KR102036138B1 - 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물 - Google Patents

비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR102036138B1
KR102036138B1 KR1020170166736A KR20170166736A KR102036138B1 KR 102036138 B1 KR102036138 B1 KR 102036138B1 KR 1020170166736 A KR1020170166736 A KR 1020170166736A KR 20170166736 A KR20170166736 A KR 20170166736A KR 102036138 B1 KR102036138 B1 KR 102036138B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
extract
sesame
present
active ingredient
vascular
Prior art date
Application number
KR1020170166736A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20180065001A (ko
Inventor
정성근
김영호
이남혁
김영언
송경모
하수정
이장호
박준
Original Assignee
한국식품연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국식품연구원 filed Critical 한국식품연구원
Publication of KR20180065001A publication Critical patent/KR20180065001A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102036138B1 publication Critical patent/KR102036138B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2300/00—Processes
    • A23V2300/48—Ultrasonic treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material

Abstract

본 발명은 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물; 상기 유효성분을 포함하는 식품 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 비가열 참깨박 추출물은, 저온 또는 고온에서 가열된 참깨박 추출물 대비 두드러지게 우수한 NF-κB 활성 억제 효과 및 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과를 갖는바, 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 염증질환, 특히 혈관염증 질환을 예방/개선하거나 치료할 수 있는 조성물로서 의약품이나 기능성 건강식품과 같은 다양한 산업 분야에 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 참깨박은 식량작물로서 식용이 가능하므로 이로부터 유래한 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 장기간 사용에도 안전한 이점을 가진다.

Description

비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물{Anti-inflammatory composition comprising extract from non-heat treated sesame oil meal}
본 발명은 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물; 상기 유효성분을 포함하는 식품 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
염증반응은 조직(세포)의 손상이나 외부감염원(박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질)에 감염되었을 때 국소 혈관과 체액 중 각종 염증 매개인자 및 면역세포가 관련되어 효소 활성화, 염증매개물질 분비, 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등 일련의 복합적인 생리적 반응과 홍반, 부종 발열 통증 등 외적 증상이 나타난다. 정상인 경우 염증반응은 외부감염원을 제거하고 손상된 조직을 재생하여 생명체 기능회복작용을 하지만, 항원이 제거되지 않거나 내부물질이 원인이 되어 염증반응이 과도하거나 지속적으로 일어나면 오히려 질환의 주요 병리현상(과민성 질환, 만성 염증)이 되며, 수혈, 약물투여, 장기이식 등 치료과정에서도 장해요인이 된다.
염증반응에 관여하는 인자들의 작용을 기술하면 다음과 같다.
보체계(complement system)는 면역반응의 초기에 염증 활성화 및 증폭작용을 하는 체액성 주요인자이다. 보체의 활성화 과정에서 생성되는 활성단백질(아나필라톡신류; C3a, C4a, C5a)과 복합단백질(membrane attack complex, MAC)은 다양한 염증 질환(류마치스성 관절염[Sato, Y. et al, Ann. Rheum. Dis. 52, 795-800, 1993], 전신홍반성낭창[Takematsu, H. et al, Clin. Exp. Rheumatol. 10, 433-438, 1992], 성인호흡기질환 증후군[Langlois, P. F. et al, Heart Lung. 18, 71-84, 1989], 알쯔하이머성 치매[McGeer, D. L. et al, 8, 80-83 1995])과 관련이 있으며, 장기이식 초급성 거부반응의 직접적인 원인이 되고 있다[White, D. 14, 3-5, 1996].
ICAM-1은 내피세포(endothelial cells) 표면에서 발현되는 세포부착물질군의 대표적인 단백질이다. 정상적인 경우 매우 낮은 수준으로 발현되어 있으나 TNF- α , 인테페론- γ , 인터루킨-1 β 등 싸이토카인류 염증매개물질에 의하여 자극을 받으면 발현량이 급속히 증가되어 혈류 중 이동하는 단핵구나 임파구 등 염증세포를 부착하고 염증세포가 염증발생 조직으로 이동하는데 역할을 한다[Wegner C. D. et al, Science, 247(1941), 456-459, 1990; Dustin, M. L. et al, J. Immunol. 137(1) 245-254, 1986]. 따라서, ICAM-1의 발현은 염증세포가 염증발생 부위로 이동 및 집속하는 초기에 작용하여 염증반응의 증폭작용에 중요한 작용을 한다.
NO는 NO 합성효소(nitric oxide synthase, 이하 NOS)에 의해 L-알지닌(L-arginine)이 산화된 후 L-시트룰린(L-citrulline)과 함께 생성된다. NO는 혈관계에 작용하여 혈관확장, 혈소판 부착 및 응집, 신경전달, 소화기관 운동, 음경발기 등에 관여하는 매개물질이며, 염증세포 뿐만 아니라 비면역 세포에서도 생성되어 미생물 감염에 대한 방어작용을 한다. 한편, NO 생성에 관여하는 NOS 중 하나인 유도형-NOS(inducible-NOS, 이하 iNOS)는 칼슘이나 칼모듈린(calmodulin)에 비의존성으로서 지방다당질(lipopolysaccharide, 이하 LPS), 싸이토카인류(IFN- γ , TNF 등)의 자극으로 발현되는데[Dinerman, J. L. et al, Circ. Res. 73, 217-222, 1993], 이러한 자극에 의하여 싸이클로옥시게네이즈-2(cyclooxygenase-2, 이하 COX-2)도 함께 활성화되어 염증매개물질인 프로스타글란딘류(prostaglandins, 이하 PGs)가 생성되기 때문에 iNOS 발현과 COX-2의 발현은 매우 밀접한 관련이 있으며, 생성된 NO는 COX-2 발현에 영향을 주기도 한다[Robert C. et al, J. Immunol. 165, 1582-1587, 2000; Daniela S. et al, Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 90, 7240-7244, 1993]. 대식세포에서 NO의 생성은 선택적으로 iNOS의 발현에 의해서 유발되며, 그 결과 역시 다른 염증반응의 활성화를 유발하기 때문에 NO는 염증 질환의 중요한 인자라고 할 수 있다[Heirholzer, C. et al, J. Exp. Med. 187, 917-928, 1998; Nussler A. K. et al, J. Leukocyte Biol. 54, 171-178, 1993].
