KR102087868B1 - Cosmetic composition containing the extracts of natural substances, Stellaria media, Helianthus annuus and Vaccinium vitis-idaea - Google Patents

Cosmetic composition containing the extracts of natural substances, Stellaria media, Helianthus annuus and Vaccinium vitis-idaea Download PDF

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Abstract

The present invention relates to a cosmetic composition containing, as an active ingredient, a composite extract prepared by subcritical extraction after the ultra-high pressure pretreatment of a mixture of Stellaria media, Helianthus annuus and Vaccinium vitis-idaea. The prepared composite extract exhibits excellent skin cell protection and anti-aging efficacy under condition involving UV and blue light irradiation that could cause skin cell damage and aging, and effectively inhibits the penetration of blue light. Due to the effects, the composite extract of the present invention can be useful as a cosmetic ingredient for preventing skin aging or blocking blue light due to ultraviolet rays and blue light.

Description

별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing the extracts of natural substances, Stellaria media, Helianthus annuus and Vaccinium vitis-idaea}Cosmetic composition containing chickweed, sunflower and bilberry extract as an active ingredient {Cosmetic composition containing the extracts of natural substances, Stellaria media, Helianthus annuus and Vaccinium vitis-idaea}

본 발명은 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 별꽃(Stellaria media), 해바라기(Helianthus annuus) 및 월귤(Vaccinium vitis-idaea) 혼합물을 초고압 전처리 후 아임계 추출하여 제조되는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 유효성분으로 함유하여, 피부에 유해한 영향을 미치는 블루라이트 및 자외선으로부터 피부를 보호하며, 우수한 항노화 활성을 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing chickweed, sunflower and bilberry complex extract, specifically, Stellaria media , sunflower ( Helianthus annuus ) and bilberry ( Viccinium vitis-idaea ) mixture by ultracritical extraction after ultra high pressure pretreatment It contains a chickweed, sunflower and bilberry complex extract prepared as an active ingredient, and protects the skin from blue light and ultraviolet rays which have a harmful effect on the skin, and relates to a cosmetic composition showing excellent anti-aging activity.

피부노화는 시간 의존성 자연노화에 따른 내인성 노화(intrinsic aging)와 외부적 요인에 의한 외인성 노화(extrinsic aging)로 구분할 수 있다. 외인성 노화의 요인으로는 바람, 온도, 공해 등에 다양한 요인이 있으나 그 중 가장 주요 요인은 바로 자외선이다. 내인성 노화는 잔주름, 창백한 피부, 피부 건조증, 경미한 탄력감소 등의 특징을 나타내는 반면, 외인성 노화는 굵고 깊은 주름, 탄력 감소, 피부건조, 색소침착 등 보다 급속하고 중대한 노화의 징후를 나타낸다(김옥경 외, 2013; 전소현 외, 2014). Skin aging can be classified into intrinsic aging according to time-dependent natural aging and extrinsic aging due to external factors. Exogenous aging factors include various factors such as wind, temperature, and pollution, but the most important factor is ultraviolet rays. Endogenous aging is characterized by fine wrinkles, pale skin, dry skin, and slight loss of elasticity, while exogenous aging is more rapid and significant signs of aging such as thick and deep wrinkles, decreased elasticity, dry skin, and pigmentation. 2013; Jeon So-hyun et al., 2014).

지속적인 자외선 노출은 피부 내에서 ROS(reactive oxygen species)의 증가를 유도하여 멜라닌세포의 불규칙한 멜라닌 생성으로 인한 색소 침착을 유발하고 각질형성세포의 배열을 불규칙적으로 변화시켜 피부 보습을 저하시키게 된다. 또한 섬유아세포에서 콜라겐의 분해를 촉진하는 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 생성을 증가시키고 콜라겐의 전구체인 procollagen type 1 생성을 감소시켜 주름을 유발하고 탄력을 감소시켜, 결과적으로 피부노화를 가속화하게 된다(김옥경 외, 2013). 최근 피부연구 결과를 통해 자외선 뿐만 아니라 블루라이트(blue light)도 피부노화의 중요원인이 될 수 있다는 것이 밝혀진 바 있다. 블루라이트가 피부세포의 생존율을 감소시키며, ROS의 생성을 증가시키고, MMP-1의 생성 증가, 콜라겐 생성 감소, DNA 손상 증가 등의 피부노화 메커니즘을 활성화 한다는 것이 확인되었다(Avola R. et al., 2019). 그러므로 피부노화 억제용 제품 개발에 있어서 자외선 및 블루라이트에 의해 변화하는 피부인자를 조절할 수 있는 소재를 발굴하는 것이 무엇보다 중요하다.Continuous UV exposure induces an increase in reactive oxygen species (ROS) in the skin, causing pigmentation due to irregular melanogenesis of melanocytes and irregularly changing the arrangement of keratinocytes to reduce skin moisturization. It also increases the production of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1), which promotes the breakdown of collagen in fibroblasts, and reduces the production of procollagen type 1, a precursor of collagen, which induces wrinkles and reduces elasticity, resulting in accelerated skin aging. (Kim Ok-kyung et al., 2013). Recent skin research has shown that not only ultraviolet light but also blue light can be an important cause of skin aging. Blue light has been shown to reduce skin cell survival, increase ROS production, activate skin aging mechanisms such as increased MMP-1 production, reduced collagen production, and increased DNA damage (Avola R. et al. , 2019). Therefore, in developing products for inhibiting skin aging, it is most important to find a material that can control skin factors that are changed by ultraviolet light and blue light.

자외선에 의한 피부노화 현상을 억제하는 천연소재는 기존에 많이 연구가 되어 있으나, 블루라이트에 의한 피부노화 억제 소재는 비교적 최근에서야 연구가 진행되고 있다. 올리브, 레스베라트롤 등이 블루라이트에 의한 피부세포 손상을 억제한다는 연구논문이 최근 발표되었다(Avola R. et al., 2019; Mamalis A. et al., 2016). 블루라이트와 피부 관련 특허는 지금까지 수십 편이 검색되나 주로 LED 미용기기와 관련된 특허가 대부분이며, 블루라이트를 피부로부터 차단, 방어할 수 있는 소재는 소수가 검색되었다. 관련특허로는 블루라이트 방어용 화장품 조성물(대한민국 공개특허 제10-2019-0006910호), 스피루리나 추출물을 유효성분으로 함유하는 블루라이트 차단용 화장료 조성물(대한민국 등록특허 제10-1851623호) 등이 있다. 그 밖에 유해 가시광선 차단용 화장료 조성물(대한민국 공개특허 제10-2017-0101799호), 옥 분말을 함유하는 블루라이트 차단용 화장료 조성물(대한민국 공개특허 제10-2017-0003391호), 자외선과 블루라이트에 대한 흡수력이 우수한 티타이나 입자 및 그 제조방법(대한민국 등록특허 제 10-1905418호) 등이 공개되었다. Natural materials for inhibiting skin aging caused by ultraviolet rays have been studied in the past, but the material for inhibiting skin aging due to blue light has been studied only relatively recently. A study paper recently published that olive, resveratrol, etc. inhibits skin cell damage caused by blue light (Avola R. et al., 2019; Mamalis A. et al., 2016). Dozens of blue light and skin related patents have been searched so far, but most of them are mainly related to LED beauty devices, and a few have been found that can block and protect blue light from the skin. Related patents include a blue light protective cosmetic composition (Korean Patent Publication No. 10-2019-0006910), a blue light blocking cosmetic composition (Korean Patent Registration No. 10-1851623) containing spirulina extract as an active ingredient. Other harmful visible light blocking cosmetic composition (Korean Patent Publication No. 10-2017-0101799), blue light blocking cosmetic composition containing jade powder (Korean Patent Publication No. 10-2017-0003391), ultraviolet rays and blue light Titanium particles having excellent absorption ability and a manufacturing method thereof (Korea Patent No. 10-1905418) and the like have been disclosed.

