KR101458496B1 - A skin-care agent for anti-inflammatory containig Pleurotus ferulae fruit body extract or Pleurotus ferulae mycelium extract or Pleurotus ferulae mycelium culture fluid - Google Patents

A skin-care agent for anti-inflammatory containig Pleurotus ferulae fruit body extract or Pleurotus ferulae mycelium extract or Pleurotus ferulae mycelium culture fluid Download PDF

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KR101458496B1 KR20140036755A KR20140036755A KR101458496B1 KR 101458496 B1 KR101458496 B1 KR 101458496B1 KR 20140036755 A KR20140036755 A KR 20140036755A KR 20140036755 A KR20140036755 A KR 20140036755A KR 101458496 B1 KR101458496 B1 KR 101458496B1
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이도경
이정노
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이누림
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Abstract

The present invention relates to a composition containing Pleurotus ferulae fruit body extract, Pleurotus ferulae mycelium extract, or Pleurotus ferulae mycelium culture fluid for external skin application. More specifically, the present invention relates to a functional composition for external skin application which comprises 0.001-90.0 wt% of the Pleurotus ferulae fruit body extract, Pleurotus ferulae mycelium extract, or Pleurotus ferulae mycelium culture fluid obtained from the cultivation, and has effects of active oxygen scavenging, anti-aging, alleviating wrinkles, promoting collagen synthesis, skin moisturizing, skin whitening, alleviating skin irritation, anti-acne, alleviating atopy, anti-inflammatory, preventing hair damage, preventing hair loss, and promoting hair growth.

Description

아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 항염용 피부 외용제 조성물{A skin-care agent for anti-inflammatory containig Pleurotus ferulae fruit body extract or Pleurotus ferulae mycelium extract or Pleurotus ferulae mycelium culture fluid}FIELD OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to a skin-care agent for anti-inflammatory composition comprising Pleurotus ferulae mycelium extract or Pleurotus ferulae mycelium culture fluid containing an extract of Fusarium oxysporum f.

본 발명은 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 함유하는 항염용 피부 외용제 조성물, 더욱 구체적으로는 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 염증 질환(예를 들면, 아토피, 여드름) 예방, 치료 또는 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for external application for antiinflammatory activity containing a culture obtained from the cultivation of an agaricus fruiting body extract or an agaricus mycelium extract or an agaricus mycelium, more specifically, a composition for external application for antiinflammatory skin, more specifically an agaricus fruiting body extract or an agaricus mycelium extract, (For example, atopic dermatitis, acne), which comprises administering an effective amount of the composition of the present invention to the skin.

피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(phtoaging) 두 가지로 나눌 수 있다[Gilchrest BA: J. Am. Acad. Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이다[Braverman IM 등: J. Invest. Dermatol., 78, 434-443(1982)]. 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다[Ridder GM등: J. Am. Acad. Dermatol., 25, 751-760(1991)]. 또한, 피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 활성산소종이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화 될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응이 일어나고, 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.Skin aging can be divided into two types: intrinsic (chronological aging) and phtoaging (Gilchrest BA: J. Am. Acad. Dermatol ., 21, 610-613 (1989)]. Endogenous aging is a naturally occurring aging phenomenon that is accompanied by decreased physiological function of the body as age increases [Braverman IM et al . : J. Invest. Dermatol ., 78, 434-443 (1982)]. Photoaging means that the skin is repeatedly exposed to light to change the appearance or function of the skin [Ridder GM et al . : J. Am. Acad. Dermatol ., 25, 751-760 (1991)]. In addition, skin aging can be caused by active oxygen species activated by ultraviolet rays, stress, disease states, environmental factors, wounds, and aging. When such conditions are deepened, the antioxidant defense network existing in the living body is destroyed, It damages tissues and promotes adult diseases and aging. More specifically, lipids, proteins, polysaccharides and nucleic acids, which are major constituents of the skin, are oxidized to destroy skin cells and tissues, resulting in skin aging. In particular, the oxidation of proteins causes severe hyperinflammation of collagen, hyaluronic acid, elastin, proteoglycans, and fibronectin, which are connective tissues of the skin, which interferes with skin elasticity. Mutation, cancer induction, and immune function.

