KR101932408B1

KR101932408B1 - Cd80 및 cd86에 특이적으로 결합하는 항체

Info

Publication number: KR101932408B1
Application number: KR1020180077947A
Authority: KR
Inventors: 이종서; 김규태; 고봉국; 이종호; 이현종
Original assignee: 앱클론(주)
Priority date: 2018-07-04
Filing date: 2018-07-04
Publication date: 2018-12-31
Also published as: KR20180081029A

Abstract

본 발명은 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료에 이용되는 신규한 CD80 및 CD86에 대한 항체에 관한 것이다. 본 발명의 항체는 세포에서 과발현되는 CD80 및/또는 CD86에 특이적으로 결합하는 항체이다. 본 발명의 항체는 종래의 CD80 및/또는 CD86 타겟 항체들의 CDR 서열과 비교하여 상동성이 매우 낮아, 그 서열의 독특함이 있다. 본 발명의 항체는 단독처리 시 기존 류마티스성 관절염 치료에 사용되고 있는 아바타셉트와 동등한 T 세포 활성 저해 능력을 갖고, CD80 타겟 항체와 CD86 타겟 항체를 병용 처리 시 아바타셉트에 비하여 현저하게 우수한 T 세포 활성 저해 능력을 갖는바, 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료에 매우 유효하다.

Description

CD80 및 CD86에 특이적으로 결합하는 항체{Antibodies Capable of Binding Specifically to CD80 and CD86}

본 발명은 인간 CD80 및 CD86(Cluster of Differentiation 80 및 86) 관련 질환, 특히 류마티스성 관절염 예방 또는 치료에 이용되는 CD80 및 CD86에 대한 항체에 관한 것이다.

류마티스성 관절염은 인체 내 관절의 활막(synovial membrane)에 발생하는 만성 염증으로, 즉 6 주 이상 염증이 지속되는 것을 말한다. 류마티스성 관절염의 발병 원인으로 T 세포 기능의 중요성은 널리 밝혀져 있다. 이를 뒷받침하는 연구에는 MHC class II의 HLA-DR 유전자와 류마티스성 관절염 증상과의 연관성(Winchester. AdvImmunol. 32:1221-1225(1994)), 류마티스성 관절염 질환 동물의 CD4+ T 세포를 정상 동물모델에 이식하였을 때 염증 반응의 증가(Banerjee et al. Cell Immunol. 144:347-357(1992)) 및 류마티스성 관절염 환자의 활막을 면역기능이 결여된 쥐에 이식하였을 때 류마티스성 관절염 증상의 증가(Mima et al. J Clon Invest. 96:1746-1758(1995)) 등의 확인이 있다. 또한 류마티스성 관절염 환자의 활막 부위에서 활성화된 CD4+ 세포와 MHC class II 세포가 다량으로 침윤되어 있음이 확인된 바 있으며(Van and Paget. N Engl J Med. 293:517-520(1975)), 이는 관절의 손상 정도와 활막 부위에 존재하는 T 면역세포의 수와 연관성이 있는 것으로 밝혀졌다(Kraan et al. Ann Rheum Dis. 63:483-488(2004)).

T 세포의 활성 및 억제기능을 담당하는 공동 자극 신호로 CD28과 CD80 및 CD86(CD28 및 CTLA-4 분자에 대한 주요 리간드 B7.1 및 B7.2) 사이의 상호작용이 잘 알려져 있다. CD80 및 CD86은 CD28 뿐만 아니라 세포독성 T 면역세포 항원인 CTLA4와 결합하며, CD80 및 CD86과 CTLA4의 결합력은 CD28과의 결합력보다 10-20 배 정도 높은 것으로 알려져 있다(Linsley et al. J Exp Med. 174:561-569(1991)). CTLA4와 CD80 및/또는 CD86을 결합시킴으로서 CD28에 의한 T 세포 활성 억제가 확인된 바 있다(Alegre et al. Nat Rev Immunol. 1:220-228(2001)).

CD80 및 CD86을 표적하는 항체들 중에서 승인되어 사용되고 있는 항체는 아바타셉트(Abatacept)로, 오렌시아(orencia)로 상업화되어 이에 대한 연구가 많이 이루어져 있다. 아바타셉트는 면역글로블린(Ig)의 Fc에 융합된 CTLA4의 세포 외 도메인을 함유하는 CTLA4 Ig 융합 단백질로 류마티스성 관절염에 이용이 승인되어 이용되고 있다(Moreland et al. Nat Rev Drug Discov. 5(3):185-186(2006)).

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 CD80 또는 CD86을 표적하여 T 세포의 활성을 억제하는 류마티스성 관절염 치료제인 아바타셉트보다 동등하거나 우수한 활성을 보이는 항체를 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명의 항체가 CD80 또는 CD86에 대한 우수한 결합능을 나타내면서도, 아바타셉트보다 동등하거나 우수한 T 세포의 활성 억제능을 가짐을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 CD80 또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 CD80 또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 분자를 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 재조합 벡터로 형질전환된 숙주세포를 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 CD80 및/또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 결합 단편을 포함하는 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 CD80 및/또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 류마티스성 관절염 진단 및 의약반응성(drug responsiveness) 분석 키트를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 서열목록 제1서열의 CDR(complementarity determining region)H1, 서열목록 제2서열의 CDRH2 및 서열목록 제3서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제4서열의 CDRL1, 서열목록 제5서열의 CDRL2 및 서열목록 제6서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역; (b) 서열목록 제7서열의 CDRH1, 서열목록 제8서열의 CDRH2 및 서열목록 제9서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제10서열의 CDRL1, 서열목록 제11서열의 CDRL2 및 서열목록 제12서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역; 또는 (c) 서열목록 제13서열의 CDRH1, 서열목록 제14서열의 CDRH2 및 서열목록 제15서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제10서열의 CDRL1, 서열목록 제11서열의 CDRL2 및 서열목록 제16서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 CD80에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제13서열의 CDRH1, 서열목록 제17서열의 CDRH2 및 서열목록 제18서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제4서열의 CDRL1, 서열목록 제5서열의 CDRL2 및 서열목록 제19서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.

