KR102116048B1 - 탁산 화합물을 내포하는 리포좀 - Google Patents

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테츠야 이토
이치로 후지와라
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엔스이코 세이토 가부시키가이샤
히로키 하마다
시미즈 요시오
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Abstract

본 발명의 과제는, 리포좀 내에 난수용성 약리 활성 물질을 고효율로 내포시키기 위한 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 조성물에 있어서, 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 난수용성 약리 활성 물질을 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5의 몰비로 포함하는 조성물을 제공한다.

Description

탁산 화합물을 내포하는 리포좀
본 발명은 탁산 화합물을 내포하는 리포좀에 관한 것이다.
파클리탁셀이나 도세탁셀 등의 탁산 화합물은 우수한 항암 활성을 가지지만, 반면에 이들 화합물은 난수용성이라는 단점을 갖는다. 이에, 탁산 화합물을 크레모포르(Cremophor) 등의 계면활성제를 포함하는 에탄올에 용해시켜 암 환자에게 투여되고 있다.
그러나, 이러한 계면 활성제는 인간에 대한 부작용이 크다는 새로운 문제점이 부상하고 있다. 이에, 탁산 화합물을 내포하는 리포좀을 개발하여 얻어진 리포좀을 DDS 제제로서 이용하는 시도가 이루어지고 있다.
구체적으로는, 특허문헌 1에 기재된 바와 같은 용해도 구배의 원리를 이용하는 원격 로딩법(remote loading method)을 사용하여 리포좀 내에 탁산 화합물을 내포시키는 방법이 알려져 있다.
한편, 리포좀 제작용 지질 이중막 내에 미리 탁산 화합물을 함유시켜, 상술한 바와 같은 계면 활성제를 이용하여 리포좀을 형성시키는 패시브 로딩법(passive loading method)을 사용한 비특허문헌 1에 표시된 방법도 알려져 있다.
WO2013/141346
Tao et al., Int. J. Pharm; 338(2007)317-326
상기 특허문헌 1에 기재된 방법에서는, 리포좀 내에 난수용성 약리 활성 물질을 내포시키는 효율이 매우 낮다. 또한, 비특허문헌 1에 나타낸 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 지질 이중막에 대해, 수계용제 중에 크레모포르 등의 계면 활성제와 접촉시켜도 리포좀 형성에조차 이르지 못했음을 본원 발명자들은 확인하였다. 본 발명의 과제는, 리포좀 내에 난수용성 약리 활성 물질을 고효율로 내포시키기 위한 방법을 제공하는 것이다.
본원 발명자들은 이러한 문제를 해결하기 위해 예의 연구를 실시한 결과, 하기에 나타낸 특정 성분을 포함하는 조성물을 사용함으로써, 난수용성 약리 활성 물질을 효율 좋게 리포좀에 내포시킬 수 있다는 것을 발견하였다.
본 발명은 이러한 발견들에 기초하여 완성되었으며, 하기에 나타낸 양태의 발명을 넓게 포함한다.
1 항. 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 조성물에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 것인, 조성물.
2 항. 상기 1 항에 있어서, 포스파티딜콜린기를 갖는 지질은 수소 첨가 대두 레시틴(HSPC), 난황 인지질(EPC), 디스테아로일 포스파티딜콜린(DSPC), 디미리스토일 포스파티딜콜린(DMPC), 디팔미토일 포스파티딜콜린(DPPC) 및 디올레오일 포스파티딜콜린(DOPC)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
3 항. 상기 1 항 또는 2 항에 있어서, 콜레스테롤 화합물은 콜레스테롤, 콜레스타놀, 7-디하이드로콜레스테롤 및 피토스테롤로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
4 항. 상기 1 항 내지 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질은 디스테아로일 포스파티딜 에탄올 아민(DSPE), 디팔미트일 포스파티딜 에탄올 아민(DPPE), 디미리스토일 포스파티딜 에탄올 아민(DMPE) 및 디올레오일 포스파티딜 에탄올 아민(DOPE)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
5 항. 상기 1 항 내지 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물 및 포스파티딜콜린기를 갖는 지질 중 어느 하나는 폴리알킬렌글리콜로 수식(modifying)되는 지질인 것인, 조성물.
6 항. 상기 1 항 내지 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 난수용성 약리 활성 물질은 탁산 화합물, 마크로라이드 화합물, 빈카알카로이드 화합물, 퀴놀린알카로이드 화합물 및 에토포시드 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
7 항. 상기 6 항에 있어서, 탁산 화합물은 파클리탁셀, 도세탁셀, 카바지탁셀 및 이들의 배당체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
8 항. 상기 6 항에 있어서, 마크로라이드 화합물은 바필로마이신, 콘카나마이신, 아지트로마이신 및 클라리트로마이신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
9 항. 상기 1 항 내지 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 지질 필름 형성용인 것인, 조성물.
10 항. 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 지질 필름에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 것인, 지질 필름.
11 항. 수계용제 중에 상기 10 항의 지질 필름과 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 접촉시키는 공정을 포함하는, 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀의 제조 방법.
12 항. 상기 11 항에 있어서, 수계용제로서 저급 알코올을 추가로 포함하는 제조 방법.
13 항. 상기 11 항 또는 12 항에 있어서, 수계용제로서, 완충액을 추가로 포함하는 제조 방법.
14 항. 상기 11 항 내지 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 암세포를 인식하는 항체를 담지시키는 공정을 추가로 포함하는 제조 방법.
15 항. 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 난수용성 약리 활성 물질 및 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 내포하는 리포좀을 포함하는 리포좀 제제에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 것인, 리포좀 제제.
I. 조성물
조성물 (I)은, 이하 (I-1) 내지 (I-9)로 나타낸 양태의 발명을 포함한다.
(I-1) 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 조성물에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 것인, 조성물.
(I-2) 상기 (I-1) 항에 있어서, 포스파티딜콜린기를 갖는 지질은 수소 첨가 대두 레시틴(HSPC), 난황 인지질(EPC), 디스테아로일 포스파티딜콜린(DSPC), 디미리스토일 포스파티딜콜린(DMPC), 디팔미토일 포스파티딜콜린(DPPC) 및 디올레오일 포스파티딜콜린(DOPC)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
(I-3) 상기 (I-1) 항 또는 (I-2) 항에 있어서, 콜레스테롤 화합물은 콜레스테롤, 콜레스타놀, 7-디하이드로콜레스테롤 및 피토스테롤로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
(I-4) 상기 (I-1) 항 내지 (I-3) 항 중 어느 한 항에 있어서, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질은 디스테아로일 포스파티딜 에탄올 아민(DSPE), 디팔미트일 포스파티딜 에탄올 아민(DPPE), 디미리스토일 포스파티딜 에탄올 아민(DMPE) 및 디올레오일 포스파티딜 에탄올 아민(DOPE)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
(I-5) 상기 (I-1) 항 내지 (I-4) 항 중 어느 한 항에 있어서, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물 및 포스파티딜콜린기를 갖는 지질 중 어느 하나는 폴리알킬렌글리콜로 수식되어 이루어지는 것인, 조성물.
(I-6) 상기 (I-1) 항 내지 (I-4) 항 중 어느 한 항에 있어서, 난수용성 약리 활성 물질은 탁산 화합물, 마크로라이드 화합물, 빈카알카로이드 화합물, 퀴놀린알카로이드 화합물 및 에토포시드 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
(I-7) 상기 (I-6) 항에 있어서, 탁산 화합물은 파클리탁셀, 도세탁셀, 카바지탁셀 및 이들의 배당체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
(I-8) 상기 (I-6) 항에 있어서, 마크로라이드 화합물은 바필로마이신, 콘카나마이신, 아지트로마이신 및 클라리트로마이신으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것인, 조성물.
