KR101828557B1 - 세드롤 또는 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

세드롤 또는 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 세드롤 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명의 세드롤 또는 이의 유도체는 IL-17A의 발현을 저해하며, 특히 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 세드렌은 건선 동물모델에서 건선의 발병 지연 및 치료 효능을 나타냄으로써, 상기 화합물은 IL-17로부터 매개되는 자가면역질환을 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.

Description

세드롤 또는 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING AUTOIMMUNE DISEASES COMPRISING CEDROL OR DERIVATIVES THEREOF, OR PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALTS THEREOF}
본 발명은 세드롤 또는 이의 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
면역은 생체 조직으로 침입하거나 주입되는 모든 외부 고분자물질에 대한 생체의 자기보호체계의 하나로 모든 정상 개체는 자기(self)를 구성하는 항원에 대해서는 해롭게 반응하지 않는 반면, 비자기(non-self) 항원에 대해서는 이를 인식하고 반응하여 제거할 수 있는 능력을 갖는다. 그러나 숙주의 면역 반응이 외래 항원을 자기항원과 구별하는데 실패하여 비정상적인 면역반응을 유도하면 체내의 면역세포가 자신의 세포성분을 공격하여 다양한 질병을 일으키는데 이를 자가면역질환이라고 한다.
자가면역질환은 유전성, 스트레스, 호르몬, 중금속, 음식, 감염, 살충제 등 다양한 원인에 의해 발병하며, 전 세계적으로 약 5 내지 8%에서 나타난다. 또한, 자가면역질환은 과잉의 IL-17 사이토카인에 의해 발병할 수 있다. 체내에서 항원제공세포(APC)가 항원을 인식하면 그 세포가 분비하는 사이토카인의 종류에 따라서 다양한 T 세포가 활성화되는데, 특히 Th17 세포가 활성화되면 인터류킨-17A(IL-17A), 인터류킨-17F(IL-17F), 인터류킨-21(IL-21) 또는 인터류킨-22(IL-22) 등의 사이토카인이 분비되어 면역이 활성화된다. 그 중에서 IL-17A와 IL-17F는 과다하게 분비되면 호모다이머(homodimer) 또는 헤테로다이머(heterodimer)가 되어 피부 또는 점막 세포에 발현된 인터류킨-17 수용체 A(IL-17RA)와 인터류킨-17 수용체 C(IL-17RC)에 결합하여 염증과 세포파괴 작용을 나타낸다. 분비된 IL-17이 혈관내피세포에 작용하면 혈전증 또는 염증작용이 일어나며, 상피조직에 작용하면 피부 또는 점막에 다양한 염증작용이 일어난다. 또한, 대식세포나 수지상세포에 작용하면 각종 염증뿐만 아니라 연골조직도 손상시키며, 골아세포에 작용하면 파골작용을 촉진하여 골다공증을 유발한다. IL-17의 과다 분비에 의해 발생하는 자가면역질환의 예로는 다발성경화증, 자폐증, 천식, 제1형 당뇨병, 류마티스성 관절염, 류마티스성 다발성 근육통, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 건선, 습진, 피부경화증, 백반, 다발성 경화증, IL-17 유발성 치매, 말초성 신경염, 포도막염, 안구건조증, 장기이식 거부, 암 등이 있다. 현재 자가면역질환 치료제로서 항염증 및 면역 억제제 약물이 사용되고 있으나 일부 환자들은 상기 약물들에 내성이 있어 치료가 어렵다.
자가면역질환의 하나인 건선은 악화와 호전이 반복되는 비 전염성 만성 피부질환으로 처음 발병하면 피부에 좁쌀 같은 붉은색을 띠는 발진이 생기며, 그 위에 하얀 피부 각질세포가 덮여 크기가 점점 커진다. 모든 연령에서 발생할 수 있으나 20대에 가장 많이 발생하며, 10대, 30대의 순으로 높게 나타난다. 세계적으로는 약 3%의 유병률을 나타내며, 꾸준히 증가하는 추세에 있다. 현재 건선의 치료제로서 메토트렉세이트, 에트레티네이트 등과 같은 스테로이드 제제가 사용되고 있으나 스테로이드 제제는 간을 손상시키거나 태아의 기형을 유발하는 등의 부작용이 있다.
상기의 문제점들로 인해 부작용이 없는 자가면역질환의 치료제를 개발하고자 하는 연구가 진행되고 있다. 구체적으로, 비바리 비단망사 추출물을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환 또는 염증질환의 치료용 조성물이 대한민국 특허공개 제10-2014-0096770호에 개시되어 있으며, 고삼추출물을 포함하는 자가면역질환치료제가 대한민국 특허등록 제10-0804517호에 개시되어 있다.
이에, 본 발명자들은 체내 부작용이 없는 자가면역질환 치료제를 개발하고자 노력하던 중, 세드롤, 세드릴 아세테이트, 알파-세드렌, 메틸 세드릴 케톤, 메틸 세드릴 에테르 및 세드렌 에폭사이드가 IL-17A의 발현을 저해하며, 특히 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌이 건선 동물모델에서 건선의 발병 지연 및 치료 효능이 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 하기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 자가면역질환의 개선용 건강기능식품, 피부자극 완화용 화장료 조성물 및 발모제 조성물을 제공하는 것이다:
[화학식 1]
Figure 112017033330149-pat00001
;
[화학식 2]
Figure 112017033330149-pat00002
;
[화학식 3]
Figure 112017033330149-pat00003
;
[화학식 4]
Figure 112017033330149-pat00004
;
[화학식 5]
Figure 112017033330149-pat00005
; 및
[화학식 6]
Figure 112017033330149-pat00006
.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는, 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112017033330149-pat00007
;
[화학식 2]
Figure 112017033330149-pat00008
;
[화학식 3]
Figure 112017033330149-pat00009
;
[화학식 4]
Figure 112017033330149-pat00010
;
[화학식 5]
Figure 112017033330149-pat00011
; 및
[화학식 6]
Figure 112017033330149-pat00012
.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환의 개선용 건강기능식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 피부자극 완화용 화장료 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 발모제 조성물을 제공한다.
본 발명의 세드롤 또는 이의 유도체는 IL-17A의 발현을 저해하며, 특히 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌은 건선 동물모델에서 건선의 발병 지연 및 치료 효능을 나타냄으로써, 상기 화합물은 IL-17로부터 매개되는 자가면역질환을 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 세드롤, 세드릴 아세테이트, 알파-세드렌, 메틸 세드릴 케톤, 메틸 세드릴 에테르 및 세드렌 에폭사이드에 의한 IL-17A 발현 수준 저해 효과를 확인한 그래프이다:
Con: 화합물을 처리하지 않은 대조군.
도 2a는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드를 도포하기 전(D0) 또는 도포 1일 후(D1)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 2b는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드 도포 2일 후(D2) 또는 도포 3일 후(D3)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 2c는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드 도포 4일 후(D4) 또는 도포 5일 후(D5)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 2d는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드 도포 6일 후(D6) 또는 도포 7일 후(D7)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 3은 무처리 대조군(CONT), 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스의 체중 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스의 귀 두께에 대한 저감효과를 비교한 그래프이다.
도 5는 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스의 피부각질화에 대한 저감효과를 비교한 그래프이다.
도 6은 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스의 피부발적에 대한 저감효과를 비교한 그래프이다.
도 7은 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스의 귀 두께, 피부각질화 및 피부발적을 모두 반영한 건선 중증도 지수(PASI) 점수 변화를 나타낸 그래프이다.
도 8은 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스에서 피부통증에 대한 저감효과를 비교한 그래프이다.
도 9는 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스에서 피부출혈반점에 대한 저감효과를 비교한 그래프이다.
도 10은 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스에서 피부주름에 대한 저감효과를 비교한 그래프이다.
도 11은 무처리 대조군(Control), 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스의 비장에서 IL-17A 발현 저해효과를 비교한 그래프이다.
도 12는 무처리 대조군(CONTROL), 이미퀴모드를 도포하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여하며 건선을 유발시킨 마우스의 표피층 두께를 비교한 사진(A) 및 그래프(B)이다.
도 13a는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드 도포 중지 1일 후(D8) 또는 도포 중지 2일 후(D9)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 13b는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드 도포 중지 3일 후(D10) 또는 도포 중지 4일 후(D11)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 13c는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드 도포 중지 5일 후(D12) 또는 도포 중지 6일 후(D13)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 13d는 건선을 유발시킨 마우스의 귀 및 등에 각각 증류수(IMQ), 세드롤(C), 세드릴 아세테이트(CA) 또는 알파-세드렌(CE)을 경구 투여하면서 이미퀴모드 도포 중지 7일 후(D14) 또는 도포 중지 8일 후(D15)에 건선 치료 효과를 확인한 사진이다.
도 14는 건선을 유발시킨 후 이미퀴모드 도포를 중지하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여한 마우스에서 귀 두께 회복효과를 비교한 그래프이다.
도 15는 건선을 유발시킨 후 이미퀴모드 도포를 중지하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여한 마우스에서 피부각질화 회복효과를 비교한 그래프이다.
도 16은 건선을 유발시킨 후 이미퀴모드 도포를 중지하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여한 마우스에서 피부발적 회복효과를 비교한 그래프이다.
도 17은 건선을 유발시킨 후 이미퀴모드 도포를 중지하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여한 마우스에서 귀 두께, 피부각질화 및 피부발적을 모두 반영한 건선 중증도 지수의 누적 점수를 비교한 그래프이다.
도 18은 건선을 유발시킨 후 이미퀴모드 도포를 중지하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여한 마우스에서 피부출혈반점 회복효과를 비교한 그래프이다.
도 19는 건선을 유발시킨 후 이미퀴모드 도포를 중지하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여한 마우스에서 피부주름 회복효과를 비교한 그래프이다.
도 20은 건선을 유발시킨 후 이미퀴모드 도포를 중지하고 증류수(IMQ), 세드롤(IMQ+C), 세드릴 아세테이트(IMQ+CA) 또는 알파-세드렌(IMQ+CE)을 경구 투여한 마우스에서 발모재생력 촉진효과를 비교한 그래프이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는, 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
세드롤 및 이의 유도체의 구조
화학식 화합물명 화학구조


