KR102099097B1 - 터치아핀 펩티드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 터치아핀 펩티드를 유효성분으로 함유하는 주름개선, 발모촉진 또는 탈모방지용 화장료 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명에 따른 봉독 유래의 터치아핀 펩티드는 피부 섬유아세포(human dermal fibroblasts, HDFs) 또는 모낭 모유두 세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDP)의 증식을 촉진하는 효과가 우수하며, 펩티드 합성을 통해 대량생산이 가능하므로, 주름개선용 기능성 화장품 또는 탈모방지 및 발모촉진용 화장품의 소재로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

터치아핀 펩티드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising tertiapin peptide as effective component}

본 발명은 터치아핀 펩티드를 유효성분으로 함유하는 주름개선, 발모촉진 또는 탈모방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.

꿀벌의 산란관에서 나오는 독액을 봉독(Bee Venom)이라고 한다. 봉독은 벌 복부 끝 독낭에 저장되어 봉침과 연결되어있으며, 자극 시에 봉침에서 분비되는 동물성 천연 생리 활성물질로서, 이집트, 바빌로니아에서 치료 목적으로 사용되었다는 기록이 남아 있고, 우리나라에서도 마왕퇴백서(최초의 침구학 문헌), 동의보감, 민간요법에서 생봉침을 통증 및 류마티스 관절염 치료에 이용하였다는 기록이 남아 있다.

봉독은 폴리펩티드, 작은 분자량을 가진 다양한 물질 등으로 이루어진 아주 복잡한 혼합체로, 그 중 펩티드를 다량 포함하고 있으며, 마른 봉독량의 50~60%를 차지한다.

봉독 펩티드는 멜리틴, 아파민, 비만 세포 과립 감소 펩티드, 단백효소 억제제, 세카르핀, 터치아핀, 프로카민 등이 알려져 있으며, 그 중, 멜리틴(Melittin)은 봉독의 주성분으로 분자량이 2,840이고 24개의 아미노산으로 구성된 폴리펩티드이다. 아파민(Apamin)은 1965년 Habermann과 Reiz에 의해서 처음으로 분리되었다. 분자량은 2,036이며 마른 봉독량의 2∼3%에 지나지 않지만 신경독 작용 때문에 널리 알려져 있다. 비만 세포 과립 감소 펩티드(MCD-Peptide, Mast Cell Degranulation Peptide, Op)는 1966년 Fredholm에 의해서 분리되었고, 그 분자량은 2,588이다. 단백효소 억제제(Protease Inhibitor)는 1973년 Shkenderov에 의해 처음으로 보고되었으며 트립신 용해작용을 현저하게 억제한다. 비만 세포 과립 감소 펩티드의 총량은 건조 봉독의 0.8%이며 분자량은 8,000∼10,000이다. 단백효소 억제제들은 중성이나 산성 용액에서 온도상으로 안전하다. 세카르핀(Secarpin)은 건조 봉독의 0.5% 이하로 존재하는 소수성분이다. 터치아핀(Tertiapin)은 마른 봉독에 0.1% 미만 포함된 소수성분이며 하나의 벌침에서 약 70mg을 공급한다. 프로카민(Procamine)은 C-말단에 히스타민을 부착한 2개 또는 3개의 동질성 펩티드의 그룹을 말한다.

봉독은 염증 유발 동물의 부종을 감소시키고, 관절염 환자의 활막세포에 작용하여 주성분인 멜리틴(melittin)이 NF-κB를 비활성화시킴으로써 산화질소(Nitric Oxide; NO)의 양을 감소시키고, 사이클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2; COX-2)를 억제하여 항염증 효과를 유발하는 것으로 알려져 있다.

봉독의 성분을 분리 정제하여 치매나 암치료에 이용하는 등의 봉독 처리 효과를 확인하는 생리적 연구나 건조 봉독의 성분 분석에 대한 연구결과는 이미 보고되어 있으며, 한의학에서는 염증 질환의 치료제로 오랫동안 사용되어 왔고, 봉독의 항염증 효과와 항암 효과에 대해서 많은 연구가 이루어지고 있다. 특히 봉독을 이용한 동물의 관절염 또는 항염증 치료제 개발 연구는 이미 농진청을 비롯한 많은 정부기관에서 수행된 바 있다. 그러나 봉독 유래 펩티드를 이용한 주름개선 또는 탈모방지 화장료 조성물에 관한 연구는 미흡한 실정이다.

