KR102074859B1 - 풀루란-레티노이드 접합체를 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 풀루란-레티노이드 접합체를 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따르는 풀루란-레티노이드계 접합체는 기존 레이노이드가 갖는 단점을 보완하여 자극을 줄이고 안정성이 증대되며, 콜라겐합성 증진효과가 우수하고, 비자극적이며, 무독성이고, 화학적 안정성이 우수하며, 피부흡수력이 탁월할 뿐만 아니라, 지속성이 있어 피부재생, 노화방지 등에 탁월한 효과를 나타낼 수 있다. 또한, 광안정성이 우수하여 밤에만 사용할 수 있었던 레티노이드를 낮에도 사용 가능하게 해줄 수 있다는 장점이 있다. 따라서 본 발명에 따른 풀루란-레티노이드계 접합체는 화장품 또는 의약의 활성성분으로 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

풀루란-레티노이드 접합체를 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물 {A composition for preventing the skin aging comprising Pullulan-Retinoid complex}

본 발명은 풀루란-레티노이드 접합체를 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 풀루란-레티노이드 접합체에 의해 레티노이드를 안정화시킴으로써 콜라겐합성 증진효과가 우수하고, 비자극적이며, 무독성이고, 안정성이 우수하며, 피부흡수력이 탁월할 뿐만 아니라 지속성이 있는 풀루란-레티노이드 접합체 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염을 포함하는 피부노화 방지용 화장료 및 약학적 조성물에 관한 것이다.

사람은 태어나면서부터 노화가 시작되며, 일생생활에서 스트레스 등에 의해 노화가 진행되기도 한다. 노화 정도를 가늠할 수 있는 가장 일반적인 기준은 바로 피부에서 관찰 할 수 있는 기미, 검버섯, 주름 등이 있다. 이는 피부 구성성분이 표피, 진피와 피하조직의 두께가 얇아지기 때문인데, 자세하게는 피부의 탄력에 중요한 요소인 세포외 기질(Extracelluar matcix, ECM)이 변화하게 되기 때문이다.

세포외 기질은 크게 탄력 섬유인 엘라스틴이 2~4% 정도 포함되어 있고, 대부분 다당류 및 콜라겐으로 이루어져 있다. 나이가 들어감에 따라 세포외 기질에 존재하는 콜라겐과 엘라스틴이 경화 되고, 뮤코 다당류의 분해가 증가되어 수분 보유 능력이 낮아지고, 피부의 탄력이 줄어들게 되며, 이는 표면적으로 주름으로 나타나게 된다.

또한 피부 외부 층은 자외선의 영향을 받게 되어 피부 세포 내 신호 전달 체계에 영향을 주어 DNA 손상과 유전자 발현을 변화시켜 세포 노화를 가속 시키고, 세포 사멸을 일으키게 된다. 그리고 지속적으로 자외선에 노출될 경우 진피층에서 활성산소가 증가하게 되고, 콜라겐 합성이 저해되며, 콜라겐 분해 효소인 Matrix MetalloProteases (MMPs)의 양이 조절되어 콜라겐 분해가 촉진되게 된다. 이를 외인성 노화 중 광노화라고 한다.

광노화의 경우 주름의 주요 요인인 자외선 A와 B를 물리적으로 차단해 주는 자외선 차단제로 피부를 보호 하거나, 항산화 물질이 함유된 화장품 등을 통한 꾸준한 관리로 예방 및 치료가 가능하기 때문에 이에 따른 다양한 피부 관련 제품들이 개발되어 지고 있다. 광노화로 인한 피부 손상에 주로 쓰이는 원료는 레티노이드(Retinoid)로, 진피의 콜라겐 합성을 증가 및 콜라겐을 합성하는 섬유아세포 수를 증가시키는 기전을 통해 주름을 개선해주며 미백에도 가장 효과적인 원료이다. 레티놀(Retinol), 레티노익산(Retinoic acid), 레티날(Retinal)등이 이에 포함된다.

레티노이드는 비타민 A의 유도체로서, 레티놀(retinol), 레티날(retinal), 레티노인산(retinoic acid), 레티닐 에스테르의 일종인 레티닐 아세테이트(retinyl acetate), 레티닐 프로피오네이트(retinyl propionate), 레티닐 리놀리에이트 (retinyl linoleate), 레티닐 팔미테이트(retinyl palmitate) 등이 포함된다.

