KR101841344B1 - 봉독 추출물을 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 봉독 및 어성초 추출물을 이용한 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 봉독의 지용성 추출물과 수용성 추출물 및 어성초 추출물을 혼합하여 피부 주름 개선과 같은 항노화 효과를 나타내는 화장료 조성물 및 이를 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 합성을 촉진하고, 피부 세포의 대사(ECM: Epidermal Cell Metabolism)를 활성화하여 피부 주름을 비롯한 피부 상태의 개선 효과를 나타낸다.

Description

봉독 추출물을 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법{Cosmetic composition comprising extracts of bee venom and method for manufacturing the same}

본 발명은 봉독 및 어성초 추출물을 이용한 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 봉독의 지용성 추출물과 수용성 추출물 및 어성초 추출물을 혼합하여 주름 개선과 같은 항노화 효과를 나타내는 화장료 조성물 및 이를 제조하는 방법에 관한 것이다.

꿀벌의 산란관에서 나오는 독액을 봉독(Bee Venom)이라고 한다. 봉독은 벌 복부 끝 독낭에 저장되어 봉침과 연결되어 자극 시에 분비되는 동물성 천연 생리 활성물질로서 봉독이 이집트, 바빌로니아에서 치료 목적으로 사용되었다는 기록이 남아 있다. 우리나라에서도 마왕퇴백서(최초의 침구학 문헌), 동의보감, 민간요법에서 생봉침을 통증 및 류마티스 관절염 치료에 이용하였다는 기록이 남아 있다.

이러한 봉독은 염증 유발 동물의 부종을 감소시키고, 관절염 환자의 활막세포에 작용하여 그 주성분 멜리틴(melittin)이 NF-ΚB를 비활성화시킴으로써 일산화질소(Nitric Oxide; NO)의 양을 감소시키며 싸이클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2; COX-2)를 억제하여 항염증 효과를 유발하는 것으로 알려져 있다. 봉독의 성분을 분리정제하여 치매나 암 치료에 이용하는 등의 봉독 처리 효과를 확인하는 생리적 연구나 건조 봉독의 성분 분석에 대한 연구 결과가 이미 보고되어 있다. 한의학에서는 염증 질환의 치료제로 오랫동안 사용되어 왔으며, 봉독의 항염증 효과와 항암효과에 대하여 연구하고 있다.

한편, 어성초는 삼백초과에 속하는 다년생 초본으로서 학명은 Houttuynia Cordata이고, 중약대사전(상해과학기술출판사)에 따르면 약모밀, 십약 등의 다른 이름이 있다.

본초강목(本草綱目)에는 어성초가 해열작용과 함께 종기, 독 등을 없앤다고 기술되어 있으며, 중약대사전(重藥大辭典)에는 피를 맑게 해주고 염증을 없애준다고 기록되어 있다.

어성초는 잎, 줄기, 뿌리 전체에 유효성분이 함유되어 있으며 특유의 독특한 냄새를 포함한 생리활성물질들이 신진대사를 도와 혈액을 맑게 하고 신장기능을 촉진시키며, 염증 증상과 체내 독소를 배설하는 등의 기능이 있어, 옛날부터 중국, 일본 등에서 민간약으로 널리 이용되어 왔다.

한방에서 어성초는 고혈압, 변비증, 당뇨병, 해열, 종기, 해독, 관절염, 염증성 질환 등에 이용되고 있으며, 주요성분으로는 전초에 정유성분인 데카노일아세트알데히드, 메론, 미르센 등이 있는데 이중 데카노일아세트알데히드는 설파민 항생제의 40,000배의 역가를 지니고 있다. 또한, 어성초 추물물과 관련하여서 한국공개특허 제2014-0124172호, 한국등록특허 제1383519호에서는 화장료 조성물의 일 구성 성분으로 적용하는 내용이 개시된 바 있다.