본 발명자들은 CD80 또는 CD86을 표적하여 T 세포의 활성을 억제하는 류마티스성 관절염 치료제인 아바타셉트보다 동등하거나 우수한 활성을 보이는 항체를 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명의 항체가 CD80 또는 CD86에 대한 우수한 결합능을 나타내면서도, 아바타셉트보다 동등하거나 우수한 T 세포의 활성 억제능을 가짐을 확인하였다.

본 명세서에서, 용어 “아바타셉트(Abatacept)”는 브리스톨-마이어스 스퀴브(Bristol-Myers Squibb)에 의해 개발되었고, 미국 특허 제5,851,795호, 미국 특허 제7,455,835호 및 미국 특허 공개 제2011/322529호에 개시된 항체를 의미한다.

본 발명의 항체는 CD80 또는 CD86 발현 세포에 대하여 우수한 T 세포 활성 억제능을 갖는다.

본 명세서에서, 용어 “항체(antibody)”는 완전한 항체 형태뿐만 아니라 항체 분자의 항원 결합 단편을 포함한다.

완전한 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 구조이며 각각의 경쇄는 중쇄와 다이설파이드 결합으로 연결되어 있다. 중쇄 불변 영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 타입을 가지고 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다 (Cellular and Molecular Immunology, Wonsiewicz, M. J., Ed., Chapter 45, pp. 41-50, W. B. Saunders Co. Philadelphia, PA(1991); Nisonoff, A., Introduction to Molecular Immunology, 2nd Ed., Chapter 4,pp. 45-65, sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA (1984)).

본 명세서에서, 용어 “항원 결합 단편”은 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')₂ 및 Fv 등을 포함한다. 항체 단편 중 Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변영역과 경쇄의 불변 영역 및 중쇄의 첫 번째 불변 영역(C_H1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다. Fab'는 중쇄 C_H1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역(hinge region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다. F(ab')₂ 항체는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 다이설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변부위 및 경쇄 가변부위만을 가지고 있는 최소의 항체조각으로 Fv 단편을 생성하는 재조합 기술은 PCT 국제 공개특허출원 WO 88/10649, WO 88/106630, WO 88/07085, WO 88/07086 및 WO 88/09344에 개시되어 있다. 이중쇄 Fv(two-chain Fv)는 비공유 결합으로 중쇄 가변부위와 경쇄 가변부위가 연결되어 있고 단쇄 Fv(single-chain Fv)는 일반적으로 펩타이드 링커를 통하여 중쇄의 가변 영역과 단쇄의 가변 영역이 공유 결합으로 연결되거나 또는 C-말단에서 바로 연결되어 있어서 이중쇄 Fv와 같이 다이머와 같은 구조를 이룰 수 있다. 이러한 항체 단편은 단백질 가수분해 효소를 이용해서 얻을 수 있고(예를 들어, 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F(ab')₂단편을 얻을 수 있다), 또는 유전자 재조합 기술을 통하여 제작할 수 있다.

본 발명에서 항체는 바람직하게는 Fab 형태이거나 완전한 항체 형태이다. 또한, 중쇄 불변 영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 또는 엡실론(ε) 중의 어느 한 이소타입으로부터 선택될 수 있다. 일 구현예에 따라면, 불변영역은 감마1(IgG1), 감마 3(IgG3) 및 감마 4(IgG4)이고, 다른 구현예에 따르면, 감마 1(IgG1) 이소타입이다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 형일 수 있으며, 일 구현예에 따르면, 카파형이다. 따라서, 본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 카파(κ) 경쇄와 감마1(γ1) 중쇄를 가지는 Fab 형태 또는 IgG1 형태이다.

본 명세서에서, 용어“중쇄”는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변 영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 V_H 및 3개의 불변 영역 도메인 C_H1, C_H2 및 C_H3를 포함하는 전체길이 중쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다. 또한 본 명세서에서 용어“경쇄”는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 V_L 및 불변 영역 도메인 C_L을 포함하는 전체길이 경쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다.

본 명세서에서, 용어 “CDR(complementarity determining region)”은 면역글로블린 중쇄 및 경쇄의 고가변 영역(hypervariable region)의 아미노산 서열을 의미한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)). 중쇄 및 경쇄에는 각각 3개의 CDR(중쇄(CDRH1, CDRH2 및 CDRH3) 및 경쇄(CDRL1, CDRL2 및 CDRL3))이 포함되어 있다. CDR은 항체가 항원 또는 에피토프에 결합하는 데 있어서 주요한 접촉 잔기를 제공한다.

본 발명의 CD80 또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편은, CD80 또는 CD86을 특이적으로 인식할 수 있는 범위 내에서 첨부한 서열목록에 기재된 아미노산 서열의 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들면, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선시키기 위하여 항체의 아미노산 서열에 변화를 줄 수 있다. 이러한 변형은, 예를 들어 항체의 아미노산 서열 잔기의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다.

이러한 아미노산 변이는 아미노산 곁사슬 치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 잔기이고; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 크기를 갖으며; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 유사한 모양을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다.

변이를 도입하는데 있어서, 아미노산의 소수성 인덱스(hydropathic index)가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 소수성과 전하에 따라 소수성 인덱스가 부여되어 있다: 아이소루이신(+4.5); 발린(+4.2); 루이신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스타인(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글라이신(-0.4); 쓰레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 타이로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5).

단백질의 상호적인 생물학적 기능(interactive biological function)을 부여하는데 있어서 소수성 아미노산 인덱스는 매우 중요하다. 유사한 소수성 인덱스를 가지는 아미노산으로 치환하여야 유사한 생물학적 활성을 보유할 수 있다는 것은 공지된 사실이다. 소수성 인덱스를 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 소수성 인덱스 차이를 나타내는 아미노산 사이에서 치환을 한다.

