KR101879625B1 - Cosmetic Composition for Improving Atopic Dermatitis Comprising Extract of Tagetes Minuta - Google Patents

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Abstract

본 발명은 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, 항알러지, 항산화, 항염증 효과를 나타내어 아토피 피부염을 개선하는 효과를 나타낸다.
The present invention relates to a cosmetic composition for improving atopic dermatitis, which is characterized by containing an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.
The cosmetic composition for improving atopic dermatitis according to the present invention exhibits an anti-allergic, antioxidant and anti-inflammatory effect and thus has the effect of improving atopic dermatitis by containing the extract of Radix guinea pigs as an active ingredient.

Description

만수국아재비 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Improving Atopic Dermatitis Comprising Extract of Tagetes Minuta}TECHNICAL FIELD The present invention relates to a cosmetic composition for improving atopic dermatitis,

본 발명은 만수국아재비 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for improving atopic dermatitis, which contains an extract of Radix japonicum.

아토피는 유아기에 주로 발생하여 태열이라고도 하며, 주로 각질층 내의 세라마이드(ceramides)의 함량이 감소됨에 따라 발생한다.Atopy occurs mainly in infancy and is called as fever, and it occurs mainly as the content of ceramides in the stratum corneum is decreased.

아토피 피부염은 그 원인이 아직까지 명확히 규명되어 있지 않지만, 면역 체계의 교란에 의하여 발생하는 것으로 추정되고 있다.The cause of atopic dermatitis has not been clarified yet, but it is presumed that it is caused by the disturbance of the immune system.

일반적으로, 아토피 피부염은 각질층의 수분 유지 기능이 떨어짐에 따라 건조하며, 피부 장벽 기능이 저하됨에 따라 피부 알러지 등이 용이하게 발생하여 소양감이 심하고, 반복적으로 재발되며, 각종 자극에 의해 쉽게 피부염이 유발된다.In general, atopic dermatitis is dry due to a decrease in the water retention function of the stratum corneum, and skin barrier function is lowered, so that skin allergy can easily occur, so that it is prone to be pruritic, repeatedly recurring, do.

많은 경우에 1 내지 2주 간격으로 반복적으로 악화되며 적절한 관리를 하지 않으면 삼출을 동반한 홍반성 발진의 아급성 병변, 가죽과 같이 두꺼워진 태선화의 만성 병변으로 진행된다.In many cases, it is exacerbated repeatedly at intervals of 1 to 2 weeks. If not properly managed, it progresses to subacute lesions of erythematous eruption with exudation, chronic lesions of thickening skin like skin.

아토피 피부의 발생 원인은 크게 두 가지로 구분되는데, 하나는 유전적 원인에 의한 것으로서, 피부 보호막인 세포간 결합물질인 감마-리놀레인산(γ-linoleic acid; GLA)이 선천적으로 부족하여 피부 보호막이 약하고 피부 표면의 수분이 쉽게 소실됨으로써 발생하게 된다. 다른 원인은 환경적 원인으로서 건조한 생활환경, 활성 산소, 세균, 바이러스, 곰팡이 등에 의하여 발생한다[피부과학, 대한피부과학회 간행위원회, 여문각, 1992].The cause of atopic skin is divided into two main causes. One is genetic cause, and it is inherently deficient in gamma-linoleic acid (GLA) This is caused by the weak and easily disappearing of moisture on the surface of the skin. Other causes are environmental factors, such as dry living environment, reactive oxygen species, bacteria, viruses, fungi, etc. [Dermatology, Korean Society of Dermatology Editorial Committee,

아토피 피부염에 의해 비만세포는 세포 내 과립에서 히스타민과 같은 알레르기 반응 유도 물질이 방출되어 탈과립 상태를 나타낸다[Gao ZG, et al., Biochem Pharmacol. 2009. Nov 5]. 또한, 아토피 피부염은 알러지성 비염, 천식 등을 동반한다는 점에서 알러지성 질환일 가능성이 높은 것으로 보고되고 있다[de Meer G, et al., Pediatr Allergy Immunol. 2009. Nov 13].Atopic dermatitis causes mast cells to release an allergic reaction inducer such as histamine in the intracellular granules, indicating degranulation [Gao ZG, et al., Biochem Pharmacol. 2009. Nov 5]. In addition, atopic dermatitis has been reported to be associated with allergic rhinitis and asthma, and thus it is highly likely to be an allergic disease [de Meer G, et al., Pediatr Allergy Immunol. 2009. Nov 13].