그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부가 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다. 노화에는 활성산소종 뿐만 아니라 MMP(Matrix metalloprotease)라는 효소가 관여하는데 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포 외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 자외선 노출에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 자외선에 의해 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 지금까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 분해효소(MMP)의 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다.Therefore, it is necessary to protect the cell membranes by abolishing reactive oxygen species that are mediated by the body's metabolic processes, ultraviolet irradiation, and inflammatory reactions, and regenerate already damaged cells by active metabolism to proliferate the cells Can be restored and healthy skin can be maintained. Aging involves not only active oxygen species but also an enzyme called MMP (matrix metalloprotease). The synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen in vivo is appropriately controlled, but its synthesis decreases as aging progresses and the collagen- Expression of matrix metalloproteinases (MMPs) is promoted, and skin elasticity is lowered and wrinkles are formed. These degrading enzymes are also activated by exposure to ultraviolet light. Therefore, there is a demand for development of a substance capable of controlling the activation of MMP induced in the cell by ultraviolet light or inhibiting its activity. Until now, the raw materials used as cosmetic materials mostly inhibited only the activity of degrading enzyme (MMP).

한편, 멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 티로시나제의 작용에 의해 타이로신으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거처 생성된다. 멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비 조절에 중요한 기능을 나타낸다. 그러나, 멜라닌이 과잉생산되면 기미, 주근깨 등을 형성하고 피부노화를 촉진하며 피부암 유발에 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 멜라닌 과잉생산을 예방하기 위한 연구개발이 활발히 진행되고 있다. 이미 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되고 있으나 화장품 제형 중에서의 안정성이 나빠, 분해되어 착색되거나, 이취가 발생하거나, 생체 수준에서의 효능, 효과가 불분명하거나 또는 안전성이 문제가 되어 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.On the other hand, melanin is converted from tyrosine to dopa and dopaquinone by the action of tyrosinase existing in pigment cells, and is generated by dopachrome. Melanin is present in the skin, protects the body from ultraviolet light and has an important function in regulating hormone secretion in the body. However, when melanin is overproduced, it is known that it forms spots and freckles, promotes skin aging, and plays an important role in skin cancer induction. Therefore, research and development are actively conducted to prevent melanin overproduction. (Japanese Patent Laid-open No. 4-93050) and plant extracts inhibit tyrosinase (Japanese Patent Laid-open Publication No. 4-9320), hydroquinone (Japanese Patent Laid Open No. 6-192062), kojic acid Activity and is used as a whitening cosmetic, but its stability is poor in cosmetic formulations, it is decomposed to cause coloration, odor, or efficacy at a biological level, its effect is unclear, or its safety is a problem. to be.

