KR101777313B1

KR101777313B1 - 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101777313B1
Application number: KR1020150168928A
Authority: KR
Inventors: 성민규; 최원석; 전선재; 정영필
Original assignee: (주)셀아이콘랩
Priority date: 2015-11-30
Filing date: 2015-11-30
Publication date: 2017-09-11
Also published as: KR20170063023A

Abstract

본 발명은 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물은 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 유효성분으로 포함한다.
상기한 구성에 의해 본 발명은 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 최적의 배합비로 혼합하여 화장료 조성물을 제조함으로써 콜라겐 합성을 촉진하여 현저한 피부 재생 및 보습 효과를 발휘하고 각 성분들의 상승작용에 의해 우수한 노화방지 효과를 발휘할 수 있다.

Description

베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR SKIN REGENERATION AND MOISTURING CONTAINING BETA-GLUCAN AND PEPTIDE}

본 발명은 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 최적의 배합비로 혼합하여 화장료 조성물을 제조함으로써 콜라겐 합성을 촉진하여 현저한 피부 재생 및 보습 효과를 발휘할 수 있는 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물에 관한 것이다.

인간을 포함하는 동물의 피부의 가장 중요한 역할은 외부의 손상 및 세균의 침입으로부터 신체를 보호하는 방어 장벽(defense barrier)의 역할을 함과 동시에 내부로부터의 열과 수분의 손실을 방지하는 것이다.

이러한 기능을 하는 피부는 여러 개의 층으로 구성되어 있으며, 이 가운데 가장 바깥에 위치하는 것을 표피(epidermis)라고 하는데, 이들 표피에서 재생능력을 보이는 것으로 알려진 것은 기저층에 존재하는 피부의 각질 줄기세포(Keratinocyte stem cells, KSC)이다.

이러한 피부는 세포의 변이, 활성산소 라디칼, 독성물질의 축적 및 피부간극 구성 단백질 변형 등에 의해 노화가 발생하는 것으로 알려져 있고 그 정확한 원인에 대한 수많은 연구에도 불구하고 각각의 주요인이 어떠한 메커니즘으로 피부에 주름을 형성하는지에 대해서는 충분히 밝혀져 있지 않았으며, 그 노화결과는 피부의 주름형성, 탄력저하 및 반점 형성 등으로 나타난다.

또한, 보통 어릴 때는 피부 손상이 일어나더라도 흉터가 남지 않는 반면, 나이가 들어 피부 손상이 일어나게 되면 흉터가 남는 이유도 피부 재생에 필요한 피부각질 줄기세포와 전이-증폭 세포의 증식의 수준 정도가 나이 정도에 따라 현저하게 낮아지기 때문인 것으로 보인다. 즉, 노화가 진행하게 되면, 상기한 세포들의 증식 정도가 낮아지게 되며, 이는 피부 재생 능력이 감퇴하는 것으로, 상처 등의 회복이 지연되거나, 피부 탄력 감소가 심화되어 주름이 발생할 수 있다.

이러한 피부노화, 주름개선 등의 문제를 해결하기 위하여 콜라겐의 변화에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다. 콜라겐의 생산을 촉진하는 저분자 화합물은 현재 피부주름 및 기미, 색소침착 개선을 위해 널리 사용되고 있는 레티노이드류, 그중에서도 레티놀(비타민 A)에 대한 피부 주름제거 임상 결과들이 다양하게 보고되고 있다.

이러한 레티놀을 함유한 화장료는 일광에 의해 형성된 피부 주름살이나 피부 처짐, 탄력감소 등을 효과적으로 개선한 사례가 보고된바 있다(미국등록특허 제4,603,146호, 제4,877,805호 참조). 또한, 콜라겐 합성 과정에 필수적인 L-아스코르빈산(비타민 C)를 함유하는 화장료 조성물이 피부주름개선, 자외선차단, 기미/주근깨/검버섯 등의 색소침착 등에 효과적이다는 보고가 있다(미국등록특허 제4,938,969호, 미국등록특허 제4,772,591호 및 유럽등록특허 제533,667호 참조). 이에, 최근에는 상기에 기술된 유효성분을 안정화하는 연구가 진행되고 있다.

