KR101844829B1

KR101844829B1 - 가짜 벌꿀 구별용 단클론 항체 및 이를 이용한 벌꿀 구별 방법 및 그 조성물

Info

Publication number: KR101844829B1
Application number: KR1020160119918A
Authority: KR
Inventors: 이득찬; 이해익
Original assignee: 강원대학교산학협력단
Priority date: 2016-09-20
Filing date: 2016-09-20
Publication date: 2018-04-03
Also published as: KR20180031376A

Abstract

본 발명은 가짜 벌꿀 구별용 단클론 항체 및 이를 이용한 가짜 벌꿀 구별 방법 및 그 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 토종꿀과 양봉 꿀 모두를 인식하는 항체를 생성하는 hybridoma 세포주 및 이들이 생산하는 항체를 이용하여 ELISA와 Immunoblotting 방법 등을 통해 토종꿀과 양봉꿀, 인조꿀의 면역학적 분별을 할 수 있다.

Description

가짜 벌꿀 구별용 단클론 항체 및 이를 이용한 벌꿀 구별 방법 및 그 조성물{A monoclonal antibody for distinguishing artificial honey, a method for distinguishing honey using the same, and a composition thereof}

본 발명은 가짜 벌꿀 구별용 단클론 항체 및 이를 이용한 가짜 벌꿀 구별 방법 및 그 조성물에 관한 것이다.

토종꿀이란 꿀벌들이 꽃 꿀을 채집하여 벌집에 저장한 것을 채밀한 것으로, 채밀 후 화분, 로열젤리,당류, 감미료 등 일절 다른 물질을 첨가하지 아니한 것이다.

벌꿀의 성질과 상태는 고유의 색택과 향미를 가지고 점조성이 있어야 하며 밀원에 따라 결정될 수 있다. 토종꿀의 성분함량 기준으로는 수분 21.0% 이하, 물불용물 0.5% 이하, 산도 40.0meq/kg 이하, 전화당 65.0% 이상, 자당 7.0% 이하, H.M.F(히드록시메틸푸르푸랄) 80.0mg/kg 이하가 되어야 하며, 타르색소와 인공감미료가 검출되어서는 안 되고, 이성화당은 음성이어야 한다.

벌꿀의 사양은 주로 봄철에 많이 이루어지고 있으며, 우기에도 실시하고 있다. 즉 무밀기에 집중된다.꿀벌에게 주는 사양(밥)은 설탕물과 꿀물 그리고 화분을 들 수가 있다. 사람이 꿀벌에게서 부산물로 받는 것이 꿀, 프로폴리스, 화분, 벌집이다. 이 방법에서 사양으로 주는 설탕물과 꿀물을 벌에게 주면 벌은 이를 수집하여 일부는 식량으로 사용하고 남은 것은 벌집을 만들거나, 유충이 태어난 후의 벌방에 보관하게 된다.

그런데 벌방에 보관된 사양한 꿀과 자연에서 채취하여 온 일반 꿀을 일반인들은 판별하기가 어렵다. 따라서 시중에서 판매되는 것이 진짜 꿀인지 혹은 가짜 꿀인지가 분명치 않아 문제가 발생하는 경우가 많다.

일반적으로 가짜벌꿀 또는 인공적으로 생산된 벌꿀은 설탕+효모기원의 invertase를 넣어서 단당류로 만든 것을 말한다. 이는 주로 증량제로 쓰이게 된다.

한편, 사양꿀은 설탕을 벌에 먹임으로써 생산된 단당류로로서 식품공전에서 식품으로 인정받은 꿀이다. 다만 꽃으로부터 꿀벌이 얻어온 꿀은 아니며, 이 또한도 증량제로 이용될 수 있다.

그러나 진짜 꿀인지를 과학적으로 명확하게 구분하기 위해서는 값비싼 장비를 이용하여 비교 분석을 하여야 하는데, 꿀 한 병을 구입하려고 그 비싼 시험비와 며칠간의 시간을 소요한다는 것은 대단한 낭비가 아닐 수 없다.