별꽃(Stellaria media)은 석죽목 석죽과에 속하는 관속식물로서, 길가, 공터, 밭두렁 등 햇볕이 잘 들고 저지대의 습기가 있는 곳에 흔하게 자라는 두해살이풀이다. 쇠별꽃(Stellaria aquatica)과 비슷하나, 별꽃은 쇠별꽃보다 크기가 작으며 암술대가 3개로 암술대가 5개인 쇠별꽃과 뚜렷이 구분된다. 어린순을 식용하며, 우리나라 전역에 난다. Stellaria media is a vascular plant belonging to the Sukjukokseok family, and is a biennial plant that grows commonly in sunny, low-lying areas such as roadsides, vacant lands, and field dunes. It is similar to Stellaria aquatica , but it is smaller in size than the stellar flower and has three pistils and is distinct from five stigmas. It eats young shoots and flies all over Korea.

해바라기(Helianthus annuus)는 국화목 국화과에 속하는 관속식물로서, 북아메리카 원산의 귀화식물이며 관상용 및 식용으로 밭이나 화단 등에 심어 기르는 한해살이풀이다. 유사한 북아메리카 원산의 귀화식물인 애기해바라기(Helianthus salicifolius)는 머리모양꽃 바로 밑에 잎이 달리지 않으며, 지름이 5~9cm로 작은 편이고, 피침형의 모인꽃싸개 조각 끝이 꼬리 모양으로 뾰족하므로 다르다. 꽃은 관상용으로, 열매는 식용하거나 식용유를 얻는 데 쓰며, 우리나라 전국에서 심어 기른다.Sunflower ( Helianthus annuus ) is a flowering plant belonging to the chrysanthemum Asteraceae. It is a natural plant native to North America, and is an annual herb that is planted in fields or flower beds for ornamental and food use. A similar naturalized plant native to North America, Helianthus salicifolius does not have a leaf directly under the head flower, and is 5 ~ 9cm in diameter and small, and the tip of the lanceolate bundle is sharp in the shape of a tail. Flowers are for ornamental purposes. Fruits are used for edible or cooking oil, and they are planted throughout Korea.

월귤(Vaccinium vitis-idaea)은 진달래목 진달래과에 속하는 관속식물로, 높은 산의 숲 속에서 드물게 자라는 상록 작은떨기나무이다. 꽃은 5~6월에 피는데 흰색 또는 분홍색이며 지난해 가지 끝의 잎겨드랑이에서 나온 길이 1~2cm의 총상꽃차례에 2~3송이씩 달린다. 열매는 둥근 장과이며, 8~9월에 붉은색으로 익는다. 이 종은 모새나무(Vaccinium bracteatum)에 비해 작은떨기나무이고, 꽃은 2~3개씩 달리며, 열매는 붉게 익으므로 구별된다. 관상용으로 심으며, 잎은 약용하고, 열매는 식용한다. 한반도에 자생한다.The bilberry ( Vaccinium vitis-idaea ) is a flowering plant belonging to the rhododendron Azalea, an evergreen small evergreen tree that rarely grows in high mountain forests. Flowers bloom in May-June, white or pink, and hang 2 ~ 3 each on a 1 ~ 2cm long inflorescence from the axilla at the tip of last year's branches. Fruits are round berries and ripen in red from August to September. This species is a small bush compared to Vaccinium bracteatum , with two or three flowers, and ripened red. Planted for ornamental purposes, leaves are medicinal, fruits are edible. It grows wild on the Korean peninsula.

본 발명자들은 자외선 및 블루라이트로부터 피부 보호 효능을 나타낼 수 있는 천연소재 복합추출물을 발굴하고자 연구를 진행하였으며, 1차 스크리닝을 통해 최종적으로 별꽃, 해바라기 및 월귤 3종의 소재를 선택하였다. 이들을 혼합하여 초고압 전처리 후 아임계 추출하여 복합추출물로 제조하는 경우에 블루라이트 또는 자외선으로 인한 피부노화 유발 인자의 증가 및 피부콜라겐 전구체의 감소 억제효과가 크게 증진되고, 또한 블루라이트 투과 억제 활성을 나타내는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors conducted a study to discover a natural material composite extract that can exhibit the skin protection effect from ultraviolet light and blue light, and finally selected three materials of chickweed, sunflower and bilberry through primary screening. When the mixture is mixed with these and then subcritically extracted and prepared as a complex extract, the effect of increasing the skin aging-inducing factor and the decrease of skin collagen precursor due to blue light or ultraviolet ray is greatly enhanced, and also shows the blue light permeation inhibitory activity. It was confirmed that the present invention was completed.

본 발명은 초고압 전처리 후 아임계 추출하여 제조되는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition containing chickweed, sunflower and bilberry composite extract prepared by subcritical extraction after ultra high pressure pretreatment as an active ingredient.

또한 본 발명은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화를 억제하는 활성이 우수한 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.In another aspect, the present invention is to provide a method for producing a chickweed, sunflower and bilberry complex extract excellent in the activity of inhibiting skin aging due to ultraviolet light and blue light.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면 초고압 전처리 후 아임계 조건에서 추출하여 제조되는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~15 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.According to the present invention in order to achieve the above object is provided a cosmetic composition containing 0.01 to 15% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition as an active ingredient is prepared by extracting under subcritical conditions after ultra-high pressure pretreatment. .

상기 복합추출물은 건조된 별꽃, 해바라기 및 월귤이 각각 1~5:1~5:1~5의 중량비율로 혼합 추출되어 제조되는 것이다.The composite extract is produced by mixing and extracting dried chickweed, sunflower and bilberry in a weight ratio of 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5, respectively.

상기 화장료 조성물은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제용인 것을 특징으로 한다. 또한 상기 화장료 조성물은 블루라이트 차단용인 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition is characterized in that for inhibiting skin aging due to ultraviolet light and blue light. In addition, the cosmetic composition is characterized in that the blue light blocking.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)별꽃, 해바라기 및 월귤을 각각 1~5:1~5:1~5의 중량비율로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; (B)상기 혼합물 자체 또는 상기 혼합물에 추출용매를 가한 후, 초고압으로 가압 처리하는 전처리 단계; 및 (C)추출용매를 가하여 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15MPa에서 10~30분간 추출하는 단계를 포함하는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물의 제조방법이 제공된다.According to the present invention to achieve the above another object, (A) mixing the chickweed, sunflower and bilberry at a weight ratio of 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5, respectively, to prepare a mixture; (B) a pretreatment step of applying the extraction solvent to the mixture itself or the mixture, and then pressurized to ultra high pressure; And (C) is added to the extraction solvent is provided a method for producing a star flower, sunflower and bilberry complex extract comprising the step of extracting for 10 to 30 minutes at 120 ~ 200 ℃, the pressure of 0.1 ~ 15MPa subcritical conditions.

상기 (B) 또는 (C)단계에서 추출용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 디메치콘, 미네랄오일, 사이클로메치콘, 옥틸도데칸올, 세틸에칠헥사노에이트, 트리레칠헥사노인, 이소프로필미리스테이트 및 식물성 오일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이 사용된다.The extraction solvent in the step (B) or (C) is water, anhydrous alcohol of 1 to 4 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, glycerin, ethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol, caprylic / capric triglyceride, At least one selected from the group consisting of dimethicone, mineral oil, cyclomethicone, octyldodecanol, cetylethylhexanoate, triethylhexanoin, isopropyl myristate and vegetable oil is used.

상기 (B)단계의 전처리는 상기 혼합물 또는 상기 혼합물에 추출용매를 가한 것을 비닐 파우치에 넣어 밀봉하고 40~50℃, 50~100MPa 조건의 물로 60~180분 동안 가압 처리하는 것으로 이루어지는 것이 더욱 바람직하다.The pretreatment of step (B) is more preferably made by applying the extraction solvent to the mixture or the mixture in a plastic pouch and sealed and pressurized for 60 to 180 minutes with water at 40 ~ 50 ℃, 50 ~ 100MPa conditions. .