(I-9) 상기 (I-1) 항 내지 (I-8) 항 중 어느 한 항에 있어서, 지질 필름 형성용인 것인, 조성물.
II. 지질 필름
지질 필름 (II)은, 이하의 (II-1)에 나타낸 양태의 발명을 포함한다.
(II-1) 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 지질 필름에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 것인, 지질 필름.
III. 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀의 제조 방법
난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀의 제조 방법 (III)은, 이하의 (III-1) 내지 (III-4)에 나타낸 양태의 발명을 포함한다.
(III-1) 수계용제 중에 지질 필름 (II)과 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 접촉시키는 공정을 포함하는, 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀의 제조 방법.
(III-2) 상기 (III-1) 항에 있어서, 수계용제로서 저급 알코올을 추가로 포함하는 제조 방법.
(III-3) 상기 (III-1) 항 또는 (III-2) 항에 있어서, 수계용제로서, 완충액을 추가로 포함하는 제조 방법.
(III-4) 상기 (III-1) 항 또는 (III-3) 항 중 어느 한 항에 있어서, 암세포를 인식하는 항체를 담지시키는 공정을 추가로 포함하는 제조 방법.
IV. 리포좀 제제
리포좀 제제 (IV)는, 이하의 (IV-1) 내지 (IV-6)에 나타난 양태의 발명을 포함한다.
(IV-1) 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 난수용성 약리 활성 물질 및 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 내포하는 리포좀을 포함하는 리포좀 제제에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 것인, 리포좀 제제.
(IV-2) (IV-1) 항에 있어서, 상기 리포좀 중에 수계용제로서 저급 알코올을 추가로 포함하는 것인, 리포좀 제제.
(IV-3) (IV-1) 항 및 (IV-2) 항에 있어서, 상기 리포좀은 수계용제로서 완충액을 추가로 포함하는 것인, 리포좀 제제.
(IV-4) (IV-1) 항 내지 (IV-3) 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리포좀은 암세포를 인식하는 항체를 추가로 담지하는 것인, 리포좀 제제.
(IV-5) (IV-1) 항 내지 (IV-4) 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리포좀은 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀의 제조 방법 (III)의 방법으로 제조된 리포좀인 것인, 리포좀 제제.
(IV-6) (IV-1) 항 내지 (IV-5) 항 중 어느 한 항에 있어서, 암 치료 또는 예방에 이용되는 것인, 리포좀 제제.
본 발명의 조성물은 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조할 때에 알맞게 이용된다.
본 발명의 리포좀 제제는 부작용이 경감된 효과를 발휘한다.
도 1은 PTX-L(A) 및 gPTX-L(B)의 내포효율 (EE: %) 및 담지율 (LE: %)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=4이고, *는 P<0.05를 나타낸다. 또한, 그래프 가로축은 리포좀에 첨가한 PTX 및 gPTX의 각각 전체에 대한 몰비의 값(x)을 나타낸다.
도 2는 DTX-L의 내포효율 (EE: %) 및 담지율 (LE: %)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=4이고, *는 P<0.05를 나타낸다. 또한, 그래프 가로축은 리포좀에 첨가한 DTX의 전체에 대한 몰비의 값(x)을 나타낸다.
도 3은 PTX-L(A) 및 gPTX-L(B)의 물성평가 (입자경: nm, 다분산지수 및 제타 전위: mV)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=4이다. 또한, 그래프 가로축은 리포좀에 첨가한 PTX 및 gPTX의 각각 전체에 대한 몰비의 값(x)을 나타낸다.
도 4는 DTX-L의 물성평가 (입자경: nm, 다분산지수 및 제타 전위: mV)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=3이다. 또한, 그래프 가로축은 리포좀에 첨가한 DTX의 전체에 대한 몰비의 값(x)을 나타낸다.
도 5는 PTX-L(A) 및 gPTX-L(B)의 유지율(%) 및 입자경(mm)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=3이다. 또한, 그래프 가로축은 리포좀에 첨가한 PTX 및 gPTX의 각각 전체에 대한 몰비의 값(x)을 나타낸다.
도 6은 DTX-L의 유지율(%) 및 입자경(mm)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=3이다. 또한, 그래프 가로축은 리포좀에 첨가한 DTX의 전체에 대한 몰비의 값(x)을 나타낸다.
도 7은 PTX-L(A) 및 gPTX-L(B)의 항암 활성 평가 (IC50 값: nM)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=5이고, *는 P<0.05를 나타낸다.
도 8은 DTX-L의 항암 활성 평가 (IC50 값: nM)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다.
도 9는 BafA1-L의 내포효율 (EE: %), 담지율 (LE: %) 및 물성평가 (입자경: nm, 다분산지수 및 제타 전위: mV)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=3이고, *는 P<0.05를 나타낸다. 또한, 그래프 가로축은 리포좀에 첨가한 바필로마이신의 전체에 대한 몰비의 값(x)을 나타낸다.
도 10은 BafA1-L의 항암 활성 평가 (IC50 값: nM)에 관한 실험 결과를 나타내는 그래프이다. N=5이고, *는 P<0.05를 나타낸다.
도 11은 비교실험예의 결과를 나타내는 사진이다. A는 본원 발명의 지질 필름을 기초로 제조한 리포좀이며, B는 비특허문헌 1에 기재된 조성의 지질 필름을 기초로 하여 제조한 리포좀이다.
도 12는 실시예 3에 나타낸, 본 발명의 도세탁셀 내포 리포좀을 이용한 독성 실험 결과를 나타내는 카플란-마이어 (Kaplan-Meier) 그림이다. 그래프의 세로축은 생존율(%)을 나타낸다. 그래프의 가로축은 투여 후 일수를 나타낸다.
본 명세서에서 "지질"이란, 단순 지질, 복합 지질, 유도 지질 등을 의미하며, 특별히 이들에 한정되지 않는다. 또한, 이러한 지질에, 예를 들어 폴리알킬렌 글리콜 등의 고분자 등에 의해 수식되는 지질도 포함된다.
조성물 (I)
본 발명의 조성물 (I)은, 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 조성물에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5의 몰비인 조성물이다.
보다 바람직하게는, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 4~8:2~6:0.2~2:0.01~4인 조성물이다.
더욱 바람직하게는, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 5~7:3~5:0.3~1.5:0.05~3인 조성물이다.
가장 바람직하게는, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 5~6:4~5:0.5~1:0.1~2인 조성물이다.
포스파티딜콜린기를 갖는 지질은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 인지질을 들 수 있으며, 보다 구체적으로는, HSPC, ECP, DMPC, DPPC, DOPC 등의 인지질을 들 수 있다. 이들 중에서도, 수소 첨가 대두 레시틴 (HSPC)가 바람직하다. 또한, 상술한 포스파티딜콜린기를 가진 지질은 1종 뿐만 아니라, 2종 이상을 적당히 조합해서 이용할 수 있다.
콜레스테롤 화합물은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 콜레스테롤, 콜레스타놀, 7-디하이드로콜레스테롤 및 피토스테롤 등을 들 수 있다. 이들 중에서도, 콜레스테롤이 바람직하다. 또한, 상술한 콜레스테롤 화합물은 1종 뿐만 아니라, 2종 이상을 적당히 조합해서 이용할 수 있다.