아토피 피부염 개선을 위한 다양한 천연물을 주성분으로 하는 조성물이 개시되고 있는데, 대한민국 등록특허공보 10-1418916호에서는 톳 추출물 또는 그로부터 크로마토그래피로 분리한 활성분획을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허공보 10-1382115호에서는 인삼열매 추출물을 유효성분으로 하여 아토피 피부염 또는 건조증을 개선하는 식품 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허공보 10-1083347호에서는 이끼 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선 또는 치료용 약학적 조성물이 개시되어 있다.A composition comprising as a main ingredient various natural substances for improving atopic dermatitis has been disclosed. In Korean Patent Publication No. 10-1418916, a composition for improving atopic dermatitis comprising an extract of Chrysantida or an active fraction isolated therefrom by chromatography as an active ingredient is disclosed Korean Patent Publication No. 10-1382115 discloses a food composition containing ginseng fruit extract as an active ingredient and improving atopic dermatitis or dryness. Korean Patent Publication No. 10-1083347 discloses a food composition containing a moss extract as an active ingredient A pharmaceutical composition for improving or treating atopic dermatitis is disclosed.

한편, 만수국아재비(Tagetes minuta)는 쓰레기풀이라 불리는 국화과의 한해살이 식물로서 야생에 널리 분포하는 식물이다.On the other hand, Tagetes minuta (Tagetes minuta) is an annual plant of Asteraceae called garbage grass and widely distributed in the wild.

우리나라에서는 만수국아재비를 주로 관상용으로 이용할 목적으로 일부 재배하고 있으나, 외국에서는 오래 전부터 관상용 이외에도 향료, 색소 및 약용 자원으로 이용하고 있다. 근래에는 남미 지역이나 인도, 남부 유럽 지역에서 상업적으로 재배되고 있다.In Korea, some plants are grown for the purpose of ornamental use, but in foreign countries, they have been used for fragrance, coloring and medicinal resources in addition to ornamental use. It is commercially grown in South America, India and southern Europe.

만수국아재비의 약용 자원으로서의 이용을 살펴보면, 용매 추출물이나 정유를 전통적인 민간처방으로서 사용하고 있는데, 예를 들어, 인도, 유럽, 남미, 및 미국의 남부 지역에서는 민간 처방으로 만수국아재비의 침출액(infusion)을 간 장해, 장내 질환, 설사, 복통, 두통, 폐렴, 기침, 곰팡이성 피부질환의 치료를 목적으로 이용되고 있을 뿐만 아니라 항경련, 항염증, 항균, 항미생물 효과도 있음이 밝혀져 있다[Radzen et al., Parfmer und Kosmetik, 67, 52-55(1986); Zygadlo et al., Lag. J. Essent. Oil Res., 6, 617-621(1994); Singh et al., Indian Perfumer, 39, 102-106(1995); Bicchi et al., Flavour Fragr. J., 12, 47-52(1997)].For example, in southern India, Europe, South America, and the United States, private prescriptions are used to control the infusion of raw water from aquatic plants. It has been shown to be effective for the treatment of liver disorders, intestinal diseases, diarrhea, abdominal pain, headache, pneumonia, cough and fungal skin diseases as well as anticonvulsant, anti-inflammatory, antibacterial and antimicrobial effects [Radzen et al , ≪ / RTI > Parfmer und Kosmetik, 67, 52-55 (1986); Zygadlo et al., Lag. J. Essent. Oil Res., 6, 617-621 (1994); Singh et al., Indian Perfumer, 39, 102-106 (1995); Bicchi et al., Flavor Fragr. J., 12, 47-52 (1997)).

이러한 만수국아재비를 활용한 예를 살펴보면, 대한민국 등록특허공보 10-0979059호에서 천연 염색을 위한 염료의 원료로 사용되고 있을 뿐이다. 즉, 만수국아재비를 원료로 하여 아토피 피부염 개선을 위한 조성물로 사용한 예는 아직 보고되지 않고 있다.As an example of utilizing such an abalone, Korean Patent Registration No. 10-0979059 merely serves as a raw material of a dye for natural dyeing. In other words, there has not yet been reported an example in which a composition for improvement of atopic dermatitis is used as a raw material for aquatic plants.

본 발명자들은 천연물인 만수국아재비의 추출물을 유효성분으로 사용할 때 아토피 피부염 개선을 위해 효능이 있음을 확인하고 이를 함유하는 조성물을 연구하여 본 발명을 완성하게 되었다.The inventors of the present invention have confirmed the efficacy for improving atopic dermatitis when using an extract of a natural product, Mansuo japonica as an active ingredient, and studied a composition containing the same to complete the present invention.