즉 일반인들이 토종꿀인지를 식별하기 위해서는 구매하려는 토종꿀 제품이 상기와 같은 성분함량들을 갖추고 있는지를 검사해보아야 하는데, 이러한 검사가 값비싼 장비를 이용한 비교 분석이 뒤따라야 할 뿐만 아니라, 꿀 한 병을 구입하려고 비싼 시험비와 장시간을 허비하는 등의 문제가 상존하는 것이 현실인 것이다.

또한, 지역마다 기후조건과 토양의 토질 문제, 개체의 수집 방법, 일조량 등등에 의하여 각기 다르게 수치가 나타나므로 시험을 하여도 지역 특성상 똑같은 결과치를 얻을 수가 없다는 문제도 있다.

또한, 가짜벌꿀 또는 인위적으로 생산된 벌꿀과 꿀벌에 의해 생산된 꽃꿀을 구분할 수 있으며 혼합정도를 정량화할 필요성을 가진다.

[선행 특허 문헌]

대한민국 특허공개번호 제10-2010-0110431호

본 발명은 상기의 문제점을 해결하고, 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서 본 발명의 목적은 가짜 벌꿀 구별용 단클론 항체를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 신규한 가짜 벌꿀 구별 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 신규한 가짜 벌꿀 구별용 조성물을 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 수탁번호 KCLRF-BP-00373의 하이브리도마에 의하여 생산되는 토종 및 양봉 벌꿀을 공통적으로 인식하는 단클론 항체를 제공한다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 단클론 항체를 생산하는 수탁번호 KCLRF-BP-00373의 하이브리도마 세포를 제공한다.

또 본 발명은 상기 본 발명의 단클론 항체를 벌꿀 샘플과 접촉시켜 벌꿀과 상기 항체 복합체 존재를 조사하여 벌꿀을 구별하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 벌꿀은 토종 또는 양봉 벌꿀인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명의 다른 구현예에 있어서, 상기 벌꿀은 토종 또는 양봉 벌꿀이 아닌 가짜 벌꿀인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 단클론 항체를 유효성분으로 포함하는 벌꿀 구별용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 수탁번호 KCLRF-BP-00373의 하이브리도마를 배양하여 토종 및 양봉 벌꿀을 공통적으로 인식하는 단클론 항체를 생산하는 방법을 제공한다.

이하 본 발명을 설명하다.

본 발명은 토종꿀 및 양봉 꿀 둘 모두를 인식하는 항체를 생성하는 hybridoma 세포주들을 개발하고 이들이 생산하는 항체를 이용하여 ELISA와 Immunoblotting 방법을 통해 토종꿀과 양봉꿀, 인조꿀의 면역학적 분별을 할 수 있다.

통상적으로, 상이한 결정기(epitope)들에 대해 지시되는 상이한 항체들을 포함하는 다클론 항체와는 다르게, 단클론 항체는 항원상의 단일 결정기에 대해서 지시된다.

단클론 항체는 항원-항체 결합을 이용하는 진단 및 분석학적 분석법의 선택성과 특이성을 개선시키는 장점이 있으며, 융합 배양에 의해 합성되기 때문에 다른 면역 글로불린에 의해 오염되지 않는 또 다른 장점을 갖는다.

상기 본 발명의 단클론 항체는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마 방법(hybridoma method)(Kohler 및 Mislstein(1976) European Journal of Immunology 6:511-519 참조) 또는 파지 항체 라이브러리(Clackson et al, Nature,352:624-628, 1991 등 참조) 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 단클론 항체를 분비하는 하이브리도마 세포는 항원 단백질을 주사한 마우스와 같은 면역학적으로 적합한 숙주 동물로부터의 면역 세포와 암세포주를 융합함으로써 만들어진다. 이런 두 집단의 세포 융합은 폴리에틸렌글리콜과 같이 본 발명이 속하는 기술 분야에 공지되어 있는 방법을 이용하여 융합시키고 항체 생산 세포를 표준적인 배양 방법에 의해 증식시킨다. 한계 희석법(limited dilution)에 의한 서브 클로닝을 실시하여 균일한 세포 집단을 수득하고 난 뒤 항원에 특이적인 항체를 생산할 수 있는 하이브리도마 세포를 시험관 또는 생체 내에서 대량으로 배양한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "하이브리도마"는 2 개의 다른 종류의 세포를 인공적으로 융합시켜 만든 세포를 의미한다. 하이브리도마 세포는 폴리에틸렌글리콜 등 세포융합을 일으키게 하는 물질이나 특정 종의 바이러스를 사용하여 둘 이상의 동종 세포나 이종 세포를 융합시킴으로써 제조되는데, 하이브리도마 세포를 형성시킴으로써 각기 다른 세포가 갖는 다른 기능을 하나의 세포에 통합시킬 수 있게 된다.