포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 인지질을 들 수 있으며, 보다 구체적으로는, DSPE, DPPE, DMPE, DOPE 등의 인지질을 들 수 있다. 이들 중에서도, DSPE가 바람직하다. 또한, 상술한 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질은 1종 뿐만 아니라, 2종 이상을 적당히 조합해서 이용할 수 있다.
상술한 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 또는 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질은, 모두 폴리알킬렌 글리콜로 수식된 것으로 할 수도 있다.
폴리알킬렌 글리콜은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 등을 들 수 있다. 이들 중에서도, 폴리에틸렌 글리콜이 바람직하다.
폴리알킬렌 글리콜의 분자량은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 수평균 분자량으로는 500 내지 3000을 들 수 있다. 예를 들어, 중량 평균 분자량으로는 500 내지 10000을 들 수 있다.
상술한 폴리알킬렌 글리콜에 의한 수식의 양태는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 화학 결합으로 이루어지는 양태로 수식되는 것을 들 수 있다. 특히 포스파티딜콜린기를 갖는 지질 또는 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질이라면, 이의 친유성기가 아닌 친수성기 (알코올 유도성기)에 대해 폴리알킬렌 글리콜이 화학 결합으로 이루어지는 것이 바람직하다. 보다 구체적으로는, mPEG-DSPE 등의 폴리에틸렌 글리콜에 의해 수식되어 이루어지는 인지질을 들 수 있다.
난수용성 약리 활성 물질은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 물에 용해성이 현저하게 낮은 약리 활성 물질을 사용할 수 있으며, 0℃에서의 물에 대한 용해도가 10000 mg/L 이하, 바람직하게는 1000 mg/L 이하이다. 또한, 이와 같은 용해도의 하한치가 0 이상인 것은 말할 것도 없다. 이와 같은 구체적인 난수용성 약리 활성 물질로서, 탁산 화합물, 마크로라이드 화합물, 빈카알칼로이드 화합물, 퀴놀린알칼로이드 화합물 및 에토포시드 화합물 등을 들 수 있다.
여기서, 탁산 화합물은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀, 카바지탁셀 및 이들의 배당체 등을 들 수 있다.
배당체는 특별히 한정되지 않으며, 공지의 배당체를 사용할 수 있다. 구체적으로는, 글루코스, 갈락토스 등의 단당류에 의해 수식된 배당체를 들 수 있다. 이중에서도 글루코스 배당체가 바람직하다. 또한, 단당류의 형태로서, 피라노스, 퓨 라노스 등의 고리형 당에 의해 수식된 배당체로 하는 것이 바람직하다. 본 발명의 배당체로서 글루코피라노사이드가 바람직하다.
또한, 배당체란 이의 아글리콘에 적당한 기를 가지면서 당을 수식할 수도 있다. 예를 들어, 파클리탁셀과 글루코피라노사이드 사이에 옥시아세틸기가 있는 7-글루코실옥시아세틸파클리탁셀이 가장 바람직하다.
또한, 마크로라이드 화합물은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 바필로마이신, 콘카나마이신, 아지트로마이신, 및 클라리트로마이신 등을 들 수 있다.
또한, 퀴놀린알카로이드 화합물은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 캄토테신, 이리노테칸 등을 들 수 있다.
또한, 빈카알칼로이드 화합물은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐린 등을 들 수 있다.
또한, 에토포시드 화합물은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 에토포시드, 테니포시드 등을 들 수 있다.
본 발명의 조성물 (I)은, 공지의 용매에 용해시킬 수 있다. 구체적인 용매는 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 클로로포름 등의 유기용제와 필요에 따라 메탄올, 에탄올 등의 알코올을 적절히 혼합하면서 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물 (I)은 후술하는 지질 필름 (II)의 형성을 위해서 적절히 사용할 수 있다.
지질 필름 (II)
본 발명의 지질 필름 (II)은 상술한 조성물 (I)과 동일한 조성을 가질 수 있다. 즉, 본 발명의 지질 필름의 일 양태로서, 상술한 조성물 (I)과 동일한 조성으로 이루어진 양태가 포함될 수 있다.
본 발명의 지질 필름 (II)이란, 보다 상세하게는 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질을 포함하는 조성물에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 지질 필름이다.
예를 들어, 상술한 바와 같이 조성물 (I)을 공지의 용매에 용해시킨 경우에는 이를 증발 건조함으로써도 지질 필름 (II)을 얻을 수 있다.
구체적인 증발 건조의 방법은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어 증발기 등을 사용하는 방법을 들 수 있다. 증발 건조의 조건에 대해서는 특별히 한정되지 않으며, 지질 이중막 등으로 대표되는 지질 다중막을 형성시킬 수 있는 범위에서 적절히 설정하면 된다.
이와 같이 해서 얻어진 지질 필름 (II)은 이하에 나타낸 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조하기 위한 방법의 원료로서 알맞게 사용할 수 있다.
난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀의 제조 방법 (III)
본 발명의 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조하는 방법 (III)은, 수계용제 중에서 상술한 지질 필름 (II)과 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 접촉시키는 공정을 포함한다.
본 명세서에서 용어 "내포"란, 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 리포좀 내에 난수용성 약리 활성 물질이 완전히 포함되는 양태, 이의 일부 분자가 리포좀을 구성하는 지질 다중막을 관통하는 양태 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 용어 "접촉"은, 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 지질 필름 (II)과 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 포함하는 수계용제를 혼합시키는 양태를 들 수 있다.
본 명세서에서 용어 "수계용제"는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 적어도 물을 포함하는 용제의 양태를 들 수 있다. 하기에 나타낸 완충액 및/또는 저급 알코올을 추가로 포함하는 양태일 수도 있다.
폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 알킬에테르 황산 나트륨, 폴리옥시에틸렌 알킬에테르 인산, 폴리옥시에틸렌 알킬페닐에테르 인산, 폴리(옥시에틸렌-옥시프로필렌)메틸폴리실록산 공중합체, 폴리옥시에틸렌 옥틸페닐에테르, 폴리옥시에틸렌 스테아릴에테르, 폴리옥시에틸렌 스테아린산 아미드, 폴리옥시에틸렌 세틸에테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시, 폴리옥시에틸렌 피마자유 에스테르 등을 들 수 있다.
이들 중에서도, 폴리옥시에틸렌 피마자유 에스테르가 바람직하고, 폴리옥시알킬렌(C24)피마자유 지방산에스테르 (크레모포르 (등록상표) EL)가 보다 바람직하다.
상술한 지질 필름 (II)과 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 접촉시킨 후에, 이러한 접촉물을 공지의 리포좀 형성 처리를 실시함으로써, 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조할 수 있다.
구체적인 리포좀 형성 처리 방법은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 박층 수화법, 초음파 처리법, 압출기(extruder) 처리법 등을 들 수 있다. 또한, 리포좀 형성 처리한 후, 이를 멤브레인 필터를 이용한 한외 여과법을 실시할 수도 있다.
또한, 상기 수계용제는 물에 더하여 저급 알코올을 추가로 포함하는 양태일 수 있다. 저급 알코올은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어, 탄소수가 1 내지 4의 알코올을 들 수 있다.
그리고, 상기 수계용제는, 물 및/또는 저급 알코올 외에, 완충액을 추가로 포함하는 양태일 수도 있다. 완충액은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어, PBS, MES, ADA, PIPES, ACES, BES, TES, HEPES 등을 들 수 있다. 이들 중에서도, PBS가 바람직하다.
