KR101781468B1 - 항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물 및 이의 제조방법. - Google Patents
항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물 및 이의 제조방법. Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 마황, 의이인, 함초, 청국장, 나복자, 오미자, 맥문동, 석창포, 길경으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 항비만 활성을 갖는 가미태음조위탕 조성물에 관한 것으로서, 항비만 효과를 나타내며, 항산화 효능, 항염증 효능, 지방 축적 억제 효능, 및 체중 감량의 효과를 나타내는 가미태음조위탕 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 맥문동, 창출, 감초, 건강, 진피, 용안육으로 이루어지는 창맥탕 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
최근, 식생활의 서구화에 따라, 고지혈증, 당뇨병, 고혈압, 비만을 비롯한 생활습관병은 매년 증가 경향에 있다. 이 중에서 고지혈증은, 식사의 고칼로리화, 운동부족, 기초대사의 저하 등, 여러 가지의 요인이 원인이 되어 혈액 중의 중성 지방치나 총콜레스테르치가 상승하는 질환이지만, 특히 중성 지방치의 상승이 여러 가지의 중증질환, 즉 파생질환의 원인이 되는 것이 알려져 있다.
중성 지방치의 상승은, 지방세포의 비대, 간세포의 중성 지방 축적 및 동맥경화 이발성(易發性) 리포단백 증가를 촉진시킨다. 그리고, 지방세포의 비대는 비만증, 간세포의 중성 지방 축적은 지방간을 거쳐 간염이나 간경변의 발증 리스크를 높인다. 또한, 동맥경화 이발성 리포단백이란, 렘넌트 유사 리포단백-콜레스테롤(remnantlike particles-cholesterol)과 소립자(小粒子) LDL-콜레스테롤을 가리키지만, 이들은 마크로파지나 혈관 내피세포에 흡수되기 쉽기 때문에, 혈중 농도의 증가는 동맥경화의 발증 리스크를 높인다.
즉, 혈액 중의 중성 지방치를 건강한 정상의 범위로 컨트롤한다고 하는 것은, 고지혈증의 파생질환인 동맥경화증, 비만증, 간질환 등의 발증을 억제하는 것으로 이어진다. 따라서, 종래부터 고중성 지방혈증을 예방하기 위한 여러 가지의 약제나 식품 등이 개발되어 왔다.
대한민국 등록특허공보 10-0573591호에서는 맥문동 추출물을 함유하는 비만억제 및 치료용 약제를 통해 비만 및 지혈증을 억제하는 효과를 얻으며, 대한민국 등록특허공보 10-1322503호에서는 맥문도 종자 추출물을 포함하는 항비만 조성물을 통해 비만 치료, 개선 및 예방의 효과를 얻고 있다.
본 발명은 상기와 같은 종래기술을 감안하여 안출된 것으로, 맥문동, 창출, 감초, 건강, 진피, 용안육으로 이루어지는 창맥탕 조성물을 통해 항고지혈 효과를 나타내는 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 창맥탕 조성물은 맥문동, 창출, 감초, 건강, 진피, 용안육으로 이루어지는 것을 특징으로 하며, 특히, 맥문동 10~15 중량부, 창출 12~18 중량부, 감초 5~10 중량부, 건강 2~6 중량부, 진피 5~10 중량부, 용안육 5~10 중량부로 이루어지는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 창맥탕 조성물은 지방 축적 억제 효능, 콜레스테롤 감소 효능, 동맥경화 억제 효능, 심혈관 질환 억제 효능 및 체중 감량 효능을 보유하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 창맥탕 조성물은 맥문동, 창출, 감초, 건강, 진피, 용안육을 혼합하여 제조하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 창맥탕 조성물은 맥문동, 창출, 감초, 건강, 진피, 용안육으로 구성되어 항고지혈 효과를 나타내며, 지방 축적 억제 효능, 콜레스테롤 감소 효능, 동맥경화 억제 효능, 심혈관 질환 억제 효능 및 체중 감량 효능을 나타낸다.
도 1은 본 발명의 창맥탕 투여군에 대한 조직병리학적 검사 방법을 나타낸 흐름도이다.
도 2는 고지방식 유도 비만 쥐의 AST 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 3은 고지방식 유도 비만 쥐의 ALT 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 4는 고지방식 유도 비만 쥐의 Creatinine 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 5는 고지방식 유도 비만 쥐의 BUN 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 6은 본 발명의 창맥탕 처방 하에서 3T3-L1 세포주의 세포활성도(cell viability) 결과이다. 각 세포는 1, 10, 100 ㎍/㎖의 창맥탕으로 24시간 동안 처리하였다. 세포활성도 MTT assay를 사용하여 측정되었고, 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 7은 3T3-L1 세포주의 지질 축적에 대한 창맥탕의 저해효과에 대한 결과이다. 지질 축적률은 λ=510nm의 파장에서 plate reader에 의해 측정했다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05; ***p <0.001).
도 8은 3T3-L1 세포주의 TG 축적에 대한 창맥탕의 저해효과의 결과이다. TG 축적률은 λ=510nm의 파장에서 plate reader에 의해 측정했다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: **p <0.01).
도 9는 3T3-L1 세포주의 C/EBPβ의 RNA 발현에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. β-actin을 내부 컨트롤로 사용하였고, 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: ***p <0.001).
도 10은 3T3-L1 세포주의 C/EBPα의 RNA 발현에 대한 창맥탕의 효과에 대한 결과이다. 총 RNA는 분리되고 역전사되었으며, β-actin은 내부 컨트롤로서 사용되었다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: ***p <0.001).
도 11은 3T3-L1 세포주의 PPARγ의 RNA 발현에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 총 RNA는 분리되고 역전사되었으며, β-actin은 내부 컨트롤로서 사용되었다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05).
도 12는 3T3-L1 세포주의 지방산 생성에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 각 세포주는 DMM으로 개시한 후, 다른 농도의 창맥탕으로 9일간 처리되었다. 지방산 생성률은 λ=540nm 파장에서 plate reader로 측정하였다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: **p <0.01).
도 13은 3T3-L1 세포주의 ACC 생성에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 각 세포주는 DMM으로 개시한 후, 다른 농도의 창맥탕으로 9일간 처리되었다. ACC 생성률은 λ=540nm 파장에서 plate reader로 측정하였다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05).
도 14는 분화된 3T3-L1 세포주에 의한 lipid peroxidation 생성에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05).
도 15는 고지방식 유도 비만 쥐의 체중 증가에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p <0.05).
