KR101869738B1 - 꽃송이버섯 균사체 배양방법, 상기 배양방법을 이용한 베타글루칸 원료 제조방법 및 상기 배양방법에 사용되는 배양병 - Google Patents

꽃송이버섯 균사체 배양방법, 상기 배양방법을 이용한 베타글루칸 원료 제조방법 및 상기 배양방법에 사용되는 배양병 Download PDF

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Abstract

본 발명은 곡립배지를 이용한 꽃송이버섯 균사체 배양방법, 베타글루칸 원료 제조방법 및 상기 배양방법에 사용되는 배양병에 관한 것이다.
상기 꽃송이버섯 균사체 배양방법은, a) 곡립으로 배지를 조성하는 단계; b) 상기 배지를 내열성 배양병에 입병하는 단계; c) 상기 배양병 내의 배지를 살균하는 단계; d) 상기 배양병 내의 배지를 냉각하는 단계; e) 무균실에서 상기 배양병 내의 배지에 꽃송이버섯 종균을 접종하는 단계; f) 상기 배양병을 밀폐하여 꽃송이버섯 균사체를 1차로 배양하는 단계; 및 g) 상기 배양병 내에 여과된 공기가 드나들도록 하며 꽃송이버섯 균사체를 2차로 배양하는 단계;를 포함한다.

Description

꽃송이버섯 균사체 배양방법, 상기 배양방법을 이용한 베타글루칸 원료 제조방법 및 상기 배양방법에 사용되는 배양병{Cultivating method Sparassis crispa mycelium, beta-glucan manufacturing process with the method and culture bottle for the method}
본 발명은 곡립배지를 이용한 꽃송이버섯 균사체 배양방법, 베타글루칸 원료 제조방법 및 상기 배양방법에 사용되는 배양병에 관한 것이다.
베타글루칸(β-glucan)은 다당류의 일종으로서, 인체의 면연력을 높여 암, 고혈합 및 당뇨 등에 유효하다.
이러한 베타글루칸은 꽃송이버섯의 자실체에 100g 당 43.6g이 함유되어 있다. 꽃송이버섯은 담자균류 민주름버섯목 꽃송이버섯과의 버섯으로서, 한국, 일본, 유럽, 북아메리카 및 오스트레일리아 등지에서 자생한다.
등록번호 10-0449947호의 '꽃송이버섯의 인공재배법'에서는, a) 낙엽송 가루 및 활엽수 가루를 배합한 혼합물을 포함하는 배지를 제조하는 단계, b) 상기 배지에 꽃송이버섯 종균을 접종하는 단계, c) 균사체를 만연시킨 후 자실체 원기를 형성시키는 단계, d) 자실체를 형성시키는 단계, 및 e) 자실체를 성장시키는 단계를 통해 꽃송이버섯을 재배한다.
그리고 등록번호 10-0474980의 '꽃송이 버섯의 인공 재배 방법'에서는, a) 침엽수와 광엽수의 가루를 배합하여 배지를 형성하는 과정, b) 배지를 고온상압 살균하는 과정, c) 탄소원, 질소원, 무기염류 및 수소이온농도 조정제를 첨가하여 형성된 액체배지에서 배양된 균사체를 상기 b) 단계에서 형성된 배지에 접종하여 균사를 배양하는 과정, 및 d) 강온, 광조사 배양과정을 통해 꽃송이버섯을 재배한다.
그러나 상기한 방법들은 꽃송이버섯 자실체를 성숙시키기까지 많은 시간이 소요되는 문제점이 있고, 자실체보다는 균사체에 보다 많은 양의 베타글루칸이 함유되어 있으므로 베타글루칸을 얻기 위해서 자실체가 될 때까지 꽃송이버섯을 성장시키는 것은 불합리한 점이 있다.
KR 10-1998-0044151 A
본 발명은 상기한 것과 같은 종래기술들의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 단기간에 꽃송이버섯의 균사체를 효과적으로 배양할 수 있는 방법, 상기 배양방법을 이용한 베타글루칸 원료 제조방법 및 상기 배양방법에 사용되는 배양병을 제공하는 데에 그 목적이 있다.
