KR102156324B1

KR102156324B1 - 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 치료용 약학 조성물

Info

Publication number: KR102156324B1
Application number: KR1020190007424A
Authority: KR
Inventors: 김혜주; 이동인; 유지연; 강유선; 박희경
Original assignee: 주식회사 시선테라퓨틱스
Priority date: 2019-01-21
Filing date: 2019-01-21
Publication date: 2020-09-15
Also published as: KR20200090419A

Abstract

본 발명은 VEGF 유전자 또는 VEGFR 유전자와 결합하는 서열을 가지는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 치료용 약학 조성물{Composition for Treating Disease Concerning vascularization Containing Nucleic Acid Complex}

본 발명은 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 치료용 약학 조성물에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 VEGF 유전자 또는 VEGFR 유전자와 결합하는 서열을 가지는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

혈관 형성의 기구는 혈관아세포가 조혈관세포집단을 형성하여 그 융합 및 관강 형성에 의해 혈관총을 형성하는 혈관 형성과, 기존의 혈관으로부터 혈관내피세포가 출아하여 조직에 침입하는 형태로 모세혈관이 뻗어나가는 맥관 형성으로 크게 나누는데, 일반적으로 후자를 가리키는 용어. 형성과정은 단백질가수분해효소에 의한 혈관 기저막의 소화, 혈관내피세포의 유주와 증식, 관강 형성의 차례로 진행된다. 정상 개체에서는 태생기 혈관 형성, 자궁과 난소의 성주기가 변화할 때에 나타나는데, 창상 치유조직이나 종양조직 및 당뇨병성 망막증 등의 병적 상태에서도 의의가 크다.

황반변성은 녹내장, 당뇨망막병증과 함께 주요 3대 실명질환으로 알려져 있다. 대부분 노화로 인해 발생하여 노인성 질환으로 여겼으나 최근에는 청장년층에서도 발병이 증가하는 추세로, 2011-2015년의 황반변성 환자는 5년 사이에 49% 가량이 증가하였다(건강보험심사평가원). 황반변성의 주요 원인은 노화이며, 그 다음으로 유전적인 요인, 그리고 환경적 요인으로는 자외선, 흡연, 고지방·고열량의 서구화 식단 등이 꼽히고 있다.

수술법의 발전으로 인해 녹내장, 백내장에 의한 실명은 크게 감소하였으나, 여전히 황반변성은 실명 원인 1위를 유지하고 있으며 이는 건강한 노년의 삶을 위협하고 있다. 또한 실명 인구의 증가는 개인적, 사회적 부담을 높여 질환의 치료 및 예방에 대한 관심이 높아지고 있다.

혈관내피세포 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)는 혈관 신생과 혈관 투과성을 증가시키는 중요한 인자로 알려져 있으며, 혈관, 림프관의 발생과 항상성 유지에 관여하며 신경세포에도 중요한 효과를 가진다. 이러한 VEGF는 눈에서의 질병과 관련된 신혈관생성의 중요한 매개자인 것으로 알려져 있으며, VEGF는 수용체인 VEGFR1, 2, 3에 결합하지만, VEGFR2를 통해 내피세포의 증식, 이동, 투과성을 유도하는 신호를 전달한다(Zeng H. 등, J Biol. Chem., 276:26969-26976 (2001)). 그러므로 VEGF를 타겟하는 약물을 이용하면 신생혈관형성을 제어하여, 신생혈관형성 관련 질환을 치료할 수 있다.

한편, 전통적인 약제와 다르게 핵산 약제는 표적 특이적 전령 RNA(messenger RNA, mRNA)의 발현을 억제하므로, 단백질을 표적으로 하는 기존 약제로 치료가 불가능 했던 연구 영역을 다룰 수 있게 되었다(Kole R. 등 Nature Rev. Drug Discov. 2012; 11; 125-140., Wilson C. 등 Curr. Opin. Chem. Bio. 2006; 10: 607-614.).

올리고 핵산(Oligo nucleic acid)을 기반으로 유전자 발현 조절의 뛰어난 효과 및 다양한 용도에도 불구하고, 핵산을 기반으로 하는 치료제를 개발하기 위해서는 극복해야 할 방해물이 다수 존재한다. 예를 들면, 올리고 핵산은 핵산분해효소(nuclease) 등에 의한 손상의 위험이 있으며, 올리고 핵산의 전기적 성질(전하)과 크기로 인하여 수동 확산(passive diffusion)에 의한 세포막 투과가 불가능한 점 등이 있다. 상기 문제점들을 해소하기 위하여, 핵산의 변형을 통한 생물학적 안정성을 확보하려는 노력이 계속되고 있으며, 변형된 인공핵산(Artificial Nucleic Acid)의 경우 생물학적인 활성의 손실 없이 표적 핵산과의 친화성을 높이는 것이 가능하게 되었다. 변형된 인공핵산의 한 종류인 펩티드 핵산(Peptide Nucleic Acid, PNA)은 (2-아미노에틸)-글리신 펩티드 백본((2-aminoethyl)-glycine peptide backbone)이 도입된 인공 핵산으로, 상보적인 염기 서열을 가지는 RNA 및 DNA에 강하게 결합하는 성질을 가지고 있다. 특히, 상기 펩티드 핵산은 핵산분해효소에 대해 저항성이 있고, 생물학적 안정성이 높아 다양한 올리고 핵산을 기반으로 하는 치료제 관련 연구가 수행되고 있다. 하지만 상기 펩티드 핵산은 전기적 중성을 가지는 특성으로 세포 내 도입이 어려운 단점을 가지고 있다(Joergensen M. 등 Oligonucleotides 2011, 21; 29-37.). 올리고 핵산 자체의 세포막 투과 능력은 상당히 낮으며, 특히 DNA 또는 RNA는 음전하를 띄고 있기 때문에, 세포의 소수성 인지질 이중막을 통과하지 못하므로 단순 확산을 통한 세포 내 전달이 어렵다. 레트로바이러스(Retrovirus) 혹은 AAV(adeno-associated virus) 등의 바이러스 운반체의 사용은 올리고 핵산의 세포 내 도입을 가능하게 하지만, 의도치 않은 면역활성과 발암유전자(oncogene)의 재조합 가능성 등의 위험성이 있다(Couto L. B. 등 Curr. Opin. Pharmacol. 2010, 5; 534-542.).

이러한 이유로 세포독성이 적고, 면역활성이 낮은 비-바이러스성 올리고 핵산을 기반으로 하는 핵산 운반체 개발의 중요성이 더욱 커지고 있으며, 그 결과로 양전하성 지질(cationic lipid), 리포좀(liposome, 안정된 핵산 지질 입자(stable nucleic acid lipid particle, SNALP), 폴리머 및 세포-투과 입자(cell-penetrating peptide)를 이용한 세포 도입 기법이 개발되고 있다(Zhi D. 등 Bioconjug. Chem. 2013, 24; 487-519., Buyens K. 등 J. Control Release, 2012, 158; 362-70., ROSSI, J. J. 등 Gene Ther. 2006, 13: 583-584., Yousefi A. 등 J. Control Release, 2013, 170; 209-18., Trabulo S. 등 Curr. Pharm. Des. 2013, 19; 2895-923.). 이러한 핵산 전달 기법은 기능성 잔기를 직접적인 결합으로 가지고 있으며, 복합체 형성을 위한 단계를 포함하고, 리포좀(liposome) 구조의 앤도좀 에스케이프(endosome escape) 효율 및 생체독성 등의 문제점을 가지고 있어, 올리고 핵산 도입 기능의 향상과 제조 절차 및 부작용과 관련된 문제점의 해소가 필요하다.