이 외의 주름개선용 조성물로서, 미국등록특허 제4,720,353호에는 항산화제로 BHA(butylated hydroxy anisole), 비타민 C, 프로필 갈레이트 및 토콜페롤 리놀리에이트(linoleate)를 사용하여 안정화할 수 있음이 개시되어 있으며, 유럽특허 제440,398호에서는 한 종류 이상의 수용성 항산화제와 한 종료 이상의 유용성 항산화제, 킬레이트를 함유한 유중수(W/O)형의 유화 조성물로 레티놀을 안정화시킬 수 있음이 개시되어 있는데, 이와 같은 레티놀을 안정화시키기 위한 다양한 리포좀 및 캡슐 제제가 연구되어 화장료로 사용되고 있다. 한편, 레티놀 외에는 TGF-β(Transforming growth factor), 베툴린산, 야생 참마 추출물(한국공개특허 제2009-0055079호), 대두 단백질에서 유래하는 콜라겐 펩타이드(일본등록특허 제4030067호) 등이 주름개선용 조성물로서 알려져 있다.

그러나 상기에 기술된 피부개선 유효성분들은 빛, 수분, 공기, 열 등에 쉽게 산화되는 불안정한 성질이 있어 화장료의 원료로 사용하기에는 문제점을 포함한다. 특히 레티놀은 건성피부에 사용할 경우 피부의 각질을 벗겨내 피부자극이 심해 피부가 빨갛게 변하거나 더욱 건성이 될 가능성이 있다. 또한, 재조합 단백질 원료의 경우 고가의 비용이 소요되며, 천연 추출물의 경우 재현성이 떨어지는 단점이 있다.

이에 본 발명자들은 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 최적의 배합비로 혼합하여 화장료 조성물을 제조함으로써 콜라겐 합성을 촉진하여 현저한 피부 재생 및 보습 효과를 발휘할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

국내공개특허 제10-2015-0029498호(2015년 03월 18일 공개) 국내등록특허 제10-1032271호(2011년 04월 25일 등록) 국내등록특허 제10-1355385호(2014년 01월 20일 등록)

본 발명은 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 최적의 배합비로 혼합하여 화장료 조성물을 제조함으로써 콜라겐 합성을 촉진하여 현저한 피부 재생 및 보습 효과를 발휘할 수 있는 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

또한, 본 발명은 피부 내의 콜라겐 합성을 촉진함과 동시에 콜라겐의 분해를 저지하는 성분들을 함께 함유함으로써, 각 성분들의 상승작용에 의해 우수한 노화방지 효과를 발휘할 수 있는 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명이 해결하고자 하는 다양한 과제들은 이상에서 언급한 과제들에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

본 발명에 따른 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물은 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 유효성분으로 포함한다.

상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드는 H₂N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]₂-CO₂H의 화합물이고, 상기 화합물에서 [Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]₂는 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)일 수 있다.

상기 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드는 0.25:0.20:0.10의 중량비율로 혼합될 수 있다.

상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드 0.01 중량%, 코퍼트리펩타이드-1 0.02 중량%, 베타-1,3/1,6-글루칸 0.025 중량%, 글리세린 10 중량%, 프로필렌글라이콜 10 중량%, 에탄올 5 중량%, 소듐하이알루로네이트 0.5 중량%, 디메치콘 0.5 중량%, 피이지-40 하이드로제네이티드캐스터 오일 0.35 중량%, 향료 0.005 중량%, 방부제 0.005 중량% 및 잔량의 정제수를 포함할 수 있다.

기타 실시 예들의 구체적인 사항들은 상세한 설명에 포함되어 있다.

본 발명에 따른 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물은 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 최적의 배합비로 혼합하여 화장료 조성물을 제조함으로써 콜라겐 합성을 촉진하여 현저한 피부 재생 및 보습 효과를 발휘할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물은 피부 내의 콜라겐 합성을 촉진함과 동시에 콜라겐의 분해를 저지하는 성분들을 함께 함유함으로써, 각 성분들의 상승작용에 의해 우수한 노화방지 효과를 발휘할 수 있다.

본 발명의 기술적 사상의 실시예는, 구체적으로 언급되지 않은 다양한 효과를 제공할 수 있다는 것이 충분히 이해될 수 있을 것이다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예를 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 실시예들은 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미가 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미가 있는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

이하, 본 발명에 따른 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물에 대하여 상세하게 설명하기로 한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "재생"은, 피부 외부 및 내부 원인에 의해 발생된 피부(세포) 손상에 대한 피부 조직의 회복 과정을 의미한다. 상기 외부 원인에 의한 손상은 자외선, 외부 오염 물질, 창상, 외상 등을 들 수 있으며, 상기 내부 원인에 의한 손상은 스트레스 등을 들 수 있다.

