KR101769531B1 - 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 및 제조방법 - Google Patents

항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 및 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항암면역증진 활성이 우수한 장생도라지와 여러 생약들을 혼합하여 항암면역증진 활성을 강화시킨 장생도라지 복합조성물과 이러한 장생도라지 복합조성물을 건강기능소재로 간편하게 활용하기 위한 장생도라지 복합조성물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물은, 장생도라지 26.85~40.27중량%, 와송 6.44~9.66중량%, 유근피 6.44~9.66중량%, 원육 4.30~6.44중량%, 황정 4.30~6.44중량%, 녹각 3.22~4.84중량%, 숙지황 2.02~3.02중량%, 산약 2.02~3.02중량%, 인삼 2.02~3.02중량%, 당귀 2.02~3.02중량%, 황기 2.02~3.02중량%, 황백 2.02~3.02중량%, 진피 2.02~3.02중량%, 백복령 2.02~3.02중량%, 두충 1.61~2.41중량%, 감초 1.61~2.41중량%, 백출 1.61~2.41중량%, 택사 1.61~2.41중량%, 산수유 1.61~2.41중량%, 파고지 1.61~2.41중량%, 오미자 1.61~2.41중량%, 솔잎 1.07~1.61중량%를 포함하여 조성되는 것을 특징으로 한다. 또한 본 발명에 따른 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 제조방법은 장생도라지 복합조성물 원료를 열수추출한 후 10±0.3 Brix 농도로 만드는 제1단계; 여과한 후 살균하는 제2단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하며, 나아가 제2단계 후에 동결건조한 후 분쇄하여 포장용기에 포장하는 제3단계;를 더 포함하여 이루어질 수 있다.

Description

항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 및 제조방법{Old Platycodon Composit Composition Enhanced Anti-cancer Immune-modulatory Activity}
본 발명은 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 및 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 항암면역증진 활성이 우수한 장생도라지와 여러 생약들을 혼합하여 항암면역증진 활성을 강화시킨 장생도라지 복합조성물과 이러한 장생도라지 복합조성물을 건강기능소재로 간편하게 활용하기 위한 장생도라지 복합조성물의 제조방법에 관한 것이다.
도라지(길경 Platycodon grandiflorum A. DC)는 배농, 거담, 기관지염, 천식 등의 호흡기계질환에 사용되어온 생약재로서, 도라지가 배합되어 있는 한방 처방의 수가 동의보감에 273건, 방약합편에 49건에 이를 정도로 다양한 약리작용을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.
이러한 도라지의 주요 약리성분은 테르펜계 사포닌이며, 이 약리성분은 동물실험을 통하여 진해, 거담작용, 중추신경억제작용(진정, 진통, 해열효과), 급ㅇ만성 염증에 대한 항염증작용, 항궤양 및 위액분비억제작용, 혈관을 확장하여 혈압을 낮추는 항콜린작용, 혈당강하작용, 콜레스테롤 대사 개선작용 등이 있는 것으로 밝혀져 있다(Chem. Pharm. Bull., 20, 1952(1972), Chem. Pharm. Bull., 23, 2965(1975), J. Chem. Soc., Perkin trans I, 661(1984), Sogoigaku, 3, 1(1951), J. Pharm. Soc. Kor., 19, 164(1975)). 이외에도 도라지의 열수 및 에탄올 추출물은 곰팡이의 아프라톡신을 억제하며, 이눌린 분획은 식균작용과 고형암 및 복수암에 대한 강력한 항종양효능이 있고, 40중량% 도라지엑기스는 알코올흡수 억제작용이 있는 것으로 알려져 있다( Mycopathologia, 66, 16(1979), Shoyakugaku Zasshi, 40, 367(1986), Shoyakugaku Zasshi, 40, 375(1986), JP60-89427(1985), JP平3-264534(1991)).