대한민국 등록특허공보 10-1418916호Korean Patent Publication No. 10-1418916 대한민국 등록특허공보 10-1382115호Korean Patent Publication No. 10-1382115 대한민국 등록특허공보 10-1083347호Korean Patent Publication No. 10-1083347 대한민국 등록특허공보 10-0979059호Korean Patent Publication No. 10-0979059

본 발명은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 아토피 피부염 개선의 효과를 얻는 것을 그 목적으로 한다.It is an object of the present invention to obtain an effect of improving atopic dermatitis by containing an extract of Radix Tamiflu as an active ingredient.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.In order to achieve the above object, the cosmetic composition for improving atopic dermatitis according to the present invention is characterized in that it contains an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

이때, 상기 만수국아재비 추출물은 만수국아재비를 C1~C4 알코올 또는 물과 C1~C4 알코올의 혼합물 중에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 메탄올에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물일 수 있다.At this time, the water extract of Suifuji radish can be an extract obtained by adding a water-soluble salt of C1-C4 or a mixture of water and C1-C4 alcohol and extracting it, preferably by adding it to methanol.

본 발명의 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 상기 만수국아재비 추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 97 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 20 중량%의 범위로 함유하는 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition for improving atopic dermatitis according to the present invention is characterized in that it contains 0.001 to 97% by weight, preferably 0.01 to 20% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.

상기와 같이 제시된 본 발명에 의한 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, 항알러지, 항산화, 항염증 효과를 나타내어 아토피 피부염을 개선하는 효과를 나타낸다.The cosmetic composition for improving atopic dermatitis according to the present invention as described above exhibits an antiallergic, antioxidant, anti-inflammatory effect and thus has the effect of improving atopic dermatitis by containing the extract of Radix guinea pigs as an active ingredient.

도 1은 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 β-헥소사미니다제 분비량 억제에 대한 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 ABTS 라디칼 소거능의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거능의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 NO 생성 억제능의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 양성 대조군에 대한 상대 함량을 나타낸 그래프이다.
FIG. 1 is a graph showing the results of analysis of inhibition of secretion amount of? -Hexosaminidase according to the concentration of the extract of Radix Salviae Radix extract of the present invention.
FIG. 2 is a graph showing the results of analysis of the ABTS radical scavenging ability according to the concentration of the extract of Radix Salviae Radix extract of the present invention.
FIG. 3 is a graph showing the results of analysis of DPPH radical scavenging ability according to the concentration of the extract of Radix Salviae Radix extract of the present invention.
FIG. 4 is a graph showing the results of analysis of inhibitory effect on NO production according to the concentration of the extract of Radix Salviae Radix extract of the present invention. FIG.
FIG. 5 is a graph showing the relative content of positive control group according to the concentration of the water extract of the present invention.

본 명세서에서, "아토피 피부염"은 그 발생의 직·간접적인 원인을 불문하고 당업계에서 아토피 피부염으로 분류되는 모든 질환을 포함하는 것으로 정의된다.As used herein, "atopic dermatitis" is defined as including any disease classified as atopic dermatitis in the art, regardless of its direct or indirect cause.

통상 아토피 피부염은 그 발병 시기 또는 그 발명 대상에 따라 유아형 아토피 피부염, 소아형 아토피 피부염, 성인형 아토피 피부염 그리고 임산부 아토피 피부염으로 분류되는데, 본 명세서에서 아토피 피부염은 이러한 모든 유형의 아토피 피부염을 포함하는 것으로서 이해되어야 한다.In general, atopic dermatitis is classified into infantile atopic dermatitis, infantile atopic dermatitis, adult atopic dermatitis, and maternal atopic dermatitis according to the onset period or the object of the invention. In this specification, atopic dermatitis includes all types of atopic dermatitis .

본 발명의 하기 실험예에서 확인할 수 있듯이 무작위로 선출된 아토피 피부염 증상을 갖는 100명(총 4 그룹)의 피검자들을 대상으로 임상실험을 실시한 결과, 약 85 내지 95% 전후의 피검자에 대해서 효과가 있는 것으로 나타났다.As shown in the following experimental examples of the present invention, clinical tests were conducted on 100 subjects (total 4 groups) having randomly selected atopic dermatitis symptoms, and as a result, it was found that about 85 to 95% Respectively.