이와 관련하여, 본 발명자들은 생활성 핵산과 전체적으로 양전하를 가지도록 변형된 캐리어 펩티드 핵산(Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체가 세포 투과성(cell permeability)이 놀랍게 향상되며, 이를 이용하여 표적 유전자의 발현을 매우 효율적으로 조절할 수 있음을 확인하고, 이러한 세포 독성이 낮고, 생활성 핵산의 세포투과성 및 유전자 발현 조절능력이 향상된 새로운 구조체에 대한 특허를 출원한 바 있다(PCT/KR2017/008636).

상기 구조체 및 치료용 약물 등의 세포 내 투과 및 세포 전달 기능이 향상에 대한 연구를 지속적으로 수행한 결과, 본 발명자들은 생활성 핵산(Bioactive Nucleic Acid)과 전체적으로 양전하를 가지도록 변형된 캐리어 펩티드 핵산(Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체가 피부, 바람직하게는 각질층 및/또는 표피층을 매우 효율적으로 통과하는 특성을 가지고 있어, 이러한 핵산 복합체가 피부 투과성이 우수함을 확인하였다.

이에, 본 발명자들은 세포투과성을 가지는 핵산 복합체를 이용하여, 혈관신생관련 질환 치료에 적용하고자 예의 노력한 결과, VEGF 유전자와 결합능을 가지는 핵산복합체를 당뇨병성 망막병증 마우스 모델의 망막에 투여하는 경우, 망막병증에 의한 혈관신생이 억제되는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 VEGF 유전자 또는 VEGFR 유전자와 결합하는 서열을 가지는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 핵산 복합체는 점안액이나 피부도포 등을 포함하는 여러 방법으로 투여가 가능하고, VEGF가 관여하는 혈관신생을 효율적으로 억제할 수 있어, 혈관신생관련 질환 치료에 포괄적으로 사용될 수 있다.

도 1은 VEGF-A를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체(PNA1)의 안구 점안액을 통한 쥐의 안구 전달을 확인한 결과를 나타낸 것으로, a는 핵산 복합체의 안구 점안액를 쥐의 안구에 투여한 뒤 형광현미경으로 망막 중심부를 촬영한 결과를 나타낸 것이고, b는 IMAGE J 프로그램으로 생활성 펩티드 핵산의 형광 세기를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 VEGF-A를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체 PNA 2와 VEGFR1를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체 PNA 3의 안구 점안액을 1주간 2회, 2주간 처리하여 쥐의 발달 과정에서 망막의 혈관 억제 효과를 비교한 도면으로 도2a는 투여 시작일로부터 일주일 후 망막 혈관 억제효과를 나타내며, 도2b는 투여 시작일로부터 2주일 후 망막 혈관 억제 효과를 면역 형광 염색법으로 확인한 결과를 나타낸 것이다. SC1은 VEGF-A 표적 유전자에 대한 대조군이며, SC2는 VEGFR1 표적 유전자에 대한 대조군을 나타낸다.
도 3은 VEGF-A를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체(PNA 2)의 안구 점안액의 투여 횟수에 따른 효과를 확인한 결과를 나타낸 것으로 a는 1주간 2회 투여한 결과이고, b는 2주간 매일 투여한 결과를 나타낸 것이며, SC1은 VEGF-A 표적 유전자에 대한 대조군을 나타낸다.
도 4는 양성대조군인 아일리아(40μg) 처리군과 VEGF-A를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체(PNA 2)(30μg/1 drop)의 효과를 면역형광염색법으로 확인한 것으로, a는 면역형광이미지를 나타낸 것이고, b는 image J를 사용하여 형광세기를 정량화한 그래프를 나타낸 것이며, SC1은 VEGF-A 표적 유전자에 대한 대조군을 나타낸다.
도 5는 양성대조군인 아일리아(40μg) 처리군과 VEGF-A를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체(PNA 2)(60μg/1 drop)의 효과를 면역형광염색법으로 확인한 것으로, a는 면역형광이미지를 나타낸 것이고, b는 image J를 사용하여 형광세기를 정량화한 그래프를 나타낸 것이며, SC1은 VEGF-A 표적 유전자에 대한 대조군을 나타낸다.
도 6은 아일리아(40μg) 처리군과 VEGF-A를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체(PNA 2)(60μg / 1 drop)의 복합투여에 의한 혈관신생억제 효과를 면역형광염색법으로 확인한 것으로, a(2주간, 주 2회 투여)와 c(2주간 매일 투여)는 면역형광이미지를 나타낸 것이고, b(2주간, 주 2회 투여)와 d(2주간 매일 투여)는 image J를 사용하여 형광세기를 정량화한 그래프롤 나타낸 것이며, SC1은 VEGF-A 표적 유전자에 대한 대조군을 나타낸다.
도 7은 쥐의 당뇨병성 망막병증 모델에서 핵산 복합체(PNA 2)에 의한 망막혈관 누수 억제 효과를 확인한 것으로, a는 면역형광이미지를 나타낸 것이고, b는 image J를 사용하여 형광세기를 정량화한 그래프를 나타낸 것이며, SC1은 VEGF-A 표적 유전자에 대한 대조군을 나타낸다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

혈관내피세포 성장인자(vascular endothelial growth factor, 이하, 'VEGF'라 함)는 혈관, 림프관의 발생과 항상성 유지에 관여하며 신경세포에도 중요한 효과를 가진다. 이러한 VEGF는 눈에서의 질병과 관련된 신혈관생성의 중요한 매개자인 것으로 알려졌다. VEGF는 수용체인 VEGFR1, 2, 3에 결합하지만, VEGFR2를 통해 내피세포의 증식, 이동, 투과성을 유도하는 신호를 전달한다(Zeng H. 등, J Biol. Chem., 276:26969-26976 (2001)). 그러므로 VEGF를 타겟하는 약물을 이용하여 신생혈관형성을 제어함으로써, 및 신생혈관형성 관련 질환을 치료할 수 있다.

본 발명에서는 VEGF 유전자 또는 VEGFR 유전자에 결합하여 그의 발현을 억제시키는 생활성 펩티드 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산를 이용하여 신생혈관 억제효과를 확인하였다.

따라서, 본 발명은 VEGF 유전자 또는 VEGFR 유전자와 결합하는 서열을 가지는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 혈관 신생 관련 질환은 일 예로, 나이 관련 황반변성, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 증식성 망막병증, 신생혈관 녹내장, 종양 또는 암, 망막병증, 정맥류, 죽상 동맥경화증, 만성 관절 류마티스 등을 들 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 양태에서는 나이 관련 황반 변성과 당뇨합병증으로 인해 초래되는 당뇨병성 망막병증 원인이 되는 VEGF를 억제하여 치료 효과를 확인하였다.

본 발명의 일양태에서는 VEGF_A 유전자 또는 VEGFR1의 유전자에 결합하는 핵산 복합체를 어린 쥐의 안구에 투여하고, 쥐의 발달과정에서 혈관 생성을 억제하는지 확인하기 위하여, 태어난 지 P14의 쥐에 Cy3로 표지한 핵산 복합체 PNA 1(표 2 참조)를 함유하는 안구점안액를 이용하여 30 μg / 1 drop으로 망막에 한번 처리한 후, 1, 3, 5, 7일 간격으로 망막을 분리하여 형광현미경으로 분석하였으며, VEGF_A 유전자 또는 VEFGR1 유전자의 핵산 복합체에 의해서 쥐의 망막에서의 혈관 생성이 효율적으로 억제되는 것을 확인하였다.

본 발명의 다른 양태에서는, 종래 습성황반변성과 맥락막 신생혈관증 등에 치료제로 사용되는 아일리아(40μg)를 유리체 내 주사한 쥐와 VEGF_A 유전자에 대한 핵산 복합체(30μg)를 안구점안액을 이용하여 2주간 매일 처리한 쥐에서 모두 망막 혈관생성이 효율적으로 억제되는 것을 확인하였다.

