KR101757790B1 - Composition of skin external application containing Panax ginseng var. Hwangsookjong extracts - Google Patents
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Abstract
본 발명은 황숙종 인삼 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인삼속(Panax) 고려인삼종(ginseng)의 변종인 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부에서 콜라겐 생성을 촉진하고, MMP-1을 억제하면서, 동시에 항산화 및 DNA 손상보호 효과를 통해 피부 노화 억제 및 주름 개선 효과를 갖는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 멜라닌 생성을 억제하고 자외선에 의한 색소침착을 개선하는 효과를 통하여 피부 미백 효과를 나타내며, 피부각질형성세포의 분화를 정상유도하고 유지시킴으로써 피부 건조증상과 아토피증상을 개선시킬 수 있고, 피지분비를 조절하며 항염증 효과를 통한 여드름 및 피부 트러블 개선에도 효과적이다.The present invention relates to a composition for external application for skin containing ginseng extract, and more particularly, to a composition for external application for skin containing ginseng extract of Hwang Sookjong, which comprises a ginseng extract of Hwangsinjong ginseng, a variant of ginseng, The present invention relates to a composition for external application for skin having an effect of inhibiting MMP-1 and simultaneously inhibiting skin aging and improving wrinkles through antioxidative and DNA damage protection effects. In addition, the composition for external application for skin according to the present invention exhibits skin whitening effect by inhibiting melanin formation and improving pigmentation caused by ultraviolet rays, and inducing and maintaining the differentiation of dermal keratinocytes to maintain skin dryness symptoms and atopic symptoms It is also effective in controlling sebum secretion and improving acne and skin troubles through anti-inflammatory effect.
Description
본 발명은 황숙종 인삼 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인삼속(Panax) 고려인삼종(ginseng)의 변종인 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부에서 콜라겐 생성을 촉진하고, MMP-1을 억제하면서, 동시에 항산화 및 DNA 손상보호 효과를 통해 피부 노화 억제 및 주름 개선 효과를 갖는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 멜라닌 생성을 억제하고 자외선에 의한 색소침착을 개선하는 효과를 통하여 피부 미백 효과를 나타내며, 피부각질형성세포의 분화를 정상유도하고 유지시킴으로써 피부 건조증상과 아토피증상을 개선시킬 수 있고, 피지분비를 조절하며 항염증 효과를 통한 여드름 및 피부 트러블 개선에도 효과적이다.
The present invention relates to a composition for external application for skin containing ginseng extract, and more particularly, to a composition for external application for skin containing ginseng extract of Hwang Sookjong, which comprises a ginseng extract of Hwangsinjong ginseng, a variant of ginseng, The present invention relates to a composition for external application for skin having an effect of inhibiting MMP-1 and simultaneously inhibiting skin aging and improving wrinkles through antioxidative and DNA damage protection effects. In addition, the composition for external application for skin according to the present invention exhibits skin whitening effect by inhibiting melanin formation and improving pigmentation caused by ultraviolet rays, and inducing and maintaining the differentiation of dermal keratinocytes to maintain skin dryness symptoms and atopic symptoms It is also effective in controlling sebum secretion and improving acne and skin troubles through anti-inflammatory effect.
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오가피과 인삼 속에 속하는 식물로서 한국, 중국 및 일본 등지에서 2,000여년 전부터 사용되어 온 생약이며, 경험적으로 질병을 예방하고 수명을 연장시킬 목적으로 사용되어 왔다. 지금까지 알려진 인삼의 효능 및 효과는 중추신경계에 대한 작용, 항발암 작용, 항암활성, 면역기능 조절작용, 항당뇨 작용, 간기능 항진효능, 심혈관 장해개선, 항동맥경화 작용, 혈압조절 작용, 갱년기 장애 개선, 골다공증에 미치는 효과, 항스트레스 및 항피로 작용, 항산화 활성 및 노화억제 효능 등이 있다(최신고려인삼 '성분 및 효능편', 한국인삼연초연구원, 56-112, 1996).Ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) is a herb that belongs to the genus Ogawa and Ginseng. It has been used in Korea, China and Japan for over 2,000 years and has been used empirically to prevent disease and prolong the life span. The efficacy and effect of ginseng which has been known so far can be determined by the action of the central nervous system, the anticarcinogenic action, the anticancer activity, the immune function regulating action, the anti-diabetic action, the hyperfunction of liver function, the improvement of cardiovascular disorder, (Korean Ginseng & Tobacco Research Institute, 56-112, 1996). In addition, it has been reported that the antioxidant activity and antioxidant activity of osteoporosis are improved.
인삼의 대표적 생리활성 성분인 진세노사이드(Ginsenoside)는 인삼의 지상 및 지하부에 고르게 분포되어 있으며, 특히 인삼 근(뿌리), 인삼엽 및 인삼 열매 등 부위에 따라 진세노사이드 함량뿐만 아니라 조성도 다른 것으로 알려져 있다(Attele AS et al, Biochem Pharmacol, 58; 1685-1693, 1999). Ginsenoside, which is a representative physiologically active ingredient of ginseng, is distributed evenly on the ground and underground of ginseng. Especially, ginsenoside (root), ginseng leaf and ginseng berries have not only ginsenoside content but also composition (Attele AS et al, Biochem Pharmacol, 58: 1685-1693, 1999).
인삼속(Panax) 고려인삼종(ginseng)에는 4가지 변종인 자경종(紫莖種, var. jakeungjong), 황숙종(黃熟種, var. hwangsookjong), 청경종(靑莖種, var. chungkeangjong) 및 등황숙종(橙黃熟種, var. deunghwangsookjong)이 있다. The ginseng of Panax ginseng contains four varieties of japonica var. Jakeungjong, hwangsookjong, var. Hongsookjong, var. Chungkeangjong, There is an equinox (黄黄 熟 種, var. Deunghwangsookjong).
이 중 황숙종은 열매 생성 시기에 노란색 열매가 생기는 것이 특징이며, 1926년과 1928년 경기도 장단군 인삼포에서 처음 발견된 변이종으로 일부 농가에서 재배하고 있다.Hwang sookjong is characterized by yellow fruit at the time of fruit production, and it is firstly found in Ginseng, Jangdan County, Gyeonggi Province in 1926 and 1928, and is cultivated in some farms.
황숙종은 자경종에 비하여 내병성이 강하기 때문에 생존율이 높고 단위 면적 당 생존 본수가 많기 때문에 생산수량이 많다. 또한 홍삼 품질에서도 황숙종이 자경종에 비하여 천삼 등급이 높다고 한다(권우생 외, Korean J. Breed. 26(4) : 400-404 (1994)). 또한, 황숙종은 배수 불량지에서의 생존율 역시 다른 종에 비하여 높았다(이성우 외, Korean J. Crop Sci., 53(4): 401-406 (2008)).Hwang sookjong has a higher survival rate and a higher survival rate per unit area because it is more resistant to infectious diseases than its own. In addition, the quality of red ginseng is higher than that of the wild species. (Kwon, Y. et al., Korean J. Breed. 26 (4): 400-404 (1994)). The survival rate of Hwangsookjong was higher than that of other species (Lee, Sungwoo et al., Korean J. Crop Sci., 53 (4): 401-406 (2008)).
황숙종은 인삼 생장이 적절한 20℃ 이하 온도에서 자경종과 청경종에 비하여 광합성량이 월등히 높아 다른 종에 비하여 우수한 성장력을 보여 주었다(천성룡 외, Korean J. Ginseng Sci., Vol. 13, no.2, 153-157 (1989)).Hwang, S., and Hwang, S., Ginseng Sci., Vol. 13, no. 2, p. 153-157 (1989)).
최근 천연 화장품에 대한 소비자의 관심이 증대되고 동시에 한방 소재를 활용하는 많은 화장품들이 출시되면서 인삼도 화장품의 중요한 피부 효능을 가진 식물소재로 연구되고 있다.Recently, consumers' interest in natural cosmetics has been increasing, and at the same time, many cosmetics utilizing herbal materials have been released, and ginseng has been studied as a plant material having important skin effect of cosmetics.
그러나, 현재까지 알려진 피부에 안전한 천연 소재로서 피지 분비의 근본적인 원인에 접근하여 감소시키고, 동시에 염증작용을 완화해 주는 원료는 많지 않은 실정이다.
However, there are not many raw materials which are known as skin-safe natural materials to date, which approach and reduce the fundamental cause of sebum secretion and alleviate the inflammatory action.
이에, 본 발명자들은 피부에 안전하면서 항노화 등의 다양한 피부 개선 효능을 갖는 물질을 찾고자 노력한 결과, 고려인삼의 변종인 황숙종 추출물이 일반적인 자경종 인삼과는 다른 조성으로 인해 피부 개선 효능이 우수함을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, the present inventors have found that the Hwang sookjong extract, which is a variant of Korean ginseng, is superior in skin-improving effect due to a composition different from that of common ginseng ginseng as a result of efforts to find a skin-safe substance having various skin- Thereby completing the present invention.
따라서, 본 발명의 목적은 항산화 효과, 콜라겐 생성 촉진 또는 MMP-1 억제 효과를 갖는 피부 노화 억제 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition for external application for skin for preventing skin aging or improving wrinkles, which has an antioxidative effect, a collagen production promotion effect or an MMP-1 inhibitory effect.
또한 본 발명의 목적은 멜라닌 생성 억제 및 색소침착 개선 효과를 갖는 피부 미백용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.It is also an object of the present invention to provide a composition for external application for skin whitening which has an effect of inhibiting melanin formation and improving pigmentation.
또 본 발명의 목적은 표피 각질형성세포의 정상적인 분화를 유도하고 유지시키는 피부 보습 및 아토피증상 개선 효과를 갖는 피부 보습용 또는 아토피증상 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a composition for external application for skin moisturizing or atopic symptom improvement which has skin moisturizing effect and atopic symptom improvement effect inducing and maintaining normal differentiation of epidermal keratinocytes.