또한, 본 발명에서 사용되는 용어 "보습"은, 수분손실(수분 증발) 등을 적절히 조절하여 생체의 항상성을 유지하는 것을 의미한다.

본 발명에 따른 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물은 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 포함한다.

상기 베타-1,3/1,6-글루칸은 수지상 세포의 분화 유도 및 면역세포를 활성화하는 작용을 함으로써 면역증강 효과를 나타낼 수 있다. 상기 베타-1,3/1,6-글루칸은 주쇄로서 베타-1,3 결합으로 연결된 포도당 5 분자당 베타-1,6 결합을 하고 있는 단당류가 1 분자씩 연결된 분지형의 수용성 베타-1,3/1,6-글루칸으로, 베타-1,3 및 베타-1,6 결합이 서로 혼재되어 있는 분지된 베타-글루칸(branched β-glucan)이다.

즉, 상기 베타-1,3 결합 외에 베타-1,6 결합도 있기 때문에 분지가 없는 다른 베타-글루칸보다 생리활성이 높다. 상기 베타-1,3/1,6-글루칸은 결정화도가 낮은 무정형 구조를 가지며 분자량이 수십만에서 수백만에 이른다. 본 발명에서 상기 베타-1,3/1,6-글루칸은 한국생명공학연구원에서 공급하는 것을 이용할 수 있고, 상기 베타-1,3/1,6-글루칸은 순도가 93.3%인 것을 사용하여 본 발명에 따른 화장료 조성물을 제조할 수 있다.

상기 코퍼트리펩타이드-1(Copper Tripeptide-1)는 트리펩타이드-1의 카퍼(Copper) 복합체로, 주름개선, 피부컨디셔닝제, 항염 등의 목적으로 사용될 수 있다.

본 발명에서 상기 코퍼트리펩타이드-1의 아미노산 서열은 글라이신을 아미노 말단기로 시작하여 히스티딘, 라이신 순서의 트리펩타이드가 코퍼 이온과 배위결합된 형태로, 구리(Cu)에 아미노산 서열이 Gly-His-Lys(G-H-K)로 결합될 수 있다.

본 발명에서 상기 코퍼트리펩타이드-1은 고체상 폴리머 지체를 이용하여 합성하는 고체상 펩타이드 합성방법을 이용하여 제조될 수 있는데, 상기 코퍼트리펩타이드-1은 당해 기술분야에서 공지된 자동 펩타이드 합성기를 이용하여 제조되거나 수동으로 직접 제조될 수 있고, 상기 코퍼트리펩타이드-1의 합성방법은 당해 기술분야에서는 공지된 기술인 바 이에 대한 구체적인 설명은 생략하기로 한다.

상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드는 우수한 콜라겐 합성촉진 기능을 가져 피부노화 경감, 주름 개선을 위해 사용될 수 있다.

본 발명에서 상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드는 H₂N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]₂-CO₂H과 같은 화합물로 나타낼 수 있고, 상기 화합물에서 [ ]₂는 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)를 의미할 수 있다.

본 발명에서 상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드는 하기의 합성방법에 의해 제조될 수 있다.

< 콜라겐 합성촉진 펩타이드의 합성 >

Novabiochem corporation으로부터 구입한 2-chlorotrityl chloride resin(g당 1.4mmol이 로딩된 수지)을 71.4㎎(0.10mmol) 측량하여 반응용기에 넣었다. 수지를 3㎖의 DMF로 용매화시키고 5분간 충분히 반응(sweeling)시킨 다음, 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액을 3㎖ 첨가하고 10분간 교반(shaking)하고 피페리딘 DMF 용액을 제거한 후, 10㎖의 DMF 용매를 이용하여 5회 세척하였다(10㎖씩 5회 세척) * DMF : 디메틸포름아미드.