이러한 결과는 무작위로 선출된 피검자들을 대상으로 하여 얻어진 결과라는 점에서, 본 발명의 아토피 피부염 개선제 조성물은 아토피 피부염의 발생 원인을 불문하고 모든 유형의 아토피 피부염에 그 효과가 있는 것으로 볼 수 있다.These results are obtained for randomly selected subjects. Thus, the composition for improving atopic dermatitis of the present invention may be effective for all types of atopic dermatitis regardless of the cause of atopic dermatitis.

본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 아토피 피부염의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.The term "improvement" as used in the present invention means all actions in which the symptoms of atopic dermatitis are alleviated or changed by administration of the composition of the present invention.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.The present invention is characterized by containing an extract of Fusarium oxysporum as an active ingredient.

상기 만수국아재비 추출물은 건조된 만수국아재비에 C1~C4 알코올 또는 물과 C1~C4 알코올의 혼합물 중에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물일 수 있다. 상기 C1~C4 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 중 어느 하나 또는 그 이상의 혼합물일 수 있다. 상기 알코올은 물과 혼합한 혼합용매로서 사용할 수도 있다.The above-mentioned water extract of Fertility Supernatant may be an extract obtained by adding C1-C4 alcohol or a mixture of water and C1-C4 alcohol to dried Fertilizer. The C1 to C4 alcohols may be any one or more of methanol, ethanol, propanol, isopropanol, and butanol. The alcohol may be used as a mixed solvent mixed with water.

본 발명에서 바람직한 일 실시예에서는 상기 추출에 메탄올을 사용한다.In one preferred embodiment of the present invention, methanol is used for the extraction.

구체적으로 설명하면, 상기 만수국아재비 추출물은 작두를 사용하여 2~3cm로 절단하여 사용한다. 만수국아재비의 절단물을 30~50℃의 온도에서 2~4일간 건조시킨 후, 400~600g의 건중량에 75~85 중량% 메탄올을 넣고 초음파 기기를 이용하여 추출하고 여과하여 제조한다.To be more specific, the above-mentioned Extracts of the Extra Virgin Rice are cut into 2 to 3 cm and used by using a cutting machine. The cut pieces of the mulberry leaves are dried at a temperature of 30 to 50 ° C. for 2 to 4 days, and 75 to 85% by weight of methanol is added to the dry weight of 400 to 600 g, and extracted with ultrasonic equipment and filtered.

본 발명의 만수국아재비 추출물은 피부 주름 개선용 화장료 조성물의 유효성분으로 사용되며, 이때 상기 만수국아재비 추출물은 조성물 중량에 대하여 0.001 내지 97 중량%의 범위로 함유될 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 20 중량%의 범위로 함유될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.The extract of Radix Salvia Radix extract of the present invention is used as an active ingredient of a cosmetic composition for improving skin wrinkles, wherein the Radix sativus extract may be contained in an amount of 0.001 to 97% by weight, preferably 0.01 to 20% %, ≪ / RTI > but is not limited thereto.

화장료 조성물의 경우, 상기 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 하여, 그 용도에 따라, 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.In the case of a cosmetic composition, the cosmetic composition may be prepared by using the above-mentioned extract of Radix Seed sauvignon as an active ingredient, and for example, a solution, a gel, a solid or a paste anhydrous product, an emulsion obtained by dispersing an oil phase in water, a suspension, a microemulsion, , Microgranules or ionic forms (liposomes), non-ionic follicular dispersions, creams, skins, lotions, powders, ointments, sprays or conical sticks. It can also be prepared in the form of a foam or an aerosol composition further containing a compressed propellant.

상기 화장료 조성물은 본 발명의 만수국아재비 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may further comprise at least one selected from the group consisting of fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softening agents, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, , Ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, barrier agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or cosmetics And may contain adjuvants conventionally used in the cosmetics field, such as any other ingredient.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예에 의하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Experimental Examples.

단, 하기 실시예, 실험예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following Examples and Experimental Examples are merely illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by Examples and Experimental Examples.

<실시예> <Examples>

*만수국아재비 추출물은 아래와 같이 제조되었다.* Extracts of Mulgariae japonica were prepared as follows.

사용한 모든 용매들은 분석용 등급으로써, Sigma-Aldrich(미국)나 Merck(미국)에서 구입하였다.All solvents used were analytical grade, purchased from Sigma-Aldrich (USA) or Merck (USA).