본 발명에 따른 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 천연 추출물로 이루어져 안전하며, 그 상승작용에 의하여 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화를 억제하고, 블루라이트 투과를 억제하는 활성이 매우 우수하므로 항노화용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다. Starflower, sunflower and bilberry complex extract according to the present invention is made of a natural extract is safe, and by its synergism, inhibits skin aging due to ultraviolet rays and blue light, anti-aging cosmetics because it is very excellent in inhibiting the transmission of blue light It can be usefully used.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물의 블루라이트 차단활성 시험결과를 나타내는 사진도이다.1 is a photograph showing the blue light blocking activity test results of chickweed, sunflower and bilberry complex extract according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 발명의 내용을 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, the content of the present invention will be described in detail in order to help understanding of the present invention.

본 발명에 따르면 초고압 전처리 후 아임계 추출하여 제조되는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~15 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.According to the present invention there is provided a cosmetic composition containing 0.01 to 15% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition as the active ingredient chickweed, sunflower and bilberry complex extract prepared by subcritical extraction after ultra-high pressure pretreatment.

상기 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 다음과 같은 단계를 포함하는 방법으로 제조된다. The chickweed, sunflower and bilberry complex extract is prepared by a method comprising the following steps.

본 발명의 일 구체예에 따르면, (A)별꽃, 해바라기 및 월귤을 각각 1~5:1~5:1~5의 중량비율로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; (B)상기 혼합물 자체 또는 상기 혼합물에 추출용매를 가한 후, 초고압으로 가압 처리하는 전처리 단계; 및 (C)추출용매를 가하여 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15MPa에서 10~30분간 추출하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 제조된다.According to an embodiment of the present invention, (A) mixing the chickweed, sunflower and bilberry in a weight ratio of 1 to 5: 1 to 5: 1 to 5, respectively, to prepare a mixture; (B) a pretreatment step of applying the extraction solvent to the mixture itself or the mixture, and then pressurized to ultra high pressure; And (C) adding a solvent to extract for 10 to 30 minutes at 120 to 200 ° C., which is a subcritical condition, and a pressure of 0.1 to 15 MPa.

먼저 건조된 별꽃, 해바라기 및 월귤을 각각 1~5:1~5:1~5의 중량비율로 혼합하여 혼합물을 제조한다. 이때, 화장료의 성분으로 사용 가능한 별꽃의 전초가 사용되며, 해바라기의 전초, 꽃 및/또는 씨가 사용되며, 월귤의 열매, 잎 및/또는 씨가 사용된다.First, the dried chickweed, sunflower and bilberry are mixed in a weight ratio of 1-5: 1-5: 1-5 to prepare a mixture. At this time, chickweed outpost that can be used as a component of the cosmetic is used, sunflower outpost, flowers and / or seeds are used, bilberry fruit, leaves and / or seeds are used.

이어서 상기 혼합물 자체 또는 상기 혼합물에 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 디메치콘, 미네랄오일, 사이클로메치콘, 옥틸도데칸올, 세틸에칠헥사노에이트, 트리레칠헥사노인, 이소프로필미리스테이트 및 식물성 오일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추출용매를 가한 후 50~100MPa의 초고압으로 가압하여 전처리한다. 상기 식물성 오일이란 식물의 씨나 과육 등을 압착 등의 방법으로 추출한 오일을 의미하는 것으로, 올리브오일, 해바라기씨오일, 호호바오일, 야자오일, 아보카도오일 등이 사용될 수 있다. Subsequently, the mixture itself or the mixture is water, anhydrous alcohol having 1 to 4 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, glycerin, ethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol, caprylic / capric triglycerides, dimethicone, mineral oil, Cyclomethicone, octyldodecanol, cetylethylhexanoate, triethylhexanoin, isopropyl myristate and at least one extraction solvent selected from the group consisting of vegetable oils were added and then pressurized to an ultra-high pressure of 50-100 MPa. Pretreatment The vegetable oil refers to an oil extracted from a plant seed or pulp by compression or the like, and may be used as olive oil, sunflower seed oil, jojoba oil, palm oil, avocado oil, and the like.

보다 바람직하게는 상기 전처리는 상기 혼합물 또는 상기 혼합물에 추출용매를 가한 것을 비닐 파우치에 넣어 밀봉하고 40~50℃, 50~100MPa 조건의 물을 가압매개로 하여 60~180분 동안 가압 처리하는 것으로 이루어진다.More preferably, the pretreatment is performed by adding the extraction solvent to the mixture or the mixture in a plastic pouch and sealing it, and pressurizing for 60 to 180 minutes using water at 40 to 50 ° C. and 50 to 100 MPa conditions as a pressure medium. .

이후, 전처리가 이루어진 상기 혼합물에 추출용매를 가하여 아임계 조건에서 추출하고 여과, 농축하여 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 제조한다. 이때, 상기 전처리 과정에서 상기 혼합물을 추출용매와 함께 가압 처리한 경우에는 그대로 아임계 조건에서 추출과정을 진행할 수도 있다. Thereafter, an extraction solvent is added to the mixture, which is pretreated, and extracted under subcritical conditions, filtered, and concentrated to prepare a chickweed, sunflower and bilberry complex extract. In this case, when the mixture is pressurized with the extraction solvent in the pretreatment process, the extraction process may be performed under subcritical conditions.

이때, 별꽃, 해바라기 및 월귤을 각각 1~3:3~5:1~3의 중량비율로 혼합하여 추출하는 경우에 더 우수한 활성을 나타내었으며, 각각 3:5:1의 중량비율로 혼합하여 추출하는 경우에 가장 우수한 활성을 나타내었다. At this time, when the chickweed, sunflower and bilberry were mixed and extracted at a weight ratio of 1 to 3: 3 to 5: 1 to 3, respectively, they showed more excellent activity, and each was mixed to a weight ratio of 3: 5: 1. It showed the best activity when.

이와 같이 제조되는 상기 별꽃, 해바라기 및 월귤의 복합추출물은 별꽃, 해바라기 또는 월귤 각각의 추출물 또는 통상의 방법에 의해 추출되거나, 전처리 없이 아임계 조건에서만 추출된 복합추출물에 비하여 자외선 및 블루라이트에 대한 우수한 피부세포 보호 및 항노화 효능을 나타내어, 혼합에 따른 활성성분 간의 상승효과를 확인할 수 있었다. The composite extract of chickweed, sunflower and bilberry prepared in this way is superior to ultraviolet and blue light as compared to the composite extract of chickweed, sunflower or bilberry, respectively, or extracted by conventional methods or extracted only in subcritical conditions without pretreatment. It showed skin cell protection and anti-aging effect, and confirmed the synergistic effect between the active ingredients according to the mixing.

본 발명의 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 자외선 및 블루라이트를 조사하지 않은 상태뿐만 아니라, 조사한 상태에서도 피부유래 세포주의 생존률에 영향을 미치지 않으면서(시험예 1 및 2), 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서 피부노화 유발 인자인 ROS의 생성(시험예 3)을 효과적으로 억제하였다. 또한, 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서 MMP-1의 mRNA 발현(시험예 4)을 감소시켰으며, procollagen type 1의 생성을 크게 증가시켰다(시험예 5). 또한, 본 발명의 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 블루라이트의 투과를 크게 감소시키는 효과를 나타내었다(시험예 6). 그리고 이 복합추출물을 세럼 및 크림 제형에 적용하였을 때 실온, 냉장, 항온 및 순환 조건에서 제형안전성을 나타내었다(시험예 7). The chickweed, sunflower, and bilberry complex extracts of the present invention not only irradiated with UV and blue light, but also irradiated with ultraviolet and blue light without affecting the survival rate of skin-derived cell lines even in the irradiated state (Test Examples 1 and 2). Under the conditions, the generation of skin aging-inducing factor ROS (Test Example 3) was effectively suppressed. In addition, the mRNA expression of MMP-1 (Test Example 4) was reduced under UV and blue light irradiation conditions, and procollagen type 1 production was greatly increased (Test Example 5). In addition, the chickweed, sunflower and bilberry composite extract of the present invention showed an effect of greatly reducing the transmission of blue light (Test Example 6). When the complex extract was applied to serum and cream formulations, it showed formulation safety at room temperature, refrigeration, constant temperature, and circulation conditions (Test Example 7).