상술한 수계용제에서 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물의 사용량은 특별히 한정되지 않지만, 통상은 용제 100 용량부에 대해 10 내지 30 용량부, 바람직하게는 15 내지 25 용량부, 더욱 바람직하게는 17 내지 23 용량부, 가장 바람직하게는 18 내지 22 용량부이다.
또한, 용량부란 상압 및 실온 (15 내지 40℃ 정도)의 환경하에서 측정되는 수치이다.
본 발명의 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조하는 방법 (III)에 의해 얻어진 리포좀의 입자경 측정치는 특별히 한정되지 않으며, 통상은 200 nm 정도 이하로 할 수 있다.
또한, 본 발명의 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조하는 방법 (III)에 의해 얻어진 리포좀의 제타 전위의 측정치도 특별히 한정되지 않는다. 통상은 -10 mV 정도의 아니온성 리포좀으로 할 수 있다.
본 발명의 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조하는 방법 (III)의 일 양태로서, 상술한 방법으로 형성된 리포좀에 대해 암 세포를 인식하는 항체를 담지시키는 공정을 추가로 포함하는 방법을 들 수 있다. 즉, 본 발명의 제조 방법에 의해 제조된 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀은 암 세포를 인식하는 항체를 담지하는 리포좀일 수 있다.
암 세포를 인식하는 항체는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 면역글로블린일 수 있으며, Fab 등의 항체 단편일 수도 있다. 이들 항체 중에서도 면역글로블린이 바람직하며, IgG가 바람직하다.
암 세포를 인식하는 항체를 담지시키는 방법은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 링커를 사용해 화학적 수식이 실시되어 이루어진 것일 수 있다.
상기 암 세포란 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 폐암세포, 비소세포 폐암, 유방암 세포, 식도암, 위암 세포, 간암 세포, 췌장암 세포, 대장암 세포, 난소암, 자궁경부암 세포, 자궁 내막암 세포, 전립선암 세포, 두경부암 세포 (구강암 세포, 인후암 세포, 후두암 세포, 비강 혹은 부비강암 세포, 침샘암 세포, 및 갑상선암 세포 등을 포함한다) 등을 들 수 있다.
이 중에서도, 파클리탁셀의 임상적인 적용 지식에 기초하여, 비소세포 폐암 세포, 유방암 세포, 식도암 세포, 위암 세포, 자궁 내막암 세포, 난소암 세포 및 전립선암 세포 등이 바람직하다.
상술한 암 세포를 인식하는 항체로서, 암 세포의 표층에 존재하는 단백질 (예를 들어, CD44, CD133 등과 같은 CD 단백질 군을 형성하는 CD 단백질; 성장 인자, 혹은 호르몬에 대한 수용체; 막 관통 혹은 막 결합 도메인을 갖는 단백질 등), 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 특이적으로 인식하는 항체를 들 수 있다. 이와 같은 항체는, 특별히 한정되는 것은 아니며, 각각의 암 세포 표층에 존재하는 것이 공지되어 있는 항체를 적절히 선택할 수 있다.
유방암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어 유방암에 걸린 환자로부터 채취한 유방암 세포, 구체적으로는, 유방암 조직 유래 세포인 Hs274. T 세포, Hs280. T 세포, Hs281. T 세포, Hs343. T 세포, Hs362. T 세포, Hs739. T 세포, Hs741. T 세포, Hs742. T 세포, Hs190. T 세포, Hs319. T 세포, Hs329. T 세포, Hs344. T 세포, Hs350. T 세포, Hs371. T 세포, Hs748. T 세포, Hs841. T 세포, Hs849. T 세포, Hs851. T 세포, Hs861. T 세포, Hs905. T 세포, Hs479. T 세포, Hs540. T 세포, Hs566 (B). T 세포, Hs605. T 세포, Hs606 세포, BT-20 세포, UACC-812 세포, HCC1954 세포, Hs574. T 세포, BT-483 세포, BT-549 세포, DU4475 세포, Hs578 T 세포, BT-474 세포, UACC-893 세포, HCC38 세포, HCC70 세포, HCC202 세포, HCC1143 세포, HCC1187 세포, HCC1395 세포, HCC1419 세포, HCC1500 세포, HCC1599 세포, HCC1937 세포, HCC2157 세포, HCC2218 세포, HCC1569 세포, MB157 세포, SK-BR3 세포, MDA-MB-330 세포, MDA-MB-453 세포, MDA-MB-157 세포, MDA-MB-134 세포, T-47D 세포, ZR-75 세포 또는 MCF-7 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체 (항 ErbB2 항체) 또는 항 CEA 항체 등을 들 수 있다.
폐암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어 폐암에 걸린 환자로부터 채취한 폐암 세포, 구체적으로는, 폐암 조직 유래 세포인 Hs229. T 세포, NCI-H2066 세포, NCI-H2286 세포, NCI-H1703 세포, Hs573. T 세포, A549 세포, A427 세포, N417 세포, NCI-H596 세포, SW1573 세포, NCI-H835U 세포, MC11 세포, NCI-H727 세포, NCI-H720 세포, NCI-H810 세포, NCI-H292 세포, NCI-H2126 세포, H69 세포, NCI-H1688 세포, NCI-H1417 세포, NCI-H1672 세포, NCI-H1836 세포, DMS79 세포, DMS53 세포, DMS114 세포, SW1271 세포, NCI-H2227 세포, NCI-H1963 세포, SHP-77 세포, H69 세포, H69AR 세포, NCI-H2170 세포, NCI-H520 세포 또는 SW900 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체, 항 EGFR 항체 또는 항 CEA 항체 등을 들 수 있다.
비소세포 폐암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 비소세포 폐암에 걸린 환자로부터 채취한 비소세포 폐암 세포, 구체적으로는, 비소세포 폐암 조직 유래 세포인 NCI-H23 세포, NCI-H522 세포, NCI-H1435 세포, NCI-H1563 세포, NCI-H1651 세포, NCI-H1734 세포, NCI-H1793 세포, NCI-H1838 세포, NCI-H1975 세포, NCI-H2073 세포, NCI- H2085 세포, NCI-H2228 세포, NCI-H2342 세포, NCI-H2347 세포, NCI-H2135 세포, NCI-H2172 세포 또는 NCI-H2444 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체 또는 항 EGFR 항체 등을 들 수 있다.
식도암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 식도암에 걸린 환자로부터 채취한 식도암 세포, 구체적으로는, 식도암 조직 유래 세포인 SGF-3 세포, EC-YO 세포, TE-1 세포, TE-2 세포, TE-3 세포, TE-4 세포, TE-5 세포, TE-6 세포, TE-7 세포, TE-8 세포, TE-9 세포, TE-10 세포, TE-11 세포 , TE-12 세포, TE-13 세포, TE-14 세포 또는 TE-15 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체 또는 항 EGFR 항체 등을 들 수 있다.
위암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 위암에 걸린 환자로부터 채취한 위암 세포, 구체적으로는, 위암 조직 유래 세포인 AZ521 세포, AGS 세포, SNU-1 세포, SNU-5 세포, SNU-16 세포, NCI-N87 세포, Hs746 T 세포 또는 KATO III 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체, 항 EGFR 항체, 항 CEA 항체 또는 항 SLX 항체 등을 들 수 있다.
간암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 간암에 걸린 환자로부터 채취한 간암 세포, 특히 간암 조직 유래 세포인 HepG2 세포, Huh-7 세포, C3A 세포, SNU- 398 세포, SNU-449 세포, SNU-182 세포, SNU-475 세포, Hep3B2.1-7 세포, PLHC-1 세포, SNU-387 세포, SNU-423 세포 또는 SK-HEP-1 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체 등을 들 수 있다.