도 16은 음식 섭취량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p <0.05).
도 17은 고지방식 유도 비만 쥐의 간 무게에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 18은 고지방식 유도 비만 쥐의 부고환 주위 지방 조직(epididymal adipose tissue) 무게에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 19는 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 총 콜레스테롤 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p < 0.05).
도 20은 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 HDL-콜레스테롤 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p < 0.05).
도 21은 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 LDL-콜레스테롤 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 22는 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 트리글리세리드 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 23은 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 렙틴 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 24는 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 아디포넥틴 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 25는 정상 쥐와 고지방식 유도 비만 쥐의 간 조직 변화를 나타낸 결과이다. 파라핀 조직은 hematoxylin & eosin으로 착색되었다. 시료는 광학 현미경(Zeiss, ×100)으로 촬영되었다. (A) ; 정상군, (B) ; 컨트롤Ⅰ, (C) ; 컨트롤Ⅱ, (D) ; 창맥탕
도 2는 고지방식 유도 비만 쥐의 AST 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 3은 고지방식 유도 비만 쥐의 ALT 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 4는 고지방식 유도 비만 쥐의 Creatinine 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 5는 고지방식 유도 비만 쥐의 BUN 함량에 대한 본 발명의 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 6은 본 발명의 창맥탕 처방 하에서 3T3-L1 세포주의 세포활성도(cell viability) 결과이다. 각 세포는 1, 10, 100 ㎍/㎖의 창맥탕으로 24시간 동안 처리하였다. 세포활성도 MTT assay를 사용하여 측정되었고, 측정결과는 3차례 실험의 ± S.D.로서 나타내었다.
도 7은 3T3-L1 세포주의 지질 축적에 대한 창맥탕의 저해효과에 대한 결과이다. 지질 축적률은 λ=510nm의 파장에서 plate reader에 의해 측정했다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05; ***p <0.001).
도 8은 3T3-L1 세포주의 TG 축적에 대한 창맥탕의 저해효과의 결과이다. TG 축적률은 λ=510nm의 파장에서 plate reader에 의해 측정했다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: **p <0.01).
도 9는 3T3-L1 세포주의 C/EBPβ의 RNA 발현에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. β-actin을 내부 컨트롤로 사용하였고, 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: ***p <0.001).
도 10은 3T3-L1 세포주의 C/EBPα의 RNA 발현에 대한 창맥탕의 효과에 대한 결과이다. 총 RNA는 분리되고 역전사되었으며, β-actin은 내부 컨트롤로서 사용되었다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: ***p <0.001).
도 11은 3T3-L1 세포주의 PPARγ의 RNA 발현에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 총 RNA는 분리되고 역전사되었으며, β-actin은 내부 컨트롤로서 사용되었다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05).
도 12는 3T3-L1 세포주의 지방산 생성에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 각 세포주는 DMM으로 개시한 후, 다른 농도의 창맥탕으로 9일간 처리되었다. 지방산 생성률은 λ=540nm 파장에서 plate reader로 측정하였다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: **p <0.01).
도 13은 3T3-L1 세포주의 ACC 생성에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 각 세포주는 DMM으로 개시한 후, 다른 농도의 창맥탕으로 9일간 처리되었다. ACC 생성률은 λ=540nm 파장에서 plate reader로 측정하였다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05).
도 14는 분화된 3T3-L1 세포주에 의한 lipid peroxidation 생성에 대한 창맥탕의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 3차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: *p <0.05).
도 15는 고지방식 유도 비만 쥐의 체중 증가에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p <0.05).
도 16은 음식 섭취량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p <0.05).
도 17은 고지방식 유도 비만 쥐의 간 무게에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 18은 고지방식 유도 비만 쥐의 부고환 주위 지방 조직(epididymal adipose tissue) 무게에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 19는 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 총 콜레스테롤 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p < 0.05).
도 20은 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 HDL-콜레스테롤 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다(결과유의성: * : p < 0.05).
도 21은 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 LDL-콜레스테롤 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 22는 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 트리글리세리드 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 23은 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 렙틴 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 24는 고지방식 유도 비만 쥐의 혈청 아디포넥틴 함량에 대한 창맥탕 추출물의 효과를 나타낸 결과이다. 각 값은 6차례 실험의 평균 ± S.D.로서 나타내었다.
도 25는 정상 쥐와 고지방식 유도 비만 쥐의 간 조직 변화를 나타낸 결과이다. 파라핀 조직은 hematoxylin & eosin으로 착색되었다. 시료는 광학 현미경(Zeiss, ×100)으로 촬영되었다. (A) ; 정상군, (B) ; 컨트롤Ⅰ, (C) ; 컨트롤Ⅱ, (D) ; 창맥탕
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 창맥탕 조성물은 맥문동, 창출, 감초, 건강, 진피, 용안육으로 이루어지는 것을 특징으로 하며, 특히, 맥문동 10~15 중량부, 창출 12~18 중량부, 감초 5~10 중량부, 건강 2~6 중량부, 진피 5~10 중량부, 용안육 5~10 중량부로 이루어지는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 창맥탕 조성물에 사용되는 맥문동(Liriope platyphylla Wang et Tang)은 한방에서는 맥문동이 보허약(補虛藥)으로서 양음윤폐(養陰潤肺), 익위생진(益胃生津), 청심제번(淸心除煩)하는 작용으로 거담(去痰), 진해(鎭咳), 자양(滋養), 강장(强壯), 이뇨(利尿), 지갈(止渴) 등에 이용되며, 맥문동을 함유한 방제로는 온경탕, 자감초탕, 청심연자음, 일관전, 생맥산 등이 있다. 맥문동의 효능으로 혈당강하작용, 항염증작용, IgM 항체 생산억제 작용, 항부정맥효과, 부탄올(butanol) 분획의 항암작용, 백혈구 감소증 길항체로의 작용 등이 있는 것으로 알려져 있다. 상기 맥문동은 10 내지 15 중량부의 양으로 사용하는데, 이 범위를 벗어날 경우 항고지혈 효과가 불충분하게 되므로 상기 범위에서 사용하는 것이 중요하다.
본 발명의 조성물에 사용되는 창출(蒼朮, Atractylodes chinensis Koidzumi)은 한방에서 당삽주(Atractylis chinensis)의 뿌리를 이르는 말로써, 발한, 이뇨, 진통 및 건위 등에 효능이 있어 위장염 및 감기 등에 효과가 있으며, 특히 중추신경 흥분을 억제와 진정작용의 역할을 하고 비만에 탁월한 효과가 있다. 상기 창출은 12 내지 18 중량부의 양으로 사용하는데, 이 범위를 벗어날 경우 항고지혈 효과가 불충분하게 되므로 상기 범위에서 사용하는 것이 중요하다.
