KR101776942B1

KR101776942B1 - 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물

Info

Publication number: KR101776942B1
Application number: KR1020140131540A
Authority: KR
Inventors: 정태숙; 박호용; 신동하
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2014-09-30
Filing date: 2014-09-30
Publication date: 2017-09-11
Also published as: KR20160039005A

Abstract

본 발명은 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용 조성물, 또는 항산화용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 콩잎으로부터 분리한 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈, α-아밀레이즈, DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 및 hACAT의 활성을 효과적으로 억제하고, LDL 산화를 효과적으로 억제함으로써 이와 관련되는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 항산화 활성이 우수하므로 항산화용 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

Description

코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물{Compositions for the prevention or treatment of metabolic diseases or complications thereof, or antioxidant for containing coumestan compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof as an active ingredient}

본 발명은 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물에 관한 것이다.

현대사회의 급속한 발전과 영양 섭취상태가 풍요로워 짐에 따라 원시시대와 차이가 없는 인체의 대사기관에 막대한 환경 변화가 발생하였다. 이에, 성인병 또는 현대병이라 불리는 비만, 제2형 당뇨병, 고혈압, 고중성지방혈증, 고콜레스테롤혈증, 동맥경화 등의 질환이 2개 이상 복합적으로 나타나는 경우 대사증후군이라 한다. 보건복지부가 2007~2010년 국민건강 영양조사 자료를 분석한 결과, 대사증후군 유병률이 30세 이상 성인의 28.8%(남자 31.9%, 여자 25.6%)로 나타났으며 (2012. 3. 22 발표자료), 이로부터 발병되는 심장질환과 뇌졸중이 한국인 사망원인 2, 3위를 차지할 만큼 증가하고 있는 실정이다.

이는 균형있는 신진대사가 잘 이루어지지 않아 발생하는 대사성 노폐물과 독소를 방출시키지 못함으로 인해 인체 내에 쌓인 노폐물들이 각 인체의 기능을 상실시킴으로 발생하는 증상으로 인슐린저항성증후군(insulin resistance syndrome)으로도 알려져 있는 대사증후군(Metabolic Syndrome)으로 발전하고, 대사증후군은 곧 관상동맥내 손상을 줘 심장질환 또는 중풍의 원인을 제공하거나, 신장에서 소금을 제거하는 능력이 떨어져서 고혈압을 일으키고, 심혈관 질환의 원인을 제공하는 중성지방 비율을 증가시키고, 혈액 응고의 위험을 가중시키며 또한, 2형 당뇨로 인슐린 생산이 적어져 눈, 신장, 신경에 손상을 초래하는 것으로 알려져 있다.

혈장 저밀도 지질 단백질(low-density lipoprotein: LDL)의 증가로 야기되는 동맥경화는 뇌동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬우며, 이로 인해 심장질환, 뇌혈관 질환 등의 순환계 질환으로 발전하게 된다. 혈관 내벽의 플라그(plaque) 형성 및 혈관파열은 심근경색 발병의 주요한 요인이며, 동맥경화의 초기 발생에 관한 가설은 혈관벽의 손상에 대한 만성 염증과정으로, 손상기작보다는 오히려 방어기작인 '손상에 대한 반응(responce-to-injury hypothesis)'으로 제시되고 있다(Circ. Res. 2001, 89, 298-304). 이는 유전적 변이, 과산화물, 고혈압, 당뇨, 혈장 호모시스테인 농도 증가 또는/및 미생물 감염 등의 원인에 의하여 혈관 내피세포가 정상적인 항상성을 유지하지 못하는 기능부전 상태가 되는 것이다.

더욱 상세하게, 상기의 원인들로 인하여 LDL이 산화, 당결합, 집적화, 당단백 결합 등을 거쳐 변형-LDL(highly modified-LDL; HM-LDL)로 변화하게 되고, 이들은 혈관 내피세포 및 평활근을 자극하고 손상을 유발한다. 이로 인하여, 내피세포의 혈관세포부착물질-1(vascular cell adhesion molecule-1; VCAM-1)의 발현 및 염증세포의 염증매개인자 방출이 촉진되면 LDL은 내피세포 아래에 유입 및 축적되고, 축적된 LDL 및 산화된 HM-LDL은 다시 대식세포, T 임파구 등의 면역세포의 유입 및 활성화를 유발하는 과정을 되풀이하여 병변의 염증반응을 촉진시키게 된다. 그 다음, 유입된 대식세포나 임파구로부터 방출된 가수분해효소, 염증매개인자, 성장인자 등의 작용으로 병반은 괴사하게 되고, 괴사된 병소 부위로 단핵구의 유입, 평활근의 이동 및 분화, 섬유성 조직의 형성 등의 반복적인 과정이 이루어진다. 상기 과정을 통해 병변 조직은 HM-LDL을 핵으로 한 괴사조직에 섬유질이 덮인 복잡한 구조의 섬유질 병변으로 발달하게 되며, 발달된 병변 조직으로부터 혈전이 생성되고 동맥이 경화되어 혈류장애 등 순환기 질환이 나타나게 되는 것이다.

LDL 산화는 죽상동맥경화증(atherosclerosis)을 포함하는 동맥경화(arteriosclerosis)를 유발하는 초기 요인으로 가장 중시되고 있다[Circulation, 1995, 91, 2488-2496; Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 1997, 17, 3338-3346]. 생체 내외에서 생성되는 산화적 스트레스(oxidative stress)는 혈액 내의 LDL을 산화된-LDL(oxidized-LDL)로 변형시키게 되고, 이것이 부착분자(adhesion molecule)를 통해 맥관내막(intima) 내로 유입된다. 유입된 산화된-LDL을 단핵구(monocyte)가 탐식하여 거품세포(foam cell)를 형성하면서 동맥경화 초기 병변인 지방선조(fatty streak)를 생성하게 된다. 동맥경화 초기 병변의 특징은 동맥 내피세포에서 생성되는 부착분자인 VCAM-1, ICAM-1(intracellular adhesion molecule-1) 및 MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)이 발현된다는 것인데, 이들은 전사인자(transcription factor)인 활성 산소종이나 사이토카인(cytokine) 등과 같은 다양한 요인에 의해 활성화되는 NF-κB(nuclear factor-κB)에 의해 유도된다. 활성화된 NF-κB는 IL-1, VCAM-1, ICAM-1 및 동맥경화의 진행에 관여하는 다른 인자들과 같이 특이적인 프로모터 유전자(promoter gene)에 결합하여 다양한 염증인자의 발현을 조절한다. 이에 항산화제 및 유리기 소거제는 이러한 NF-κB의 활성을 저해하는 것으로 밝혀지고 있으므로 항산화제를 적절히 섭취할 경우, 생체 내(in vivo)에서 LDL의 산화를 저해하고 부착분자의 발현을 억제하며 NF-κB의 활성을 감소시켜 동맥경화를 억제할 것으로 기대되며, 이에 대한 연구들이 진행되었다(J. Agric. Food Chem., 54: 5369-5374, 2006; 대한민국 등록특허 제588358호, 제631486호, 제728706호, 제772495호).