한편, 햇빛에 의한 자외선에 장기간 노출은 피부의 주름, 거칠어짐, 반점 등 피부의 광노화 또는 암 등 피부질환의 주된 요인이다. 모두-트랜스인 레티노인산(all-trans retinoic acid)은 이러한 피부 광노화에 의한 피부의 거칠어짐, 주름 등을 완화하는 효능이 있어서, 이를 함유하는 화장료 조성물은 노화를 개선한다고 알려져 있다[참고문헌: Weiss C. N 등, JAMA, 259(1988), 527-532].

그러나 레티노이드 계열의 화합물은 빛, 열, 산소, 물 등에 매우 불안정하기 때문에 실용화를 위해서는 안정화가 필요하며, 생체 내의 안정성, 레티노인산 리셉터(Retinoic Acid Receptor: RAR)에 의한 부작용으로써 세포독성의 문제점이 지적되었다. 따라서 안정성이 우수하고, 무독성이며, 비자극적이면서 광노화 억제의 효능을 유지한 레티노이드 유도체에 대한 개발이 진행되어 왔다.

이와 같은 레티노이드 유도체 개발 경향을 살펴보면, 레티노인산의 에스테르 또는 아미드 유도체 등이 알려져 있으며, 미국특허공보 제4,677,120호에는 2-(올-트랜스-레티노일옥시)-4-메톡시아세토페논 화합물이 비교적 저자극성이고, 피부암이나 광노화의 억제에 효과를 나타낸다고 개시되어 있고, 미국특허공보 제4,900,478호에는 테트라에틸렌글리콜과 레티노인산의 에스테르 화합물이 피부에 대한 침투 증진 효과가 있는 것으로 개시되어 있다. 또한, 아미드 결합을 통한 N-(4-하이드록시페닐) 레틴아미드 및 레티닐 β-글루크로나이드(Retinyl-β-Glucuronide)도 노화억제의 활성을 가진다고 보고되어 있으나, 독성 문제를 해결하지 못하였다[참고문헌: FASEB J., 10, 1014-1024, 1996].

최근에는 국제특허출원 PCT/US2002/036421호에 지용성인 레티노이드 계열 화합물을 폴리에틸렌글리콜로 에스테르화 및 고리화하여 물에 대한 용해도를 개선함으로써 가공이나 제형화가 비교적 용이하고, 특히 흡입투여에 매우 적합하여 만성 폐쇄성 폐질환인 기종의 치료에 있어서 적은 용량으로 소기의 치료 효과를 나타낼 수 있어, 생체 이용률이 극대화되고 전신 독성을 감소시킬 수 있는 레티노이드 유도체가 보고된 바 있다. 그러나 이 화합물 역시 혈액 내 폴리에틸렌글리콜 골격(PEG backbone)과 레티노인산의 효소에 의한 너무 빠른 분해가 문제가 되고, 또한 용해도가 개선되었다 하더라도 인체의 혈액 내로 흡수된 후 실제 효능을 나타내기 위해서는 레티노인산 수용체에 대한 결합의 선택성이 비교적 낮다는 것이 문제가 된다[참고문헌: 미국특허공보 제6,180,670호]

하지만 레티노이드 계열의 특성상 열과 빛에 불안정하여 산화되기 쉽고, 피부가 붉어지고 따갑고 화끈거리는 등의 부작용이 일시적으로 일어나기 때문에 레티날 및 레티놀의 경우 화장품 원료로 사용이 어려우며, 레티노익산의 경우에는 의약품으로만 사용되고 있다.

따라서 피부 자극은 감소시키면서 안정하게 피부의 주름 및 미백 효과를 증진시키고자 레티놀 등 레티노이드 유도체 연구 등이 활발하게 진행되고 있다. 유도체 중에서는 레티닐 팔미테이트이나 팔미틸산 레티놀 등이 가장 많이 사용되고 있으나, 이 또한 다량 사용 시 자극이 있다.