본 발명의 조성물에 사용되는 감초(甘草, Glycyrrhiza uralensis Linne)는 콩과의 다년생 초본으로, 감초는 한방에서 모든 약재와 조화를 이루면서 효능을 증가시킬 뿐만 아니라 완화, 진통약으로 각종 동통 및 급박증상을 완화하는데 내복용 또는 외용으로 사용되고, 그 자체가 독의 중화작용과 같은 약성이 있는 것으로 알려져 있다. 상기 감초는 5 내지 10 중량부의 양으로 사용하는데, 이 범위를 벗어날 경우 항고지혈 효과가 불충분하게 되므로 상기 범위에서 사용하는 것이 중요하다.
본 발명의 조성물에 사용되는 건강(乾薑, Zingiber officinale Roscoe)은 생강의 뿌리줄기를 말린 것으로서, 위액 분비 촉진과 장관의 연동 작용을 활성화시키므로 소화를 돕고 구토를 가라앉히는 효과를 나타내고, 혈관 운동 중추, 호흡 중추와 심장 흥분 작용이 있어서 혈압을 상승시킴과 동시에 혈액순환을 촉진시키며, 항염증 작용 및 진통 작용이 있고, 인플루엔자균, 콜레라균, 개선균 등에 일정한 억균 작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 상기 건강은 2 내지 6 중량부의 양으로 사용하는데, 이 범위를 벗어날 경우 항고지혈 효과가 불충분하게 되므로 상기 범위에서 사용하는 것이 중요하다.
본 발명의 조성물에 사용되는 진피(Citrus unshiu Markovich)는 성숙한 감귤 과실의 껍질로 예로부터 한약재로 사용되어 왔으며, 진피 플라보노이드의 기능성에 대한 연구에서 항산화작용, 고지혈증 억제작용, 충치예방효과, 항균작용 등과 고혈압 예방, 혈중 LDL-콜레스테롤 함량 감소작용 및 HDL-콜레스테롤 증가 그리고 순환계 질환의 예방 및 개선 효과 등 다양한 생리기능성에 대한 보고가 되고 있다(Han and You 1988; Monforte et al. 1995; Kurowska et al. 2000). 상기 진피는 5 내지 10 중량부의 양으로 사용하는데, 이 범위를 벗어날 경우 항고지혈 효과가 불충분하게 되므로 상기 범위에서 사용하는 것이 중요하다.
본 발명의 조성물에 사용되는 용안육(Dimocarpus longan Lour.)은 무환자나무과의 용안(Dimocarpus longan Lour.:龍眼)의 가종피를 말하는 것으로, 강장작용, 항산화작용, 면역 기능활성화작용이 우수한 것으로 알려져 있다. 또한 용안육은 육혈을 보하고 정신안정효과가 있어 숙면을 유도하며, 뇌를 튼튼하게 하고 심장과 비장을 보호하는 데 효과적인 것으로 알려져 있다. 상기 진피는 5 내지 10 중량부의 양으로 사용하는데, 이 범위를 벗어날 경우 항고지혈 효과가 불충분하게 되므로 상기 범위에서 사용하는 것이 중요하다.
본 발명의 창맥탕 조성물은 마황, 의이인, 함초, 청국장, 나복자, 오미자, 맥문동, 석창포, 길경을 혼합하여 제조하는 것을 특징으로 한다. 추출액으로 제조할 경우, 마황, 의이인, 함초, 청국장, 나복자, 오미자, 맥문동, 석창포, 길경의 혼합물을 주정에 넣고 환류추출한 후 감압 농축하여 제조할 수 있다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
[실시예]
1. 시험방법
본 발명의 창맥탕 조성물의 항고지혈 효과를 확인하기 위하여, American Type Culture Collection (ATCC, USA)에서 구입한 3T3-L1 세포를 사용하여 시험을 실시하였다.
실험동물은 C57BL/6J (6주령, 수컷, 18∼22 ｇ)는 ㈜라온바이오 (Korea)에서 구입하여 사용하였다. 실험동물은 2주간의 안정기를 가지면서 순화를 시켰으며, 안정기동안 모든 실험군에는 일반 사료 (㈜퓨리나, Korea)를 자유식이 하였다. 안정기를 마친 후 정상군에는 일반 사료를, 고지혈증을 유도하기 위한 대조군과 창맥탕 추출물 투여군에는 고콜레스테롤 사료 (㈜중앙실험동물, Korea)를 2주간 자유 식이하면서 물을 충분히 공급하였다. 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 22±2℃, 1일 중 12시간은 200-300 Lux로 조명하고, 12시간은 모든 빛을 차단하였다. 본 실험은 대전대 동물실험윤리 위원회의 승인 (동물사용 윤리위원회 동물실험 승인번호 DJUARB 2015-025)을 받아 동물윤리준칙에 의거하여 실험하였다. 일반 사료와 고콜레스테롤 사료의 ㎏당 조성의 내용과 분량은 표 1 및 표 2와 같다.
| 성분 | 함량(%) |
| Crude protein | 20.0 |
| Crude fat | 4.5 |
| Crude fiber | 6.0 |
| Crude calcium oxide | 7.0 |
| Calcium | 0.5 |
| Phosphorus | 1.0 |
| 총함량 | 39.0 |
| 성분 | 함량(gm) |
| Casein, 80 Mesh | 200 |
| L-Cystine | 3 |
| Maltodextrin 10 | 125 |
| Sucrose | 68.8 |
| Cellulose, BW200 | 50 |
| Soybean Oil | 25 |
| Lard | 245 |
| Mineral Mix S10026 | 10 |
| DiCalcium Phosphate | 13 |
| Calcium Carbonate | 5.5 |
| Potassium Citrate, 1 H20 | 16.5 |
| Vitamin Mix V10001 | 10 |
| Choline Bitartrate | 2 |
| FD&C Blue Dye #1 | 0.05 |
| 총함량 | 773.85 |
창맥탕 약재는 ㈜옴니허브에서 구입하였고, 대전대학교 지역혁신센터 난치성면역질환의 동서생명의학 연구센터 (TBRC)에서 확인 후 정선하여 사용하였다.