또한, 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화 및 심근경색 환자에 있어서 LDL 퍼옥사이드의 생성요인과 제거에 관한 연구(Curr. Atheroscler. Res., 2000, 2, 363-372)도 활발히 진행되고 있다. 현재 고지혈증 치료제로 사용되고 있는 프로부콜(Probucol), N,N'-디페닐렌디아민(N,N'-diphenylenediamine), 페놀계 합성 항산화제인 BHA(butylated hydroxyanisol) 및 BHT(butylated hydroxytoluene)는 LDL내 콜레스테롤을 감소시키고, 산화 정도를 약화시켜 병변형성을 감소되며, 상기 고지혈증 치료제는 항산화력은 우수하지만, 부작용이 많아 사용이 제한되고 있다.

따라서, 이러한 질병을 예방하려는 목적으로 종전부터 콜레스테롤 흡수의 억제와 생합성의 저해를 통한 혈장 LDL양을 감소시키려는 시도가 진행되어 왔으며(Principles in Biochemistry, lipid biosynthesis, 770-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers, New York; Steinberg, N. Engl. J. Med., 1989, 320, 915-924), 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화 및 심근경색 환자에 있어서 LDL 항산화제와 함께 지질강하제의 병행투여 요법에 대한 관심도가 높아지고 있다.

당뇨병은 혈당 농도가 정상인에 비하여 높아 소변으로 포도당이 배출되는 질환으로, 췌장 내의 랑게르한스섬의 β-세포에서 인슐린(insulin)의 비정상적 대사과정 또는 이상 생리활성에 의하여 발병된다. 당뇨병은 인슐린의 분비와 작용 여부에 따라 인슐린 의존성 당뇨병 및 인슐린 비의존성 당뇨병으로 나누어진다. 인슐린 의존성 당뇨병(제 1형 당뇨병)은 췌장의 베타세포가 파괴되어 인슐린을 분비하지 못하므로 심한 인슐린 결핍상태에 있으므로, 케톤증과 사망을 예방하기 위해 정기적으로 외부에서 인슐린을 공급해야 하며, 주로 청소년기 이전에 발생하므로 소아 당뇨병으로 불린다. 반면에 전체 당뇨병 환자의 90% 이상인 인슐린 비의존성 당뇨병(제 2형 당뇨병)은 췌장의 베타세포에서 인슐린을 분비하는 능력은 있으나 인슐린의 기능 이상 상태로부터 유발되는 질환이다. 당뇨병은 체내 고혈당환경으로 높은 삼투압 스트레스를 유발하여 백내장 및 신장질환과 같은 합병증을 유발한다(Campbell, R. K. and Steil, C. F. 1988. Diabetes, clinical pharmacy and therapeutics. William & Wilkins. 4, p.176). 당뇨병에는 인슐린을 비롯한 글루카콘(glucagon), 글루코콜티코이드(glucocorticoid) 등의 호르몬 불균형으로 탄수화물을 비롯한 단백질, 지질 및 전해질 대사 등 생리적 대사조절 기능이상으로 고혈당, 당뇨 등의 특징적인 증세를 나타내며, 또한 당뇨병의 합병증으로 혈관장애, 신경장애 및 감염증 등이 주로 나타난다. α-글루코시데이즈(α-glucosidase)는 탄수화물의 소화과정의 마지막에 관여하는 효소로, 이의 억제활성을 갖는 물질들은 탄수화물의 흡수를 저해하여 식후의 급격한 혈당상승을 억제할 수 있어, 당뇨 및 비만환자를 조절하는데 이용된다(Int. J. Obes. 11(Supple 2): 28, 1987).

생체 내 탄수화물 분해 효소인 α-아밀레이즈(EC 3.2.1.1, α-amylase)는 α-글루코시다아제와 마찬가지로 탄수화물의 체내흡수에 필요한 효소다. 이 효소의 억제는 탄수화물의 소화와 그리고 당의 흡수의 지연을 일으켜 식후 고혈당을 억제시킴으로써 항당뇨 효과를 가진다(J. Nutr. Sci. Vitaminol., 52: 149-153, 2006). 한편, 기존의 혈당조절제인 아카보스 등의 약을 지속적으로 사용하는 경우 혈당상승 억제효과는 강하지만, 그 지속적인 복용은 소화되지 못한 전분이 바로 대장 유입됨으로 인해 발생되는 저혈당 쇼크, 가스발생, 대장 내 전분분해 세균류의 비정상적인 발효로 인한 복부팽만, 설사 등의 부작용이 보고되고 있다(J. Pharm. Exp. Ther., 241: 915-920, 1987; Diabetes Care, 14: 732-737, 1991). 따라서 보다 부작용이 적고 안전한 혈당강하제의 개발이 필요하다.

성인형 당뇨병을 치료하기 위해 소화성 분해산물에 의해 인슐린 분비를 촉진시키는 인트레틴(incretins)을 이용한 치료방법이 있다. 이 인트레틴 중 GLP-1(Glucagon-Like Peptide-1)은 음식물 섭취 후 장내 세포로부터 분비되어 인슐린 분비를 촉진시킨며, 혈당 의존적으로 인슐린 분비를 자극함으로써 기존 치료제가 갖는 저혈당 유발 문제점을 갖지 않는다. 또한 GLP-1은 포만감을 증가시켜 음식섭취를 감소시킴으로써 성인형 당뇨병 치료에 유효하다고 보고되어 있다(J. Med. Chem., 48: 14, 2005; J. Med. Chem., 50: 2297, 2007; J. Med. Chem., 50: 6450, 2007). 따라서 GLP-1의 작용을 증가시킴으로써 당뇨병을 치료하는 방법이 주목받고 있다. 그러나 GLP-1의 짧은 반감기(2 분 이하)와 경구 투여의 어려움 때문에 이를 보완하기 위해 GLP-1의 분해에 관여하는 DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 저해제 개발이 활발히 진행 중이다. 즉, DPP-4를 억제하면 GLP-1의 순환농도를 증가시키고, 이로 인해 인슐린 분비를 증가시켜 GLP-1과 관련된 작용을 강화시켜 혈당 조절에 도움을 주는 것으로 알려져 있다.