한편, 유사한 친수성 값(hydrophilicity value)을 가지는 아미노산 사이의 치환이 균등한 생물학적 활성을 갖는 단백질을 초래한다는 것도 잘 알려져 있다. 미국 특허 제 4,554,101호에 개시된 바와 같이, 다음의 친수성 값이 각각의 아미노산 잔기에 부여되어 있다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스팔테이트(+3.0± 1); 글루타메이트(+3.0± 1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글라이신(0); 쓰레오닌(-0.4); 프롤린(-0.5 ± 1); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 루이신(-1.8); 아이소루이신(-1.8); 타이로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5); 트립토판(-3.4).

친수성 값을 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 친수성 값 차이를 나타내는 아미노산 사이에서 치환을 한다.

분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H. Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.

상술한 생물학적 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 본 발명의 항체 또는 이를 코딩하는 핵산 분자는 서열목록에 기재된 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 61%의 상동성, 보다 바람직하게는 70%의 상동성, 보다 더 바람직하게는 80%의 상동성, 가장 바람직하게는 90%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다. 서열비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다. 얼라인먼트에 대한 다양한 방법 및 알고리즘은 Smith and Waterman, Adv . Appl . Math. 2:482(1981); Needleman and Wunsch, J. Mol . Bio. 48:443(1970); Pearson and Lipman, Methods in Mol . Biol . 24: 307-31(1988); Higgins and Sharp, Gene 73:237-44(1988); Higgins and Sharp, CABIOS 5:151-3(1989); Corpet et al., Nuc . Acids Res. 16:10881-90(1988); Huang et al., Comp. Appl . BioSci . 8:155-65(1992) and Pearson et al., Meth . Mol . Biol . 24:307-31(1994)에 개시되어 있다. NCBI Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) (Altschul et al., J. Mol. Biol . 215:403-10(1990))은 NBCI (National Center for Biological Information) 등에서 접근 가능하며, 인터넷 상에서 blastp, blastm, blastx, tblastn and tblastx와 같은 서열 분석 프로그램과 연동되어 이용할 수 있다. BLSAT는 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/에서 접속 가능하다. 이 프로그램을 이용한 서열 상동성 비교 방법은 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/blast_help.html에서 확인할 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 CD80에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 중쇄 가변영역은 서열목록 제21서열, 제25서열 또는 제29서열의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 중쇄 가변영역은 서열목록 제33서열의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 CD80에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 경쇄 가변영역은 제23서열, 제27서열 또는 제31서열의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 경쇄 가변영역은 제35서열의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 항체는 단일클론 항체, 다특이적 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 Fvs(scFV), 단쇄 항체, Fab 단편, F(ab')단편, 다이설파이드-결합 Fvs(sdFV) 및 항-이디오타입(항-Id) 항체, 그리고 상기 항체들의 에피토프-결합 단편 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 항체 CDR 서열은 종래 항체들의 CDR 서열과 비교하여 상동성(similarity)이 매우 낮아, 상기 서열의 독특함이 있다. 예를 들어, BLAST 검색(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)에서 상동성이 가장 높은 것으로 조사된 공개 특허에 개시된 단백질 및 서열 상동성은 하기 표 1과 같다.

		경쇄	상동성	중쇄	상동성	종합
2B2 (CD80)	CDR3	QQSNYGYPYYT (서열목록 제6서열)	유사성 없음	GDPSYYDGDFDY (서열목록 제3서열)	80% (미국 등록특허 제5844094호의 서열 18)	경쇄의 유사성이 없어 50% 미만
2F11 (CD80)	CDR3	AAGNPSDYV (서열목록 제12서열)	유사성 없음	SGYDSYYYYNYFDY (서열목록 제9서열)	71% (미국 등록특허 제7879329호의 서열 22)	경쇄의 유사성이 없어 50% 미만
2H1 (CD80)	CDR3	AAGSYSDYV (서열목록 제16서열)	유사성 없음	SYAYYPGYYRTGYFDY (서열목록 제15서열)	88% (미국 등록특허 제7329737호의 서열 552)	경쇄의 유사성이 없어 50% 미만
3A2 (CD86)	CDR3	QQGYYSNST (서열목록 제19서열)	유사성 없음	YYYYGYYYGYYGAFDY (서열목록 제18서열)	71% (미국 등록특허 제7329737호의 서열 252)	경쇄의 유사성이 없어 50% 미만

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제21서열, 제25서열 또는 제29서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD80에 대한 항체의 중쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 서열목록 제21서열, 제25서열 또는 제29서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD80에 대한 항체의 중쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자는 서열목록 제20서열, 제24서열 또는 제28서열 또는 제32서열의 뉴클레오타이드 서열을 각각 포함한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제23서열, 제27서열 또는 제31서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD80에 대한 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 서열목록 제23서열, 제27서열 또는 제31서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD80에 대한 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자는 서열목록 제22서열, 제26서열 또는 제30서열의 뉴클레오타이드 서열을 각각 포함한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제33서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD86에 대한 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 서열목록 제33서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD86에 대한 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자는 서열목록 제32서열의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제35서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD86에 대한 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 서열목록 제35서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD86에 대한 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자는 서열목록 제34서열의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

본 명세서에서 용어 “핵산 분자”는 DNA(gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 갖으며, 핵산 분자에서 기본 구성단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)를 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)). 본 발명의 상기 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자 서열은 변형될 수 있다. 상기 변형은 뉴클레오타이드의 추가, 결실 또는 비보존적 치환 또는 보존적 치환을 포함한다.

CD80 또는 CD86에 대한 항체를 코딩하는 본 발명의 핵산 분자는 상기한 뉴클레오타이드 서열에 대하여 실질적인 동일성을 나타내는 뉴클레오타이드 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 뉴클레오타이드 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 80%, 90% 또는 95%의 상동성을 나타내는 뉴클레오타이드 서열을 의미한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.

본 명세서에서 용어 “벡터”는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단으로 플라스미드 벡터; 코즈미드 벡터; 그리고 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터 같은 바이러스 벡터 등을 포함한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 벡터에서 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자 및 중쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자는 프로모터와 작동적으로 결합(operatively linked)되어 있다.

본 명세서에서, 용어 “작동적으로 결합된”은 핵산 발현 조절 서열(예: 프로모터, 또는 전사조절인자 결합 위치의 어레이)과 다른 핵산 서열사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 핵산 서열의 전사 및/또는 해독을 조절하게 된다.