위와 같은 도라지의 다양한 약리작용에도 불구하고 장기간 재배에 어려움이 있어 개발이 쉽지 않았으나, 20년 이상의 도라지를 재배할 수 있는 기술이 개발되어 다량 생산이 가능해졌기에(이성호, "다년생도라지재배법", 대한민국 특허 제 045731호) 이를 이용한 연구가 활발히 진행되고 있다. 현재까지 장생도라지에 관한 연구는 항당뇨 효과에 관한 실험( J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 25, 986(1996)), 고지혈증에 관한 실험(J. Nur. Sci. Vitaminol,41, 485(1995)) 등이 있으며, 항암, 면역활성에 대한 연구 등이 계속되고 있다. 이러한 장생도라지 약리 효과와 관련한 특허문헌으로 장생도라지 관련 공개특허 제10-2005-0021026호, 공개특허 제10-2005-0011211호 등이 있다.
본 발명은 장생도라지의 항암면역증진 활성을 강화하여 건강기능소재로서 활용가치를 증대시키고자 개발된 것으로서, 장생도라지의 항암면역증진 활성 더욱 강화시키기 위해 다른 생약재와 혼합한 항암면역증진 장생도라지 복합조성물을 제공하는데 기술적 과제가 있다.
또한 본 발명은 장생도라지 복합조성물을 건강기능소재로 간편하게 활용하기 위한 장생도라지 복합조성물의 바람직한 제조방법을 제공하고자 한다.
상기한 기술적 과제를 해결하기 위해 본 발명은, 장생도라지 26.85~40.27중량%, 와송 6.44~9.66중량%, 유근피 6.44~9.66중량%, 원육 4.30~6.44중량%, 황정 4.30~6.44중량%, 녹각 3.22~4.84중량%, 숙지황 2.02~3.02중량%, 산약 2.02~3.02중량%, 인삼 2.02~3.02중량%, 당귀 2.02~3.02중량%, 황기 2.02~3.02중량%, 황백 2.02~3.02중량%, 진피 2.02~3.02중량%, 백복령 2.02~3.02중량%, 두충 1.61~2.41중량%, 감초 1.61~2.41중량%, 백출 1.61~2.41중량%, 택사 1.61~2.41중량%, 산수유 1.61~2.41중량%, 파고지 1.61~2.41중량%, 오미자 1.61~2.41중량%, 솔잎 1.07~1.61중량%를 포함하여 조성되는 것을 특징으로 하는 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 장생도라지 복합조성물을 건강기능소재로 제조하는 방법으로, 제1항 또는 제2항에 따른 조성으로 장생도라지 복합조성물 원료를 열수추출한 후 10±0.3 Brix 농도로 만드는 제1단계; 여과한 후 살균하는 제2단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 제조방법을 제공한다. 여기서 제2단계 후에는 동결건조한 후 분쇄하여 포장용기에 포장하는 제3단계;를 더 포함하여 실시할 수 있다.
본 발명에 따르면 다음과 같은 효과를 기대할 수 있다.
첫째, 장생도라지를 와송, 유근피, 원육, 황정, 녹각, 숙지황, 산약, 인삼, 당귀, 황기, 황백, 진피, 백복령, 두충, 감초, 백출, 택사, 산수유, 파고지, 오미자, 솔잎과 같은 생약재와 함께 혼합할 때 항암면역증진 활성이 더욱 우수해지는 것을 확인할 수 있었는바, 본 발명에 따른 장생도라지 복합조성물은 항암면역증진 용도로 유리하게 이용할 수 있다.
둘째, 장생도라지 복합조성물을 분말상태의 건강기능소재로 간편하게 제조하는 공급할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 장생도라지 복합조성물의 제조방법에 대한 공정도이다.
도 2는 본 발명의 실시예에서 장생도라지 복합조성물의 제조방법에 대한 공정도이다.
도 3은 본 발명의 실험예에서 비특이적 면역반응인 자연살해(NK) 세포 활성 조사 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4와 도 5는 본 발명의 실험예에서 대식세포 식작용(phagocytosis) 활성도 조사 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6 내지 8은 본 발명의 실험예에서 대식세포 활성화 관련 cytokines 발현 대한 영향 조사 결과를 나타낸 사진이다.