동맥경화는 지질대사와 관련된 유전적 요인과 식습관, 흡연, 운동부족 등 환경적 요인에 의하여 동맥이 경화되는 질환으로서, 이로 인하여 심장질환, 뇌혈관 질환 등의 순환계 질환의 원인이 된다. 동맥경화의 초기 발생에 관한 가설은 "손상에 대한 반응(responce-to-injury hypothesis)"으로서, 유전적 변이, 과산화물, 고혈압, 당뇨, 혈장 호모시스테인 농도 증가, 미생물 감염 등의 원인에 의하여 혈관 내피세포가 정상적인 항상성을 유지하지 못하는 기능부전상태가 되는 것이다. 내피세포가 기능부전상태로 되면 세포부착물질이 크게 발현되고 세포 투과성이 증가되어 혈중 면역세포, 혈소판, 지방질 등의 부착 및 조직으로의 투과성이 증가되며, 이들 면역세포들의 염증매개인자 및 성장인자 분비 등 염증반응 때문에 동맥경화성 병변이 발생 및 발달하게 된다는 것이다[Russel R., New England J. of Med. 340(2), 115-126, 1999]. 이때 혈중 저밀도 지단백질(low density lipoprotein, 이하 LDL)이 산화, 당결합, 집적화, 당단백 결합 등의 원인으로 변형-LDL(modified-LDL, 이하 MLDL)이 생성되고, 이들은 혈관 내피세포 및 평활근의 자극 및 손상을 유발한다[Steinberg D., J. Biol. Chem. 272, 20963-20966, 1997; Griendling K.K. et al., Circulation 96, 3264-3265, 1997; Bavab M. et al, Artheriosler. Thromb. Vasc. Biol. 16, 831-42, 1996]. 이로 인하여, 내피세포의 혈관세포부착물질-1(vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1) 발현 및 염증세포의 염증매개인자 방출이 촉진되면 LDL은 내피세포 아래에 유입 및 축적이 되고, 축적된 LDL 및 산화된 MLDL은 다시 대식세포, T 임파구 등 면역세포의 유입 및 활성화를 유발하는 과정을 되풀이하여 병변의 염증반응을 촉진하게 된다[Rajavashisth T.B. et al., Nature, 344, 254-257, 1990; Quinn M. T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 2995-2998, 1987]. 그 후 병변으로 유입된 대식세포나 임파구로부터 방출된 가수분해효소, 염증매개인자, 성장인자 등의 작용으로 병반은 괴사하게 되고, 괴사된 병소 부위로 단핵구의 유입, 평활근의 이동 및 분화, 섬유성 조직의 형성 등의 반복적인 과정을 통하여 병변 조직은 MLDL을 핵으로 한 괴사조직에 섬유질이 덮인 복잡한 구조의 섬유질 병변으로 발달하게 되며[Fuster V. et al. eds. Artherosclerosis and coronary artery disease. vol. 1, 539-555; 585-594; vol. 2, 492-510, Philadelphia, Lippincott-Raven, 1996], 발달된 병변 조직으로부터 혈전이 생성되고 동맥이 경화되어 혈류장애 등 순환기 질환이 나타나게 되는 것이다[Russel R., New England J. of Med. 340(2), 115-126, 1999; Wong, M.-L. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(15), 8681-8686, 2000].
따라서, 동맥경화는 혈중 콜레스테롤 및 LDL 등 지방질의 함량이 높을 경우 발생하게 되지만, 단순한 지방질 축적에 의해서만 발생되는 것이 아니라 동맥 내피세포 아래로 지방질의 유입 및 축적되는 과정과 그 후 일어나는 병변의 발달 및 세포괴사에 이르는 일련의 과정이 내피세포, 대식세포 및 임파구 등이 관여하는 전형적인 염증 반응인 것이다.
한편, 참깨박(sesame oil meal, 胡麻粕)은 기름을 짜고 남는 갈색의 부산물(물질)로서 호마박이라고 한다. 참깨박은 조단백질 함량이 40-50% 정도로 높으며, 단백질 외에도 칼슘과 인의 함량이 높고 모든 가축의 기호에 알맞으며 장기간의 저장도 가능하다.
이러한 참깨박은 다량의 조단백질을 함유함에 따라 동물의 사료로 많이 사용되고 있으나, 이와 관련된 특정 질환 치료용 의약품 또는 기능성식품 소재로서의 용도로는 연구가 미미한 실정이다.