본 발명의 재조합 벡터 시스템은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있으며, 이에 대한 구체적인 방법은 Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)에 개시되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.

본 발명의 벡터는 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 지놈으로부터 유래된 프로모터(예: 메탈로티오닌 프로모터, β-액틴 프로모터, 사람 헤로글로빈 프로모터 및 사람 근육 크레아틴 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터, HSV의 tk 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, HIV의 LTR 프로모터, 몰로니 바이러스의 프로모터, 엡스타인 바 바이러스(EBV)의 프로모터 및 로우스 사코마 바이러스(RSV)의 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.

본 발명의 벡터는 그로부터 발현되는 항체의 정제를 용이하게 하기 위하여, 다른 서열과 융합될 수도 있다. 융합되는 서열은 예컨대, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(Pharmacia, USA), 말토스 결합 단백질(NEB, USA), FLAG(IBI, USA) 및 6x His(hexahistidine; Quiagen, USA) 등이 있다.

또한, 본 발명의 벡터에 의해 발현되는 단백질이 항체이기 때문에, 정제를 위한 추가적인 서열 없이도, 발현된 항체는 단백질 A 컬럼 등을 통하여 용이하게 정제할 수 있다.

한편, 본 발명의 발현 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함하며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 제네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 재조합 벡터로 형질전환 된 숙주 세포를 제공한다.

본 발명의 벡터를 안정되면서 연속적으로 클로닝 및 발현시킬 수 있는 숙주 세포는 당업계에 공지되어 어떠한 숙주 세포도 이용할 수 있으며, 예컨대, 상기 벡터의 적합한 진핵 세포 숙주 세포는 원숭이 신장 세포7(COS7: monkey kidney cells), NSO 세포, SP2/0, 차이니즈 햄스터 난소(CHO: Chinese hamster ovary) 세포, W138, 어린 햄스터 신장(BHK: baby hamster kidney) 세포, MDCK, 골수종 세포주, HuT 78 세포 및 HEK-293 세포를 포함하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 (a) (i) 본 발명의 CD80에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 약제학적 유효량, (ⅱ) 본 발명의 CD80에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 약제학적 유효량, (ⅲ) 또는 (i) 및 (ⅱ)의 조합; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 상술한 본 발명의 CD80 또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 유효성분으로 이용하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 반복 기재에 의해 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 비경구로 투여할 수 있고, 예컨대 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장내 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.0001-100 ㎎/㎏이다. 본 명세서에서 용어 “약제학적 유효량”은 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 좌제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 항체는 진단, 예컨대 류마티스성 관절염, 질병(diseases) 또는 상태(conditions)를 진단하는 데 이용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 CD80 및/또는 CD86에 대한 항체를 포함하는 류마티스성 관절염, 질병 또는 상태의 진단 키트를 제공한다.

본 발명의 진단 키트는 상술한 본 발명의 CD80 또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하며, 본 발명의 약제학적 조성물과 동일한 질환을 진단하는바, 이 둘 사이에 공통된 내용은 반복 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.

또한, 본 발명의 항체는, 본 발명의 항체가 환자에게 의약 반응성(drug responsiveness)이 있는지 여부를 분석하는 데 이용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 CD80 및/또는 CD86에 대한 항체를 포함하는 의약 반응성(drug responsiveness) 분석 키트를 제공한다.

본 발명의 분석 키트는, 특정의 환자가 본 발명의 항체에 대하여 의약 반응성이 있는지 여부를 분석하는 데 이용될 수 있다. 예를 들어, 환자의 세포에 본 발명의 항체를 처리한 경우, 본 발명의 항체가 결합하는 것으로 결과가 나오면, 이 환자는 본 발명의 항체에 대하여 의약 반응성이 있는 것으로 판정할 수 있다.

상술한 키트는 항체를 포함하기 때문에, 기본적으로 다양한 면역분석(immunoassay) 또는 면역염색(immunostaining)에 적합하게 제작될 수 있다. 상기 면역분석 또는 면역염색은 방사능면역분석, 방사능면역침전, 면역침전, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay), 캡처-ELISA, 억제 또는 경쟁 분석, 샌드위치 분석, 유세포 분석(flow cytometry), 면역형광염색 및 면역친화성 정제를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 면역분석 또는 면역염색의 방법은 Enzyme Immunoassay, E. T. Maggio, ed., CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980; Gaastra, W., Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), in Methods in Molecular Biology, Vol. 1, Walker, J.M. ed., Humana Press, NJ, 1984; 및 Ed Harlow and David Lane, Using Antibodies:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999에 기재되어 있으며, 상기 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.

예를 들어, 본 발명의 방법이 방사능면역분석 방법에 따라 실시되는 경우, 방사능동위원소(예컨대, C¹⁴, I¹²⁵, P³²및 S³⁵)로 레이블링된 항체가 세포를 둘러싸고 있는 세포 표면에 있는 수용체를 검출하는 데 이용될 수 있다. 본 발명이 ELISA 방식으로 실시되는 경우, 본 발명의 특정 실시예는 (i) 분석하고자 하는 시료를 고체 기질의 표면에 코팅하는 단계; (ⅱ) 일차항체로서의 CD80 또는 CD86에 대한 항체와 상기 세포 분해물을 반응시키는 단계; (ⅲ) 상기 단계 (ⅱ)의 결과물을 효소가 결합된 이차항체와 반응시키는 단계; 및 (ⅳ) 상기 효소의 활성을 측정하는 단계를 포함한다.

상기 고체 기질로 적합한 것은 탄화수소 폴리머(예컨대, 폴리스틸렌 및 폴리프로필렌), 유리, 금속 또는 젤이며, 가장 구체적으로는 마이크로타이터 플레이트이다.