만수국아재비의 전초를 작두를 이용하여 2.54㎝ 정도로 고르게 자른 후, 건조 오븐에서 40℃로 3일간 건조시켰다. 약 500g의 식물 건중량으로 한 전초를 80 중량% 메탄올에서 초음파 기기를 이용하여 추출하였으며, 이들 액체를 멤브레인 필터(0.2 ㎛)에 통과시켜 여과한 후, 진공상태에서 용매를 제거하여 메탄올 추출물을 남겼다. 이러한 과정을 통하여, 만수국아재비의 구성성분 중 섬유소 등은 정제 과정을 통해 걸러지고, 만수국아재비 추출물은 만수국아재비의 미량성분을 주로 포함하는 메탄올 추출물이 되었다. The outpasted shoots were cut into 2.54 ㎝ by using a round bar, and then dried in a drying oven at 40 캜 for 3 days. The outgrowths of about 500 g plant weight were extracted with 80 wt% methanol using an ultrasonic device. These liquids were filtered through a membrane filter (0.2 μm), and the solvent was removed in a vacuum to leave a methanol extract. Through this process, the cellulose of the components of the water ginseng was filtered through the purification process, and the water extract of the ginseng extract was a methanol extract mainly containing trace components of the water ginseng.

<실험예 1> 항알러지 유효성 평가 <Experimental Example 1> Evaluation of anti-allergy effectiveness

항알러지 유효성은 β-헥소사미니다제 양을 측정하여 평가하였다. 상기 β-헥소사미니다제 분비 양의 억제는 면역세포의 탈과립화 방지 정도를 나타내는 지표로서 분석 결과를 도 1에 도시하였다.Anti-allergic efficacy was assessed by measuring the amount of β-hexosaminidase. The inhibition of β-hexosaminidase secretion is an index indicating the degree of prevention of deaggregation of immune cells, and the results of the analysis are shown in FIG.

실험은 다음과 같이 수행되었다.The experiment was carried out as follows.

먼저, Rat basophlic leukemia 셀 라인인 RBL-2H3 세포주를 15% FBS, 100 unit/ml의 페니실린과 스트렙토마이신을 포함하는 MEM 배지와 37℃, 5% CO2 조건에서 24 well plate에 2ㅧ105cells/well로 분주한 후 24시간 배양하였다. 상등액 제거 후 25 ng/ml anti-DNP IgE가 포함된 MEM 배지를 넣고 4시간 배양 후 PIPES buffer로 두 번 세척하고, 4 mM MgCl2, 5.6 mM glucose, 0.1% BSA를 포함시킨 PIPES buffer를 넣고 10분 배양하였다. First, Rat basophlic leukemia cell line in RBL-2H3 cell line 15% FBS, 100 unit / ml of penicillin and streptomycin MEM medium containing hygromycin and 37 ℃, 2 ㅧ 10 5 cells on a 24 well plate in 5% CO 2 conditions / well and cultured for 24 hours. After removal of the supernatant, MEM medium containing 25 ng / ml anti-DNP IgE was added, incubated for 4 hours, washed twice with PIPES buffer, and PIPES buffer containing 4 mM MgCl 2 , 5.6 mM glucose and 0.1% Min.

다음으로, 시료를 25, 50, 100 ㎍/㎖의 농도로 20분 처리 후 50 ng/㎖ DNP-BSA 넣고 20분간 반응하였다. ice에서 10분 방치하여 반응을 종결시킨 후 상등액을 96 well plate에 넣고 1mM P-니트로페닐-아세틸-β-D-글루코사미니드를 넣은 후 37℃에서 1시간 반응시켰다. 다음으로, stop solution (0.1 M NaHCO3, 0.1 M Na2CO3) 을 넣고 반응을 종결시킨 후 405nm 파장대에서 ELISA 리더로 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 ketotifen(100 ㎍/ml)을 사용하였다.Next, the samples were treated with 25, 50, and 100 μg / ml of 20 ng / ml of DNP-BSA and reacted for 20 min. After the reaction was terminated by ice for 10 minutes, the supernatant was added to a 96-well plate, and 1 mM P-nitrophenyl-acetyl-β-D-glucosaminyl was added thereto and reacted at 37 ° C. for 1 hour. Next, stop solution (0.1 M NaHCO 3 , 0.1 M Na 2 CO 3 ) was added, and the absorbance was measured with an ELISA reader at 405 nm wavelength band. Ketotifen (100 ㎍ / ml) was used as a positive control.

측정에 따른 50% 저해농도(IC50)를 표 1에 나타내었다.The 50% inhibitory concentration (IC 50 ) according to the measurement is shown in Table 1.