상기한 것과 같은 과제를 해결하기 위한 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, a) 곡립으로 배지를 조성하는 단계; b) 상기 배지를 내열성 배양병에 입병하는 단계; c) 상기 배양병 내의 배지를 살균하는 단계; d) 상기 배양병 내의 배지를 냉각하는 단계; e) 무균실에서 상기 배양병 내의 배지에 꽃송이버섯 종균을 접종하는 단계; f) 상기 배양병을 밀폐하여 꽃송이버섯 균사체를 1차로 배양하는 단계; 및 g) 상기 배양병 내에 여과된 공기가 드나들도록 하며 꽃송이버섯 균사체를 2차로 배양하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 꽃송이버섯 균사체 배양방법이 제공된다.
상기 a)단계에서는, 상기 배지에 염산, 초산, 유산 중 적어도 어느 하나로 구성되는 수소이온농도 조정제를 첨가하고, 상기 배지에 제1인산칼슘, 황산마그네슘, 폴리인산나트륨, 제1인산칼륨, 제2인산칼륨 중 적어도 어느 하나로 구성되는 무기염류를 첨가하는 것이 바람직하다.
상기 b)단계 전에는, 배양병 본체;와 상기 배양병 본체의 입구부분 둘레를 감싸는 원통부, 상기 원통부의 내부공간에서 배양병 본체의 내부공간에 인접하여 위치하는 밀폐층, 및 상기 원통부의 내부공간에서 상기 배양병 본체의 내부공간 반대측에 위치하는 필터층으로 이루어지는 뚜껑;을 구비하는 배양병을 준비하는 단계가 더 포함되고, 상기 f)단계에서는 상기 밀폐층에 의해 배양병을 밀폐하며, 상기 g)단계에서는 상기 밀폐층을 파괴하여 필터층에 의해 공기가 여과되도록 할 수 있다.
상기 b)단계 전에는, 배양병 본체; 상기 배양병 본체의 입구부분 둘레를 감싸는 원통부와 상기 원통부의 내부공간에서 배양병 본체의 내부공간에 인접하여 위치하는 필터층으로 이루어지는 필터부; 및 상기 필터부에서 상기 배양병 본체의 내부공간 반대측에 체결되는 밀폐뚜껑;을 구비하는 배양병을 준비하는 단계가 더 포함되고, 상기 f)단계에서는 상기 밀폐뚜껑을 필터부에 체결하여 배양병을 밀폐하며, 상기 g)단계에서는 상기 밀폐뚜껑을 제거하여 필터층에 의해 공기가 여과되도록 할 수 있다.
상기 필터층은 유산지로 이루어지는 것이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 실시예에 의하면, 상기 꽃송이버섯 균사체 배양방법을 통해 꽃송이버섯 균사체를 배양하는 단계; 나) 상기 배양병 내의 꽃송이버섯 균사체를 살균하는 단계; 다) 상기 배양병에서 꽃송이버섯 균사체를 탈병하는 단계; 라) 상기 꽃송이버섯 균사체를 건조하는 단계; 및 마) 상기 꽃송이버섯 균사체를 분쇄하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 베타글루칸 원료 제조방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시예에 의하면, 배양병 본체;와 상기 배양병 본체의 입구부분 둘레를 감싸는 원통부, 상기 원통부의 내부공간에서 배양병 본체의 내부공간에 인접하여 위치하는 밀폐층, 및 상기 원통부의 내부공간에서 상기 배양병 본체의 내부공간 반대측에 위치하는 필터층으로 이루어지는 뚜껑;을 구비하는 것을 특징으로 하는 꽃송이버섯 균사체 배양방법에 사용되는 배양병이 제공된다.