한편, 한국공개특허 제2012-0003178호에는 봉독 추출물을 함유하는 피부 미백 및 보습용 조성물에 관해 개시되어 있지만, 본 발명의 터치아핀 펩티드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관해 개시된 바 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 터치아핀 펩티드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하고, 상기 조성물이 피부 섬유아세포(human dermal fibroblasts, HDFs)의 증식 및 모낭 모유두 세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDP)의 증식을 촉진하는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 터치아핀(tertiapin) 펩티드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 봉독 유래의 터치아핀 펩티드는 피부 섬유아세포(human dermal fibroblasts, HDFs) 또는 모낭 모유두 세포(hair follicle dermal papilla cell, HFDP)에 처리하였을 때 각 세포의 증식을 촉진하는 효과가 우수하였다. 또한, 터치아핀 펩티드에 멜리틴 펩티드; 또는 아파민 펩티드 및 멜리틴 펩티드;를 추가로 더 포함하는 터치아핀 펩티드 혼합물을 처리하였을 때 섬유아세포(human dermal fibroblasts, HDFs)의 증식을 촉진하는 효과가 우수하였다. 이들 펩티드는 펩티드 합성을 통해 대량생산이 가능하므로, 주름개선 또는 탈모방지 및 발모촉진용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 봉독 유래 펩티드(터치아핀, 아파민 및 멜리틴)를 피부 섬유아세포에 처리한 후 세포 증식을 크리스탈 바이올렛 염색을 통해 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명의 봉독 유래 펩티드(터치아핀, 아파민 및 멜리틴) 및 이들의 혼합물을 피부 섬유아세포에 처리한 후 세포 증식을 크리스탈 바이올렛 염색을 통해 확인한 결과이다.
도 3은 본 발명의 봉독 유래 펩티드를 모낭 모유두 세포에 처리한 후 세포 증식을 크리스탈 바이올렛 염색을 통해 확인한 결과이다.

본 발명은 터치아핀(tertiapin) 펩티드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서 용어 "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다.

상기 터치아핀 펩티드는 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지며, 상기 터치아핀 펩티드의 단편, 유도체 및 유사체(analogues)를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 유효성분으로는 터치아핀 펩티드 이외에 아파민 펩티드 및 멜리틴 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 펩티드를 추가로 더 포함할 수 있으며, 바람직하게는 멜리틴 펩티드; 또는 아파민 펩티드 및 멜리틴 펩티드;를 추가로 더 포함하여 터치아핀 펩티드 혼합물을 제조하여 화장료 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 터치아핀 펩티드, 아파민 펩티드 및 멜리틴 펩티드를 모두 포함하여 화장료 조성물을 제조하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 멜리틴 펩티드는 서열번호 2, 아파민 펩티드는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어지며, 상기 멜리틴 또는 아파민 펩티드의 단편, 유도체 및 유사체(analogues)를 포함할 수 있다.

본원에 사용된, 용어 "단편", "유도체" 및 "유사체"는 본 발명의 터치아핀 펩티드와 실질적으로 동질의 활성을 보유하는 펩티드를 말하며, "실질적으로 동질의 활성"이란 피부 주름 개선, 발모촉진 또는 탈모방지 활성을 의미한다.

본 발명의 일 구현 예에서, 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 멜리틴 펩티드를 50~150 중량부 혼합하거나, 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 아파민 펩티드 50~150 중량부 및 멜리틴 펩티드 50~150 중량부를 혼합할 수 있고, 바람직하게는 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 멜리틴 펩티드를 80~120 중량부 혼합하거나, 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 아파민 펩티드 80~120 중량부 및 멜리틴 펩티드 80~120 중량부를 혼합할 수 있고, 더 바람직하게는 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 멜리틴 펩티드를 100 중량부 혼합하거나, 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 아파민 펩티드 100 중량부 및 멜리틴 펩티드 100 중량부를 혼합할 수 있으며, 더 바람직하게는 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 아파민 펩티드 100 중량부 및 멜리틴 펩티드 100 중량부를 혼합하는 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현 예에서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름개선 효과를 나타내는 특징이 있다.

또한, 본 발명의 일 구현 예에서, 상기 화장료 조성물은 발모촉진 또는 탈모방지 효과를 나타내는 특징이 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭과 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다.

보다 상세하게는, 본 발명의 조성물은 스킨, 스킨 소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이 크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 로션, 클렌징 크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누, 파우더, 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 화장품 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로 히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

실시예 1. 봉독 펩티드의 생산을 위한 펩티드 합성

본 발명의 3종의 봉독 펩티드(서열번호 1~3의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드)는 자동화합성기(Liberty Blue-Automated Microwave Peptide Synthesizer, CEM 사, 미국)를 이용하여 Fmoc 고체상 방법(Fmoc solid-phase method)으로 합성하였다. 합성된 펩타이드는 C18 분석용 RP 컬럼(Lichrosorb RP-18, Agilent 사, 미국)을 사용한 역상 고속액체크로마토그래피(Reverse-phase HPLC) CTO-10A, Shimadzu사, 일본)로 정제 및 분석하였다.