2. 시료의 제조 및 분석
1) 시료의 제조
본 발명의 창맥탕은 표 3에 기재된 대로의 분량에 80% 주정 500 mL을 넣고 3시간 동안 환류추출 후 여과액을 얻어 rotary vacuum evaporator에서 감압 농축하였다. 농축된 용액은 freeze dryer로 동결 건조하여 분말 10.3 g (수득률, 9.37%)을 얻었다. 얻어진 분말은 냉동고에서 보관하며 필요한 농도로 3차 증류수에 희석하여 사용하였다.
| 성분 | 학술명 | 함량(g) |
| 맥문동 | Liriope platyphylla Wang et Tang | 12 |
| 창 출 | Atractylodes chinensis Koidzumi | 16 |
| 감 초 | Glycyrrhiza glabra Linne | 8 |
| 건 강 | Zingiber officinale Roscoe | 4 |
| 진 피 | Citrus unshiu Markovich | 8 |
| 용안육 | Dimocarpus longan Lour. | 8 |
| 총함량 | 56 | |
2) 시료의 검사
중금속 검사를 위하여, 납, 비소, 카드뮴 분석의 경우, 청맥탕 추출물 0.5 g을 극초단파 시료전처리장치 전용용기에 넣고 질산 10 ㎖을 넣은 후, 용기를 후드 안에 정치시켜 발생 가스를 제거하고 극초단파 시료전처리장치를 사용하여 분해하였다. 분해가 끝난 다음 분해액을 여과지로 여과하여 용량플라스크에 넣고 물을 넣어 적절하게 표준액의 농도범위로 희석하여 검액으로 하였다. 따로 질산 10 ㎖를 극초단파 시료전처리장치 전용용기에 넣어 검액 조제와 같은 방법으로 조작하여 공시험액으로 사용하였다. 준비된 검액, 표준액 및 공시험액을 가지고 유도결합플라즈마분광계(ICP)를 이용하여 검량선을 작성 하고 공시험액으로 보정하여 검액을 측정하였다. 수은 분석의 경우 창맥탕 추출물 50 mg을 정확하게 달아 특별한 전처리 과정 없이 수은분석기를 이용하여 측정하였다.
3) 간 기능 검사
혈청 내에서 AST, ALT 활성도를 측정하기 위해 실험 종료 후 심장 천자법을 이용하여 혈액을 채취하였다. 혈액을 30분간 상온에서 굳힌 뒤 3,000 rpm에서 15분간 원심분리 후 혈청을 분리하여, 서울의과학연구소에 분석 의뢰 하였다. AST, ALT 활성도는 JSCC UV method의 원리를 이용하여 생화학 자동분석기로 측정하였다.
4) 신 기능 검사
혈청 내에서 creatinine, BUN 활성도를 측정하기 위해 실험 종료 후 심장 천자법을 이용하여 혈액을 채취하였다. 혈액을 30분간 상온에서 굳힌 뒤 3,000 rpm에서 15분간 원심분리 후 혈청을 분리하여, 서울의과학연구소에 분석 의뢰 하였다. Creatinine의 함량은 Creatinine Jaffe Method의 원리, BUN의 함량은 Kinetic UV assay for urea/urea nitrogen의 원리를 이용하여 생화학 자동분석기로 측정하였다
5) 세포배양 및 세포독성 측정
동결된 3T3-L1 세포를 해동시킨 후 50 ㎖ 튜브에 옮기고, PBS 9 ㎖을 넣어 세포를 부유시킨 뒤 125 g에서 5분간 원심분리 하여 상등액을 제거하였다. 세포가 있는 튜브에 10% bovine calf serum (BCS)와 1% 항생제로 조성된 DMEM 배지 1 ㎖을 넣어 부유시켰다. 100 ㎜ dish에 9 ㎖의 배지를 넣고, 부유시킨 세포 1 ㎖을 넣어 세포배양기 (37℃, 5% CO2)에서 배양하였다. 계대 배양 횟수는 5회 이상으로 하였고, 시료들을 처리하기 전에 24시간 적응시켰다. 3T3-L1 세포는 96 well plate에 104 cells/well씩 분주하여 48시간 동안 배양하였다. 실험을 진행하기 전에 새로운 배양액으로 교체하였고, 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하여 다시 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 10 ㎕의 cell viability solution을 첨가하여 30분간 반응시킨 후 450 ㎚에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시 하였다.
3. 생체외 실험 방법
1) 3T3-L1 세포 분화
3T3-L1 세포 분화는 세포의 밀도가 80%가 된 것을 확인 후 differentiation media (DM, 10% FBS, 10 ㎍/㎖ insulin, 1 μM dexamethasone, 0.5 mM IBMX)으로 교체 한 후 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하고 2일간 배양하였다. Differentiation maintain media (DMM, 10% FBS, 10 ㎍/㎖ insulin)으로 교체하고 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하였으며, 2일 간격으로 DMM과 시료를 교체하여 7일 동안 배양하였다.
2) Oil red O 염색
3T3-L1 세포의 지방세포로의 분화를 억제하는지 여부를 확인하기 위하여 분화된 3T3-L1세포에서 형성되는 지방을 특이적으로 염색하는 Oil red O 염색법을 시행하였다. 배양된 세포의 배양액을 제거하고 PBS로 세척한 후 10% formalin용액을 넣은 뒤 1시간 동안 고정 시켰다. 고정액을 제거하고 증류수로 세척한 후 Oil red O 염색약을 넣고 2시간 동안 염색하였다. 염색 후 증류수로 세척하고, 염색된 세포를 현미경을 이용하여 관찰하였다. 지방축적을 정량적으로 측정하기 위하여 100% isopropanol을 이용하여 지방을 추출하여 96 well plate에 200 ㎕씩 옮겨서 plate reader로 510 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 지방축적은 대조군의 흡광도 값에 대한 백분율로 나타내었다.
3) Triglyceride 생성 측정
Triglyceride를 측정하기 위해서 triglyceride detection kit을 사용하였다. 3T3-L1 세포를 96 well plate에 104 cells/well로 분주하여 2일간 37℃, 5% CO2의 조건으로 배양하였다. 세포의 밀도가 80%이 된 것을 확인 후 DM으로 교체한 후 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하고 2일간 배양하였다. PBS로 세척한 후 DMM으로 교체하여 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하였으며, 2일 간격으로 다시 DMM과 시료를 교체하여 7일 동안 배양하였다. 배양 후 세포를 PBS로 세척하였고, lipid extraction buffer 100 ㎕를 넣은 후 30분 동안 90∼100℃에 두었다. 아이스박스에 옮긴 뒤 1분 동안 shake 하였다. 96 well plate에 50 ㎕씩 옮긴 뒤 lipase solution 2 ㎕를 넣고 10분 동안 상온에 두었다. kit의 master mix를 50 ㎕ 씩 넣고 상온에서 30분 동안 암소에 두었다. 과정 후 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. Triglyceride의 양은 triglyceride standard 검량선에 따라 계산하였다.