본 발명의 또다른 양태에서는 쥐의 안구에 아일리아(40μg)를 유리체 내 주사한 군와 VEGF_A 유전자에 대한 핵산 복합체(60μg)를 안구점안액을 이용하여 2주간 매일 처리한 군의 경우, 아일리아 처리군보다 핵산복합체 처리군에서 망막 혈관생성이 더 현저히 억제되는 것을 확인하였다.

본 발명의 또다른 양태에서는 스트렙토조토신 주사에 의해 유도된 당뇨병 모델 마우스에 핵산 복합체(PNA 2)를 포함하는 안구점안액를 이용하여 30μg / 1 drop(low, L)과 60 μg / 1 drop(high, H)으로 하루에 한번 14일 동안 처리한 뒤 경추탈골로 쥐를 안락사시킨 후 안구를 적출하여, 형광 현미경으로 망막 혈관누수 현상을 관찰한 결과, 핵산복합체의 투여에 의해 망막혈관 누수가 효과적으로 억제되는 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 생활성 핵산과 캐리어 펩티드가 상보적으로 결합된 핵산 복합체는 하기 구조식 (1)의 구조를 가지는 것을 특징으로 할 수 있다.

구조식 (1)

[ A ≡ C ⁽⁺⁾ ]

상기 구조식 (1)에 있어서,

A는 목적하는 유전자와 결합할 수 있는 서열을 가지는 생활성 핵산(Bioactive Nucleic Acid)이고,

C는 생활성 핵산과 결합할 수 있는 캐리어 펩티드 핵산(Carrier Peptide Nucleic Acid)이고,

'≡'는 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산 간의 상보적인 결합을 의미하며,

A로 표시되는 생활성 핵산은 전체적으로 음전하 또는 중성을 가지며,

C⁽⁺⁾는 캐리어 펩티드 핵산이 전체적으로 양전하를 가진다는 것을 의미하며,

캐리어 펩티드 핵산은 캐리어 펩티드 핵산 전체적으로 양전하를 띠도록 변형된 펩티드 핵산 단량체를 하나 이상 포함한다.

본 발명에 따른 핵산 복합체에서의 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산은 역평행결합(anti-parallel binding) 또는 평행결합(parallel binding) 형태를 가질 수 있다.

본 발명에 있어서, “생활성 핵산”은 발현을 감소시키고자 하는 목적하는 표적 유전자와 결합할 수 있는 상보적인 서열, 특히 그러한 목적하는 표적 유전자의 mRNA에 결합할 수 있는 상보적인 서열을 가지는 핵산으로, 해당 유전자의 발현을 억제하는 등의 유전자 발현조절에 관여하는 핵산을 의미하며, 발현을 감소시키고자 하는 표적 유전자에 상보적인 서열을 가지는 핵산일 수 있다.

특히, 본 발명에서의 “생활성 핵산(Bioactive Nucleic Acid)”은 생체 외(in vitro) 또는 생체 내(in vivo)에서 표적 유전자 및 이를 포함하는 염기서열과 결합하여 해당 유전자의 고유 기능(예를 들어, 전사체(transcript) 발현 또는 단백질 발현)을 저해시키는 등의 기능을 수행하는 것을 특징으로 할 수 있다.

따라서, 본 발명에서의 "생활성 핵산(Bioactive Nucleic Acid)"은 혈관신생관련질환의 표적 유전자인 VEGF 또는 VEGFR의 안티센스 펩티드 핵산인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 서열번호 2 내지 5로 구성된 군에서 선택되는 서열로 표시되는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, “캐리어 펩티드 핵산”은 생활성 핵산과 일부 혹은 전부의 염기가 상보적으로 결합하여 기능성을 부여하는 핵산을 의미하며, 본 발명에서 사용되는 캐리어 펩티드 핵산은 펩티드 핵산(PNA : Peptide Nucleic Acid) 뿐 아니라, 이와 유사한 변형된 핵산을 사용할 수 있으며, 펩티드 핵산이 바람직하지만, 이에 한정되는 의미는 아니다.

특히, 본 발명에 있어서, 상기 캐리어 펩티드 핵산은 서열번호 6 내지 9으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열로 표시되는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서 " 핵산 복합체"는 피부 또는 안구와의 접촉을 통해 생활성 물질을 체내, 궁극적으로 세포 내로 침투시킬 수 있으며, 구체적으로는 망막상피 또는 피부의 표피층의 최 외곽층인 각질층 및/또는 표피층을 통과하여, 표피층이나 진피층에 전달하거나, 진피층도 통과하여 체내로 전달할 수 있는 능력을 가진다.

또한, 상기 VEGF 또는 VEGFR 유전자와 결합할 수 있는 생활성 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산의 결합력(융해온도, melting temperature, Tm)은 생활성 핵산과 생활성 핵산의 목적하는 VEGF 또는 VEGFR 유전자와의 결합력보다 낮은 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 생활성 핵산 또는 캐리어 펩티드 핵산은 각각의 핵산의 5'-말단 또는 3'-말단에 엔도좀 탈출을 도와주는 물질이 추가로 결합된 것을 특징으로 할 수 있다. 즉, 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산의 엔도좀 탈출(endosome escape)을 도와주는 물질을 더 포함하여 하기 구조식 (2)의 구조를 가지는 것을 특징으로 할 수 있다.

구조식 (2)

[ mA ≡ mC ⁽⁺⁾ ]

상기 구조식 (2)에 있어서,

'm'은 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산의 엔도좀 탈출(endosome escape)을 도와주는 물질을 의미한다.

본 발명에 있어서, “엔도좀 탈출을 도와주는 물질”은 엔도좀 내부의 삼투압을 증가시키거나, 엔도좀의 막을 불안정화 시키는 방법에 의하여 생활성 핵산의 엔도좀에서 탈출을 도와주는 것을 특징으로 할 수 있다. 생활성 핵산이 보다 효율적이고 빠르게 핵이나 세포질로 이동하여 표적 유전자를 만나 작용하도록 도와주는 것을 의미한다(D. W. Pack, A. S. Hoffman, S. Pun, P. S. Stayton, “Design and development of polymers for gene delivery,” Nat. Rev. Drug. Discov., 4, 581-593 (2005)).

본 발명에 있어서, 상기 엔도좀 탈출을 도와주는 물질은 펩티드, 지질 나노물질(lipid nanoparticles), 접합체 나노물질(polyplex nanoparticles), 고분자 나노구(polymer nanospheres), 무기물 나노물질(inorganic nanoparticles), 양이온 지질 나노물질(cationic lipid-based nanoparticles), 양이온 고분자(cationic polymer) 및 pH 감응 고분자(pH sensitive polymers)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 엔도좀 탈출을 도와주는 물질로서 생활성 핵산에는 GLFDIIKKIAESF(서열번호 10)의 서열을 갖는 펩티드가 링커 매개로 연결될 수 있으며, 캐리어 펩티드 핵산에는 Histisine(10)을 링커 매개로 연결하는 방법으로 결합하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 지질 나노물질(lipid nanoparticles)은 Lipid, phospholipids, cetyl palmitate, poloxamer 18, Tween 85, tristearin glyceride 및 Tween 80로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 접합체 나노물질(polyplex nanoparticles)은 poly(amidoamine) 또는 polyethylenimine (PEI)인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 고분자 나노구(polymer nanospheres)는 polycaprolactone, poly(lactide-co-glycolide, polylactide, polyglycolide, poly(d,l-lactide), chitosan 및 PLGA-polyethylene glycol로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 무기물 나노물질(inorganic nanoparticles)은 Fe₂O₃ Fe₃O₄, WO3 및 WO2.9로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 양이온 지질 나노물질(cationic lipid-based nanoparticles)은 1-(aminoethyl)iminobis[N-(oleicylcysteinyl-1-amino-ethyl)propionamide], N-alkylated derivative of PTA 및 3, 5-didodecyloxybenzamidine로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 양이온 고분자(cationic polymer)는 vinylpyrrolidone-N, N-dimethylaminoethyl methacrylate acid copolymer diethyl sulphate, polyisobutylene 및 poly(N-vinylcarbazole)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 pH 감응 고분자(pH sensitive polymers)는 polyacids, poly(acrylic acid), poly(methacrylic acid) 및 hydrolyzed polyacrylamide로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산은 각각 2 내지 50개, 바람직하게는 5 내지 30개, 더욱 바람직하게는 10 내지 25개, 가장 바람직하게는 15 내지 17개의 핵산 단량체를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

상기 생활성 핵산은 천연(natural) 핵산 염기 및/또는 변형된 핵산 단량체로 이루어져 있는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어, 상기 생활성 핵산에 사용된 단량체가 PNA일 경우, 생활성 펩티드 핵산이라고 하며, 다른 단량체가 사용된 경우에도 동일한 방식으로 부른다.