콩잎(Glycine max leaf)은 이소플라본과 플라보노이드 함량은 콩에 비해 현저히 감소된 반면에, 캠페롤(kaempferol) 배당체가 많이 함유되어 있다(Biomed. Pharmacother. 56: 289-295, 2002). 또한 성숙한 콩잎으로부터 테로카판(pterocarpane)계 화합물인 코우메스트롤(coumestrol), 글라이세오린 유도체 (glyceollin derivatives), 이소트리폴리올(isotrifoliol), 파세올(phaseol)을 분리하였으며, 이 화합물들의 α-글루코시데이즈 저해할성과 LDL 항산화 활성을 보고한바 있다(J. Agric. Food Chem., 54: 2057-2063, 2006; Food Chemistry, 126: 1057-1063, 2011; J. Agric. Food Chem., 59: 12683-12690, 2011). 그러나 아직까지 콩잎으로부터 하기 화학식 1 및 2의 코우메스탄(Coumestan)계 화합물을 분리하여 보고된 문헌은 발견되지 않았다. 또한 화학식 1의 화합물은 본 발명에서 처음으로 분리한 신규 화합물이며, 화학식 2의 화합물은 파키스탄 식물인 Psoralea Plicata로부터 분리되어 보고되었으나 (Phytochemistry, 30: 2800-2803, 1991), 생리활성은 보고된 것이 없다.

종래 대사성 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물로는, 대한민국 등록특허 제758265호에서는 트리터페노이드계계 화합물을 유효성분으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 806226호에서는 콩뿌리 추출물 또는 이로부터 분리된 폴리페놀계 화합물을 유효성분으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제 811100호에서는 벤즈아졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 1089716호에서는 플라보노이드계 화합물을 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 고지혈증, 고콜레스테롤증 또는 이들의 합병증의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 1158856호에서는 콩잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 비만, 고지혈증, 동맥경화, 지방간, 당뇨 또는 대사증후군의 예방 또는 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 1415167호에서는 테로카판계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환, 염증성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 대사성 질환 치료에 유용한 신규 치료제의 개발이 여전히 요구되고 있는 실정이다.

이에, 본 발명자들은 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료제를 천연물로부터 탐색하던 중, 콩잎 추출물로부터 얻은 코우메스탄(Coumestan)계 화합물이 LDL 항산화 및 α-글루코시데이즈 저해활성이 있음을 확인하고, 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료뿐만 아니라 항산화용 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 항산화용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:

[화학식 1]

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또한, 본 발명은

1) 콩잎(Glycine max leaf)을 물, C₁ ~ C₂ 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물로 추출하여 콩잎 추출물을 얻는 단계;

2) 상기 단계 1)에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 순차적으로 사용하여 콩잎 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트 분획물을 얻는 단계; 및

3) 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 제 1항의 화합물을 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 신규 코우메스탄계 화합물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 하기 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:

[화학식 2]

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또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 및 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 및 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 상기 화학식 1 및 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 사료첨가제를 제공한다.

본 발명에 따른 콩잎(Glycine max leaf)으로부터 분리한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물은 α-글루코시데이즈(α-glucosidase), 알파-아밀레이즈(α-amylase), DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4), 사람 콜레스테롤 아실 전이효소(hACAT)의 활성을 효과적으로 억제하고, LDL 산화를 효과적으로 억제함으로써 이와 관련되는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 항산화 활성이 우수하므로 항산화용 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은, 본 발명의 코우메스탄(Coumestan)계 화합물의 제조 방법을 나타낸 개략도이다.
도 2는, 화학식 1로 표시되는 신규 화합물(9-hydroxy-2-(prop-1-en-2-yl)-1H-benzofuro[3,2-c]furo[3,2-g]chromen-6(2H)-one; C₂₀H₁₄O₅)의 NMR 분석 결과(2차원 분석)을 나타낸 도이다.
도 3은, 화합물 2로 표시되는 화합물인 플리카딘(plicadin; C₂0H₁₄O₅)의 NMR 분석 결과(2차원 분석)을 나타낸 도이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:

[화학식 1]

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또한, 본 발명은

상기 신규한 코우메스탄계 화합물은 콩잎(Glycine max leaf)에서 분리된 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 상기 콩잎은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.

상기 제조방법으로 제조된 신규 화합물은 핵자기공명스펙트럼(NMR), 질량분석, 녹는점, 적외선 분광도 등으로 확인할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 및 하기 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:

[화학식 2]

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본 발명은 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물뿐만 아니라, 이의 약학적으로 허용되는 염, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 라세미체, 또는 입체이성질체를 모두 포함한다.

본 발명의 화학식 1 또는 화학식 2의 코우메스탄계 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 동량의 화학식 1 또는 화학식 2의 신규 코우메스탄계 화합물 및 산 수용액 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조하거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비 용해화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 하기 제법에 의해 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.

<제법 1>

본 발명에 따른 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 제조방법은,

1) 콩잎을 물, C₁~C₄의 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물을 가하여 콩잎 추출물을 수득하는 단계;

2) 상기 단계 1)에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 이용하여 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는 단계; 및

3) 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계를 포함한다.

이하, 본 발명의 제조방법을 단계별로 살펴본다.

상기 <제법 1>의 단계 1)은 콩잎을 물, C₁~C₄의 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물을 가하여 콩잎 추출물을 수득하는 단계이다.

상기 단계에 있어서, 본 발명의 콩잎 추출물을 얻는 방법은 건조된 콩잎을 세절하여 추출용기에 넣고, 물, C₁~C₄의 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물을 넣어 상온 또는 가온하여 추출하여 추출액을 얻는다. 콩잎의 추출 효율을 높이기 위하여 상기 과정을 수회 반복 수행할 수 있다. 이후, 상기 추출액을 일정 시간 동안 방치 한 다음 거름종이 등으로 여과하여 메탄올 추출물을 제조할 수 있다.

상기 단계 2)는 단계 1에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 이용하여 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는 단계이다.

구체적으로 상기 단계에서 얻은 콩잎 추출물을 물에 현탁시킨 후, 추출용매로서 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 사용하여 순차적으로 분획하여 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 얻을 수 있다.

상기 단계 3)은 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매으로 하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계이다(도 1 참조).