그 밖에도 레티노이드의 안정성을 높여 주고자 부틸레이티드 하이드록시톨루엔 (Butylated hydroxytoluene)과 비타민 E, 에틸렌디아민테트라아세트산 (Ethylene diaminetetracetic aicd)를 사용한 유화제형을 사용해 주었거나(미국특허 등록 번호 : 3,906,108), 레티노산과 알기닌 또는 펩타이드를 결합시켜 안정화 시켜 주었다 (등록번호 : 10-1224809). 또한 레티노이드 원료에 폴리에스테르계 고분자를 결합시켜 보다 안정성을 증진 시켜 주거나(등록번호 : 10-0836036), 생분해성 고분자를 이용한 캡슐화를 통해 레티노이드를 안정화 시켜준(등록번호 : 10-0789628) 예도 있다.

이에 본 발명에서는 본 발명자들에 의해 이미 개발된 바 있는 생체적합하고 생분해성인 풀루란에 레티노이드를 접합시킨 형태를 갖는 물질인 풀루란-레티노이드 접합체(등록특허 10-1003687)에 대해 연구를 진행하던 중 풀루란-레티노이드 접합체가 종래의 레티노이드 유도체 발명들과 비교하여 볼 때 레티노이드의 안정성 유효성을 가질 뿐만 아니라 플루란의 특성을 활용하여 보습력을 부여해 줄 수 있다는 사실을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명에서 해결하고자 하는 기술적 과제는 피부노화 방지 효과를 가지면서 레티노이드의 안정성을 높일 뿐만 아니라 레티노이드계의 효능을 지속시킬 수 있으며 인체 안정성이 우수한 화장품 및 의약 원료 물질을 제공하기 위한 것이다.

상기한 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명에서는 하기 화학식 1의 구조를 가지는 풀루란-레티노이드 접합체 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

상기한 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명에서는 하기 화학식 1의 구조를 가지는 풀루란-레티노이드 접합체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 약학적 조성물을 제공한다.

바람직하게, 본 발명에 사용되는 풀루란-레티노이드 접합체는 풀루란의 609개 클루코오스링 당 레티노익산 2개가 에스테르결합 된 것임을 특징으로 하며, 이는 시판하는 것을 사용하거나 당분야에 공지된 방법에 따라 제조될 수 있으며, 이에 특별한 제한은 없다다. 예를 들어, 본 발명자들에 의해 출원되어 등록된 대한민국 특허등록 제10-1003687호에 기술된 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명에서 '풀루란'이라는 용어는 풀루란뿐만 아니라 이의 허용가능한 염으로서, 풀루란 나트륨, 풀루란 칼륨, 풀루란 마그네슘 및 풀루란 칼슘을 포함하는 임의의 풀루란 염, 화학적으로 변형 또는 유도체화된 형태의 풀루란을 포함하는 의미로 사용된다.

본 발명에서 '레티노익산' 이라는 용어는 레티노익산뿐만 아니라 이의 허용가능한 염으로서, 레티노익산 나트륨, 레티노익산 칼륨, 레티노익산 마그네슘 및 레티노익산 칼슘을 포함하는 임의의 레티노익산 염, 화학적으로 변형 또는 유도체화된 형태의 레티노익산을 포함하는 의미로 사용된다.

상기 풀루란은 흑효모로 불리는 아우레오바시디움 풀루란스(Aureobasidium pullulans) 균주로부터 세포외 생산되는 수용성 다당류를 말한다. 풀루란은 3개의 글루코스가 a-1,4 결합된 말토트리오스가 a-1, 6결합으로 반복결합된 직쇄상 글루칸으로 무미무취하고 부정형의 백색분말 형태이다. 이 물질은 각종 독성, 변이원형 시험결과에 아무 문제가 없으며, 다른 합성고분자와 달리 생체 내 장내세균의 풀루라네이즈, 아이소풀루라네이즈 등에 의해 분해되어 포도당을 생성하는 무독성 고분자이다. 또한 분자량이 큰 다당류들의 특징인 수분 보유 능력이 뛰어나, 히알루론산과 같이 피부에 보습 효과를 줄 수 있다.

상기 레티노익산은 광노화로 인한 주름개선 치료제로 많이 사용되는 원료로, 비타민 A 중 하나이다. 이는 콜라겐 분해 효소인 Matrix MetalloProteases (MMPs)를 감소시키며, 콜라겐을 합성하는 섬유아세포 수를 증가시키는 기전을 통해 주름을 개선해 준다.