본 발명에 있어서, 상기 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산은 포스포디에스테르(phosphodiester), 2' 0-메틸(2' 0-methyl), 2' 메톡시-에틸(2' methoxy-ethyl), 포스포르아미데이트(phosphoramidate), 메틸포스포네이트(methylphosphonate) 및 포스포로티오에이트(phosphorothioate)로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 작용기를 추가로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 캐리어 펩티드 핵산은 상기 생활성 핵산과 염기서열 일부 혹은 전부가 상보적인 서열로 구성되는 것을 특징으로 할 수 있다. 특히, 캐리어 펩티드 핵산은 유니버설 염기(universal base)를 하나 이상 포함할 수 있으며, 캐리어 펩티드 핵산 모두가 유니버설 염기로 이루어질 수도 있다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산 복합체 내의 상기 생활성 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산 각각은 전기적 특성이 전체적으로, 양전하(양성), 음전하(음성) 또는 중성 전하를 가지는 것을 특징으로 하는 복합체일 수 있다.

상기 전기적 특성의 표현에 있어, “전체적으로”의 의미는 개별 염기의 전기적 특성이 아닌 전체적인 생활성 핵산 또는 캐리어 펩티드 핵산 각각의 전하가 외부에서 볼 때 전체적인 전기적 특성을 의미하는 것으로, 예를 들어, 생활성 핵산 내의 일부 단량체가 양성을 가지더라도 음성을 가지는 단량체의 개수가 더 많이 존재하는 경우에는 생활성 핵산은 “전체적으로” 전기적 특성을 볼 때 음전하를 가지게 되는 것이며, 캐리어 펩티드 핵산 내의 일부 염기 및/또는 백본(backbone)이 음성을 가지더라도 양성을 가지는 염기 및/또는 백본의 개수가 더 많이 존재하는 경우에는 캐리어 펩티드 핵산은 “전체적으로” 전기적 특성을 볼 때 양전하를 가지게 되는 것이다.

따라서, 본 발명의 핵산 복합체는 전체적으로 양전하를 가지는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 핵산 복합체에 있어서, 바람직하게는 상기 생활성 핵산은 전체적으로 전기적 특성을 볼 때 음전하 또는 중성의 특성을 가지며, 상기 캐리어 펩티드 핵산은 전체적으로 전기적 특성을 볼 때 양전하 특성을 가지는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산의 전기적 특성의 부여는 변형된 펩티드 핵산 단량체를 사용할 수 있고, 변형된 펩티드 핵산 단량체는 양전하를 가지는 캐리어 펩티드 핵산으로 리신(Lysine, Lys, K), 아르기닌(Arginine, Arg, R), 히스티딘(Histidine, His, H), 디아미노 부티르산(Diamino butyric acid, DAB), 오르니틴(Ornithine, Orn) 및 아미노산 유사체로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 양전하의 아미노산을 포함하고, 음전하를 가지는 캐리어 펩티드 핵산으로 음전하의 아미노산인 글루타민산(Glutamic acid, Glu, E) 또는 아미노산 유사체의 음전하의 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 캐리어 펩티드 핵산은 전체적으로 양전하를 가지도록 1개 이상의 gamma- 또는 alpha-backbone 변형 펩티드 핵산 단량체를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

상기 gamma- 혹은 alpha-backbone 변형 펩티드 핵산 단량체는 전기적 양성을 가지도록 리신(Lysine, Lys, K), 아르기닌(Arginine, Arg, R), 히스티딘(Histidine, His, H), 디아미노 부티르산(Diamino butyric acid, DAB), 오르니틴(Ornithine, Orn) 및 아미노산 유사체로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 양전하를 가지는 아미노산을 backbone에 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 일양태에서 아미노산을 이용한 펩티드 핵산 단량체의 변형은 PNA의 알파, 베타 감마 사이트 중, 감마 부위에 아미노산의 곁사슬이 결합하고 아미노산의 R기가 따로 결합하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 전하 부여를 위한 펩티드 핵산 단량체의 변형은 상기 backbone 변형 이외에도 nucleobase가 변형된 펩티드핵산 단량체를 사용할 수 있다. 바람직하게는 전기적 양성을 가지도록 amine, triazole, imidazole moeity를 nucleobase에 포함하거나, 전기적 음성을 가지도록 carboxylic acid를 염기에 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 캐리어 펩티드 핵산의 변형 펩티드 핵산 단량체는 음전하를 backbone 혹은 nucleobase에 더 포함할 수 있지만, 변형 펩티드 핵산 단량체는 양전하를 가지는 단량체가 음전하를 가지는 단량체에 비해 더 많이 포함되어 전체적으로 캐리어 펩티드 핵산의 전하가 양성이 되는 것이 바람직하다.

바람직하게는 본 발명에 따른 상기 핵산 복합체는 전체적으로 양의 전하를 가지는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 상기 핵산 복합체에 있어, 소수성 잔기(hydrophobic moiety), 친수성 잔기(hydrophilic moiety), 표적 항원 특이적 항체, 앱타머 또는 형광/발광 표지자 등으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 물질이 생활성 핵산 및/또는 캐리어 펩티드 핵산에 결합된 것을 특징으로 할 수 있으며, 바람직하게는 상기 소수성 잔기(hydrophobic moiety), 친수성 잔기(hydrophilic moiety), 표적 항원 특이적 항체, 앱타머 및 이미징을 위한 형광/발광 표지자 등으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 물질은 상기 캐리어 펩티드 핵산에 결합된 것일 수 있다.

본 발명에서 상기 소수성 잔기(hydrophobic moiety), 친수성 잔기(hydrophilic moiety), 표적 항원 특이적 항체, 앱타머, 소광자, 형광 표지자 및 발광 표지자로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 물질과 생활성 핵산 및/또는 캐리어 펩티드 핵산의 결합은 단순 공유결합 또는 링커로 매개된 공유결합인 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 핵산 운반체에 결합된 세포투과, 용해도, 안정성, 운반 및 이미징 관련 물질(예컨대, 소수성 잔기 등)은 표적 유전자의 발현을 조절하는 생활성 핵산과 독립적으로 존재하게 된다.

본 발명에 있어서, 앞서 기술한 바와 같이, 상기 생활성 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산의 상보적인 결합 형태는 크게 역평행결합(antiparallel binding)과 평행결합(parallel binding)의 형태를 가지는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 상보적인 결합 형태는 생활성 핵산의 목적서열(생활성 핵산과 상보적인 서열) 존재 하에서 분리되는 구조를 가진다.