Fmoc-Ser(Trt)-OH(468.6㎎, 0.80mmol), HOBt(108.1㎎, 0.80mmol) 및 DIC(0.124㎖, 0.80mmol)를 2㎖의 DMF 용매에 완전히 녹인 후, 수지에 첨가하였다. 반응액을 실온에서 8시간 동안 교반(shaking)한 후, 10㎖의 DMF 용매로 5회 세척하였다. 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액을 3㎖ 첨가하고 10분간 교반(shaking)하고 피페리딘 용액을 제거한 후, 다시 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액을 첨가하여 10분간 반응시켜 수지에 보호되어 있는 Fmoc 보호기를 완전히 제거하고 10㎖의 DMF 용매를 이용하여 5회 세척하였다(10㎖씩 5회 세척). 이 단계에서 Fmoc 보호기의 탈보호 반응 여부를 Kaiser test[E. Kaiser et al. Anal. Biochem., 1970, 34(2), 595~598.]를 실시하여 확인하였다. * Fmoc : 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 / HOBt : 1-하이드록시벤조트리아졸 / DIC : N,N'-디이소프로필카보디이미드.

다음으로는 아래와 동일한 합성 주기에 따라 연속적으로 펩타이드를 축합(커플링)시켰다.

(1) DMF 용매(10㎖)로 5회 세척 ;

(2) 20%(w/v) 피페리딘 DMF 용액(3㎖)을 사용하여 10분간 2회 탈보호 ;

(3) DMF 용매(10㎖)로 5회 세척 ;

(4) Fmoc-아미노산 첨가 ;

(5) 축합 시약을 첨가하여 아미노산 활성화 및 2시간 축합 ;

(6) DMF 용매(10㎖)로 5회 세척 ;

상기 (1) 내지 (6)은 계속 반복하였으며, 이 때, Fmoc-Cys(Trt)-OH 이후의 Fmoc으로 보호된 아미노산(0.80mmol)은 다음에 기술된 순서로 수지 반응용기에 첨가하여 축합시켰다.

(i) Fmoc-Lys(Boc)-OH ;

(ii) Fmoc-Lys(Boc)-OH ;

(iii) Fmoc-Thr(tBu)-OH ;

(iv) Fmoc-Lys(Boc)-OH ;

(v) Fmoc-Cys(Trt)-OH ;

Fmoc-Cys(Trt)-OH 축합 후의 (6) 이후에는, 마지막으로, 20% 피페리딘 DMF 용액(3㎖)을 처리하였다.

상기와 같은 합성 종결 즉시, 펩타이드가 축합된 수지를 3시간 동안 트리플루오로아세트산/티오아니졸/에탄디티올/트리이소프로필실래인/물(95:5:2.5:2.5:2.5)의 혼합물을 사용(10㎖)하여, 수지로부터 펩타이드를 절단하였다. 이렇게 얻어진 혼합 용액에 냉장 보관된 디에틸에테르 용매를 100㎖ 처리함으로써 침전물을 생성시켰다. 얻어진 침전물을 원심분리하여 완전히 침전시키고 트리플루오로아세트산, 티오아니졸 및 에탄디티올을 1차 제거하고 이상의 절차(디에틸에테르 용매를 100㎖ 첨가하여 침전물을 세척하고 원심분리하는 단계 - 1차 제거를 시도했던 트리플루오로아세트산, 티오아니졸 및 에탄디티올을 제거하기 위한 작업)를 2회 반복하여 고형화시킨 침전물을 얻었다. 상기 침전물(펩타이드)을 C-18 칼럼을 사용하여 50분에 걸쳐 0.01% 트리플루오르아세트산을 함유하는 5% 내지 100%의 아세토니트릴/물 농도구배 용매 시스템을 사용하는 HPLC로 정제하였다. 순수 정제된 분획물을 동결건조시켜 백색 분말형의 트리플루오로아세테이트염으로서 콜라겐 합성촉진 펩타이드 H₂N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]-CO₂H(70㎎)을 얻었다.

상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드 H₂N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]-CO₂H(20㎎)을 디메틸설폭사이드(DMSO) 2㎖에 녹인 후 10㎖의 물을 첨가하고 3일간 상온에서 교반시켜, 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer) 형태의 최종 콜라겐 합성촉진 펩타이드(18㎎)를 얻었다.

콜라겐 합성촉진 펩타이드 : H₂N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]₂-CO₂H : MS(ESI)m/e, [M+H]⁺= 1386.88; (18㎎)

이하, 본 발명에 따른 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물에 대한 실시예와 비교예를 들어 더욱 구체적으로 설명하기로 한다.

하기의 [표 1]에 나타낸 실시예 및 비교예들과 같은 배합비로 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 혼합하여 실험하였다.