또한 본 발명의 목적은 피지 조절 또는 항염증 효과, 즉 염증인자의 생성을 억제하여 여드름을 비롯한 피부 트러블을 개선시킬 수 있는 항염증용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
It is also an object of the present invention to provide an anti-inflammatory external preparation for skin which can suppress sebum control or anti-inflammatory effect, that is, the production of an inflammatory factor, thereby improving skin troubles including acne.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
In order to attain the above object, the present invention provides a composition for external application for skin, which comprises Hwang Sookjong ginseng extract as an active ingredient.
본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 고려인삼의 변종 중에서 자경종과 차별적 조성을 갖는 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부 노화 억제, 주름 개선, 미백, 보습 및 아토피증상 개선, 여드름 및 피부 트러블 개선 효과가 우수하였다.
The composition for external application for skin according to the present invention contains the ginseng extract having different composition from the ginseng species as an active ingredient among the varieties of Korean ginseng, thereby suppressing skin aging, improving wrinkles, improving whitening, moisturizing and atopic symptoms, improving acne and skin troubles .
본 발명은 황숙종 인삼 추출물을 피부 외용제 조성물의 형태에 따라 조성물 총 중량에 대하여 0.001∼50 중량%로 혼합하여 제조한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for external application for skin, which is prepared by mixing Hwang sookjong ginseng extract in an amount of 0.001 to 50 wt% based on the total weight of the composition according to the form of the composition for external application for skin.
본 발명에서 사용하는 황숙종 인삼 추출물은 황숙종 인삼의 뿌리, 또는 종자를 분리하여 제거한 열매의 과육과 과피를 일광건조 또는 열풍건조한 후 물 또는 에탄올로 추출하여 제조한 것이다. The ginseng extract used in the present invention is prepared by extracting the flesh and the skin of the fruit which has been separated or removed from roots or seeds of the ginseng root of Ginseng root with sunlight or hot air, followed by extraction with water or ethanol.
본 발명에서는 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 항산화 효과, 콜라겐 생성 촉진 또는 MMP-1 억제 효과를 갖는 피부 노화 억제 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for external application for skin inhibition or wrinkle suppressing skin having antioxidative effect, collagen production promotion or MMP-1 inhibitory effect by containing Hwang sookjong ginseng extract as an active ingredient.
또한 본 발명에서는 상기 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 멜라닌 생성 억제 또는 색소침착 개선 효과를 갖는 피부 미백용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for external skin application for skin whitening which has an effect of inhibiting melanin formation or improving pigmentation by containing the above-mentioned ginseng extract as an active ingredient.
또 본 발명에서는 상기 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 표피 각질형성세포의 정상적인 분화를 유도하고 유지시키는 피부 보습 및 아토피증상 개선 효과를 갖는 피부 보습용 또는 아토피증상 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for external application for skin moisturizing or atopic symptom improvement, which has skin moisturizing effect and atopic symptom improvement effect, which induces and maintains normal differentiation of epidermal keratinocytes by containing the above-mentioned ginseng extract as an active ingredient.
또한 본 발명에서는 상기 황숙종 인삼 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피지조절 또는 항염증 효과, 즉 염증인자의 생성을 억제하여 여드름을 비롯한 피부 트러블을 개선시킬 수 있는 항염증용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an anti-inflammatory skin topical composition for anti-inflammation which can improve sebum control or anti-inflammatory effect, that is, the production of an inflammatory factor, thereby improving skin troubles including acne by containing the ginseng extract as an active ingredient.
본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용하는 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 더 함유할 수 있다. 이는 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제조될 수 있다. 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.The composition for external application for skin according to the present invention may further contain a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base conventionally used in the art. It may be any form suitable for topical application according to conventional methods in the art, for example, as a solution, a gel, a solid, a paste anhydrous product, an emulsion obtained by dispersing an oil phase in water phase, a suspension, a microemulsion, a microcapsule, Or in the form of ionic (liposomes) and non-ionic follicular dispersants, or in the form of creams, skins, lotions, powders, ointments, sprays or conical sticks. The composition for external application for skin according to the present invention may also be prepared in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 더 함유할 수 있으며, 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.The composition for external application for skin according to the present invention may further comprise at least one selected from the group consisting of fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening agents, gelling agents, softening agents, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, Any other ingredient commonly used in cosmetics, lipid vesicles or cosmetics may be added to the composition, including, but not limited to, nonionic emulsifiers, fillers, sequestering agents, chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, , And the adjuvants may be introduced in amounts commonly used in the cosmetics or dermatology fields.
또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 또는 바디에센스 등의 화장료로 제형화될 수 있다.
Further, the composition for external application for skin according to the present invention is not particularly limited in its formulation, and examples thereof include softening agents, convergent lotion, nutritional lotion, nutritional cream, massage cream, essence, eye cream, eye essence, cleansing cream, Foam, cleansing water, pack, powder, body lotion, body cream, body oil or body essence.
이하, 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예 및 시험예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포함된다.
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples and test examples. It is to be understood that the scope of the present invention is not limited to these embodiments and test examples, and that variations, substitutions, and insertions conventionally known in the art And this is also included in the scope of the present invention.
[실시예 1] 황숙종 인삼 추출물 제조[Example 1] Preparation of Hwang sookjong ginseng extract
1) 황숙종 인삼 뿌리 전처리: 황숙종 생(生)인삼(전라북도 진안군 마령면)을 수확하여 토사(土砂)를 제거하고 뿌리를 일광건조 또는 열풍건조를 통하여 황숙종 인삼 뿌리 건조 원료를 제조하였다.1) Hwang Sook Jong Ginseng Root Pretreatment: Hwang Sook Jong raw ginseng was harvested to remove soil, and roots were dried with sunshine or hot air to produce dried ginseng roots.
2) 황숙종 인삼 뿌리 추출물 제조: 황숙종 인삼 뿌리 건조물 1 kg에 물 3 L를 가하여 환류 추출한 다음 여과한 후 40∼45℃에서 감압농축하여 그 추출물 300 g을 얻었다.2) Preparation of Hwang sookjong ginseng root extract: To 1 kg of Hwang sookjong ginseng root dried product, 3 L of water was added, and the mixture was refluxed. After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure at 40~45 ℃ to obtain 300 g of the extract.
3) 황숙종 인삼 열매 전처리: 황숙종 생(生)인삼 열매를 수확하여 종자를 분리하여 제거한 후 열매의 과육과 과피를 일광건조 또는 열풍건조를 통하여 황숙종 인삼 열매 건조원료를 제조하였다.3) Hwang Sook Jong Ginseng Fruit Pretreatment: Hwang Sook Jong Fresh ginseng fruit was harvested and seeds were separated and removed. Then, the flesh and perilla of the fruit were dried by sunlight or hot air drying to prepare dry matter of ginseng root.
4) 황숙종 인삼 열매 추출물 제조: 황숙종 인삼 열매 건조물 1 kg에 물 3 L를 가하여 환류 추출한 다음 여과한 후 40∼45℃에서 감압농축하여 황숙종 인삼 열매 추출물 300 g을 얻었다.
4) Preparation of Hwang Sookjong Ginseng Fruit Extract: Hwang Sookjong 3 l of water was added to 1 kg of dried ginseng fruit, and the mixture was refluxed and filtered. The mixture was concentrated under reduced pressure at 40-45 ° C to obtain 300 g of Hwang Sookjong ginseng fruit extract.
[비교예 1] 자경종 인삼 추출물 제조[Comparative Example 1] Manufacture of ginseng extract
상기 실시예 1에서 황숙종 인삼 대신에 자경종 인삼(전라북도 진안군 마령면)을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 자경종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 제조하였다.
In the same manner as in Example 1, except for using Ganoderma ginseng (Gamyeong-myeon, Jinan-gun, Jeollabuk-do) instead of Ganoderma ginseng in Example 1, root ginseng root and fruit extract were prepared.
[시험예 1] 황숙종과 자경종 인삼 추출물의 성분비교[Test Example 1] Comparison of components of Hwang sookjong and ginseng extract
<황숙종과 자경종 인삼 뿌리 및 열매의 진세노사이드(인삼사포닌) 성분분석><Analysis of Ginsenosides (Ginseng Saponin) Components of Hwangsookjong and Ginseng Root and Fruits of Ginseng>
실시예 1 및 비교예 1에서 각각 제조한 추출물에 에테르(ether)를 처리하여 지용성 성분을 제거한 후 부탄올(BuOH)로 조사포닌을 추출, 농축하여 HPLC를 통한 진세노사이드 성분 분석을 실시하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.The extracts prepared in Example 1 and Comparative Example 1 were treated with ether to remove fat-soluble components, crude saponin was extracted with butanol (BuOH), concentrated, and analyzed for ginsenoside components by HPLC. The results are shown in Table 1 below.
(건조중량)Crude saponin content
(Dry weight)
상기 표 1의 결과에서, 실시예 1에서 제조한 황숙종 인삼 뿌리와 열매 추출물은 조사포닌 함량이 비교예 1에서 제조한 자경종 인삼 뿌리와 열매 추출물의 약 1 내지 1.1배로 유의적인 차이가 없는 것을 확인하였다.
From the results shown in the above Table 1, it was confirmed that the crude saponin content of the Hwang SJ type ginseng roots and the Fruit extracts prepared in Example 1 was about 1 to 1.1 times that of the root ginseng roots and the fruit extract prepared in Comparative Example 1, Respectively.
[시험예 2] 피부 노화 억제 및 주름 개선 효과[Test Example 2] Effect of suppressing skin aging and improving wrinkles
1) 황숙종 인삼 뿌리와 열매 추출물의 항산화 효과1) Antioxidative Effect of Ginseng Root and Fruit Extract
자외선(UV) 조사에 의하여 세포에서 발생하는 활성산소(ROS: Reactive oxygen species)를 제거하는 능력을 비교하는 실험을 통하여 항산화 효과를 조사하였다. 양성대조군으로서 일반적으로 항산화 효과를 비교하는데 사용하는 트롤록스(trolox)를 사용하였다. 또한 시험물질을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다.The antioxidant effect was investigated by comparing the ability to remove reactive oxygen species (ROS) from cells by ultraviolet (UV) irradiation. As a positive control group, trolox, which is generally used to compare antioxidative effects, was used. In addition, the test group was not used as a control group.