본 발명은 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물과 그 제조방법에 관한 것으로, 항암면역증진 활성이 우수한 장생도라지와 여러 생약들을 혼합하여 항암면역증진 활성을 강화시킨다는데 특징이 있다. 본 발명에 따른 항암면역증진 활성 강화 장생도라지 복합조성물은, 장생도라지 26.85~40.27중량%, 와송 6.44~9.66중량%, 유근피 6.44~9.66중량%, 원육 4.30~6.44중량%, 황정 4.30~6.44중량%, 녹각 3.22~4.84중량%, 숙지황 2.02~3.02중량%, 산약 2.02~3.02중량%, 인삼 2.02~3.02중량%, 당귀 2.02~3.02중량%, 황기 2.02~3.02중량%, 황백 2.02~3.02중량%, 진피 2.02~3.02중량%, 백복령 2.02~3.02중량%, 두충 1.61~2.41중량%, 감초 1.61~2.41중량%, 백출 1.61~2.41중량%, 택사 1.61~2.41중량%, 산수유 1.61~2.41중량%, 파고지 1.61~2.41중량%, 오미자 1.61~2.41중량%, 솔잎 1.07~1.61중량%를 포함하여 구성된다. 바람직하게는 장생도라지 33.56중량%, 와송 8.05중량%, 유근피 8.05중량%, 원육 5.37중량%, 황정 5.37중량%, 녹각 4.03중량%, 숙지황 2.52중량%, 산약 2.52중량%, 인삼 2.52중량%, 당귀 2.52중량%, 황기 2.52중량%, 황백 2.52중량%, 진피 2.52중량%, 백복령 2.52중량%, 두충 2.01중량%, 감초 2.01중량%, 백출 2.01중량%, 택사 2.01중량%, 산수유 2.01중량%, 파고지 2.01중량%, 오미자 2.01중량%, 솔잎 1.34중량%로 조성된다. 이러한 조성범위는 항암면역증진 활성을 극대화하기 위한 범위로서 아래에서 설명하는 각 원료들의 작용효과를 감안한 결과이다.
본 발명은 항암면역증진 효과가 이미 입증된 장생도라지를 군약으로 삼고, 와송과 유근피, 그리고 원육과, 황정, 녹각 등을 신약으로 삼고, 숙지황, 산약, 인삼, 당귀, 황기, 황백, 진피, 백복령을 좌약으로 삼고, 두충, 감초, 백출, 택사, 산수유, 파고지, 오미자, 솔잎 등을 사약으로 삼아서 항암면역증진 활성을 강화시킨 것이다. 한의학에서 군신좌사의 개념은 아주 중요하며 약물 처방이 근간이 되는 기본 원리다. 모든 질환에 한약재를 처방함에 있어서, 수많은 약재들의 약성을 고려하여 군신좌사의 개념으로 약재 상호 간의 상승, 억제 효과의 밸런스를 맞추어 주는 것이 중요하다. 항암면역 활성이 입증되어 있는 장생도라지와, 근래의 연구에 의해 밝혀진 항암면역 활성이 특별히 높은 와송, 솔잎 등의 생약을 가미하여 임상에서 적용해 본 결과 상당히 유의성 있는 결과들이 확인되었으며, 또한 아래 [실시예]와 [실험예]에서와 같이 관련 실험을 통해서도 유의성 있는 결과를 나타냈다. 이러한 결과에 따라 본 발명을 완성하고 출원하기에 이른 것이다.
또한 본 발명은 위와 같은 장생도라지 복합조성물을 활용가능한 건강기능소재로 제조하는 방법으로 도 1과 같은 공정을 제안한다. 구체적으로 장생도라지 복합조성물 제조방법은, 장생도라지 복합조성물 원료를 열수추출한 후 10±0.3 Brix 농도로 만드는 제1단계; 여과한 후 살균하는 제2단계;를 포함하여 이루어진다. 나아가 제2단계 후에 동결건조한 후 분쇄하여 포장용기에 포장하는 제3단계;를 더 포함하여 이루어질 수도 있다.