본 발명의 또 다른 실시예에 의하면, 배양병 본체; 상기 배양병 본체의 입구부분 둘레를 감싸는 원통부와 상기 원통부의 내부공간에서 배양병 본체의 내부공간에 인접하여 위치하는 필터층으로 이루어지는 필터부; 및 상기 필터부에서 상기 배양병 본체의 내부공간 반대측에 체결되는 밀폐뚜껑;을 구비하는 것을 특징으로 하는 꽃송이버섯 균사체 배양방법에 사용되는 배양병이 제공된다.
본 발명에 의한 꽃송이버섯 균사체 배양방법은, 우수한 품질의 꽃송이버섯 균사체를 배양할 수 있다.
그리고 베타글루칸의 원료를 단시간 내에 얻을 수 있다.
도 1은 본 발명에 의한 꽃송이버섯 균사체 배양방법의 순서도이다.
도 2 및 도 3은 본 발명에 의한 꽃송이버섯 균사체 배양방법을 적용한 경우의 효과에 관한 설명도이다.
도 4 및 5는 상기 본 발명에 의한 꽃송이버섯 균사체 배양방법에 사용되는 배양병의 단면도이다.
도 6은 상기 꽃송이버섯 균사체 배양방법을 이용한 베타글루칸 원료 제조방법의 순서도이다.
이하에서는 본 발명의 구체적인 실시예에 대해 도면을 참고하여 자세하게 설명한다.
도 1에는 본 발명에 의한 꽃송이버섯 균사체 배양방법의 순서도가 도시되어 있다.
본 발명에 의한 꽃송이버섯 균사체 배양방법은, a) 곡립으로 배지를 조성하는 단계(S11); b) 상기 배지를 내열성 배양병에 입병하는 단계(S12); c) 상기 배양병 내의 배지를 살균하는 단계(S13); d) 상기 배양병 내의 배지를 냉각하는 단계(S14); e) 무균실에서 상기 배양병 내의 배지에 꽃송이버섯 종균을 접종하는 단계(S15); f) 상기 배양병을 밀폐하여 꽃송이버섯 균사체를 1차로 배양하는 단계(S16); 및 g) 상기 배양병 내에 여과된 공기가 드나들도록 하며 꽃송이버섯 균사체를 2차로 배양하는 단계(S17);를 포함한다.
아래에서는 상기 꽃송이버섯 균사체 배양방법에 대하여 단계별로 상세하게 설명하도록 한다.
a) 배지 조성 단계(S11);
꽃송이버섯 균사체의 배양에 필요한 영양물질을 포함하는 배지를 조성한다. 배지는 쌀, 보리, 밀, 옥수수, 조 등의 곡립을 주요 구성물로 하여 꽃송이버섯 균사체의 배양에 필요한 탄소원과 질소원을 별도로 추가할 필요가 없도록 한다. 곡립 중에서도 보리는 베타글루칸 함유량이 높으므로 이를 배지의 주요 구성물로 하는 것이 바람직하다.
상기 배지 조성 단계(S11)에서 배지의 pH는 염산, 초산, 유산 중 적어도 어느 하나로 구성되는 수소이온농도 조정제에 의하여 5~6으로 조정된다. pH의 정확한 조정을 위하여 수산화나트륨, 수산화칼륨, 염기성아미노산 등의 염기성 물질이 배지에 첨가될 수도 있다.
그리고 제1인산칼슘, 황산마그네슘, 폴리인산나트륨, 제1인산칼륨, 제2인산칼륨 중 적어도 어느 하나로 구성되는 무기염류를 첨가하여 곡립에 의해 충분하지 않을 수 있는 영양물질을 보충한다. 무기염류는 곡립의 중량 대비 0.5~1.0 중량%가 되도록 한다.
배지에 첨가되는 상기 물질들은 식용이 가능하여야 한다.
상기 수소이온농도 조정제 및 무기염류에 의하여 배지는 꽃송이버섯 균사체의 배양에 보다 알맞은 조건을 갖추게 된다.