한편, 본 발명자들은 한국등록특허 제1425018호에서 지용성 용매와 수용성 용매를 사용하여 봉독 추출물을 제조하는 과정을 개시한 바 있으나, 상기 제조 과정에서는 수용성 용매층과 지용성 용매층을 서로 분획하여 분리할 때, 중간층이 나타나 완벽한 분리가 어려워지며, 이로 인하여 수율이 일정하지 않은 문제가 있었다.

따라서 봉독 추출물을 활용한 화장료 조성물의 제조 방법에 대한 개발이 지속적으로 요구되고 있는 실정이다.

이에 본 발명자들은 피부 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물 및 수율을 일정하게 확보할 수 있는 화장료 조성물의 제조 방법을 제공하고자 연구, 노력한 결과, 지용성 용매 및 수용성 용매 각각을 사용한 여과에 따라 봉독 추출물을 얻고, 이를 어성초 추출물과 일정 비율로 혼합하면 지용성 추출물과 수용성 추출물의 수율을 일정하게 확보하면서도 콜라겐 대사 활성화에 따라 피부 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제조할 수 있음을 발견함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명은 봉독 추출물을 포함하여 콜라겐 대사 활성화에 의한 피부 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.

본 발명은, 지용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 지용성 추출물과 수용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 수용성 추출물이 혼합된 봉독 추출물 100 중량부에 대하여 어성초 추출물 50 내지 500 중량부가 포함되는 화장료 조성물을 그 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 지용성 추출물과 수용성 추출물이 1 : 0.1 ~ 10 의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 지용성 용매는 헥산, 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄 및 클로로포름 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매인 것을 특징으로 하고, 상기 수용성 용매는 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 어성초 추출물은 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매에 의하여 추출된 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 멜리틴 5 ~ 40 중량%, 에이코세놀(eicosenol) 1 ~ 20 중량%, 포스포리파제A-2 1 ~ 20 중량%, 아파민(Apamin) 0.1 ~ 5 중량%, 피노셈브린(pinocembrin) 0.01 ~ 5 중량% 및 크리신(chrysin) 0.01 ~ 5 중량%를 포함하고, 쿼시트린 1 ~ 10 중량% 및 쿼세틴 0.01 ~ 5 중량%를 포함하는 것을 특징으로 한다.

한편, 본 발명은, 봉독을 지용성 용매에 넣고 여과하여 여액의 지용성 추출물을 얻는 단계;

상기 여과에 의하여 걸러진 잔사를 수용성 용매에 넣고 여과하여 여액의 수용성 추출물을 얻는 단계;

상기 지용성 추출물과 수용성 추출물을 혼합하여 봉독 추출물을 제조하는 단계; 및

상기 봉독 추출물 100 중량부에 대하여 어성초 추출물 50 내지 500 중량부를 혼합하는 단계를 포함하는 화장료 조성물의 제조 방법을 또 다른 특징으로 한다.

상기 화장료 조성물의 제조 방법에 있어서, 상기 봉독 추출물은 지용성 추출물과 수용성 추출물을 1 : 0.1 ~ 10 의 중량비로 혼합하여 제조되는 것을 특징으로 한다.

한편, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 포함하는 마이크로 니들 패취를 또 다른 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물은 콜라겐 합성을 촉진하고, 피부 세포의 대사(ECM: Epidermal Cell Metabolism)를 활성화하여 피부 주름을 비롯한 피부 상태의 개선 효과를 나타낸다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 세포 독성 및 피부 부작용도 없어 안전하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 화장료 조성물의 제조 과정을 나타낸 모식도이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물의 프로콜라겐 합성 효과 및 MMP-1 발현 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 3는 본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물과 Adenosine의 비교 실험을 진행한 결과이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물의 콜라겐 대사활성(Pro-collagen/MMP-1 ratio)을 비교한 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물과 EGF(Epidermal Growth Factor) 및 EGCG [(-)-Epigallocatechin-3-O- gallate]의 비교 실험을 진행한 결과이다.
도 6은 본 발명의 실시예에서 봉독 추출물과 어성초 추출물의 중량비에 따른 프로콜라겐 합성 효과 및 MMP-1 발현 억제 효과를 비교한 결과이다.
도 7은 본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물을 탑재한 마이크로 니들 패취를 제조하기 위한 혼합 용액의 제조 과정을 도식화한 것이다.
도 8은 본 발명의 실시예에 따른 화장료 조성물을 탑재한 마이크로 니들 패취의 적용 시 조성물의 유효 농도 범위를 확인하기 위한 실험 결과이다.

