KR102109027B1 - 쿼세틴을 이용한 꿀벌응애 구제용 제제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 쿼세틴을 유효성분으로 포함하는 꿀벌응애 구제용 제제, 이의 제조방법 및 꿀벌응애의 구제방법에 관한 것이다.
본 발명의 제제는 쿼세틴의 난용성을 개선하고 물과 혼합시 자가유화함으로써 나노에멀전을 형성하여 수용해성과 안정성이 우수하며, 비교적 경제적으로 대량생산이 가능하고 벌들에게는 독성이 적어 안전할 뿐만 아니라 꿀벌응애들이 내성이 가지고 있지 않아 방제효과가 우수하므로 꿀벌응애의 구제용으로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

쿼세틴을 이용한 꿀벌응애 구제용 제제{Agent for controlling Varroa destructor having Quercetin}
본 발명은 쿼세틴을 유효성분으로 포함하는 꿀벌응애 구제용 제제, 이의 제조방법 및 꿀벌응애의 구제방법에 관한 것이다.
일반적으로 양봉산업은 꿀벌의 생태와 습성을 활용하여 사양 관리, 번식과 생산, 생산물의 유통, 질병과 해충의 구제 대책, 양봉기구의 개량, 밀원식물의 조성과 활용 등 합리적인 양봉경영으로 영양가 높은 고급 건강식품을 생산하여 소득을 얻는 사업 분야이다.
양봉으로 얻을 수 있는 대표적인 건강식품은 벌꿀이며, 벌꿀은 포도당과 과당을 주성분으로 하는 단당류로서, 체내 장벽에 직접 흡수되어 신체 각 부분의 근육세포에서 연소되며 생명체의 활동에 필요한 에너지를 공급할 뿐만 아니라 글리코겐 상태로 간에 저장된다. 또한, 인체에 필요한 무기물이 함유되어 있어 체내에서 생리작용을 원활하게 하고 골조직의 발육을 완전하게 하는 천연 종합 식품이다.
상기한 양봉산업은 생산물의 종류가 다양하고 수요가 급증하여 소득을 크게 높일 수 있을 뿐만 아니라 각종 농작물의 화분매개로 결실을 좋게 하여 세계 각국에서 주요 농업정책으로 다루어지고 지속적인 발전이 이루어지고 있다.
상기와 같이 양봉산업의 지속적인 발전을 위해서는 꿀벌의 질병인 세균, 바이러스, 곰팡이, 기생충 등으로부터 꿀벌을 보호하는 것이 중요하고, 특히 꿀벌응애(진드기) 등의 해충으로부터 꿀벌을 보호하는 것이 매우 중요하다.
꿀벌응애는 원래 동남아 지역에서 동양종 꿀벌의 외부 기생충 이었으나, 인간의 활동에 의한 봉군의 이동으로 인해 서양종 꿀벌 지역으로 옮겨졌고, 전 세계로 분포, 확산되었다. 꿀벌응애가 어떤 지역에 침입하고 몇 년에 걸쳐 정착을 한다면 이것을 완전히 없애는 것은 거의 불가능하다는 것이 경험적으로 밝혀져 있다. 그러므로 꿀벌응애의 감염 경로 및 생활사를 이해하고 그 밀도를 조절함으로써 경제적인 손실을 최소화하는 작업이 필요하다.
꿀벌응애의 암컷은 꿀벌의 유충, 번데기 및 성충벌에 기생하여 림프혈을 흡입하여 소위 진드기병을 유발한다. 감염된 꿀벌 성충의 무게는 정상적인 것보다 7.1~ 30.4%까지 감소하며, 기생이 심한 경우에는 불구벌이 되거나 발육이 정지되기도 한다. 꿀벌 번데기의 경우에도 꿀벌응애의 기생(또는 감염)이 심한 경우 10%의 체중감소를 보인다. 심한 경우에는 다리의 불구 또는 번데기가 죽게 되기도 한다(De Jong 등, 1982; Schneider 등, 1987). 더 큰 피해는 봉세 약화로 말미암아 채밀 성적이 크게 떨어져 채밀량이 30~46% 가량 감소하는 결과를 나타낸다. 진드기 피해를 입는 양봉농가는 한 해 평균 2만여 곳에 이르고 추산되는 피해액은 해마다 증가해 지난 해에는 6 백억원 이상인 것으로 추산되고 있다(2013년 기준). 꿀벌 유충 수의 3%정도가 진드기에 감염됐을 때 방역 약품을 사용해야 피해를 가장 줄일 수 있다.