상기 이차항체에 결합된 효소는 발색반응, 형광반응, 발광반응 또는 적외선 반응을 촉매하는 효소를 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 예를 들어, 알칼린 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제, 루시퍼라아제 및 사이토크롬 P₄₅₀을 포함한다. 상기 이차항체에 결합하는 효소로서 알칼린 포스파타아제가 이용되는 경우에는, 기질로서 브로모클로로인돌일 포스페이트(BCIP), 니트로 블루 테트라졸리움(NBT), 나프톨-AS-B1-포스페이트(naphthol-AS-B1-phosphate) 및 ECF(enhanced chemifluorescence)와 같은 발색반응 기질이 이용되고, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제가 이용되는 경우에는 클로로나프톨, 아미노에틸카바졸, 디아미노벤지딘, D-루시페린, 루시게닌(비스-N-메틸아크리디늄 니트레이트), 레소루핀 벤질 에테르, 루미놀, 암플렉스 레드 시약(10-아세틸-3,7-디하이드록시페녹사진), HYR(p-phenylenediamine-HCl and pyrocatechol), TMB(tetramethylbenzidine), ABTS(2,2‘-Azine-di[3-ethylbenzthiazoline sulfonate]), o-페닐렌디아민(OPD) 및 나프톨/파이로닌, 글루코스 옥시다아제와 t-NBT(nitroblue tetrazolium) 및 m-PMS(phenzaine methosulfate)과 같은 기질이 이용될 수 있다.

본 발명이 캡처-ELISA 방식으로 실시되는 경우, 본 발명의 특정 실시예는 (i) 포획항체(capturing antibody)로서 CD80 또는 CD86에 대한 항체를 고체 기질의 표면에 코팅하는 단계; (ⅱ) 포획항체와 시료를 반응시키는 단계; (ⅲ) 상기 단계 (ⅱ)의 결과물을 시그널을 발생시키는 레이블이 결합되어 있는 CD80 또는 CD86 검출항체(detecting antibody)와 반응시키는 단계; 및 (ⅳ) 상기 레이블로부터 발생하는 시그널을 측정하는 단계를 포함한다.

상기 검출 항체는 검출 가능한 시그널을 발생시키는 레이블을 가지고 있다. 상기 레이블은 화학물질(예컨대, 바이오틴), 효소(알칼린 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 호스 래디쉬 퍼옥시다아제 및 사이토크롬 P₄₅₀), 방사능물질(예컨대, C¹⁴, I¹²⁵, P³²및 S³⁵), 형광물질(예컨대, 플루오레신), 발광물질, 화학발광물질( chemiluminescent) 및 FRET(fluorescence resonance energy transfer)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 다양한 레이블 및 레이블링 방법은 Ed Harlow and David Lane, Using Antibodies:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999에 기재되어 있다.

상기 ELISA 방법 및 캡처-ELISA 방법에서 최종적인 효소의 활성 측정 또는 시그널의 측정은 당업계에 공지된 다양한 방법에 따라 실시될 수 있다. 만일, 레이블로서 바이오틴이 이용된 경우에는 스트렙타비딘으로, 루시퍼라아제가 이용된 경우에는 루시페린으로 시그널을 용이하게 검출할 수 있다.

본 발명의 키트에 적용될 수 있는 시료는 세포, 조직 또는 조직-유래 추출물, 파쇄물(lysate) 또는 정제물, 혈액, 혈장, 혈청, 림프 또는 복수를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 항체는 인 비보 또는 인 비트로 이미징에 이용될 수 있다. 본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 항체 및 상기 항체에 결합된 검출 가능한 신호를 발생시키는 레이블이 결합된 결합체를 포함하는 이미지용 조성물을 제공한다.

상기 검출 가능한 신호를 발생시키는 레이블은 T1 조영물질(예컨대, Gd 킬레이트 화합물), T2 조영물질(예컨대, 초상자성 물질(예: 마그네타이트, Fe₃O₄,γ-Fe₂O₃, 망간 페라이트, 코발트 페라이트 및 니켈 페라이트)), 방사성 동위 원소(예컨대, ¹¹C, ¹⁵O, ¹³N, P³², S³⁵, ⁴⁴Sc, ⁴⁵Ti, ¹¹⁸I, ¹³⁶La, ¹⁹⁸Tl, ²⁰⁰Tl, ²⁰⁵Bi 및 ²⁰⁶Bi), 형광물질(플루오리신(fluorescein), 피코에리트린(phycoerythrin), 로다민, 리사민(lissamine), 그리고 Cy3와 Cy5), 화학발광단, 자기입자, 매스 표지 또는 전자밀집입자를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 항체는 그 단독으로도 류마티스성 관절염을 치료하는 데 이용될 수 있지만, CD80 또는 CD86 발현 세포를 타겟팅 할 수 있기 때문에 다른 약물에 결합시켜 ADC(antibody drug conjugate) 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(a) 본 발명은 신규한 서열의 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR 아미노산 서열을 포함하는 CD80 또는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 신규한 아미노산 서열을 포함하는 CD80 또는 CD86에 대한 항체의 중쇄 및 경쇄 가변영역을 코딩하는 각각의 핵산 분자, 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터, 본 발명의 재조합 벡터로 형질전환된 숙주세포, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물, 진단 키트 및 의약 반응성 분석 키트에 관한 것이다.

(b) 본 발명의 항체는 세포에서 과발현되는 CD80 또는 CD86에 특이적으로 결합하는 항체로서, 아바타셉트와는 서로 상이한 에피토프에 결합하는 항체이며, 종래의 CD80 또는 CD86 타겟 항체들의 CDR 서열과 비교하여 상동성이 매우 낮아, 그 서열의 독특함이 있다.

(c) 본 발명의 항체는 아바타셉트보다 동등 또는 우수한 활성으로, T 세포 활성 저해가 있으며, 본 발명의 CD80에 대한 항체와 CD86에 대한 항체를 병용 처리하는 경우 아바타셉트보다 T 세포 저해 활성이 현저하게 우수한바, 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료에 매우 유효하다.

(d) 본 발명의 항체의 T 세포 활성 저해에 의해, 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.

(e) 본 발명의 항체는 류마티스성 관절염 치료제로서 뿐만 아니라, 진단, 의약 반응성 분석, 이미징 및 ADC(antibody drug conjugate)로서도 이용될 수 있다.