사람의 표피 조직에서 분리한 인간 HaCaT 각질형성세포(keratinocyte)를 24웰 플레이트의 각 웰에 5×104개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 16시간 후, 각 시험물질을 10 ㎍/ml로 처리하였다. 2시간 뒤에 배양액을 제거한 다음, 각 웰에 100 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 각질형성세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model: F15T8, UV B 15 W, Sankyo Dennki社, Japan)를 이용하여 자외선 30 mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액 200 ㎕를 첨가하였다. 여기에 시험물질을 다시 동일하게 처리하고 3시간 후 자외선 자극에 의해 증가한 활성 산소종의 양을 정량하였다. ROS의 양은 ROS에 의해 산화되는 DCF-DA(dichlorofluorescin diacetate)의 형광을 측정하는 Tan의 방법을 참고하여 정량하였으며(Tan et al., 1998, J. Cell Biol. Vol. 141, pp1423-1432), ROS 생성 억제율을 하기 수학식 1을 이용하여 산출한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.Human HaCaT keratinocytes isolated from human epidermal tissue were added to each well of a 24 well plate in an amount of 5 x 10 4 and adhered for 24 hours. After 16 hours, each test substance was treated with 10 [mu] g / ml. Two hours later, the culture medium was removed, and 100 占 퐇 of PBS was added to each well. The keratinocytes were irradiated with ultraviolet rays of 30 mJ / cm 2 using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UV B 15 W, Sankyo Dennki, Japan), and PBS was removed. 200 [mu] l was added. The same test material was treated again and the amount of active oxygen species increased by ultraviolet stimulation after 3 hours was quantified. The amount of ROS was determined by referring to Tan's method of measuring the fluorescence of DCF-DA (dichlorofluorescin diacetate) oxidized by ROS (Tan et al., 1998, J. Cell Biol. Vol. 141, pp1423-1432) The inhibition rate of ROS production was calculated using the following equation (1).
상기 표 2의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리와 열매 추출물은 인간 HaCaT 각질형성세포 단층 배양 시스템(human HaCaT keratinocytes monolayer culture system)에서 비교예 1에 비하여 UV에 의해 생성된 활성 산소를 유의적으로 소거하는 것을 확인하였다. 이는 항산화 물질의 활성지표로 사용되는 트롤록스와 유사한 정도의 우수한 활성이었다. 즉, 본 발명의 실시예 1에 의한 황숙종 인삼 뿌리와 열매 추출물은 피부 노화의 원인이 되는 활성 산소를 유의적으로 소거함으로써 주름 생성, 탄력 저하 및 색소 침착 등을 예방하는 효과를 가질 수 있음을 확인하였다.
From the results shown in the above Table 2, it can be seen that the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 according to the present invention are more effective than those of Comparative Example 1 in the human HaCaT keratinocytes monolayer culture system It was confirmed that oxygen was significantly erased. This activity was similar to that of trolox used as an activity index of antioxidants. In other words, it was confirmed that the extract of Root and Ginseng according to Example 1 of the present invention has the effect of preventing wrinkle formation, elasticity degradation and pigment deposition by significantly erasing active oxygen which is a cause of skin aging Respectively.
2) 단 세포 겔 전기영동(SCGE: Single cell gel electrophoresis, Comet assay)에 의한 DNA 산화적 손상에 대한 억제 활성2) Inhibitory activity against DNA oxidative damage by single cell gel electrophoresis (Comet assay)
사람의 정상 섬유아세포를 24시간 배양한 후 실시예 1 및 비교예 1의 추출물과 비타민 E를 각각 농도별로 처리하고, 12시간 후에 자극원인 H2O2(최종농도 10-3 M)를 처리한 다음 전기영동법으로 염색한 결과를 형광현미경으로 관찰하였다. 이때 이미지분석기(image analyzer)인 KOMET 3.1(Kinetic Imaging, England)를 사용하여 25개의 각 세포에서 DNA 절단 결과로 나타난 테일(tail)의 길이(㎛)를 분석하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.After human normal fibroblasts were cultured for 24 hours, the extracts of Example 1 and Comparative Example 1 and vitamin E were treated for each concentration, and 12 hours after stimulation, H 2 O 2 (final concentration: 10 -3 M) was treated The results of staining with the following electrophoresis were observed with a fluorescence microscope. At this time, the length (쨉 m) of the tail showing the result of DNA cleavage in each of 25 cells was analyzed using an image analyzer, KOMET 3.1 (Kinetic Imaging, England). The results are shown in Table 3 below .
H 2 O 2 + Example 1 Root
H 2 O 2 + Example 1 Fruit
H 2 O 2 + Comparative Example 1 Root
H 2 O 2 + Comparative Example 1 Fruit
상기 표 3의 결과에서, 세포 겔 전기영동에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 유의성 있는 산화적 DNA 손상억제 활성을 나타내었으며, 이로 인해 본 발명에 의한 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 히드록실 라디칼(.OH)에 의한 DNA 싱글 스트랜드 브레이크(single strand break)를 억제하는 DNA 산화적 손상억제제로서 작용함을 확인할 수 있었다.
From the results shown in Table 3, it was confirmed that the root-ginseng roots and the fruit extract of Example 1 by cell gel electrophoresis showed significant oxidative DNA damage-inhibiting activity, and thus, the root- And it acts as a DNA oxidative damage inhibitor that inhibits DNA single strand break by hydroxyl radical (.OH).
3) I형 프로콜라겐 분석(Type I Procollagen assay)3) Type I procollagen assay (Type I Procollagen assay)
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12웰 평판배양기에서 배양한 다음 실시예 1 및 비교예 1의 추출물을 각각 1 및 10 ppm씩 포함한 배지로 교체하였다. 배양 3일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 I형 프로콜라겐(type I procollagen)의 양을 정량하였으며, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 그 결과는 실시예 1의 시험물질을 포함하지 않는 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출하였다.The human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and then the medium containing the extracts of Example 1 and Comparative Example 1 was replaced with a medium containing 1 and 10 ppm, respectively. On the third day of culture, the cells were harvested and the amount of type I procollagen produced by the ELISA method was quantified. The results are shown in Table 4 below. The result was calculated by comparing the value obtained by measuring the value of the control group containing no test substance of Example 1 as 100. [
Example 1 Root
Example 1 Fruit
Comparative Example 1 [
Comparative Example 1 Fruit
상기 표 4의 결과에서, 인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템(Normal human fibroblast monolayer culture system)에서 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 대조군에 비하여 I형 프로콜라겐 생성을 뚜렷하게 촉진시키는 것을 확인하였다. 즉, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 인체 피부의 노화에 의해 발생하는 콜라겐 생성량 감소 현상을 억제시킴으로써 주름 개선 효과를 나타내었다.
From the results shown in the above Table 4, it was confirmed that the Hwang sookjong ginseng roots and the fruit extract of Example 1 significantly promoted the formation of type I procollagen in the normal human fibroblast monolayer culture system. That is, the ginseng roots and fruit extracts of Example 1 showed wrinkle-reducing effect by inhibiting the reduction of collagen production caused by aging of human skin.
4) MMP-1 발현 억제 분석4) MMP-1 expression inhibition assay
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12웰 평판배양기에서 배양한 다음 자외선 B를 40 mJ/㎠로 조사한 후, 각 시험물질을 하기 표 5에 기재된 양으로 포함하는 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 양을 정량하였다. 그 결과는 시험물질을 포함하지 않는 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 양성대조군은 RA(Retinoic acid; Sigma.)를 사용하였다.Human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , then irradiated with ultraviolet B at 40 mJ / cm 2, and then replaced with medium containing each test substance in the amount shown in Table 5 below. On the second day of culture, the cells were harvested and the amount of MMP-1 (matrix metalloproteinase-1) produced by ELISA was quantitated. The result was calculated by comparing the value measured with the ultraviolet control group containing no test substance as 100. RA (Retinoic acid; Sigma.) Was used as a positive control group.
상기 표 5의 결과에서, 인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템에서 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 UVB 40 mJ/㎠에 의해서 유도되는 MMP-1의 발현을 유의적으로 억제하였다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 내적 노화 또는 외적 환경요인에 의하여 발생하는 피부조직 분해효소인 MMP-1의 생합성을 저해하여 피부 노화를 억제하고 주름 개선에 효과가 있음을 확인하였다.
From the results shown in the above Table 5, in the human normal fibroblast monolayer culture system, the Hwang SJ Root and Fruit Extract of Example 1 according to the present invention significantly inhibited the expression of MMP-1 induced by UVB 40 mJ / cm 2 . Therefore, the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 according to the present invention inhibit the biosynthesis of MMP-1, a skin tissue degrading enzyme caused by internal aging or external environmental factors, thereby suppressing skin aging and improving wrinkles Respectively.
5) 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2(COX-2)의 생합성 억제 효과5) Effect of inhibiting biosynthesis of cyclooxygenase-2 (COX-2) by ultraviolet light
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12웰 평판배양기에서 배양한 다음 자외선 A를 15 J/㎠로 조사한 후, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물 및 비교예 1의 자경종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 각각 0.1, 1 및 10 ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) 웨스턴블랏(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2의 양을 정량하였다. 시험물질을 함유하지 않은 자외선 대조군을 100으로 하여 농도계(densitometer)로 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.Human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and then irradiated with ultraviolet ray A at 15 J / cm 2. Then, the roots and fruit extracts of the roots of the roots of Example 1 and the roots of the roots of the roots of ginseng and the fruit extract Were replaced with medium containing 0.1, 1 and 10 ppm, respectively. On the second day of culture, the cells were harvested and the amount of cyclooxygenase-2 produced was quantified using the Westren blot method. The results are shown in Table 6 below. The results are shown in Table 6 below. [Table 6] < EMI ID = 16.1 >
상기 표 6의 결과에서, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켰으며, 이를 통해 COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E2(PGE2)에 의한 피부 조직 분해를 방지하는 것을 확인할 수 있었다.