본 발명은 지용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 지용성 추출물과 수용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 수용성 추출물이 혼합된 봉독 추출물과 어성초 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 그 특징으로 한다.

봉독은 꿀벌의 산란관에서 나오는 독액으로서, 본 발명에서 사용되는 봉독은 생봉독, 건조봉독, 정제봉독일 수 있다. 생봉독은 건조 또는 정제과정을 거치지 않은 것으로서 일반적으로 비중이 1.1 ~ 1.3이고, pH가 5.2 내지 5.5 범위이며, 70 ~ 80중량%의 펩타이드를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 봉독 추출물 100 중량부에 대하여 어성초 추출물 50 내지 500 중량부가 포함되고, 바람직하게는 80 내지 400 중량부, 더욱 바람직하게는 100 내지 300 중량부가 포함되는 것이 좋다.

본 발명의 화장료 조성물에서 봉독 추출물은 지용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 지용성 추출물과 수용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 수용성 추출물이 혼합되어 피부 주름 개선을 위한 지용성 성분과 수용성 성분이 최적 비율로 포함된다.

상기 봉독 추출물은 지용성 추출물과 수용성 추출물이 1 : 0.1 ~ 10 의 중량비로 혼합될 수 있으며, 바람직하게는 1 :　0.2 ~ 5.0 의 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.5 ~ 2.0 의 중량비로 혼합되는 것이 피부 주름 개선 효과에 보다 유리하다.

상기 지용성 용매로는 헥산, 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄 및 클로로포름 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 에틸아세테이트 또는 메틸아세테이트를 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 수용성 용매로는 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 물, 메탄올 또는 에탄올을 사용하는 것이 바람직하다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 어성초 추출물(Houttuynia Cordata)은 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매를 사용하여 추출한 것일 수 있으며, 바람직하게는 물, 메탄올 또는 에탄올을 사용한 추출물이 포함될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 봉독 추출물 유래의 멜리틴 5 ~ 40 중량%, 에이코세놀(eicosenol) 1 ~ 20 중량%, 포스포리파제A-2 1 ~ 20 중량%, 아파민(Apamin) 0.1 ~ 5 중량%, 피노셈브린(pinocembrin) 0.01 ~ 5 중량% 및 크리신(chrysin) 0.01 ~ 5 중량%을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 멜리틴 10 ~ 30 중량%, 에이코세놀(eicosenol) 5 ~ 15 중량%, 포스포리파제A-2 5 ~ 15 중량%, 아파민(Apamin) 0.5 ~ 3 중량%, 피노셈브린(pinocembrin) 0.01 ~ 3 중량% 및 크리신(chrysin) 0.01 ~ 3 중량%을 포함할 수 있다.

또한 본 발명의 화장료 조성물은 어성초 추출물 유래의 쿼시트린(Quercitrin) 1 ~ 10 중량% 및 쿼세틴(Quercetin) 0.01 ~ 5 중량%를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 쿼시트린 2 ~ 8 중량%, 쿼세틴 또는 그 유도체들(Quercetin-glucose, Quercetin-galactose) 0.01 ~ 3 중량%를 포함할 수 있다.