1		 세드롤(cedrol)
Figure 112017033330149-pat00013


2		 세드릴 아세테이트
(cedryl acetate)
Figure 112017033330149-pat00014


3		 알파-세드렌
(alpha-cedrene)
Figure 112017033330149-pat00015



4		 메틸 세드릴 케톤
(methyl cedryl ketone)
Figure 112017033330149-pat00016



5		 메틸 세드릴 에테르
(methyl cedryl ether)
Figure 112017033330149-pat00017



6		 세드렌 에폭사이드
(cedrene epoxide)
Figure 112017033330149-pat00018
상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등이 있다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1 내지 6의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜서 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
또한, 상기 화학식 1 내지 6의 화합물은 비대칭 중심을 가지므로 상이한 거울상 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 이는 화학식 1 내지 6의 화합물의 모든 광학 이성질체, (R) 또는 (S)형 입체 이성질체, 또는 이들의 혼합물을 모두 포함할 수 있다. 상기 화학식 1의 화합물은 이의 라세미체, 하나 이상의 거울상 이성질체 형태, 하나 이상의 부분 입체 이성질체 형태 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 광학 이성질체는 당업계에 알려진 이성질체의 분리 방법이나 제조 과정에 따라 수득될 수 있다.
상기 자가면역질환은 인터류킨-17에 의해 매개된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 자가면역질환은 탈모, 다발성 경화증, 자폐증, 천식, 제1형 당뇨병, 류마티스성 관절염, 류마티스성 다발성 근육통, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 건선, 아토피, 습진, 지루성피부염, 백반증, 피부경화증, 피부 면역 과민증, 다발성 경화증, 치매, 말초성 신경염, 포도막염, 안구건조증, 장기이식 거부 또는 암일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 세드롤, 세드릴 아세테이트, 알파-세드렌, 메틸 세드릴 케톤, 메틸 세드릴 에테르 및 세드렌 에폭사이드를 사용하여, 상기 세드롤 또는 이의 유도체가 IL-17A의 발현을 저해함을 확인하였다(도 1 참조).
또한, 본 발명자들은 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여하면서 마우스에 건선을 유발시키면 귀 두께(도 4 참조), 피부각질화(도 5 참조), 피부발적(도 6 참조), 피부통증(도 8 참조), 피부출혈반점(도 9 참조) 및 피부주름(도 10 참조)에 대한 저감효과가 있으며, 비장에서 IL-17A의 발현 저해효과(도 11 참조)가 있고, 표피층의 두께가 대조군에 비해 더 얇은 것을 확인하였다(도 12 참조).
아울러, 본 발명자들은 건선을 유발시킨 후 마우스에 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여하면 귀 두께(도 14 참조), 피부각질화(도 15 참조), 피부발적(도 16 참조), 피부출혈반점(도 18 참조) 및 피부주름(도 19 참조)에 대한 회복효과가 있으며, 발모재생력 촉진효과(도 20 참조)가 있음을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물은 IL-17A의 발현을 억제하고, IL-17A 매개 질환인 건선의 발병 지연 효과 및 치료 효과가 있으므로, 자가면역질환의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약학적 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분인 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 10 내지 95 중량%로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 추가로 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 둘 이상의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 조성물을 생체 내에 전달하는데 적합한 것이면 특별히 제한되지 않으며, 예로서, Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc. 에 기재된 화합물, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 또는 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합한 것일 수 있다. 이때, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.
상기 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
본 발명의 조성물은 경구제제 또는 비경구제제로 제형화 될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 및 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 첨가될 수 있다. 한편, 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 여기에는 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등과 같은 부형제가 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제 등의 주사제가 포함될 수 있다.
비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여될수 있으며, 비경구 투여는 피부 외용 또는 복강내 주사, 직장내 주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식중 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여된다. 이는 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물 등에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 조성물은 단독 또는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 병용 투여시, 투여는 순차적 또는 동시일 수 있다.
그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함되는 유효성분의 양은 0.001 내지 10,000 mg/㎏, 구체적으로는 0.1 내지 5 g/kg일 수 있다. 상기 투여는 하루에 1회일 수 있고, 수회로 나뉠 수도 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환의 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 실시예에 따르면, 상기 화합물은 화학식 1로 표시되는 세드롤, 화학식 2로 표시되는 세드릴 아세테이트, 화학식 3으로 표시되는 알파-세드렌, 화학식 4로 표시되는 메틸 세드릴 케톤, 화학식 5로 표시되는 메틸 세드릴 에테르 또는 화학식 6으로 표시되는 세드렌 에폭사이드일 수 있다.
상기 화합물은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 상기 자가면역질환은 인터류킨-17로부터 매개될 수 있다. 구체적으로, 상기 자가면역질환은 탈모, 다발성 경화증, 자폐증, 천식, 제1형 당뇨병, 류마티스성 관절염, 류마티스성 다발성 근육통, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 건선, 아토피, 습진, 지루성피부염, 백반증, 피부경화증, 피부 면역 과민증, 다발성 경화증, 치매, 말초성 신경염, 포도막염, 안구건조증, 장기이식 거부 또는 암일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 세드롤, 세드릴 아세테이트, 알파-세드렌, 메틸 세드릴 케톤, 메틸 세드릴 에테르 및 세드렌 에폭사이드가 IL-17A의 발현을 저해하며(도 1 참조), 특히 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌은 건선 동물모델에서 건선의 발병 지연(도 2a 내지 도 12 참조) 및 치료 효능(도 13a 내지 도 19 참조)을 나타냄을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물은 IL-17A로부터 매개되는 자가면역질환의 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있다. 이때, 첨가되는 유효성분의 함량은 목적에 따라 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 함량은 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부일 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품의 형태 및 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 건강기능식품의 형태는 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 건강기능식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 피부자극 완화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시예에 따르면, 상기 화합물은 화학식 1로 표시되는 세드롤, 화학식 2로 표시되는 세드릴 아세테이트, 화학식 3으로 표시되는 알파-세드렌, 화학식 4로 표시되는 메틸 세드릴 케톤, 화학식 5로 표시되는 메틸 세드릴 에테르 또는 화학식 6으로 표시되는 세드렌 에폭사이드일 수 있다.