From the results shown in Table 6, the ginseng roots and fruit extracts of Example 1 decreased the biosynthesis of cyclooxygenase-2 by ultraviolet rays in a concentration-dependent manner, and prostaglandin E2 (PGE2), a product of COX- It was confirmed that it prevents the skin tissue degradation by
6) 자외선에 의한 종양괴사인자(TNF-α)의 생합성 억제 효과6) Inhibitory effect of UV-induced tumor necrosis factor (TNF-α) on biosynthesis
인체 각질형성세포를 105개의 농도로 12웰 평판배양기에서 배양한 다음 자외선 B를 30 mJ/㎠로 조사한 후, 실시예 1 및 비교예 1의 추출물을 각각 0.1, 1 및 10 ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 6∼24시간 후 세포를 수확해서(harvest) ELISA(Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 TNF-α의 양을 정량하였으며, 시험물질을 처리하지 않은 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출한 결과를 하기 표 7에 나타내었다.Human keratinocytes were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , then irradiated with ultraviolet B at 30 mJ / cm 2, and then replaced with media containing 0.1, 1 and 10 ppm of the extracts of Example 1 and Comparative Example 1, respectively Respectively. After 6-24 hours of culture, the cells were harvested and the amount of TNF- [alpha] produced was quantitated using ELISA (Pharmingen 555212) method. The amount of TNF- [alpha] The results are shown in Table 7 below.
상기 표 7의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 자외선에 의한 TNF-α의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴으로써 TNF-α의 생합성으로 인해 발생할 수 있는 피부 노화를 미연에 방지할 수 있음을 확인하였다.
From the results of Table 7, it can be seen that the roots and fruit extracts of the Ginseng root of Example 1 according to the present invention reduce the biosynthesis of TNF-α by ultraviolet rays in a concentration-dependent manner, thereby preventing skin aging caused by biosynthesis of TNF- And the like.
7) 인체 피부를 대상으로 한 피부 주름 개선 효과7) Skin wrinkle improvement effect on human skin
30∼50세의 안면주름이 있는 시험대상자 40명에 대하여, 하기 표 8에 기재된 조성을 갖는 제형예 1,2 및 비교제형예 1,2의 영양크림을 통상적인 방법으로 제조한 후 이들의 피부 주름 개선 효과를 비교 평가하였다(단위: 중량%).For the 40 subjects who had facial wrinkles of 30 to 50 years old, the nutritional creams of Formulation Examples 1 and 2 and Comparative Formulation Examples 1 and 2 having the compositions shown in the following Table 8 were prepared by a conventional method, (Unit: wt%).
(Estasan: Uniqema(제조사))Caprylic / capric triglyceride
(Estasan: Uniqema (manufacturer))
피검자의 안면 좌부에는 제형예 1 또는 2를, 우부에는 비교제형예 1 또는 2를 3개월간 각각 사용하였다. 크림 사용 이전의 안면 양쪽부의 피부 상태를 측정해 놓은 다음 크림 사용 3개월 후 동일 부위를 재측정하여 피부 주름의 변화를 측정하였다. 24℃, 상대습도 40%의 항온항습실에서 눈꼬리 부위의 주름을 레플리카(replica)로 떠서 비시오메타 시스템(Visiometer system; C+K사)으로 피부 주름을 측정하였다. 피부 주름의 변화량은 하기 수학식 2에 따라 계산하였다.Formulation Example 1 or 2 was used for the face side of the subject and Comparative Formulation Example 1 or 2 was used for the right side for 3 months, respectively. The skin condition of both sides of the facial area before the use of the cream was measured, and then the same part was remeasured 3 months after using the cream to measure the change of the skin wrinkles. The skin wrinkles were measured with a Visiometer system (C + K company) by removing the wrinkles of the eye tail region with a replica in a constant temperature and humidity chamber at 24 ° C and a relative humidity of 40%. The amount of change in the skin wrinkles was calculated according to the following formula (2).
상기 수학식 2에서, "Tdi"는 D90에서의 측정부위 값이며, "Tdo"는 D0에서의 측정부위 값이다.In the equation (2), "Tdi" is the measured site value at D90 and "Tdo" is the measured site value at D0.
상기 표 9의 결과에서, 비교제형예 1을 사용한 군에서는 27.5±7%(평균±표준편차)의 피부 주름 감소치를 보였고, 비교제형예 2의 경우 35.7±10%로 나타난 반면, 제형예 1을 사용한 군에서는 31±9%의 피부 주름 감소치를 보였으며, 제형예 2의 경우 39±11%의 감소치를 보여 우수한 피부 주름 개선 효과를 확인하였다.
In the results of Table 9 above, the skin wrinkle reduction value of 27.5 + 7% (mean + -standard deviation) was shown in the group using Comparative Formulation Example 1, and 35.7 + 10% in Comparative Formulation Example 2, The skin wrinkle reduction value was 31 ± 9% in the used group and 39 ± 11% in the case of Formulation Example 2, and the excellent wrinkle improving effect was confirmed.
8) 인체에서 피부 탄력 개선 효과8) Skin elasticity improvement effect in human body
상기에서 제조한 제형예 1,2 및 비교제형예 1,2의 영양크림의 피부 탄력 개선 효과를 측정하였다. 30세 이상의 여성 40명을 대상으로 4개 조로 나누어, 각 조에 상기 제형예 1,2 및 비교제형예 1,2의 영양크림을 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다. 표 10의 결과 값은 피부탄력측정기의 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 의미한다.The skin elasticity improving effects of the nutritional creams of Formulation Examples 1 and 2 and Comparative Formulation Examples 1 and 2 prepared above were measured. Forty women aged 30 or older were divided into four groups. The nutritional creams of Formulation Examples 1 and 2 and Comparative Formulation Examples 1 and 2 were applied to the face for 12 weeks for 2 weeks each day. Then, the skin elasticity was measured with a cutter SEM 575 , C + K Electronic Co., Germany). The results are shown in Table 10 below. The results in Table 10 indicate the viscoelasticity of the skin elasticity meter.
상기 표 10의 결과에서, 제형예 1,2의 영양크림을 사용한 경우 비교제형예 1,2 보다 높은 피부탄력 증진 효과를 나타내었다.
In the results of Table 10 above, when the nutritional creams of Formulation Examples 1 and 2 were used, skin elasticity enhancement effect was higher than Comparative Formulation Examples 1 and 2.
[시험예 3] 피부 미백 효과[Test Example 3] Skin whitening effect
1) 쥐의 색소세포를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과1) Inhibitory effect of melanin on melanin production in rat
실시예 1의 황숙종 인삼 추출물의 멜라닌 생성 억제효과를 알아보기 위하여 쥐의 색소세포를 이용하였다.In order to examine the inhibitory effect of the ginseng extract of Example 1 on melanogenesis, mouse pigment cells were used.
먼저, C57BL/6 마우스 유래의 쥐 색소세포(Mel-Ab cell)(Dooley, T.P. et al, Skin pharmacol, 7, pp 188-200)를 DMEM(Dulbeccos modified Eagles media)에 10% 우태반 혈청, 100 nM 2-O-테트라데카노일포르볼(tetradecanoylphorbol)-13-아세테이트 및 1 nM 콜레라 독소(cholera toxin)를 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다. 배양한 Mel-Ab 세포를 0.25% 트립신-EDTA로 떼어내고, 24-웰 플레이트에 105 세포/웰(cells/well)의 농도로 세포를 배양한 다음 이틀째부터 3일 연속으로 실시예 1 및 비교예 1의 추출물을 10 ppm 씩 가하여 배양하였다. 이 때, 양성대조군으로 하이드로퀴논 1 ppm을 사용하였다. 그 다음 배양액을 제거하고, PBS로 세척한 후, 1 N 수산화나트륨으로 세포를 녹여 400 nm에서 흡광도를 측정한 다음, 하기 수학식 3에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 11에 나타내었다(Dooley의 방법). First, 10% fetal bovine serum (100 μl) was injected into DMEM (Dulbeccos modified Eagles media) and 100 μl of 100 μl The cells were cultured in the presence of nM 2-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate and 1 nM cholera toxin at 37 ° C and 5% CO 2 . The cultured Mel-Ab cells were removed with 0.25% trypsin-EDTA, and the cells were cultured at a concentration of 10 5 cells / well (cells / well) on a 24-well plate. The extract of Example 1 was added at 10 ppm / well. At this time, 1 ppm of hydroquinone was used as a positive control. Then, the culture solution was removed, washed with PBS, and the cells were dissolved with 1 N sodium hydroxide, and the absorbance at 400 nm was measured. Then, the inhibition rate of melanin production was calculated according to the following formula (3) (Dooley's method).
상기 표 11의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 비교예 1의 자경종 추출물과 홍삼 추출물 보다 우수한 멜라닌 생성 억제율을 보였다. 이를 통해 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 우수한 미백 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.
From the results shown in Table 11, the ginseng root extract and fruit extract of Example 1 according to the present invention showed a better melanin production inhibitory rate than the ginseng extract and red ginseng extract of Comparative Example 1. Thus, it was confirmed that the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 according to the present invention showed excellent whitening effect.
2) 인체 피부에 대한 미백 효과2) Whitening effect on human skin
실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물의 인체 피부에 대한 미백 효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.The following experiment was conducted to examine the whitening effect of the ginseng root and fruit extract of Example 1 against human skin.
먼저, 건강한 12명의 남자를 대상으로 피검자의 상박 부위에 직경 1.5 ㎝의 구멍이 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose)의 1.5∼2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다.First, 12 healthy boys were exposed to 1.5 cm diameter opaque tape at the upper abdomen of the subject. Ultraviolet rays (UVB) of about 1.5 to 2 times of the minimum erythema dose of each subject were observed. To induce blackening of the skin.