그러므로 상기 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화를 억제하는 화장료 및 블루라이트 차단용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the chickweed, sunflower and bilberry complex extract can be usefully used as a cosmetic for inhibiting skin aging due to ultraviolet rays and blue light and cosmetics for blocking blue light.

상기 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~15 중량% 함유될 수 있다.The chickweed, sunflower and bilberry complex extract may be contained 0.01 to 15% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition as an active ingredient.

본 발명의 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 여성청결제, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.  The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any of the formulations commonly prepared, such as lotion, cream, essence, cleansing foam, cleansing water, feminine cleanser, pack, body lotion, body oil, body gel, shampoo, Rinse, hair conditioner, hair gel, foundation, lipstick, mascara, makeup base and the like.

[실시예]EXAMPLE

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐, 본 발병의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples will be described in detail to help understand the present invention. However, the following examples are merely to illustrate the content of the present invention, the scope of the present invention is not limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.

제조예 1 - 3: 별꽃, 해바라기 또는 월귤 추출물의 제조Preparation Examples 1-3: Preparation of chickweed, sunflower or bilberry extract

건조된 별꽃 전초, 해바라기 꽃 및 월귤 열매 각각 100g에 추출용매로서 정제수를 5배 중량을 가하고 냉각 콘덴서가 달린 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 95℃로 가열하여 2 시간동안 추출하였다.5 g of purified water was added to 100 g of dried chickweed outpost, sunflower flower and bilberry fruit as extraction solvent, and the extract was heated at 95 ° C. in an extractor equipped with a cooling condenser (Cosmos-660, Gyeongseo Machinery) for 2 hours.

위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하여 추출물을 제조하였다.  After extraction by the above method, the mixture was left at room temperature for 3 days, and the precipitate was filtered through a 300 mesh filter paper, and the precipitate was filtered twice with an Adventech No. 5 filter paper and a Whatman GFC 150 mm filter paper to prepare an extract.

제조예 4 - 6: 별꽃, 해바라기 또는 월귤 아임계 추출물의 제조Preparation Example 4-6 Preparation of Chickweed, Sunflower or Bilberry Subcritical Extract

건조된 별꽃 전초, 해바라기 꽃 및 월귤 열매 각각 100g에 추출용매로서 정제수를 5배 중량을 가하고 아임계 조건인 200℃, 압력 15 MPa에서 15분간 추출하였다.To 100 g of dried chickweed outpost, sunflower flower and bilberry fruit, 5 times the weight of purified water was added as an extraction solvent, and extracted for 15 minutes at 200 ° C. under pressure of 15 MPa.

위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하여 추출물을 제조하였다.  After extraction by the above method, the mixture was left at room temperature for 3 days, and the precipitate was filtered through a 300 mesh filter paper, and the precipitate was filtered twice with an Adventech No. 5 filter paper and a Whatman GFC 150 mm filter paper to prepare an extract.

제조예 7 - 11: 별꽃, 해바라기 및 월귤 아임계 복합추출물의 제조Preparation Examples 7-11: Preparation of Chickweed, Sunflower and Bilberry Subcritical Complex Extracts

건조된 별꽃 전초, 해바라기 꽃 및 월귤 열매를 하기 표 1의 중량비로 혼합하여 100g의 혼합물을 제조한 후, 정제수 5배 중량을 넣고 아임계 조건인 200℃, 압력 15 MPa에서 15분간 추출하였다.Dried chickweed outpost, sunflower flower and bilberry fruit was mixed in the weight ratio of Table 1 to prepare a mixture of 100g, 5 times the weight of purified water and extracted for 15 minutes at 200 ℃, pressure 15 MPa of subcritical conditions.

위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하여 추출물을 제조하였다.  After extraction by the above method, the mixture was left at room temperature for 3 days, and the precipitate was filtered through a 300 mesh filter paper, and the precipitate was filtered twice with an Adventech No. 5 filter paper and a Whatman GFC 150 mm filter paper to prepare an extract.

실시예 1 - 5: 별꽃, 해바라기 및 월귤 초고압 전처리 아임계 복합추출물의 제조Examples 1-5 5: Preparation of Chickweed, Sunflower and Bilberry Ultra High Pressure Pretreatment Subcritical Complex Extracts

건조된 별꽃 전초, 해바라기 꽃 및 월귤 열매를 하기 표 1의 중량비로 혼합하여 100g의 혼합물을 제조한 후, 비닐 파우치에 넣어 밀봉하고 50℃, 100MPa의 물로 120분 동안 초고압으로 가압처리를 하였다(TFS-10L, Toyo Koatsu Co. LTD). 이후 비닐 파우치를 제거한 후 전처리된 별꽃, 해바라기 및 월귤 혼합물에 정제수 5배 중량을 넣고 아임계 조건인 200℃, 압력 15 MPa에서 15분간 추출하였다.The dried chickweed outpost, sunflower flower and bilberry fruit were mixed in a weight ratio of Table 1 to prepare a mixture of 100g, and then put in a plastic pouch and sealed and pressurized at an ultra-high pressure for 120 minutes with water at 50 ℃, 100MPa (TFS -10L, Toyo Koatsu Co. LTD. Then, after removing the vinyl pouch, 5 times the weight of purified water was added to the pretreated chickweed, sunflower and bilberry mixture and extracted for 15 minutes at 200 ° C. under pressure of 15 MPa.

위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하여 추출물을 제조하였다. After extraction by the above method, the mixture was left at room temperature for 3 days, and the precipitate was filtered through a 300 mesh filter paper, and the precipitate was filtered twice with an Adventech No. 5 filter paper and a Whatman GFC 150 mm filter paper to prepare an extract.

(중량비)(Weight ratio) 별꽃chickweed 해바라기sunflower 월귤Bilberry 제조예 7Preparation Example 7 실시예 1Example 1 1One 1One 1One 제조예 8Preparation Example 8 실시예 2Example 2 55 33 1One 제조예 9Preparation Example 9 실시예 3Example 3 33 1One 55 제조예 10Preparation Example 10 실시예 4Example 4 1One 55 33 제조예 11Preparation Example 11 실시예 5Example 5 33 55 1One

시험예 1: 세포독성 여부 확인 Test Example 1: Confirmation of Cytotoxicity

세포 독성 여부를 확인하기 위해 각질세포주인 HaCaT와 섬유아세포인 NHDF(normal human dermal fibroblast)를 10% FBS를 첨가한 DMEM 배지에 배양하였으며 96 well plate에 각각 5×105 및 3×104의 세포 농도로 접종하여 37℃ 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 0.1 또는 1.0% 가 되도록 디메틸설폭시드에 희석하여 제조한 희석용액을 처리하여 24시간 배양한 후에 MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazoliumboromide, Sigma)용액을 각 well에 100㎖씩 첨가한 후 (3 ㎎/㎖) 4시간 동안 더 배양하였다. 이후 상층액을 제거하고, 150 ㎕의 디메틸 설폭시드를 첨가한 후, 30분간 shaking하여 생성된 formazan을 녹여 multimicroplate reader(Molecular device Spectra max190)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율은 아래의 식에 따라 계산하였으며 그 결과는 하기의 표 2에 나타내었다.To determine the cytotoxicity, keratinocyte lines HaCaT and fibroblast NHDF (normal human dermal fibroblast) were cultured in DMEM medium with 10% FBS and 5 × 10 5 and 3 × 10 4 cells in 96 well plates, respectively. Inoculation at concentration was incubated for 24 hours in a 37 ℃ 5% CO 2 incubator. After culturing, the medium was removed, and the extract prepared in Examples and Examples above was diluted with dimethyl sulfoxide so as to have a sample concentration of 0.1 or 1.0%, followed by incubation for 24 hours, followed by MTT (3- [4). , 5-dimethylthiazol-2yl] -2,5-diphenyltetrazoliumboromide, Sigma) solution was added to each well 100ml (3 mg / ml) and further incubated for 4 hours. Then, the supernatant was removed, 150 μl of dimethyl sulfoxide was added, and then shaken for 30 minutes to dissolve the generated formazan, and the absorbance was measured at 540 nm using a multimicroplate reader (Molecular device Spectra max190). Cell viability was calculated according to the following formula and the results are shown in Table 2 below.