4) Fatty acid 생성 측정
Fatty acid를 측정하기 위하여 fatty acid detection kit을 사용하였다. 3T3-L1 세포를 96 well plate에 104 cells/well로 분주하여 2일간 37℃, 5% CO2의 조건으로 배양하였다. 세포의 밀도가 80%이 된 것을 확인 후 DM으로 교체한 후 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하고 2일간 배양하였다. PBS로 세척한 후 DMM으로 교체하여 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하였으며, 2일 간격으로 다시 DMM과 시료를 교체하여 7일 동안 배양하였다. 배양 후 free fatty acid (FFA) reagent A solution 100 ㎕를 넣고 37℃에서 10분 동안 반응하였다. 반응 후 FFA reagent B solution 50 ㎕를 넣고 다시 37℃에서 10분 동안 반응하였다. 상온에서 5분 동안 둔 후 plate reader로 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. Fatty acid의 양은 FFA standard를 이용해 계산하여 확인하였다.
5) Assay for Acetyl-coenzyme A Carboxylase (ACC) 생성 측정
3T3-L1 세포를 96 well plate에 104 cells/well로 분주하여 2일간 37℃, 5% CO2의 조건으로 배양하였다. 세포의 밀도가 80%이 된 것을 확인 후 DM으로 교체하여 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하고 2일간 배양하였다. PBS로 세척한 후 DMM으로 교체하여 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하였으며, 2일 간격으로 다시 DMM과 시료를 교체하여 7일 동안 배양하였다. 배양 후 ACC detection kit (Sigma Co., USA)을 이용하여 ACC를 측정하였으며, ACC의 양은 대조군의 값에 대한 백분율로 나타내었다.
6) Lipid peroxidation
3T3-L1 세포를 96 well plate에 104 cells/well로 분주하여 2일간 37℃, 5% CO2의 조건으로 배양하였다. 세포의 밀도가 80%이 된 것을 확인 후 DM으로 교체하여 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하고 2일간 배양하였다. PBS로 세척한 후 DMM으로 교체하여 시료를 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하였으며, 2일 간격으로 다시 DMM과 시료를 교체하여 7일 동안 배양하였다. 배양 후 lipid Peroxidation Assay Kit (Sigma Co., USA)을 이용하여 lipid Peroxidation를 측정하였으며, lipid Peroxidation의 양은 대조군의 값에 대한 백분율로 나타내었다.
7) Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)
(1) RNA 추출
세포에 RNAzolB 1000 ㎕를 넣고 chloroform (CHCl3) 200 ㎕를 첨가한 후 15초간 다시 혼합하였다. 이를 얼음에 2 분간 방치하였고, 13,000 rpm에서 원심 분리한 후 약 400 ㎕의 상층액을 회수하여 isopropanol 400 ㎕와 동량 혼합 후 천천히 흔들고 얼음에서 15 분간 방치하였다. 이를 다시 13,000 rpm에서 원심 분리한 후 80% EtOH로 수세하고 1분간 vacuum pump에서 건조하여 RNA를 추출하였다.
(2) 역전사 중합효소 연쇄반응
역전사(reverse transcription) 반응은 RT premix kit의 mixture (reaction buffer, dNTPs mixture, RNase inhibitor, stabilizer, oligo dT15 primer)를 사용하여 RNA가 1 ㎍이 되게 diethyl pyrocarbonate (DEPC) 처리된 증류수에 최종 부피가 20 ㎕가 되도록 하여 첨가하였다. 이 20 ㎕의 반응 혼합액을 잘 섞은 뒤 2,000 rpm에서 5초간 원심 침강하여 45℃ heating block에서 60분 동안 반응시켜 first-strand cDNA를 합성하였다. 이를 다시 95℃에서 5분 동안 방치하여 M-MLV RT를 불활성화 시킨 후 합성이 완료된 cDNA를 polymerase chain reaction (PCR)에 사용하였다.
(3) PCR
RT-PCR은 DNA polymerase 1U/tube에 250 mM dNTPs mix, RT buffer (10 mM Tris-HCl, pH 9.0, 30 mM KCl, 1.5 mM MHCl2)를 포함한 mixture에 각 샘플과 primer를 넣고 PCR을 시행하였다. 사용된 primer 는 표 4와 같다. 1% agarose gel에 전기 영동하여, 유전자발현 여부를 측정하였다. UV로 촬영하여 각 그룹별로 band를 확인하였다.
| Primer | F/R | Sequences | Annealing(℃) |
| C/EBPα |
F | GGTGCTGGAGTTGACCAGTG | 59 |
| R | CGGAATCTCCTAGTCCTGGC | ||
| C/EBPβ |
F | CCTTATAAACCTCCCGCTCG | 59 |
| R | TCCAGGTAGGGGCTGAAGTC | ||
| PPARγ |
F | GAGCCGTGACCACTGACAAC | 59 |
| R | TTGGCTGGTGCCAGTAAGAG | ||
| β-actin |
F | GATGCCCTGAGGCTCTTTTC | 60 |
| R | TCAGCAATGCCTGGGTACAT |
4. 생체내 실험 방법
1) 비만 유도 및 약물투여
실험군의 구분은 일반 식이를 투여한 정상군, 2주간의 고콜레스테롤 식이 사료로 고지혈증 유도한 쥐를 대조군과 창맥탕 추출물을 투여한 실험군으로 각 8마리씩 나누어 진행하였고, 실험이 진행되는 동안 자유 식이를 하였다. 정상군과 대조군에는 증류수를 실험군에는 창맥탕 추출물을 매일 1회, 오전 10시에 200 ㎕ (200 ㎎/㎏) 씩 투여하였다. 창맥탕 추출물 투여량은 1첩을 성인 체중 60 ㎏에 1회 투여용량으로 하고, 1첩으로부터 얻은 시료를 마우스 체중 30g으로 기준하여 산출하였다.