상기 화합물은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 상기 자가면역질환은 인터류킨-17로부터 매개될 수 있다. 구체적으로, 상기 자가면역질환은 탈모, 다발성 경화증, 자폐증, 천식, 제1형 당뇨병, 류마티스성 관절염, 류마티스성 다발성 근육통, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 건선, 아토피, 습진, 지루성피부염, 백반증, 피부경화증, 피부 면역 과민증, 다발성 경화증, 치매, 말초성 신경염, 포도막염, 안구건조증, 장기이식 거부 또는 암일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 세드롤, 세드릴 아세테이트, 알파-세드렌, 메틸 세드릴 케톤, 메틸 세드릴 에테르 및 세드렌 에폭사이드가 IL-17A의 발현을 저해하며(도 1 참조), 특히 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌은 건선 동물모델에서 건선의 발병 지연(도 2a 내지 도 12 참조) 및 치료 효능(도 13a 내지 도 19 참조)을 나타냄을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물은 IL-17A로부터 매개되는 피부자극 완화에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물에서 본 발명의 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1 내지 50 중량%, 구체적으로는 1 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나 상기 비율은 화장품이 제조되는 형태에 따라, 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 적용용량에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들이 포함되며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 페이스트, 크림, 젤, 파우더, 스프레이, 용액, 유탁액, 현탁액(무수 및 수계), 계면활성제-함유 클렌징, 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 마스크, 팩, 분말, 로션, 비누, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 등으로 제형화될 수 있다. 구체적으로, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있다. 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
아울러, 본 발명은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 발모제 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시예에 따르면, 상기 화합물은 화학식 1로 표시되는 세드롤, 화학식 2로 표시되는 세드릴 아세테이트, 화학식 3으로 표시되는 알파-세드렌, 화학식 4로 표시되는 메틸 세드릴 케톤, 화학식 5로 표시되는 메틸 세드릴 에테르 또는 화학식 6으로 표시되는 세드렌 에폭사이드일 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌이 발모 재생력 촉진효과를 나타냄을 확인하였다(도 13a 내지 13d 및 20 참조).
따라서, 본 발명의 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물은 발모제 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 발모제 조성물은 발모제 조성물 전체 중량에 대하여 본 발명의 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물을 0.001 내지 99.99중량%, 구체적으로는 0.1 내지 50중량%로 첨가할 수 있다. 그러나 상기 비율은 탈모의 증상 정도나 사용용도에 따라 인체에의 독성을 미치지 않는 범위 내에서 달라질 수 있다.
본 발명의 발모제 조성물은 상기 화학식 1 내지 6으로 표시되는 화합물 이외에 약품 또는 화장품 원료로서 통상적으로 사용되는 성분이 적절히 배합될 수 있다. 예를 들어, 정제수, 미네랄워터, 에탄올, 글리세린, 스쿠알렌, 1,3-프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 피마자유, 츠바키유 및 리퀴드 페트롤레이텀(liquid petrolatum), 계면활성제, 유화제, 증점제, 방부제, 산화방지제, 향료 또는 담체 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물에는 상기 성분 이외에도 모낭에 영영소를 공급하는 역할을 할 수 있는 성분이나 통상적으로 사용되는 모발성장 촉진 보조성분이 포함될 수 있으며, 예컨데 비타민류, 아미노산류, 동식물유 또는 염화나트륨 등이 포함될 수 있다. 비타민류로는 비타민 A, 비타민 B1, 비타민 B2, 나이아신(니코틴산), 비타민 C, 비타민 E, 판토텐산 나트륨, 판토텐산 칼륨 또는 비오틴 H(비타민 H)가 이용될 수 있으며, 아미노산류로는 도파가 이용될 수 있다. 동식물유로는 마유, 난유, 올리브유, 동백유, 유채기름, 참기름 또는 배아유 등이 이용될 수 있다. 이들의 양은 전체 조성물의 0.0001 내지 10중량%, 구체적으로는 0.01 내지 1중량%로 첨가될 수 있다.
본 발명의 조성물은 모발 또는 두피에 직접 도포 또는 산포하는 등의 방법으로 사용될 수 있다. 따라서, 헤어토닉, 헤어로션, 헤어크림, 헤어스프레이, 헤어무스, 헤어젤, 헤어컨디셔너, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어팩, 헤어트리트먼트, 눈썹발모제, 속눈썹발모제 또는 속눈썹영양제, 애완동물용 샴푸 또는 애완동물용 린스로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 크림, 로션, 토닉, 스프레이, 에어로졸, 오일, 용액, 현탁액, 젤, 연고, 에멀젼, 또는 페이스트 등의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는, 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액인 경우에는, 담체 성분으로 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있다. 이의 예로는, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
세드롤 및 이의 유도체의 IL-17A 발현 저해효과 확인
<1-1> 세드롤 및 이의 유도체의 IL-17A 발현 저해 정도 확인
세드롤 및 이의 유도체의 IL-17A 발현 저해효과를 확인하기 위하여 인간 IL-17 루시페라아제-(LUCPorter)안정화 리포터 세포주[IL-17 Luciferase-(LUCPorter)Stable Reporter Cell Line(IMGENEX, USA, Cat No. IML-301)]에 세드롤(Sigma-Aldrich, USA, Cat No. 22135), 세드릴 아세테이트(Sigma-Aldrich, USA, Cat No. 45885), 알파-세드렌(Sigma-Aldrich, USA, Cat No. 22133), 메틸 세드릴 케톤(Sigma-Aldrich, USA, Cat No. W522805), 메틸 세드릴 에테르(Sigma-Aldrich, USA, Cat No. W525405) 및 세드렌 에폭사이드(Sigma-Aldrich, USA, Cat No. S528188)를 처리한 후, IL-17A 저해 어세이를 수행하였다. 인간 IL-17 루시페라아제-(LUCPorter)안정화 리포터 세포주는 IL-17을 분비하는 세포주로서, 인간 배아 신장 세포주인 HEK 293 세포에 pLightSwitch 프로모터 벡터가 삽입되어 있으며, 인간 IL-17A 타겟 유전자에 리포터 유전자로써 레닐라 루시페라아제(Renilla luciferase)가 삽입되어 있다.
구체적으로, 인간 IL-17 루시페라아제-(LUCPorter)안정화 리포터 세포주는 4.5 g/ℓ의 글루코스, 4 mM의 L-글루타민, 1 mM의 소듐 피루빈산(sodium pyruvate), 10% FBS, 100 ㎍/㎖의 스트렙토마이신, 100 units/㎖의 페니실린 및 3 ㎍/㎖의 퓨로마이신이 포함된 DMEM(GIBCO, USA)배지에서 배양하여 준비하였다. 상기 준비한 세포를 96-웰 플레이트의 각 웰에 웰당 5 X 104 cells/well이 되도록 분주하고, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 16시간 동안 배양하였다. 배양한 세포에 상기 6종의 화합물을 각각 10, 100 또는 1,000 ㎍/㎖ 농도로 처리한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 6시간 동안 더 배양하였다. 이후, 각 웰에 LightSwitch 어세이 키트(SwitchGear Genomics, USA)에 포함되어 있는 LightSwitch 루시페라아제 어세이 용액(CAT Number LS010, Switchgear Genomics, USA)을 50 ㎕씩 넣고, 30분 동안 암실에서 반응시킨 후, Multimode Reader LB-942(Berthold, USA) 및 ICE 프로그램을 이용하여 형광을 측정하였다. 결과는 세번 반복한 값의 평균±표준편차를 그래프로 나타내었다.
화합물의 IL-17A 발현 저해 정도
화합물
 농도
(㎍/㎖)		 IL-17A의 발현 저해 정도(%) 평균
(%)
실험-1 실험-2 실험-3