본 발명의 유효성분인 풀루란-레티노이드 접합체는 소수성인 레티노이드가 풀루란 사슬 안쪽에 자리 잡게 되어 빛과 열에 안정해 질 수 있는 구조를 갖게 되어, 레티노이드가 피부에 안정적으로 오래 효과를 발휘 할 수 있게 해준다.

바람직하게, 본 발명의 하나의 구현예에 따르면, 본 발명에서는 피부노화 방지용 화장료 조성물의 유효성분으로서 풀루란-레티노이드 접합체 또는 이의 허용가능한 염을 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화학식 1로 표시되는 풀루란-레티노이드 접합체는 화장학적으로 허용가능한 염 또는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 화장학적 또는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 화장학적 또는 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 풀루란-레티노이드 접합체을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시켜서 건조하거나 또는 석출 된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.

또한, 염기를 사용하여 화장학적으로 또는 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

상기 "피부노화 방지"는 피부 진피층의 치밀성을 증진시키고, 진피층-표피층 접합부의 접합력을 향상시켜 피부주름의 모든 형태의 호전 및 양호화를 의미한다.

본 발명의 피부노화 방지를 위한 조성물에 포함되는 풀루란-레티노이드 접합체 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염은 전체 조성물의 총 중량을 기준으로 0.00001 내지 15.0 중량%, 보다 바람직하게는 0.0001 내지 10 중량%, 가장 바람직하게는 0.0001 내지 5 중량%로 포함될 수 있다.

본 발명의 하나의 구체적 용도로서, 본 발명의 상기 조성물은 화장료 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 사용되는 경우, 유효성분으로서 풀루란-레티노이드 접합체 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 추가적으로 포함할 수 있다. 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 하나의 실시양태에 따른 약학적 조성물은 풀루란-레티노이드 접합체 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 비경구 투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여(topical application) 방식으로 적용된다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다. 또한 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 당분야의 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑시르제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

한편, 본 발명의 구체적 실시예에서 풀루란-레티노이드 접합체에 대한 피부누적 자극실시 결과 인체에 무해한 물질임이 확인되었다. 따라서, 본 발명의 풀루란-레티노이드 접합체은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같은 화장료 및 약학적 조성물에 안전하게 사용할 수 있다.

이와 같이, 본 발명에 따르는 풀루란-레티노이드계 접합체는 기존 레이노이드가 갖는 단점을 보완하여 자극을 줄이고 안정성이 증대되며, 콜라겐합성 증진효과가 우수하고, 비자극적이며, 무독성이고, 화학적 안정성이 우수하며, 피부흡수력이 탁월할 뿐만 아니라, 지속성이 있어 피부재생, 노화방지 등에 탁월한 효과를 나타낼 수 있다. 또한, 광안정성이 우수하여 밤에만 사용할 수 있었던 레티노이드를 낮에도 사용 가능하게 해줄 수 있다는 장점이 있다. 따라서 본 발명에 따른 풀루란-레티노이드계 접합체는 화장품 또는 의약의 활성성분으로 효과적으로 사용될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

<실시예 1> 풀루란-레티노익산 접합체의 합성

대한민국 등록특허 제10-1003687호의 기술내용을 참조로 다음과 같이 풀루란-레티노익산 접합체를 합성하였다.

풀루란 (분자량 100,000 Da, Tokyo Chemical Industry) 1g을 10ml의 디메틸 설폭사이드(Dimethyl sulfoxide)에 넣고 교반하여 용해시키고, 레티노익산 3mmole과 N,N'-디싸이클로헥실카르보닐이미드 (DCC)와 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP)을 각각6 mmole의 농도로 디메틸 설폭사이드 (Dimethyl sulfoxide) 5ml에 6시간동안 용해시켜 반응을 시킨 뒤, 레티노익산이 용해된 5ml의 디메틸설폭사이드 (Dimethyl Sulfoxide) 용액을 한방울씩 용해된 풀루란에 적하하여 24시간 동안 반응을 수행한 후 증류수로 3일간 투석 (Dialylsis membrane with MWCO 10,000 Da)하여 미반응된 레티노익산을 제거한 후, 동결건조 하여 풀루란-레티노익산의 합성반응물 (풀루란-레티노익산 접합체)을 수득하였다.