이에 본 발명자는 천연물질 유래의 소재로서 생체에 부작용이 없으면서 항염활성이 우수한 물질을 찾고자 모색하던 중, 참깨박 추출물에 대한 NF-κB 억제 활성을 분석하였으며, 그 결과 저온 또는 고온에서 가열된 참깨박 추출물 대비 가열공정을 거치지 않은 생참깨박(비가열참개박) 추출물이 염증반응 유발인자인 TNF-α(tumor necrosis factor α)에 의해 증가한 NF-κB 활성을 두드러지게 억제하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
한국등록특허 제10-1484862호
따라서 본 발명의 목적은 인체에 안전하면서 우수한 혈관 염증 억제 효과를 갖는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 인체에 안전하면서 우수한 혈관 염증 억제 효과를 갖는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 인체에 안전하면서 우수한 혈관 염증 억제 효과를 갖는 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 인체에 안전하면서 우수한 혈관 염증 억제 효과를 갖는 비가열 참깨박 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 방법으로 제조된 비가열 참깨박 추출물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서,
본 발명은 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 초음파 추출물은 비가열 참깨박에 20~60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz의 초음파를 0.5~6시간 동안 처리하는 공정을 통해 추출될 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 NF-κB 활성 억제 효과 및 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과를 가질 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 혈관 염증질환은 죽상경화(동맥경화), 허혈성 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 고혈압, 뇌졸중, 빈혈, 편두통, 부정맥, 중풍, 혈관종, 혈관섬유종, 고지혈증, 혈관기형 및 말초혈관질환으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관 염증질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 초음파 추출물은 비가열 참깨박에 20~60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz의 초음파를 0.5~6시간 동안 처리하는 공정을 통해 추출될 수 있다.
또한, 본 발명은 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 a) 비가열 참깨박에 20~60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz 초음파를 0.5~6시간 처리하는 단계; 및 b) 상기 a) 단계를 거친 용액을 원심분리하고, 분리한 상층액을 여과하는 단계를 포함하는, 혈관 염증 억제 효과를 갖는 비가열 참깨박 추출물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 따라 제조되는 비가열 참깨박 추출물을 제공한다.
본 발명에 따른 비가열 참깨박 추출물은, 저온 또는 고온에서 가열된 참깨박 추출물 대비 두드러지게 우수한 NF-κB 활성 억제 효과 및 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과를 갖는바, 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 염증질환, 특히 혈관염증 질환을 예방/개선하거나 치료할 수 있는 조성물로서 의약품이나 기능성 건강식품과 같은 다양한 산업 분야에 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 참깨박은 식량작물로서 식용이 가능하므로 이로부터 유래한 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 장기간 사용에도 안전한 이점을 가진다.
도 1은 세포에 각 시료별 전처리에 따른 TNF-α의 처리에 의해 증가하는 NF-κB의 활성 억제 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 추출시간별 비가열 참깨박 초음파 추출물의 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 3은 용매농도별 비가열 참깨박 초음파 추출물의 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명에서 사용한 용어를 설명한다.
본 발명에서 "약제학적으로 허용가능한"이란 생물체를 상당히 자극하지 않고 투여활성 물질의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환(예를 들어, 혈관 염증질환)의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환(예를 들어, 혈관 염증질환)의 증상을 호전 또는 이롭게 변경시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다. 이때, 개체는 본 발명의 조성물을 투여하여 특정 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.
본 발명에서 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물, 특히, 혈관 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서의 "비가열 참깨박"이라 함은 추출공정 전 가열공정을 거치지 않은 참깨로부터 압착공정을 거친 후 참기름을 제외하고 수득된 부산물이다.
본 발명에서의 "비가열 참깨박 추출물"이라 함은 추출공정 전 가열공정을 거치지 않은 참깨로부터 압착공정을 거친 후 참기름을 제외하고 수득된 부산물인 생참깨박을 이용하여 추출한 추출물을 의미한다.
본 발명에서 "저온 참깨박"이라 함은 추출공정 전 70℃ 이하의 저온에서 가열처리한 참깨로부터 압착공정을 거친 후 참기름을 제외하고 수득된 부산물이다.
본 발명에서 "고온 참깨박"이라 함은 추출공정 전 120℃ 이상의 고온에서 가열처리한 참깨로부터 압착공정을 거친 후 참기름을 제외하고 수득된 부산물이다.
본 발명에서의 "염증질환"은 전신성 홍반성 루푸스, 경피증, 궤양성 대장염, 크론병, 아토피성 피부염, 건선, 아나필랙시스, 피부염, 당뇨병성 망막증, 망막염, 황반 변성, 포도막염, 결막염, 뇌졸증, 관상동맥질환, 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 심근경색, 불안정 협심증, 맥관염, 혈관협착, 가와사키병, 거대세포 동맥염, 관절염, 류마티스성 관절염, 강직성 척추염, 골관절염, 골다공증, 알레르기, 당뇨, 당뇨성 신장병, 신염, 신장염, 쇼그렌 증후군, 자가 면역 췌장염, 치주질환, 천식, 이식편 대 숙주 질환, 만성 골반 염증 질환, 자궁내막염, 비염, 종양전이, 이식 거부 및 만성 전립선염 등을 예시할 수 있다.
본 발명에서의 "혈관 염증질환"은 대표적인 염증인자인 NF-κB의 활성에 기인하는 질환으로써, 예를 들어, 죽상경화(동맥경화), 허혈성 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 고혈압, 뇌졸중, 빈혈, 편두통, 부정맥, 중풍, 혈관종, 혈관섬유종, 고지혈증, 혈관기형 및 말초혈관질환 등을 포함한다.
본 발명의 비가열 참깨박 추출물은 초음파 추출물일 수 있으며, 비가열 참깨박에 20~60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz의 초음파를 0.5~6시간 동안 처리하는 공정을 통해 추출될 수 있다.
본 발명의 비가열 참깨박 추출물은 실험을 통해 NF-κB 활성 억제 효과 및 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과를 확인하였다.