IC50(㎍/㎖)IC 50 ([mu] g / ml) 만수국아재비 추출물Extracts 92.7992.79 KetotifenKetotifen 38.9738.97

세포독성 평가 결과 본 발명의 만수국아재비 추출물에 있어서 양성 대조군에 비해 훨씬 높은 세포 생존률을 나타내어 세포독성이 적은 것을 확인하였다.As a result of the cytotoxicity evaluation, it was confirmed that the extract of Mulberry Soup of the present invention had much higher cell survival rate than the positive control and thus the cytotoxicity was low.

또한, 도 1의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 탈과립화 억제 효과가 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 항알러지 효과를 나타내는 것이며, 화장료 조성물로 사용할 때의 아토피 피부염 개선의 효과를 기대할 수 있는 결과이다.1, it was confirmed that the effect of inhibiting degranulation is dependent on the concentration of the extract of Radix guinea pigs of the present invention. These results demonstrate the antiallergic effect of the extract of Radix Salviae Radix extract of the present invention and can be expected to have the effect of improving atopic dermatitis when used as a cosmetic composition.

<실험예 2> 항산화 유효성 평가 <Experimental Example 2> Evaluation of antioxidant effectiveness

항산화 유효성은 ABTS 라티칼 소거능과 DPPH 라디칼 소거능을 측정하여 평가하였다.Antioxidant efficacy was evaluated by measuring ABTS latacity and DPPH radical scavenging ability.

ABTS 라디칼 소거능은 아래와 같이 평가하였으며, 그 결과는 도 2에 도시하였다.The ABTS radical scavenging ability was evaluated as follows, and the results are shown in Fig.

7 mM ABTS buffer와 2.45 mM potassium persulfate buffer(K2S2O8)를 제조한 후 ABTS: K2S2O8을 2:1의 부피비로 섞은 후 12~16시간 차광하여 반응시켰다. 다음으로, stock buffer를 734nm에서 측정한 O.D. 값이 0.70ㅁ0.02가 나오도록 희석하고 buffer 100㎕ 농도별로 희석한 추출물 시료 100㎕를 첨가하고 실온에서 6분간 반응시켰다. 734nm에서 흡광도를 측정하여 각각의 시료에 대한 IC50 값을 구해 평가하였다. 양성대조군으로 항산화제인 BHA를 사용하였다.The reaction mixture was prepared by mixing 7 mM ABTS buffer and 2.45 mM potassium persulfate buffer (K 2 S 2 O 8 ), mixing ABTS: K 2 S 2 O 8 in a volume ratio of 2: 1 and shading for 12 to 16 hours. Next, the stock buffer was diluted so that the OD value measured at 734 nm was 0.70, 0.02, and 100 μl of the extract sample diluted by 100 μl of the buffer was added, followed by reaction at room temperature for 6 minutes. The absorbance was measured at 734 nm and the IC 50 value for each sample was determined and evaluated. BHA, an antioxidant, was used as a positive control.

측정에 따른 50% 저해농도(IC50)를 표 2에 나타내었다.The 50% inhibitory concentration (IC 50 ) according to the measurement is shown in Table 2.

IC50(㎍/㎖)IC 50 ([mu] g / ml) 만수국아재비 추출물Extracts 28.1428.14 BHABHA 3.373.37

세포독성 평가 결과 본 발명의 만수국아재비 추출물에 있어서 양성 대조군에 비해 훨씬 높은 세포 생존률을 나타내어 세포독성이 적은 것을 확인하였다.As a result of the cytotoxicity evaluation, it was confirmed that the extract of Mulberry Soup of the present invention had much higher cell survival rate than the positive control and thus the cytotoxicity was low.

또한, 도 2의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 ABTS 라디칼 소거능이 증가하는 경향을 확인할 수 있었다.2, the ABTS radical scavenging activity tended to increase with the concentration of the extract of the present invention.

다음으로, DPPH 라디칼 소거능을 확인하기 위하여, DPPH 용액과 시료를 넣은 반응액을 30분 동안 상온에서 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과는 도 3에 도시하였다.Next, in order to confirm the DPPH radical scavenging ability, the reaction solution containing the DPPH solution and the sample was reacted at room temperature for 30 minutes, and the absorbance was measured at 517 nm using an ELISA reader. The results are shown in FIG.

또한, 측정에 따른 50% 저해농도(IC50)를 표 3에 나타내었다.In addition, the 50% inhibitory concentration (IC 50 ) according to the measurement is shown in Table 3.