췌장암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 췌장암에 걸린 환자로부터 채취한 췌장암 세포, 구체적으로는 췌장암 조직 유래 세포인 MIAPaCa-2 세포, BxPC-3 세포, HPAF-II 세포 , HPAC 세포, Panc03.27 세포, Panc08.13 세포, Panc02.03 세포, Panc02.13 세포, Panc04.03 세포, Panc05.04 세포, Capan-2 세포, CFPAC-1 세포, PL45 세포, Panc10.05 세포, PANC-1 세포, AsPC-1 세포, Capan-1 세포, SW1990 세포, Hs766 T 세포 또는 SU. 86.86 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 Her2 항체, 항 CEA 항체 또는 항 SLX 항체 등을 들 수 있다.
대장암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어 대장암에 걸린 환자로부터 채취한 대장암 세포, 특히 대장암 조직 유래 세포인 WiDr 세포, Caco-2 세포, NCI-H548 세포, Hs255. T 세포, TAC-1 세포, COLO320DM 세포, COLO320HSR 세포, DLD-1 세포 HCT-15 세포, SW480 세포, SW403 세포, SW48 세포, SW1116 세포, SW948 세포, SW1417 세포, LS123 세포, LS180 세포, LS174T 세포, C2BBe1 세포, Hs257. T 세포, Hs587. Int 세포, HT-29 세포, HCT-8 세포, Hs675. T 세포, HCT116 세포, ATRFLOX 세포, Hs698. T 세포, SW626 세포, SNU-C1 세포, COLO205 세포, COLO201 세포, SW620 세포, LoVo 세포, SK-CO-1 세포 및 T84 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체, 항 EGFR 항체 또는 항 CEA 항체 등을 들 수 있다.
난소암을 인식하는 항체로서, 예를 들어, 난소암에 걸린 환자로부터 채취한 난소암 세포, 구체적으로는 난소암 조직 유래 세포인 PA-1 세포, Caov-3 세포, TOV-21G 세포, TOV-112D 세포, Hs38. T 세포, Hs571. T 세포, ES-2 세포, TE84. T 세포, NIH : OVCAR-3 세포, SK-OV-3 세포, Caov-4 세포 또는 OV-90 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체 등을 들 수 있다.
자궁 경부암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 자궁 경부암에 걸린 환자로부터 채취한 자궁 경부암 세포, 구체적으로는 자궁 경부암 조직 유래 세포인 HeLa 세포, HeLa229 세포, HeLaS3 세포, H1HeLa 세포, Hs588. T 세포, GH329 세포, GH354 세포, HeLaNR1 세포, C-4I 세포, C-4II 세포, DoTc2 4510 세포, C-33A 세포, SW756 세포, SiHa 세포, HT-3 세포, MS751 세포, CaSki 세포, ME- 180 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드 당쇄 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체 등을 들 수 있다.
자궁 내막암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 자궁 내막암에 걸린 환자로부터 채취한 자궁 내막암 세포, 구체적으로는 자궁 내막암 조직 유래 세포인 HHUA 세포, KLE 세포, HEC-1 -A 세포, HEC-1-B 세포, HEC-6 세포, HEC-50 세포, HEC-59 세포, HEC-108 세포, HEC-116 세포, RL95-2 세포, SK-UT-1 세포, SK-UT-1B 세포, MES-SA 세포, MES-SA/Dx5 세포, MES-SA/MX2 세포, AN3CA 세포, SNG-P 세포, SNG-M 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄, 및 지질 등으로 대표되는 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체, 항 CEA 항체 등을 들 수 있다.
전립선암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어 전립선암에 걸린 환자로부터 채취한 전립선암 세포, 특히 전립선암 조직 유래 세포인 LNCaP 세포, 22Rv1 세포, PC-3 세포, MDA PCa 2b 세포, TRAMP-C3 세포, DU145 세포, NCI-H660 세포, TSU- PR1PC-82 세포, PPC-1 세포, VCRU-Pr-2 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등의 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체, 항 EGFR 항체를 들 수 있다.
두경부암 세포의 일종인 구강암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 구강암에 걸린 환자로부터 채취한 구강암 세포, 구체적으로는 구강암 조직 유래 세포인 Hs53. T 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등의 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
두경부암 세포의 일종인 인두암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 인두암에 걸린 환자로부터 채취한 인두암 세포, 구체적으로는, 인두암 조직 유래 세포인 C666-1 세포, NPC-TY861 세포, MPC-Y851 세포, MPC-K852 세포, KKK-YT 세포, MPC-ST 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등의 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
두경부암 세포의 일종인 후두암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 후두암에 걸린 환자로부터 채취한 후두암 세포, 구체적으로는, 후두암 조직 유래 세포인 FaDu 세포, Hs840. T 세포, Detroit 562 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등의 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
두경부암 세포의 일종인 비강 또는 부비강암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어, 각 비강 또는 부비강암에 걸린 환자로부터 채취한 비강 또는 부비강암 세포, 구체적으로는 비강암 조직 유래 세포 또는 부비강암 조직 유래 세포인 RPMI2650 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등의 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
두경부암 세포의 일종인 침샘암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어 침샘암에 걸린 환자로부터 채취한 침샘암 세포, 구체적으로는, 침샘암 조직 유래 세포인 SGT-1 세포 등 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등의 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
두경부암 세포의 일종인 갑상선암 세포를 인식하는 항체로서, 예를 들어 갑상선암에 걸린 환자로부터 채취한 갑상선암 세포, 구체적으로는, 갑상선암 조직 유래 세포인 HTC/C3 세포, SW579 세포, TT 세포 등의 세포 표면에 존재하는 단백질, 펩타이드, 당쇄 및 지질 등의 각종 생체 분자를 인식하는 항체를 들 수 있다.
이러한 두경부암 세포를 인식하는 항체로서, 구체적으로는, 항 HER2 항체, 항 EGFR 항체 등을 들 수 있다.
이와 같은 본 발명의 리포좀에 대해 암세포를 인식하는 항체를 담지하는 방법은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 특허문헌 1에 기재된 방법을 들 수 있다.
IV. 리포좀 제제
본 발명의 리포좀 제제란, 상기 난수용성 약리 활성 물질을 내포하는 리포좀을 제조하는 방법 (III)에 의해 얻어지는 리포좀을 포함하는 것이다.
즉, 본 발명의 리포좀 제제란, 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 난수용성 약리 활성 물질 및 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 내포하는 리포좀 및 약학적으로 허용되는 담체 및 첨가제를 포함하는 리포좀 제제에 있어서, 상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 상기 난수용성 약리 활성 물질의 몰비가 각각 3~8:2~7:0.1~3:0.001~5인 리포좀 제제이다.
이러한 리포좀 제제는 이에 내포되는 난수용성 약리 활성 물질이 치료 효과를 발휘하는 각종 질환에 따라 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀, 카바지탁셀 또는 이들의 배당체 등으로 대표되는 탁산계 화합물을 리포좀 제제에 내포되는 난수용성 약리 활성 물질로 하는 경우, 상기 리포좀을 포함하는 리포좀 제제는, 암, 알츠하이머, 아토피성 피부염, 궤양성 대장염, 류마티스 관절염 (자가면역 질환), 파이롤리균성 위염, 바이러스성 간염, (감염성 염증) 등의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다. 또한, 해열, 진통, 진해, 세균, 면역 억제, 항 기생충 등의 효과를 발휘하는 목적에 사용할 수 있다.