세드롤
 0 0 0 0 0
10 24 0 33 19.0
100 21 14 43 26.0
1000 76 59 72 69.0

알파-세드렌
 0 0 0 0 0
10 6 3 21 10.0
100 21 11 32 21.3
1000 36 23 35 31.3

세드릴 아세테이트
 0 0 0 0 0
10 실험하지 않음 15 23 19.0
100 실험하지 않음 27 36 31.5
1000 실험하지 않음 74 90 82.0

메틸 세드릴 케톤
 0 0 0 0 0
10 0 1 13 4.7
100 12 15 25 17.3
1000 78 58 66 67.3

메틸 세드릴 에테르
 0 0 0 0 0
10 -6 4 4 0.7
100 -5 5 8 2.7
1000 48 18 26 30.7

세드렌 에폭사이드		 0 0 0 0 0
10 11 4 0 5.0
100 14 16 12 14.0
1000 60 56 46 54.0
그 결과, 도 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, IL-17A 발현이 대조군에서는 2,582 유닛(unit)이었으며, 6종의 화합물을 각각 10, 100 또는 1,000 ㎍/㎖ 농도로 처리했을 때, 세드롤을 처리한 군에서는 각각 1,718±174(대조군의 67%), 1,460±124(대조군의 57%) 및 715±45(대조군의 28%) 유닛을 나타내었고, 알파-세드렌을 처리한 군에서는 각각 2,042±114(대조군의 79%), 1,757±310(대조군의 68%) 및 1,688±64(대조군의 65%) 유닛을 나타내었으며, 세드릴 아세테이트를 처리한 군에서는 각각 1,994±304(대조군의 77%), 1,648±138(대조군의 64%) 및 257±6(대조군의 10%) 유닛을 나타내었다. 또한, 메틸 세드릴 케톤을 처리한 군에서는 각각 2,248±194(대조군의 87%), 1,930±111(대조군의 75%) 및 866±106(대조군의 34%) 유닛을 나타내었고, 메틸 세드릴 에테르를 처리한 군에서는 각각 2,479±136(대조군의 96%), 2,379±206(대조군의 92%) 및 1,921±239(대조군의 74%) 유닛을 나타내었으며, 세드렌 에폭사이드를 처리한 군에서는 각각 2,591±458(대조군의 100%), 2,267±806(대조군의 88%) 및 1,382±87(대조군의 54%) 유닛을 나타내었다(도 1 및 표 2). 특히, 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌은 농도의존적으로 IL-17A의 발현을 저해했다.
상기 결과를 바탕으로 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 하기 실험에 사용할 화합물로 선별하였다.
<1-2> 세드롤 및 이의 유도체의 IL-17A 발현에 대한 IC 50 값 확인
세드롤, 세드릴 아세테이트, 알파-세드렌, 메틸 세드릴 케톤, 메틸 세드릴 에테르 및 세드렌 에폭사이드의 IC50 값을 확인하기 위하여, 먼저, 상기 실시예 <1-1>에서 측정한 값을 하기 수학식 1에 대입하여 각각의 화합물에 대한 IL-17A 발현 평균 억제율을 계산한 후, 계산 값을 이용하여 IL-17A 발현을 50% 억제할 수 있는 농도인 IC50 값을 계산하였다. 각각의 화합물에 대한 IL-17A 발현 평균 억제율은 상기 표 2에 나타내었다.
[수학식 1]
억제율(%)= 100 × (대조군의 측정값 - 실험군의 측정값) / 대조군의 측정값
IL-17A 발현 저해에 대한 화합물의 IC50 값
화합물 IC50(㎍/㎖)
세드롤 726
알파-세드렌 1,507
세드릴 아세테이트 608
메틸 세드릴 케톤 841
메틸 세드릴 에테르 1,130
세드렌 에폭사이드 942
그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 세드릴 아세테이트〉세드롤〉 메틸 세드릴 케톤〉 세드렌 에폭사이드〉 메틸 세드릴 에테르〉 알파-세드렌 순으로 IL-17A 발현 억제작용이 강하게 나타났다(표 3).
세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌의 건선 발병 지연 효과 확인
<2-1> 건선을 유발시킨 마우스의 준비
세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌의 건선 발병 지연 효과를 확인하기 위해 총 5그룹의 마우스를 준비하였으며 각 그룹당 8마리의 마우스를 사용하였다. 먼저, 이발기(Kimlaube Hair pen 325,327, 리케이, Korea)로 면역력이 약화된 8주령 수컷 Balb/c 마우스(Narabiotech, Korea)의 등 전체 부분의 털을 제거하였다. 털을 제거한 마우스 등 가운데의 2 cm X 1.5 cm 부분에 2 ㎎의 이미퀴모드(3M Health Care Limited, England)를, 오른쪽 귀에 1.125 ㎎의 이미퀴모드를 매일 1회 도포하여 건선을 유발시켰다.
상기 제조된 마우스를 증류수 처리그룹(IMQ), 세드롤 처리그룹(C), 세드릴 아세테이트 처리그룹(CA) 또는 알파-세드렌(CE) 처리그룹으로 나누었고, 증류수는 200 ㎕씩, 세드롤 또는 이의 유도체는 100 ㎎/㎏의 투여량이 되게 200 ㎕씩 경구 투여하였다. 증류수 또는 화합물의 투여를 시작한 날을 0일로 하여 하루 1회씩 일주일 동안 투여하면서 매일 사진으로 기록하였다(도 2a 내지 2d). 한편, 무처리 대조그룹(CONT)으로는 이미퀴모드를 도포하는 대신 등에는 40 ㎎의 바세린을, 오른쪽 귀에는 22.5 ㎎의 바세린을 도포하고, 200 ㎕의 증류수를 경구 투여한 것을 사용하였다.
<2-2> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 체중 변화 비교
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 체중 변화를 비교하기 위해 일주일 동안 매일 같은 시간에 마우스의 체중을 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 대조군(CONT)에서는 마우스의 체중이 완만하게 증가하여, 7일 후 1.13 g이 증가하였다. 그러나 이미퀴모드(IMQ)를 도포한 그룹에서는 첫날부터 2일간 체중이 감소하였지만 3일째부터 5일째까지 체중이 증가하였으며, 5일 이후에는 다시 체중이 감소하기 시작하였다. IMQ만 도포한 그룹은 7일간 체중이 0.48 g 감소하였으나, IMQ를 도포하면서 세드롤을 투여한 그룹은 7일간 체중이 0.025 g 증가하였다(도 3).
<2-3> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 귀 두께에 대한 저감효과 확인
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰한 후, 1점 내지 4점의 건선 중증도 지수(Psoriasis Area Severity Index, PASI)를 계산하여 상기 화합물의 귀 두께에 대한 저감효과를 확인하였다.