이러한 하이브리도마 세포는 일반적으로 시험관 내에서도 증식이 되는 암세포와 생체로부터 추출한 어느 특정의 분화 형질을 가진 대형 세포를 융합시켜 제조될 수 있다. 대표적인 하이브리도마는 림프구 하이브리도마로서,골수종세포와 B세포를 융합시킨 하이브리도마 세포, T세포와 그 종양세포인 하이브리도마 세포, 림포카인(생리 활성물질)을 만들어내는 T세포와 그 종양세포인 하이브리도마 세포 등이 있으며, 본 발명의 하이브리도마 세포주는 당업자의 선택에 따라 본 발명의 단클론 항체를 효과적으로 생산하기 위한 최적의 조건으로 융합 및 배양될 수 있음은 자명하다.

본 발명의 바람직한 실시예에서 본 발명의 하이브리도마 세포는 대한민국 서울특별시 종로구 연건동 소재 한국세포주연구재단에 2016년 09월 05일 자로 기탁하였다(수탁번호 'KCLRFBP00373BP', 미생물 기탁증에는 'KCLRF-BP-00373'이라고 기재됨).

본 발명의 하이브리도마 세포가 생산하는 단클론 항체는 정제하지 않고 이를 포함하는 세포 배양액 상태로 사용할 수도 있으나, 최선의 결과를 얻기 위해서는 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려져 있는 방법에 따라 고순도(예컨대, 95% 이상)로 정제하여 사용하는 것이 바람직하다. 이러한 정제 기술로는, 예를 들어 겔 전기영동,투석, 염 침전, 크로마토그래피 등이 포함될 수 있다.

본 발명을 통하여 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 토종꿀과 양봉 꿀 모두를 인식하는 항체를 생성하는 hybridoma 세포주들 및 이들이 생산하는 항체를 이용하여 ELISA와 Immunoblotting 방법 등을 통해 토종꿀과 양봉꿀, 및 인조꿀의 면역학적 분별을 할 수 있으며, 가짜벌꿀 또는 인위적으로 생산된 벌꿀과 꿀벌에 의해 생산된 꽃꿀을 구분할 수 있으며 혼합 정도를 정량화할 수 있다.