IC50(㎍/㎖)IC 50 ([mu] g / ml) 만수국아재비 추출물Extracts 222.3222.3 BHABHA 19.119.1

세포독성 평가 결과 본 발명의 만수국아재비 추출물에 있어서 양성 대조군에 비해 훨씬 높은 세포 생존률을 나타내어 세포독성이 적은 것을 확인하였다.As a result of the cytotoxicity evaluation, it was confirmed that the extract of Mulberry Soup of the present invention had much higher cell survival rate than the positive control and thus the cytotoxicity was low.

또한, 도 3의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 DPPH 라디칼 소거능이 증가하는 경향을 확인할 수 있었다.The results of FIG. 3 indicate that DPPH radical scavenging ability tends to increase with the concentration of the water extract of the present invention.

이러한 ABTS 및 DPPH 라디칼 소거능에 대한 결과는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 항알러지 효과를 나타내는 것이며, 화장료 조성물로 사용할 때의 아토피 피부염 개선의 효과를 기대할 수 있는 결과이다.The results of the ABTS and DPPH radical scavenging activity show the antiallergic effect of the water extract of the present invention and can be expected to have the effect of improving atopic dermatitis when used as a cosmetic composition.

<실험예 3> 항염증 유효성 평가 <Experimental Example 3> Evaluation of anti-inflammatory effectiveness

항염증 유효성은 Raw264.7 cell의 NO synthesis 유도하고, 이로부터 NO assay를 분석하여 항염증 효능을 평가하였으며, MTT assay를 분석하여 세포 독성을 평가하였다.The anti - inflammatory efficacy was induced by NO synthesis in Raw264.7 cell, and the anti - inflammatory effect was evaluated by analyzing the NO assay. The cytotoxicity was evaluated by analyzing the MTT assay.

항염증 유효성을 평가하기 위한 Raw264.7 cell의 NO synthesis는 아래와 같이 수행되었다.The NO synthesis of Raw264.7 cell to evaluate anti-inflammatory efficacy was performed as follows.

마우스 대식세포인 raw264.7 cell을 10% FBS DMEM 배지를 넣고 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다. Raw264.7 대식세포를 96 well plate에 4.3ㅧ104 cells/well의 세포 수로 분주하고 24시간 후 내독소로 작용하여 NO synthesis mitogen으로 쓰이는 Lipopolysacharide를 0.5 ㎍/㎖농도로 처리하였다. Mouse macrophages, raw 264.7 cells, were cultured in a 10% FBS DMEM medium at 37 ° C and 5% CO 2 . Raw 264.7 macrophages were seeded at a density of 4.3 ㅧ 104 cells / well in a 96 well plate and treated with Lipopolysacharide, a NO synthesis mitogen, at a concentration of 0.5 ㎍ / ㎖ for 24 hours.

다음으로 37℃, 5% CO2의 조건에서 1시간 30분 인큐베이션한 후 시료를 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 500 ㎍/㎖의 농도 또는 25, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖의 농도까지 처리하고, 24시간 인큐베이션하였다.After incubation for 1 hour and 30 minutes at 37 ° C and 5% CO 2 , samples were incubated at concentrations of 6.25, 12.5, 25, 50, 100 and 500 μg / ml or 25, 50, 100, 200 and 400 μg / ml , And incubated for 24 hours.

다음으로 항염증 효능평가를 위하여 아래와 같이 NO assay를 분석하였다.Next, the NO assay was analyzed for anti-inflammatory efficacy as follows.

1M NaNO2를 표준곡선으로 0, 1.56 μM, 3.12 μM, 6.25 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM, 100 μM이 되도록 희석하여 기준값을 잡았다(Reference 1). 다음으로, 1% sulfanilamide와 0.1% N-(1-naphtyl)ethylenediamine dihydrochloride 시약을 1:1의 부피비로 섞고, 혼합시약과 Raw264.7 cell의 NO synthesis 유도 실험의 시료 처리 후 24시간 배양된 배지상등액을 1:1의 부피비로 각각 50 ㎕씩 섞어주고 10분간 상온에 보관한 후 540 nm에서 ELISA 측정하여 대조군 대비 NO생성 억제능을 측정하였다.1M NaNO 2 was diluted to a standard curve of 0, 1.56 μM, 3.12 μM, 6.25 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM and 100 μM to obtain the reference value (Reference 1). Next, 1% sulfanilamide and 0.1% N- (1-naphtyl) ethylenediamine dihydrochloride reagent were mixed in a volume ratio of 1: 1, and the culture supernatant of the culture supernatant Were mixed at a volume ratio of 1: 1, and the mixture was stored at room temperature for 10 minutes. ELISA was then measured at 540 nm to measure the inhibitory effect of NO production on the control.