1) 터치아핀 펩티드

ALCNCNRIIIPHMCWKKCGKK(서열번호 1)

2) 멜리틴 펩티드

MGIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ(서열번호 2)

3) 아파민 펩티드

CNCKAPETALCARRCQQH(서열번호 3)

실시예 2. 봉독 펩티드에 의한 피부 섬유아세포 증식 효과 확인

상기 실시예 1에서 합성 및 정제한 3종의 봉독 펩티드(터치아핀, 멜리틴 및 아파민)의 피부 섬유아세포 증식 효과 확인을 위해, 배양한 피부 섬유아세포(Human Dermal Fibroblasts adult, HDFa cell)에 다양한 농도로 상기 3종의 펩티드를 처리한 후, 3일 동안 37℃에서 배양하였다. 이후 크리스털 바이올렛 염색법으로 세포 증식 여부를 확인하였다.

그 결과 도 1에 개시된 바와 같이 터치아핀, 멜리틴 및 아파민 펩티드의 처리 농도가 증가될수록 피부 섬유아세포에 대한 세포 증식 효과가 있음을 확인할 수 있었고, 0.2ppm과 1ppm의 세포 증식 차이는 거의 없었다.

또한, 처리 농도 및 봉독 펩티드 혼합에 따른 피부 섬유아세포에 대한 세포 증식 효과를 확인한 결과, 도 2에 개시된 바와 같이 터치아핀 펩티드는 멜리틴 펩티드와 동일 농도로 혼합하였을 때, 터치아핀 펩티드 또는 멜리틴 펩티드를 단독으로 사용하는 경우에 비해 피부 섬유아세포의 증식효과가 현저하였다.

또한, 아파민 및 멜리틴 펩티드, 멜리틴 및 터치아핀 펩티드, 아파민 및 터치아핀 펩티드를 혼합하는 것에 비해 아파민, 멜리틴 및 터치아핀 펩티드를 1:1:1 중량비로 혼합한 경우, 더욱 피부 섬유아세포의 증식효과가 우수하였다.

이를 바탕으로, 본 발명의 터치아핀 펩티드는 피부 재생 촉진을 통한 주름개선 효과가 있다는 것을 알 수 있었고, 터치아핀 펩티드에 멜리틴 펩티드를 혼합한 혼합물, 터치아핀 펩티드에 아파민 및 멜리틴 펩티드를 동량 혼합한 혼합물은 피부 재생 촉진을 통한 주름개선 효과가 더욱 우수하다는 것을 알 수 있었다.

실시예 3. 봉독 펩티드에 의한 모낭 모유두 세포 증식 효과 확인

상기 실시예 1에서 합성 및 정제된 봉독 펩티드의 모낭 모유두 세포에 대한 활성 측정을 위해, 모낭 모유두 세포 (Hair follicle dermal cell)에 각각 0.01, 0.1, 1 또는 10ppm 농도의 봉독 펩티드를 처리한 후 3일 동안 37℃에서 배양하였다. 이후 크리스털 바이올렛 염색법으로 세포 증식 여부를 확인하였다.

그 결과, 도 3에 개시된 바와 같이 봉독 펩티드를 0.1ppm 이상 처리한 경우, 모낭 모유두 세포에 대한 세포 증식 효과가 우수하였다.

또한, 터치아핀 펩티드는 10ppm에서도 세포독성이 나타나지 않았지만, 멜리틴 펩티드 및 아파민 펩티드는 10ppm 농도로 모낭 모유두 세포에 처리하였을 때, 세포 독성이 나타나, 세포수가 감소한 것을 확인하였다.

상기 결과를 바탕으로 터치아핀 펩티드는 고농도로 처리하였을 경우에도 세포 독성 없이 모낭 모유두 세포 증식 효과를 통해 발모촉진 또는 탈모방지 효과가 있다는 것을 알 수 있었다.

<110> Nexgen Biotechnologies, Inc. LEE, SUN GYO <120> Cosmetic composition comprising tertiapin peptide as effective component <130> PN19440 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Tertiapin peptide <400> 1 Ala Leu Cys Asn Cys Asn Arg Ile Ile Ile Pro His Met Cys Trp Lys 1 5 10 15 Lys Cys Gly Lys Lys 20 <210> 2 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Melittin peptide <400> 2 Met Gly Ile Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Thr Thr Gly Leu Pro Ala 1 5 10 15 Leu Ile Ser Trp Ile Lys Arg Lys Arg Gln Gln 20 25 <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Apamin peptide <400> 3 Cys Asn Cys Lys Ala Pro Glu Thr Ala Leu Cys Ala Arg Arg Cys Gln 1 5 10 15 Gln His

Claims (7)

1. 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 멜리틴 펩티드를 80~120 중량부 혼합하거나, 터치아핀 펩티드 100 중량부에 대하여 아파민 펩티드 80~120 중량부 및 멜리틴 펩티드 80~120 중량부를 혼합한 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 터치아핀 펩티드는 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 삭제
4. 제1항에 있어서, 상기 멜리틴 펩티드는 서열번호 2, 아파민 펩티드는 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 삭제
6. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
7. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 발모촉진 또는 탈모방지 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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