세포생존율(%)=시료첨가군의 흡광도 / 대조군의흡광도 × 100Cell survival rate (%) = absorbance of the sample addition group / absorbance of the control group × 100

구분division 세포생존률 (%)Cell survival rate (%) HaCATHaCAT NHDFNHDF 0.1%0.1% 1.0 %1.0% 0.1 %0.1% 1.0 %1.0% 대조군Control 100100 제조예 1Preparation Example 1 101101 100100 100100 100100 제조예 2Preparation Example 2 101101 102102 100100 101101 제조예 3Preparation Example 3 100100 100100 100100 100100 제조예 4Preparation Example 4 101101 100100 9999 9898 제조예 5Preparation Example 5 100100 100100 101101 100100 제조예 6Preparation Example 6 100100 9999 101101 101101 제조예 7Preparation Example 7 101101 9898 9999 100100 제조예 8Preparation Example 8 100100 101101 100100 9999 제조예 9Preparation Example 9 100100 103103 100100 100100 제조예 10Preparation Example 10 101101 9898 9999 9898 제조예 11Preparation Example 11 101101 101101 100100 9999 실시예 1Example 1 100100 100100 100100 100100 실시예 2Example 2 9999 101101 100100 9999 실시예 3Example 3 101101 100100 9999 9696 실시예 4Example 4 9898 101101 100100 100100 실시예 5Example 5 100100 101101 100100 101101

상기 표 2의 결과에서 보는 바와 같이, 별꽃, 해바라기 또는 월귤 추출물 및 이들의 혼합추출물 등을 적용한 시료 모두에서 95% 이상의 세포생존율을 나타냄에 따라 인간 피부유래 세포의 세포 독성에는 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었고, 이에 안전에는 문제가 없는 것을 확인하였다. As shown in the results of Table 2, it was confirmed that it does not affect the cytotoxicity of human skin-derived cells as it shows a cell viability of 95% or more in all samples to which the chickweed, sunflower or bilberry extract and their mixed extracts are applied. It was confirmed that there is no problem with safety.

시험예 2: 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 세포독성 여부 확인 Test Example 2: Confirmation of cytotoxicity under UV and blue light irradiation conditions

자외선과 블루라이트 조사 조건에서의 세포 독성 여부를 확인하기 위해 HaCaT 및 NHDF 세포를 24 well plate에 각각 6×106 및 4×105의 세포 농도로 접종하여 37℃ 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)으로 1회 세척한 후 PBS를 각 well에 1 ml 씩 넣었다. 자외선에 의한 세포 독성 여부를 확인하기 위해 UV 조사기(BLX-312, Vilber Lourmal, France) 안에 plate를 넣고 UV lamp를 이용하여 75 mJ/cm2의 광량으로 자외선을 조사하였다. 블루라이트에 의한 세포 독성은 440~450 nm 파장의 LED-Blue light lamp(HBL0204, Jeno, Korea)를 이용하여 30분간 조사한 후 확인하였다. 각각의 광선을 조사한 후 plate 안에 들어있는 PBS를 제거하고 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 1.0% 가 되도록 처리하였다. 24시간 배양 후 상기 시험예 1에서 명시한 방법과 동일하게 MTT 실험을 진행하여 추출물 시료가 세포 독성에 미치는 영향을 확인하였다. 세포생존율은 자외선과 블루라이트 조사군의 흡광도를 대조군으로 하여 계산하였으며 그 결과는 하기의 표 3에 나타내었다.To determine cytotoxicity under UV and blue light irradiation conditions, HaCaT and NHDF cells were inoculated into 24 well plates at cell concentrations of 6 × 10 6 and 4 × 10 5 , respectively, for 24 hours in a 37 ° C. 5% CO 2 incubator. Incubated for 2 hours. After incubation, the medium was removed, washed once with PBS (phosphate buffered saline), and 1 ml of PBS was added to each well. In order to check the cytotoxicity caused by UV light, the plate was placed in a UV irradiator (BLX-312, Vilber Lourmal, France) and irradiated with UV light at a light quantity of 75 mJ / cm 2 using a UV lamp. Cytotoxicity by blue light was confirmed after irradiation for 30 minutes using an LED-Blue light lamp (HBL0204, Jeno, Korea) of 440 ~ 450 nm wavelength. After irradiating each ray, the PBS contained in the plate was removed and the extract prepared in Preparation Example and Example was treated to have a sample concentration of 1.0%. After incubation for 24 hours, the MTT experiment was performed in the same manner as that described in Test Example 1 to confirm the effect of the extract sample on cytotoxicity. Cell viability was calculated using the absorbance of the ultraviolet and blue light irradiation group as a control group and the results are shown in Table 3 below.

구분division 세포생존률 (%)Cell survival rate (%) 자외선UV-rays 블루라이트Blue light HaCaTHaCaT NHDFNHDF HaCaTHaCaT NHDFNHDF 광선 조사 XLight irradiation X 142142 134134 128128 117117 대조군Control 100100 제조예 1Preparation Example 1 101101 100100 9999 9797 제조예 2Preparation Example 2 102102 105105 102102 9999 제조예 3Preparation Example 3 105105 104104 100100 100100 제조예 4Preparation Example 4 104104 101101 101101 101101 제조예 5Preparation Example 5 103103 9999 103103 100100 제조예 6Preparation Example 6 102102 104104 100100 9999 제조예 7Preparation Example 7 101101 106106 104104 101101 제조예 8Preparation Example 8 105105 100100 102102 9898 제조예 9Preparation Example 9 9999 9898 101101 102102 제조예 10Preparation Example 10 101101 9797 100100 100100 제조예 11Preparation Example 11 102102 105105 106106 103103 실시예 1Example 1 101101 103103 9898 9999 실시예 2Example 2 105105 104104 9999 101101 실시예 3Example 3 9898 105105 106106 102102 실시예 4Example 4 102102 100100 101101 100100 실시예 5Example 5 101101 105105 105105 100100

상기 표 3의 결과에서 보는 바와 같이, 별꽃, 해바라기 또는 월귤 추출물 및 이들의 혼합 추출물 등을 적용한 시료 모두에서 대조군 대비 95% 이상의 세포생존율을 나타냄에 따라 인간 피부유래 세포의 세포 독성에는 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었다. As shown in the results of Table 3, all of the samples to which the chickweed, sunflower or bilberry extract and mixed extracts thereof, etc. exhibited cell viability of 95% or more compared to the control, and thus did not affect the cytotoxicity of human skin-derived cells. It was confirmed.