국내에는 이미 전국적으로 만연한 상태여서 큰 피해를 주고 있으며, 설문조사결과 절반이상의 농가가 이 꿀벌 응애에 의한 직접적인 피해가 30% 이상이라고 보고되고 있다. 그동안 국내에서는 벌의 생육 및 양봉농가에 큰 피해를 끼치는 꿀벌 응애에 대한 방제를 위해 주로 유기합성 살충제들을 이용하여 필요 이상의 방제를 하여 왔고, 이 때문에 국내 서식 꿀벌 응애들이 기존의 약제에 대한 강한 내성을 보이는 문제점도 발생하고 있다.
현재 이 응애에 의한 피해는 전국적으로 지역에 관계없이 지속적으로 발생하고 있고, 효율적인 방제효과를 얻지 못하고 있어, 내성이 없는 새로운 약제의 개발 및 도입이 절실히 필요하다.
KR 10-1384515 B(2014.04.11.) KR 10-0340016 B(2002.06.10.)
본 발명이 해결하고자 하는 첫 번째 과제는 내성이 없고 방제효과가 우수한 꿀벌응애 구제용 제제 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 두 번째 과제는 상기 제제를 이용한 꿀벌응애의 구제방법을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 쿼세틴(quercetin)을 유효성분으로 포함하고, 디에틸렌글리콜모노에틸에테르, 및 폴리에틸렌글리콜 또는 그 유도체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 용해제; 및 폴리옥시에틸렌계(polyoxyethylene)의 계면활성제;를 포함하되, 물과 혼합시 자가유화(self-emulsification)하여 에멀젼을 형성하는 것을 특징으로 하는 꿀벌응애 구제용 제제를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 쿼세틴은 제제 총 중량에 대하여 0.5 내지 3 중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 용해제를 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 10 내지 30 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 계면활성제를 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 20 내지 40 중량부로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene sorbitan monostearate(Tween 60)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미에이트(Polyoxyethylene sorbitan monopalmitate(tween40)) 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene sorbitan monolaurate(tween 20))로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 제제는 쿼세틴 0.5 내지 3 중량%와, 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 10 내지 30 중량부의 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르 및 20 내지 40 중량부의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80))를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 제제를 물에 희석시 평균 입자 크기가 50 nm 이하일 수 있다.
또한, 본 발명은 (1) 쿼세틴을 디에틸렌글리콜모노에틸에테르, 및 폴리에틸렌글리콜 또는 그 유도체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 용해제와 혼합하는 단계; 및 (2) 상기 (1) 단계의 혼합물에 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene sorbitan monostearate(Tween 60)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미에이트(Polyoxyethylene sorbitan monopalmitate(tween40)) 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene sorbitan monolaurate(tween 20))로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 계면활성제를 혼합하는 단계;를 포함하는 꿀벌응애 구제용 제제의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 꿀벌응애 구제용 제제를 10 내지 50 중량배의 물과 혼합하여 나노에멀전이 형성되도록 하는 단계; 및 상기 나노에멀전을 꿀벌응애에 감염된 벌에 분무하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 꿀벌응애의 구제방법을 제공한다.
본 발명에 따른 제제는 쿼세틴의 난용성을 개선하고 물과 혼합시 자가유화하여 나노에멀전을 형성함으로써 수용해성과 안정성이 우수하며, 비교적 경제적으로 대량생산이 가능하고 벌들에게는 독성이 적어 안전할 뿐만 아니라 꿀벌응애들이 내성이 가지고 있지 않아 방제효과가 우수하므로 꿀벌응애의 구제용으로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 꿀벌의 성충에 기생하고 있는 꿀벌응애들의 모습을 나타내는 사진이다.
