KR101806890B1 - 발모활성을 갖는 피난의 정제방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 1) 침엽수잎을 갈아서 헥산으로 상온에서 추출하고, 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻는 단계;
3) 상기 단계 2)의 농축공정을 통해 얻은 농축액에 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수를 넣어 세척하는 단계;
4) 상기 단계 3)에서 세척된 유기층을 NaOH로 씻어주고, HCl로 pH를 중성으로 조절하는 단계;
5) 상기 단계 4)의 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어주는 단계;
6) 상기 단계 5)에서 얻는 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여 농축액을 감압하여 증류하는 단계; 및
7) 상기 단계 6)에서 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 피난(Pinane)을 얻는 단계를 포함하는 발모활성을 갖는 피난의 정제방법을 제공한다.

Description

발모활성을 갖는 피난의 정제방법{PURIFICATION METHOD OF PINANE HAVING HAIR GROWTH ACTIVATING PROPERTIES}

본 발명은 발모활성을 갖는 피난의 정제방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 유효성분으로서 모발의 성장 주기 가운데 휴지기에서 성장기로 이행하는 주기를 단축시켜 새로운 모발이 빨리 자라게 하는 효과가 우수한 피난을 정제하는 방법에 관한 것이다.

인체의 모발은 약 10 만 내지 15 만 개 정도이며, 각각의 모발은 서로 다른 주기를 가지며 성장기(anagen), 퇴행기(catagen), 휴지기(telogen)를 거쳐 성장, 탈락한다. 이러한 주기는 3-6 년에 걸쳐 반복되는데 그 결과 일일 평균 50 내지 100 개의 모발이 정상적으로 탈락하게 된다. 일반적으로 탈모증이라 함은 이러한 주기 중에서 성장기의 모발 비율이 짧아지고 퇴행기 또는 휴지기의 모발이 많아져 비정상적으로 모발이 탈락하는 숫자가 많아지는 것을 일컫는다.

탈모의 원인으로는 남성호르몬 과다 분비, 지루성 두피, 스트레스, 비만, 과산화물, 세균 등에 의한 두피 기능 저하등이 논의되어 왔었다. 그러나, 현재까지 탈모에 관한 명확한 원인은 밝혀져 있지 않으며, 최근 들어 식생활의 변화, 사회환경 등에 의한 스트레스의 증가 등으로 탈모로 고민하는 인구가 늘어나고 있는 추세이고 그 연령 또한 낮아지고 있으며, 여성의 탈모 인구도 늘어나고 있는 실정이다.

최근의 연구로부터 탈모의 주요한 요인으로 남성호르몬인 안드로겐의 환원형 물질인 디하이드로테스토스테론이 주목받고 있다. 남성호르몬인 테스토스테론은 5α-reductase(5α-환원효소)의 작용에 의해 디하이드로테스토스테론으로 전환되는데, 탈모 환자들의 모낭에는 5α-reductase의 활성도가 높고, 이로 인해 탈모를 일으키는 것으로 알려지고 있다.

이와 같은 탈모의 원인을 치유하기 위하여, 머크사는 5α-reductase의 작용을 저해하여 다이하이드로테스토스테론의 생성을 억제하는 약으로서, 피나스테라이드를 개발하여 시판하고 있으나, 다양한 부작용이 보고되고 있다.

따라서, 본 발명에서는 다양한 화합물들을 대상으로 다이하이드로테스토스테론의 생성을 촉진하는 5α-reductase의 활성을 저해하는 효과가 있는지 비교 실험함으로써, 탈모를 예방하고 발모를 촉진시키는 효과가 있는 조성물을 찾던 중 본 발명을 완성하게 되었다.

이에 본 발명은 상기한 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 그 목적은 탈모를 유발하는 5α-reductase를 효과적으로 저해시켜 탈모를 예방하고 모발 성장을 촉진시키는 피난의 정제방법을 제공하는 것이다.