그 결과, 도 2a 내지 2d 및 4에 나타낸 바와 같이, IMQ만 도포한 그룹은 귀 두께가 가장 많이 증가하였으며, 1일 후에는 평균 0.83점이었고, 지속적으로 증가하여 7일 후에는 평균 3.5점이었다. IMQ를 도포하고 세드롤을 투여한 그룹에서는 7일 후에 귀 두께가 평균 2.6점이었으며, IMQ를 도포하고 세드롤 아세테이트를 투여한 그룹에서는 7일 후에 귀 두께가 평균 2.3점이었고, IMQ를 도포하고 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 7일 후에 귀 두께가 평균 2.6점이었다. 화합물을 투여한 그룹에서 귀 두께에 대한 저감효과가 있었고, 세드릴 아세테이트가 가장 강하였으며, 뒤를 이어 알파-세드렌 및 세드롤 순으로 효과를 나타내었다(도 2a 내지 2d 및 4).
<2-4> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 피부각질화에 대한 저감효과 확인
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰한 후, 건선 중증도 지수(PASI)를 계산하여 상기 화합물의 피부각질화에 대한 저감효과를 확인하였다. 피부각질화는 건선의 증상으로, IMQ를 도포하면 피부각질화가 유도된다.
그 결과, 도 2a 내지 2d 및 5에 나타낸 바와 같이, IMQ만 도포한 그룹은 가장 강하게 피부각질화를 일으켰으며, 7일 후에는 평균 3.8점이었다. IMQ를 도포하고 세드롤을 투여한 그룹에서는 7일 후에 평균 3.00점이었으며, IMQ를 도포하고 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 7일 후에 평균 3.08점이었고, IMQ를 도포하고 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 7일 후에 평균 2.66점이었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부각질화에 대한 저감효과가 있었고, 알파-세드렌이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드릴 아세테이트 및 세드롤 순으로 효과를 나타내었다(도 2a 내지 2d 및 5).
<2-5> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 피부발적에 대한 저감효과 확인
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰한 후, 건선 중증도 지수(PASI)를 계산하여 상기 화합물의 피부발적에 대한 저감효과를 확인하였다. 피부발적은 건선의 증상으로, IMQ를 도포하면 피부발적이 유도된다.
그 결과, 도 2a 내지 2d 및 6에 나타낸 바와 같이, IMQ만 도포한 그룹은 가장 강하게 피부발적을 일으켰으며, 7일 후에는 평균 4.00점이었다. IMQ를 도포하고 세드롤을 투여한 그룹에서는 7일 후에 평균 3.33점이었으며, IMQ를 도포하고 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 7일 후에 평균 3.16점이었고, IMQ를 도포하고 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 7일 후에 평균 3.33점이었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부발적에 대한 저감효과가 있었고, 알파-세드렌이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드롤 및 세드릴 아세테이트 순으로 효과를 나타내었다(도 2a 내지 2d 및 6).
<2-6> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 귀 두께, 피부각질화 및 피부발적에 대한 건선 중증도 지수의 누적 점수 비교
상기 실시예 <2-3> 내지 <2-5>에서 얻은 건선 중증도 지수 값을 누적하여 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 귀 두께, 피부각질화 및 피부발적에 대한 건선 중증도 지수의 누적 점수를 비교하였다.
그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, 알파-세드렌과 세드릴 아세테이트가 유사한 정도로 가장 강한 저감효과를 나타내었다(도 7).
<2-7> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 피부통증에 대한 저감효과 확인
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 등을 꼬집어 강한 거부반응과 통증을 나타내는 소리를 내는 마우스의 수를 계산하였다. 통증은 건선의 증상이며, IMQ를 도포하면 시간이 경과할수록 피부통증이 강해진다.
그 결과, 도 8에 나타낸 바와 같이, 모든 그룹에서 3일 후부터 통증을 나타냈으며, IMQ만 도포한 그룹에서 가장 많은 마우스가 통증을 나타내었는데 7일 후에는 5마리가 통증을 나타내었다. 그러나 IMQ를 도포하고 세드롤을 투여한 그룹에서는 4일 후에 1마리만, 5일 후에는 통증을 나타내는 마우스가 전혀 없었다. IMQ를 도포하고 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 6일 후에 1마리만, 7일 후에는 통증을 나타내는 마우스가 전혀 없었다. IMQ를 도포하고 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 7일간 관찰하였을 때 통증을 나타내는 마우스가 전혀 없었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부통증에 대한 저감효과가 있었고, 알파-세드렌이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드롤 및 세드릴 아세테이트가 유사한 정도로 효과를 나타내었다(도 8).
<2-8> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 피부출혈반점에 대한 저감효과 확인
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰하여 출혈반점을 나타내는 마우스의 수를 계산하였다. 출혈반점은 건선의 증상이며, IMQ를 도포하면 시간이 경과할수록 피부출혈반점의 개수가 증가한다.
그 결과, 도 2a 내지 2d 및 9에 나타낸 바와 같이, IMQ만 도포한 그룹은 3일 후에 1마리가, 7일 후에는 5마리가 출혈반점을 나타냈다. 그러나 IMQ를 도포하고 세드롤을 투여한 그룹에서는 4일 후에 1마리가, 7일 후에는 3마리가 출혈반점을 나타냈다. IMQ를 도포하고 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 5일 후에 1마리가, 7일 후에도 1마리만 출혈반점을 나타냈다. IMQ를 도포하고 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 5일 후에 2마리가, 7일 후에는 1마리만 출혈반점을 나타냈다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부출혈반점에 대한 저감효과가 있었고, 세드릴 아세테이트가 가장 강하였으며, 뒤를 이어 알파-세드렌 및 세드롤 순으로 효과를 나타내었다(도 2a 내지 2d 및 9).
<2-9> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 피부주름에 대한 저감효과 확인