<시험예 1> 콜라겐합성 효과 시험

본 발명에 따른 실시예 1에서 제조된 풀루란-레티노익산 접합체의 피부노화방지 효능을 확인하기 위해 콜라겐합성 효과를 시험하였다. 비교예 1에서 대조물질로서 노화방지용 의약 및 화장품 원료로 사용되는 레티닐 팔미테이트 및 비교예 2의 레티노인산을 사용하여 비교시험을 하였다.

구체적으로, 인체 유래 정상 섬유아세포(human normal fibroblast, 아주대 피부과)를 DMEM 배지가 들어 있는 24-웰 마이크로 플레이트에 접종시키고(2 ㅧ 10⁵ 세포/웰), 5% 농도의 CO₂ 배양기에서 37℃, 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, 각 웰에서 배지를 제거하고 실시예 1의 풀루란-레티노익산 접합체, 비교예 1의 레티닐 팔미테이트 및 비교예 2의 레티노인산을 각각 100 ㎍/mL(ppm) 처리한 다음 24시간 동안 다시 배양하였다. 24시간 후, 세포배지를 수집하여 샘플을 제조하였다.

콜라겐 합성능은 콜라겐 측정 키트 (Procollagen Type I C-peptide EIA kit MK101, 다카라, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (Type I C-peptide: PICP)의 양을 측정하였다. 자세한 실시방법은 (주)다카라의 키트 설명서에 따라 수행하였다. 콜라겐 합성량의 수치는 풀루란-레티노이드 접합체를 처리하지 않은 섬유아세포에 비해 증가된 수치를 백분율(%)로 환산한 값이다. 그 결과를 표 1에 나타내었다.

	콜라겐 합성 증가율(%)
비교예 1(레티닐 팔미테이트)	11
비교예 2(레티노인산)	13
실시예 1(풀루란-레티노익산 접합체)	47

상기 표 1에서 보듯이, 실시예 1의 풀루란-레티노익산 접합체은 비교예 1의 레티닐 팔미테이트 및 비교예 2의 레티노인산을에 비하여 현저히 우수한 콜라겐 합성 증가율을 나타내었다.

<시험예 2> 세포독성 측정

본 실험은 murine melanoma(B-16 F10) 세포를 10%의 FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배지로 6-well plate에 well당 1 X 10⁵ 개로 접종한 후, 5 % CO₂ 및 37 ℃ 하에서 세포가 well 바닥에 약 80 % 이상 부착될 때까지 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 풀루란-레티노익산 접합체를 10 uM , 50 uM , 100 uM 농도로 배지에 처리하고, 5% CO_2, 37 ℃ 하에서 2일간 배양하였다. 세포독성 효과를 MTT(3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide) 평가법으로 측정하였다. MTT는 담황색의 기질로서 생세포의 미토콘드리아 내의 호흡연쇄효소에 의해 개열하고 암청색의 포마잔을 생성한다. 죽은 세포에서는 반응이 일어나지 않으므로 이 포마잔의 생성량은 살아있는 세포수 측정에 이용된다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

시료	처리농도	세포생존율 (% of control)
forskolin	10 uM	100±2.3
풀루란-레티노익산 접합체	10 uM	102.4±1.8
	50 uM	101.20±3.2
	100 uM	99.56±2.7

상기 표 2에서 보듯이, 풀루란-레티노익산 접합체는 모든 농도 군에서 세포독성이 나타나지 않음을 확인할 수 있었다.

<시험예 3> 인체 피부에 대한 안전성 확인 실험

풀루란-레티노익산 접합체가 인체피부에 안전한지 확인하기 위하여, 피부 안전성 검증 실험을 수행하였다. 피부 안전성 검증을 위해 통상의 피부누적자극실험을 실시하였다.