상기한 바와 같은 본 발명의 기술적 과제는 다음과 같은 수단에 의해 달성되어진다.

(1) 1) 침엽수잎을 갈아서 헥산으로 상온에서 추출하고, 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻는 단계;

2) 상기 단계 1)의 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻는 단계;

3) 상기 단계 2)의 농축공정을 통해 얻은 농축액에 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수를 넣어 세척하는 단계;

4) 상기 단계 3)에서 세척된 유기층을 NaOH로 씻어주고, HCl로 pH를 중성으로 조절하는 단계;

5) 상기 단계 4)의 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어주는 단계;

6) 상기 단계 5)에서 얻는 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여 농축액을 감압하여 증류하는 단계; 및

7) 상기 단계 6)에서 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 피난(Pinane)을 얻는 단계를 포함하는 발모활성을 갖는 피난의 정제방법.

(2) 상기 (1)에 있어서,

1) 침엽수잎을 갈아서 5~10 배수의 헥산으로 상온에서 2~5일 동안 추출하고, 1㎛, 0.5㎛ 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻는 단계;

2) 상기 단계 1)의 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻는 단계;

3) 상기 단계 2)의 농축공정을 통해 얻은 농축액에 100~200 ㎖의 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수 100~200 ㎖를 넣어 세척하는 단계;

4) 상기 단계 3)에서 세척된 유기층을 1N NaOH로 2회 씻어주고, 1N HCl로 pH를 중성으로 조절하는 단계;

5) 상기 단계 4)의 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어주는 단계;

6) 상기 단계 5)에서 얻는 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여 농축액을 감압하여 외부온도 80℃에서 증류정제하며, 시료는 증기온도 60℃에서 증류하는 단계; 및

7) 상기 단계 6)에서 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 피난(Pinane)을 얻는 단계를 포함하는 발모활성을 갖는 피난의 정제방법.

(3) 상기 (1)에 있어서,

침엽수잎은 솔잎, 전나무잎 및 측백나무잎 중 선택된 적어도 1종을 포함하는 것을 특징으로 하는 발모활성을 갖는 피난의 정제방법.

본 발명에 따른 정제방법은 탈모를 유발하는 5α-reductase를 효과적으로 저해시켜 탈모방지 내지 모발성장을 촉진하는 피난을 고순도로 정제할 수 있다.

본 발명에 따른 발모활성을 갖는 피난의 정제방법은, (1) 침엽수잎을 갈아서 5~10 배수의 헥산으로 상온에서 2~5일 동안 추출하고, 1㎛, 0.5㎛ 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻는 단계; (2) 상기 단계 (1)의 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻는 단계; (3) 상기 단계 (2)의 농축공정을 통해 얻은 농축액에 100~200 ㎖의 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수 100~200 ㎖를 넣어 세척하는 단계; (4) 상기 단계 (3)에서 세척된 유기층을 1N NaOH로 2회 씻어주고, 1N HCl로 pH를 중성으로 조절하는 단계; (5) 상기 단계 (4)의 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어주는 단계; (6) 상기 단계 (5)에서 얻는 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여 농축액을 감압하여 외부온도 80℃에서 일반증류로 정제하며, 시료는 증기온도 60℃에서 증류하는 단계; 및 (7) 상기 단계 (6)에서 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 피난(Pinane)을 얻는 단계를 포함한다.

본 발명에 의해 얻어지는 피난(Pinane, 하기 화학식 1 또는 2)은 아래와 같은 화학구조를 갖으며, 발모활성이 우수한 것이 본 발명에 의해 확인되었다.

(1)

(2)

이하 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 따른 피난은 침엽수의 잎을 소정의 용매를 이용하여 추출할 수 있으며, 이를 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

[추출공정]

먼저, 침엽수잎을 갈아서 5~10 배수의 헥산으로 상온에서 2~5일 동안 추출하고, 1㎛, 0.5㎛ 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻는다.