예를 들어, 바필로마이신, 콘카나마이신, 아지트로마이신 및 클라리트로마이신 등으로 대표되는 마크로라이드 화합물을 리포좀 제제에 내포된 난수용성 약리 활성 물질로 하는 경우, 상기 리포좀을 포함하는 리포좀 제제는 암, 알츠하이머, 아토피성 피부염, 궤양성 대장염, 류마티스 관절염 (자가면역 질환), 파이롤리균성 위염, 바이러스성 간염, (감염성 염증) 등의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다. 또한, 해열, 진통, 진해, 세균, 면역 억제, 항 기생충 등의 효과를 발휘하는 목적에 사용할 수 있다.
예를 들어, 캄토테신, 이리노테칸 등으로 대표되는 퀴놀린알칼로이드 화합물을 리포좀 제제에 내포된 난수용성 약리 활성 물질로 하는 경우, 상기 리포좀을 포함하는 리포좀 제제는 암, 알츠하이머, 아토피성 피부염, 궤양성 대장염, 류마티스 관절염 (자가면역 질환), 파이롤리균성 위염, 바이러스성 간염, (감염성 염증) 등의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다. 또한, 해열, 진통, 진해, 세균, 면역 억제, 항 기생충 등의 효과를 발휘하는 목적에 사용할 수 있다.
예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐린 등 빈카알칼로이드 화합물을 리포좀 제제에 내포된 난수용성 약리 활성 물질로 하는 경우, 상기 리포좀을 포함하는 리포좀 제제는 암, 알츠하이머, 아토피성 피부염, 궤양성 대장염, 류마티스 관절염 (자가면역 질환), 파이롤리균성 위염, 바이러스성 간염, (감염성 염증) 등의 예방 또는 치료를 위해 사용될 수 있다. 또한, 해열, 진통, 진해, 세균, 면역 억제, 항 기생충 등의 효과를 발휘하는 목적에 사용할 수 있다.
상기 암은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 폐암 세포, 비소세포 폐암, 유방암 세포, 식도암, 위암 세포, 간암 세포, 췌장암 세포, 대장암 세포, 난소암 세포, 자궁 경부암 세포, 자궁 내막암 세포, 전립선암 세포, 두경부암 세포 (구강암 세포, 인두암 세포, 후두암 세포, 비강 혹은 부비강암 세포, 침샘암 세포 및 갑상선암 세포 등을 포함한다)등을 들 수 있다.
본 발명의 리포좀 제제는 예를 들어, 상기 각종 질환에 걸린 환자에 대해 투여할 수 있다. 구체적인 투여 경로는 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 점적(点滴) 등의 정맥내 주사 (정주), 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사 등을 선택할 수 있으며, 환자의 연령, 증상에 의해 적절히 투여 방법을 선택할 수 있다.
리포좀 제제의 구체적인 투여 방법으로는, 의약 조성물을 실린지나 점적을 이용해 투여할 수 있다. 또한, 카테터를 상기 환자의 체내, 예를 들어 관강내, 혈관내 등에 삽입하여 이의 선단을 표적부위 근처에 이르게 하고, 당해 카테터를 통해 원하는 표적 부위 또는 이의 근방 혹은 표적 부위로의 혈류가 기대되는 부위로부터 투여하는 것도 가능하다.
본 발명의 리포좀 제제는 상기 언급한 각종 질환을 앓고 있는 환자에 대해, 그 질환의 증상을 치료하거나 적어도 부분적으로 저지하기 위한 충분한 양이 투여된다.
구체적인 리포좀 제제에 봉입되는 약물의 유효 투여량은 특별히 한정되지 않는다. 예를 들어, 리포좀 제제에 내포되는 난수용성 약리 활성 물질의 양으로 환산하여, 통상 0.01 내지 50 mg/kg 정도의 범위일 수 있다.
본 발명의 리포좀 제제에는 약학적으로 허용되는 담체 및 첨가제를 포함할 수도 있다. 이들의 약학적으로 허용되는 담체 및 첨가제는 특별히 한정되지 않으며, 당해 분야에서 종래 공지된 것을 널리 사용할 수 있다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 실시예를 나타낸다. 또한, 본 발명은 이하에 나타내는 실시예에 한정되지 않는 것은 말할 것도 없다.
<제조예 1>
PTX , gPTX 또는 DTX를 내포하는 리포좀
PTX (파클리탁셀), gPTX (7-글루코실옥시아세틸파클리탁셀) 또는 DTX (도세탁셀)을 내포하는 리포좀을 박층 수화법으로 제조하였다.
9.6 mg의 수소 첨가 레시틴 (HSPC), 3.2 mg의 콜레스테롤 (Chol), 3.2 mg의 1,2-디스테아로일-sn-글리세롤-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-2000] (mPEG-DSPE) 및 탁산 화합물 (PTX, gPTX 또는 DTX)을 칭량하고, HSPC:Chol:mPEG-DSPE:탁산 화합물=6:4:0.5:X의 몰비가 되도록 하여 둥근 플라스크에 첨가하였다.
구체적으로, PTX는 0.9, 1.8 또는 3.5 mg (x=0.5~2), gPTX는 2.2, 4.4 또는 6.6 mg (x=1~3), 그리고 DTX는 1.7, 3.3 또는 5.0 mg (x=1~3)을 칭량하고, 이들을 둥근 플라스크에 첨가하였다.
이 둥근 플라스크에, 4 mL의 유기 용매 (클로로포름:메탄올=9:1)을 첨가하고, 혼합한 지질을 잘 용해시켰다. 그 후, 혼합 지질을 회전 농축기로 진공 건조시켜서 유기 용매를 완전히 제거하고, 탁산 화합물을 내포하는 지질 필름을 형성시켰다.
이렇게 생성된 지질 필름에 1 mL의 CEP (크레모포르 EL:에탄올:인산 완충생리식염수 (PBS)=20:15:65 [부피비])를 첨가하고, 60℃로 가온하면서 현탁하여 리포좀을 형성시켰다. 입경을 조절하기 위해, 60℃에서의 가온하에서 소니케이션 처리를 실시하였다. 그 후, 100 KDa의 막 필터를 이용한 한외 여과법으로 미내포의 약제를 제거하기 위해 리포좀 외액을 PBS로 치환하였다.
이렇게 제조한 리포좀의 입경과 제타 전위를 ELS-8000 (오오츠카전자)을 이용하여 동적 산란광법과 전기영동 산란광법으로 측정하였다. 또한, 리포좀 내의 약제 농도를 역상 HPLC로 측정하여 내포효율 및 담지율을 구했다.
리포좀에 내포시킨 약물 농도는 역상 고속 액체 크로마토그래피 (역상 HPLC)로 구했다. 측정 조건은 다음과 같이 설정하였다. HPLC 컬럼으로는 WP300 C18.5 μm 4.6×150 mm를 사용하였다. 검출 파장으로는 PTX 및 gPTX에 대해 227 nm, 또한 DTX에 대해 검출 파장 229 nm를 선택하고, 이동상으로는 메탄올:초순수=7:3의 용매를 사용하였다. 구체적으로는 10 μL의 리포좀 샘플을 HPLC 컬럼에 주입하고, 1.0 mL/min 유속의 이동상으로 송액하였다.
얻어진 약제 함유량으로부터 이하 식 (1) 및 (2)를 이용하여 내포효율 및 담지율을 산출하였다.