상기 자외선 조사 후 시험물질인 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물과 하이드로퀴논을 각각 바르고, 한곳은 아무 것도 바르지 않고 10주 동안 상태변화를 관찰하였다. 1주 단위로 피부의 색깔을 색차계 CR2002(일본, 미놀타 사)로 측정하였다. The ginseng roots and fruit extract of Example 1, which is the test substance after the ultraviolet ray irradiation, and hydroquinone were applied to each other, and one state was observed for 10 weeks without any application. The color of skin was measured with a colorimeter CR2002 (Minolta Co., Japan) every 1 week.
그 다음 상기 각 시험물질의 도포 개시시점과 도포 완료시점에서의 피부색의 차이(△L*)를 하기 수학식 4에 따라 계산하였고, 그 결과를 하기 표 12에 나타내었다. 한편, 미백효과는 시료 도포 부위와 대조군 부위의 △L*의 비교로 판정하는데, △L* 값이 2 정도일 경우는 침착된 색소의 미백화가 뚜렷한 경우이고, 1.5 정도 이상이면 미백 효과가 있다고 판정할 수 있다. Then, the difference (ΔL *) between the start time of application of the respective test materials and the completion time of the application of the test materials was calculated according to the following equation (4). On the other hand, the whitening effect is judged by comparison of DELTA L * between the sample application region and the control region. When the DELTA L * value is 2, the whitening of the deposited pigment is noticeable. .
상기 표 12의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 하이드로퀴논과 유사한 정도의 피부색 밝기 정도를 보임을 확인하였다. 이는 상기 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 자외선에 의해 생성된 색소 침착을 개선하여 피부색을 밝게 해주기 때문이다.
From the results of Table 12, it was confirmed that the roots and fruit extracts of the Ginseng root of Example 1 according to the present invention had a degree of skin color brightness similar to that of hydroquinone. This is because the Hwang sookjong ginseng roots and fruit extracts improve pigmentation caused by ultraviolet rays to brighten skin color.
[시험예 4] 피부 보습 및 아토피증상 개선 효과[Test Example 4] Skin moisturizing effect and atopic symptom improvement effect
1) 인간 각질형성세포의 분화유도1) induction of differentiation of human keratinocytes
각질형성세포 및 인간피부세포주(HaCaT)의 분화 시 생성되는 CE(Cornified Envelop)의 양을 측정하여 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물의 세포분화 촉진 효과를 알아보았다. (CE) produced during differentiation of keratinocyte and human skin cell line (HaCaT) were measured to investigate the promoting effect of ginseng root and fruit extract of Example 1 according to the present invention on cell differentiation.
일차 배양한 인간의 각질형성세포를 배양용 플라스크에 넣어 바닥에 부착시킨 후, 하기 표 13에 기재된 시험물질들을 농도별로 배양액에 첨가하고, 세포가 바닥 면적의 70∼80% 정도 자랄 때까지 5일간 배양하였다. 이 세포를 수확(cell harvest)하여 PBS(phosphate buffered saline)로 세척한 다음, 2% SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)와 20 mM 농도의 DTT(Dithiothreitol)를 함유한 10 mM 농도의 트리스-염산 완충액(Tris-HCl, pH 7.4) 1 ml를 가하여 소니케이션(sonication), 보일링(boiling), 원심분리한 침전물을 다시 PBS 1 ml에 현탁시켜 340 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 이와 별도로 상기 소니케이션 후의 용액 일부를 취하여 단백질 함량을 측정하여, 세포분화 정도의 평가 시 기준으로 삼았다. 저칼슘(0.03 mM) 처리군과 고칼슘(1.2 mM) 처리군을 각각 음성/양성 대조군으로 하고, 저칼슘농도에 시험물질을 첨가하여 실시한 시험 결과를 하기 표 13에 나타내었다. The primary cultured human keratinocytes were placed in a culture flask and adhered to the bottom. The test substances described in the following Table 13 were added to the culture medium by concentration, and the cells were cultured for 5 days until the cells reached 70-80% Lt; / RTI > The cells were harvested, washed with PBS (phosphate buffered saline), and resuspended in 10 mM Tris-HCl buffer (Tris buffer, pH 7.4) containing 2% SDS (sodium dodecyl sulfate) and 20 mM DTT (Dithiothreitol) -HCl, pH 7.4), sonication, boiling, and centrifugation were resuspended in 1 ml of PBS, and the absorbance at 340 nm was measured. Separately, a part of the solution after the sonication was taken to measure the protein content, and was used as a standard for evaluation of the degree of cell differentiation. The test results are shown in Table 13 below, in which low calcium (0.03 mM) and high calcium (1.2 mM) treatment groups are used as negative / positive control groups and low calcium concentration test materials are added.
상기 표 13의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 각질형성세포에서 분화를 촉진하는 것을 확인할 수 있었다.
From the results shown in the above Table 13, it can be confirmed that the extract of Root and Ginseng Root of Example 1 according to the present invention promotes differentiation in keratinocytes.
2) 인간 피부세포주의 트랜스 글루타미나아제(transglutaminase)의 발현 효과2) Expression effect of transglutaminase in human skin cell line
인간의 피부세포주를 96웰 평판배양기의 각 웰에 5×104개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 부착시킨 피부세포주에 시험물질을 처리한 후, 2일이 지난 다음, 배지를 제거하고, -20℃ 냉장고에 보관하였다. 동결-해동(Freeze-thawing)을 2회 반복하여 물질 처리한 세포를 파괴시킨 후, -20℃ 에 보관한 아세톤:에탄올(1:1, v/v)을 처리하여 4℃에서 30분간 방치하여 세포를 고정시켰다. 그 후, 실온에 방치하여 유기용매가 증발되게 하고, 블록킹(1% 소혈청알부민), 트랜스글루타미나아제 항체(일차 항체) 및 HRP 항-마우스 항체(이차 항체)를 첨가하였으며, 발색은 OPD(o-phennyldiamine)를 첨가하여 수행하였다. 발현량은 490 nm에서 흡광도를 측정하였고, 보정은 630 nm에서 백그라운드(background)를 측정하여 수행하였다. 저칼슘(0.03 mM) 처리군과 고칼슘(1.2 mM) 처리군을 각각 음성/양성 대조군으로 하고, 저칼슘농도에 시험물질을 첨가하여 실시한 시험 결과를 하기 표 14에 나타내었다.Insert the 5 × 10 4 dogs human skin cell lines in each well of a 96-well plate culture medium was attached for 24 hours. After the adhered skin cell line was treated with the test substance, after 2 days, the medium was removed and stored in a -20 ° C refrigerator. Cells treated with the substance were treated with acetone: ethanol (1: 1, v / v) stored at -20 ° C for 30 minutes at 4 ° C, followed by freezing-thawing twice Cells were fixed. Then, the mixture was allowed to stand at room temperature to allow the organic solvent to evaporate, and blocking (1% bovine serum albumin), transglutaminase antibody (primary antibody) and HRP anti-mouse antibody (secondary antibody) (o-phennyldiamine). Absorbance was measured at 490 nm and calibration was performed by measuring the background at 630 nm. The test results are shown in Table 14 below, in which low calcium (0.03 mM) and high calcium (1.2 mM) treatment groups were used as negative / positive control groups and low calcium concentration test substances were added.
상기 표 14의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 대조군보다도 많은 양이 발현됨을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 트랜스글루타미나아제의 발현을 촉진시키는 것을 확인하였다.
From the results of Table 14, it can be seen that the ginseng root extract and fruit extract of Example 1 of the present invention are expressed more than the control group. Therefore, it was confirmed that the roots and the fruit extract of the ginseng root of Example 1 according to the present invention promote the expression of transglutaminase.
3) 인간 피부에서 표피지질(총 세라마이드) 생성량 증가 효과3) Increased production of epidermal lipid (total ceramide) in human skin
실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 실제 인간 피부에서의 지질 합성 증가에 미치는 효과를 평가하기 위하여, Carbopol ETD 2020 0.5%, TEA 0.45%, 시험물질 5%, 및 탈이온화된 물로 100을 맞추어 사용하였다. 12명의 성인 남녀를 대상으로 팔뚝에 50 ml 폴리프로필렌 코르니컬 튜브(polypropylene cornical tube)의 직경만큼 영역을 표시한 후 매일 2회씩 대조군들과 실시예 1의 황숙종 인삼 열매 추출물을 20 μl씩 도포하면서 피검자를 2군으로 나누어 3일째와 11일째 생성 지질량을 하기와 같은 방법으로 지질을 추출하여 분석하였다. 팔뚝을 수돗물을 이용하여 씻은 다음 스카치 810 매직테이프(Scotch 810 Magic tape) 로 1회 테이프 스트립핑(tape stripping)한 후 자른 50 ml 폴리프로필렌 코르니컬 튜브를 저장소(reservoir)로 사용하여 1 ml의 사이클로헥산/에탄올(cyclohexane/ethanol)(4:1)을 첨가한 다음 약 1분간 섞어 준 뒤 이를 새로운 튜브에 옮기고 다시 1 ml의 사이클로헥산/에탄올(1:1)을 위와 같은 방법으로 처리한 후 튜브에 모았다. 이 후 이를 50℃에서 질소 가스를 이용하여 건조시킨 다음 500 μl의 클로로포름/메탄올(2:1)에 녹인 후 각 시험물질들을 CAMAG사의 Automated TLC sampler-4를 이용하여 실리카겔 TLC(Thin Layer chromatography) 판에 점적하고, AMD(Automated Multiple Development)를 이용하여 하기 표 15와 같은 조성비의 전개 용매로 전개하였다.In order to evaluate the effect of ginseng roots and fruit extract of Example 1 on the increase of lipid synthesis in human skin, 0.5% of Carbopol ETD 2020, 0.45% of TEA, 5% of test substance and 100 of deionized water Respectively. Twelve adult male and female subjects were divided into two groups of 50ml polypropylene cornical tube diameters on the forearm, and then the control group and 20mg of the extract of Ganoderma lucidum extract of Example 1 were applied to the subject Were divided into two groups, and the lipid was extracted and analyzed by the following method on the 3rd and 11th days. The forearms were washed with tap water and then tape stripped once with Scotch 810 Magic tape and cut into 50 ml polypropylene cornic tubes as a reservoir in 1 ml cyclone After the addition of cyclohexane / ethanol (4: 1), the mixture was mixed for about 1 minute, transferred to a new tube, treated with 1 ml of cyclohexane / ethanol (1: 1) . Each sample was dissolved in 500 μl of chloroform / methanol (2: 1) and dried on silica gel TLC (Thin Layer Chromatography) plate using Automated TLC sampler-4 from CAMAG And developed with developing solvent of composition ratio as shown in Table 15 using AMD (Automated Multiple Development).