[농축공정]

상기 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻는다.

[정제공정]

상기 농축공정을 통해 얻은 농축액에 100~200 ㎖의 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수 100~200 ㎖를 넣어 세척한다.

세척된 유기층을 1N NaOH로 2회 씻어주고, 1N HCl로 pH를 중성으로 조절한다. 그런 다음, 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어준다. 최종적으로 얻은 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치한다. 정제되지 않은 농축액을 감압하여 외부온도 80℃에서 일반증류로 정제하며, 시료는 증기온도 약 60℃에서 증류된다. 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 피난(Pinane)을 고순도로 얻는다.

상기와 같은 방법에 따라 얻어지는 피난은 발모제 조성물의 활성성분으로 첨가되어질 수 있으며, 피난을 유효성분으로 포함하는 발모제 조성물은 피부에 적용할 수 있는 화장품 내지 약학조성물 중 피부 외용제 제형으로서 페이스트, 크림, 젤, 파운데이션, 스프레이, 에센스, 팩, 비누, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파운데이션 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또, 본 발명에 따라 얻어진 피난을 함유하는 발모제 조성물을 화장품으로 제조하고자 할 경우, 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 발모제 조성물은 또한, 상기 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 상기 첨가가능한 배합 성분으로서는 안정화제, 유지, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01~5 중량%, 보다 바람직하게는 0.01~3 중량%로 배합되어질 수 있다.

상기 발모제 조성물에서 본 발명에 따라 얻어진 피난의 배합량은 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001~20 중량%인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 0.001~10 중량%인데, 이것은 0.001 중량% 미만에서는 효과가 저하될 우려가 있고 20 중량%를 넘으면 배합해도 효과의 증가는 기대하기 곤란하기 때문이다.

또한, 본 발명에 따라 얻어진 피난의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따라 얻어진 피난의 바람직한 투여량은 사용자의 상태 및 체중, 증상의 정도, 제형, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.00001 내지 1000㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

이하 본 발명의 내용을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명하기로 한다. 다만 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에 한정되어지는 것으로 해석되어져서는 아니된다.

[실시예 1]

솔잎을 갈아서 5 배수의 헥산으로 상온에서 3일 동안 추출하고, 1㎛, 0.5㎛ 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻었다. 상기 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻었다. 상기 농축공정을 통해 얻은 농축액에 100 ㎖의 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수 100 ㎖를 넣어 세척하였다. 세척된 유기층을 1N NaOH로 2회 씻어주고, 1N HCl로 pH를 중성으로 조절하였다. 그런 다음, 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어주었다. 최종적으로 얻은 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여, 정제되지 않은 농축액을 감압하여 외부온도 80℃에서 일반증류로 정제하였으며, 시료는 증기온도 60℃에서 증류되어졌다. 이와 같이 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 고순도의 피난(Pinane)을 얻었다(순도 98%).

[실시예 2]

전나무잎을 갈아서 5 배수의 헥산으로 상온에서 3일 동안 추출하고, 1㎛, 0.5㎛ 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻었다. 상기 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻었다. 상기 농축공정을 통해 얻은 농축액에 100 ㎖의 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수 100 ㎖를 넣어 세척하였다. 세척된 유기층을 1N NaOH로 2회 씻어주고, 1N HCl로 pH를 중성으로 조절하였다. 그런 다음, 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어주었다. 최종적으로 얻은 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여, 정제되지 않은 농축액을 감압하여 외부온도 80℃에서 일반증류로 정제하였으며, 시료는 증기온도 60℃에서 증류되어졌다. 이와 같이 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 고순도의 피난(Pinane)을 얻었다(순도 98%).