내포효율 (EE: %) = 약제 함유량/초기 사용 약제량 × 100 (1)
담지율 (LE: %) = (약제 함유량/약제 몰 중량)/초기 지질 몰수 × 100 (2)
<제조예 2>
바필로마이신 A1 ( BafA1 )을 내포하는 리포좀
BafA1을 내포하는 리포좀을 박층 수화법으로 제조하였다. 9.6 mg의 HSPC, 3.2 mg의 Chol, 3.2 mg의 mPEG-DSPE 및 BafA1을 칭량하고, HSPC:Chol:mPEG-DSPE=6:4:0.5:x의 몰비로 이들을 둥근 플라스크에 첨가하였다.
BafA1은 145 μg 또는 290 μg (x=0.1 또는 0.2)을 칭량하고, 이에 첨가하였다.
이 둥근 플라스크에 4 mL의 유기 용매 (클로로포름:메탄올=9:1)를 넣고 혼합한 지질을 잘 용해시켰다. 그 후, 혼합 지질을 회전 농축기로 진공 건조시켜 유기 용매를 완전히 제거하고, BafA1을 내포하는 지질 필름을 형성시켰다.
이렇게 하여 만든 BafA1을 내포하는 지질 필름을 이용한 리포좀 형성 처리 및 물성 평가는, 상기 탁산 화합물을 내포하는 리포좀의 제조와 동일하게 수행하였다.
리포좀에 내포시킨 BafA1의 농도는 이하의 측정 조건에서 역상 HPLC로 구했다. HPLC 컬럼으로는 WP300 C18.5 μm 4.6 × 150 mm를 사용하였다. 검출 파장으로는 245 nm를 선택하고, 이동상으로는 메탄올:초순수=8:3의 용매를 사용하였다. 구체적으로는 10 μL 샘플을 HPLC 컬럼에 주입하고, 1.0 mL/min의 유속의 이동상으로 송액하였다.
내포효율 및 담지율을 상기 식 (1) 및 식 (2)로 산출하였다.
<실시예 1>
4℃에서 리포좀 안정성 시험
상기 탁산 화합물을 내포하는 리포좀을 제조한 후, 이들를 4℃에서 정치하였다. 2주 후 및 4주 후에 100 KDa의 막 필터를 이용한 한외 여과법으로 리포좀 외액 중에 흘러나온 약제를 제거하였다. 그 후, 리포좀의 입경을 동적 산란광법으로 측정하고, 또한 리포좀 용액중의 약제 농도를 역상 HPLC로 구했다. 얻어진 약제량으로부터 이하의 식 (3)을 이용해 유지율을 구했다.
유지율 (%) = 내포 약제 함유량/초기 내포 약제량 × 100 (3)
<실시예 2>
세포 독성 평가
PTX, gPTX 또는 DTX 각 약제를 내포하는 리포좀의 세포 독성을 MTT 분석 방법으로 평가하였다. 시험 대상 세포에 인간 대장암 세포주인 HT-29 세포, 인간 난소암 유래 세포인 SK-OV-3 세포 및 인간 유방암 세포주인 SK-BR-3 세포를 이용하였다. 암 세포를 96 웰 플레이트에 5000 세포/웰로 파종하였다.
24시간 배양 후, 다른 농도의 약제를 각 웰에 첨가하였다. 72시간의 약제노출 후, MTT 용액을 최종 농도 0.5 mg/mL로 첨가하고, 4시간 배양하였다. 그 후, 생성된 포르마잔을 포르마잔 용해액 (10% SDS + 0.02 규정의 HCl)으로 용해시켰다. 각 웰의 470 nm의 세포 생존률 곡선으로부터 50% 세포 치사 농도 (IC50)를 산출하였다.
또한, BafA1 및 BafA1을 내포하는 리포좀의 세포 독성은 이하의 수단의 MTT 분석 방법으로 평가하였다. 시험 대상 세포는, 인간 대장암 세포주인 HT-29 세포 및 인간 유방암 세포주인 MCF7을 사용하였다. 암 세포를 96 웰 플레이트에 5000 세포/웰로 파종하였다. 24시간 배양 후, 다른 농도의 약제를 각 웰에 첨가하였다. 48시간의 약제 노출 후, MTT 용액을 최종 농도 0.8 mg/mL로 첨가하고, 2시간 배양하였다. 그 후, 생성된 포르마잔을 포르마잔 용해액 (10% SDS + 0.02 규정의 HCl)으로 용해시켰다. 각 웰의 470 nm의 세포 생존률 곡선으로부터 50% 세포 치사 농도 (IC50)를 산출하였다.
<비교예 1>
공지의 지질 성분 ( 비특허문헌 1)을 이용한 파클리탁셀 내포 리포좀의 제조 비교
9.6 mg의 HSPC, 3.2 mg의 Chol, 3.2 mg의 mPEG-DSPE 및 1.8 mg의 PTX 혹은 14.5 mg의 HSPC, 0.8 mg의 Chol, 2.8 mg의 mPEG-DSPE 및 1.8 mg의 PTX를 칭량하고, (9:1:0.5:1 [몰비]) 이들을 둥근 플라스크에 첨가하였다. 이 둥근 플라스크에 4 mL의 유기 용매 (클로로포름:메탄올=9:1)를 첨가하고 혼합한 지질을 잘 용해시켰다. 회전 농축기로 진공 건조시켜 유기 용매를 완전히 제거하고 항암제를 포함한 지질 필름을 형성시켰다.
형성시킨 지질 필름을 1 mL의 CEP (크레모포르 EL:에탄올:인산 완충 생리식염수 (PBS)=20:15:65 [부피비])를 첨가하고, 60℃로 가온하면서 현탁하여 리포좀을 형성시켰다. 그리고 형성시킨 다중막 리포좀의 형성을 현미경으로 관찰하였다.
<각종 실험 결과>
도 1 및 도 2에서는 PTX, gPTX 및 DTX의 각 탁산 화합물의 리포좀 내에의 내포효율 (EE: %) 및 이의 담지율 (LE: %)을 측정한 결과를 나타낸다.
이에 따르면, PTX에서는 몰비가 5몰 및 10몰, gPTX에서는 몰비가 10몰, 그리고 DTX에서는 몰비가 10몰 및 20몰 일 때, 내포효율이 거의 100% 되는 것을 확인하였다. 각 약제의 담지율은 몰비를 많이하면 할수록 커지는 경향을 보였다.
도 3과 도 4에 나타난 탁산 화합물을 내포시킨 리포좀의 물성 평가에 따르면, 입자경, 다분산 지수 및 제타 전위의 모든 관점에서, 모든 리포좀 제제로 사용할 수 있는 것이 시사되었다. 특히 입자경이 200 nm 이하인 점과 제타 전위가 마이너스인 점에 대해서, 전자는 EPR 효과에 적합한 크기이며, 후자는 간에 인식되기 어려운 점에서 유용하다.
이어서, 도 5 및 도 6에 나타낸 유지율에 대해, 탁산 화합물을 내포시킨 리포좀은 모든 리포좀 제제로서 유용하다는 것이 시사되었다. 또한, 현저한 입자경의 변화도 4주간, 4℃에서의 보존 기간 동안에는 보이지 않았다.
도 7과 도 8은 PTX, gPTX 및 DTX의 각 탁산 화합물을 내포시킨 리포좀에 의한 암세포에 대한 항암 활성 평가를 나타내고 있다. 이 결과에 따르면, 어떠한 탁산 화합물을 내포시킨 리포좀도 각종 암세포에 적합한 항암 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 특히 PTX에 대해서는, 이를 리포좀 내에 내포시키는 쪽이 보다 적합한 항암 활성을 발휘하는 것으로 밝혀졌다.