따라서 본 발명의 비가열 참깨박 추출물은 염증질환, 예를 들어, 전신성 홍반성 루푸스, 경피증, 궤양성 대장염, 크론병, 아토피성 피부염, 건선, 아나필랙시스, 피부염, 당뇨병성 망막증, 망막염, 황반 변성, 포도막염, 결막염, 뇌졸증, 관상동맥질환, 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 심근경색, 불안정 협심증, 맥관염, 혈관협착, 가와사키병, 거대세포 동맥염, 관절염, 류마티스성 관절염, 강직성 척추염, 골관절염, 골다공증, 알레르기, 당뇨, 당뇨성 신장병, 신염, 신장염, 쇼그렌 증후군, 자가 면역 췌장염, 치주질환, 천식, 이식편 대 숙주 질환, 만성 골반 염증 질환, 자궁내막염, 비염, 종양전이, 이식 거부 및 만성 전립선염 등의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있으며, 특히, 죽상경화(동맥경화), 허혈성 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 고혈압, 뇌졸중, 빈혈, 편두통, 부정맥, 중풍, 혈관종, 혈관섬유종, 고지혈증, 혈관기형 및 말초혈관질환 등과 같은 혈관 염증질환 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 상기 유효성분(비가열 참깨박 추출물) 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분(비가열 참깨박 추출물) 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약제학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 비가열 참깨박 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 99중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상술한 비가열 참깨박 추출물 이외에, 비가열 참깨박 추출물과 반응하여 부작용을 일으키지 않는 한도에서 종래부터 사용되어오던 항염증제를 혼합하여 사용할 수도 있다.
또한, 본 발명은 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물, 특히, 혈관 염증질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 혈관 염증질환은 죽상경화(동맥경화), 허혈성 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 고혈압, 뇌졸중, 빈혈, 편두통, 부정맥, 중풍, 혈관종, 혈관섬유종, 고지혈증, 혈관기형 및 말초혈관질환 등을 예시할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 비가열 참깨박 추출물은 초음파 추출물일 수 있으며, 본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 비가열 참깨박에 20~60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz의 초음파를 0.5~6시간 동안 처리하는 공정을 통해 추출될 수 있다.
본 발명에서 "식품 조성물"이라는 용어는, 그를 섭취하는 대상체에 제공되는 영양소에 관계없이, 그 생물의 하나 이상의 기능에 유리하게 작용하여 보다 나은 건강 상태를 제공하는 식품을 의미한다. 결과적으로, 상기 식품 조성물은 질병 또는 질병-유발 인자의 예방, 개선 또는 치료를 위해 사용될 수 있다.
따라서 본 발명의 "식품 조성물"이라는 용어는 기능성 식품 또는 특정 영양 목적을 위한 식품 또는 의약 식품의 동의어로서 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분(비가열 참깨박 추출물) 이외에 통상적인 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 이 외에도 바인더, 분해제, 코팅제, 윤활제 등과 같은 제약학적으로 통상적으로 사용되는 다양한 첨가제와 제형화되어 조제될 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 비가열 참깨박 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 99.9중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분인 비가열 참깨박 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 상기 기재한 유효성분(비가열 참깨박 추출물) 이외에 추가로 식품학적으로 허용 가능하거나 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 식품 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 식품 조성물의 제제 형태는 정제, 캡슐제, 분말, 과립, 액상, 환, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 또는 점적제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
상기와 같은 방식으로 제제화된 본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가될 수 있다.
본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 유효성분(비가열 참깨박 추출물) 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 유효성분인 비가열 참깨박 추출물은 대표적인 염증인자인 NF-κB의 활성을 억제하는 효과 및 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착을 억제시키는 효과가 우수하며, 이와 더불어, 식용 가능한 식량작물로부터 유래한 추출물에 해당하는바 화학약품과 같은 부작용이 거의 없이 혈관 염증 개선을 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명은 또한, 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품, 특히 혈관 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품은 혈관 염증질환의 예방 또는 개선을 목적으로, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
본 발명에서 ‘건강기능식품’이라 함은 건강기능식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 ‘식품 첨가물 공전’에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.
예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분(비가열 참깨박 추출물)을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.
캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분(비가열 참깨박 추출물)을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 상기 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분(비가열 참깨박 추출물)과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.
과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분(비가열 참깨박 추출물)과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등일 수 있다.
또한, 본 발명은 a) 비가열 참깨박에 20~60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz 초음파를 0.5~6시간 처리하는 단계; 및 b) 상기 a) 단계를 거친 용액을 원심분리하고, 분리한 상층액을 여과하는 단계를 포함하는, 항염증 효과(특히, 혈관 염증 억제 효과)를 갖는 비가열 참깨박 추출물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 상기 b) 단계는 상기 a) 단계를 거친 용액을 원심분리하고, 분리한 상층액을 여과하는 단계로서, 구체적으로 상기 a) 단계를 거친 용액을 0~10℃에서 3000~5000rpm의 속도로 5~30분간 원심분리하고, 분리한 상층액을 공극이 0.2~10㎛인 멤브레인으로 여과하는 단계일 수 있다.
본 발명의 비가열 참깨박 추출물의 제조방법은 상기 b) 단계 이후에 추가적으로 c) 여과된 추출물을 분말화하는 단계를 더 거칠 수 있다.
즉, 본 발명의 상기 b) 단계를 통해 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다.
따라서 본 발명에 있어서, '비가열 참깨박 추출물'은 상기 a), b) 및 c) 단계를 거쳐 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 비가열 참깨박 추출물을 제공한다.