2) 체중 및 장기 무게 측정
체중과 식이 섭취량은 비만 유발을 마친 이후부터 실험이 종료되는 주까지 매주 월요일에 측정을 실시하였다. 장기무게는 실험 종료 후 간 조직과 부고환 주위 지방조직을 절취하여 g 단위로 측정하였다.
3) 혈액화학적 검사
혈중 내의 total cholesterol, high density lipoprotein cholesterol (HDL-cholesterol), low density lipoprotein cholesterol (LDL-cholesterol), triglyceride (TG)의 함량을 측정하기 위해 실험 종료 후 심장 천자법을 이용하여 혈액을 채취하여, 그 혈액을 30분간 상온에서 굳힌 뒤 3,000 rpm에서 15분간 원심분리 후 혈청을 분리하여 서울의과학연구소에 분석 의뢰 하였다.
4) 사이토카인 측정
혈중 내의 렙틴과 아디포넥틴의 함량을 측정하기 위해 실험 종료 후 심장 천자법을 이용하여 혈액을 채취하였다. 혈액을 30분간 상온에서 굳힌 뒤 3,000 rpm에서 15분간 원심분리 후 혈청을 분리하였다. 렙틴과 아디포넥틴의 함량은 ELISA 기법을 이용하여 측정하였으며, 농도별 표준곡선을 이용하여 계산하였다.
5) 동맥경화지수 (AI) 및 심혈관위험지수 (CRF) 측정
동맥경화 지수(Atherogenic Index, AI)는 아래의 식을 사용하여 구하였다. 또한, 심혈관 위험지수인 CRF (Cardiac Risk Factor)는 총 콜레스테롤의 양을 HDL 콜레스테롤의 양으로 나누어 구하였다.
6) 조직병리학적검사
Ether로 마취하여 심장 천자법를 통해 혈액을 채혈하고 흉부 및 복강을 절개하여 간과 지방 조직을 적출하였다. 각 실험군 별로 적출한 조직은 10% 중성 포르말린에 48시간 고정하여 고정이 완료된 조직들을 흐르는 수돗물에서 12시간 수세한 뒤 조직내 고정액을 완전 제거하였다. 조직의 탈수를 위해 60%에서부터 100% 알코올에 이르기까지 농도 상승 순으로 탈수하고, xylene에 투명과정을 거친 다음 파라핀 블럭을 제작하였다. 제작된 블럭은 박절기 (microtome)를 이용해 3∼4 ㎛ 두께로 절편을 만들어 탈 파라핀 및 함수과정을 거친 다음 hematoxyline과 eosin (H&E) 및 Masson-trichrome staining을 실시하여 광학현미경상에서 관찰 및 사진 촬영하였다(도 1).
5. 통계처리
본 연구에서 얻어진 결과는 평균±표준편차로 나타내었으며, 평균값 사이에 대한 유의성은 SPSS 11.0의 unpaired student's t-test를 사용하여 P<0.05, P<0.01 및 P<0.001의 신뢰수준에서 유의성을 검증하였다.
6. 시험결과
1) 중금속 검사
창맥탕의 안전성을 검사하기 위해 중금속 검사, 간 기능에 미치는 영향, 신 기능에 미치는 영향, 세포 독성에 미치는 영향을 검사하였다.
창맥탕 추출물의 중금속 함량을 측정한 결과는 표 5와 같다. 표 5의 결과를 살펴보면, 비소, 납, 카드뮴, 수은 모두 기준치 이하로 검출되는 것을 알 수 있다. 따라서 창맥탕를 사용하는데 있어서 중금속 함량은 안전 범위인 것으로 확인되었다.
| Pb | As | Cd | Hg | |
| 허용량(mg/kg) | 5 | 3 | 0.3 | 0.2 |
| 실시예(mg/kg) | 0.082 | 1.92 | 0.052 | 검출안됨 |
2) 간 기능에 미치는 영향
간 기능 측정의 지표성분인 Aspartate aminotransferase (AST) 및 Alanine aminotransferase (ALT) 함량을 측정한 결과를 도 2 및 3에 나타내었다.
AST를 측정한 결과, 정상군은 97.6±34.29 IU/L, 대조군은 109.39±27.88 IU/L, 창맥탕 200 투여군은 108.50±31.64 IU/L, 창맥탕 400 ㎎/㎏ 투여군은 103.33±26.01 IU/L로 나타나, 정상군과 비교하여 차이를 나타내지 않아 안전한 것으로 나타났다(도 2).
또한, ALT를 측정한 결과, 정상군은 87.14±8.79 IU/L, 대조군은 88.50±10.12 IU/L, 창맥탕 200 투여군은 86.48±14.66 IU/L, 창맥탕 400 ㎎/㎏ 투여군은 87.76±9.65 IU/L로 나타나, 정상군과 비교하여 차이를 나타내지 않아 안전한 것으로 나타났다(도 3).
3) 신 기능에 미치는 영향
신 기능 측정의 지표성분인 Creatinine (Cr) 및 Blood urea nitrogen (BUN) 함량을 측정한 결과를 도 4 및 5에 나타내었다.
Cr 함량을 측정한 결과, 정상군은 0.95±0.05 ㎎/㎗, 대조군은 1.00±0.04 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 1.00±0.05 ㎎/㎗, 창맥탕 400 ㎎/㎏ 투여군은 0.97±0.07 ㎎/㎗로 나타나, 정상군과 비교하여 차이를 나타내지 않아 안전한 것으로 나타났다(도 4).
또한, BUN 함량을 측정한 결과, 정상군은 34.12±3.15 ㎎/㎗, 대조군은 32.91±5.45 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 33.64±3.84 ㎎/㎗, 창맥탕 400 ㎎/㎏ 투여군은 32.46±2.35 ㎎/㎗로 나타나, 정상군과 비교하여 차이를 나타내지 않아 안전한 것으로 나타났다(도 5).
4) 세포독성에 미치는 영향
3T3-L1 세포에서 창맥탕의 세포독성을 확인한 결과, 대조군을 100%로 하였을 때, 1 μg/㎖의 농도에서 103.5±4.7%, 10 μg/㎖의 농도에서 102.2±3.6%, 100 μg/㎖의 농도에서 99.4±4.4%로 나타났다(도 6). 따라서 본 발명의 창맥탕에서는 세포독성이 없는 것으로 판단하였다.