주름 발생은 피부의 콜라겐(collagen) 대사능력이 감소하고, 산화스트레스나 광 손상에 의하여 콜라겐의 합성능이 감소하며 Matrix metallo proteinase(MMP)의 분해활성이 증가하기 때문으로 알려져 있으며, 사람 유래의 진피 섬유아세포를 과산화수소 스트레스에 노출시키면 프로콜라겐(Pro-collagen)의 mRNA와 단백질의 양이 감소하고, MMP-1의 mRNA와 단백질의 양이 산화스트레스에 의해 증가하는 것이 확인된다. 본 발명의 화장료 조성물은 상기 MMP를 억제하여 콜라겐 합성을 촉진하고, 궁극적으로 피부 세포의 대사(ECM: Epidermal Cell Metabolism)를 활성화하여 피부 주름을 비롯한 피부 상태의 개선 효과를 보인다,

또한, 봉독 추출물 내 피노셈브린(pinocembrin) 및 에이코세놀(eicosenol)은 어성초 추출물 내 쿼시트린(Quercitrin) 및 쿼세틴(Quercetin)과 함께 피부 세포의 콜라겐 합성을 촉진하고 타이로시네이즈(tyrosinase)의 활성 억제에 관여하여 멜라닌 생성을 억제하는 미백 효과를 가질 수 있다. 쿼시트린은 항산화 성질을 갖는 바이오플라보노이드로서 항박테리아 및 항염, 항알러지, 산화 및 UV에 의한 피부손상과 세포사 등을 억제하는 역할을 한다.

그리고 본 발명의 화장료 조성물은 세포 독성 및 피부 부작용도 없어 안전성을 확보할 수 있다.

한편, 본 발명은, 봉독을 지용성 용매에 넣고 여과하여 여액의 지용성 추출물을 얻는 단계; 상기 여과에 의하여 걸러진 잔사를 수용성 용매에 넣고 여과하여 여액의 수용성 추출물을 얻는 단계; 상기 지용성 추출물과 수용성 추출물을 혼합하여 봉독 추출물을 제조하는 단계; 및 상기 봉독 추출물 100 중량부에 대하여 어성초 추출물 50 내지 500 중량부를 혼합하는 단계를 포함하는 화장료 조성물의 제조 방법을 또 다른 특징으로 한다.

보다 구체적으로 미정제된 생봉독을 헥산, 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄 및 클로로포름 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 지용성 용매에 넣고 교반하고 여과하여 여액의 지용성 추출물을 얻는다. 상기 교반 후 초음파 처리를 추가적으로 진행하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 여과 시 포어 지름은 0.1 ~ 10 μm 범위의 거름종이를 사용할 수 있으며, 이를 통하여 여액의 지용성 추출물과 잔사를 분리한다.

상기 여과에 의하여 걸러진 잔사를 건조시킨 후 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 수용성 용매에 넣고 교반하고 여과하여 여액의 수용성 추출물을 얻을 수 있다. 상기 교반 후 초음파 처리를 추가적으로 진행하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 여과 시 포어 지름은 0.1 ~ 10 μm 범위의 거름종이를 사용할 수 있으며, 이를 통하여 여액의 수용성 추출물과 불용물을 추가적으로 분리한다.

상기 지용성 추출물과 수용성 추출물을 각각 건조한 후, 지용성 추출물과 수용성 추출물을 1 : 0.1 ~ 10 의 중량비로 혼합하여 봉독 추출물을 제조한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물의 일 성분인 어성초 추출물을 당해 기술분야의 통상적인 방법으로 추출하여 제조하되, 바람직하게는 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매에 넣고 상온에서 초음파 처리하여 추출할 수 있다. 다음 상기 봉독 추출물 100 중량부에 대하여 어성초 추출물 50 내지 500 중량부, 바람직하게는 80 내지 400 중량부, 더욱 바람직하게는 100 내지 300 중량부를 혼합하여 화장료 조성물을 제조한다.