시험예 3: 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 ROS 생성억제효능 확인Test Example 3: Confirmation of ROS generation inhibitory effect under UV and blue light irradiation conditions

자외선과 블루라이트 조사 조건에서의 세포 독성 여부를 확인하기 위해 HaCaT 및 NHDF 세포를 24 well plate에 각각 접종하여 37℃ 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)으로 1회 세척한 후 PBS를 각 well에 1 ml 씩 넣은 후 상기 시험예 2에서 명시한 방법과 동일하게 자외선과 블루라이트를 각각 조사하였다. 이후 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 1.0% 가 되도록 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양액을 제거하고 페놀레드를 함유하지 않는 DMEM 배양액에 녹인 40 μM의 DCF-DA(2'-7'-dichlorofluoresceine diacetate)를 첨가하고 30 분 후에 각 well의 상층액을 따서 ELISA reader가 부착된 fluorometer를 이용하여 excitation 485 nm, emission 530 nm에서 형광도를 측정하였다. ROS 생성률은 자외선과 블루라이트 조사군의 형광도를 대조군으로 하여 계산하였으며 그 결과는 하기의 표 4에 나타내었다.In order to confirm the cytotoxicity under UV and blue light irradiation conditions, HaCaT and NHDF cells were inoculated in 24 well plates and incubated in 37 ° C. 5% CO 2 incubator for 24 hours. After incubation, the medium was removed, washed once with PBS (phosphate buffered saline), 1 ml of PBS was added to each well, and the UV and blue lights were irradiated in the same manner as described in Test Example 2. Thereafter, the extracts prepared in Preparation Examples and Examples were treated to have a sample concentration of 1.0% and then incubated for 24 hours. Remove the culture medium, add 40 μM of DCF-DA (2'-7'-dichlorofluoresceine diacetate) dissolved in DMEM medium containing no phenol red, and after 30 minutes, pick up the supernatant of each well and attach a fluorometer with an ELISA reader. Fluorescence was measured at excitation 485 nm and emission 530 nm. The ROS production rate was calculated using the fluorescence of the ultraviolet and blue light irradiation groups as a control, and the results are shown in Table 4 below.

구분division ROS 생성률 (%)ROS production rate (%) 자외선UV-rays 블루라이트Blue light HaCaTHaCaT NHDFNHDF HaCaTHaCaT NHDFNHDF 광선 조사 XLight irradiation X 88 1111 44 99 대조군Control 100100 제조예 1Preparation Example 1 6767 7272 6969 5858 제조예 2Preparation Example 2 6666 7171 6565 5959 제조예 3Preparation Example 3 6464 7373 6868 5757 제조예 4Preparation Example 4 5858 6464 6262 4949 제조예 5Preparation Example 5 5656 6666 6161 5050 제조예 6Preparation Example 6 5555 6767 6060 4747 제조예 7Preparation Example 7 4848 6060 5151 4141 제조예 8Preparation Example 8 4646 6060 5252 4040 제조예 9Preparation Example 9 4545 6262 5252 4141 제조예 10Preparation Example 10 4242 5454 4848 3434 제조예 11Preparation Example 11 4040 5353 4646 3232 실시예 1Example 1 3434 4545 4040 2222 실시예 2Example 2 3333 4646 3939 2323 실시예 3Example 3 3434 4444 4141 2121 실시예 4Example 4 2929 4040 3434 1414 실시예 5Example 5 2222 3737 3131 1010

상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이, 초고압 전처리 후 아임계 추출하여 제조된 본 발명 실시예의 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 제조예의 각각의 추출물과 비교해 볼 때, 피부유래 세포주에서 자외선과 블루라이트에 의한 ROS의 생성 억제능이 우수한 것으로 나타나 자외선과 블루라이트로 인한 피부노화를 억제하는 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다. 특히 실시예 4와 5에서 높은 억제능을 나타내었으며, 실시예 5에서 가장 우수한 활성을 나타내었다.As shown in the results of Table 4, the chickweed, sunflower and bilberry complex extract of the present invention prepared by subcritical extraction after ultra-high pressure pretreatment compared to the respective extracts of the preparation, in the skin-derived cell line UV and blue light Inhibition of the production of ROS is shown to be excellent, it was confirmed that the effect of inhibiting skin aging due to ultraviolet light and blue light. In particular, the high inhibitory activity was shown in Examples 4 and 5, the most excellent activity in Example 5.

시험예 4: 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 MMP-1 발현억제효능 확인Test Example 4 Confirmation of MMP-1 Expression Inhibitory Effect Under UV and Blue Light Irradiation Conditions

자외선과 블루라이트 조사 조건에서의 MMP-1 발현억제 효능을 확인하기 위해 NHDF 세포를 6 well plate에 접종하여 37℃ 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)으로 1회 세척한 후 PBS를 각 well에 1 ml 씩 넣은 후 상기 시험예 2에서 명시한 방법과 동일하게 자외선과 블루라이트를 조사하였다. 이후 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 0.1 또는 1.0% 가 되도록 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후 Trizol reagent(invitrogen, USA)를 이용하여 NHDF 세포를 회수하여 mRNA를 추출하여 일련의 과정을 거쳐 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA로부터 MMP-1 유전자 부위를 증폭시켜 전기영동을 통해 유전자 발현 양을 확인하였으며, 유전자 증폭은 thermal cycler (GenePro, Hangzhou bioer tech., CHINA)를 사용하여 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: GGT GAT GAA GCA GCC CAG, R: CAG TAG AAT GGG AGA GTC), taq polymerase를 혼합하고 증류수를 더하여 50 uL로 조정 후 95도 5분 1cycle/95도 1분/51도 2분/72도 1분 28 cycle 증폭, 72도에서 5분간 반응하는 조건으로 수행하였다. MMP-1 발현은 자외선과 블루라이트 조사군의 발현량를 대조군으로 하여 계산하였으며 그 결과는 하기의 표 5에 나타내었다.In order to confirm the effect of inhibiting MMP-1 expression under UV and blue light irradiation conditions, NHDF cells were inoculated into 6 well plates and incubated in 37 ° C. 5% CO 2 incubator for 24 hours. After incubation, the medium was removed, washed once with PBS (phosphate buffered saline), 1 ml of PBS was added to each well, and the UV and blue light were irradiated in the same manner as described in Test Example 2. Thereafter, the extracts prepared in Preparation Examples and Examples were treated to a sample concentration of 0.1 or 1.0%, and then incubated for 24 hours. Thereafter, NHDF cells were recovered using Trizol reagent (invitrogen, USA), mRNA was extracted, and cDNA was synthesized through a series of processes. The amount of gene expression was confirmed by electrophoresis by amplifying the MMP-1 gene region from the synthesized cDNA, and gene amplification was performed using a thermal cycler (GenePro, Hangzhou bioer tech. 10 pmol primer (F: GGT GAT GAA GCA GCC CAG, R: CAG TAG AAT GGG AGA GTC) and taq polymerase Minutes / 72 degrees 1 min 28 cycle amplification, was carried out under the conditions of reacting for 5 minutes at 72 degrees. MMP-1 expression was calculated using the expression level of the ultraviolet and blue light irradiation group as a control group and the results are shown in Table 5 below.

구분division MMP-1 발현량 (%)MMP-1 expression level (%) 자외선UV-rays 블루라이트Blue light 0.1%0.1% 1.0%1.0% 0.1%0.1% 1.0%1.0% 광선 조사 XLight irradiation X 4646 3535 대조군Control 100100 제조예 1Preparation Example 1 7474 6767 7777 6868 제조예 2Preparation Example 2 7575 6868 7676 6767 제조예 3Preparation Example 3 7676 6666 7575 6565 제조예 4Preparation Example 4 7272 6262 7474 6565 제조예 5Preparation Example 5 7070 6060 7272 6363 제조예 6Preparation Example 6 7171 5858 7373 6363 제조예 7Preparation Example 7 6767 5252 7070 5858 제조예 8Preparation Example 8 6868 5151 6969 5757 제조예 9Preparation Example 9 6666 5353 6868 5757 제조예 10Preparation Example 10 6161 4848 6464 5252 제조예 11Preparation Example 11 6060 4646 6161 4949 실시예 1Example 1 5656 4040 6060 4646 실시예 2Example 2 5757 4141 6161 4848 실시예 3Example 3 5656 3939 5959 4545 실시예 4Example 4 5252 3434 5656 4040 실시예 5Example 5 4949 3232 5252 3636

상기 표 5의 결과에서 보는 바와 같이, 초고압 전처리 후 아임계 추출하여 제조된 본 발명 실시예의 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 제조예 1~6의 각각의 추출물, 본 발명의 초고압 전처리를 거치지 않은 제조예 7~11의 복합추출물과 비교해 볼 때, 인간 섬유아세포에서 자외선 또는 블루라이트에 의한 MMP-1 발현 증가를 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 실시예 5에서 가장 우수한 활성을 나타내었다.As shown in the results of Table 5, the chickweed, sunflower and bilberry composite extract of the embodiment of the present invention prepared by subcritical extraction after ultra high pressure pretreatment, the respective extracts of Preparation Examples 1 to 6, the ultra high pressure pretreatment of the present invention Compared with the composite extracts of Examples 7 to 11, it was confirmed that the human fibroblasts effectively suppressed the increase of MMP-1 expression by ultraviolet or blue light. In particular, Example 5 showed the best activity.