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰하여 피부주름을 나타내는 마우스의 수를 계산하였다. 주름은 건선의 증상이며, IMQ를 도포하면 시간이 경과할수록 피부의 각질화가 증가하여 주름이 생성된다.
그 결과, 도 2a 내지 2d 및 10에 나타낸 바와 같이, IMQ만 도포한 그룹은 6일 후에 1마리가, 7일 후에는 3마리가 피부주름을 나타냈다. IMQ를 도포하고 세드롤을 투여한 그룹에서는 5일 후부터 1마리가, 7일 후에는 2마리가 피부주름을 나타냈다. IMQ를 도포하고 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 5일 후에 1마리만, 7일 후에도 1마리만 피부주름을 나타냈다. IMQ를 도포하고 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 6일 후에 1마리만, 7일 후에도 1마리만 피부주름을 나타냈다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부주름에 대한 저감효과가 있었고, 알파-세드렌이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드릴 아세테이트 및 세드롤 순으로 효과를 나타내었다(도 2a 내지 2d 및 10).
<2-10> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 비장에서 IL-17A 발현 저해효과 확인
세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 비장에서 IL-17A 발현 저해효과를 실시간-PCR(polymerase chain reaction)을 통해 확인하였다.
구체적으로, 화합물을 투여하고 7일 후, 상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 비장을 적출하여 통상적인 방법에 따라 총 RNA를 추출하였다. 이후, cDNA를 합성하기 위하여 2 ㎍의 RNA가 9 ㎕의 DEPC(RNase free water)에 들어가도록 농도를 희석하여 사용하였으며, 1 ㎕의 oligo dT를 넣고 70℃에서 10분간 처리하였다. 이후, 얼음에서 5분간 처리하고 시료당 2 ㎕의 10X 반응 버퍼, 2 ㎕의 dNTP(10 mM each), 1 ㎕의 M-MLV 역전사효소 및 5 ㎕의 DNase free water를 넣어 총 20 ㎕가 되도록 한 후, 42℃에서 1시간 동안 반응시켜 cDNA를 합성하였다. 그 후에 72℃에서 10분간 가열하여 역전사효소의 활성을 제거하였으며, -20℃에서 보관하며 사용하였다. 실시간 PCR은 AMPIGENE qPCR 1-Step Green Kit (Enzo Life Sciences Inc, USA)를 사용하여 수행하였다. 실시간 PCR을 하기 위해 먼저, 96-웰 PCR 플레이트에 10 ㎕의 2X Ampigene qPCR Green Mix Lo-Rox, 1 ㎕의 앞쪽 프라이머[IL-17A forward primer: 5'-TCTCCTCTGAATGGGGTGAA-3'(서열번호 1)], 1 ㎕의 뒤쪽 프라이머[IL-17A reverse primer: 5'-CAGAGTAGGGAGCTAAATTATCCA-3'(서열번호 2)], 상기 방법으로 합성한 2 ㎕의 cDNA 주형 및 6 ㎕의 증류수를 넣어 총 20 ㎕가 되도록 하여 샘플을 준비하였다. 이후, 상기 샘플을 이용하여 95℃에서 2분 동안 1 사이클(중합효소 활성)을 한 후, 95℃에서 5초(변성) 및 65℃에서 30초(결합 및 신장) 동안 40 사이클을 하는 조건으로 실시간 PCR을 수행하였다.
그 결과, 도 11에 나타낸 바와 같이, 무처리 대조그룹의 IL-17A의 발현 값을 1로 하였을 때 IMQ만 도포한 그룹에서 IL-17A의 발현 값은 54.9±5.5였다. IMQ를 도포하고 이와 함께 세드롤, 세드릴 아세테이트 또는 알파-세드렌을 처리한 그룹에서 IL-17A의 발현 값은 각각 1.1±0.1, 7.4±0.7 및 31.0±3.1을 나타냈다. 화합물을 투여한 그룹에서 IL-17A의 발현 저해효과가 있었고, 알파-세드렌이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드릴 아세테이트 및 세드롤 순으로 효과를 나타내었다(도 11).
<2-11> 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 표피층 두께 비교
상기 실시예 <2-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 피부를 헤마톡실린과 에오신으로 염색하여 표피층의 두께를 비교하였다.
구체적으로, 상기 실시예 <2-1>의 건선이 유발된 마우스를 CO2로 치사한 후, 등 표면의 1 cm X 1 cm 부분을 수득하여 PBS에 담가두었다. PBS로 세척한 조직을 10% 포르말린에 넣고 상온에서 하루 동안 고정시켰다. 고정된 조직을 PBS로 1회 세척하고, 25% 메탄올, 50% 메탄올, 75% 메탄올 및 100% 메탄올로 각각 30분 동안 탈수시킨 후, 100% 에탄올로 30분씩 2번, 에탄올과 자일렌을 1:1로 혼합한 용액으로 30분, 100% 자일렌으로 30분씩 2번 더 조직을 탈수시켰다. 파라핀을 세척하기 4시간 전에 modular tissue embedding center(LEICA EG 1150H, Leica, Germany)를 켜놓고 60℃에서 파라플라스트 플러스(Sigma Aldrich, Korea)를 녹여 파라핀 세척을 하였다. 병에 조직을 넣고 용해된 파라핀 용액을 부어 60℃인 보온 체임버에서 한 시간씩 2번 세척하였다. 자일렌이 제거된 조직을 파라핀 용액에 넣어 보온 체임버에서 하루 동안 반응시킨 후, Peel-A-Way 포매 몰드(Polysciences, Taiwan)에 조직 단면을 위로 놓고 파라핀 용액을 몰드의 반정도 채워서 고정시켰다. 포매링(Thomas Scientific, USA)을 몰드 위에 올리고 파라핀 용액을 처리하여 몰드와 링이 붙도록 4℃에서 3시간 동안 굳힌 후, 4℃에서 하루 동안 반응시켰다. 포매시킨 조직은 4℃에서 반영구적으로 보존할 수 있다. 포매된 조직은 Semi-motorized rotary microtome(LEICA RM2145 Microtome, Leica, Germany)을 이용하여 절단한 후, 37℃ 온도의 항온수조에서 부유시켜 파라핀 주름이 펴지도록 하였다. 주름을 편 조직은 micro silane coating slide(Muto Pure Chemicals, Japan)를 이용하여 건진 후, 37℃에서 하루 동안 말려주었다. 완전히 마르면 자일렌을 5분씩 2번 처리하여 조직에 남아 있는 파라핀을 제거하였다. 이후, 에탄올과 자일렌을 1:1로 혼합한 용액, 100% 에탄올, 100% 메탄올, 75% 메탄올 및 50% 메탄올로 각각 2분씩 세척하여 염색이 용이하도록 만들었다. 마이어의 헤마톡실린 용액(MHS 1-100ML, Sigma Aldrich, Korea)을 상온에서 30분 동안 처리한 후, PBS로 10분 동안 세척하고, 에오신 Y 용액(Daejung, Korea)을 상온에서 1분 동안 처리하여 조직을 염색하였다. 염색한 후, 조직을 영구적으로 보존하기 위해 75% 메탄올, 100% 메탄올, 100% 에탄올 및 에탄올과 자일렌을 1:1로 혼합한 용액으로 각각 10초씩 조직을 탈수시켰다. 마지막으로 자일렌을 2분씩 처리하여 염색된 조직을 고정시킨 후, Nikon eclipse Ti 현미경(Nikon Instruments, USA)의 plan fluor 4 X 0.13을 통해 NIS-Elements F(Nikon software, DS-F12-U3, Nikon, USA) 프로그램으로 피부 표피층의 두께를 측정하였다.