도 2는 꿀벌의 유충들에 기생하고 있는 꿀벌응애들의 모습을 나타내는 사진이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 꿀벌응애 구제용 제제를 물과 혼합한 후 형성된 나노 입자의 크기 분포를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 꿀벌응애 구제용 제제를 물과 혼합한 후 형성된 모습을 나타내는 사진이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명은 쿼세틴(quercetin)을 유효성분으로 포함하는 꿀벌응애 구제용 제제를 제공한다. 본 발명자들은 주로 식품첨가물로 이용되고 있는 쿼세틴이 꿀벌응애에 대하여 강력한 살충 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 고안하게 되었다. 다만, 쿼세틴은 물에 잘 녹지 않는 성질로 인해 분무 방식으로 이용하기 위하여 액상 제형화하는 것에 문제점이 있었다. 이를 극복하기 위해 자가미세유화 약물전달시스템(SMEDDS; Self-microemulsifying drug delivery system)을 응용하여 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명에서 "자가미세유화 약물전달시스템"의 기본적인 원리는, 상기 시스템이 물과 접촉시, 이는 완만한 기계적인 교반하에서 수중유 미세유화물을 자동적으로 형성한다는 점이다.
본 발명자들은 쿼세틴의 난용성을 개선하고 꿀벌응애에 대한 침투력을 증가시키기 위한 자가유화 약물전달시스템을 개발하기 위해 노력하였다. 그 결과, 쿼세틴에 용해제, 계면활성제를 혼합하여 제제를 구성하면, 물과 혼합하여 희석시 자가유화됨으로써 쿼세틴이 수용액상에서 나노에멀전 상태로 존재하게 되고, 약물의 입자가 최소화되므로 가용화가 크게 향상되어 꿀벌응애에 대한 침투율 및 살충력이 크게 증대된다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
상기 쿼세틴은 제제 총 중량에 대하여 0.5 내지 3 중량%, 바람직하게는 1 내지 2.5 중량%, 더욱 바람직하게는 2 중량%로 포함될 수 있다.
상기 쿼세틴의 함량이 상기 하한치 미만인 경우에는 꿀벌응애에 대한 구제 효과가 미미할 우려가 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 나노파티클 제형 내부에 모두 봉입되지 못하여 현탁 내지는 석출되는 쿼세틴이 있을 수 있어 균질한 약제의 살포가 불가능해진다.
본 발명의 꿀벌응애 구제용 제제는 상기 쿼세틴의 용해제로서 디에틸렌글리콜모노에틸에테르(Diethyleneglycolmonoethylether)을 포함한다. 상기 디에틸렌글리콜모노에틸에테르(Diethyleneglycolmonoethylether)은 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 10 내지 30 중량부, 바람직하게는 15 내지 25 중량부로 포함될 수 있다.
상기 디에틸렌글리콜모노에틸에테르의 함량이 상기 하한치 미만인 경우에는 용해되지 않는 쿼세틴으로 인해 제형 안정성이 낮아질 우려가 있고, 상기 상한치를 초과하는 경우에는 주성분인 쿼세틴의 용해에는 문제가 없으나, 용제의 과량 사용에 따른 추가적인 계면활성제의 양이 증가하여 생산원가가 높아지고 주성분의 농도가 낮아져서 포장용기의 거대화에 따른 물류비용 증대, 보관의 불편함 등이 추가적으로 발생한다.
상기 제제는 폴리옥시에틸렌계(polyoxyethylene) 화합물을 포함하는 계면활성제를 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 20 내지 40 중량부, 바람직하게는 25 내지 35 중량부로 더 포함할 수 있다. 상기 계면활성제의 함량이 상기 하한치 미만으로 포함되는 경우에는 나노파티클이 형성되지 못하고 유화 형태의 제품이 되며 이는 봉군에 제품 적용시 정확한 용법용량이 불가능해진다. 상기 상한치를 초과하여 포함되는 경우에는 불필요하게 부형제를 과다하게 사용하여 주성분의 농도가 낮아지며, 제품의 부피가 커져서 보관 및 운송에 부적절하여 바람직하지 않다.
상기 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene sorbitan monostearate(Tween 60)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미에이트(Polyoxyethylene sorbitan monopalmitate(tween40)) 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene sorbitan monolaurate(tween 20))로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 꿀벌응애 구제용 제제는 쿼세틴 2 중량%와, 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 10 내지 30 중량부의 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르 및 20 내지 40 중량부의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80))를 포함하여 이루어질 수 있다.
상기 제제를 물과 혼합하여 희석하는 경우에는 평균 입자 크기가 50 nm 이하인 나노에멀전이 형성될 수 있다. 이와 같이 본 발명의 유효성분인 쿼세틴이 수용액상에서 나노에멀전 상태로 존재하게 되면 가용화가 크게 향상되어 꿀벌응애에 대한 침투율 및 살충력이 크게 증대될 수 있다.