배지에는 상기한 물질들 외에도 음용수를 첨가하여 습도를 조절해준다.
b) 배지 입병 단계(S12);
조성된 배지를 배양이 이루어질 배양병 내에 입병한다.
후속의 살균 단계에서 배양병이 변형되지 않도록 배양병은 내열성 PP와 같이 내열성을 가지는 재질로 이루어지는 것을 사용한다.
c) 배지 살균 단계(S13);
배지에 포함된 잡균을 제거하기 위하여 배지가 입병되어 있는 배양병을 살균한다.
이에 의해 꽃송이버섯 균사체의 생장에 방해가 될 수 있는 세균 및 곰팡이균 등이 제거된다.
상기 배지 살균 단계(S13)는, 100~105℃에서 30~50분간 진행되는 1차 살균과정과 118~121℃에서 20~40분간 진행되는 2차 살균과정으로 이루어져, 배지를 보다 효과적으로 살균해줄 수 있다.
d) 배지 냉각 단계(S14);
고온으로 살균한 배지를 꽃송이버섯 균사체가 생장할 수 있는 온도가 될 때까지 냉각시킨다.
배지는 15~25℃, 바람직하게는 22~25℃가 될 때까지 냉각된다.
e) 종균 접종 단계(S15);
살균이 완료된 배지에 꽃송이버섯의 종균을 접종한다. 접종시 배지가 잡균 등에 의해 오염되는 것을 방지하기 위하여 꽃송이버섯 종균의 접종은 무균실에서 이루어진다.
상기 종균 접종 단계에서 사용되는 꽃송이버섯의 종균은 아래와 같은 과정을 거쳐 종균 배양된다.
ⅰ) 꽃송이버섯 자실체를 조직분리하여 22~25℃에서 평판배지 표면의 80~90%를 덮도록 배양하는 단계; ⅱ) 상기 ⅰ단계에서 배양된 균을 액체배지에 접종하여 22~25℃에서 25~30일간 배양하는 단계; ⅲ) 상기 ⅱ단계에서 배양된 균을 평판배지에서 2차례 계대배양하는 단계; ⅳ) 상기 ⅲ단계에서 배양된 균을 액체배지에 접종하여 8~10일간 정치배양 한 후, 3~5일 간격으로 교반하면서 25~30일간 배양하는 단계; ⅴ) 상기 ⅳ단계에서 배양된 균을 살균된 액탱크 내의 액체배지에 접종하고 온도를 22~25℃로, 공기 압력을 0.2~1kgf/㎠으로 유지하며 균을 생장시키는 단계.
이러한 과정들에 의해 꽃송이버섯 균사체의 재배에 필요한 충분한 양의 종균을 얻을 수 있게 된다.
종균 배양시 사용되는 액체배지는, 탄소원을 액체배지 중량당 2.0~3.5 중량%, 질소원을 액체배지 중량당 0.5~1.5 중량%, 그리고 무기염류를 포함할 수 있다. 상기 탄소원은 옥수수전분, 과당, 포도당,덱스트린 및 가용성 전분 중 적어도 어느 하나로 이루어지며, 질소원은 펩톤(Peptone), 효모추출물 및 맥아추출물 중 적어도 어느 하나로 이루어진다. 그리고 무기염류는 인산칼륨, 인산나트륨, 염화칼슘 및 황상마그네슘 등으로 이루어진다.
f) 1차 배양 단계(S16);
배양병을 밀폐하여 잡균 등이 들어가는 것을 방지하면서 꽃송이버섯 균사체를 1차로 배양한다.
상기 1차 배양단계(S16)는, 온도 22~25℃, CO2 농도 1800~2500ppm 조건을 유지하면서 진행되는 것이 꽃송이버섯 균사체의 원활한 생장을 위한 측면에서 유리하다.
g) 2차 배양 단계(S17);
1차 배양 단계(S17)를 진행함에 의해 꽃송이버섯 균사체가 일정치 이상의 생장력을 가지게 되면, 배양병 내에 여과된 공기가 유입되도록 하면서 꽃송이버섯 균사체를 2차로 배양한다.