8. 생체외 실험 결과
1) 세포내 지방구 함량에 미치는 영향
창맥탕의 지질 축적 감소는 1 μg/㎖의 농도에서 86.4±6.5% (*p <0.05), 10 μg/㎖의 농도에서 81.9±1.5% (*p <0.05), 100 μg/㎖의 농도에서 63.6±2.1% (***p <0.001)로 나타나 현미경 촬영 결과와 유사하였다(도 7).
2) Triglyceride (TG)의 생성에 미치는 영향
대조군을 100%로 하였을 때, 창맥탕 1 μg/㎖의 농도에서 78.3±1.4% (**p <0.01), 10 μg/㎖의 농도에서 77.1±1.5% (**p <0.01), 100 μg/㎖의 농도에서 50.5±0.5% (**p <0.01)로 나타나 TG의 생성을 현저히 감소시키는 것을 확인하였다(도 8).
3) 지방세포 분화에 관련된 전사인자에 미치는 영향
지방세포 분화에 관련된 전사인자로서 CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP)β, C/EBPα 및 Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ) 발현을 시험하였다.
C/EBPβ 발현은 대조군을 100%로 하였을 때, 창맥탕 1 μg/㎖의 농도에서 78.4±0.6% (***p <0.001), 10 μg/㎖의 농도에서 66.0±0.7% (***p <0.001), 100 μg/㎖의 농도에서 64.1±0.1% (***p <0.001)로 나타나 C/EBPβ의 발현을 억제시키는 것으로 확인되었다(도 9).
또한, C/EBPα 발현은 대조군을 100%로 하였을 때, 창맥탕 1 μg/㎖의 농도에서 47.4±0.7% (***p <0.001), 10 μg/㎖의 농도에서 34.2±0.4% (***p <0.001), 100 μg/㎖의 농도에서 46.6±0.4% (***p <0.001)로 나타나 C/EBPα의 발현을 현저하게 억제시키는 것으로 확인되었다(도 10).
또한, PPARγ 발현은 대조군을 100%로 하였을 때, 창맥탕 1 μg/㎖의 농도에서 78.9±1.1% (*p <0.05), 10 μg/㎖의 농도에서 94.8±1.0%, 100 μg/㎖의 농도에서 82.1±1.3% (*p <0.05)로 나타나 100 μg/㎖의 농도에서 C/EBPβ의 발현을 유의하게 억제시키는 것으로 확인되었다(도 11).
4) 지방산의 생성에 미치는 영향
대조군은 100%로 하였을 때, 창맥탕 1 μg/㎖의 농도에서 87.8±4.9%, 10 μg/㎖의 농도에서 85.7±5.0%, 100 μg/㎖의 농도에서 73.6±5.2% (**p <0.01)로 나타나 100 μg/㎖의 농도에서 유의하게 감소시키는 것을 확인하였다(도 12).
5) Acetyl-CoA carboxylase의 생성에 미치는 영향
대조군을 100%로 하였을 때, 창맥탕 1 μg/㎖의 농도에서 91.6±3.1%, 10 μg/㎖의 농도에서 85.0±4.6.% (*p <0.05), 100 μg/㎖의 농도에서 80.4±6.8% (*p <0.05)로 나타나 10 μg/㎖와 100 μg/㎖의 농도에서 유의하게 감소시키는 것을 확인하였다(도 13).
6) Lipid peroxidation의 생성에 미치는 영향
대조군을 100%로 하였을 때, 창맥탕 1 μg/㎖의 농도에서 94.4±3.3%, 10 μg/㎖의 농도에서 88.4±2.9%, 100 μg/㎖의 농도에서 86.8±2.8 (*p <0.05)로 나타나 100 μg/㎖의 농도에서 유의하게 감소시키는 것을 확인하였다(도 14).
9. 생체내 실험 결과
1) 체중 변화에 미치는 영향
비만 쥐의 체중 증가에 미치는 영향을 측정한 결과, 정상군은 실험 시작 시 20.6±0.45 g에서 종료 후 25.1±0.69 g, 대조군은 실험 시작 시 33.94±1.15 g에서 종료 후 43.96±1.45 g, 창맥탕 200 투여군은 실험 시작 시 34.58±0.68 g에서 종료 후 30.14±0.77 g (*p <0.05), 창맥탕 400 투여군은 실험 시작 시 34.58±0.53 g에서 종료 후 28.37±0.34 g (*p <0.05)으로 나타내었다(도 15). 결과적으로 창맥탕 200과 400 모두에서 대조군에 비해 현저한 체중감소를 확인하였다.
2) 평균 식이 섭취량에 미치는 영향
비만 쥐의 마리당 평균 식이 섭취량에 미치는 영향을 측정한 결과, 정상군은 실험 시작 시 20.6 g에서 종료 후 24.9 g, 대조군은 실험 시작 시 20.6 g에서 종료 후 20.4 g, 창맥탕 200 투여군은 실험 시작 시 20.4 g에서 종료 후 18.0 g, 창맥탕 400 투여군은 실험 시작 시 19.0 g에서 종료 후 19.0 g으로 나타내었다(도 16). 식이섭취량은 창맥탕 군이 대조군과는 큰 차이를 나타내지 않았다.
3) 장기 무게에 미치는 영향
간 조직 및 지방조직의 무게를 측정한 결과 다음과 같다.
비만 쥐의 간 조직 무게에 미치는 영향을 측정한 결과, 정상군은 0.98±0.09 g, 대조군은 2.57±0.52 g, 창맥탕 200 투여군은 2.32±0.47 g, 창맥탕 400 투여군은 2.24±0.39 g으로 나타나, 대조군에 비해 감소를 나타내었다(도 17).
비만 쥐의 부고환 주위 지방 조직 무게에 미치는 영향을 측정한 결과, 정상군은 0.40±0.06 g, 대조군이 3.31±0.37 g, 창맥탕 200 투여군은 2.79±0.44 g, 창맥탕 400 투여군은 2.91±0.48 g으로 나타나, 대조군에 비해 감소를 나타내었다(도 18).
4) 혈중 콜레스테롤에 미치는 영향
총 콜레스테롤 함량, HDL 및 LDL 콜레스테롤에 미치는 영향을 조사하여 혈중 콜레스테롤에 미치는 영향을 확인하였다.
혈청 내 총 콜레스테롤 함량을 측정한 결과, 정상군은 95.15±15.89 ㎎/㎗, 대조군은 201.63±28.10 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 166.50±17.45 ㎎/㎗ (*p <0.05), 창맥탕 400 투여군은 161.43±20.12 ㎎/㎗ (*p <0.05)로 나타나, 대조군에 비해 감소를 나타내었다(도 19).