그 결과, 도 12에 나타낸 바와 같이, 7일 후에 무처리 대조그룹과 IMQ만 도포한 그룹의 표피층 두께는 각각 1,045 ㎛와 1,181 ㎛이었다. 그러나 7일 후에 IMQ를 도포하고 이와 함께 세드롤, 세드릴 아세테이트 또는 알파-세드렌을 투여한 그룹의 표피 두께는 각각 954 ㎛(19.2% 억제), 999 ㎛(15.3% 억제) 및 954 ㎛(19.2% 억제)이었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부진피층 두께에 대한 저감효과가 있었고, 세드롤과 알파-세드렌이 유사한 정도로 효과를 나타내었다(도 12).
세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌의 건선 치료 효과 확인
<3-1> 건선을 유발시킨 마우스의 준비
일주일 동안 건선을 유발시킨 상기 실시예 <2-1>의 건선 유발 마우스에 이미퀴모드를 도포한 후 8일째부터 이미퀴모드의 도포를 중지하고, CON 및 IMQ 그룹은 증류수를, C 그룹은 세드롤을, CA 그룹은 세드릴 아세테이트를, CE 그룹은 알파-세드렌만을 매일 200 ㎕씩 100 ㎎/㎏의 농도로 경구 투여하였다. 이미퀴모드의 도포를 중지한 날을 8일로 하여 하루 1회씩 일주일 동안 투여하면서 매일 사진으로 기록하였다(도 13a 내지 13d).
<3-2> 건선이 유발된 마우스에서 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌에 의한 귀 두께 회복효과 확인
상기 실시예 <3-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰한 후, 1점 내지 4점의 건선 중증도 지수(Psoriasis Area Severity Index, PASI)를 계산하여 상기 화합물의 귀 두께에 대한 회복효과를 확인하였다.
그 결과, 도 13a 내지 13d 및 14에 나타낸 바와 같이, 증류수만 경구 투여한 그룹은 8일째에 귀 두께가 4.0 ± 1.0점이었으며, 14일째부터는 평균 2.0 ± 0점을 유지하며 더 이상 감소하지 않았다. 세드롤을 투여한 그룹에서는 8일째에 귀 두께가 4.0 ± 0.6점이었으며, 16일째에는 0.7 ± 0.6점으로 감소되었고, 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 8일째에 귀 두께가 4.0 ± 0.6점이었으며, 15일째부터는 8마리 모두 정상으로 회복되었다. 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 8일째에 귀 두께가 4.0 ± 0.0점이었으며, 15일째부터는 0.7 ± 0.6점으로 감소되었다. 화합물을 투여한 그룹에서 귀 두께에 대한 회복효과가 있었고, 세드릴 아세테이트가 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드롤 및 알파-세드렌 순으로 효과를 나타내었다(도 13a 내지 13d 및 14).
<3-3> 건선이 유발된 마우스에서 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌에 의한 피부각질화 회복효과 확인
상기 실시예 <3-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰한 후, 건선 중증도 지수(PASI)를 계산하여 상기 화합물의 피부각질화에 대한 회복효과를 확인하였다.
그 결과, 도 13a 내지 13d 및 15에 나타낸 바와 같이, 증류수만 경구 투여한 그룹은 8일째에 피부각질화에 대한 건선 중증도 지수가 4.0 ± 1.0점이었으며, 16일째에는 평균 0.7 ± 0.6점이었다. 세드롤을 투여한 그룹에서는 8일째에 피부각질화에 대한 건선 중증도 지수가 3.0 ± 0.6점이었으며, 15일째에는 모든 마우스의 피부각질화가 정상으로 회복되었고, 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 8일째에 피부각질화에 대한 건선 중증도 지수가 4.0 ± 0.6점이었으며, 14일째에는 1.0 ± 0.0점이었다. 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 8일째에 피부각질화에 대한 건선 중증도 지수가 4.0 ± 0.6점이었으며, 15일째에는 0.3 ± 0.6점으로 감소되었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부각질화에 대한 회복효과가 있었고, 세드롤이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌 순으로 효과를 나타내었다(도 13a 내지 13d 및 15).
<3-4> 건선이 유발된 마우스에서 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌에 의한 피부발적 회복효과 확인
상기 실시예 <3-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰한 후, 건선 중증도 지수(PASI)를 계산하여 상기 화합물의 피부발적에 대한 회복효과를 확인하였다.
그 결과, 도 13a 내지 13d 및 16에 나타낸 바와 같이, 증류수만 경구 투여한 그룹은 8일째에 피부발적에 대한 건선 중증도 지수가 평균 4.0 ± 0.0점이었으며, 16일째에는 평균 0.7 ± 0.6점이었다. 세드롤을 투여한 그룹에서는 8일째에 피부발적에 대한 건선 중증도 지수가 3.0 ± 0.6점이었으며, 16일째에는 모든 마우스의 피부발적이 소실되었고, 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 8일째에 피부발적에 대한 건선 중증도 지수가 4.0 ± 0.0점이었으며, 16일째에는 모든 마우스의 피부발적이 소실되었다. 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 8일째에 피부발적에 대한 건선 중증도 지수가 4.0 ± 1.0점이었으며, 16일째에는 모든 마우스의 피부발적이 소실되었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부발적에 대한 회복효과가 있었고, 세드롤이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌 순으로 효과를 나타내었다(도 13a 내지 13d 및 16).
<3-5> 건선이 유발된 마우스에서 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌에 의한 귀 두께, 피부각질화 및 피부발적에 대한 건선 중증도 지수의 누적 점수 비교