시험예 5: 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 procollagen type 1 생성증가 효능 확인Test Example 5 Confirmation of the increase in procollagen type 1 production under UV and blue light irradiation conditions

자외선과 블루라이트 조사 조건에서의 procollagen type 1의 생성 억제 효능를 확인하기 위해 NHDF 세포를 24 well plate에 접종하여 37℃ 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)으로 1회 세척한 후 PBS를 각 well에 1 ml 씩 넣은 후 상기 시험예 2에서 명시한 방법과 동일하게 자외선과 블루라이트를 조사하였다. 이후 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 0.1 또는 1.0% 가 되도록 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후에 배양된 세포의 배지를 수거하여 Procollagen type I c-peptide EIA kit (TAKARA, MK101)를 사용하여 procollagen type 1의 양을 측정하였다. 한편, 바닥에 부착되어 있는 세포는 PBS로 세척한 후 1N NaOH로 용해시켜 총 단백질 양을 측정하여, 일정 단백질 당 전구콜라겐 생성량을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.In order to confirm the inhibitory effect of procollagen type 1 production under UV and blue light irradiation conditions, NHDF cells were inoculated in 24 well plates and incubated in 37 ° C. 5% CO 2 incubator for 24 hours. After incubation, the medium was removed, washed once with PBS (phosphate buffered saline), 1 ml of PBS was added to each well, and UV and blue light were irradiated in the same manner as described in Test Example 2. Thereafter, the extracts prepared in Preparation Examples and Examples were treated to a sample concentration of 0.1 or 1.0%, and then incubated for 24 hours. Thereafter, the cultured cells were collected and the amount of procollagen type 1 was measured using a Procollagen type I c-peptide EIA kit (TAKARA, MK101). On the other hand, cells attached to the bottom was washed with PBS and lysed with 1N NaOH to measure the total protein amount to calculate the amount of procollagen per constant protein. The results are shown in Table 6 below.

구분division Procollagen type 1 생성량/총 단백질량Procollagen type 1 production / total protein 자외선UV-rays 블루라이트Blue light 0.1%0.1% 1.0%1.0% 0.1%0.1% 1.0%1.0% 광선 조사 XLight irradiation X 5.35.3 대조군Control 2.82.8 3.23.2 제조예 1Preparation Example 1 2.82.8 2.92.9 3.23.2 3.33.3 제조예 2Preparation Example 2 2.92.9 2.92.9 3.23.2 3.23.2 제조예 3Preparation Example 3 2.92.9 3.03.0 3.33.3 3.43.4 제조예 4Preparation Example 4 3.13.1 3.23.2 3.53.5 3.63.6 제조예 5Preparation Example 5 3.23.2 3.33.3 3.43.4 3.63.6 제조예 6Preparation Example 6 3.23.2 3.33.3 3.53.5 3.73.7 제조예 7Preparation Example 7 3.83.8 3.93.9 3.73.7 4.04.0 제조예 8Preparation Example 8 3.73.7 3.93.9 3.83.8 3.93.9 제조예 9Preparation Example 9 3.83.8 4.04.0 3.73.7 4.04.0 제조예 10Preparation Example 10 4.14.1 4.24.2 4.04.0 4.34.3 제조예 11Preparation Example 11 4.24.2 4.34.3 4.14.1 4.34.3 실시예 1Example 1 4.04.0 4.54.5 4.34.3 4.54.5 실시예 2Example 2 4.24.2 4.44.4 4.44.4 4.64.6 실시예 3Example 3 4.34.3 4.54.5 4.34.3 4.84.8 실시예 4Example 4 4.84.8 4.94.9 4.74.7 5.35.3 실시예 5Example 5 4.94.9 5.25.2 4.84.8 5.55.5

상기 표 6의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명 실시예의 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 제조예의 각각의 추출물, 전처리하지 않은 제조예의 복합추출물들과 비교해 볼 때, 인간 섬유아세포에서 자외선과 블루라이트에 의한 procollagen type 1 생성 감소를 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. As shown in the results of Table 6, the chickweed, sunflower and bilberry composite extract of the present invention is compared to the respective extracts of the preparation, the composite extract of the pre-treatment example, in the ultraviolet and blue light in human fibroblasts It was confirmed that it effectively inhibits the reduction of procollagen type 1 production.

시험예 6: 블루라이트 투과 여부 확인Experimental Example 6: Checking Blue Light Transmission

본 발명 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물의 블루라이트 차단활성을 다음과 같이 평가하였다. The blue light blocking activity of the chickweed, sunflower and bilberry complex extract of the present invention was evaluated as follows.

정제수와 정제수에 혼합한 상기 실시예 5의 복합추출물, 그리고 정제수에 색소를 첨가하여 실시예 5의 복합추출물과 색상을 유사하게 맞춘 용액(대조군)을 각각 투명 유리병에 넣고 440~450 nm 파장의 LED-Blue light lamp를 이용하여 블루라이트를 조사한 후 사진촬영하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다. The complex extract of Example 5 mixed with purified water and purified water, and a solution (control group) similar in color to the complex extract of Example 5 by adding a pigment to the purified water were placed in clear glass bottles, respectively, at a wavelength of 440-450 nm. Photographs were taken after irradiating blue light using an LED-Blue light lamp. The results are shown in FIG.

도 1의 결과에서 보는 바와 같이, 정제수 또는 대조군과 비교해 볼 때 초고압 전처리 후 아임계 추출하여 제조된 본 발명 실시예 5의 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물은 블루라이트 투과를 크게 감소시켜 블루라이트 차단활성을 가지는 것을 확인할 수 있었다.As shown in the results of Figure 1, compared to the purified water or the control compared to the ultra high pressure pretreatment after the subcritical extraction prepared according to the fifth embodiment of the present invention, the chickweed, sunflower and bilberry complex extract greatly reduced the blue light permeation blue light blocking activity It could be confirmed that having.

실시예 6: 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 함유하는 세럼의 제조 Example 6: Preparation of Serum Containing Chickweed, Sunflower and Bilberry Complex Extracts

실시예 5의 복합추출물을 함유한 세럼을 하기의 표 7의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다. 상기 시험예를 통해 실시예 5가 자외선 및 블루라이트에 의한 피부노화 억제효능을 가장 우수하게 나타내었기 때문에, 실시예 5를 이용하여 제조하였다.Serum containing the composite extract of Example 5 was prepared according to the conventional method in the composition and content of Table 7. Since Example 5 showed the best skin aging inhibitory effect by ultraviolet light and blue light through the test example, it was prepared using Example 5.