또한, 쿼세틴을 유효성분으로 포함하고, 자가미세유화약물전달시스템을 이용하는 본 발명의 꿀벌응애 구제용 제제는 물과 혼합이 쉽고, 부착 및 점착능이 우수하며, 꿀벌응애에 감염된 벌에게 분사 또는 분무 후 쉽게 휘발되지 않아 약효가 우수하다.
본 발명은 또한, (1) 주성분 쿼세틴과 디에틸렌글리콜모노에틸에테르, 및 폴리에틸렌글리콜 또는 그 유도체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 용해제를 40 내지 70 ℃의 온도에서 혼합하는 단계; 및 (2) 상기 (1) 단계의 혼합물에 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene sorbitan monostearate(Tween 60)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미에이트(Polyoxyethylene sorbitan monopalmitate(tween40)) 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene sorbitan monolaurate(tween 20))로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 계면활성제를 혼합하는 단계;를 포함하는 꿀벌응애 구제용 제제의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 제제를 10 내지 500 중량 배의 물과 혼합하여 나노에멀전이 형성되도록 하는 단계; 및 상기 나노에멀전을 꿀벌응애에 감염된 벌에 분무하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 꿀벌응애의 구제방법을 제공한다. 상기와 같이 본 발명에 따른 꿀벌응애 구제용 제제를 물과 혼합하여 희석하는 경우, 쿼세틴의 농도가 0.01 내지 1 중량%인 희석용액으로도 꿀벌응애에 대한 살충 효과가 유효하게 나타난다.
본 발명의 꿀벌응애 구제방법은 꿀벌응애 구제용 제제를 단 1회 분무하는 것만으로도 꿀벌응애에 대한 구제 효과가 우수하다.
상기의 분무는 1일 1회 수행하는 것이 바람직하며, 3일 동안 연속하여 분무하는 것이 더욱 바람직하다.
이하, 바람직한 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 의하여 제한되지 않는다는 것은 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 자명할 것이다.
실시예
실시예 및 비교예 1~5
인체용 의약품 또는 식품 첨가물에 이용되고 있어 인체에 무해한 액상의 부형제들 중에서 쿼세틴이 가장 우수한 용해도를 나타낸 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르(Diethyleneglycolmonoethylether; Carbitol), 폴리에틸렌글리콜(PEG200) 또는 프로필렌글리콜(PPG)를 용해제로 이용하여 하기 표 1의 조성대로 꿀벌응애 구제용 제제를 제조하였다.
또한, 상기 꿀벌응애 구제용 제제의 계면활성제로는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)) 및 크레모포 EL(Cremophor EL)을 이용하였다.
구체적인 제조방법으로는, 하기 표 1의 조성대로 용해제에 쿼세틴 분말을 용기에 넣고 용해제를 첨가한 다음, 60 ℃로 가열하면서 쿼세틴을 완전히 용해시킨다. 이후, 상기 용액을 상온으로 식힌 후, 계면활성제를 첨가하여 완전히 혼합하였다.
구분(g) 실시예 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4 비교예 5
유효성분 쿼세틴 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
용해제 Carbitol 7.8 7.8 - - - -
PEG200 - - 7.8 7.8 - -
PPG - - - - 7.8 7.8
계면
활성제		 Tween80 11.8 - 11.8 - 11.8 -
Cremophor EL - 11.8 - 11.8 - 11.8
총 중량 20 20 20 20 20 20
비교예 6
기존 시장의 출시제품으로, 구연산(citric acid)을 유효성분으로 하는 제품이다.