상기 실시예 <3-2> 내지 <3-4>에서 얻은 건선 중증도 지수 값을 누적하여 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스의 귀 두께, 피부각질화 및 피부발적에 대한 건선 중증도 지수의 누적 점수를 비교하였다.
그 결과, 도 17에 나타낸 바와 같이, 세드롤이 가장 빠른 회복효과를 나타내었으며, 뒤를 이어 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌의 순으로 회복효과를 나타내었다 (도 17).
<3-6> 건선이 유발된 마우스에서 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌에 의한 피부출혈반점 회복효과 확인
상기 실시예 <3-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰하여 출혈반점 증상이 회복되는 마우스의 수를 계산하였다.
그 결과, 도 13a 내지 13d 및 18에 나타낸 바와 같이, 화합물을 투여하지 않고 증류수만 경구 투여한 그룹에서는 8일째에 8마리 모두 출혈반점을 나타냈으나 실험이 종료되는 16일째에는 1마리가 출혈반점을 나타냈다. 그러나 세드롤을 투여한 그룹에서는 8일째에 6마리가 출혈반점을 나타냈으며, 12일째부터는 출혈반점을 나타내는 마우스가 없었다. 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 8일째에 6마리가 출혈반점을 나타냈으며, 16일째에는 출혈반점을 나타내는 마우스가 없었다. 알파-세드렌을 처리한 그룹에서는 8일째에 4마리가 출혈반점을 나타냈으며, 16일째에는 출혈반점을 나타내는 마우스가 없었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부출혈반점 증상에 대한 회복효과가 있었고, 세드롤이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌 순으로 효과를 나타내었다(도 13a 내지 13d 및 18).
<3-7> 건선이 유발된 마우스에서 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌에 의한 피부주름 회복효과 확인
상기 실시예 <3-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰하여 피부주름이 회복되는 마우스의 수를 계산하였다.
그 결과, 도 13a 내지 13d 및 19에 나타낸 바와 같이, 화합물을 투여하지 않고 증류수만 경구 투여한 그룹에서는 8일째에 5마리가, 실험이 종료되는 16일째에는 1마리가 피부주름을 나타냈다. 세드롤을 투여한 그룹에서는 8일째에 5마리가 피부주름을 나타냈으나, 15일 이후부터는 피부주름을 나타내는 마우스가 없었다. 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 8일째에 3마리가 피부주름을 나타냈으나, 16일째에는 피부주름을 나타내는 마우스가 없었다. 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 8일째에 3마리가 피부주름을 나타냈으나, 16일째에는 피부주름을 나타내는 마우스가 없었다. 화합물을 투여한 그룹에서 피부주름에 대한 회복효과가 있었고, 세드롤이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 알파-세드렌 및 세드릴 아세테이트 순으로 효과를 나타내었다(도 13a 내지 13d 및 19).
<3-8> 건선이 유발된 마우스에서 세드롤 , 세드릴 아세테이트 및 알파- 세드렌에 의한 발모재생력 촉진효과 확인
상기 실시예 <3-1>의 세드롤, 세드릴 아세테이트 및 알파-세드렌을 경구 투여한 건선 유발 마우스를 육안으로 관찰하여 발모가 일어나는 마우스의 수를 계산하였다.
그 결과, 도 13a 내지 13d 및 20에 나타낸 바와 같이, 화합물을 투여하지 않고 증류수만 경구 투여한 그룹에서는 14일째에 1마리에서, 실험을 종료하는 16일째에는 5마리에서 발모가 관찰되었다. 세드롤을 투여한 그룹에서는 13일째에 2마리에서, 16일째에는 모든 마우스에서 발모가 관찰되었다. 세드릴 아세테이트를 투여한 그룹에서는 14일째에 1마리에서, 16일째에는 7마리에서 발모가 관찰되었다. 알파-세드렌을 투여한 그룹에서는 13일째에 1마리에서, 16일째에는 모든 마우스에서 발모가 관찰되었다. 화합물을 투여한 그룹에서 발모재생력 촉진효과가 있었고, 세드롤이 가장 강하였으며, 뒤를 이어 알파-세드렌 및 세드릴 아세테이트 순으로 효과를 나타내었다(도 13a 내지 13d 및 20).
<110> University of seoul Industry Cooperation Foundation <120> PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING AUTOIMMUNE DISEASES COMPRISING CEDROL OR DERIVATIVES THEREOF, OR PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALTS THEREOF <130> 2017P-02-026 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-17A forward primer <400> 1 tctcctctga atggggtgaa 20 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-17A reverse primer <400> 2 cagagtaggg agctaaatta tcca 24

Claims (6)

  1. 하기 화학식 1 내지 3으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는,
    건선, 아토피, 습진, 지루성피부염, 피부경화증, 또는 피부 면역 과민증으로부터 선택되는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure 112017116296074-pat00019
    ;
    [화학식 2]
    Figure 112017116296074-pat00020
    ; 및
    [화학식 3]
    Figure 112017116296074-pat00021
    .
  2. 제1항에 있어서, 상기 자가면역질환이 인터류킨-17에 의해 매개되는, 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 삭제
  4. 하기 화학식 1 내지 3으로 표시되는 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 유효성분으로 함유하는,
    건선, 아토피, 습진, 지루성피부염, 피부경화증, 또는 피부 면역 과민증으로부터 선택되는 자가면역질환의 개선용 건강기능식품:
    [화학식 1]
    Figure 112017116296074-pat00025
    ;
    [화학식 2]
    Figure 112017116296074-pat00026
    ; 및
    [화학식 3]
    Figure 112017116296074-pat00027
    .
  5. 삭제
  6. 삭제
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