구분(중량%)	실시예 1	비교예 1	비교예 2	비교예 3
콜라겐 합성촉진 펩타이드	0.10	0.5	-	-
코퍼트리펩타이드-1	0.20	-	0.5	-
베타-1,3/1,6-글루칸	0.25	-	-	0.5
증류수	잔량 전부	잔량 전부	잔량 전부	잔량 전부

실험예 1 : 실시예 1의 콜라겐 합성촉진 효과 측정 ( in vitro )

정상 사람 피부 섬유아세포(NHDF-NB: 쿠라시키보세키 가부시키가이샤 제조)를, 1.0×10⁴세포/㎖ 농도로 96웰 플레이트에 100㎕씩 분주하고, 37℃, 5% C0₂, 가습 조건하에서 3일간 배양을 실시하였다. 배양액은, Medium 106S(쿠라시키보세키 가부시키가이샤 제조]에 LSGS(Low Serum Growth Supplement, 쿠라시키보세키 가부시키가이샤 제조)를 10 중량%로 함유한 배지를 각 웰 100㎕씩 사용하였다.

이어서, DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Sigma사 제조)으로 교환하고, 다시 100㎕의 PBS[Phosphate Buffered Saline, 타카라바이오 가부시키가이샤 제조]로 세척 한 후 본 발명의 화합물을 처리하여 배양하였다. 상기 화합물을 용해하지 않는 PBS를 100㎕ 첨가한 것을 대조군으로서 사용하였다.

콜라겐 생산 촉진 시험에 있어서는, 7일간 배양한 후, 배양액을 채취하여, 배양액 중에 분비된 타입 I 콜라겐 농도를, 효소 결합 면역 측정법(Procollagen type I c-peptide EIA Kit; 타카라바이오 가부시키가이샤 제조)으로 정량하였다.

정량 결과를 기초로, 화합물을 첨가하지 않는 대조군 배양액 중의 타입 I 콜라겐 양을 100%로 하여 각 시험 샘플 배양액 중의 콜라겐 양을 산출하였으며 이에 대한 결과는 [표 2]에 나타내었다.

조건	피부 섬유아세포 콜라겐 생산량(%)
조건	2일 차	4일 차
실시예 1	168	198
비교예 1	124	148
비교예 2	121	126
비교예 3	118	134

상기 [표 2]를 참조하면, 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드 전부를 상기 실시예 1과 같은 배합비로 혼합한 경우가 각각 사용한 비교예 1 내지 3의 경우보다 피부 섬유아세포 콜라겐의 생산량이 현저히 촉진됨을 확인할 수 있었다.

실험예 2 : 실시예 1의 MMP -1 생성 억제 효과 ( in vitro )

인간 피부 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 1*10⁶ cells/well 농도가 되도록 접종하고, 70~80% 정도 자랄 때까지 37℃, 5% CO₂의 조건에서 24시간 배양하였다.

상기 실시예 1과 비교예 1~3을 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. 배양이 끝난 배지 상등액을 MMP-1 항체가 코팅된(anti-MMP-1 antibody coated) 96well plate(머크, 미국)에 넣고 어두운 곳에서 2시간 동안 37℃에서 배양하였다.

MMP-1 분석키트(Amersham, 미국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/ml)을 측정하고, 하기 수학식 1에 따라 MMP-1 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과를 [표 3]에 나타내었다. 이때, MMP-1 생성 억제율의 양성 대조군으로 TGF-b (10ng/ml, Roche, 미국)을 사용하였다.

[수학식 1]

MMP-1 생성억제율(%) = (실험군 MMP-1 양 / 대조군 MMP-1 양) * 100

구분	MMP-1 억제율(%)
실시예 1	48
비교예 1	31
비교예 2	26
비교예 3	14

상기 [표 3]을 참조하면, 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드 전부를 상기 실시예 1과 같은 배합비로 혼합한 경우가 각각 사용한 비교예 1 내지 3의 경우보다 MMP-1 생성 억제 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

상기한 콜라겐 합성촉진 펩타이드, 코퍼트리펩타이드-1 및 베타-1,3/1,6-글루칸을 포함하는 화장료의 효과를 평가하기 위하여, 하기의 [표 4]와 같은 성분들을 배합하여 화장료를 제조하였다.