구체적으로 단계 2)로부터 얻은 분획물들 중 에틸아세테이트 분획물을 헥산/아세톤을 유출용매로 사용하여 헥산/아세톤=30:1~1:1로 농도구배하여 컬럼크로마토그래피를 수행하여 8개의 분획물(A ~ H)로 분획하고, 이중 D 분획물(헥산:아세톤=10:1)은 헥산:아세톤=6:1을 유출용매로 사용하여 실리카 컬럼크로마토그래피를 수행하여 25개의 분획물(FD1 ~ FD25)로 분획하고, 상기 25개의 분획물 중, FD7 ~ FD14의 분획물을 합쳐서 80% 메탄올을 유출용매로 사용하여 세파덱스 LH-20 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 1로 표시되는 신규한 코우메스탄계 화합물을 분리, 정제하여 얻을 수 있다.

또한, 상기 25개의 분획물 중, FD17 ~ FD23의 분획물을 합쳐서 80% 메탄올을 유출용매로 사용하여 세파덱스 LH-20 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 2로 표시되는 화합물(플리카딘, plicadin)을 분리, 정제하여 얻을 수 있다.

<제법 2>

또한, 본 발명에 따른 화학식 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 제조 방법은,

1) 콩잎에 에틸아세테이트를 가하여 콩잎 에틸아세테이트 추출물을 수득하는 단계; 및

2) 상기 단계 1)에서 수득한 콩잎 추출물을 헥산/아세톤을 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계를 포함한다.

이하, 본 발명의 상기 제조방법을 단계별로 살펴본다.

상기 <제법 2>의 단계 1)은 콩잎을 에틸아세테이트로 추출하는 단계이다.

상기 단계에 있어서, 에틸아세테이트 추출물을 얻는 방법은 건조된 콩잎을 세절하여 추출용기에 넣고, 에틸아세테이트를 넣어 상온에서 추출하여 추출액을 얻는다. 콩잎의 추출 효율을 높이기 위하여 상기 과정을 수회 반복 수행할 수 있다. 이후, 상기 추출액을 일정 시간 동안 방치한 다음 거름종이 등으로 여과하여 에틸아세테이트 추출물을 제조할 수 있다.

상기 단계 2)는 상기 단계 1)에서 수득한 에틸아세테이트 추출물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계이다.

상기 단계는 상술한 <제법 1>의 단계 3)과 동일한 방법으로 수행될 수 있다.

본 발명에 있어 상기 대사성 질환은 당뇨, 고지혈증, 동맥경화, 지방간 또는 비만이 있으며, 대사성 질환의 합병증은 관상 동맥 질환, 협심증, 경동맥 질환, 뇌졸중, 뇌동맥경화증, 고콜레스테롤증, 콜레스테롤 결석, 고중성지방혈증, 고혈압, 백내장, 신장질환, 신경장애, 염증성 장애 또는 감염증 등이 있다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 대사성 질환에 관련된 활성을 검증하기 위해 α-글루코시데이즈 저해 활성, α-아밀레이즈 저해 활성, DPP-4 저해활성, hACAT-1 및 hACAT-2 저해활성 및 LDL에 대한 항산화 활성 측정을 수행하였다. 그 결과, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 코우메스탄계 화합물의 α-글루코시데이즈 저해 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈에 대하여 7.5 μg/ml에서 각각 57.8 ± 2.9% 및 66.0 ± 0.3%로 우수한 저해활성이 있는 것으로 나타났다(표 3 참조).

또한, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 코우메스탄계 화합물의 α-아밀레이즈 저해 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-아밀레이즈에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 14.9% 및 61.4%로 나타났다(표 4 참조).

또한, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 코우메스탄계 화합물의 DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 저해 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 DPP-4에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 45.0% 및 77.1%로 나타났다(표 5 참조).

또한, 고지혈증 치료와 관련 있는 혈중 콜레스테롤 전이 효소의 저해활성을 측정한 결과, 본 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 60.4% 및 64.2%로 매우 우수한 것으로 나타났고, 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 24.5% 및 43.5%로 나타났다(표 6 참조).

또한, LDL 산화 억제 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 저밀도 지질 단백질의 산화에 대하여 3 ㎍/ml에서 각각 34.1% 및 22.8%로 우수한 저해활성이 있는 것으로 나타났다(표 7 참조).

또한, 본 발명의 코우메스탄계 화합물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 상기 코우메스탄계 화합물은 경구 독성시험에 의한 50% 치사량(LD50)은 적어도 1000 ㎎/㎏ 이상인 것으로 나타났다(실험예 4 참조).

따라서, 본 발명의 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈 활성, α-아밀레이즈 활성, DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 활성 및 사람 콜레스테롤 아실 전이효소(hACAT) 활성을 효과적으로 억제하고, LDL에 대한 우수한 항산화 활성을 나타내며, 독성이 거의 없기 때문에 대사성 질환 또는 이의 합병증 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 항산화용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

상기 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명로 표시되는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다.

비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

구체적으로, 본 발명에 따른 화합물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 ㎏당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 0.5 내지 10 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 항산화용 화장료 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제 등을 포함하나 여기에 국한되는 것은 아니다. 본 발명에 따른 항산화용 화장료 조성물을 제조함에 있어서, 통상적으로 함유되는 피부 외용제 조성물에 본 발명의 코우메스탄계 화합물을 1 내지 15 중량부, 바람직하게는 2 또는 10 중량부로 첨가할 수 있다. 상기 피부 외용제 조성물에는 본 발명의 코우메스탄계 화합물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부 외용제 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세하게 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 범위가 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 콩잎으로부터 코우메스탄(Coumestan)계 화합물의 분리

<1-1> 콩잎 추출물의 제조

본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 콩잎(Glycine max leaf)으로부터 분리하여 얻었다.

구체적으로, 충청남도 일대에서 대두콩을 파종하여 생육기간이 110일 이후에 수확한 콩잎을 음지에서 건조하였다. 건조된 콩잎 1 kg을 분쇄한 후 에틸아세테이트 10 L를 가하고 4일 동안 실온에서 추출한 후, 여과지를 사용하여 에틸아세테이트 가용부만을 회수하고 감압 농축하여 25 g의 에틸아세테이트 추출물을 수득하였다.

<1-2> 코우메스탄계 화합물의 분리 및 동정

<1-2-1> 화학식 1로 기재되는 신규한 코우메스탄계 화합물의 제조

상기 실시예 <1-1>에서 얻은 에틸아세테이트 추출물은 헥산-아세톤 혼합용액을 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피(헥산:아세톤 = 30:1(4 L), 20:1(2 L), 10:1(2 L), 8:1(2 L), 6:1(2 L), 3:1(2 L), 1:1(1 L))를 수행하여 총 8개의 분획물(A ~ H)을 얻었다. 상기 D 분획물(헥산:아세톤=10:1, 1.0 g)을 헥산:아세톤=6:1의 혼합 농도구배 용액을 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하여 25개의 분획물(FD1 ~ FD25)을 얻었다. 상기 분획물 중 FD7 ~ FD14의 분획물을 합쳐서 80% 메탄올을 유출용매로 사용하여 세파덱스 LH-20(pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 1로 표시되는 신규 화합물(7 mg)을 얻었다. 상기 화합물의 구조분석을 위하여 NMR 분석 및 질량분석을 수행하였다.