한편, 아토피 피부염(atopic dermatitis)은 아토피 알러지를 가진 사람에게서 나타나는 대표적인 질환으로, 아직까지 아토피 피부염의 원인은 명확히 밝혀지지 않았지만 아토피 피부염 환자의 70%에서 아토피의 병력이 있었으며, 알레르기성 체질인 사람에서 호발하고, 특히 다른 알러지 질환인 알러지성 비염, 천식 등을 동반하기 때문에 유전적 요인에 의한 질병이나 면역 질환 중의 하나로 이해되고 있다. 아토피성 피부염의 치료에는, 높은 약리효과를 기대할 수 있는 부신피질 호르몬 등의 약재가 사용되고 있으나 부신피질 호르몬제의 부작용이 문제가 되고 있고, 부신피질 호르몬제의 사용 중지에 의하여 리바운드(약물의 사용정지 후에 일어나는 극적인 환부의 병세악화)가 생기는 것도 잘 알려져 있다. 이와 같이 부작용의 대책으로서, 부신피질 호르몬 등의 호르몬을 포함하지 않는 비스테로이드성 항염증제 또는 항히스타민제 등이 사용되고 있으나 완치가 어려운 상태이기 때문에 부작용이 없는 아토피 피부염의 개선제 또는 치료제 개발이 매우 절실한 실정이다.Atopic dermatitis is a common disease in people with atopic allergies. Although the cause of atopic dermatitis has not yet been clarified, atopic dermatitis has a history of atopy in 70% of the patients, And it is understood to be one of diseases caused by genetic factors or immune diseases because it is accompanied by allergic diseases such as allergic rhinitis and asthma. In the treatment of atopic dermatitis, medicines such as corticosteroids, which can expect high pharmacological effects, are used, but side effects of corticosteroids are problematic, and the use of corticosteroids causes the rebound It is also well-known that a later severe worsening of the affected part occurs. As a countermeasure for such side effects, a non-steroidal anti-inflammatory agent or an antihistamine agent which does not contain a hormone such as adrenocortical hormone is used but it is very difficult to develop a remedy or therapeutic agent for atopic dermatitis without side effects because it is difficult to cure.

최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연 추출물로부터 얻어진 항산화, 주름완화, 미백, 가려움 완화 등의 기능을 가진 기능성 화장료(Functional cosmetics)에 많은 관심이 집중되고 있다. 예를 들어, 미국 특허공보 US 5,972,341은 코미포라 무쿨(Commiphora mukul) 추출물의 주름개선 효과에 관하여, 일본특허공개 평9-672662는 히아루로니디아제(Hyaluronidase) 억제 효능을 가지는 해조류 추출물에 관하여, 일본특허공개 평10-85905는 와카메(Wakame)로부터 추출된 푸코이단(Fucoidan)의 피부감촉 개선효과에 관하여, 일본특허공개 평2-245087은 사르가숨(Sargassum) 속 추출물의 항산화 효과에 관하여, 대한민국 특허 제0431076호는 백급, 자소, 에키나시아 및 발효대두 추출물을 포함하는 아토피 피부의 치유 개선용 화장료 조성물을, 대한민국 특허 제0511494호는 하수오, 시엽, 일라이트를 포함하는 아토피 피부염 치료를 위한 추출물 및 조성물에 관해 개시하고 있다.Recently, much attention has been focused on functional cosmetics having functions such as antioxidation, wrinkle reduction, whitening, and itching relief obtained from natural extracts in order to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. For example, U.S. Patent No. 5,972,341 discloses a wrinkle-reducing effect of an extract of Commiphora mukul. Japanese Patent Application Laid-Open No. 9-672662 discloses an extract of seaweed having a hyaluronidase inhibitory effect, Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 2-245087 discloses an antioxidative effect of Sargassum sp. Extract on the skin texture improvement effect of Fucoidan extracted from Wakame, Patent No. 0431076 discloses a cosmetic composition for improving the healing of atopic skin including a white, black, echinacea, and fermented soybean extract, Korean Patent No. 0511494 discloses an extract and composition for treating atopic dermatitis including at least one of Hashuo, .