성분	실시예 2(중량%)	비교예 4(중량%)
콜라겐 합성촉진 펩타이드	0.01	-
코퍼트리펩타이드-1	0.02	-
베타-1,3/1,6-글루칸	0.025	-
글리세린	10.00	10.00
프로필렌글라이콜	10.00	10.00
에탄올	5.00	5.00
소듐하이알루로네이트	0.50	0.50
디메치콘	0.50	0.50
피이지-40 하이드로제네이티드캐스터 오일	0.35	0.35
향료	0.005	0.05
방부제	0.005	0.05
정제수	잔량 전부	잔량 전부

실험예 3: 주름 개선 효과 평가 (육안평가)

본 발명에 따른 화장료 조성물의 주름 개선 효과를 확인하기 위해, 만 35 내지 55세의 대한민국 여성 20명을 대상으로 각 8주간 일상적인 로션 사용과 같은 방법으로 평가하였다.

실시예 2 및 비교예 4에 따라 제조된 화장료를 얼굴의 각 면에 구분 지어 사용하게 하였으며, 피검자의 주름개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰을 통하여 평가하였다.

구분	주름개선 효과			유효율(%)
구분	우수	약간	없음	유효율(%)
실시예 2	16	2	2	80
비교예 4	2	5	13	10

상기 [표 5]를 참조하면, 실시예 2와 같이 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 포함하여 제조된 화장료가 비교예 4와 같이 상기 성분들을 포함하지 않고 제조된 화장료보다 주름개선 효과가 현저히 향상되었음을 확인할 수 있었다.

실험예 4 : 보습효과 측정

코르네오메타(Corneometer) CM820(독일 Courage)을 이용한 커패시턴스 측정법을 사용하고, 시료는 실시예 2와 실시예 4를 사용하여 보습효과를 비교 측정하였다.

대한민국 남녀 15명씩 전체 30명을 대상으로 하여, 시험 시작 직전 하박 내측면을 대상으로 항온항습실에서 20분 동안 적응하게 한 다음, 피부 수분을 일정하게 유지시켰다. 그 다음, 코르네오메타 C820을 사용하여 각 시료 도포부위의 초기 수분 보유 양을 측정한 후, 실시예 2와 비교예 4에 따라 제조된 화장료를 도포하였다.

도포 20분 후에 수분증감율을 1차 측정하고, 2시간 후 다시 수분증감율을 측정하였다. 각 측정부위를 3번 반복 측정하고 그 평균값으로 하기 [수학식 2]에 따라 피부 수분 증감율을 계산하여 [표 6]에 나타내었다.

[수학식 2]

수분증감율(%) = (Tdi-Tdo)-(Ntdi-NTdo) / ((Ntdi-Ntdo) + Tdo) * 100

Tdi : 시료 도포 부위의 n번째 측정값

Tdo : 시료 도포 전 측정값

Ntdi : 시료를 도포하지 않은 부위의 n번째 측정값

NTdo : 시료를 도포하지 않은 부위의 도포 전 측정값

구분	실시예 2	비교예 4
20분	31.65	6.25
120분	16.97	1.57

상기 [표 6]을 참조하면, 실시예 2와 같이 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 포함하여 제조된 화장료가 비교예 4와 같이 상기 성분들을 포함하지 않고 제조된 화장료보다 초기뿐만 아니라 시간이 경과하여도 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

이상, 본 발명의 바람직한 일 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 일 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드를 유효성분으로 포함하며,
상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드는 H₂N-[Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]₂-CO₂H의 화합물이고,
상기 베타-1,3/1,6-글루칸, 코퍼트리펩타이드-1 및 콜라겐 합성촉진 펩타이드는 0.25:0.20:0.10의 중량비율로 혼합되는 것을 특징으로 하는 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 화합물에서 [Cys-Lys-Thr-Lys-Lys-Ser]₂는 시스테인 잔기인 티올기(-SH)를 환원체 형태(-S-S-)로 변형한 이중체(dimer)인 것을 특징으로 하는 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물.
삭제
제 1항에 있어서,
상기 콜라겐 합성촉진 펩타이드 0.01 중량%, 코퍼트리펩타이드-1 0.02 중량%, 베타-1,3/1,6-글루칸 0.025 중량%, 글리세린 10 중량%, 프로필렌글라이콜 10 중량%, 에탄올 5 중량%, 소듐하이알루로네이트 0.5 중량%, 디메치콘 0.5 중량%, 피이지-40 하이드로제네이티드캐스터 오일 0.35 중량%, 향료 0.005 중량%, 방부제 0.005 중량% 및 잔량의 정제수를 포함하는 것을 특징으로 하는 베타글루칸과 펩타이드를 함유하는 피부 재생 및 보습 화장료 조성물.