[실시예 3]

측백나무잎을 갈아서 5 배수의 헥산으로 상온에서 3일 동안 추출하고, 1㎛, 0.5㎛ 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻었다. 상기 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻었다. 상기 농축공정을 통해 얻은 농축액에 100 ㎖의 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수 100 ㎖를 넣어 세척하였다. 세척된 유기층을 1N NaOH로 2회 씻어주고, 1N HCl로 pH를 중성으로 조절하였다. 그런 다음, 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액(Brine)으로 유기층을 씻어주었다. 최종적으로 얻은 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여, 정제되지 않은 농축액을 감압하여 외부온도 80℃에서 일반증류로 정제하였으며, 시료는 증기온도 60℃에서 증류되어졌다. 이와 같이 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 고순도의 피난(Pinane)을 얻었다(순도 97%).

[실험예 1] 피난에 대한 5α-reductase(5알파-환원효소) 저해 효능 평가

Dermal papilla cells (DPCs)를 24-well plate에 5×10⁵/㎖로 1ml씩 분주하고 24시간 동안 배양한 다음 상기 실시예 1 ~ 3에 기재된 방법에 따라 수득한 피난을 50 ㎍/ml, 10㎍/ml 그리고 0㎍/ml로 각 well에 처리하고 1시간 후 50 nM testersterone (DMSO dissolved)으로 자극하였다. 배양 24시간 후에 상층액을 버리고 DPCs pellet을 얻었다. 다이하이드로테스토스테론(DHT) (DB52021, Hamburg, Germany) 함량은 enzyme-linked immuno-sorbent assay를 이용하였다. Rabbit Anti-DHT Antibody Coated된 다이하이드로테스토스테론(DHT) ELISA microtiter strips에 DPCs세포 펠렛을 100 μL씩 분주하고, 모든 well에 DHT antiserum 25 μL를 분주하여 8℃에서 15 시간 동안 반응시킨 뒤 3회 세척하였다. 모든 well에 DHT-HRP Enzyme Conjugate를 100 μL 분주하고, 쉐이커 위에서 30분간 실온에서 반응시킨 뒤 3회 세척하였다. 기질 100 μL를 분주하고, 쉐이커 위에서 20 - 30분간 실온에서 반응시킨 뒤, 100 μL의 스톱용액을 처리하여 450 nm에서 흡광도를 측정함으로써 생성된 DHT의 양을 흡광도로 나타냈다.(3회 반복) 대조군에 대한 상대적인 DHT의 생성량을 저해율(%)로 계산하여 그 결과를 표 1에 나타내었다.

실시예 1 ~ 3의 피난의 5α-reductase 저해율

시료	시료농도(/ml)	저해율(%)
대조군	-	-
실시예 1	10	22
	50	48
실시예 2	10	23
	50	46
실시예 3	10	22
	50	46

상기 표 1의 결과에서 알 수 있듯이 각 실시예에서 추출하여 정제한 피난의 5α-reductase 저해율은 모두 우수함을 알 수 있다.

[실험예 2] 추출농축액에 대한 5α-reductase(5알파-환원효소) 저해 효능 평가

실시예 1 내지 3에서 각각 얻은 농축액을 이용하여 실험예 1에서와 동일한 조건 및 방법에 의해 5α-reductase(5알파-환원효소) 저해 효능 평가를 수행한 결과는 하기 표 2에서와 같다.

실시예 1 ~ 3의 추출농축액의 5α-reductase 저해율

시료	시료농도(/ml)	저해율(%)
대조군	-	-
실시예 1	10	8
	50	12
실시예 2	10	8
	50	11
실시예 3	10	9
	50	13

상기 표 2의 결과에서 알 수 있듯이 각 실시예에서 추출하여 얻은 농축액의 5α-reductase 저해율도 우수함을 알 수 있다.