상기 역평행결합과 평행결합은 DNA-DNA 또는 DNA-PNA의 결합 방식에 있어, 5'-방향성과 3'-방향성에 따라 결정된다. 역평행 결합은 일반적인 DNA-DNA 또는 DNA-PNA의 결합 방식으로, 본 발명에 따른 핵산 복합체를 예로 들어 설명하면, 생활성 핵산은 5'에서 3' 방향으로, 캐리어 펩티드 핵산은 3'에서 5' 방향으로 서로 결합되는 형태를 의미한다. 평행결합은 역평행결합에 비해서는 결합력이 다소 떨어지는 형태로, 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산 모두가 5'에서 3' 방향 또는 3'에서 5' 방향으로 서로 결합되는 형태를 의미한다.

본 발명에 따른 핵산 복합체에 있어서, 바람직하게는 상기 생활성 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산의 결합력은 생활성 핵산과 생활성 핵산의 목적하는 유전자, 특히 목적 유전자의 mRNA와의 결합력보다 낮은 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 결합력은 융해온도, melting temperature 또는 Tm에 의해 결정된다.

상기 생활성 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산의 결합력(융해온도, melting temperature, Tm)이 생활성 핵산과 생활성 핵산의 목적하는 유전자, 특히 목적 유전자의 mRNA와의 결합력보다 낮게 하기 위한 구체적인 방법의 예로는, 상기 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산이 평행 결합(Parallel binding) 또는 부분 특이결합(Partial specific binding)하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또 다른 예로서 상기 캐리어 펩티드 핵산이 링커, 유니버설 염기(universal base) 및 생활성 핵산의 대응되는 염기와 상보적이지 않은 염기를 가지는 펩티드 핵산 염기로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 펩티드 핵산 염기를 갖는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 유니버설 염기(universal base)는 아데닌(adenine), 구아닌(guanine), 사이토신 (cytosine), 티민(thymine), 우라실(Uracil) 등의 천연 염기와 선택성 없이 결합하고, 상보적인 결합력보다 낮은 결합력을 가지는 염기로 이노신 PNA(inosine PNA), 인돌 PNA(indole PNA), 나이트로인돌 PNA(nitroindole PNA) 및 무염기(abasic)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상 사용할 수 있으며, 바람직하게는 이노신 PNA를 사용하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산 복합체의 기능 조절을 위한 핵산들의 결합 형태와 전기적 성질 조합을 제공하고, 상기 핵산의 결합 형태와 전기적 성질 조합으로 입자 크기 및 작용 시점을 조절하고, 세포투과성, 용해도 및 특이도를 향상시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 생활성 펩티드 핵산과 캐리어 펩티드 핵산의 결합력 조절을 통해, 목적 유전자의 존재 하에서, 생활성 펩티드 핵산이 목적 서열과 결합되는 시점(생활성 핵산의 목적 서열로의 치환되는 시점, 표적 특이적 분리 및 결합 시점) 등의 조절이 가능하다.

본 발명에 따른 핵산 복합체에 있어서, 생활성 핵산의 목적 유전자로의 치환(strand displacement) 시점, 표적 특이적 분리 및 결합(target specific release and bind) 시점의 조절은 복합체의 비특이 결합을 위한 캐리어 펩티드 핵산의 비특이 염기, 유니버설 염기 및 linker의 유무, 개수 및 위치에 의하여 조절이 가능한 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 펩티드 복합체의 상보적인 결합의 형태인 평행(parallel) 또는 역평행(antiparallel) 형태의 결합 등과 상기 조건의 조합에 의하여 조절이 가능한 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산 복합체의 입자는 5 nm 내지 300 nm, 바람직하게는 10 nm 내지 200nm, 가장 바람직하게는 15 nm 내지 100nm의 크기를 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산 복합체의 입자 크기는 생활성 펩티드 핵산과 캐리어 펩티드 핵산의 전하 밸런스(charge balance)를 조절함으로써 조절되는 것을 특징으로 할 수 있다. 구체적으로는 캐리어 펩티드 핵산의 양전하가 증가하면 입자의 크기가 작아지나, 캐리어 펩티드 핵산의 양전하가 일정 수준을 넘게 되면 입자의 크기가 커지는 특징을 가지게 된다. 또한, 입자 크기를 결정하는 다른 중요한 요소로 복합체를 이루는 생활성 펩티드 핵산 전하에 따른 전반적인 캐리어 펩티드 핵산과의 적절한 전하 밸런스에 의해서 입자 크기가 결정된다.

본 발명에 따른 캐리어 펩티드 핵산의 양전하는 1개 내지 7개(양전하를 가지는 단량체가 1개 내지 7개 포함됨을 의미한다), 바람직하게는 2개 내지 5개, 가장 바람직하게는 2개 내지 3개이며, 생활성 핵산의 전하는 전하 밸런스의 넷 차지(net charge)가 음전하 0개 내지 5개, 바람직하게는 0개 내지 3개이다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산 복합체는 생활성 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산이 적절한 조건에서 혼성화됨으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 “혼성화”는 상보적인 단일가닥 핵산들이 이중-가닥 핵산을 형성하는 것을 의미한다. 혼성화는 2개의 핵산 가닥 간의 상보성이 완전할 경우(perfect match) 일어나거나 또는 일부 부정합(mismatch) 염기가 존재하여도 일어날 수 있다. 혼성화에 필요한 상보성의 정도는 혼성화 조건에 따라 달라질 수 있으며, 특히 결합 온도에 의하여 조절될 수 있다.

본 발명의 “표적 유전자”는 활성, 억제 또는 표지 하고자 하는 핵산 서열(염기서열)을 의미하며, 용어 “표적 핵산”과 차이가 없으며, 본 명세서에서 혼용된다.

본 발명에 있어서, 표적 유전자를 포함하는 표적 핵산(염기서열)이 생체 외(in vitro) 또는 생체 내(in vivo)에서 상기 복합체와 접촉(결합)하게 되면, 캐리어 펩티드 핵산으로부터 생활성 핵산이 분리되어 생물학적 활성을 나타내게 된다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산 복합체를 이용하여 예방, 치료할 수 있는 질병은, 상기 핵산 복합체 내의 생활성 핵산이 결합하는 표적 유전자에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에서는 생활성 핵산이 결합하는 표적 유전자로 VEGF 또는 VEGFR 인 것을 특징으로 할 수 있다.

따라서, 본 발명에서 상기 핵산 복합체를 이용하여 예방, 치료할 수 있는 질병은 혈관신생관련 질환인 것이 바람직하며, 예를 들어 노인성 황반변성, 당뇨병성 망막병증, 종양 또는 암, 망막병증, 희귀질환 및 중증질환, 심혈관 질환, 대사성 질환 등의 치료에 사용될 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명에 있어서, 용어 “치료용 조성물”은 "의약(약제학적, 약학적) 조성물(pharmaceutical composition)"과 혼용될 수 있으며, 본 발명의 생활성 핵산 및 상기 핵산과 결합하는 캐리어 펩티드 핵산을 포함하는 핵산 복합체를 유효성분으로 포함하며, 추가적으로 상기 핵산 복합체에 목적하는 질환을 치료하기 위한 치료용 약물이 결합된 형태일 수 있다.

본 발명의 치료용 조성물은 표준 의약 실시에 따라 안구내로 전달되는 점안액 형태 또는 피부 전달 형태의 제형으로 제형화될 수 있다. 이들 제형은 유효성분 이외에 약학적으로 허용되는, 특히 피부에 적용될 수 있는 형태의 제형에 적합한 담체, 부형제, 보조제 또는 희석제 등의 첨가물을 함유할 수 있다.

바람직하게는 본 발명에 따른 조성물은 점안액, 수성액, 겔, 연고, 크림, 로션, 페이스트, 도말제 또는 패치 형태로 제형화될 수 있다.

가장 바람직하게는 수성액의 형태로 제형화될 수 있고, 이때 수성액은 증류수 및 버퍼 용액의 형태가 사용될 수 있다.

용어 "약학적으로 허용되는(physiologically acceptable)"은 화합물의 생물학적 활성과 물성들을 손상시키지 않는 특성을 의미한다.