배양병을 밀폐하면 외부에서 잡균 등이 배양병 내로 들어오는 것은 방지할 수 있지만 배양시 발생하는 내부열에 의해 배양병 내의 온도가 올라가고 CO2 농도가 높아질 수 있는데, 배양병 내에 여과된 공기를 유입시켜주면 온도와 CO2 농도를 일정하게 유지해줄 수 있다.
도 2는 배양실의 온도를 25℃로 하고 배양병 내의 초기 온도를 18℃로 하여 꽃송이버섯 균사체를 배양했을 때 배양병 내의 온도 변화와 균사체성장률의 변화를 나타낸 그래프이다. 도 2의 (a)는 배양병을 밀폐하였다가 배양병에 여과된 공기를 유입시켜준 경우로, 배양병 내의 온도변화가 크지 않고 균사체성장률이 지속적으로 높아지는 것을 볼 수 있다. 반면, 배양병을 계속해서 밀폐하여 꽃송이버섯 균사체를 배양했을 때에는 도 2의 (b)에 도시되어 있는 것과 같이 배양병 내의 온도가 34℃ 정도까지 올라가고 균사체성장률도 일정 정도에서 고착된다.
배양 중간에 배양병 내에 여과된 공기를 유입시켜주는 경우와 계속해서 배양병을 밀페시키는 경우는, 배양병 내의 오염률에 있어서도 차이를 보인다. 즉, 배양 중간에 배양병 내에 여과된 공기를 유입시켜준 경우는, 배양 중 100병당 2병에서 푸른곰팡이가 발생하였고, 도 3의 (a)에 도시되어 있는 것과 같이 2차 배양 단계(S17) 시작 후, 즉 배양병 내에 여과된 공기를 유입시켜준 후 15일만에 푸른곰팡이가 발생하여 5일간 10㎜ 정도 성장하였다. 그러나 계속해서 배양병을 밀페시킨 경우에는 배양 중 100병당 8병에서 푸른곰팡이가 발생하였고, 도 3의 (b)에 도시되어 있는 것과 같이 보다 이른 시기에 푸른곰팡이가 발생하여 빠르게 성장하였다.
본 발명에 의한 꽃송이버섯 균사체의 배양방법에 사용되는 배양병은, 배양병 본체(10);와 원통부(11a), 밀폐층(11b) 및 필터층(11c)을 가지는 뚜껑(11);을 구비하며, 배지 입병 단계(S12) 전에 준비된다. 도 4에는 상기 배양병의 단면도가 도시되어 있다.
배양병 본체(10)는 내부에 공간을 가지는 일반적인 병의 형태로 이루어지며, 입구 부분 외측면에 뚜껑(11)과의 결합을 위한 나사산이 형성된다.
원통부(11a)는 원통형으로 이루어져 배양병 본체(10)의 입구를 감싸며, 상기 원통부(11a)의 내측면에는 상기 나사산과 맞물리는 나사홈이 형성된다.
밀폐층(11b)은 상기 원통부(11a)의 내부공간 중에서 배양병 본체(10)의 내부공간에 인접한 곳에 위치하며, 필터층(11c)은 원통부(11a)의 내부공간 중에서 배양병 본체(10)의 내부공간 반대측에 위치한다.
이러한 배양병 뚜껑(11)은 1차 배양 단계(S16)에서는, 밀폐층(11b)이 배양병 본체(10)의 내부공간을 밀폐한다. 그리고 1차 배양 단계(S16)가 완료된 후에는 배양병 뚜껑(11)을 배양병 본체(10)의 입구에 더 체결함으로써 밀폐층(11b)이 배양병 본체(10)의 입구 끝에 닿아 파괴될 수 있도록 한다. 밀폐층(11b)이 파괴되면 2차 배양 단계(S17)에서는 파괴된 밀폐층(11b) 사이 공간을 통해 필터층(11c)에 의해 여과된 공기가 배양병 본체(10) 내로 유입될 수 있다.