다음으로 세포독성평가를 위하여 아래와 같이 MTT assay를 분석하였다.Next, MTT assay was analyzed for cytotoxicity as follows.

NO assay 분석 실험에 사용된 상층액을 제외한 나머지 상층액을 제거하고 5 ㎎/㎖ MTT solution이 10% 포함된 serum-free 배지를 100 ㎕씩 넣었다. 37℃, 5% CO2 인큐베이터에 넣어 2시간 보관하였다. 다시 배지를 제거하고 DMSO를 100 ㎕/well로 넣었다. 마지막으로 Shaker에서 15 분간 용해시키고, ELISA reader를 이용해 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군은 L-NNMA를 사용하였다.NO assay The remaining supernatant was removed and 100 μl of serum-free medium containing 10% 5 mg / ml MTT solution was added. And incubated in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C for 2 hours. The medium was removed again and DMSO was added to 100 μl / well. Finally, it was dissolved in a Shaker for 15 minutes and absorbance was measured at 540 nm using an ELISA reader. The positive control group was L-NNMA.

측정에 따른 50% 저해농도(IC50)를 표 4에 나타내었다.The 50% inhibitory concentration (IC 50 ) according to the measurement is shown in Table 4.

IC50(㎍/㎖)IC 50 ([mu] g / ml) 만수국아재비 추출물Extracts 222.3222.3 L-NNMAL-NNMA 19.119.1

세포독성 평가 결과 본 발명의 만수국아재비 추출물에 있어서 양성 대조군에 비해 훨씬 높은 세포 생존률을 나타내어 세포독성이 적은 것을 확인하였다.As a result of the cytotoxicity evaluation, it was confirmed that the extract of Mulberry Soup of the present invention had much higher cell survival rate than the positive control and thus the cytotoxicity was low.

또한, 도 4의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 NO 생성 억제능이 증가하는 경향을 확인할 수 있었다. 또한, 도 5의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 양성 대조군에 대한 상대 함량이 일정한 것으로 나타나 본 발명의 만수국아재비 추출물의 항염증 유효성을 확인할 수 있었다.In addition, as shown in FIG. 4, it was confirmed that the inhibitory effect on the NO production was increased according to the concentration of the water extract of the present invention. In addition, the results of FIG. 5 show that the relative content of the extract of the present invention to the positive control was constant depending on the concentration of the extract of the present invention. Thus, the anti-inflammatory activity of the extract of the present invention was confirmed.

*이상과 같이 본 발명의 만수국아재비 추출물은 항알러지, 항산화, 항염증의 효과를 나타내었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 만수국아재비 추출물을 화장료 조성물의 유효성분으로 사용할 때 아토피 피부염 개선의 효과를 나타낼 것으로 기대되었다.* As described above, the extract of the present invention has the effect of antiallergic, antioxidant and anti-inflammation. From these results, it was expected that the use of the extract of the present invention as an active ingredient of a cosmetic composition would have the effect of improving atopic dermatitis.

상기는 본 발명의 바람직한 실시예를 참고로 설명하였으며, 상기의 실시예에 한정되지 아니하고, 상기의 실시예를 통해 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명의 요지를 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변경으로 실시할 수 있는 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments, but, on the contrary, It is possible to carry out various changes in the present invention.

Claims (4)

만수국아재비(Tagetes minuta) 전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 항알러지용 조성물로서,
상기 만수국아재비 전초 추출물은 만수국아재비 전초를 메탄올, 에탄올, 물 또는 이들의 혼합용매 중에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물이고,
상기 항알러지용 조성물은 아토피 피부염에 그 개선 용도로 적용될 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
A composition for anti-allergy comprising extractant of Tagetes minuta as an active ingredient,
The above extract of Extensible Fertility Supernatant is an extract obtained by adding Extensive Supernatant of Fertility Supernatant to methanol, ethanol, water or a mixed solvent thereof,
Wherein the composition for anti-allergy is applicable to improvement of atopic dermatitis.
제1항에 있어서,
상기 만수국아재비 전초 추출물은 물과 메탄올의 혼합용매 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the extract of Fifty Millet of Anguilla japonica is a mixed solvent extract of water and methanol.
제1항에 있어서,
상기 만수국아재비 전초 추출물은 80% 메탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the Fertilizer Extract is a 80% methanol extract.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
4. The method according to any one of claims 1 to 3,
Wherein the composition is a cosmetic composition.
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