용어 "담체(carrier)"는 세포 또는 조직 내로의 핵산 복합체의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.

용어 "희석제(diluent)"는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 용액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.

본 발명에서의 핵산 복합체를 함유하는 물질은, 환자에게 그 자체로서 또는 병용 요법(combination therapy)에서와 같이 다른 활성 성분들과 함께 또는 적당한 담체나 부형제와 함께 혼합된 의약 조성물로서 투여될 수 있다.

본 발명에서 사용에 적합한 의약 조성물에는, 활성 성분들이 그것의 의도된 목적을 달성하기에 유효한 양으로 함유되어 있는 조성물이 포함된다. 더욱 구체적으로, 치료적 유효량은 치료될 객체의 생존을 연장하거나, 질환의 증상을 방지, 경감 또는 완화시키는데 유효한 화합물의 양을 의미한다. 치료적 유효량의 결정은, 특히, 여기에 제공된 상세한 개시 내용 측면에서, 통상의 기술자의 능력 범위 내에 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은, 상기 핵산 복합체를 포함하는 치료용 조성물의 투여(또는 점안)로 질환의 발병을 막거나, 이의 진행을 억제시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어 “개선”이란 상기 핵산 복합체를 포함하는 치료용 조성물의 투여(또는 점안)로 질환의 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

또한, 본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는, 상기 핵산 복합체를 포함하는 치료용 조성물의 투여(또는 점안)로 질환의 증세가 호전되거나 완치되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산 복합체는 리포솜(liposome) 등의 전달체를 이용하여 투여(또는 점안)할 수도 있다. 상기 리포솜은 림프 조직과 같은 특정 조직에 대해 상기 복합체를 표적화하거나, 감염 세포에 대해 선택적으로 표적화하는데 도움을 줄 수 있고, 또한 상기 복합체가 포함된 조성물의 반감기를 증가시키는데 도움을 줄 수 있다. 리포솜으로는 에멀션, 포움(foam), 마이셀(micelle), 불용성 단층, 액정, 인지질 분산물, 라멜라 층(lamellar layer) 등이 있다. 이러한 제제에 있어서, 송달되는 상기 복합체는, 단독으로 또는 특정 세포들을 대상으로, CD45 항원에 결합되는 모노클로날 항체와 같은 림프 세포 중 우세한 수용체에 결합하는 분자와 함께 또는 기타 치료 조성물과 함께, 리포솜의 일부로서 혼입시킨다. 따라서, 본 발명의 소정 복합체로 충진되거나 도포되어(decorated) 상기 핵산 복합체 조성물을 송달하는 리포솜은 림프 세포의 상기 부위로 지향될 수 있다.

본 발명에 따라 사용하기 위한 리포솜은 일반적으로 중성 및 음전하 인지질 및 콜레스테롤 등의 스테롤을 비롯한 표준 베시클 (vesicle)-형성 지질로부터 형성된다. 일반적으로, 예를 들어 혈류 중의 리포솜의 안정성, 산 불안정성(acid lability) 및 리포솜의 크기 등을 고려하여 지질을 선택한다. 리포솜 제조에는 다양한 방법을 이용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Szoka, et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9:467, 1980), 및 미국 특허 제4,235,871호, 제4,501,728호, 제4,837,028호 및 제5,019,369호]에 기재되어 있는 바와 같은 방법을 이용할 수 있다.

본 발명은 또 다른 관점에서, VEGF 또는 VEGFR 유전자와 결합할 수 있는 서열을 가지는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체를 개체에 투여하는 단계를 포함하는 혈관시생관련 질환의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.

본 발명에 따른 핵산 복합체를 포함하는 조성물은 망막질환을 치료하기 위하여 또는 망막질환의 증세를 억제(또는 완화)하기 위하여 의약으로 효과적인 양으로 안구에 적용될 수 있다. 망막질환의 종류, 환자의 연령, 체중, 증상의 특성 및 정도, 현재 치료법의 종류, 치료 회수, 적용 형태 및 경로 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 해당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 상기한 약리학적 또는 생리학적 성분을 함께 적용하거나 순차적으로 적용할 수 있으며, 또한 추가의 종래의 치료제와 병용하여 적용될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 적용될 수 있다. 이러한 적용은 단일 또는 다중적으로 적용일 수 있다.

본 발명에서, "개체"는 본 발명에 따른 핵산 복합체를 투여(점안)하여 경감, 억제 또는 치료될 수 있는 상태 또는 질환을 앓고 있거나 그러한 위험이 있는 포유동물을 의미하며, 바람직하게 사람을 의미한다.

또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 투여량(도포량)은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여(도포) 형태, 건강 상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.001 ~ 1,000㎎/일이고, 바람직하게는 0.01 ~ 500㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여(점안)할 수도 있다.

본 명세서에 기재되어 있는 핵산 복합체를 포함하는 조성물의 독성과 치료 효율성은, 예를 들어, LD50(군집의 50%에 대한 치사량), ED50(군집의 50%에 대해 치료 효과를 갖는 선량), IC50(군집의 50%에 대해 치료 억제 효과를 갖는 선량)을 결정하기 위하여, 세포 배양 또는 실험동물에서의 표준 제약 과정들에 의해 산정될 수 있다. 독성과 치료 효과 간의 선량 비가 치료 지수이고 이것은 LD50과 ED50(또는, IC50) 간의 비율로서 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 보이는 화합물들이 바람직하다. 이들 세포 배양 분석에서 얻어진 데이터는 인간에 사용하는 선량의 범위를 산정하는데 사용될 수 있다. 그러한 화합물들의 투여량(dosage) 또는 도포량은 바람직하게는 독성이 없거나 거의 없는 상태에서 ED50(또는, IC50)을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다.

본 발명의 용어 "투여"란, 어떠한 적절한 방법으로 개체에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 행위를 의미하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 안구 위 점안, 망막 내 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

상기 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약제학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명의 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.

본 발명의 약학조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물을 사람을 포함하는 포유동물에 하루 동안 10 내지 100 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 10 내지 30 ㎎/㎏으로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 내지 3회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.

본 발명은 또 다른 관점에서, VEGF 또는 VEGFR 유전자와 결합할 수 있는 서열을 가지는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체를 혈관신생관련 질환의 예방 또는 치료에 사용하는 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또 다른 관점에서, 혈관신생관련 질환의 예방 또는 치료용 약제의 제조를 위한 VEGF 또는 VEGFR 유전자와 결합할 수 있는 서열을 가지는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체의 용도에 관한 것이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 생활성 펩티드 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산, 및 이들을 이용한 복합체의 제조

본 실시예에서는 눈에서의 질병과 관련된 신혈관생성의 중요한 매개자인 VEGF 또는 VEGFR을 억제하여 신생혈관 치료 효과를 확인하고자 VEGF 또는 VEGFR 억제용 생활성 펩티드 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산을 제조하였다.

본 발명의 대조군으로 사용한 생활성 펩티드 핵산 (antisense PNA) 은 서열 1 내지 4로 구성되어 있으며, 신생혈관생성 치료효과를 확인하기 위해 사용한 생활성 펩티드 핵산(antisense PNA)은 서열번호 2 내지 5번으로 기재되는 서열로 구성되어 있다.

본 실시예에서 사용된 펩티드 핵산 기반 생활성 핵산은 엔도좀 탈출능을 돕기 위한 펩타이드(GLFDIIKKIAESF)를 5'에 결합시켰으며 염기서열, 단량체 변형 및 구조는 하기 표 1과 같다.

본 발명에서 사용한 모든 펩티드 핵산은 파나진(PANAGENE, 한국)에서 HPLC 정제 방법을 통해 합성하였다. 본 발명의 실시예에 따른 모든 캐리어 펩티드 핵산 중 일부는 엔도좀 탈출능을 돕기 위한 펩타이드(Histidine(10))를 5' 내지 3' 말단에 결합하였으며, 서열번호 6번 내지 9번으로 기재되는 서열로 구성되어 있다 (표 1).