TLC 판을 전개시킨 후 TLC 스캐너-II(CAMAG 사: densitometer)를 이용하여 570 nm 파장에서 각 밴드(band)의 크기를 측정하였다. 비처치군의 세라마이드 생성량을 100%로 환산한 각 처치군의 세라마이드 생성량은 하기 표 16에 나타내었다.The TLC plate was developed and the size of each band was measured at a wavelength of 570 nm using a TLC scanner-II (CAMAG: densitometer). The amount of ceramide produced in each treatment group in which the amount of ceramide produced in the non-treated group was converted to 100% is shown in Table 16 below.
상기 표 16의 결과에서, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물 처치 3일 후에 음성대조군(무처리군/비히클) 대비 증가 상태를 보였고 양성대조군(글리세린) 보다는 2%와 6% 정도의 증가를 보였다. 그리고 11일 후에는 지질 생성능이 음성대조군(운반제)과 양성대조군(글리세린)에 비해 월등히 우수한 것을 확인하였다. 이는 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물에 의한 세라마이드 증가를 입증하는 것이다.
The results of Table 16 show that the growth of Ginseng Root and Fruit Extract of Example 1 was increased after 3 days of treatment compared to the negative control group (untreated group / vehicle) and increased by 2% and 6% over the positive control group (glycerin) It looked. And 11 days later, lipid production was significantly superior to that of the negative control (carrier) and the positive control (glycerin). This demonstrates the increase of ceramide by roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 according to the present invention.
4) 인체에서의 피부 보습력 증가 4) Increase skin moisture in human body
피부 건조증을 나타내는 50∼60대의 성인 남녀 40명을 4개조로 나누어, 각 조에 제형예 1,2 및 비교제형예 1,2의 영양크림을 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주, 2주, 4주 경과한 시점 및 도포를 중지한 2주 경과(총 6주 경과) 후에 항온, 항습 조건(24℃, 상대습도 40%)에서 코니오미터로 피부수분량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 17에 나타내었다. 시험결과는 시험개시 직전에 측정한 코니오미터 값을 기준으로 하여 일정기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 표시한 것이다. 상기 코니오미터는 표피의 전기전도도 값을 측정하여 피부에 존재하는 수분량을 측정하는 피부수분측정기이다.40 male and female adult male and female adults exhibiting dry skin syndrome were divided into 4 groups. The nutritional creams of Formulation Examples 1 and 2 and Comparative Formulation Examples 1 and 2 were applied twice daily to the face for 4 weeks. (24 ° C, relative humidity: 40%) after one week, two weeks, and four weeks after application and before two weeks (six weeks after completion of application) Skin moisture was measured and the results are shown in Table 17 below. The test result is a percentage of the increment of the measured value after a certain period of treatment based on the coneometer value measured just before the start of the test. The coneometer is a skin moisture meter for measuring the amount of water present in the skin by measuring the electrical conductivity of the skin.
상기 표 17의 결과에서, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 함유된 제형예 1,2를 도포한 군에서는 비교제형예 1,2를 도포한 대조군에 비해서 피부수분량이 더 증가되었다. 또한, 제형예 1,2의 영양크림의 도포를 중지한 2주 후(총 6주 경과)에 피부수분을 측정한 수치가 1∼2주 경과 후의 수치와 유사하게 나타나, 제형예 1,2를 추가로 도포하지 않아도 일정 기간 동안 본 발명에 의한 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물의 도포에 의해 피부 수분이 지속적으로 유지되는 것을 확인하였다.
In the results shown in Table 17, the skin moisture content was further increased in the group to which Formulation Examples 1 and 2 containing the extract of Root Ginseng Root and Fruit Extract of Example 1 were applied compared to the control group to which Comparative Formulations 1 and 2 were applied. In addition, the values of skin moisture measured 2 weeks after the application of the nutritional cream of Formulation Examples 1 and 2 were stopped (total of 6 weeks) were similar to those after 1 to 2 weeks, It was confirmed that the skin moisture was continuously maintained by applying the extract of Rootstock ginseng root and fruit extract according to the present invention for a certain period of time without further application.
5) 아토피성 피부염 개선 효과5) Improvement of atopic dermatitis
아토피 증상 개선 효과를 다음과 같이 측정하였다. 아토피 증상(가려움, 진무름, 심한 건조증)으로 진단받았거나, 육안관찰로 아토피 유사 증상을 보이는 10∼50대 사이의 40명을 대상으로 하여 4그룹으로 나누고, 각각 제형예 1,2 및 비교제형예 1,2의 영양크림을 제공하여, 아토피 증상을 보이는 부위에 매일 2회씩 12주 동안 도포하도록 하였다. 효능 평가는 12주 처치 후 설문 조사를 통해 개선 정도를 본인이 주관적으로 판단하게 하였다. 설문에서는 아토피성 피부염의 증상을 "가려움", "건조함", "각질발생", "비듬", "홍반", "부어오름", "피부 균열" 및 "진물과 습집" 등으로 나누고 상기 증상이 있는 경우 각각의 증상에 대하여 개선 정도를 평가한 후에 이를 평균하여 아토피 증상 개선 효과를 개인별로 평가하였으며, 그 결과를 하기 표 18에 나타내었다.The effect of improving atopic symptoms was measured as follows. Forty patients between the ages of 10 and 50 who were diagnosed with atopic symptoms (itching, eruption, severe dryness) or who had atopic symptoms by visual observation were divided into 4 groups and were classified into Formulation Examples 1, 2 and Comparative Formulation Examples 1,2 nutritional creams were applied to the area showing atopic symptoms twice a day for 12 weeks. The efficacy evaluation was conducted after 12 weeks' treatment, and the degree of improvement was judged subjective by the questionnaire. In the questionnaire, symptoms of atopic dermatitis were divided into "itching", "dryness", "keratinization", "dandruff", "erythema", "swelling", "skin crack" , The degree of improvement was evaluated for each symptom, and then the average was evaluated to evaluate the improvement effect of atopic symptoms. The results are shown in Table 18 below.
상기 표 18의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 함유된 제형예 1,2를 도포한 군이 비교제형예 1,2를 도포한 군보다 전반적으로 아토피 증상이 더 개선된 것을 확인하였다. From the results shown in Table 18, it can be seen that the group to which Formulation Examples 1 and 2 containing the extract of Root-root ginseng and the fruit extract of Example 1 according to the present invention applied had generally atopic symptoms And further improvement was confirmed.
[시험예 5] 여드름 및 피부 트러블 완화[Test Example 5] Acne and skin troubles were alleviated
1) 피지조절효과: 5α-리덕타아제 활성 억제 효과1) sebum control effect: 5α-reductase inhibitory effect
성숙한 SD(Sproque-Dawley) 웅성 랫트(생후 7∼8주)를 디에틸에테르로 치사시킨 후, 복부 전립선을 떼내어 결합조직을 제거하고 완충액(0.32 M 수크로오스, 0.1 mm 디티오트레이톨(dithiothreitol) 및 20 mM 아세트산 나트륨)을 첨가하여 잘게 자른 다음, 분쇄기로 현탁화하였다. 현탁액은 원심분리하여 상층액을 취해 5α-리덕타아제를 부분 정제하고, 이 효소의 활성도 억제 실험을 수행하였다. Mature SD (Sproque-Dawley) male rats (7-8 weeks old) were sacrificed with diethyl ether, the abdominal prostate was removed, the connective tissue was removed, and a buffer (0.32 M sucrose, 0.1 mM dithiothreitol, And 20 mM sodium acetate), and then suspended in a pulverizer. The suspension was centrifuged and the supernatant was taken to partially refine 5α-reductase, and the activity of the enzyme was inhibited.
위에서 얻은 상층액의 일부를 취하여 0.2 M 일염기산과 0.2 M 이염기산이 들어 있는 완충액에 넣은 후, 동위원소인 3H가 붙어 있는 기질(테스토스테론)과 함께 반응시켜 생성물인 디하이드로테스토스테론의 생성량을 측정하였다. A portion of the supernatant obtained above is taken in a buffer containing 0.2 M base acid and 0.2 M dibasic acid, and then reacted with a substrate (testosterone) with an isotope, 3 H, to measure the amount of product dihydrootestosterone Respectively.
반응용액은 1 mM 디티오트레이톨, 40 mM 나트륨 포스페이트(pH 6.5), 50 μM NADPH, [1,2,6,7-3H] 테스토스테론/테스토스테론(2.2×109 몰) 및 효소 현탁액(0.8 ㎎) 단백질을 565 ㎕ 포함하였다.The reaction solution contained 1 mM dithiothreitol, 40 mM sodium phosphate (pH 6.5), 50 μM NADPH, [1,2,6,7- 3 H] testosterone / testosterone (2.2 × 10 9 mol) Mg) < / RTI > protein.
실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 10% 에탄올에 녹여 한 반응당 100 ㎍/10% 에탄올 10 ㎕ 상태로 가하고, 대조군으로는 동일한 부피의 용매를, 양성대조군으로는 리보플라빈을 사용하였다. The roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 were dissolved in 10% ethanol and added to 10 μl of 100 μg / 10% ethanol per reaction. The same volume of solvent was used as a control, and riboflavin was used as a positive control.