도 1a 내지 도 1b는 CD80 또는 CD86에 특이적인 인간 항체 선별 바이오-패닝(Bio-panning)을 보여준다.
도 2는 2B2, 2F11, 2H1 및 3A2 항체가 세포 표면에 발현된 CD80 또는 CD86에 결합하는 결합능을 보여준다.
도 3은 2B2, 2F11, 2H1 및 3A2 항체의 단독 처리에 의한 CD80 또는 CD86에 기능 억제능을 보여준다.
도 4는 2B2, 2F11, 2H1 및 3A2 항체의 병행 처리에 의한 CD80 또는 CD86에 기능 억제능을 보여준다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1: CD80 또는 CD86에 특이적으로 결합하는 인간 항체 선별

T 세포 활성에 필수적인 신호전달 과정에서 핵심적인 역할을 하는 CD80 및 CD86에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 바이오-패닝(bio-panning) 방법을 이용하여, 각각 CD80에 특이적으로 결합하는 3개의 항체와 CD86에 특이적으로 결합하는 1개의 항체를 선별하였다(표 2).

CD80 또는 CD86에 특이적으로 결합하는 인간항체 선별을 위한 바이오-패닝 스크리닝은 다음과 같이 실시하였다. 바이오 패닝에 사용한 CD80(R&D systems, Cat. #. 140-B1-100)과 CD86(R&D systems, Cat. #. 141-B2-100) 항원을 R&D systems사에서 구입하였다. 항체 라이브러리는 Fab 형태인 Rz 인간 항체 라이브러리를 이용하였으며, VCSM13 헬퍼 파지(helper phage)를 이용하여 파지 형태로 수득하여 패닝에 이용하였다. 10¹²의 라이브러리 파지를 항원과 결합시켰다. 패닝 라운드(round)는 4 라운드까지 실시하였다. 친화도가 높은 파지가 선택적으로 잘 선별될 수 있도록, 패닝 라운드 횟수가 늘어날수록 항원의 양은 줄이고 세척 횟수는 늘이는 방법을 이용하였다. 타겟 항원에 결합한 파지의 수는 ER2537 에세리키아 콜라이(E. coli)를 이용하여 다음과 같이 적정하였다. 바이오-패닝 각 라운드에서 수득한 바인더(binder) 파지는 pH2.5 글라이신 완충액으로 용출하였다. SB 배양액에서 하룻밤동안 배양한 ER2537은 새로운 SB 배양액에 1/200 희석하여 계대한 다음, 3시간 동안 37℃에서 추가 배양하여 로그 파지에 도달하게 하였다. 100 ㎕의 신선한 ER2537와 10 ㎕의 희석된 파지를 1.5 ㎖ 튜브에서 혼합한 다음, 30분 동안 반응시킨 후 암피실린(ampicillin) LB 플레이트에 도말한 후, 37℃에서 하룻밤동안 배양하였다. 이어서 생성된 콜로니(colony) 수와 희석 요소를 적용하여 파지 수를 측정하였다. 바이오 패닝 각 라운드에서 수득한 바인더 파지를 ER2537에 감염시켜 콜로니 형태로 유지시킨 상태에서 하기의 ELISA 방법을 이용하여 각 항원에 대한 결합 여부를 확인하였다(도 1). 바인더 파지를 감염시켜 수득한 콜로니를 SB 배양액에 접종시킨 후 OD600에서 0.5가 될 때까지 배양하였다. 이어서, 0.5 mM의 IPTG를 넣고 30℃에서 셰이킹(shaking) 배양하여 Fab 단백질이 과발현되도록 하였다. Fab 단백질을 TES 완충액을 이용하여 정제하였다. 정제된 Fab 단백질을 류마티스성 관절염 관련 단백질이 코팅된 플레이트에 처리하였다. 류마티스성 관절염 관련 단백질에 이차 항체 항-HA 마우스 HRP(Roche, cat. #. 12013819001)를 처리한 후, Absignal(AbClon, cat. #. AbC3001)로 발색반응을 실시하였다. 이어서 ELISA 측정기(reader)(Victor X3 PerkinElmer)를 이용하여 OD₄₅₀의 값을 측정하였다. CD80 또는 CD86에 특이적으로 결합하는 선별된 Fab 항체 클론(clone)을 pCombXSS 파지미드(phagemid)에 확보한 후 공지된 프라이머 세트(Phage display: a laboratory manual, Carlos Barbas III, et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press)를 이용하여 시퀀싱(sequencing) 분석을 통해 가변부위의 염기서열을 확인하였다. 선별된 항체는 IgG 전환(conversion)을 실시한 후, 293F 세포를 이용하여 발현시켰다. 이어서 protein-A를 이용하여 정제하였다.

CD80 또는 CD86에 대한 항체의 CDR(complementarity determining region)의 아미노산 서열

		경쇄	중쇄
2B2 (CD80)	CDR1	RASQSVSSSYLA (서열목록 제4서열)	GFTFSSYSMS (서열목록 제1서열)
	CDR2	GASSRAT (서열목록 제5서열)	YISPYYSYTY (서열목록 제2서열)
	CDR3	QQSNYGYPYYT (서열목록 제6서열)	GDPSYYDGDFDY (서열목록 제3서열)
2F11 (CD80)	CDR1	SGSSSNIGSNYVY (서열목록 제10서열)	GFTFSGYYMS (서열목록 제7서열)
	CDR2	RNNQRPS (서열목록 제11서열)	AISYGGYSTY (서열목록 제8서열)
	CDR3	AAGNPSDYV (서열목록 제12서열)	SGYDSYYYYNYFDY (서열목록 제9서열)
2H1 (CD80)	CDR1	SGSSSNIGSNYVY (서열목록 제10서열)	GFTFSYYSMS (서열목록 제13서열)
	CDR2	RNNQRPS (서열목록 제11서열)	AISYDNGNKY (서열목록 제14서열)
	CDR3	AAGSYSDYV (서열목록 제16서열)	SYAYYPGYYRTGYFDY (서열목록 제15서열)
3A2 (CD86)	CDR1	RASQSVSSSYLA (서열목록 제4서열)	GFTFSYYSMS (서열목록 제13서열)
	CDR2	GASSRAT (서열목록 제5서열)	SISYGPGYTY (서열목록 제17서열)
	CDR3	QQGYYSNST (서열목록 제19서열)	YYYYGYYYGYYGAFDY (서열목록 제18서열)