VEGF-A와 VEGFR의 활성 억제를 위한 생활성 펩티드 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산의 서열

구분	서열번호	염기서열	단량체 변형	타겟 유전자
생활성 핵산	서열번호 1	5'-GLFDIIKKIAESF-O-GC ^(-) CT ⁽⁺⁾ CCT ^(-) AC ⁽⁺⁾ GTT ^(-) ATC-O-K-3'	-+-+-	VEGF_A
	서열번호 2	5'-GLFDIIKKIAESF-O-AT ^(-) GA ⁽⁺⁾ TTC ^(-) TG ⁽⁺⁾ CCC ^(-) TCC-O-K-3'	-+-+-	VEGF_A
	서열번호 3	5'-GLFDIIKKIAESF-O- AT ^(-) GA ⁽⁺⁾ TTC ^(-) TG ⁽⁺⁾ CCC ^(-) TCC-O-K(Cy3)-3'	-+-+-	VEGF_A
	서열번호 4	5'-GLFDIIKKIAESF-O-GG ^(-) CTTAC ⁽⁺⁾ AAG ^(-) TTC ⁽⁺⁾ AT ^(-) C-O-K-3'	-+-+-	VEGFR1
	서열번호 5	5'-GLFDIIKKIAESF-O-ACT ^(-) CA ⁽⁺⁾ GTT ^(-) CAG ⁽⁺⁾ GAT ^(-) CT-O-K-3'	-+-+-	VEGFR1
캐리어 펩티드 핵산	서열번호 6	5'-Histidine(10)-O-CGG ⁽⁺⁾ AGGAT ⁽⁺⁾ GCA ⁽⁺⁾ ATAG-O-K-3'	+++	VEGF_A
	서열번호 7	5'-Histidine(10)-O-TAC ⁽⁺⁾ TAAGA ⁽⁺⁾ CGG ⁽⁺⁾ GAGG-O-K-3'	+++	VEGF_A
	서열번호 8	5'-Histidine(10)-O-CCGA ⁽⁺⁾ ATGT ⁽⁺⁾ TCAA ⁽⁺⁾ GTAG-O-K-3'	+++	VEGFR1
	서열번호 9	5'-K-O-AGATC ⁽⁺⁾ CTGA ⁽⁺⁾ ACTGA ⁽⁺⁾ GT-O-Histidine(10)-3'	+++	VEGFR1

단량체의 변형은 전기적인 성질을 부여하기 위하여 핵산의 backbone을 전기적 양성은 리신(Lysine, Lys, K, ⁽⁺⁾로 표기)을 전기적 음성은 글루타민산(Glutamic acid, Glu, E, ^(-)로 표기)로 변형된 펩티드 backbone을 가지도록 제작하였다.

각각의 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산 조합은 DMSO 하에서 혼성화 되었으며, 그 결과 생활성 핵산과 캐리어 펩티드 핵산으로 구성된 복합체가 제작되었다.

본 발명의 이하 실시예에서 VEGF 또는 VEGFR 유전자 발현을 억제하기 위하여 사용한 PNA 복합체의 조합을 표 2에 나타내었다.

노인성 황반변성 및 당뇨병성 망막병증 동물모델에서의 치료 효과 분석을 위한 VEGF-A를 표적 유전자로 하는 핵산 복합체 조합

구분	핵산 복합체	타겟 유전자
SC 1	서열번호 1 및 6	VEGF-A
SC 2	서열번호 4 및 8	VEGFR1
PNA 1	서열번호 3 및 7	VEGF-A
PNA 2	서열번호 2 및 7	VEGF-A
PNA 3	서열번호 5 및 9	VEGFR1

실시예 2: 생활성 핵산 및 캐리어 펩티드 핵산, 혈관 내피 성장인자의 억제에 의한 신생혈관 치료 효과 확인

실시예 1에서 제조한 핵산 복합체를 포함하는 안구 점안액을 어린 쥐의 안구에 투여하여, 쥐의 발달 과정에서 혈관 생성을 억제하는지 확인하였다.

(1): 핵산 복합체의 안구내 전달 확인

생쥐의 안구 전달을 확인하기 위해서 임신한 랫드(나라바이오텍, 한국)에서 태어난 지 P14의 쥐에 Cy3로 표지한 핵산 복합체 PNA 1(표 2 참조)를 함유하는 안구점안액를 이용하여 30 μg / 1 drop으로 망막에 한번 처리한 후, 1, 3, 5, 7일 간격으로 망막을 분리하여 형광현미경으로 분석하였다. 망막 내의 혈관의 강도를 Image J로 측정하였다.

상기 핵산복합체를 함유하는 안구점안액은 각각 NaCl (sigma, 미국) 0.5%, Tween 80 (sigma, 미국) 및 0.05%, Sodium phosphate (duksan, 한국) 0.3mg/mL을 3차 증류수에 첨가하여 제조하였으며, pH 6.8로 조정한 후, 매스실린더에서 최종 부피인 50mL을 3차 증류수로 채워주었다. 핵산 복합체는 80% DMSO에 녹인 다음 점안제제와 희석하여 사용하였다. 기타 첨가물을 넣은 상태에서 삼투압의 변화도가 크지 않음을 확인하였다.

망막의 면역형광 염색은 쥐의 눈을 분리하여 4% 포르말린 용액에 한 시간 고정하고 망막을 분리한 다음 70% 에탄올에 20분간 처리한다. PBS에 용해시킨 1% Triton X-100 (Sigma, 미국)용액으로 조직을 투과화 시킨다. PBS로 5분씩 2회 세척한다. Alexa Fluor-488-conjugated isolectin-IB4를 0.2% BSA가 포함된 PBS에 1:1000 비율로 희석하여 처리하고 4℃에서 하루 동안 처리하였다. 이어서 PBS로 5분씩 2회 세척한 다음 green 형광으로 표지된 망막의 혈관을 형광 현미경으로 관찰하였다.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 안구 점안액를 이용하여 핵산 복합체를 투여하는 경우, 1일부터 7일까지 쥐의 망막 중심부에 핵산 복합체가 위치하고 있는 것을 확인할 수 있었다.

(3): VEGF_A와 VEGFR1 표적 유전자의 핵산 복합체 비교 효과

핵산 복합체의 VEGF_A와 VEFGR1 억제 정도를 생쥐의 망막에서 확인하기 위하여, 임신한 쥐(나라바이오텍, 한국)에서 태어난 지 P14의 쥐의 안구에 핵산복합체(PNA 2 및 PNA 3)를 투여하였다. 핵산 복합체의 투여는 핵산 복합체를 함유하는 안구점안액으로, 핵산복합체를 30 μg / 1 drop으로 쥐의 망막에 일주일에 두번씩 2주 동안 처리한 후, 망막의 VEGF_A와 VEFGR1 억제효과를 비교하였다. 쥐의 망막을 분리하여 isolectin IB4(sigma, 미국)으로 면역 형광 염색법을 진행한 다음 형광현미경으로 분석하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 안구점안액을 이용한 VEGF_A와 VEFGR1 표적 유전자 핵산 복합체에 의해서 쥐의 망막에서의 혈관 생성이 효율적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었다.

(4) 안구점안액의 투여 횟수에 따른 생쥐의 망막에서의 혈관 생성 억제 효과

핵산 복합체의 혈관내피성장인자 억제 정도를 투여 횟수에 차이에 의해 혈관 생성이 억제되는지 확인하기 위해서 임신한 쥐(나라바이오텍, 한국)에서 태어난 지 P14의 쥐에 핵산 복합체를 안구점안액을 이용하여 60 μg / 1 drop으로 일주일에 두번 처리한 군과 하루에 한번 14일 동안 처리한 군을 비교하였다. 쥐의 망막을 분리하여 isolectin IB4(sigma, 미국)으로 면역 형광 염색법을 진행한 다음 형광현미경으로 분석하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 안구점안액을 이용한 핵산 복합체에 의해서 쥐의 망막에서의 혈관 생성이 효율적으로 억제되는 것을 확인하였다. 사용한 핵산 복합체 조합은 표 2의 PNA 2이다.