본 발명의 비가열 참깨박 추출물은 우수한 NF-κB 활성 억제 및 혈관내피세포에서 TNF-α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과를 갖는다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1>
초음파 추출물 제조
<1-1> 시료 준비
본 발명의 하기 실험에서 사용한 비가열 참깨박, 저온 참깨박, 저온 들깨박은 고창군의 참깨를 수매(고창군에서 2015년 10월28일 참깨를 100kg 수매하여 이 중 일부를 사용)하여 세척 건조하여 각각의 조건으로 착즙한 후 찌꺼기로 남겨진 참깨박을 시료로 사용하였고 A사(CJ), B사(오뚜기)의 참깨박은 참기름 제조 후 찌꺼기로 남겨진 참깨박을 수득하여 시료로 사용하였다. 이때, 비가열 참깨박의 경우 수매한 참깨를 2회 세척하여 흙, 줄기 등 불순물을 제거하고 2~3일 자연건조한 뒤 착유하였다. 착유조건은 60℃ ~ 80℃로 예열한 뒤 진행하였으며 착유기계는 엑스펠러를 사용하였다.
시료분류
실험군 시료명 가열처리 유무 가열온도
실험군 1 비가열 참깨박 X -
실험군 2 저온 참깨박 O 70℃ 이하
실험군 3 저온 들깨박 O 70℃ 이하
실험군 4 A사 고온 참깨박 O 120℃ 이상
실험군 5 A사 고온 들깨박 O 120℃ 이상
실험군 6 A사 고온 분쇄참깨박 O 120℃ 이상
실험군 7 B사 고온 참깨박 O 120℃ 이상
<1-2> 각 시료별 초음파 추출물 제조
상기 실시예 <1-1>에서 준비된 각 시료별 초음파 추출물을 제조하였다.
자세하게는 상기 각각의 시료 5.0 g에 0.1N-HCl (pH2)을 가한 뒤 초음파기(VCX750, 20kHz, Sonic and Material Inc)를 이용하여 하기 표 2의 조건으로 3 시간 동안 추출한 뒤, 추출된 추출액을 1N NaOH로 중화(pH 7.0)시켰다. 투석막(Spectrapor membrane tubing,M.W. cutoff 14,000-16,000, Cellu sep. Membrane Filtration Products, Inc.)을 이용하여 24 시간 동안 증류수로 투석함으로써 무기 이온 및 저분자 물질을 제거하였다. 그 후 투석액을 동결 건조하여 각 시료별 초음파 추출물을 제조하였다.
초음파 처리 조건
초음파 조건
주파수 25 kHz
진폭 80%
펄스 on/off 20초/20초
온도 실온
< 실시예 2>
참깨박 초음파 추출물 제조 및 초음파 추출 조건의 최적화
본 발명에 사용되는 초음파추출법은 초음파추출기 MIX SONIC (MIRAE ULTRASONIC TECH. CO, Korea)를 사용하여 28kHz, 진폭 80% 조건에서 초음파를 발생시켜 추출하였으며, 온도를 일정하게 유지하기 위하여 순환식 항온 수조(Circulator Water Bath)를 연결하여 사용하였다.
본 실험에서 사용한 비가열 참깨박은 상기 <실시예 1>에서 사용한 바가열 참깨박과 동일한 시료를 사용하였다. 시료는 분쇄기(Wonder Blender, OSAKA CHEMICAL Co., Osaka, Japan)를 이용하여 분쇄한 후 분말 형태로 수득하였다. 비가열 참깨박을 0, 20, 40 및 60 w/v%의 에탄올 수용액에 각각 침지시키고, 초음파 추출법을 이용하여 20, 40, 50 및 60℃에서 추출시간을 각각 0.5, 1, 2, 4 및 6시간으로 하여 비가열 참깨박의 유효성분을 추출하였다. 추출물을 4℃에서 원심분리(4000rpm, 20분)하고, 분리한 상층액을 공극이 0.22㎛인 멤브레인으로 여과하고 IKA RV 10 Rotary Evaporator (IKA® Works, Guangzhou, China)를 이용하여 100 mL까지 농축시킨 다음, 완전히 동결건조하여 최종적으로 본 발명의 '비가열 참깨박 추출물'을 얻었다.
비가열 참깨박 추출물의 수율(%)은 하기 수식을 이용하여 계산하였다. 하기 수식에서 ‘Weight of crude sample’은 초음파 추출이 끝난 후 동결건조한 시료의 무게를 의미하며, ‘Weight of sample’은 추출 전 시료의 무게를 의미한다.
Figure 112017121692586-pat00001
그 결과 하기 표에서 나타낸 바와 같이, 시간별 추출 수율은 6시간에서 비가열 참깨박은 24%로 가장 높았고, 용매 농도별 추출 수율은 1시간에서 비가열 참깨박은 60% EtOH에서 22.5%로 높고, 6시간에서 비가열 참깨박은 0% EtOH에서 33.3%로 높게 나왔다. 마지막으로 온도별로 추출을 하였을 때 1시간, 60℃ 초음파 추출이 비가열 참깨박은 16.9%로 가장 높게 나타났다.