반응은 효소 현탁액을 부가하는 것과 동시에 시작하여 37℃에서 30분간 진행시킨 후, 1 ㎖의 에틸아세테이트를 가하여 추출하였으며, 100 ㎕의 에틸아세테이트상을 실리카 플라스틱 시트 카이젤겔 60 F254(Silica plastic sheet kieselgel 60 F254) 상에서, 전개용매계는 아세테이트-사이클로 헥산(1:1)으로 전개하였다.The reaction was started at the same time as the addition of the enzyme suspension and proceeded at 37 DEG C for 30 minutes, followed by extraction with 1 mL of ethyl acetate. 100 mu l of the ethyl acetate phase was applied onto a silica plastic sheet kieselgel 60 F254), the developing solvent system was developed with acetate-cyclohexane (1: 1).
플라스틱 시트를 공기 건조한 후, 동위원소의 양을 측정하기 위해 바스 시스템을 사용하였는데, 건조된 플라스틱 시트와 엑스레이 필름을 함께 바스 카셋트에 넣어 1주일 후에 필름에 남아 있는 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론의 동위원소의 양을 측정하였으며, 각각의 저해율에 대한 결과를 하기 표 19에 나타내었다.After the plastic sheet was air-dried, the bath system was used to measure the amount of isotope. The dried plastic sheet and x-ray film were put together in a bath cassette and after one week, the testosterone and dihydrootestosterone isotope And the results for each inhibition rate are shown in Table 19 below.
(2) DHT : 디하이드로테스토스테론 영역에서 나타난 3H 레디오 액티버티
(3) 전환율 : DHT 영역의 레디오 액티버티/전체 레디오 액티버티
(4) 저해율 : 100 x (대조군의 전환율-시료의 전환율)/대조군의 전환율(1) T: 3H radioactivity in the testosterone area
(2) DHT: 3H radioactivity in the dihydrotestosterone region
(3) Conversion rate: Radio activity in the DHT area / Total radio activity
(4) Inhibition rate: 100 x (Conversion rate of control group - Conversion rate of sample) / Conversion rate of control group
상기 표 19의 결과에서, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 5α-리덕타아제 억제 효과가 있었으며, 특히 황숙종 인삼의 열매 추출물은 양성대조군인 리보플라빈 보다 우수한 저해율을 나타내었다.
From the results shown in Table 19, it was found that the extracts of Root and Ginseng Root and Fruit Extract of Example 1 had an inhibitory effect on 5α-reductase, and the extracts of Fruit ginseng had a better inhibitory effect than the positive control riboflavin.
2) 지질합성(lipogenesis) 억제 효과2) Inhibitory effect on lipogenesis
지질 합성에 필요한 탄소 원소의 소비(uptake) 정도를 정량하여 지질합성 저해 정도를 평가하는 방법으로 피지선에서의 지질합성 정도를 평가하였다. The extent of lipid synthesis in the sebaceous glands was evaluated by assessing the extent of uptake of carbon elements required for lipid synthesis and assessing the degree of lipid synthesis inhibition.
즉, 피지선이 많은 햄스터 귀 조직을 생검(biopsy)하여 C14이 라벨된 배지에서 6시간 동안 방사능 측정기로 대조군과 시험물질들을 비교 정량하여 저해 정도를 평가하였다. 시험물질들은 햄스터 오른쪽 귀 조직을 이용, 배지에 시험물질 용액 0.01%를 가하여 사용하였고, 대조군은 햄스터 왼쪽 귀 조직을 이용, 배지에 생리 식염수 0.01%를 가하여 사용하였으며, 그 결과를 하기 표 20에 나타내었다. In other words, the amount of inhibition was evaluated by biopsy of hamster ear tissues having a large number of sebaceous glands, and comparing and quantifying the test substance with the control group using a radioactivity measuring device for 6 hours on a C14 labeled medium. Test substances were used by adding 0.01% test substance solution to the medium using the right ear tissue of the hamster, 0.01% physiological saline was added to the medium using the hamster left ear tissue, and the results are shown in Table 20 .
한편, 표 20에서 저해율은 하기 수학식 5에 따라 계산한 것이고, 그 값은 4 마리의 햄스터에 대한 평균값이다.On the other hand, the inhibition rate in Table 20 is calculated according to the following equation (5), and the value is an average value for four hamsters.
상기 표 20의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물이 지질 생합성 억제 효과가 있음을 확인하였다.
From the results shown in the above Table 20, it was confirmed that the root extract and ginseng root extract of Example 1 of the present invention had lipid biosynthesis inhibitory effect.
3) 면포 감소 효과3) Effect of Cotton Reduction
면포 감소 효과를 확인하기 위하여 본 발명에 사용된 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 1,3-부틸렌글리콜에 용해시켜 1% 용액이 되도록 한 후, 토끼 임상실험용 시험물질로 사용하였다. In order to confirm the effect of reducing cottonseed, the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 used in the present invention were dissolved in 1,3-butylene glycol to make a 1% solution and used as test materials for rabbit clinical experiments.
흰 토끼의 귀에 면포 유발 물질인 50% 올레인산/파라핀오일 0.2 ㎖를 오전에 도포하여 면봉으로 문질러 주었다. 하루 두 번 오전(50% 올레인산/파라핀오일), 오후(물질)에 도포하며 총 실험 기간인 한달 동안 도포하였다. 면포는 약 10일 전후부터 발생되는데, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 0.2 ㎖씩 오후에 도포해 준 결과 2주 후부터는 점차적으로 면포의 수 및 크기가 감소하였다.In the white rabbit ear, 0.2 ml of 50% oleic acid / paraffin oil, which is a skin inducing substance, was applied to the ear and rubbed with a cotton swab. Twice daily (50% oleic / paraffinic oil) and in the afternoon (substance) and applied for one month, the total duration of the experiment. The cotton seedlings occurred from about 10 days after seeding. The seedlings of the seedlings of Ginseng root and fruit extract of Example 1 were sprayed with 0.2 ml in the afternoon. As a result, the number and size of cotton seedlings gradually decreased after 2 weeks.
각 조직을 생검하여 각질을 벗겨낸 후, 면포 크기를 현미경 하에서 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 21에 나타내었다.Each tissue was biopsied and the keratin was peeled off, and the size of the skin was measured under a microscope. The results are shown in Table 21 below.
상기 표 21의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물로 처리한 토끼의 면포가 현저히 감소되는 것을 확인하였다. 즉, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물에 의해 피지감소가 나타났고, 결과적으로 피부 과각질화를 감소시켜 면포가 감소되었음을 추정할 수 있다.
From the results of Table 21, it was confirmed that the rabbit skin treated with the extract of Root and Ginseng root of Example 1 of the present invention was significantly reduced. Namely, sebum reduction was observed by the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1, and as a result, skin and keratinization were reduced, and it can be estimated that cottonseed decreased.
4) 피지분비 억제 효과4) Effect of suppressing sebum secretion
지성피부 완화 효과를 측정하기 위해서 20∼45세의 여성층으로 지성피부를 가진 20명에게 이마 부분에 10명은 제형예 1,2(황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물 함유)를, 다른 10명에게는 비교제형예 1,2를 아침, 저녁으로 1일 2회 도포하여 사용하게 한 후에 1주, 2주, 3주 및 4주 후에 피부 유분 측정기(Sebumeter SM810)를 이용하여 피부의 피지 분비량을 측정하였다. 실험은 20℃, 상대습도 20%에서 이루어졌으며, 측정결과는 하기 표 22에 나타내었다. 결과는 피검자 10명의 평균값으로 나타내었다. 지성 피부인 경우 측정값이 220 이상이고, 정상피부의 경우 100 내지 220 사이이다.In order to measure the effect of oily skin mitigation, 20 women aged 20 to 45 years, 20 men with oily skin, 10 men in the forehead region, were given Formulation Examples 1 and 2 (containing Hwang sookjong ginseng roots and fruit extract) 1 and 2 were applied twice a day in the morning and evening. After 1 week, 2 weeks, 3 weeks and 4 weeks, skin sebum secretion amount was measured using a sebum smear meter (Sebumeter SM810). The experiment was performed at 20 ° C and a relative humidity of 20%. The measurement results are shown in Table 22 below. The results were expressed as the average value of 10 subjects. In the case of oily skin, the measurement value is 220 or more, and in the case of normal skin, it is between 100 and 220.
상기 표 22의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 함유하는 제형예 1,2의 영양크림이 과다한 피지분비를 억제하는 효과를 나타내어 피지조절 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
From the results of Table 22, it can be seen that the nutritional cream of Formulation Examples 1 and 2 containing the root extract and ginseng root extract of Example 1 according to the present invention has an effect of suppressing excessive sebum secretion, there was.
5) 항염증 효과: 프로스타글란딘 E2(PGE2) 생성 억제 효과5) Anti-inflammatory effect: Inhibitory effect of prostaglandin E2 (PGE2) production
본 발명에 의한 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물의 프로스타글란딘 E2 생성 억제 효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험하였다(참고문헌: Jeffrey, K. H., Anglea, S. W., Zoe, S., and Rhia C. M. Intracellular Measurement of Prostaglandin E2: Effect of Anti-inflammatory Drugs on Cyclooxygenase Activity and Prostanoid Expression, Analytical Biochemistry, 1999, 271, 18-28).In order to investigate the inhibitory effect of the ginseng roots and the fruit extract of the present invention on the production of prostaglandin E2, the following experiment was conducted (Reference: Jeffrey, KH, Anglea, SW, Zoe, S., and Rhia CM Intracellular Measurement Prostaglandin E2: Effect of Anti-inflammatory Drugs on Cyclooxygenase Activity and Prostanoid Expression, Analytical Biochemistry, 1999, 271, 18-28).
먼저, 사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포를 CO2 배양기에서 24시간 동안 배양한 다음, FBS(fetal bovine serum)가 포함되지 않은 배지로 교체하여 2 시간 동안 배양한 후, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물에 증류수를 혼합하여 각각 1, 10 및 100 ㎍/mL의 농도로 준비하여 처리한 다음, 37℃, 5%(v/v)의 CO2 배양기에서 2 시간 동안 배양하였다. First, fibroblasts isolated from human epidermal tissue were cultured in a CO 2 incubator for 24 hours, and then cultured for 2 hours in a medium containing no fetal bovine serum (FBS). Then, The roots and fruit extracts were mixed with distilled water at concentrations of 1, 10 and 100 ㎍ / mL, respectively, and then cultured in a CO 2 incubator at 37 ° C and 5% (v / v) for 2 hours.