실시예 2: 세포 표면에 발현된 CD80 또는 CD86에 대한 개발된 항체들의 결합능 확인

바이오 패닝을 통해 CD80 또는 CD86에 특이적으로 결합하는 선별된 인간 항체(2B2, 2F11, 2H1 및 3A2)에 대하여 세포 표면에 발현된 CD80 또는 CD86의 결합능을 FACS를 이용하여 확인하였다. 그 결과, 선별된 항체 4개 모두 세포 표면에 발현된 각각의 항원에 대하여 결합능이 있는 것으로 나타났다(도 2). 항원 전달 세포(Antigen presenting cell) 표면에 발현된 CD80 및 CD86은 CD28과 결합하여 T 세포 활성 기능을 수행하는 것으로 알려져 있다. 세포 기반 어세이(cell based assay)를 이용하여 CD80 또는 CD86을 타겟으로 하는 항체들의 T 세포 활성 억제능을 확인할 수 있었다. 상기 세포 기반 어세이를 통해 억제능을 확인하기 위해서는 항체들이 항원 전달 세포 표면에 발현된 CD80과 CD86에 대하여 결합하는 능력을 가져야 한다. 따라서 FACS를 이용하여 선별된 항체들의 세포 표면에 발현된 CD80과 CD86에 대한 결합능을 확인하였다. 항원 전달 세포인 라지(Raji) B 세포를 5 × 10⁵으로 준비한 후, 1200 rpm으로 5분 동안 원심 분리하여 세포를 수득하였다. 이어서, 세포에 100 ㎕의 PBS를 추가한 후 원심 분리하여 세포를 세척하였다. 상기 세척 과정을 3회 반복하였다. 100 ㎕의 PBS에 1 ㎍의 항체를 세포에 처리하고 아이스(ice)에서 1 시간동안 반응시켰다. 이어서, 세포에 100 ㎕의 PBS를 추가한 후 1200 rpm으로 5분 동안 원심 분리하여 세포를 세척하였다. 상기 세척 과정을 3회 반복하였다. 이어서 100 ㎕의 PBS에 1 ㎍의 항-인간 Fc FITC 항체를 세포에 처리하고 빛을 차단한 채로 아이스에서 1시간 동안 반응시켰다. 그리고 1200 rpm에서 5분 동안 원심분리한 세포를 100 ㎕의 PBS를 이용하여 풀어주는 세척 과정을 3회 반복한 후, 베크만 쿨터(Beckman coulter) FACS 기기를 이용하여 형광의 세기를 측정하였다.

실시예 3: 개발된 항체들에 의한 CD80 또는 CD86의 기능 억제 효능

개발된 인간 항체(2B2, 2F11, 2H1 및 3A2)에 의한 CD80 또는 CD86의 기능 억제 효과를 확인하기 위하여 항원 전달 세포 및 T 세포를 이용한 세포 기반 어세이를 실시하였다. 그 결과, 개발된 4개의 항체 모두 T 세포 활성 억제 효과를 나타냈으며(도 3), 2B2, 2F11 또는 2H1(CD80에 대한 항체)과 3A2(CD86에 대한 항체)를 동시 처리하였을 경우 효과가 증대되는 것을 확인하였다(도 4). CD80 또는 CD86과 CD28의 상호작용에 의한 T 세포 활성의 결과에 의한 IL-2의 산물 증가는 염증과정에서 잘 알려져 있다. 라지 B 세포 및 저켓(jurkat) T 세포를 이용한 인 비트로 세포 기반 어세이를 통해 T 세포 활성 억제 정도 확인할 수 있었다. T 세포의 활성 정도는 T 세포 활성의 정도에 따라 증가하는 IL-2의 발현 정도를 측정하여 확인하였다. 10% FBS(Hyclone, cat. #. sh30070) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)(Gibco , cat. #. 15140-122)이 포함된 RPMI-1640 배양액에 1 주일간 배양하여 안정화된 저켓 T 세포(ATCC cat. #. TIB-152) 및 라지 B 세포(ATCC cat. #. CCL-86)를 96 웰 플레이트에 분주하였다. 항-CD3 항체(BD phamigen, cat. #. 555329)와 anti-mouse IgG (Thermo Fisher, cat. #. 31160)을 각각 동일한 농도로 혼합 한 후, 저켓 T 세포 및 라지 B 세포를 분주한 플레이트에 처리하였다. 항체가 처리된 세포를 37℃, 5%의 CO₂조건에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 플레이트를 1000 rpm에서 10분 동안 원심분리하여 세포를 수득하고 상등액과 IL-2 정량 키트(R&D systems, cat. #. DY-202)를 이용하여 IL-2의 양을 측정하였다. 4개의 항체가 T 세포의 활성을 억제하는 효능을 확인한 결과, 모든 항체가 T 세포의 활성 억제능이 있는 것으로 확인되었다. 현재 시판 중인 아바타셉트의 효능과는 차이가 있는 것으로 측정되었다(도 3). CD80과 CD86은 모두 면역반응과정에서 T 세포 활성에 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 종래의 물질인 아바타셉트는 CD80 및 CD86을 동시에 억제하므로 본 발명에서 개발된 항체를 서로 합하여 처리한 후 효능을 비교하였다. 2B2, 2F11 또는 2H1(CD80에 대한 항체)과 3A2(CD86에 대한 항체) 항체를 동일한 비율로 처리한 후 T 세포 활성 억제능을 비교한 결과, 단독으로 처리하였을 경우보다 효능이 현저히 증가됨을 확인하였으며, 아바타셉트보다 10 배 이상 효능이 상승되는 것으로 확인되었다(도 4).