원료Raw material 함량(중량%)Content (% by weight) 복합추출물(실시예 5)Compound Extract (Example 5) 1.01.0 솔비탄 세스퀴올레이트Sorbitan Sesquioleate 0.50.5 스쿠알란Squalane 10.010.0 글리세릴 스테아레이트Glyceryl Stearate 1.01.0 세테아릴알코올Cetearyl Alcohol 1.51.5 글리세릴스테아레이트/피이지-100 스테아레이트Glyceryl Stearate / Pig-100 Stearate 1.01.0 프로필렌글리콜Propylene glycol 3.03.0 카르복시폴리머Carboxy Polymer 0.10.1 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 페녹시에탄올Phenoxyethanol 적량Quantity 정제수Purified water To 100To 100

실시예 7: 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 함유하는 크림의 제조 Example 7 Preparation of Cream Containing Chickweed, Sunflower, and Bilberry Complex

상기 실시예 5의 복합추출물을 함유한 크림을 하기의 표 8의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.The cream containing the composite extract of Example 5 was prepared according to a conventional method in the composition and content of Table 8 below.

원료Raw material 함량(중량%)Content (% by weight) 복합추출물(실시예 5)Compound Extract (Example 5) 1.01.0 시어버터Shea butter 2.02.0 솔비탄 세스퀴올레이트Sorbitan Sesquioleate 0.80.8 스쿠알란Squalane 10.010.0 디메치콘Dimethicone 3.03.0 글리세릴 스테아레이트Glyceryl Stearate 1.01.0 세테아릴알코올Cetearyl Alcohol 2.02.0 글리세릴스테아레이트/피이지-100 스테아레이트Glyceryl Stearate / Pig-100 Stearate 1.01.0 프로필렌글리콜Propylene glycol 3.03.0 카르복시폴리머Carboxy Polymer 0.250.25 트리에탄올아민Triethanolamine 0.250.25 페녹시에탄올Phenoxyethanol 적량Quantity 정제수Purified water To 100To 100

시험예 7 : 제형안정도 확인Test Example 7: Confirmation of formulation stability

상기 실시예 6, 7에서 제조한 제형에 대하여 실온(25℃), 냉장(4℃) 및 항온(50℃)으로 일정하게 유지되는 실내, 냉장고 및 인큐베이터에서 불투명 초자 용기에 담아 24주 동안 보관 및 관찰(변색, 변취 및 분리)하였다. 또한 온도 순환조건 (-5 ~ 45℃)에서도 안정성을 확인하였다. 결과는 표 9에 나타내었다.The formulations prepared in Examples 6 and 7 were stored in an opaque glass container in an indoor, refrigerator and incubator kept at room temperature (25 ° C.), refrigerated (4 ° C.) and constant temperature (50 ° C.) for 24 weeks, and Observations (discoloration, deodorization and separation) were made. In addition, the stability was confirmed in the temperature cycling conditions (-5 ~ 45 ℃). The results are shown in Table 9.

온도조건Temperature condition 안정성 확인Check stability 실시예 6Example 6 실시예 7Example 7 변색discoloration 변취Deodorant 분리Separation 변색discoloration 변취Deodorant 분리Separation 실온(25℃)Room temperature (25 ℃) 00 00 00 00 00 00 냉장(4℃)Refrigerated (4 ℃) 00 00 00 00 00 00 항온(50℃)Constant temperature (50 ℃) 00 00 00 00 00 00 순환 (-5 ~ 45 ℃)Circulation (-5 ~ 45 ℃) 00 00 00 00 00 00

< 제형 안정 등급 ><Formulation stability grade>

0: 변화 없음 1: 미세한 변화 2: 변화 3: 극심한 변화0: no change 1: slight change 2: change 3: extreme change

상기 표 9에서 나타낸 바와 같이 실시예 6, 7 제형 모두 25℃, 4℃, 50℃ 온도 조건 및 순환조건 하에서 변색 변취 및 분리 현상이 나타나지 않고 안정함이 확인되었다.As shown in Table 9, it was confirmed that the formulations of Examples 6 and 7 were stable and did not exhibit discoloration discoloration and separation under 25 ° C, 4 ° C, and 50 ° C temperature and circulation conditions.

Claims (8)

별꽃, 해바라기 및 월귤을 각각 1~5:1~5:1~5의 중량비율로 혼합하여 제조된 혼합물을 비닐 파우치에 넣어 밀봉하고 40~50℃, 50~100MPa 조건의 물을 가압매개로 하여 60~180분 동안 가압 처리하는 초고압 전처리 후, 추출용매를 가하여 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15MPa에서 10~30분간 추출하는 아임계 추출하여 제조되는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물을 함유하는 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제용 화장료 조성물.The mixture prepared by mixing chickweed, sunflower and bilberry in the weight ratio of 1-5: 1-5: 1-5, respectively, was put in a plastic pouch and sealed, and water of 40-50 ° C. and 50-100 MPa was used as a pressure medium. After the ultra-high pressure pretreatment for 60 to 180 minutes, the chickweed, sunflower and bilberry complex extracts are prepared by subcritical extraction for 10 to 30 minutes at 120 to 200 ° C, which is a subcritical condition, and pressure of 0.1 to 15 MPa. Cosmetic composition for inhibiting skin aging due to ultraviolet rays and blue light containing. 제1항에 있어서, 상기 복합추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~15 중량% 함유하는 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제용 화장료 조성물.The cosmetic composition for inhibiting skin aging according to claim 1, wherein the complex extract contains 0.01 to 15% by weight, based on the total weight of the cosmetic composition. 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 블루라이트 차단효과를 가지는 것을 특징으로 하는 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제용 화장료 조성물.According to claim 1, wherein the cosmetic composition is a cosmetic composition for inhibiting skin aging due to ultraviolet light and blue light, characterized in that it has a blue light blocking effect. (A)별꽃, 해바라기 및 월귤을 각각 1~5:1~5:1~5의 중량비율로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
(B)상기 혼합물 자체 또는 상기 혼합물에 추출용매를 가한 후 초고압으로 가압 처리하는 전처리 단계; 및
(C)추출용매를 가하여 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15MPa에서 10~30분간 추출하는 단계를 포함하는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물의 제조방법.
(A) mixing the chickweed, sunflower and bilberry at a weight ratio of 1-5: 1-5: 1-5 to prepare a mixture;
(B) a pretreatment step of applying the extraction solvent to the mixture itself or the mixture and then pressurized to ultra high pressure; And
(C) Method of producing a chickweed, sunflower and bilberry complex extract comprising the step of adding for 10 minutes to 30 minutes at 120 ~ 200 ℃, pressure 0.1 ~ 15MPa subcritical conditions by adding an extraction solvent.
제6항에 있어서, 상기 (B) 또는 (C)단계에서 추출용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 디메치콘, 미네랄오일, 사이클로메치콘, 옥틸도데칸올, 세틸에칠헥사노에이트, 트리레칠헥사노인, 이소프로필미리스테이트 및 식물성 오일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이 사용되는 것임을 특징으로 하는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물의 제조방법.The method of claim 6, wherein the extraction solvent in step (B) or (C) is water, anhydrous alcohol of 1 to 4 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, glycerin, ethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol, caprylic At least one selected from the group consisting of capric triglycerides, dimethicone, mineral oil, cyclomethicone, octyldodecanol, cetylethylhexanoate, trirexylhexanoin, isopropyl myristate and vegetable oils Method for producing chickweed, sunflower and bilberry complex extract, characterized in that it is used. 제6항에 있어서, 상기 (B)단계의 전처리는 상기 혼합물을 비닐 파우치에 넣어 밀봉하고 40~50℃, 50~100MPa 조건의 물로 120~180분 동안 가압 처리하는 것으로 이루어지는 것임을 특징으로 하는 별꽃, 해바라기 및 월귤 복합추출물의 제조방법.The method according to claim 6, wherein the pretreatment of the step (B) is a star flower, characterized in that the mixture is put into a plastic pouch and sealed and pressurized for 120 to 180 minutes with water at 40 ~ 50 ℃, 50 ~ 100MPa conditions, Sunflower and bilberry complex extract.
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