도 9와 도 10은 바필로마이신을 내포시킨 리포좀에 대해, 각종 탁산 화합물과 마찬가지로 실험한 결과를 보여주고 있다. 도 9에 나타낸 바필로마이신의 리포좀내에의 내포효율 (EE: %)에 따르면, 탁산 화합물과 마찬가지로 몰비가 1몰의 경우, 거의 100%의 내포효율이 달성되는 것을 알 수 있다. 또한, 이의 담지율 (LE: %)에 대해서도 몰비를 많이하면 할수록 커지는 경향을 보였다. 또한, 입자경 및 제타 전위에 대해서도 탁산계 약제와 동일한 경향이 확인되었다.
또한, 도 10에 대해 리포좀에 내포시킨 BafA1는 BafA1와 동등하거나 그 이상의 세포 독성을 발휘하는 것으로 확인되었다.
도 11에 대한 공지의 지질 조성을 갖는 파클리탁셀을 포함하는 지질 필름을 만들고, 이를 기초로 리포좀을 제작하였다고 하여도 (도 11 (B) 참조), 도 11의 A에 나타낸 바와 같은 리포좀 막을 형성할 수는 없었다. 이러한 바늘 모양의 구조는 분명하지 않지만, 파클리탁셀의 응집물로 생각된다.
<실시예 3>
리포좀의 생존 시험
상기 리포좀을 리포좀 제제로 했을 때의 안전성을 확인하기 위해 이를 생존 시험에 제공하였다.
SPF/VAF 마우스 (계통명: BALB/cAnNCr1Cr1j; 일본 찰스 리버 사)를 사용하였다. 암컷 6주령의 BALB/c 마우스를 각 군 4 마리로 나누었다. 마우스는 23℃ 환경 하에서 사육하고, 살균한 물과 음식을 주었다.
생리 식염수에 용해된 상기 도세탁셀 리포좀 (DTX-L) 중 리포좀 전체에 대한 도세탁셀 함유 몰량 (x)이 2의 경우에 얻어진 DTX-L을, 도세탁셀 함량으로 환산하여 각각 10, 50, 100 또는 150 mg/kg의 투여량으로 상기 마우스에 꼬리 정맥으로부터 투여하였다. 또한, PBS를 컨트롤로서 마찬가지로 투여하였다. 결과를 도 12에 나타낸다.
도세탁셀의 양으로 환산하여 150 mg/kg DTX-L을 첨가한 경우에는, 투여 후 1일에서 생존율이 25%가 되고, 2일째에는 0%가 되었다. 또한, 도세탁셀의 양으로 환산하여 100 mg/kg DTX-L을 첨가한 경우에는, 투여 후 1일에서 생존율이 75%로 감소하고, 이후 15 일째까지 변화가 없었다.
따라서, 상기 DTX-L 투여량은 50 mg/kg 정도를 상한으로 할 수 있음이 시사된다. 상기 DTX-L은 적어도 약 95%의 봉입률로 도세탁셀을 내포하고 있기 때문에,이 상한치를 체중 66kg의 사람으로 환산하면 대략 3 g 이상의 투여가 가능해진다. 이 수치는 현재 도세탁셀 투여량으로 인정받고 있는 수치와 비교하여 훨씬 많은 양임이 분명하다.

Claims (15)

  1. 수소 첨가 대두 레시틴, 난황 인지질, 디스테아로일 포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 및 디올레오일 포스파티딜콜린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 포스파티딜콜린기를 갖는 지질,
    콜레스테롤, 콜레스타놀, 7-디하이드로콜레스테롤 및 피토스테롤로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 콜레스테롤 화합물,
    디스테아로일 포스파티딜 에탄올 아민, 디팔미토일 포스파티딜 에탄올 아민, 디미리스토일 포스파티딜 에탄올 아민 및 디올레오일 포스파티딜 에탄올 아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및
    파클리탁셀 또는 그의 배당체, 도세탁셀 또는 바필로마이신을 포함하는 조성물에 있어서,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 파클리탁셀의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 0.5 ~ 2이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 파클리탁셀 배당체의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 1 ~ 3이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 도세탁셀의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 1 ~ 3이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 바필로마이신의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 0.1 ~ 0.2인, 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서, 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 콜레스테롤 화합물 및 포스파티딜콜린기를 갖는 지질 중 어느 하나는 수평균 분자량 500 내지 3000의 폴리알킬렌글리콜 또는 중량평균 분자량 500 내지 10000의 폴리알킬렌글리콜로 수식되어 이루어지는 것인, 조성물.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제1항 또는 제5항에 있어서, 지질 필름을 형성하기 위해 사용되는 것인, 조성물.
  10. 수소 첨가 대두 레시틴, 난황 인지질, 디스테아로일 포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 및 디올레오일 포스파티딜콜린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 포스파티딜콜린기를 갖는 지질,
    콜레스테롤, 콜레스타놀, 7-디하이드로콜레스테롤 및 피토스테롤로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 콜레스테롤 화합물,
    디스테아로일 포스파티딜 에탄올 아민, 디팔미토일 포스파티딜 에탄올 아민, 디미리스토일 포스파티딜 에탄올 아민 및 디올레오일 포스파티딜 에탄올 아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질, 및
    파클리탁셀 또는 그의 배당체, 도세탁셀 또는 바필로마이신을 포함하는 지질 필름에 있어서,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 파클리탁셀의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 0.5 ~ 2이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 파클리탁셀 배당체의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 1 ~ 3이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 도세탁셀의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 1 ~ 3이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 바필로마이신의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 0.1 ~ 0.2인 것인, 지질 필름.
  11. 수계용제 중에서, 제 10 항의 지질 필름과 폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 접촉시키는 공정을 포함하는, 파클리탁셀 또는 이의 배당체, 도세탁셀 또는 바필로마이신을 내포하는 리포좀의 제조 방법.
  12. 제11항에 있어서, 수계용제로서 저급 알코올을 추가로 포함하는 제조 방법.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 수계용제로서, 완충액을 추가로 포함하는 제조 방법.
  14. 제11항 또는 제12항에 있어서, 암세포를 인식하는 항체를 담지시키는 공정을 추가로 포함하는 제조 방법.
  15. 수소 첨가 대두 레시틴, 난황 인지질, 디스테아로일 포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜콜린, 디팔미토일 포스파티딜콜린 및 디올레오일 포스파티딜콜린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 포스파티딜콜린기를 갖는 지질,
    콜레스테롤, 콜레스타놀, 7-디하이드로콜레스테롤 및 피토스테롤로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 콜레스테롤 화합물,
    디스테아로일 포스파티딜 에탄올 아민, 디팔미토일 포스파티딜 에탄올 아민, 디미리스토일 포스파티딜 에탄올 아민 및 디올레오일 포스파티딜 에탄올 아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질,
    파클리탁셀 또는 그의 배당체, 도세탁셀 또는 바필로마이신; 및
    폴리옥시에틸렌 에스테르 화합물을 내포하는 리포좀을 포함한 리포좀 제제에 있어서,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 파클리탁셀의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 0.5 ~ 2이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민을 갖는 지질 및 파클리탁셀 배당체의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 1 ~ 3이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 도세탁셀의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 1 ~ 3이거나,
    상기 포스파티딜콜린기를 갖는 지질, 상기 콜레스테롤 화합물, 상기 포스파티딜 에탄올 아민기를 갖는 지질 및 바필로마이신의 몰비는 각각 3 ~ 8 : 2 ~ 7 : 0.1 ~ 3 : 0.1 ~ 0.2인 것인, 리포좀 제제.
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