세포를 접종하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
구체적으로, 상기 RAW 264.7 세포를 1×106 cells/mL의 농도(in DMEM)로 96 웰 플레이트에 접종하고 24시간 배양 후, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀을 0.01, 0.1, 및 1%(v/v) 농도로 희석한 시료와 내독소로 알려진 LPS(1μg/ml)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 그 후, 세포배양 상등액 100㎕와 Griess reagent[1%(w/v) sulfanilamide, 0.1%(w/v) naphtylethylenediamine in 2.5%(v/v) phosphoric acid] 100㎕를 혼합하여 96 웰 플레이트에서 10분 동안 반응시키고, ELISA 리더를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하여 생성된 산화질소의 양을 측정하였다. 생성된 아질산염(nitrite)의 농도는 아질산나트륨(sodium nitrite)을 DMEM 배지에 용해한 표준 곡선을 이용하여 계산하였다. LPS를 처리한 대조군(Cont)과 LPS를 처리하지 않은 대조군(Nor)에서 생성된 아질산염의 생성량 차이를 기준으로 각 시료의 일산화질소 생성 저해 활성을 확인하였다(도 6 참조).
그 결과, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀은 LPS처리 대조군(Nor)에 비해 모든 처리군에서 산화질소 생성을 억제하여 우수한 항염증 효과를 보이는 것으로 관찰되었다. 특히, 0.1, 및 1%(v/v) 농도로 처리한 군에서는 덱사메타손(Dexamethasone) 10uM 처리 양성대조군에 비해 각각 44% 및 58% 감소된 산화질소 생성이 관찰되어 항염증 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.
실시예 6. 피부 보습: 히알루론산 합성 증가
본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀의 피부 보습 효과를 검증하기 위해 히알루론산(Hyaluronan) 합성 촉진에 미치는 영향을 실험하였다. 히알루론산(HA, Hyaluronan, Hyaluronic acid)은 주로 표피 각질형성세포와 진피 섬유아세포에 의해 합성되며, 수분과 결합하여 세포가 정상적으로 활동할 수 있는 환경을 조성하는 중요한 역할을 하는 물질이다. 피부에서 히알루론산의 감소는 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나이다. 따라서 본 실시예에서는 인간각질형성세포 내에서 히알루론산의 생성량을 확인하였다.
먼저, 인간각질형성세포를 24 well 세포배양 접시에 1㎖의 배양액을 넣고 약 1×105의 농도로 세포를 접종한 후, 37℃, 5% CO2 환경에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀을 각각 0.01, 0.1 및 1%(v/v)의 농도로 함유한 배지로 교체하여 24시간 배양하였다. 이후 배양액을 회수(harvest)하여 4℃, 7,500rpm 환경에서 5분간 원심분리(centrifuge)한 뒤, ELISA 방법을 이용하여 Hyaluronan(Hyaluronan kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)의 합성량을 확인하였다. 동량의 증류수를 처리한 군을 음성대조군으로 하였고, 레티노익산(retinoic acid) 1uM 농도를 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.
실험 결과, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀 처리군은 음성대조군에 비해 각각 138%, 163%, 및 250% 증가된 히알루론산 합성 증가가 관찰되었다(도 7 참조). 상기 결과를 통해 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀은 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시키고, 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 7. 피부 미백: 멜라닌 색소 합성 감소
본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀의 미백효과를 검증하기 위해, 선행문헌(Hosoi et al., 1985)에 보고된 방법을 수정하여 멜라닌 함량을 측정하였다. 먼저, 멜란-A 세포에 상기 바다제비집 유래의 엑소좀을 각각 0.01, 0.1, 및 1%(v/v) 농도로 3일 동안 처리한 후, 배지를 제거하고, PBS(phosphate buffer saline)로 두 번씩 세척하였다. 이후, 멜라닌을 용해하기 위해, 1N의 NaOH 400㎕를 첨가하고, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 405㎚의 흡수 파장에서 멜라닌 함량을 측정하였다. 동량의 증류수를 처리한 군을 음성대조군으로 하였고, 알부틴 10uM 농도를 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.
그 결과, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀이 처리된 멜란-A 세포에서 농도 의존적으로 멜라닌 색소의 생성이 억제되는 것을 확인할 수 있었다(도 8). 구체적으로 바다제비집 유래의 엑소좀 처리군은 월등한 멜라닌 색소 생성 저해 효과를 나타내었는데, 구체적으로 음성대조군과 비교할 때 0.01, 0.1, 및 1%(v/v) 용량에서 각각 6%, 14% 및 22% 개선된 멜라닌 색소 생성 저해 효과를 나타내었고, 양성대조군과 비교할 때 1%(v/v) 용량에서 11% 개선된 멜라닌 색소 생성 저해 효과가 관찰되었다.
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀은 피부 세포에서 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 피부 미백과 관련된 용도로 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 8. 피부 상처 모델에서 세포 재생 효능 검증
세포배양 100㎜ 디쉬에 1차 배양 피부 세포인 인간섬유아세포가 80% 증식했을 때, 멸균된 tip(200ul)의 끝단을 이용하여 피부 세포에 상처를 주고, 바다제비집 유래의 엑소좀을 각각 0.01, 0.1, 및 1%(v/v) 농도로 주입한 후 세포 재생 효과를 확인하였다. 피부 세포에 상처를 유발한 후 바다제비집 엑소좀이 포함되지 않은 EXO-BB 버퍼만을 처리한 군을 음성대조군으로 하였고, 알란토인을 10ug/ml 농도로 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.
세포 증식의 측정은 MTT(methylthiazole-2-yl-2.5-diphenyl tetrazolium bromide) 분석 방법과 디프 퀵 스테인(Diff quic stain) 방법을 이용하여 세포염색 후 현미경으로 확인하고 정상세포와 비교하여 정량화하여 도 9에 나타내었다.
그 결과, 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀 성분이 처리된 인간섬유아세포에서 농도 의존적으로 피부 재생이 촉진되는 것을 확인할 수 있었다. 구체적으로 0.01, 0.1, 및 1%(v/v) 용량에서 양성대조군에 비해 각각 117%, 125% 및 146% 개선된 피부 재생 촉진 효과를 나타내었다. 또한, 재생된 피부세포의 형태적인 모양에 있어서도 정상적인 피부세포와 동일하게 성장하는 것으로 관찰되었다(미도시).
상기와 같은 결과를 토대로 본 발명의 바다제비집 유래의 엑소좀 성분을 손상된 피부에 적용하는 경우, 재생된 피부조직이 주변의 정상 피부조직과 차이가 발생하지 않으므로, 성형학적으로도 피부 상처부위가 덧나지 않게 하면서도 피부 세포의 재생을 촉진하는 효과가 있음을 알 수 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (10)