도 1은 선택된 hybridoma 세포주에 관한 그림으로, 토종꿀과 양봉 꿀을 항원으로 사용하고 개발한 hybridoma의 배양액을 1차 항체로 사용하였다.
A. TY1, TY5, TY6, TY7은 토종과 양봉을 공통적으로 인식하는 항체를 생성하는 hybridoma 세포주이다. TY2, TY3, TY4는 양봉만을 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma 세포주인 줄 알았으나 계속되는 ELISA에서 발색하지 않는 것으로 보아 wash 단계에서 옆의 항체가 튄 것 같다.
B. 토종꿀을 특이적으로 인식하는 항체를 생성하는 hybridoma 세포주 5개(T1~T5)
C. 양봉만을 특이적으로 인식하는 항체를 생성하는 hybridoma 세포주 6개(Y1~Y6).
도 2는 항체 개발과 관련된 그림으로, 토종, 양봉 꿀 공동 인식 항체에 관한 것으로, ELISA와 western blot을 이용해 Honey TY 세포주의 항체를 검증하였다.
A. Honey TY 세포주의 배양액을 1차 항체로, 항원은 토종꿀과 양봉 꿀로 동일하게 코팅을 하고 항체를 10배에서 5배씩 희석해 Honey TY 항체의 한계를 보았다. B. ELISA와 마찬가지로 항원으로는 토종꿀과 양봉 꿀을 사용하고, Honey TY 세포주의 배양액을 1차 항체로 사용하였다.
도 3은 항체 개발과 관련된 그림으로, 토종꿀 특이적 항체에 관한 것으로, ELISA와 western blot을 이용해 Honey T 세포주의 항체를 검증하였다.
A. Honey T 세포주의 배양액을 1차 항체로, 항원은 토종꿀과 양봉 꿀로 동일하게 코팅을 하고 항체를 10배에서 25600배까지 희석해 Honey T 항체의 한계를 보았다. B. ELISA와 마찬가지로 항원으로는 토종꿀과 양봉 꿀을 사용하고, Honey T 세포주의 배양액을 1차 항체로 사용하였다.
도 4는 항체 개발과 관련된 그림으로, 양봉 꿀 특이적 항체에 관한 것으로, ELISA와 western blot을 이용해 Honey Y 세포주의 항체를 검증하였다.
A. Honey Y 세포주의 배양액을 1차 항체로, 항원은 토종꿀과 양봉 꿀로 동일하게 코팅을 하고 항체를 10배에서 25600배 까지 희석해 Honey Y 항체의 한계를 보았다. B. ELISA와 마찬가지로 항원으로는 토종꿀과 양봉 꿀을 사용하고, Honey Y 세포주의 배양액을 1차 항체로 사용하였다.
도 5는 항체 특성과 관련하여 Isotyping과 관련된 그림으로, Honey TY의 항체인 TY Ab, Honey T의 항체인 T Ab, 그리고 Honey Y의 항체인 Y Ab 모두 IgG1을 중쇄로 가지고 kappa chain을 경쇄로 가지고 있다.
도 6은 토종 양봉 혼합 꿀의 분석과 관련하여 ELISA에 관한 그림으로, 토종꿀과 양봉 꿀을 혼합하여 항원으로 코팅하고 세 항체를 이용해 분석해 보았다.
TY Ab의 경우, 토종꿀과 양봉의 비율과 상관 없이 거의 일정한 정도를 보여주고 T Ab의 경우에는 토종 항원의 비율에 따라 흡광도가 선형적으로 줄어드는 모습이 보인다. Y Ab는 선형적이지는 않지만 양봉의 비율이 줄어듦에 따라 흡광도도 줄어드는 것을 볼 수 있다.
도 7은 토종 양봉 혼합 꿀의 분석과 관련하여 Immunoblotting과 관련된 그림으로, 토종꿀과 양봉을 혼합한 꿀을 immunoblotting을 이용해 분석해 보았다. TY Ab의 경우 토종꿀과 양봉의 비율에 의존하지 않고 거의 비슷한 수준의 밴드를 보이고 T Ab와 Y Ab 는 각각 토종꿀과 양봉의 비율이 많아질수록 밴드가 진해지는 것을 보여주고 있다.

이하 비한정적인 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 단 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 의도로 기재된 것으로서 본 발명의 범위는 하기 실시예에 의하여 제한되는 것으로 해석되지 아니한다.

실시예 1:단클론 항체 개발

토종과 양봉 꿀을 증류수에 투석하고 원심분리(10000g, 10분) 해 화분을 제거 한 상등액을 동결건조 하여 단클론 항체를 만들기 위한 시료로 사용했다. 토종과 양봉 꿀을 투석해 얻은 시료 100ug을 complete adjuvant와 잘 섞어서 암컷 Balb/c mouse 의 복강에 주입하였다. 2주 후 동량의 시료를 incomplete adjuvant와 잘 섞어 주입하고 2회 정도 더 주입한다. 마지막 주입을 하고 1주 후 mouse를 sacrifice 시키고 spleen을 sp2/0와 fusion시킨다. 이 후 ELISA를 통해 꿀을 항원으로 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma만을 선택하고 그 중에서 꿀에 대한 affinity 가 높은 hybridoma를 선택했다. 선택된 hybridoma는 single colony를 만들어 monoclone을 만들었다.