그 결과, 도 2 및 표 1에 나타낸 바와 같이 상기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물은 9-hydroxy-2-(prop-1-en-2-yl)-1H-benzofuro[3,2-c]furo[3,2-g]chromen-6(2H)-one으로 확인되었다(도 2 및 표 1).

화학식 1의 NMR 분석값(¹³C: 150 MHz; ¹H: 600 MHz, 용매 CDCl₃)

No.	¹³C	¹H
1	111.7	7.73 (1H, s)
2	125
3	163.2
4	98.6
4a	154.9	6.91 (1H, s)
5
6	158.6
6a	102.8
6b	117
7	122.2	7.90 (1H, d, J = 8.2 Hz)
8	113.7	6.94 (1H, br. d, J = 8.2 Hz)
8a
9	155.1
10	98.9	7.11 (1H, s)
10a	156.2
11
11a	160.6
11b	106
12α	33.6	4.46 (1H, m)
12β		3.14 (1H, m)
13	87.6	5.34 (1H, t, J = 8.2 Hz)
14	142.9
15α	133	4.97 (1H, br. s)
15β		5.12 (1H, br. s)
16CH₃	17.1	1.79 (3H, s)

<화합물명>

분자식: C₂₀H₁₄O₅

EiMS(m/z): 334 [M⁺]

<1-2-2> 화학식 2로 표시되는 화합물의 제조

상기 실시예 <1-2-1->에서 얻은 D 분획물(헥산:아세톤=10:1, 1.0 g)을 헥산:아세톤=6:1의 혼합 농도구배 용액을 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하여 25개의 분획물(FD1 ~ FD25)을 얻었다. 상기 분획물 중 화학식 2의 화합물을 다량 함유하는 분획인 FD17 ~ FD23을 합쳐서 용출 용매로 80% 메탄올을 사용하여 세파덱스 LH-20(pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 2로 표시되는 화합물(10 mg)을 얻었다. 상기 화합물들의 구조분석을 위하여 NMR 분석 및 질량분석을 수행하였다.

그 결과를 도 3 및 표 2에 나타내었으며 기 보고된 문헌(J. Agric. Food Chem., 54: 2057-920, 2063)의 결과를 참고한 결과 상기 화합물 2는 플리카딘(plicadin)으로 확인되었다(도 3 및 표 2).

화학식 2의 NMR 분석값(¹³C: 150 MHz; ¹H: 600 MHz, 용매 CDCl₃)

No.	¹³C	¹H
1	121.4	7.64 (1H, d, J = 8.3 Hz)
2	114.1	6.78 (1H, d, J = 8.3 Hz)
3	156.1
4	110.1
4a	149.3
5
6	158.9
6a	103.4
6b	115.8
7	121.7	7.77 (1H, d, J = 8.2 Hz)
8	114	6.89 (1H, br. d, J = 8.2 Hz)
8a
9	156.7
10	98.9	7.03 (1H, br. s)
10a	156.7
11
11a	160.4
11b	106.3
12	115.5	6.90 (1H, d, J = 10.3 Hz)
13	131.2	5.71 (1H, d, J = 10.3 Hz)
14	77.8
15CH₃	28.2	1.43 (3H, s)
16CH₃	28.2	1.43 (3H, s)

<화합물명>

분자식: C₂0H₁₄O₅

Coumestan-class compound, Plicadin

EiMS(m/z): 334 [M+]

< 실험예 1> 코우메스탄계 화합물의 α- 글루코시데이즈 활성 저해능 확인

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물이 탄수화물 대사에 필수적인 α-글루코시데이즈 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.

구체적으로, α-글루코시데이즈에 대한 저해활성은 Kato 등의 nitrophenol법(J. Med. Chem. 48: 2036-2044, 2005)을 일부 수정하여 사용하였다. α-글루코시데이즈(EC 3.2.1.20, Baker Yeast)에 의해 기질인 p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside(Sigma-Aldrich)이 가수분해가 일어나면서 생성되는 포도당과 같은 단당의 발색단을 이용하여 그 축적량을 흡광도로 측정하였다.

97-웰플레이트(NUNCTM 사)에 완충용액(70 mM 인산칼슘, pH 6.8) 50 ㎕, 50% DMSO에 녹인 시료 화합물 50 ㎕, α-글루코시데이즈(0.1 unit/ml) 50 ㎕를 넣고, 마지막으로 기질(5 mM, p-니트로페닐-α-D-글루코피라노사이드)을 첨가하여 37℃에서 30 분간 반응시킨 후, 2 M NaOH를 첨가하여 반응을 종결하였다. 생성된 발색단의 양을 마이크로플레이트 리더기(ANTHOSTM 사)를 사용하여 405 nm에서 측정하고 저해활성을 계산하였다.

코우메스탄 화합물	α-글루코시데이즈 저해 활성(7.5 ㎍/ml)
화학식 1	57.8 ± 2.9
화학식 2	66.0 ± 0.3

그 결과, 상기 표 3에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈에 대해 7.5 ㎍/ml에서 각각 저해 활성이 각각 57.8% 및 66.0%로 매우 우수한 것으로 나타났다(표 3).

따라서 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈 저해제로서 당뇨(Chem. Eur. J., 5: 967, 2001), 항바이러스(Diabetes Care. 28: 154, 2005), 항암(Cancer Commun. 1: 373, 1989; cancer Res. 46: 5315, 1986)을 비롯한 대사 불균형으로 인해 발생하는 각종 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용한 화합물로 사용될 수 있다.

< 실험예 2> 코우메스탄계 화합물의 α- 아밀레이즈 활성 저해능 확인

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물의 탄수화물 대사에 필수적인 α-아밀레이즈 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.