그 다음, 프로스타글란딘 E2 자극원으로 칼슘 이오노포어 A23187(Calcium ionophore A23187)과 아라키돈산을 50 ㎛의 농도로 5분간 처리한 후, 세포를 용혈시키고 ELISA 판독기 450 nm에서 흡광도를 측정하여 프로스타글란딘 E2를 정량하였으며, 그 결과를 하기 표 23에 나타내었다. 이때, 하기 표 23에 기재된 억제율은 아라키돈산 처리시 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 처리하지 않은 피부 섬유아세포와 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 처리한 섬유아세포의 프로스타글란딘 E2 생성량의 차이를 기준으로 계산하였으며, 5 회 반복하여 평균값을 구하였다.Then, calcium iodate A23187 (Calcium ionophore A23187) and arachidonic acid were treated for 50 minutes as a prostaglandin E2 stimulating agent for 5 minutes, the cells were hemolyzed, and the absorbance was measured at 450 nm in an ELISA reader to quantitate prostaglandin E2 And the results are shown in Table 23 below. At this time, the inhibition rates shown in Table 23 below are shown in terms of the amount of prostaglandin E2 produced in fibroblasts treated with arachidonic acid and the skin fibroblasts not treated with the ginseng root and fruit extract of Example 1 and fibroblasts treated with the ginseng root and fruit extract of Example 1 , And the mean value was obtained by repeating 5 times.
(㎍/mL)density
(쨉 g / mL)
상기 표 23의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 자극원에 의한 프로스타글란딘 E2 생성을 억제할 수 있음을 확인할 수 있었다.
From the results shown in the above Table 23, it can be confirmed that the ginseng root extract and fruit extract of Example 1 of the present invention can inhibit the production of prostaglandin E2 by the stimulus source.
6) 항염증 효과: LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 사이클로옥시게나제-2(COX-2)의 생합성 억제 효과6) Anti-inflammatory effect: inhibition of biosynthesis of cyclooxygenase-2 (COX-2) induced by LPS (lipopolysaccharide)
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12웰 평판배양기에 배양한 다음 LPS를 처리한 후, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물 1, 10 및 100 ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) 웨스턴블랏(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2(COX-2: cyclooxygenase-2)의 양을 정량하였다. 대조군을 100으로 하여 농도계(densitometer)로 측정한 값과의 비교치를 하기 표 24에 나타내었다. 이때 대조군은 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 처리하지 않고 배양한 비처리군이다.Human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and then treated with LPS. Then, the medium was replaced with media containing 1, 10, and 100 ppm of the Hwang sookjong ginseng root and the fruit extract of Example 1. On the second day of culture, the cells were harvested and the amount of cyclooxygenase-2 (COX-2) produced using the Westren blot method was quantitated. The comparison with the value measured with a densitometer with the control group as 100 is shown in Table 24 below. Here, the control group was a non-treated group in which the roots of Ginseng root and the fruit extract of Example 1 were cultured without treatment.
상기 표 24의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 염증반응 유발인자인 LPS로 유도된 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜 염증반응을 억제함으로써 피부 트러블을 완화시킬 수 있음을 확인하였다.
From the results of Table 24, it can be seen that the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 according to the present invention inhibit the inflammatory reaction by reducing the biosynthesis of cyclooxygenase-2 induced by LPS, which is an inflammatory reaction factor, It was confirmed that the skin trouble can be alleviated.
7) 항염증 효과: LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 종양괴사인자(TNF-α)의 생합성 억제 효과7) Anti-inflammatory effect: Inhibition effect of LPS (Lipopolysaccharide) -induced tumor necrosis factor (TNF-α)
인체 각질형성세포를 105개의 농도로 12웰 평판배양기에 배양하였고, LPS를 처리한 후, 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물 1, 10 및 100 ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 6∼24시간 배양한 다음 세포를 수확해서 ELISA(Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 TNF-α의 양을 정량하였다. 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치를 표 25에 나타내었다. 이때 대조군은 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 처리하지 않고 배양한 비처리군이다.Human keratinocytes were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and were treated with LPS and then replaced with media containing 1, 10, and 100 ppm of Hwang sookjong ginseng roots and fruit extracts of Example 1. After culturing for 6 to 24 hours, the cells were harvested and the amount of TNF-a produced was quantitated using ELISA (Pharmingen 555212) method. Table 25 shows the comparison with the value measured with the control group as 100. [ Here, the control group was a non-treated group in which the roots of Ginseng root and the fruit extract of Example 1 were cultured without treatment.
상기 표 25의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 염증유발인자 LPS에 의한 TNF-α의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜 이로 인해 발생할 수 있는 염증반응을 억제하여 피부 트러블 개선에 기여할 수 있었다.
From the results of Table 25, it can be seen that the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 according to the present invention reduce the biosynthesis of TNF-? By inflammation inducer LPS in a concentration-dependent manner, And contributed to improvement of trouble.
8) 대식세포(Macrophage)에 대하여 LPS로 유도시킨 NO 억제 효과8) NO inhibition effect induced by LPS on macrophages
본 발명에 의한 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물의 항염증 효과를 알아보기 위하여 대식세포(Macrophage)에 대하여 LPS로 유도시킨 NO(산화질소) 억제 실험을 진행하였다. In order to examine the antiinflammatory effect of the root extract and the ginseng root extract of the present invention, LPS-induced NO (nitric oxide) inhibition experiment was performed on macrophages.
10% 농도의 혈청을 첨가한 배지에서 5% CO2 조건 하에 대식세포(Raw 264.7 cell)를 배양하였다. 96웰 평판배양기에 2×105개의 농도로 자라게 하고, LPS(1 ug/ml)로 자극한 후 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 처리하여 37℃에서 1시간 동안 보관한 후 NO 생성 정도를 측정하여 LPS로 유도시킨 NO 저해하는 효과를 비교하였으며, 그 결과를 하기 표 26에 나타내었다. NO 생성량의 측정은 Griess 반응법(Minghetti, L. et al., 1991, Glia 19. 152-160)을 이용하였다.Macrophages (Raw 264.7 cells) were cultured in 5% CO 2 medium supplemented with 10% serum. The cells were grown in a 96-well plate incubator at a concentration of 2 × 10 5 , stimulated with LPS (1 ug / ml), treated with the ginseng roots and fruit extract of Example 1 at 37 ° C. for 1 hour, The results are shown in Table 26. The results are shown in Table 26 below. The NO production was measured by the Griess reaction method (Minghetti, L. et al., 1991, Glia 19. 152-160).
표 26의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물물은 염증유발인자(Cytokine)로서의 NO 생성을 효과적으로 억제하였다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물은 염증반응 조절을 통한 피부 트러블에 의한 상처를 치유하고 주름생성을 억제하는 효과에 기여할 것으로 기대된다.
From the results shown in Table 26, it was found that the extract of Root and Panax ginseng of Example 1 according to the present invention effectively inhibited NO production as an inflammatory factor (Cytokine). Therefore, it is expected that the roots and fruit extracts of the ginseng root of Example 1 according to the present invention contribute to the effect of healing wounds caused by skin troubles and suppressing wrinkle formation by controlling the inflammatory reaction.
9) 여드름 및 피부 트러블 개선 효과9) Acne and skin trouble improvement effect
실험에 참여한 인원은 평소 여드름을 비롯한 피부 트러블이 심한 여성 20명으로, 항온항습실에서 얼굴을 비누로 수세한 후 30분간 적응시키고, 여드름 개수 및 염증이 동반된 개수를 비교하여 피부 트러블 정도를 측정하였다.The participants were 20 women who had severe skin troubles including acne, and their face was soaked in soap for 30 minutes in the temperature and humidity room, and the degree of skin trouble was measured by comparing the number of acne and inflammation .
상기 피시험자들에게 제형예 1,2 및 비교제형예 1,2의 영양크림을 각각 4주일 동안 사용하게 한 다음 여드름 및 피부 트러블 정도를 비교하였으며, 그 결과를 하기 표 27에 나타내었다.The subjects were allowed to use the nutritional creams of Formulation Examples 1, 2 and Comparative Formulation Examples 1 and 2 for 4 weeks, respectively, and then the degree of acne and skin troubles were compared and the results are shown in Table 27 below.
상기 표 27의 결과에서 보여지는 바와 같이, 본 발명에 의한 실시예 1의 황숙종 인삼 뿌리 및 열매 추출물을 포함한 제형예 1,2를 4주간 도포한 결과 기존 여드름개수의 감소 및 염증 동반 트러블의 개선효과가 나타났다.
As can be seen from the results of Table 27, when Formulation Examples 1 and 2 containing the extract of Rootstock ginseng and fruit extract of Example 1 according to the present invention were applied for 4 weeks, reduction in the number of existing acne and improvement of inflammatory accompanying trouble .
[제형예 3] 유연화장수(스킨로션)[Formulation Example 3] Softening lotion (skin lotion)
하기 표 28에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 유연화장수를 제조하였다(단위: 중량%).The softening longevity was prepared according to a conventional method according to the composition shown in the following Table 28 (unit: wt%).
[제형예 4] 영양화장수(밀크로션)[Formulation Example 4] Nutritional lotion (milk lotion)
하기 표 29에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다(단위: 중량%).Nutrition lotion was prepared in a conventional manner according to the composition shown in the following Table 29 (unit: wt%).
[제형예 5] 마사지크림[Formulation Example 5] Massage cream
하기 표 30에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 마사지크림을 제조하였다(단위: 중량%).Massage creams were prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 30 below (unit: wt%).
[제형예 6] 팩[Formulation Example 6] Pack
하기 표 31에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다(단위: 중량%).A pack was prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 31 below (unit: wt%).
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