상기 결과는 본 발명에서 개발된 항체를 단독 또는 복합 처리 시 아바타셉트보다 우수하거나 또는 동등한 T 세포 활성의 억제능을 확인하였다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> AbClon, Inc <120> Antibodies Capable of Binding Specifically to CD80 and CD86 <130> PN150539D <160> 39 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> CDRH1 of 2B2 antibody (PRT) <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> CDRH2 of 2B2 antibody (PRT) <400> 2 Tyr Ile Ser Pro Tyr Tyr Ser Tyr Thr Tyr 1 5 10 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> CDRH3 of 2B2 antibody (PRT) <400> 3 Gly Asp Pro Ser Tyr Tyr Asp Gly Asp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> CDRL1 of 2B2 or 3A2 antibody (PRT) <400> 4 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> CDRL2 of 2B2 or 3A2 antibody (PRT) <400> 5 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> CDRL3 of 2B2 antibody (PRT) <400> 6 Gln Gln Ser Asn Tyr Gly Tyr Pro Tyr Tyr Thr 1 5 10 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> CDRH1 of 2F11 antibody (PRT) <400> 7 Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Tyr Met Ser 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> CDRH2 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2H1 antibody (PRT) <400> 16 Ala Ala Gly Ser Tyr Ser Asp Tyr Val 1 5 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> CDRH2 of 3A2 antibody (PRT) <400> 17 Ser Ile Ser Tyr Gly Pro Gly Tyr Thr Tyr 1 5 10 <210> 18 <211> 16 <212> PRT <213> CDRH3 of 3A2 antibody (PRT) <400> 18 Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Tyr Tyr Gly Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> CDRL3 of 3A2 antibody (PRT) <400> 19 Gln Gln Gly Tyr Tyr Ser Asn Ser Thr 1 5 <210> 20 <211> 363 <212> DNA <213> Nucleotide sequence of 2B2 heavy chain variable region <400> 20 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc tcttattcta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatac atctctcctt actactctta cacgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgtggtgac 300 ccgtcttact acgacggtga cttcgactac tggggccagg gtacactggt caccgtgagc 360 tca 363 <210> 21 <211> 121 <212> PRT <213> Amino acid sequence of 2B2 heavy chain variable region <400> 21 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Pro Tyr Tyr Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Pro Ser Tyr Tyr Asp Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 22 <211> 330 <212> DNA <213> Nucleotide sequence of 2B2 light chain variable region <400> 22 gaaattgtcc tgacgcagtc gccgggtacg ctgtcgctgt ctccgggtga acgtgctacg 60 ctgagttgtc gtgcctccca gtcggtcagc tctagttatc tggcatggta ccagcaaaaa 120 ccgggtcagg ctccgcgtct gctgatttat ggtgcatcct cacgtgcaac cggtatcccg 180 gatcgctttt cgggcagcgg ttctggcacg gacttcaccc tgacgatttc ccgcctggaa 240 ccggaagatt ttgccgtgta ttactgtcaa cagtctaact acggttaccc gtactacacc 300 ttcggtcagg gcaccaaagt ggaaatcaaa 330 <210> 23 <211> 110 <212> PRT <213> Amino acid sequence of 2B2 light chain variable region <400> 23 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Tyr Gly Tyr 85 90 95 Pro Tyr Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 24 <211> 369 <212> DNA <213> Nucleotide sequence of 2F11 heavy chain variable region <400> 24 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc ggttattaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagcg atctcttacg gtggttactc tacgtattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgttctggt 300 tacgactctt actactacta caactacttc gactactggg gccagggtac actggtcacc 360 gtgagctca 369 <210> 25 <211> 123 <212> PRT <213> Amino acid sequence of 2F11 heavy chain variable region <400> 25 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Gly Gly Tyr Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gly Tyr Asp Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 26 <211> 327 <212> DNA <213> Nucleotide sequence of 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agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagttcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg t 321 <210> 37 <211> 107 <212> PRT <213> Constant region of human IgG kappa chain(Amino acid sequence) <400> 37 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 38 <211> 990 <212> DNA <213> Constant region of human IgG heavy chain(Nucleotide sequence) <400> 38 gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgcg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 990 <210> 39 <211> 330 <212> PRT <213> Constant region of human IgG heavy chain(Amino acid sequence) <400> 39 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330

Claims

서열목록 제13서열의 CDRH1, 서열목록 제17서열의 CDRH2 및 서열목록 제18서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제4서열의 CDRL1, 서열목록 제5서열의 CDRL2 및 서열목록 제19서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
제 1 항에 있어서, 상기 중쇄 가변영역은 서열목록 제33서열의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
제 1 항에 있어서, 상기 경쇄 가변영역은 제35서열의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
서열목록 제33서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD86에 대한 항체의 중쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자.
제 4 항에 있어서, 상기 핵산 분자는 서열목록 제32서열의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 핵산 분자.
서열목록 제35서열의 아미노산 서열을 포함하는 CD86에 대한 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산 분자.
제 6 항에 있어서, 상기 핵산 분자는 서열목록 제34서열의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 핵산 분자.
제 4 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터.
제 8 항의 재조합 벡터로 형질전환된 숙주세포.
다음을 포함하는 류마티스성 관절염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물:
(a) 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항의 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 약제학적 유효량; 및
(b) 약제학적으로 허용되는 담체.
제 10 항에 있어서, 다음을 포함하는 CD80에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 약제학적 유효량을 추가적으로 포함하는 약제학적 조성물:
(a) 서열목록 제1서열의 CDR(complementarity determining region)H1, 서열목록 제2서열의 CDRH2 및 서열목록 제3서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제4서열의 CDRL1, 서열목록 제5서열의 CDRL2 및 서열목록 제6서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역;
(b) 서열목록 제7서열의 CDRH1, 서열목록 제8서열의 CDRH2 및 서열목록 제9서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제10서열의 CDRL1, 서열목록 제11서열의 CDRL2 및 서열목록 제12서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역; 또는
(c) 서열목록 제13서열의 CDRH1, 서열목록 제14서열의 CDRH2 및 서열목록 제15서열의 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변영역, 그리고 서열목록 제10서열의 CDRL1, 서열목록 제11서열의 CDRL2 및 서열목록 제16서열의 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변영역.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항의 CD86에 대한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 류마티스성 관절염의 진단 및 의약 반응성(drug responsiveness) 분석 키트.