제1단계는 열수추출 단계이다. 열수추출은 각각의 원료를 따로 수행하는 것도 가능하나 경제적인 추출을 위해 모든 재료를 한꺼번에 수행하는 것도 무방하다. 추출포에 원료를 넣어 열수추출하며, 추출포는 짜서 탈수시키고 그 탈수액은 추출액과 혼합한다. 열수추출액은 10±0.3Brix 농도로 만드는 것이 바람직한데 이는 후속공정을 효율적으로 진행하기 위해 고려한 결과이다.
제2단계는 살균 단계이다. 살균 전에 여과과정을 거쳐 이물질을 제거한다. 살균방법으로는 가열살균법을 바람직하게 채택할 수 있으며, 다만 이 경우에는 안전성을 위해 스테인리스 살균용기에 포장하여 살균한다. 이렇게 살균된 장생도라지 복합조성물은 액상 상태로 바로 포장용기에 포장하여 제품화할 수 있다. 이렇게 포장된 액상 상태의 장생도라지 복합조성물은 그대로 음용하거나 다른 식품 등과 함께 섭취할 수 있다.
제3단계는 동결건조 및 포장 단계이다. 동결건조 후 분쇄하여 분말화하며, 이어 팩, 병 등의 포장용기에 포장하여 제품화할 수 있다. 이렇게 포장된 분말 상태의 장생도라지 복합조성물은 그대로 섭취하거나 물에 타서 음용할 수 있으며, 또한 다른 식품 등과 함께 섭취할 수 있다.
이하에서는 실시예와 실험예에 의거하여 본 발명을 살펴본다. 다만, 아래의 실시예와 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이로써 한정되는 것은 아니다.
[실시예] 장생도라지 복합조성물 제조
1. 장생도라지 복합조성물 원료 조성
아래 [표 1]과 같은 조성으로 항암면역증진 활성이 알려진 재료들을 조합하여 장생도라지 복합조성물의 원료를 조성하였다.
장생도라지 복합조성물의 원료 조성
구분 원료 조성
JSD 장생도라지 100 중량%
IM-01 장생도라지 20.0중량%, 당귀 15.0중량%, 감초 13.0중량%, 두충 8.0중량%, 백출 7.0중량%, 황기 7.0중량%, 결명자 5.8중량%, 계피 5.8중량%, 구기자 5.8중량%, 독활 5.8중량%, 인진 5.0중량%, 숙지황 1.8중량%
IM-02 장생도라지 15.7중량%, 감초 15.6중량%, 대추 15.6중량%, 건강 15.6중량%, 복분자 15.6중량%, 계피 7.8중량%, 진피 4.7중량%, 결명자 4.7중량%, 솔잎 4.7중량%
IM-03 장생도라지 33.56중량%, 와송 8.05중량%, 유근피 8.05중량%, 원육 5.37중량%, 황정 5.37중량%, 녹각 4.03중량%, 숙지황 2.52중량%, 산약 2.52중량%, 인삼 2.52중량%, 당귀 2.52중량%, 황기 2.52중량%, 황백 2.52중량%, 진피 2.52중량%, 백복령 2.52중량%, 두충 2.01중량%, 감초 2.01중량%, 백출 2.01중량%, 택사 2.01중량%, 산수유 2.01중량%, 파고지 2.01중량%, 오미자 2.01중량%, 솔잎 1.34중량%
IM-04 장생도라지 40중량%, 당귀 15중량%, 겨우살이 15중량%, 구아바잎 15중량%, 강황 15중량%
IM-05 장생도라지 17.84중량%, 감초 12.91중량%, 표고버섯 7.63중량%, 백출 7.04중량%, 결명자 5.87중량%, 계피 5.87중량%, 구기자 5.87중량%, 독활 5.87중량%, 겨우살이 5.87중량%, 구아바잎 5.87중량%, 황기 4.69중량%, 두충 4.69중량%, 당귀 3.52중량%, 황칠잎 2.94중량%, 숙지황 1.76중량%, 강황 1.17중량%, 인진 0.59중량%,
IM-06 장생도라지 25.0중량%, 감초 12.4중량%, 황기 12.4중량%, 계피 10.5중량%, 두충 9.5중량%, 백출 7.0중량%, 독활 5.8중량%, 결명자 5.8중량%, 구기자 5.8중량%, 당귀 3.4중량%, 숙지황 1.8중량%, 인진 0.6중량%
2. 복합조성물 제조
[표 1]의 복합조성물은 도 2와 같은 제조공정을 거쳐 분말형태의 건강기능소재로 제조하였다.