또한, 혈청 내 HDL 콜레스테롤 함량을 측정한 결과, 정상군은 20.43±5.77㎎/㎗, 대조군은 24.63±5.77 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 28.62±8.46 ㎎/㎗ (*p <0.05), 창맥탕 400 투여군은 29.88±5.67 ㎎/㎗ (*p <0.05)로 나타나, 대조군에 비하여 증가를 나타내었다(도 20).
또한, 혈청 내 LDL 콜레스테롤 함량을 측정한 결과, 정상군은 138.24±11.75 ㎎/㎗, 대조군은 161.63±45.64 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 148.56±24.91 ㎎/㎗, 창맥탕 400 투여군은 146.32±29.44 ㎎/㎗로 나타나, 대조군에 비하여 큰 차이를 나타내지 않았다(도 21).
5) TG 생성에 미치는 영향
혈청 내 TG 함량을 측정한 결과, 정상군은 140.62±51.38 ㎎/㎗, 대조군은 270.43±101.31 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 221.12±95.33 ㎎/㎗, 창맥탕 400 투여군은 214.76±92.92 ㎎/㎗로 나타나, 대조군에 비하여 감소를 나타내었다(도 22).
6) 렙틴 생성에 미치는 영향
혈청 내 렙틴 함량을 측정한 결과, 정상군은 53.75±7.04 ㎎/㎗, 대조군은 99.81±7.76 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 80.76±15.44 ㎎/㎗, 창맥탕 400 투여군은 81.69±14.62 ㎎/㎗로 나타나, 대조군에 비하여 감소를 나타내었다(도 23).
7)
아디포넥틴
생성에 미치는 영향
혈청 내 아디포넥틴 함량을 측정한 결과, 정상군은 15.63±2.95 ㎎/㎗, 대조군은 7.05±1.17 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 12.84±2.71 ㎎/㎗, 창맥탕 400 투여군은 12.27±2.18 ㎎/㎗로 나타나, 대조군에 비하여 증가를 나타내었다(도 24).
8) 동맥경화지수 및 심혈관 위험지수에 미치는 영향
동맥경화지수를 측정한 결과, 정상군은 0.54±0.06 ㎎/㎗, 대조군은 1.36±0.06 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 0.92±0.04 ㎎/㎗ (*p <0.05)을 나타낸 반면, 창맥탕 400 투여군은 0.91±0.05 ㎎/㎗ (**p <0.01) 로 나타내었다(Table 6). 또한, 심혈관 위험지수를 측정한 결과, 정상군은 4.46±0.12 ㎎/㎗, 대조군은 8.10±0.24 ㎎/㎗, 창맥탕 200 투여군은 5.96±0.23 ㎎/㎗ (***p <0.001)을 나타낸 반면, 창맥탕 400 투여군은 5.81±0.08 ㎎/㎗ (***p <0.001)로 나타내었다(표 6). 표 6에서 AI는 atherogenic index, CRF는 cardiac risk factor를 나타내며, 평균± SD (n=6)의 조건에서 값을 구하였다(결과유의성: * : *p <0.05; **p <0.01; ***p <0.001).
표 6의 결과를 살펴보면, 대조군에 비해 창맥탕 군에서 동맥경화지수 및 심혈관 위험지수가 낮게 나타남을 알 수 있다.
| Normal | Control | CMT 200 | CMT 400 | |
| AI | 0.54±0.06 | 1.36±0.06 | 0.92±0.04* | 0.91±0.05 ** |
| CRF | 4.46±0.12 | 8.10±0.24 | 5.96±0.23*** | 5.810±0.08 *** |
9) 간조직에 미치는 영향
간의 조직을 H&E 염색하여 관찰한 결과, 정상군은 간 세포의 핵이 세포의 중앙에 위치하고 있으며, 세포의 크기도 일정하고, 쿠퍼세포는 간 세포 사이에 전체적으로 고르게 분포되어 있다. 대조군은 간 세포에서 지방공포가 관찰되었으며, 이로 인해 세포의 핵이 세포질 안에서 가장자리로 밀려난 것을 알 수 있고, 정상군에 비해 쿠퍼세포의 수도 현저히 감소함을 볼 수 있다. 창맥탕 200과 창맥탕 400 투여군에서는 간 세포내의 지방공포로 인해 세포의 크기는 커져있지만, 대조군에 비해 지방공포가 적어졌으며, 세포핵도 중앙에 위치하여 있는 호전현상을 나타내었다(도 25).
본 발명은 상술한 바와 같이 바람직한 실시예를 들어 도시하고 설명하였으나, 상기 실시예에 한정되지 아니하며 본 발명의 정신을 벗어나지 않는 범위 내에서 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 변형과 변경이 가능하다. 그러한 변형예 및 변경예는 본 발명과 첨부된 특허청구범위의 범위 내에 속하는 것으로 보아야 한다.
Claims (4)
- 맥문동 12 중량부, 창출 16 중량부, 감초 8 중량부, 건강 4 중량부, 진피 8 중량부, 용안육 8 중량부로 이루어지는 것을 특징으로 하는 항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물.
- 삭제
- 청구항 1에 있어서,
상기 창맥탕 조성물은 지방 축적 억제 효능, 콜레스테롤 감소 효능, 동맥경화 억제 효능, 심혈관 질환 억제 효능 및 체중 감량 효능을 보유하는 것을 특징으로 하는 항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물.
- 맥문동 12 중량부, 창출 16 중량부, 감초 8 중량부, 건강 4 중량부, 진피 8 중량부, 용안육 8 중량부로 이루어지는 것을 특징으로 하는 항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물의 제조방법.
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|---|---|---|---|
| KR1020160013265A KR101781468B1 (ko) | 2016-02-03 | 2016-02-03 | 항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물 및 이의 제조방법. |
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| KR1020160013265A KR101781468B1 (ko) | 2016-02-03 | 2016-02-03 | 항고지혈 효과를 나타내는 창맥탕 조성물 및 이의 제조방법. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20170092217A KR20170092217A (ko) | 2017-08-11 |
| KR101781468B1 true KR101781468B1 (ko) | 2017-09-25 |
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| KR (1) | KR101781468B1 (ko) |
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|---|---|---|---|---|
| KR102187385B1 (ko) * | 2019-01-31 | 2020-12-08 | (주)비엔지삶 | 한약재 추출물을 포함하는 면역활성 증진용 조성물 및 그 제조방법 |
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