실시예 2:ELISA

Carbonate coating buffer (0.05M sodium carbonate buffer, pH9.6)에 항원을 섞어 plate에 100ul씩 넣고 4℃에서 overnight 하고 PBS-T로 세 번 wash 한다. 1% BSA로 1시간동안 blocking을 하고 wash를 세 번 한다. 만든 hybridoma의 상등액을 1차 항체로 사용하고 PBS-T를 이용해 희석하고 1시간 동안 반응시키고 세 번 wash 한다. 2차 항체(goat anti-mouse-IgG HRP)도 1시간 동안 반응시킨 후 세 번 wash 한다. 0.03%의 H2O2의 포함된 ABTS 용액을 넣고 37℃에서 20분간 발색시킨다. 405nm에서 흡광도를 본다.

실시예 3:웨스턴 블럿

투석한 시료를 항원으로 샘플을 만들고 SDS-PAGE를 한다, 그 후 transfer를 통해 gel의 단백질을 membrane으로 옮기고 TBS-T에 희석한 1% skim milk로 1시간 동안 blocking한다. Blocking이 끝나면 TBS-T로 10분간 세 번 wash하고 1차 항체를 1시간 동안 반응시킨다. 1차 항체로는 hybridoma의 상등액을 TBS-T에 희석하여 사용한다. 세 번의 wash를 하고 2차 항체를 1시간 동안 반응시킨다. 2차 항체를 붙이고 나서 세 번의 wash를 하고 나면 membrane에 ecl을 뿌리고 암실에서 필름에 현상한다.

실시예 4:Isotyping

Thermo SCIENTIFIC의 Pierce Rapid ELISA Mouse mAb Isotyping kit를 이용했다.

한 줄의 여덟 개 well에 TBS에 희석한 상등액을 50ul씩 넣어주고 Goat Anti-Mouse IgG+IgA+IgM HRP 혼합액도 50ul씩 넣어 37℃에서 1시간 동안 반응시킨다. Wash buffer로 세 번 wash 하고 각 well에 TMB 75ul를 넣는다. 1분정도 지나 항체가 해당 isotype을 가지고 있다면 파랗게 발색된다. 5 ~15분 후 stop solution을 넣으면 노랗게 변하고 450nm에서 흡광도를 측정한다.

상기 실시예의 결과를 이하 서술한다.

항체 개발

항원을 복강에 주입한 mouse의 spleen과 mouse myeloma인 sp2/0를 fusion시켜 hybridoma를 얻었다. ELISA 방법을 이용하여 얻은 hybridoma 중의 꿀을 항원으로 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma 세포주를 선택했다. 토종과 양봉을 공통으로 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma 세포주는 4개(TY1, TY5, TY6, TY7)가 선택되었다(그림1.A). TY2~TY4는 양봉항원을 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma세포주인지 알았지만 계속되는 ELISA에서 발색을 하지 않아 옆의 well에서 wash단계나 1차 항체를 넣는 과정 중 항체가 튄 것으로 보인다.

토종꿀을 특이적으로 인식하는 항체를 생산하는 5개의 hybridoma 세포주 T1~T5(그림1.B)와, 양봉을 특이적으로 인식하는 항체를 생산하는 6개의 hybridoma 세포주(Y1~Y6)가 선택되었다(그림1.C).

이 세포주들을 single colonization하여 mono-clone으로 만들었다. ELISA와 western blot을 이용하여 항원에 대한 affinity가 높은 항체를 생산하는 hybridoma 세포주만을 골랐는데, 토종과 양봉을 공통으로 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma 세포주에서는 TY5의 affinity가 가장 높았고 토종꿀을 특이적으로 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma 세포주에서는 T2가, 양봉을 특이적으로 인식하는 항체를 생산하는 hybridoma 세포주에서는 Y1의 affinity가 가장 높았다. TY5, T2 그리고 Y1은 각각 Honey TY, Honey T, Honey Y라고 이름지었고 2016년 9월5일 기탁하였다.