또한, 남성형 탈모증은 남성호르몬 의존적이어서 남성호르몬의 양에 직접적인 관계가 있으며, 이에 따라 최근 남성호르몬 활성억제를 통한 탈모의 예방 및 치료를 위한 많은 연구가 보고되고 있다. 한편, 남성호르몬의 분비상승에 의해 피지선의 기능이 활발해지면 생성된 과잉 피지가 모낭벽의 과각화로 인하여 모낭 내에 정체되면서 생기는 면포가 여드름의 초기단계이다. 남성호르몬에 의한 탈모 및 여드름의 기전을 설명하면, 5-알파-리덕타아제(5-α-Reductase)는 피지선, 모낭, 전립선, 부고환 등의 남성 호르몬 반응성 조직에 존재하는 남성 호르몬들 중 하나로서, 테스토스테론(testosterone)을 디하이드로 테스토스테론(dihydrotestosterone)으로 대사시키는데 관여하는 효소이며, 그 전환에는 NADPH를 필요로 한다. 또한, 테스토스테론은 남성 성충동, 골격근 증가, 남성외부생식기, 음낭성장, 정자형성 등에 관여하고, 디하이드로테스토스테론은 여드름, 피지 증가, 탈모 및 전립선 비대증 등의 해당 조직에 관여한다. 특히, 사춘기 이후에 남성 호르몬의 과량 분비는 여드름과 탈모를 유발하는데, 5-알파-리덕타아제에 의하여 생성되는 남성 호르몬의 활성형태인 디하이드로테스토스테론의 과량 생성을 막기 위해 5-알파-리덕타아제 억제제를 사용하여 탈모방지 및 여드름 방지제를 개발하려는 연구들이 활발히 진행되고 있다.In addition, male-pattern alopecia are male hormone-dependent and have a direct relationship with the amount of male hormone. Accordingly, many studies for prevention and treatment of alopecia through inhibition of male hormone activity have been reported. On the other hand, when the function of the sebaceous gland is activated by the increase of the secretion of the male hormone, the excess sebum produced in the hair follicle is stagnated in the hair follicle due to the overgrowth of the hair follicle wall. 5-alpha-Reductase is one of the male hormones present in male hormone reactive tissues such as sebaceous glands, hair follicles, prostate, and epididymis, as a result of male hormone-induced hair loss and acne. , An enzyme involved in the metabolism of testosterone into dihydrotestosterone, and requires NADPH for its conversion. In addition, testosterone is involved in male sexual dysfunction, skeletal muscle increase, male external genitalia, scrotum growth, spermatogenesis and the like, and dihydrotestosterone is involved in the relevant tissues such as acne, sebum increase, hair loss and enlargement of the prostate. In particular, after puberty, excessive secretion of male hormones causes acne and hair loss. To prevent excessive production of dihydrotestosterone, an active form of male hormone produced by 5-alpha-reductase, 5-alpha-reductase Studies have been actively conducted to develop anti-hair loss and anti-acne agents using an azide inhibitor.

이러한 피부의 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물 또는 약용과 식용버섯 추출물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 지금까지 알려진 버섯의 추출물을 이용한 화장료 조성물로서는 눈꽃동충하초(한국특허 제0340185호), 상황버섯, 치마버섯(한국특허 제0681703호, 제0295623호), 잎새버섯(한국특허 제0438009호), 표고버섯 등이 있으며 이들 추출물의 피부 노화방지 효과에 관한 연구가 계속되어 왔다.In order to solve such skin problems, many cosmetics using natural products or medicinal and edible mushroom extracts have recently been developed to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. As the cosmetic compositions using the mushroom extracts known so far, there have been proposed various cosmetic compositions such as snow flake (Korean Patent No. 0340185), Situ mushroom, Chima mushroom (Korean patent No. 0681703, No. 0295623), Leaf mushroom (Korean patent No. 0438009) And the research on the anti-aging effect of these extracts has been continued.

약용과 식용으로 사용되고 있는 버섯류들은 그 예와 종류가 무수히 많지만, 화장료 조성물로서 이용되고 연구되고 있는 버섯류들은 아직은 일부분으로 알려져 있다. Mushrooms which are used for medicinal and edible purposes are many examples and kinds, but mushrooms which are used and studied as cosmetic composition are still known as a part.