구체적으로, 췌장의 α-아밀레이즈에 대한 저해 활성은 Miller의 DNSA법(Analytical Chemistry, 31: 426-428, 1959)을 일부 수정하여 사용하였다. α-아밀레이즈(EC 3.2.1.1, porcine pancreatic α-아밀레이즈, Sigma A3176)에 의해 기질인 전분(Sigma S9765)이 가수분해가 일어나면서 생성된 환원당을 발색단을 이용하여 그 축적량을 흡광도로 측정하였다. 효소의 활성을 측정하기 위해, 시험관에 α-아밀레이즈 용액(0.06 mg/ml, 2 Unit/ml 농도)을 함유하는 0.02 M 인산나트륨 완충용액(0.006 M 염화나트륨, pH 6.9) 490 ㎕와, DMSO에 녹인 코우메스탄계 화합물 10 ㎕을 넣고 37℃에서 10분간 전반응 시킨 후, 0.02 M 인산나트륨 완충용액 내의 1% 전분 용액 500 ㎕를 첨가하였고, 37℃에서 15분간 반응시켰다. 이 반응액에 DNS 용액(0.4 M NaOH에 48 mM 3,5-디니트로살리실산, 30% 타르타르산나트륨칼륨 4수화물 포함) 1 ml를 첨가하여 반응을 종결시킨 후, 100℃에서 5분간 끓여 발색시킨 후 충분히 냉각한다. 이 반응액에 증류수를 첨가하여 3배 가량 희석하고 생성된 발색단의 양을 마이크로플레이트 리더기(ANTHOSTM 사)를 사용하여 540 nm에서 측정하고 저해활성을 계산하였다.

코우메스탄 화합물	α-아밀레이즈 저해 활성(100 ㎍/ml)
화학식 1	14.9 ± 1.6
화학식 2	61.4 ± 1.0

그 결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-아밀레이즈에 대해 100 ㎍/ml에서 각각 저해 활성이 각각 14.9% 및 61.4%로 나타났다(표 4).

따라서 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-아밀레이즈 저해제로 탄수화물의 소화와 그리고 당의 흡수의 지연을 일으켜 식후 고혈당을 억제시키며, 아카보스와 같은 기존 혈당조절제의 지속적 복용으로 전분 분해효소의 과다저해로 인한 부작용인 저혈당 쇼크, 복부팽창, 설사 등의 증상을 완화할 수 있으므로 부작용이 적고, 안전한 혈당강하제로 적용 가능한 유용한 화합물로 사용될 수 있다.

< 실험예 3> 코우메스탄계 화합물의 DPP -4( Dipeptidyl peptidase -4) 활성 저해능 확인

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물의 인그레틴(GLP-1, Glucagon-Like Peptide-1) 펩타이드를 분해하는 DPP-4 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.

음식을 섭취하면 장에서 인크레틴이라고 불리는 물질이 만들어지고, 인크레틴은 췌장에서 인슐린 분비를 증가시켜 혈당을 낮추는데 도움을 준다. 하지만 인크레틴은 장으로부터 혈액으로 분비된 후 불과 수 분만에 DPP-4에 의해 분해된다. DPP-4를 억제하면 활성형의 인크레틴이 혈액 속에 오래 머물면서 고혈당 섭취시에 인슐린 분비를 촉진하고 글루카곤 분비를 억제하여 혈당을 낮추는 활성을 가진다. 따라서 DPP-4 저해제를 복용하면 DPP-4 활성 억제로 GLP-1 펩타이드가 분해되지 않고 활성을 오랫동안 유지하게 되어 GLP-1의 활성으로 혈당을 낮추어 당뇨병 치료제로 사용할 수 있다.

DPP-4 활성의 측정은 Kim 등의 방법(European Journal of Pharmacology, 518: 63-70, 2005)을 일부 수정하여 사용하였다. 사람 재조합 DPP-Ⅳ(ENZ375, Prospec Co.), H-Ala-Pro-7-amino-4-trifluoromethylcoumarin(Ala-Pro-AFC)(24126, AnaSpec.), KR-62436(6-{2-[2-(5-cyano-4,5-dihydropyrazol-1-yl)-2-oxoethylamino]ethylamino}nicotinonitrile)(K4264, Sigma)을 구입하여 사용하였다. Black 96 well plate에 DMSO에 녹인 시료 2 ㎕, 50 mM Tris-HCl buffer 78 ㎕, DPP-4(1 ㎍/㎖) 10 ㎕를 첨가하고, 마지막으로 기질인 0.4 mM Ala-Pro-AFC 10 ㎕를 첨가한 후 실온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 반응시킨 후 Fluorometer(Victor 2, Perkin Elmer, excitation 355 nm/emission 510 nm)를 사용하여 DPP-4에 의해 dipeptide로부터 분해된 AFC의 형광값을 측정하여 DPP-Ⅳ 활성을 계산하였다. 저해활성 측정을 위한 양성대조군으로는 DPP-Ⅳ 저해제인 KR-62436을 사용하였다.

코우메스탄 화합물	DPP-4 저해활성(100 ㎍/ml)
화학식 1	45.0 ± 1.5
화학식 2	77.1 ± 1.2

그 결과, 상기 표 5에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 DPP-4에 대해 100 ㎍/ml에서 저해 활성이 각각 45.0% 및 77.1%로 나타났다(표 5).

따라서 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 DPP-4 저해활성이 우수하여 인크레틴과 GLP-1의 분해를 억제하여 인슐린 분비를 촉진하고 글루카곤 분비를 억제함으로써 혈당을 낮추는 당뇨병 치료제로 적용 가능한 유용한 화합물로 사용될 수 있다.

< 실험예 4> 코우메스탄계 화합물의 ACAT( Acyl - CoA : Cholesterol Acyltransferase) 활성 저해능 확인

본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물이 콜레스테롤을 그의 에스테르 형태로 전환시켜 세포 내에 콜레스테롤이 축적되는 것을 촉진하는 역할을 하는 사람 콜레스테롤 아실 전이효소인 hACAT-1 및 hACAT-2에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.

<4-1> 단백질 재조합

사람 간 cDNA 라이브러리 스크리닝(library screening)을 통하여 얻어진 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 cDNA를 베큘로바이러스 전달 벡터에 삽입하고, 곤충세포인 sf9 세포에 도입하여 바이러스를 제조하였다. 다음으로, 플라크 정제(plaque purification) 방법으로 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 재조합 바이러스를 분리한 후, 증폭과정을 3회 거쳐 저장용 바이러스(viral stock)의 역가(titer)를 높였다.

상기 바이러스 중, 단백질 발현 효율이 좋은 Hi5 곤충세포에 재조합 바이러스를 감염다중도(mutiplicity of infection)가 1이 되도록 감염시킨 후, 27℃에서 하루 동안 진탕 배양하였다. 상기 배양된 hACAT-1 및 hACAT-2가 각각 과량 발현된 Hi5 세포들로부터 마이크로좀 분획을 분리하기 위하여, 500 rpm에서 15분간 원심분리하여 세포들을 모으고 저장완충액(hypotonic buffer)에서 급냉동, 급해동 방법으로 세포를 깬 후, 100000 rpm에서 한 시간 동안 원심분리하였다. 상기 얻어진 마이크로좀 분획들은 단백질 농도가 8 mg/ml이 되도록 저장 완충액으로 현탁하여 -70℃ 저온냉동기에 보관하면서 사용하였다.