이처럼 상기 배양병 뚜껑(11)은, 배양병이 밀폐된 상태에서 여과된 공기를 유입시킬 수 있는 상태로 쉽게 전환시킬 수 있도록 하며, 배양병의 밀폐 상태를 전환시키면서 배양병 내로 잡균 등이 유입되는 것을 방지할 수 있다.
상기 필터층(11c)층은, 유산지, 부직포 또는 스펀지 등으로 이루어질 수 있다.
상기 필터층(11c)이 유산지로 이루어지는 경우, 온도조절과 CO2 의 배출을 보다 효과적으로 할 수 있다.
상기 필터층(11c)은 일회만을 사용하는 것이 균사체의 오염률을 낮추는 측면에서 바람직하다.
상기 밀폐층(11b)이 배양병 본체(10)의 입구와 닿았을 때 쉽게 파괴될 수 있도록 밀폐층(11b)에는 파단홈(G)이 형성될 수 있다.
도 5에는 또 다른 실시예에 의한 배양병이 도시되어 있다. 상기 배양병은, 배양병 본체(10); 원통부(12a)와 필터층(12b)을 가지는 필터부(12); 및 밀폐뚜껑(13);으로 이루어진다.
본 실시예에 의한 배양병에서 배양병 본체(10)는, 도 4에 도시된 실시예에서의 배양병 본체와 동일하다.
필터부(12)를 구성하는 원통부(12a)는 원통형으로 이루어져 배양병 본체(10)의 입구를 감싸며, 원통부(12a)에서 배양병 본체(10) 반대측의 외측면에는 나사산이 형성된다. 필터층(12b)은 상기 원통부(12a)의 내부공간에서 배양병 본체(10)의 내부공간에 인접하여 위치한다.
그리고 밀폐뚜껑(13)의 내측면에는 원통부(12a) 외측면 나사산에 맞물리는 나사홈이 형성되어 있어 밀폐뚜껑(13)에 체결될 수 있다.
이러한 배양병은 1차 배양 단계(S16)에서는 밀폐뚜껑(13)이 필터부(12)에 체결된 상태로 위치하여 배양병을 밀폐하고, 2차 배양 단계(S17)에서는 밀폐뚜껑(13)을 제거하여 필터층(12b)에 의해 여과된 공기가 배양병 본체(10) 내로 유입될 수 있도록 한다.
이하에서는 상기 꽃송이버섯 균사체 배양방법을 이용한 베타글루칸 원료의 제조방법에 대하여 설명하도록 한다. 도 6에는 베타글루칸 원료 제조방법에 관한 순서도가 도시되어 있다.
상기 베타글루칸 원료 제조방법은, 가) 상기 꽃송이버섯 균사체 배양방법을 통해 꽃송이버섯 균사체를 배양하는 단계(S10); 나) 상기 배양병 내의 꽃송이버섯 균사체를 100~105℃에서 20~30분간 살균하는 단계(S20); 다) 상기 배양병에서 꽃송이버섯 균사체를 탈병하는 단계(S30); 라) 상기 꽃송이버섯 균사체를 건조하는 단계(S40); 및 마) 상기 꽃송이버섯 균사체를 분쇄하는 단계(S50);를 포함한다.
아래에서는 상기 베타글루칸 원료 제조방법을 단계별로 상세하게 설명한다.
가) 균사체 배양 단계(S10);
꽃송이버섯 균사체를 배양한다. 꽃송이버섯 균사체에는 100g 당 46.2g의 베타글루칸을 포함하고 있어 100g 당 43.6g의 베타글루칸을 포함하는 자실체보다 많은 량의 베타글루칸을 얻을 수 있을 뿐만 아니라, 배양에 소요되는 기간이 자실체에 비하여 짧다.
나) 균사체 살균 단계(S20);
배양이 완료된 균사체를 살균하여, 배양 중 발생한 푸른곰팡이 등의 잡균을 제거한다.