Honey TY를 ELISA를 통해 검증하였는데 투석한 꿀을 항원으로 코팅하고 Honey TY의 배양액을 1차 항체로 사용했다. 10배에서 5배씩 차례대로 희석해 ELISA를 했을 때 토종 항원과 양봉 항원에서 모두 발색했으며, 1250배 희석했을 때까지는 발색 정도가 유지되다가 그 이상의 희석배수에서는 희석 배수에 따라 색이 연해지는 것을 볼 수 있었다(그림2.A). Western blot을 통해서도 Honey TY의 항체를 검증했다. 항원으로는 토종꿀과 양봉 꿀을 사용하였고 그림1.B 에서와 같이 토종꿀과 양봉 꿀을 모두 인식하였다(그림2.B).

Honey T 와 Y의 항체도 ELISA와 western blot을 통해 검증하였다. 토종꿀과 양봉 꿀을 항원으로 동일한 양을 코팅하고 Honey T 와 Y의 배양액을 10배에서 25600배까지 희석하여 1차 항체로 이용하였다. Honey T의 항체는 양봉 꿀을 항원으로 인식하지 않고 토종꿀에서만 특이적으로 발색을 하였고 희석배수가 커짐에 따라 색이 점점 연해지는 것을 보였다(그림3. A). Honey Y또한 토종꿀은 인식하지 않고 양봉 꿀을 항원으로 코팅한 well에서만 특이적으로 발색하였다. Western blot에서도 ELISA와 같은 결과가 나왔다(그림4.A). Honey T를 1차 항체로 사용하였을 때 토종꿀에서만 특이적으로 밴드가 나타났으며(그림3.B) Honey Y를 1차 항체로 사용하였을 때는 양봉 꿀을 항원으로 사용한 곳에서만 특이적으로 밴드가 나타났다(그림4.B).

항체 특성 : Isotyping

개발한 Honey TY의 항체인 TY Ab, Honey T의 항체인 T Ab, 그리고 Honey Y의 항체의 Isotype을 kit를 이용해 동정하였다. 세 항체 모두 중쇄는 IgG1을 가지고 있고, kappa chain을 경쇄로 가지고 있다. 흡광도는 모두 다르지만 이는 각 hybridoma 세포주의 항체 생산량과 세포의 양이 다르기 때문이다.

토종 양봉 혼합 꿀의 분석

토종꿀과 양봉이 혼합하여 판매되고 있는 꿀도 있기에 토종꿀과 양봉을 일정 비율대로 섞어 혼합 꿀을 만든 후 ELISA와 Immunoblotting을 통해 분석해 보았다,

ELISA를 통해 혼합 꿀을 분석 한 결과(그림6), 토종꿀과 양봉 모두를 인식하는 Honey TY의 항체인 TY Ab는 토종꿀과 양봉꿀의 비율에 상관없이 거의 일정한 흡광도를 보여주었다. 토종꿀만을 특이적으로 인식하는 Honey T의 항체인 T Ab는 토종꿀의 비율이 줄어드는 것에 따라 선형적으로 줄어들고 양봉 꿀만을 특이적으로 인식하는 Honey Y의 항체인 Y Ab는 T Ab처럼 선형적으로 줄어들지는 않지만 양봉 꿀의 비율이 적어질 때마다 흡광도도 줄어드는 것을 볼 수 있다.

Immunoblotting을 통해 혼합 꿀을 분석해 보았다(그림7). TY Ab의 경우 토종꿀과 양봉의 비율에 의존하지 않고 거의 비슷한 수준의 밴드를 보이고 T Ab와 Y Ab 는 각각 토종꿀과 양봉의 비율이 많아질수록 밴드가 진해지는 것을 보여주고 있다.

한국세포주연구재단

KCLRFBP00373BP

20160905

Claims

수탁번호 KCLRF-BP-00373의 하이브리도마에 의하여 생산되는 토종 및 양봉 벌꿀을 공통적으로 인식하는 단클론 항체.
제1항의 단클론 항체를 생산하는 수탁번호 KCLRF-BP-00373의 하이브리도마 세포.
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수탁번호 KCLRF-BP-00373의 하이브리도마를 배양하여 토종 및 양봉 벌꿀을 공통적으로 인식하는 단클론 항체를 생산하는 방법.