3-1. 풀루란-레티노익산 접합체를 함유한 피부 외용제 제조

풀루란-레티노익산 접합체가 인체 피부에 안전한지 확인하기 위하여, 하기 표 3의 성분 및 함량으로 풀루란-레티노익산 접합체를 함유한 피부 외용제를 제조하였다. 구체적으로, 정제수, 글리세린, 부틸렌글리콜을 혼합하고 70℃에서 용해하였으며(물파트), 상기 세 성분과 트리메탄올아민을 제외한 나머지 성분을 70℃에서 용해하였다(오일파트). 상기 오일파트를 물파트에 첨가하고 호모믹서(일본 Tokushu Kika사)로 교반하여 1차 유화하였고, 여기에 트리메탄올아민을 최종 첨가하였다. 다음으로, 상기 혼합액에 생성된 기포를 제거한 후, 실온으로 냉각시켜 피부 외용제를 제조하였다.

성분	함량 (%)
	대조군	시험군 1	시험군 2	시험군 3
정제수	72	71.9	71.5	71
글리세린	8.0	8.0	8.0	8.0
부틸렌글리콜	4.0	4.0	4.0	4.0
풀루란-레티노익산 접합체	0	0.1	0.5	1.0
카프릴릭 카프리 트리글리세라이드	8.0	8.0	8.0	8.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0
세테아릴 글루쿠사이드	1.5	1.5	1.5	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4	0.4	0.4	0.4
세테아릴 알코올	1.0	1.0	1.0	1.0
트리메탄올아민	0.1	0.1	0.1	0.1
총중량	100	100	100	100

3-2. 피부누적 자극 실험

상기 3-1에서 제조한 피부 외용제를 건강한 30명의 성인을 대상으로 윗팔뚝 부위에 격일로 총 9회, 24시간 누적 첩포를 시행하여 풀루란-레티노익산 접합체가 피부에 자극을 주는지의 여부를 측정하였다.

첩포 방법은 핀 챔버(Finn chamber, Epitest Ltd, 핀란드)를 이용하였으며, 챔버에 상기 각 피부 외용제를 15 ㎕씩 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응의 정도를 하기 수학식 1을 이용하여 점수화 하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.

반응도에서 ±는 1점, +는 2점 및 ++는 4점의 점수를 부여하며, 평균반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정된다.

시험물질	반응이 나타난 피검자 수									평균 반응도
	1주			2주			3주
	1차	2차	3차	4차	5차	6차	7차	8차	9차
	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++
대조군	1/-/-	0/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	0.09
시험군 1	0/-/-	0/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	0.00
시험군 2	0/-/-	0/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	0.00
시험군 3	0/-/-	0/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	-/-/-	0.00

상기 표 4에서 보듯이, 시험군 1, 2 및 3 모두 ±, + 및 ++에 해당하는 사람의 수가 각각 0명, 0명 및 0명이고, 평균 반응도는 각각 0.00, 0.00, 0.00이었다. 그러므로 평균반응도가 3이하의 반응도를 나타내므로, 풀루란-레티노익산 접합체는 뚜렷한 누적자극 양상을 나타내지 않는 인체 피부에 안전한 물질로 판정되었다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

제제예 1 : 화장료 제제

1-1. 유연화장수

성분	중량%
풀루란-레티노익산 접합체	0.01
글리세린	3.0
부틸렌 글리콜	2.0
프로필렌 글리콜	2.0
카복시비닐폴리머	0.1
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	82.79
총계	100.0

1-2. 영양화장수

성분	중량%
풀루란-레티노익산 접합체	0.01
밀납	4.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	0.5
유동파라핀	5.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌 글리콜	3.0
프로필렌 글리콜	3.0
카복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	69.69
총계	100.0

1-3. 영양크림

성분	중량%
풀루란-레티노익산 접합체	0.01
밀납	10.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	0.5
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌 글리콜	3.0
프로필렌 글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	56.79
총계	100.0

1-4. 마사지 크림

성분	중량%
풀루란-레티노익산 접합체	0.01
밀납	10.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌 글리콜	3.0
프로필렌 글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	27.49
총계	100.0

1-5. 팩

성분	중량%
풀루란-레티노익산 접합체	0.01
폴리비닐알콜	13.0
소듐카복시메틸셀룰로스	0.2
알란토인	0.1
에탄올	5.0
노닐페닐에테르	0.3
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	81.39
총계	100.0

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 풀루란-레티노이드 접합체 또는 이의 화장학적으로 허용가능한 염을 0.0001 내지 5 중량%의 양으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
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