상기 화장료 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 포함한다. 이는 국소 적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 멀티에멀젼, 현탁액, 마이크로 에멀젼, 마이크로캡슐, 미세 과립구, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제, 포말(foam) 또는 압축된 추진제를 함유한 에어로졸 조성물의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면 활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 더 포함할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

또한, 상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제형을 적절히 선택할 수 있다.　 예를 들어, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 아이 에센스, 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 파우더, 콘실 스틱, 바디 로션, 바디 크림, 바디 오일, 바디 에센스, 바디 세정제, 염모제, 헤어 토닉, 모발 영양 화장수, 헤어 에센스, 헤어 세럼, 스칼프 트리트먼트, 헤어 트리트먼트, 헤어 컨디셔너, 헤어 샴푸, 헤어 로션, 치약, 구강 청정제, 정발제, 양모제, 로션, 연고, 젤, 크림, 패치 및 분무제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

특히, 상기 화장료 조성물은 마이크로 니들 패취를 통하여 피부 장벽을 투과하여 진피층에 영향을 미칠 수 있다. 상기 마이크로 니들은 국부적이면서 지속적인 유효성분 주입이 가능하고, 피부에 삽입 시 통증을 최소화할 수가 있다. 상기 화장료 조성물은 생체적합성이 우수한 생분해성 고분자와 혼합되어 마이크로 니들 패취에 탑재될 수 있으며, 혼합된 점성 용액이 건조되면 고형 상태가 되고, 체내 주입 시 체액에 의하여 다시 용해되는 원리를 이용할 수 있다. 상기 생분해성 고분자로는 히알루론산(Hyaluronic acid) 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한 마이크로 니들 패취에 탑재되는 화장료 조성물 내 유효 성분 농도는 0.01 ~ 5.0 μg/㎖ 일 수 있으며, 보다 바람직하게는 0.1 ~ 3.0 μg/㎖, 가장 바람직하게는 0.1 ~ 2.0 μg/㎖ 일 수 있다.

이하 실시예를 통해 본 발명을 상세히 설명한다. 그러나 이는 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이에 한정되는 것으로 여겨져서는 안 된다.

실시예

[봉독 추출물의 제조]

미정제 생봉독 분말 50g을 비이커에 넣고 에틸아세테이트(Ethyl acetate; EA) 400㎖를 가하여 교반기로 20분간 섞어주었다. 교반시킨 봉독을 10분간 초음파(40KHz, 4.5A) 처리하고, 에틸아세테이트로 녹인 용액을 포어 지름이 1 ㎛의 거름종이로 여과하였다. 상기 여과에 의하여 여액의 지용성 추출물을 분리하였고, 걸러진 거름종이 위 잔사는 후드(23℃)에서 20시간 방치하여 용매를 건조시켰다. 상기 건조된 잔사에 증류수 400㎖를 가하여 20분간 교반한 후 10분간 초음파처리 하여 용해시켰다. 이 용액을 위와 같은 포어 지름 1 ㎛의 거름종이로 여과하여 여액의 수용성 추출물을 분리하였다.

상기 지용성 추출물과 수용성 추출물을 각각 건조하고 1　: 2 의 중량비로 혼합하여 봉독 추출물을 제조하였다.

[어성초 추출물의 제조]

건조된 어성초 200g에 중량의 20배인 99.9% 에탄올(Ethanol) 4L를 가하고, 상온에서 30분간 초음파 처리한 후 30분간 방치하는 과정을 10회에 거쳐 반복 추출하여 얻어진 용액을 농축하고 건조하여 어성초 추출물을 제조하였다.

[화장료 조성물의 제조 및 성분 분석]

상기 봉독 추출물과 어성초 추출물을 용매에 넣고 1 : 2의 중량비로 혼합하여 화장료 조성물을 얻었으며, 상기 화장료 조성물의 성분 분석 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

성분명	중량비(%)
melittin	27.04 ±1.20
eicosanol	9.42 ± 0.84
PLA2	9.23 ± 5.23
Apamin	1.01 ± 0.98
Pinocembrin	0.04 ± 0.15
Chrysin	0.04 ± 0.13
Quercitrin	4.36 ± 0.48
Quercetin	0.06 ± 0.026

실험예 1 : 프로콜라겐 합성 및 콜라겐 억제효소 MMP-1 발현 억제 효과

섬유아세포(NHDF)에 상기 실시예의 봉독 추출물 및 화장료 조성물을 전 처리 한 뒤 UV-B(30mJ/cm²)에 노출시키고 24시간 배양한 후 mRNA를 분리하여 RT-PCR 방법으로 프로콜라겐-I 유전자 및 MMP-1 유전자의 발현수준을 확인하였다(도 2).