[ 실험예 ] 장생도라지 복합조성물의 항암면역증진 활성 실험
1. 비특이적 면역반응인 자연살해 ( NK ) 세포 활성 조사
(1)실험개요
자연 살해 세포의 활성은 종양 세포를 죽이는 숙주 방어기능의 1차적 방어망이며, 여러 바이러스 및 세균에 의한 감염의 면역과 관련이 있다. 마우스에서 비장을 적출하여 파쇄한 세포 혼탁액을 300×g에서 5분간 원심분리한 후 적혈구 용혈액으로 적혈구를 제거하여 비장세포를 분리하였다. 비장세포에 각 시료의 50μg/ml 농도로 24시간 처리하고, 비장세포:YAC-1세포(effector-to-target)의 비가 50:1, 100:1이 되도록 Calcein-AM으로 형광염색된 YAC-1 세포를 넣은 후 4시간 동안 배양하였다. 양성 대조군으로 LPS를 사용하였다.
(2)실험결과
실험결과는 도 3과 같다. 보는 바와 같이 장생도라지 복합조성물 IM-01을 제외한 모든 시료군에서 유의적으로 자연살해(NK)세포의 활성이 증가하는 것이 확인되었으며, 특히 장생도라지 복합조성물 IM-01이 가장 높은 활성을 나타냈다.
2. 대식세포 식작용 ( phagocytosis ) 활성도 조사
(1)실험개요
선천적인 면역체계로는 항원의 침입을 차단하는 피부, 점액조직, 산성의 위산, 혈액에 존재하는 보체(complement) 등이 있다. 세포로는 식균 작용을 담당하는 대식세포(macrophage)가 대표적이며, 이들 세포로부터 TNF-α와 같은 사이토카인을 생성하거나 기능을 활성화시키는 기작을 통해 생체 내 암세포에 대한 면역력을 증강시키게 된다. 이러한 대식세포의 활성도를 측정하기 위하여 대식세포주인 RAW264.7에 각 시료의 50μg/ml 농도로 처리한 후, FITC로 표식된 E. coli particle과 배양한 다음, 대식세포의 식작용 활성을 대식세포 내부에 포집된 FITC-E. coli particle의 양을 형광을 이용하여 측정 측정하였다. 양성 대조군으로 LPS를 사용하였다.
(2)실험결과
실험결과는 도 4와 같이 나타냈다. 보는 바와 같이 장생도라지 추출물(JSD) 및 복합조성물(IM-02, 03, 04)에서 유의적으로 대식세포의 식작용이 증가하였다.
(3)항암면역증진 활성 후보 소재 선정 및 대식세포에 대한 농도별 영향 실험
도 4과 같은 결과를 바탕으로 항암면역증진이 우수할 것으로 판단되는 장생도라지 추출물(JSD) 및 장생도라지 복합조성물(IM-02, 03, 04, 05)을 선정하여 대식세포에 대한 농도별 영향을 추가적으로 조사하였으며, 그 결과 도 5와 같이 나타냈다. 도 5에서 보는 바와 같이 대체적으로 농도 의존적인 대식세포의 식작용의 증가가 확인되었으며, 특히 IM03의 경우 100μg/ml 이상의 농도에서 가장 높은 활성을 나타냈다.