실험예
실험예 1. 제형의 안정성(Stability test)
실시예 및 각각의 비교예를 물에 100배(v/v) 희석하여 간헐적으로 흔들어 혼합하였다. 상기 혼합 후, 6시간 이상 경과한 다음 particle analyzer를 이용하여 입자 크기를 측정하였다. 그리고, '안정성'은 물에 희석한 직후와 6시간 이상 경과한 후의 형태 및 입자크기를 비교하여 시간이 지나도 형태 및 입자크기에 변함이 없는 경우에 '○'라고 평가하였다. 상기 측정 및 평가 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
구분 실시예 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4 비교예 5
형태
(Appearance)		 nano- particle emulsion nano- particle emulsion nano- particle emulsion
평균 입자크기
(nm)		 46 480 80 55 320 2100
안정성
(Stability)		 ○ ○ × × × ×
상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 실시예, 비교예 2 및 비교예 4의 경우에만 nano-particle 형태의 제제가 제조된 것을 확인할 수 있었다. 상기 nano-particle 제제는 물에 희석시 석출이 없어 균일한 살포가 가능하다는 장점이 있다. 반면, emulsion 제제의 경우에는 액체 상태에서 시간의 경과에 따라 균일성이 낮아져 균일한 살포가 불가능해진다는 문제점이 있어 바람직하지 않다.
또한, 상기 nano-particle 제제 중에서는 '실시예'의 경우에만 시간이 지나도 형태 및 입자 크기에 변함이 없어 '안정성'이 있다고 평가된 것으로 확인되었다.
실험예 2. 안전성 시험(Safety test)
안전성 시험은 꿀벌응애 구제에 대한 효과를 확인하기 이전에 약제 혹은 부형제에 의한 벌의 위해성을 확인 및 검증하는 시험을 말한다.
국내 양봉농가에서 보편적으로 사육하고 있는 이탈리안 종(Apis melliffera) 벌을 실험에 사용하였다. 또한, 실험에 투입할 벌들의 안정을 위하여 실험 7일 전에 미리 봉군 배치를 완료하였다. 실험 봉군의 수는 10개이며, 각각의 벌통마다 봉군번호를 부여하였으며, 벌통과 벌통 사이의 경계를 분명하게 구분하였다. 또한, 사봉의 숫자를 파악할 수 있도록 바닥에는 섬유류를 깔아두었다.
실험예 2-1. 단회 투여에 따른 안전성 평가
먼저, 상기 준비된 3 개의 봉군으로부터 10 마리씩의 벌을 포획하여 실험을 위한 3 개의 벌 포집통에 집어넣은 다음 각각 10 부피배의 수돗물로 희석한 실시예의 시료, 실시예의 시료에서 쿼세틴을 제외한 부형제들로만 이루어진 부형제 시료, 비교예 1의 시료 및 수돗물로만 이루어진 대조군 시료를 분무기에 각각 옮겨 담은 후, 상기 각각의 벌 포집통 내에 분사하였다. 1회 분사량이 약 0.8 mL인 분무기를 이용하였고, 5회 분사를 한 세트로 진행하였다. 다섯 세트를 반복하여 분사하여 상기 벌들이 완전히 시료에 젖도록 하였다. 시료에 젖은 벌들은 모두 비행이 불가하였으며 기어다닐 수밖에 없는 상태가 되었으나 수분이 증발한 다음에는 비행이 가능하여 각자의 벌통으로 복귀하였다. 이로 인해, 실시예의 시료의 안전성을 확인할 수 있었다.
실험예 2-2. 반복 투여에 따른 안전성 평가
준비된 각각의 시료를 4일 간격으로 각 벌통의 소비(巢脾)마다 4회씩(소비 앞뒤로 2회씩) 분무하는 방식으로 반복 투여하면서 관찰한 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 하기 표 3에 기재된 사봉수는 각 시료를 분무한 후에 48 시간이 경과한 후 벌통 주변의 죽은 벌들을 계수하여 누적된 값을 나타낸 것이다.
구분 사봉수(누적 수치) 벌통에 남은 벌 수
1회차 분무 2회차 분무 3회차 분무
대조군(수돗물) 35 55 80 8,241
부형제 실험군 43 62 91 10,052
실시예 34 60 88 9,018
비교예 1 39 63 90 9,517
상기 표 3을 살펴보면, 실시예의 제제에 의하여 죽은 벌들의 수는 대조군인 수돗물을 분무하여 실험한 경우와 큰 차이가 없어 벌들에게 안전한 것을 확인할 수 있었다.
실험예 3. 구제 효과(efficacy test)
분무기에 수돗물로 50 중량배로 희석한 각각의 시료를 담은 다음, 해당 봉군에 분사하였다. 이때, 개개의 소비를 들고 앞면과 뒷면에 각각 2회씩 약 30 cm 거리에서 분사하였으며, 봉군 내의 모든 소비에 살포하였다. 각 봉군 내 소비 개수는 동일하게 구성하였으며, 봉군당 벌의 군집 크기는 1만 마리 내외인 것으로 선택하였다. 각 봉군에 속한 벌들은 다른 질병이 없으며, 꿀벌응애의 감염 정도가 비슷한 봉군들을 준비하여 실험에 이용하였다.