추출시간별 비가열 참깨박 추출물의 추출 수율(%)
시간 수율(%)
0.5 14.8
1 17.1
2 20.5
4 22.5
6 24.0
(1:50 ratio, 20% EtOH, Temp 25 ℃)
추출시간 및 에탄올 농도별 비가열 참깨박 추출물의 추출 수율(%)
추출시간 에탄올 농도(%) 수율(%) 추출시간 에탄올 농도(%) 수율(%)
1시간 0 14.8 6시간 0 33.3
20 17.1 20 17.9
40 20.5 40 9.5
60 22.5 60 11.9
(1:50 ratio, 1 hr or 6 hr, Temp 25 ℃)
추출시간 및 온도별 비가열 참깨박 추출물의 추출 수율(%)
추출시간 온도(℃) 수율(%) 추출시간 온도(℃) 수율(%)
1시간 20 13.7 6시간 20 13.8
40 15.5 40 14.8
50 16.1 50 16.2
60 16.9 60 16.1
(1:50 ratio, 60% EtOH, 1 hr or 6 hr)
< 비교예 1>
대나무( Phyllostachys pubescens ) 잎 추출물 제조
가로×세로 각각 1cm로 자른, 건조된 대나무 잎 1kg을 70% 에탄올 수용액 10L를 용매로 이용하여 80℃에서 7시간 동안 3회 반복 가열하여 추출하였다. 추출물을 감압농축 및 동결건조 과정을 거쳐 최종적인 ‘대나무 잎 추출물’을 제조하였으며, 하기 실험의 양성대조군 시료로 사용하였다.
참고로, 상기 대나무 잎 추출물은 A standardized bamboo leaf extract inhibits monocyte adhesion to endothelial cells by modulating vascular cell adhesion protein-1 (Nutr Res Pract 2013) 논문을 참고하여 추출하였다.
< 실험예 1>
<1-1> 재료 준비
혈관내피세포(human umbilical vein endothelial cells, 이하 간략하게 ‘HUVECs’라 약칭함) 및 단핵구 THP-1 세포는 각각 CEFO (Seoul, Korea) 및 Korean Cell Line Bank (Seoul, Korea)에서 구입하였다. 화학시약은 SigmaAldrich (St Louis, MO, USA)에서 구입하였다. HUVEC 세포 배양배지는 CEFO (Jongno-gu, Seoul, Korea)로부터 수득하였다. RPMI 1640, 페니실린스트렙토마이신 및 FBS(fetal bovine serum)는 Thermo Scientific HyClone (Logan, UT, USA)로부터 구입하였다. 재조합 TNF-α는 BD PharMingen (San Diego, California, USA)로부터 제공받았다. VCAM-1, F4/80, α-Tubulin 및 β-actin에 대한 항체는 Santa Cruz Biotech (Santa Cruz, CA, USA)로부터 구입하였다. VCAM-1, IKKα, IKKβ, phospho-IKKα/β (Ser176/180), NF-κB p65, phospho-NF-κB p65 (Ser536), IκBα, phospho-IκB-α (Ser32), NF-κB1 p105/p50에 대한 항체는 Cell Signaling Biotechnology (Beverly, MA, USA)에서 구입하였다. 마우스 항-라민(lamin) 항체는 EMD Millipore Corporation (Temecula, CA, USA)에서 구입하였다. Alexa FluorTM488 goat 항-랫트 IgG (H+L) 2차 항체는 Thermo Fisher Scientific Inc. (Eugene, Oregon, USA)에서 구입하였다.
<1-2> 세포배양
HUVEC 세포는 HUVEC 성장 배지에서 배양하고 유지하면서 실험에 사용하였다. THP-1 세포는 10% FBS 및 0.05mM 농도의 2- 메르캅토에탄올이 보충된 RPMI-1640 배지에서 성장시켰다.
<1-3> NF - κB 전사활성 측정
본 실험에서는 하기 표 1에서 나타내는 각각의 시료별 초음파 추출물의 동맥경화 예방(또는 치료) 효과를 살펴보기 위하여, 대표적인 염증인자인 NF-κB의 전사활성에 미치는 영향을 조사하였다.
참고로, 동맥경화의 발생 단계 중 초기 인자는 혈중 단구체 세포(Monocyte)가 혈관내세포(Vacular endothelial cell)와 결합하여 혈관내(Intima)로 이동하는 것이다. 이후, 다양한 자극에 의해 대식세포(Macrophage)로 분화한 후 지방을 흡수하게 거품 세포(foam cells)를 형성하게 되고 혈관내에 축적되어 지방띠(Fatty streak)을 형성하게 되면서 동맥경화가 악화되게 된다. 따라서, 동맥경화의 초기단계를 조절하기 위해 염증성 사이토카인인 TNF-α에 의해 NF-κB가 활성화되는 것을 방지하여 동맥경화를 예방할 수 있다.
전사활성을 측정하기 위하여 NF-κB의 프로모터가 삽입된 DNA를 구축하여 pGL4 벡터(VCAM-1 프로모터 중 CREB와 NF-κB를 모두 포함하는 영역을 클로닝함)를 이용 293T 세포(서울대학교 식품생명공학과에서 분양 받음)에 트랜스펙션시킨 후 안정적으로 이 유전자를 발현하는 세포주를 구축하였다. 즉, NF-κB 유전자는 VCAM-1 promoter binding elements를 증폭하여 pGL4 luc vector로 sub-cloning하여 이동시켰다. 이후 293T 세포에 트랜스펙션하여 NF-κB luciferase reporter가 안정적으로 발현되는 세포주를 구축하였다.