살균이 완료된 후의 꽃송이버섯 균사체는 세포벽이 파괴되어, 베타글루칸의 함량이 100g 당 52.2g으로 증가하게 되고 복용시 베타글루칸의 흡수율이 높아진다.
살균이 완료된 꽃송이버섯 균사체는, 배양병에서 꺼내어 건조 및 분쇄함으로써 건강식품, 화장품 등의 원료로 사용할 수 있다.
이상에서는 본 발명의 구체적인 실시예에 대해 도면을 참고하여 설명하였으나, 청구범위의 기술적 사상으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 당업자가 본 발명을 다양하게 변형하여 실시할 수 있을 것이며, 이 또한 청구범위의 기재에 따라 본 발명의 권리범위에 속한다고 할 것이다.
10 : 배양병 본체 11 : 뚜껑 11a : 원통부
11b : 밀폐층 11c : 필터층 12 : 필터부
12a: 원통부 12b : 필터층 13 : 밀폐뚜껑
S10 : 균사체 배양 단계 S11 : 배지 조성 단계
S12 : 배지 입병 단계 S13 : 배지 살균 단계
S14 : 배지 냉각 단계 S15 : 종균 접종 단계
S16 : 1차 배양 단계 S17 : 2차 배양 단계
S20 : 균사체 살균 단계 S30 : 균사체 탈병 단계
S40 : 균사체 건조 단계 S50 : 균사체 분쇄 단계

Claims (8)

  1. a) 곡립으로 배지를 조성하는 단계;
    b) 상기 배지를 내열성 배양병에 입병하는 단계;
    c) 상기 배양병 내의 배지를 제1살균온도에서 1차 살균하고, 제2살균온도에서 2차 살균하는 단계;
    d) 상기 배양병 내의 배지를 냉각하는 단계;
    e) 무균실에서 상기 배양병 내의 배지에 꽃송이버섯 종균을 접종하는 단계;
    f) 상기 배양병을 밀폐하여 꽃송이버섯 균사체를 1차로 배양하는 단계; 및
    g) 상기 배양병 내에 여과된 공기가 드나들도록 하며 꽃송이버섯 균사체를 2차로 배양하는 단계를 포함하며,
    상기 a)단계에서는 상기 배지에 염산, 초산, 유산 중 적어도 어느 하나로 구성되는 수소이온농도 조정제를 첨가하고, 상기 배지에 제1인산칼슘, 황산마그네슘, 폴리인산나트륨, 제1인산칼륨, 제2인산칼륨 중 적어도 어느 하나로 구성되는 무기염류를 첨가하며,
    상기 배양병은,
    배양병 본체와,
    상기 배양병 본체의 입구 측에 배치되어 상기 입구를 통과하는 공기를 여과하는 필터층과, 상기 입구와 상기 필터층 사이에 배치되며 상기 입구와 접촉되어 파괴 가능한 파단홈을 가지고 상기 입구를 밀폐하는 밀폐층을 갖는 뚜껑을 포함하며,
    상기 f)단계에서는 상기 뚜껑을 상기 배양병 본체에 체결하여 상기 배양병을 밀폐하며,
    상기 g)단계에서는 상기 뚜겅을 더 체결하여 상기 밀폐층을 파괴하여 필터층에 의해 공기가 여과되도록 하며,
    상기 필터층은 유산지로 이루어지는 것을 특징으로 하는 꽃송이버섯 균사체 배양방법.
  2. 삭제
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  6. 가) 제1항에 의한 꽃송이버섯 균사체 배양방법을 통해 꽃송이버섯 균사체를 배양하는 단계;
    나) 상기 배양병 내의 꽃송이버섯 균사체를 살균하는 단계;
    다) 상기 배양병에서 꽃송이버섯 균사체를 탈병하는 단계;
    라) 상기 꽃송이버섯 균사체를 건조하는 단계; 및
    마) 상기 꽃송이버섯 균사체를 분쇄하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 베타글루칸 원료 제조방법.
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