[실험예 3] 피난에 대한 모발 성장기 유도 촉진 작용 평가 실험

모발 성장기 유도 촉진 효과 실험은 모발 성장기 유도 작용 평가에 널리 이용되고 있는 생후 7주가 된 마우스(C57BL/6, female)를 사용하였다. 먼저 마우스의 등 부위의 털을 전기면도기를 이용하여 제거하고 각 마우스의 무게를 재서 몸무게가 골고루 분산이 되도록 5마리씩 나누었다. 제모 부위에 부형약, 대조약, 시험약을 도포하였으며, 이때 부형약으로는 95% 에탄올을, 대조약은 2% 미녹시딜을, 시험약으로는 실시예 1 내지 3의 추출분획물을 각각 95% 에탄올로 희석하여 최종농도 0.5%로 제조하여 사용하였다. 마우스 개체당 등 부위에 1일 1회, 붓으로 충분히 도포하였다.

전체적인 치료 효과의 판정은 실험 시작 후 20일 후의 양모 및 발모 여부를 투약전과 비교하여 매우 호전(++), 호전(+), 조금 호전(ㅁ), 무반응(-) 등의 4단계로 분류 판정하였다.

모발 성장기 유도 촉진 작용 평가 결과

시료	마리수
	++	+		-
부형약	-	-	1	4
대조약(미녹시딜 5%)	-	2	2	1
실시예 1	3	2	-	-
실시예 2	3	2	-	-
실시예 3	4	1	-	-

상기 표 3과 같이, 각 실시예에서 얻은 피난을 도포한 마우스는 제모 부위에 빠른 속도로 발모가 이루어졌음을 알 수 있다.

[실험예 4] 추출농축액에 대한 모발 성장기 유도 촉진 작용 평가 실험

실시예 1 내지 3에서 각각 얻은 농축액을 이용하여 실험예 3에서와 동일한 조건 및 방법에 의해 모발 성장기 유도 촉진 작용 평가 실험을 수행한 결과는 하기 표 4에서와 같다.

모발 성장기 유도 촉진 작용 평가 결과

시료	마리수
	++	+		-
부형약	-	-	1	4
대조약(미녹시딜 5%)	-	2	2	1
실시예 1	-	3	2	-
실시예 2	-	3	2	-
실시예 3	-	3	2	-

상기 표 4의 결과에서 알 수 있듯이 각 실시예에서 추출하여 얻은 농축액의 모발 성장기 유도 촉진 효과도 우수함을 알 수 있다.

상기와 같이, 본 발명의 바람직한 실시 예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.

Claims (3)

1) 솔잎추출물, 전나무잎추출물 및 측백나무잎추출물 중 선택된 적어도 1종의 침엽수잎을 갈아서 5~10 배수의 헥산으로 상온에서 2~5일 동안 추출하고, 1㎛, 0.5㎛ 여과지를 이용하여 차례로 여과하여 추출액을 얻는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출공정을 통해 얻은 추출액에 남아 있는 헥산을 감압 후 농축하여 고농도의 농축액을 얻는 단계;
3) 상기 단계 2)의 농축공정을 통해 얻은 농축액에 100~200 ㎖의 에틸아세테이트를 넣은 후 정제수 100~200 ㎖를 넣어 세척하는 단계;
4) 상기 단계 3)에서 세척된 유기층을 1N NaOH로 2회 씻어주고, 1N HCl로 pH를 중성으로 조절하는 단계;
5) 상기 단계 4)의 유기층을 다시 물로 1회 세척한 후, 포화염화나트륨 용액으로 유기층을 씻어주는 단계;
6) 상기 단계 5)에서 얻는 유기층을 둥근바닥 플라스크에 농축하여 감압증류장치에 설치하여 농축액을 감압하여 외부온도 80℃에서 증류정제하며, 시료는 증기온도 60℃에서 증류하는 단계; 및
7) 상기 단계 6)에서 1차 증류정제된 물질을 대상으로 동일한 조건하에 2차로 증류정제하여 피난(Pinane)을 얻는 단계를 포함하는 발모활성을 갖는 피난의 정제방법.

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