<4-2> hACAT -1 및 hACAT -2 활성 측정

ACAT 활성의 측정은 [1-¹⁴C] 올레오일-코에이(oleoyl-CoA)(56.0 Ci/mol; Amersham)를 기질로 하여 Brecher & Chan의 방법(P. Brecher and C. Chan, Biochim. Biophys. Acta, 617: 458, 1980)을 일부 수정하여 사용하였다. 상기 <실시예 1>에서 수득한 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물을 각각 10 ㎕, 상기 실험예 <4-1>에서 수득한 hACAT-1 또는 hACAT-2의 재조합 단백질을 포함하는 마이크로좀 용액 4.0 ㎕, 활성분석 완충액(0.5 M KH₂PO₄, 10 mM DTT, pH 7.4; Sigma) 20.0 ㎕, 지방이 제거된 우혈청알부민(BSA; bovine serum albumin, 저장액 농도 40 mg/ml; Sigma) 15.0 ㎕, 콜레스테롤(저장액 농도 20 mg/ml; Sigma) 2.0 ㎕, 증류수 41.0 ㎕를 가하여 37℃에서 15 분간 예비 반응시켰다. 음성 대조군으로는 용매만을 첨가한 것을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 올레익에시드 아닐라이드(oleic acid anilide)를 첨가한 것을 사용하였다.

이 반응액에 [1-¹⁴C] 올레오일-코에이(0.05 Ci, 최종농도: 10 μM) 8 ㎕를 첨가하여 다시 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 이소프로판올:헵탄 혼합물(4:1(v/v)) 1 ml을 가하여 반응을 정지시켰다. 여기에 600 ㎕의 헵탄과 200 ㎕의 0.1 M KH₂PO₄(pH 7.4)을 첨가하고, 혼합물을 볼텍서(vortexer)로 격렬하게 혼합한 후, 300 rpm에서 5분 동안 원심분리를 하였다. 상기 원심분리하여 얻은 100 ㎕의 상층액을 신틸레이션 병(scintillation bottle)에 넣고, 신틸레이션 액(Lipoluma) 4 ml을 가하였다. 상기 혼합물의 방사선량은 1450 마이크로베타 액체 신틸레이션 계수기(1450 Microbeta liquid scintillation counter, Wallacoy)로 측정하였다. ACAT 활성은 측정된 방사선량으로부터 시간당 방사선량을 계산하여 1분 동안 단백질 1 mg당 합성된 콜레스테릴 올레이트 피코몰(피코몰/분/mg 단백질)로 계산하였다.

코우메스탄 화합물	100 ㎍/ml에서 저해활성(%)
코우메스탄 화합물	hACAT1	hACAT2
화학식 1	60.4 ± 0.3	64.2 ± 3.1
화학식 2	24.5 ± 2.9	43.5 ±3.0

그 결과, 상기 표 6에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 ㎍/ml에서 각각 저해 활성이 각각 60.4% 및 64.2%로 매우 우수한 것으로 나타났다. 또한 본 발명에 따른 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 g/ml에서 각각 저해 활성이 각각 24.5% 및 43.5%로 나타났다(표 6).

따라서 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 콜레스테롤을 축적시키는 ACAT 활성을 저해하는 활성이 우수하므로 콜레스테릴 에스테르 합성 및 축적으로 유발되는 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 및 비만과 같은 심혈관계 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

< 실험예 5> 코우메스탄계 화합물의 LDL 항산화 활성 효과 확인

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물의 악성콜레스테롤인 혈장 저밀도 지질 단백질(low-density lipoprotein; LDL)에 대한 항산화 활성을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.

Cu² ⁺는 저밀도 지질 단백질의 산화를 유도(Cu² ⁺-mediated LDL-oxidation)하는 것으로 알려져 있다. 이에, 본 발명에서는 이때 생성된 불포화 지방산의 산화산물인 디알데하이드(dialdehyde)를 TBA(thiobarbituric acid)법으로 측정하여, 콩잎으로부터 분리된 상기 코우메스탄계 화합물의 항산화 활성을 조사하였다(Packer, L. Ed.(1994) Methods in Enzymology Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego).

구체적으로, 사람의 혈장 300 ml를 초원심분리기로 100,000×g에서 24시간 동안 원심분리하여 상층에 부유된 고밀도 지질단백질(VLDL)/킬로마이크론(chylomicron)층을 제거하고 나머지 용액의 비중을 1.063 g/ml로 맞춘 후, 100,000×g에서 24 시간 동안 원심분리하여 다시 상층에 부유된 저밀도 지질 단백질 25 ml(1.5~2.5 ml 단백질/ml)를 분리하였다. 이렇게 분리한 저밀도 지질 단백질 20 ㎕(단백질 농도, 50-100 ㎕/ml)를 10 mM 인산완충용액(phosphate-buffered saline, PBS) 210 ㎕와 혼합하고, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 용액을 각각 10 ㎕씩 첨가하였다. 상기 코우메스탄계 화합물은 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며, 실험에 사용하기 전에 여러 농도로 희석하였다. 음성 대조군으로는 용매만을 첨가한 것을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 프로부콜(probucol)을 첨가한 것을 사용하였다.

상기 용액에 0.25 mM CuSO₄ 10 ㎕를 첨가하여 37℃에서 4 시간 동안 반응시키고, 20% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid, TCA) 용액 1 ml를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 0.05 N NaOH 용액에 녹인 0.67% TBA 용액 1 ml를 첨가하고 10 초간 교반시킨 후 95℃에서 5 분 동안 가열하여 발색 반응이 일어나도록 하고 얼음물로 용액을 냉각하였다. 이 용액을 3,000 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 상등액을 분리하였으며, 자외선-가시광선 분광기로 540 nm에서의 흡광도를 측정하여 상기 발색 반응으로 생성된 말론디알데하이드(malondialdehyde, MDA)의 양을 계산하였다. 또한, 테트라메톡시프로판(말론알데하이드 비스(디메틸아세탈))[tetramethoxypropane malonaldehyde bis(dimethylacetal)]의 저장용액을 이용하여 0~10 n㏖ 말론디알데하이드를 포함하는 PBS 표준용액을 250 ㎕씩 제조하고, 이 표준용액을 상기와 같은 방법으로 발색시켜 540 nm에서의 흡광도를 측정하고, 말론디알데하이드의 표준곡선을 구하고, 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물을 사용한 상기 실험에서 말론디알데하이드의 양을 상기 표준곡선을 이용하여 정량하였다.