  1. 바다제비집에서 유래된 엑소좀(exosome)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 MMP-1 단백질의 발현 억제를 통해 피부 주름 생성 억제 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 TARC(Thymus and activationregulated chemokine) 유전자의 발현 억제를 통해 아토피성 피부염의 치료 및 예방 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 산화질소(nitric oxide) 생성 억제를 통해 염증성 질환의 치료 및 예방 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 히알루론산(Hyaluronic acid) 합성을 촉진하여 피부 보습 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 멜라닌 색소의 생성을 억제하여 피부미백 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 피부 재생 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 약학적 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 상태 개선용 조성물.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102503542B1 (ko) * 2022-06-17 2023-02-24 한국콜마주식회사 오레가노 추출물 및 병풀 유래 엑소좀의 혼합물을 포함하는 피부 개선용 조성물
KR102540485B1 (ko) 2022-10-25 2023-06-08 (주)지에프씨생명과학 에델바이스, 사막장미, 병풀 또는 하수오 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물
KR102564765B1 (ko) 2022-10-25 2023-08-09 (주)지에프씨생명과학 라벤다, 어성초 또는 티트리 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항염 및 피부 진정용 화장료 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101769422B1 (ko) * 2016-02-25 2017-08-18 원광보건대학교 산학협력단 다중기능성 세럼형 화장품의 혼합 조성물 및 제조방법
KR101860266B1 (ko) * 2016-07-01 2018-05-24 사회복지법인 삼성생명공익재단 트롬빈 처리 줄기세포에서 유래된 엑소좀을 포함하는 피부상처 치료용 조성물
KR101911078B1 (ko) * 2017-01-20 2018-10-23 (주)에스디생명공학 바다제비집 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 피부의 피부 상태 개선용 조성물
KR101963572B1 (ko) * 2017-04-11 2019-03-29 코스맥스 주식회사 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 제비집의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101257381B1 (ko) * 2010-04-20 2013-04-23 스킨큐어(주) 제비집추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태개선용 조성물
US9119974B2 (en) * 2011-03-04 2015-09-01 Ahmed H. Al-Qahtani Skin cream
KR20160123619A (ko) * 2015-04-16 2016-10-26 남상범 바다제비집 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물
KR101580107B1 (ko) * 2015-06-09 2015-12-28 (주)더마랩 버섯균사체 발효 제비집 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR102039302B1 (ko) * 2017-11-24 2019-10-31 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 피부장벽 강화 내지 기능 개선 용도

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101769422B1 (ko) * 2016-02-25 2017-08-18 원광보건대학교 산학협력단 다중기능성 세럼형 화장품의 혼합 조성물 및 제조방법
KR101860266B1 (ko) * 2016-07-01 2018-05-24 사회복지법인 삼성생명공익재단 트롬빈 처리 줄기세포에서 유래된 엑소좀을 포함하는 피부상처 치료용 조성물
KR101911078B1 (ko) * 2017-01-20 2018-10-23 (주)에스디생명공학 바다제비집 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 피부의 피부 상태 개선용 조성물
KR101963572B1 (ko) * 2017-04-11 2019-03-29 코스맥스 주식회사 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 제비집의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102503542B1 (ko) * 2022-06-17 2023-02-24 한국콜마주식회사 오레가노 추출물 및 병풀 유래 엑소좀의 혼합물을 포함하는 피부 개선용 조성물
KR102540485B1 (ko) 2022-10-25 2023-06-08 (주)지에프씨생명과학 에델바이스, 사막장미, 병풀 또는 하수오 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물
KR102564765B1 (ko) 2022-10-25 2023-08-09 (주)지에프씨생명과학 라벤다, 어성초 또는 티트리 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항염 및 피부 진정용 화장료 조성물

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