(5): 아일리아와 VEGF_A 표적 유전자의 핵산 복합체(30μg)의 효과 비교

아일리아는 습성 황반변성(AMD), 당뇨병성 황반부종(DME)으로 인한 시력 손상, 망막중심 정맥폐쇄성(CRVO), 및 망막분지정맥폐쇄성(BRVO) 황반부종에 의한 시력손상, 근시성 맥락막 신생혈관으로 인한 시력손상에 대한 치료제로 사용되고 있는 약물이다. 본 실시예에서는 아일리아(Eyelea, Affiberecpt)를 양성대조군으로 사용하여 본 발명의 핵산 복합체와의 효과를 비교하였다.

임신한 쥐(나라바이오텍, 한국)에서 태어난 지 P14의 쥐에 핵산 복합체(PNA 2)를 안구점안액을 이용하여 30 μg / 1 drop으로 일주일에 두번 처리한 군과 하루에 한번 14일 동안 처리한 군, 아일리아 처리군으로 나누어 실험을 진행하였으며, 아일리아는 40μg/4μl 용량으로 유리체내주사(intravitreal injections)를 한번 실시하였다. 쥐의 망막을 분리하여 isolectin IB4(sigma, 미국)으로 면역 형광 염색법을 진행한 다음 형광현미경으로 분석하였다. 혈관의 강도를 ImageJ로 측정하였다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 안구점안액를 이용한 핵산 복합체 처리군과 아일리아 처리군에서 모두 망막의 혈관 생성이 효율적으로 억제되는 것을 확인하였다.

(6) 아일리아와 VEGF_A 표적 유전자의 핵산 복합체(60μg) 비교 효과

임신한 쥐(나라바이오텍, 한국)에서 태어난 지 P14의 쥐에 핵산 복합체(PNA 2)를 안구점안액를 이용하여 60 μg / 1 drop으로 일주일에 두 번 처리한 군과 하루에 한번 14일 동안 처리한 군, 아일리아 처리군으로 나누어 실험을 진행하였으며, 아일리아는 유리체내주사(intravitreal injections)를 한번 실시하였다. 쥐의 망막을 분리하여 isolectin IB4(sigma, 미국)으로 면역 형광 염색법을 진행한 다음 형광현미경으로 분석하였다. 혈관의 강도를 ImageJ로 측정하였다.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 안구점안액를 이용한 핵산 복합체 처리군이 아일리아 처리군 보다 망막의 혈관 생성이 더 효율적으로 억제되는 것을 확인하였다.

(7) 아일리아와 VEGF_A 표적 유전자의 핵산 복합체의 복합 투여에 의한 혈관 생성 억제 효과

아일리아와 핵산 복합체(PNA 2)를 복합 투여하는 경우, 생쥐 망막에서의 혈관 생성이 억제되는지 확인하였다.

임신한 쥐(나라바이오텍, 한국)에서 태어난 지 P14의 쥐에 아일리아를 유리체내주사를 한번 처리하고 2주 뒤에 핵산 복합체의 안구점안액를 이용하여 60μg / 1 drop으로 일주일에 두번 처리한 군과 하루에 한번 14일 동안 처리한 군으로 나누어 진행하였다.

그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 안구점안액를 이용한 핵산 복합와 아일리아를 복합 투여한 군이 아일리아를 단독투여한 군보다 망막에서의 혈관 생성이 효율적으로 억제되는 것을 확인하였다.

실시예 3: 당뇨병 동물모델에서 망막 혈관 출혈 억제 효과

당뇨동물 모델을 확립하기 위하여, 랫드 (SD rat, 오리엔트바이오, 한국)의 복강에 구연산 완충액(100mM, PH4.5)으로 제조한 스트렙토조토신(streptozotocin, STZ, sigma, 미국) 50 mg/kg을 주사하였다. 7일 후부터 혈당측정기(케어센스, 한국)를 사용하여 혈당을 일주일마다 측정하였고 3개월 동안 비 공복 혈당이 300mg/dl 이상을 유지하는 경우, 당뇨 동물모델로 사용하였다.

핵산 복합체(PNA 2)를 포함하는 안구점안액를 이용하여 30μg/1 drop(low, L)과 60 μg / 1 drop(high, H) 하루에 한번 14일 동안 처리한 뒤 경추탈골로 쥐를 안락사시킨 후 안구를 적출하여 상온에서 4% 파라포름알데히드에 1시간 고정하였다. 고정된 안구에서 망막을 분리하여 망막평면 표본고정(retinal flat mount)을 제작하고, isolectin IB4(sigma, 미국)사용하여 형광 현미경으로 혈관누수 현상을 관찰하였다.

그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, 스트렙토조토신을 투여하여 당뇨병성망막병증을 유도한 마우스모델에서 망막혈관의 누수현상이 현저하게 증가하는 것을 확인하였고(STZ), 핵산복합체(PNA 2)의 투여에 의해 망막혈관 누수가 효과적으로 억제되는 것을 확인하였다.

상기 결과로부터 본 발명의 핵산 복합체가 당뇨질환에서 유발되는 망막혈관 누수현상을 효과적으로 억제하는 당뇨병성 망막병증 치료제로 활용할 수 있다는 것을 확인하였다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> SEASUN THERAPEUTICS, Inc. <120> Composition for Treating Disease Concerning vascularization Containing Nucleic Acid Complex <130> P18-B279 <160> 10 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> bioactive peptide nucleic acid <400> 1 gcctcctacg ttatc 15 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> bioactive peptide nucleic acid <400> 2 atgattctgc cctcc 15 <210> 3 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> bioactive peptide nucleic acid <400> 3 atgattctgc cctcc 15 <210> 4 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> bioactive peptide nucleic acid <400> 4 ggcttacaag ttcatc 16 <210> 5 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> bioactive peptide nucleic acid <400> 5 actcagttca ggatct 16 <210> 6 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> carrier peptide nucleic acid <400> 6 cggaggatgc aatag 15 <210> 7 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> carrier peptide nucleic acid <400> 7 tactaagacg ggagg 15 <210> 8 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> carrier peptide nucleic acid <400> 8 ccgaatgttc aagtag 16 <210> 9 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> carrier peptide nucleic acid <400> 9 agatcctgaa ctgagt 16 <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 10 Gly Leu Phe Asp Ile Ile Lys Lys Ile Ala Glu Ser Phe 1 5 10

Claims

VEGF 유전자 또는 VEGFR 유전자와 결합하고, 서열번호 2 내지 5로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 생활성 핵산 (Bioactive Nucleic Acid); 및 서열번호 6 내지 9으로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 캐리어 펩티드 핵산 (Carrier Peptide Nucleic Acid)이 상보적으로 결합된 핵산 복합체를 유효성분으로 함유하는 혈관신생관련 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 생활성 핵산 또는 캐리어 펩티드 핵산은 각각의 핵산의 5'-말단 또는 3'-말단에 엔도좀 탈출을 도와주는 펩티드 GLFDIIKKIAESF(서열번호 10) 또는 Histidine(10)이 추가로 결합된 것을 특징으로 하는 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 생활성 핵산은 전체적으로 음전하 또는 중성을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 혈관신생관련 질환은 나이 관련 황반변성, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 증식성 망막병증, 신생혈관 녹내장, 종양 또는 암, 망막병증, 정맥류, 죽상 동맥경화증 및 만성 관절 류마티스로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.