도 2에서 M3는 실시예의 봉독 추출물을 0.083 μg/㎖의 농도로 처리한 결과를 나타낸 것이며, M4는 실시예의 봉독 추출물과 어성초 추출물이 각각 0.083 μg/㎖ 및 0.167 μg/㎖의 농도로 혼합된 화장료 조성물을 처리한 결과이다.

상기 도 2에서 보는 바와 같이, UV-B에 의하여 섬유아세포의 콜라겐 합성을 억제하면서도, MMP-1 발현을 현저히 증가시키는 것을 확인할 수 있다. 본 발명의 봉독 추출물과 어성초 추출물이 일정 농도로 혼합된 화장료 조성물의 경우 봉독 추출물에 비하여 콜라겐 대사의 활성을 현저히 증가시키고, UV-B에 의한 MMP-1 발현을 억제시킴을 확인할 수 있었다.

또한, ECM(extracellular matrix) 개선 효과를 가지는 주름개선물질로 알려져 있는 양성대조군 Adenosine과 비교 실험을 진행한 결과를 하기 도 3에 나타내었으며, 양성대조군에 비하여 월등하게 UV-B에 의한 MMP-1 발현을 억제할 수 있음을 확인할 수 있다.

또한, Pro-collagen/MMP-1 ratio를 계산하여 이를 도 4에 나타내었으며, 상기 도 4에서 보는 바와 같이, 봉독 추출물 자체는 양성대조군 Adenosine 처리(10μM, 100μM)한 수준에 못 미치는 결과를 나타내나, 본 발명의 화장료 조성물은 양성대조군에 비하여 월등한 수치를 나타내는 바, 콜라겐 대사 활성이 현저하게 증가하였음을 확인할 수 있었다.

따라서 본 발명의 조성물이 UV-B 조사에 의해 일어나는 스트레스에 노출되어 있을 때 ECM의 대사를 조절하는 보호 효과를 가질 뿐 아니라 새로운 콜라겐의 합성을 유도하는 회춘 효과(rejuvenation effect)가 우수함을 알 수 있다.

실험예 2 : 항노화 성분과의 효과 비교

타 항노화 성분과의 효과 비교를 위하여, 주름개선 항노화 기능성 물질인 EGF(Epidermal Growth Factor)와 MMP-1 저해물질로 알려진 녹차의 항노화 유효성분인 EGCG [(-)-Epigallocatechin-3-O- gallate]와의 비교 실험을 진행하였다.

이를 위하여 EGF 10ppm (10μg/㎖), EGCG 0.5uM (0.23μg/㎖)과 상기 M4 조성물을 사용하여 실험예 1과 동일한 실험을 진행하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

상기 도 5에서 보는 바와 같이, 본 발명의 M4 조성물이 EGF나 EGCG에 비하여 항노화 효과가 우수함을 확인할 수 있다.

실험예 3 : 봉독 추출물과 어성초 추출물의 농도별 효과 비교

각 추출물의 혼합 비율 별 효과를 비교하기 위하여 하기 표 2와 같이 봉독 추출물과 어성초 추출물의 농도를 달리한 조성물을 처리하였으며, 그 결과를 도 6에 나타내었다.

No	봉독 추출물(μg/㎖)	어성초 추출물(μg/㎖)
1	0.042	0.167
2	0.042	0.334
3	0.083	0.167
4	0.083	0.334
5	0.167	0.167
6	0.167	0.334

상기 도 6에서 보는 바와 같이 Pro-collagen/MMP-1 ratio를 고려할 때 No.3 시료가 가장 높은 ECM 대사 활성화를 나타낸 바, 봉독 추출물과 어성초 추출물의 중량비가 약 1 : 2로 혼합될 때 우수한 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

실험예 4 : 마이크로 니들 패취에 의한 투여 효과

본 발명의 조성물이 피부장벽을 투과하여 진피층에 영향을 미칠 수 있도록 마이크로니들 패취(microneedle patch)를 제작하였으며, 그 과정은 다음과 같다.