벌통 바닥에 떨어진 꿀벌 및 꿀벌응애를 계수하기 위하여 시판되는 시트지를 벌통 바닥 면적에 맞는 규격으로 잘라 시트지의 접착제가 묻어 있는 끈끈한 부분이 위쪽으로 향하도록 벌통 바닥에 설치하여, 꿀벌응애가 낙하하는 대로 부착될 수 있도록 하였다. 시트지 투입 후 24 시간이 경과한 시점에 시트지를 수거하여 시트지 위에 붙어 있는 꿀벌응애의 숫자를 현미경을 사용하여 계수하였다. 또한, 새로운 시트지를 각 벌통 바닥에 설치한 후, 그로부터 48 시간이 경과한 후 시트지를 수거하여 시트지 위에 붙어 있는 꿀벌응애의 숫자를 계수하여 약효의 지속성이 있는지를 확인하였다.
상기 시트지 위에 붙어 있는 꿀벌응애 숫자를 계수한 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 하기 표 4에 나타낸 결과는 각 시료마다 3회 반복 실험하여 얻은 값의 평균값을 나타낸 것이다.
구분 꿀벌응애 사망수 남은 꿀벌응애 수 살충율(%)
1일 후 3일 후 계
대조군(수돗물) 24 35 59 1,197 4.7
부형제 실험군 83 47 130 1,086 10.7
실시예 995 212 1,207 54 95.7
비교예 1 347 96 443 657 40.3
비교예 6 530 85 615 655 48.4
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 꿀벌응애 구제용 제제는 한번의 분무로도 3일 이내에 95% 이상의 꿀벌 응애 살충율을 나타내어 매우 뛰어난 구제 효과가 있는 것을 확인하였다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

Claims (9)

  1. 쿼세틴(quercetin)을 유효성분으로 포함하고,
    용해제로서 디에틸렌글리콜모노에틸에테르; 및
    계면활성제로서 폴리옥시에틸렌계(polyoxyethylene)의 계면활성제;를 포함하되,
    상기 쿼세틴은 제제 총 중량 대비 2 중량%이고,
    상기 용해제는 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 15 내지 25 중량부, 상기 계면활성제는 상기 쿼세틴 1 중량부 대비 25 내지 35 중량부이며,
    물과 혼합시 자가유화(self-emulsification)하여 나노에멀전을 형성하는 것을 특징으로 하는 꿀벌응애 구제용 제제.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene sorbitan monostearate(Tween 60)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미에이트(Polyoxyethylene sorbitan monopalmitate(tween40)) 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene sorbitan monolaurate(tween 20))로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 꿀벌응애 구제용 제제.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate (Tween 80))인 것을 특징으로 하는 꿀벌응애 구제용 제제.
  7. 제1항에 있어서, 상기 제제를 물에 희석시 평균 입자 크기가 50 nm 이하인 것을 특징으로 하는 꿀벌응애 구제용 제제.
  8. (1) 쿼세틴; 및 상기 쿼세틴 1 중량부에 대하여 디에틸렌글리콜모노에틸에테르 15 내지 25 중량부를 40 내지 70 ℃의 온도에서 혼합하는 단계; 및
    (2) 상기 (1) 단계의 혼합물에 상기 쿼세틴 1 중량부에 대하여 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(Polyoxyethylene sorbitan monooleate(Tween 80)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene sorbitan monostearate(Tween 60)), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미에이트(Polyoxyethylene sorbitan monopalmitate(tween40)) 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene sorbitan monolaurate(tween 20))로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 계면활성제 25 내지 35 중량부를 혼합하는 단계;를 포함하는 꿀벌응애 구제용 제제의 제조방법.
  9. 제1항 및 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항의 꿀벌응애 구제용 제제를 10 내지 50 중량배의 물과 혼합하여 나노에멀전이 형성되도록 하는 단계; 및
    상기 나노에멀전을 꿀벌응애에 감염된 벌에 분무하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 꿀벌응애의 구제방법.
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