이 세포주를 이용하여 NF-κB의 전사활성을 루시퍼라아제(luciferase) 활성을 통해 간접적으로 측정하였다. 실험방법은 먼저 96 웰 플레이트에 1.6×104 cell/well의 세포를 분주하고 24시간 배양 후에 무혈청배지(serum free media)로 교환 하고 다시 24시간 배양하였다. 100 μg/mL 농도의 시료를 1시간 전처리 한 후 10 ng/mL TNF-α를 가하고 4시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 lysis buffer (0.1 M potassium phosphate buffer at pH 7.8, 0.1% Triton X-100, 1 mM DTT, 2 mM EDTA)를 넣고 1시간 용해한 후 용해물을 50 μL를 취하여 substrate 50 μL와 섞고 발광측정기(SpectraMAX L, Canada)로 RLU(Relative Light Units)값을 측정하였다. 실험결과는 TNF-α 처리군에 대한 상대값으로 나타내었다.
그 결과 도 1에서 나타낸 바와 같이, 비가열 참깨박 초음파 추출물에서 TNF-α에 의해 증가한 NF-κB 활성을 두드러지게 억제하는 것을 확인하였다. 특히, 고온가열 참깨박 초음파 추출물과 비교하여, 본 발명의 비가열 참깨박 추출물이 TNF-α에 의해 증가한 NF-κB의 저해활성이 훨씬 높게 나타나는 것을 확인할 수 있다.
<1-4> 비가열 참깨박 초음파 추출물의 혈관내피세포에서 TNF -α 유도된 단핵구의 부착 억제 효과
단핵세포의 혈관내피세포에 부착은 동맥경화가 발생하는 중요한 요소이다. 이에, 본 실험에서는 상기 실시예 2을 통해 제조된 비가열 참깨박 추출물들이 TNF-α에 의해 유도된 THP-1(인간 단핵구) 세포가 혈관내피세포인 HUVEC 부착에 어떠한 영향을 미치는지를 살펴보기 위해 부착 에세이를 실시하였다. 한편, 대나무잎 추출물은 혈중 콜레스테롤 개선, 혈중 중성지방 개선, 항산화의 기능성을 가진 개별인정 원료이며, Choi(Nutr Res Pract. 2013)의 논문에서는 HUVEC과 THP-1 세포의 부착을 억제하는 것을 확인하였다. 따라서 논문을 참고하여 추출한 대나무잎 추출물을 양성 대조군으로 사용하였다.
단핵구-혈관내피세포 부착 분석을 위하여, THP-1 세포(5×105 cells/mL)는 2 μM Calcein-AM (Sigma)와 함께 37℃ PBS에서 15분 동안 배양시켰다. HUVEC 세포 (3×105 cells/mL)는 96-웰 플레이트에 분주하여 24 시간 동안 배양하여 한층에 가득차도록에 성장시키고 37℃에서 1 시간 동안 다양한 농도의 샘플로 활성화시킨 후, 분석 5 시간 전에 10 ng/mL 농도의 TNF-α로 자극하였다. 이후, 형광 표지된 THP-1 세포를 활성화된 HUVEC에 첨가하고 추가로 1 시간 동안 배양하였다. PBS로 3 번 세척한 후, 형광 플레이트 판독기 (SpectraMax M2e, Molecular Devices Corporation, USA)를 사용하여 485 및 538 nm의 여기 및 방출 파장에서 형광 세기로 단핵구(THP-1) 부착 정도를 측정하였다. 부착된 THP-1 세포를 형광 현미경(Nikon Eclipse Ti-S, Tokyo, Japan)으로 확인하고 이미지를 Metamorph (Molecular Devices, Danville, PA) 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
그 결과 도 2에서 나타낸 바와 같이, 비가열 참깨박 초음파 추출물 추출 시간에 의존적으로 단핵구의 혈관내피세포 부착 정도가 추출 6시간 이후 65%로 가장 많이 감소되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 도 3에서 나타낸 바와 같이, 비가열 참깨박 초음파 추출물은 추출 용매의 농도 증가에 의존적으로 단핵구의 혈관내피세포 부착 정도가 감소하여 60% 에탄올을 사용하여 1시간 추출했을 때 42.2%, 6시간 추출했을 때 58.3%까지 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 한편, 양성 대조군으로 사용한 대나무 추출물을 100 μg/mL 농도로 처리하였을 때 41.9%로 감소시켜 비가열 참깨박 초음파 추출물이 단핵구의 혈관내피세포 부착 정도를 더 많이 감소시키고 NF-κB 억제제로 알려진 BAY(CAS 19542-67-7)을 1 μM 처리하였을 때, 본 발명의 비가열 참깨박 추출물과 비슷한 감소 효과를 나타내었다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (10)

  1. 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하며,
    상기 추출물은 비가열 참깨박에 60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz의 초음파를 6시간 동안 처리하여 수득한 것을 특징으로 하는, 혈관 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 혈관 염증질환은 죽상경화(동맥경화), 허혈성 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 고혈압, 뇌졸중, 빈혈, 편두통, 부정맥, 중풍, 혈관종, 혈관섬유종, 고지혈증, 혈관기형 및 말초혈관질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하며,
    상기 추출물은 비가열 참깨박에 60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz의 초음파를 6시간 동안 처리하여 수득한 것을 특징으로 하는, 혈관 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
  9. a) 비가열 참깨박에 60w/v% 에탄올을 첨가한 후 28kHz 초음파를 6시간 처리하는 단계; 및
    b) 상기 a) 단계를 거친 용액을 원심분리하고, 분리한 상층액을 여과하는 단계를 포함하는, 혈관 염증 억제 효과를 갖는 비가열 참깨박 추출물의 제조방법.