먼저, 60% (w/v, 증류수에 용해) 히알루론산 1.92 g, 증류수 3 mL 및 상기 M4 조성물 0.2 mL를 4℃에서 혼합하여, 점성 용액을 제조하였다.

다음, 상기 점성 용액을 금속 기판 일 면에 상기 혼합 용액을 방울(droplet) 형태로 분배한 후, 인장 과정을 통하여 마이크로 니들의 길이를 조절하면서 송풍을 통하여 상온에서 건조하여 마이크로 니들 패치를 제조하였다. 상기 제조 과정은 도 7에 나타내었다.

화장품 용도로 사용이 가능하도록 마이크로 니들의 최종 길이를 300 μm 내외로 설정하여, 평균 길이 332.79 ±27.80 μm, 평균 상단부 내경 42.01 ±6.04 μm로 제작하였다. 상기 마이크로 니들이 형성된 패취는 폴리우레탄 필름이 부착된 겔 폼(gel foam) 패취를 사용하였고, 2 cm X 2 cm 의 크기로 제조하였으며, 패취 당 64개의 마이크로 니들이 1 mm 간격으로 탑재되었다.

상기 M4 조성물 내 봉독 추출물과 어성초 추출물의 농도 합이 0.16, 0.25, 0.42, 0.50 μg/㎖ 이 되도록 조절하여 마이크로 니들을 제조하였으며, 이를 이용하여 실험예 1과 동일한 실험을 진행하였으며, 그 결과를 도 8에 나타내었다.

그 결과 상기 M4 조성물의 농도가 0.25 μg/㎖ 이상의 범위에서 농도 의존적으로 MMP-1 발현을 억제시키는 것을 확인할 수 있었다.

이상에서는 본 발명의 실시예를 중심으로 설명하였으나, 이는 예시적인 것에 불과하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 기술자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호범위는 이하에 기재되는 특허청구범위에 의해서 판단되어야 할 것이다.

Claims (10)

1. 지용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 지용성 추출물과 수용성 용매에 의하여 추출된 봉독의 수용성 추출물이 1 : 2 ~ 5 의 중량비로 혼합된 봉독 추출물 100 중량부에 대하여, 어성초 추출물 100 내지 300 중량부가 포함되고,
   멜리틴 5 ~ 40 중량%, 에이코세놀(eicosenol) 1 ~ 20 중량%, 포스포리파제A-2 1 ~ 20 중량%, 아파민(Apamin) 0.1 ~ 5 중량%, 피노셈브린(pinocembrin) 0.01 ~ 5 중량%, 크리신(chrysin) 0.01 ~ 5 중량%, 쿼시트린 1 ~ 10 중량% 및 쿼세틴 0.01 ~ 5 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
   
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 지용성 용매는 헥산, 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄 및 클로로포름 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매인 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 수용성 용매는 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매인 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 어성초 추출물은 물 및 C₁ ~ C₄의 알코올 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매에 의하여 추출된 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
   
6. 삭제
7. 삭제
8. 봉독을 지용성 용매에 넣고 여과하여 여액의 지용성 추출물을 얻는 단계;
   상기 여과에 의하여 걸러진 잔사를 수용성 용매에 넣고 여과하여 여액의 수용성 추출물을 얻는 단계;
   상기 지용성 추출물과 수용성 추출물을 1 : 2 ~ 5 의 중량비로 혼합하여 봉독 추출물을 제조하는 단계; 및
   상기 봉독 추출물 100 중량부에 대하여 어성초 추출물 100 내지 300 중량부를 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물의 제조 방법.
   
9. 삭제
10. 제1항 및 제3항 내지 제5항 중 선택된 어느 한 항의 화장료 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 마이크로 니들 패취.
    

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