코우메스탄 화합물	LDL 산화 억제 활성(10 ㎕/ml)
화학식 1	80.0 ± 0.5
화학식 2	79.0 ± 1.4

그 결과, 상기 표 7에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 저밀도 지질 단백질의 산화에 대해 10 ㎕/ml에서 각각 저해 활성이 각각 80.0% 및 79.0%로 매우 우수한 것으로 나타났다(표 7).

따라서, 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 저밀도 지질 단백질이 산화되어 유발되는 것으로 알려진 당뇨, 고지혈증, 동맥경화, 지방간, 비만, 대사증후군 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

< 실험예 6> ICR 마우스에 대한 경구투여 급성 독성실험

본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물의 급성 독성을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.

<6-1> ICR 마우스의 제조

4주령의 특정 병원체 부재(specific pathogens free) ICR 마우스 암컷 12 마리와 숫컷 12 마리(암수 각각 3마리/용량군)를 온도 22 ± 3℃, 습도 55 ± 10%, 조명 12L/12D의 동물실 내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료((주)제일제당, 마우스 및 랫트용) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.

<6-2> 약물투여

상기 <실시예 1>에서 얻은 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물을 0.5% 트윈 80을 용매로 하여 50 mg/ml 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g당 0.2 ml(500 mg/kg), 0.4 ml(1,000 mg/kg)씩 경구 투여하였다. 시료는 단 1회 경구 투여하였으며, 투여 후 7일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여 당일은 투여 후 1시간, 4시간, 8시간, 12시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7일째까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다. 또한, 투여 7일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여 당일부터 1일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 코우메스탄계 화합물에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.

그 결과, 시험물질을 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상은 없었고 폐사된 마우스도 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 따라서, 본 발명에 따른 콩잎으로부터 분리한 코우메스탄계 화학식 1 내지 2로 표시되는 화합물은 모든 마우스에서 1000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)이 적어도 1,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

따라서, 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈, α-아밀레이즈, DPP-4, hACAT-1 및 hACAT-2 활성을 효과적으로 억제하고, LDL에 대한 우수한 항산화 활성을 나타내기 때문에 부작용이 경감된 대사성 질환 또는 이의 합병증 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화학식 1 내지 2로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

< 제조예 1> 약제의 제조

1. 산제의 제조

코우메스탄계 화합물 500 ng

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

코우메스탄계 화합물 500 ng

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

코우메스탄계 화합물 500 ng

옥수수전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

4. 주사제의 제조

코우메스탄계 화합물 500 ng

만니톨 180 ㎎

Na2HPO4ㆍ2H2O 26 ㎎

증류수 2974 ㎎

통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.

< 제조예 2> 건강식품의 제조

1. 건강식품의 제조

코우메스탄계 화합물 500 ng

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎎

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

2. 건강 음료의 제조

코우메스탄계 화합물 500 ng

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

< 제조예 3> 화장료 조성물의 제조

1. 크림의 제조

세토스테아릴알코올 2.8 중량부

밀납 2.6 중량부

스테아린산 1.4 중량부

친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부

피이지-100 스테아레이트 1 중량부

세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부

호호바오일 4 중량부

스쿠알란 3.8 중량부

폴리소르베이트 60 1.1 중량부

마카다이아오일 2 중량부

초산토코페롤 0.2 중량부

메칠폴리실록산 0.4 중량부

에칠파라벤 0.1 중량부

프로필파라벤 0.1 중량부

Euxyl K-400 0.1 중량부

1,3-부칠렌글리콜 7 중량부

메칠파라벤 0.05 중량부

글리세린 6 중량부

d-판데놀 0.2 중량부

코우메스탄계 화합물 4.6 중량부

트리에탄올아민 0.2 중량부

pt 41891 0.2 중량부

p-H₂O 46.05 중량부

2. 로션의 제조

세토스테아릴알코올 1.6 중량부

스테아린산 1.4 중량부

친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부

피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부

세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부

스쿠알렌 4.8 중량부

마카다이아오일 2 중량부

호호바오일 2 중량부

초산토코페롤 0.4 중량부

메칠폴리실록산 0.2 중량부

에칠파라벤 0.1 중량부

프로필파라벤 0.1 중량부

1,3-부칠렌글리콜 4 중량부

메칠파라벤 0.1 중량부

산탄검 0.1 중량부

글리세린 4 중량부

d-판데놀 0.15 중량부

알란토인 0.1 중량부

코우메스탄계 화합물 3.5 중량부

카르보머(2% aq. Sol) 4 중량부

트리에탄올아민 0.15 중량부

에탄올 3 중량부

pt 41891 0.1 중량부

p-H₂0 48.3 중량부

< 제조예 4> 사료첨가제의 제조

본 발명자들을 코우메스탄계 화합물을 유효성분으로 하여 하기와 같은 조성으로 사료첨가제를 제조하였다.

코우메스탄계 화합물 0.1 ~ 20% 중량부

지방분해효소(Lipase) 0.001 ~ 0.01% 중량부

제 3 인산칼슘 1 ~ 20% 중량부

비타민 E 0.01 ~ 0.1% 중량부

효소 분말 1 ~ 10% 중량부

유산균 0.1 ~ 10% 중량부

바실러스(Bacillus) 배양액 0.01 ~ 10% 중량부

포도당 20 ~ 90% 중량부

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 신규한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
[화학식 1]

.
제 1항에 있어서, 상기 신규한 코우메스탄계 화합물은 콩잎에서 분리된 것을 특징으로 하는 신규한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
1) 콩잎을 물, C₁ ~ C₂ 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물로 추출하여 콩잎 추출물을 얻는 단계;
2) 상기 단계 1)에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 순차적으로 사용하여 콩잎 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트 분획물을 얻는 단계; 및
3) 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 제 1항의 화합물을 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 신규 코우메스탄계 화합물의 제조방법.
하기 화학식 1로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는, 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
[화학식 1]

.
제 4항에 있어서, 상기 코우메스탄계 화합물은 알파-글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 효과, 알파-아밀레이즈(α-amylase) 억제효과, DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 억제 효과, 사람 콜레스테롤 아실 전이효소(hACAT)의 억제 효과 또는 저밀도 지단백질(LDL) 항산화 활성 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 대사성 질환은 당뇨, 고지혈증, 동맥경화, 지방간 또는 비만인 것을 특징으로 하는 대사성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
삭제
제 4항의 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
삭제
제 4항의 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물.
제 4항의 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 사료첨가제.