  10. 삭제
KR1020170166736A 2016-12-06 2017-12-06 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물 KR102036138B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160164927 2016-12-06
KR20160164927 2016-12-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20180065001A KR20180065001A (ko) 2018-06-15
KR102036138B1 true KR102036138B1 (ko) 2019-10-24

Family

ID=62628659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020170166736A KR102036138B1 (ko) 2016-12-06 2017-12-06 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102036138B1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102136649B1 (ko) * 2018-11-07 2020-07-22 계명대학교 산학협력단 탈지 들깨분말 열수 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역 증진용 조성물
KR102157755B1 (ko) 2018-12-28 2020-09-18 경희대학교 산학협력단 운카리나 스텔루리페라 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 또는 항아토피 조성물
KR20220000235A (ko) * 2020-06-25 2022-01-03 주식회사 쿠엔즈버킷 참깨박 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 대장염 예방 또는 개선용 식품 조성물
KR102490105B1 (ko) * 2020-09-21 2023-01-17 세종대학교산학협력단 장미 꽃잎 추출물을 포함한 피부 미백용 화장료 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004048497A1 (ja) 2002-11-22 2004-06-10 Nippon Suisan Kaisha, Ltd. 高度不飽和脂肪酸、その塩、またはそのエステルを含有する外用組成物
JP2010252634A (ja) 2009-04-21 2010-11-11 Sawa Sangyo Kk 機能性分解ゴマの製造方法
CN102356872B (zh) 2011-09-23 2013-02-27 合肥工业大学 一种降血脂组合食物

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2183637A1 (en) * 1994-02-25 1995-08-31 R. Armour Forse Anti-inflammatory and infection protective effects of sesamin-based lignans
JPH1180001A (ja) * 1997-09-08 1999-03-23 Toshihiko Osawa 高脂血症予防剤
CN1236568A (zh) * 1999-05-24 1999-12-01 李仲泉 用榨植物油下脚料制类豆腐的方法
KR100823611B1 (ko) * 2005-09-07 2008-04-21 인하대학교 산학협력단 초음파를 이용한 콩에서 이소플라본의 추출 방법 및 그추출용 초음파 반응기
KR101124621B1 (ko) * 2009-12-02 2012-03-19 한국생명공학연구원 세사민을 유효성분으로 함유하는 혈관신생 촉진제
KR20150047987A (ko) * 2013-10-25 2015-05-06 씨제이제일제당 (주) 참깨박 추출물의 용도
KR101484862B1 (ko) 2013-12-13 2015-01-22 (주)아모레퍼시픽 인삼 열매 추출물을 함유하는 혈행촉진, 혈관신생촉진, 및 허혈성 심질환 치료용 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004048497A1 (ja) 2002-11-22 2004-06-10 Nippon Suisan Kaisha, Ltd. 高度不飽和脂肪酸、その塩、またはそのエステルを含有する外用組成物
JP2010252634A (ja) 2009-04-21 2010-11-11 Sawa Sangyo Kk 機能性分解ゴマの製造方法
CN102356872B (zh) 2011-09-23 2013-02-27 合肥工业大学 一种降血脂组合食物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Hwa Jeong Lee et al, ‘Effects of Lignan Compound of Sesame on LPS-induced Nitric Oxide Generation in Murine Macrophage RAW 264.7 Cells’, J. Soc. Cosmet. Scientists Korea, 2006, Vol.32, pp.173-180*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20180065001A (ko) 2018-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102036138B1 (ko) 비가열 참깨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 조성물
JP2019172692A5 (ko)
KR101910156B1 (ko) 흑무 추출물을 이용한 항염증용 조성물
KR20180117812A (ko) 감태 추출물과 괭생이모자반 추출물을 이용한 항염증용 조성물
KR101715274B1 (ko) 감국 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR101756943B1 (ko) 모새나무(Vaccinium bracteatum Thunb.) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 신경염증 또는 퇴행성 뇌신경 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101686420B1 (ko) 장수풍뎅이 추출물을 유효성분으로 포함하는 류마티스 관절염 예방 또는 치료용 조성물
KR101735784B1 (ko) 트리고노스테몬 레이디오이데스 추출물을 이용한 항염증용 조성물
KR100447948B1 (ko) 항염증 활성 및 항동맥경화 활성을 나타내는 배초향 추출물
KR101982657B1 (ko) 테트라세라 로우레이리 추출물을 이용한 항염증용 조성물
KR101316044B1 (ko) 오디 유래의 감염성 비만 억제용 약학 조성물 및 건강기능식품
KR102119421B1 (ko) 개오동나무 추출물을 이용한 항알러지용 조성물
KR20190036974A (ko) 며느리배꼽 추출물을 이용한 항염증 및 항알러지 조성물
KR101971438B1 (ko) 비수리 초음파 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈관 염증질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
KR20140125137A (ko) 양지꽃속 식물 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물
KR102076176B1 (ko) 진세노사이드 화합물 k와 금은화 추출물을 이용한 항염증용 조성물
KR101925724B1 (ko) 큰고랭이 추출물을 이용한 항염증 조성물
KR20220076984A (ko) 개여뀌 추출물을 이용한 항알러지용 조성물
KR102352936B1 (ko) 톱니모자반 추출물을 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20070109261A (ko) 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계질환의 예방 및 치료제
KR100758263B1 (ko) 신규한 아세틸도파민계 화합물, 및 선퇴 추출물 또는이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물을 유효성분으로함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR20180050970A (ko) 테트라세라 로우레이리 추출물을 이용한 항염증용 조성물
KR102369909B1 (ko) 범꼬리 추출물을 이용한 항알러지용 조성물
KR102114674B1 (ko) 네튬 마크로스타키움 추출물을 이용한 항알러지용 조성물
KR102226439B1 (ko) 코르너스 오블롱가 추출물을 이용한 항염증용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right