3. 대식세포 활성화 관련 cytokines 발현 대한 영향 조사
(1)실험개요
선천적 면역계의 주요한 세포인 대식세포(macrophage)에 작용하여 이들 세포로부터 TNF-α(tumor necrosis factor-α)와 같은 사이토카인을 생성하거나 기능을 활성화시키는 기작을 통해 생체 내 암세포에 대한 면역력을 증강시키게 된다. 대식세포의 활성화와 관련한 각종 cytokines의 유전자 발현에 대한 영향을 대식세포주인 RAW264.7 세포에 각 시료의 50μg/ml의 농도를 처리하여 세포로부터 total RNA를 분리 및 cDNA를 제조하여 대식세포의 활성화와 관련되는 대표적인 cytokines인 TNF-α, IL-6, IL-1β의 발현을 real-time PCR을 이용하여 측정하였다.
(2)실험결과
실험결과 도 6과 같이 나타냈다. 도 6에서와 같이 TNF-α, IL-6, IL-1β의 발현이 모든 시료에서 유의적인 증가를 나타내었다.
(3)대식세포 활성화 관련 cytokines 발현에 대한 농도별 영향
도 6의 결과를 바탕으로 장생도라지 복합조성물(IM01-06)의 대식세포 활성화 관련 cytokines 발현에 대한 농도별 영향을 추가적으로 조사하였으며, 그 결과 도 7 및 도 8과 같이 나타냈다. 도 7에서 보는 바와 같이 모든 복합조성물 시료에서 농도 의존으로 TNF-α, IL-6, IL-1β의 발현이 증가하였다. 도 8은 장생도라지 복합조성물 IM-03의 대식세포 활성화 관련 cytokines 발현에 대한 농도별 영향을 살펴본 결과인데, 보는 바와 같이 농도에 따라 TNF-α, IL-6, IL-1β의 발현이 증가하였다.

Claims (4)

  1. 장생도라지 26.85~40.27중량%, 와송 6.44~9.66중량%, 유근피 6.44~9.66중량%, 원육 4.30~6.44중량%, 황정 4.30~6.44중량%, 녹각 3.22~4.84중량%, 숙지황 2.02~3.02중량%, 산약 2.02~3.02중량%, 인삼 2.02~3.02중량%, 당귀 2.02~3.02중량%, 황기 2.02~3.02중량%, 황백 2.02~3.02중량%, 진피 2.02~3.02중량%, 백복령 2.02~3.02중량%, 두충 1.61~2.41중량%, 감초 1.61~2.41중량%, 백출 1.61~2.41중량%, 택사 1.61~2.41중량%, 산수유 1.61~2.41중량%, 파고지 1.61~2.41중량%, 오미자 1.61~2.41중량%, 솔잎 1.07~1.61중량%를 포함하여 조성되는 것을 특징으로 하는 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물.
  2. 제1항에서,
    장생도라지 33.56중량%, 와송 8.05중량%, 유근피 8.05중량%, 원육 5.37중량%, 황정 5.37중량%, 녹각 4.03중량%, 숙지황 2.52중량%, 산약 2.52중량%, 인삼 2.52중량%, 당귀 2.52중량%, 황기 2.52중량%, 황백 2.52중량%, 진피 2.52중량%, 백복령 2.52중량%, 두충 2.01중량%, 감초 2.01중량%, 백출 2.01중량%, 택사 2.01중량%, 산수유 2.01중량%, 파고지 2.01중량%, 오미자 2.01중량%, 솔잎 1.34중량%로 조성되는 것을 특징으로 하는 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물.
  3. 제1항 또는 제2항의 장생도라지 복합조성물을 제조하는 방법으로,
    제1항 또는 제2항에 따른 조성으로 장생도라지 복합조성물 원료를 열수추출한 후 10±0.3Brix 농도로 만드는 제1단계;
    여과한 후 살균하는 제2단계;
    를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 제조방법.
  4. 제3항에서,
    제2단계 후에, 동결건조한 후 분쇄하여 포장용기에 포장하는 제3단계;
    를 더 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 항암면역증진 활성이 강화된 장생도라지 복합조성물 제조방법.
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