한편, 아위버섯(Pleurotus ferulae)은 중국의 아위라는 풀뿌리에서 생장함으로써 붙여진 이름이다. 비타민 A, E, D3 등이 풍부하고 느타리버섯 보다 단백질이 2배 정도 많으며, 식이섬유 함량이 높아서 다이어트 식품으로 좋다. 또한, 아위버섯은 큰느타리버섯 보다 비타민 함량이 6배 정도 많고 불포화 지방산인 리놀렌산 함량이 높으며, 아연과 철분 함량이 높아서 성인병 예방과 노화방지에 효과가 있다.On the other hand, Pleurotus ferulae is the name given by growing in the grass root of China. It is rich in vitamins A, E, D 3, and is twice as much protein as oyster mushroom, and is high in dietary fiber content. In addition, avium mushroom has 6 times more vitamin content than bigger mushroom, high content of linolenic acid which is unsaturated fatty acid, high zinc and iron content, and is effective in preventing adult diseases and preventing aging.

이러한 아위버섯에 대하여 아직까지 피부 외용제로서 피부 노화방지 효과, 미백효과, 피부자극 완화효과, 아토피 개선효과, 여드름 개선효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 개선효과 및 염증질환 예방 또는 치료효과를 나타내는지는 규명된 바가 전혀 없다.In addition to these anti-dandruff agents, anti-aging effect, whitening effect, skin irritation alleviation effect, atopic improvement effect, acne improvement effect, hair damage prevention effect, hair loss prevention and hair growth improvement effect and anti- No indication has been found.

대한민국 등록특허 제10-0438009호(잎새버섯 균사체의 추출물을 함유하는 화장료 조성물)에는 항산화 효과와 피부 세포의 증식 및 콜라겐의 생성촉진 효과와 피부 멜라닌생성 억제 효과가 있는 잎새버섯의 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 대해 기재되었으나, 이에는 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 이용하는 점에 대해서는 기재된 바 없다.Korean Patent No. 10-0438009 (a cosmetic composition containing an extract of mycelia of leaf mushrooms) has been reported to be useful as an antioxidant, an antioxidant, an antioxidant, an antioxidant, an antioxidant, The cosmetic composition containing the obtained extract has been described, but no description has been made on the use of the extract of Astragalus Fructus or the culture of Astragalus mushroom mycelium. 대한민국 등록특허 제10-0340185호(눈꽃동충하초 추출물을 함유하는 주름 방지용 화장료 조성물)에는 눈꽃동충하초의 추출물을 함유시킴으로써 주름방지에 우수한 화장료 조성물에 대해 기재되었으나, 이에는 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 이용하는 점에 대해서는 기재된 바 없다.Korean Patent No. 10-0340185 (a cosmetic composition for preventing wrinkles containing an extract of snow-flower Cordyceps sinensis) contains cosmetic composition excellent in prevention of wrinkles by containing an extract of Snow-flower Cordyceps, however, Is not used.

본 발명은 천연추출물을 이용하여 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부자극 완화, 여드름 방지, 아토피 개선 및 항염증의 효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과를 가지는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.The present invention relates to the use of natural extracts for the treatment of skin having antioxidation, promoting collagen synthesis, improving skin wrinkles, whitening, moisturizing, alleviating skin irritation, preventing acne, improving atopic appearance and antiinflammation, preventing hair damage, And an object of the present invention is to provide a composition for external application.

또한, 본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하고자 고등균류인 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양액으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.The present invention also provides a composition for external application for skin, which comprises, as an active ingredient, a culture solution obtained from an extract of Fusarium oxysporum fructus or an extract of Astragalus mushroom mycelium or a culture solution of Astragalus mushroom mycelium, There is a purpose.

또한, 본 발명은 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부자극 완화, 여드름 방지, 아토피 개선 및 항염증의 효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과를 복합적으로 가지는 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물을 효율 좋게 수득하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.In addition, the present invention relates to a composition for preventing or treating hair loss, which comprises a combination of antioxidant, collagen synthesis promotion, skin wrinkle improvement, whitening, moisturizing, skin irritation mitigation, acne prevention, atopic improvement and anti- It is an object of the present invention to provide a method for efficiently obtaining a fruit body extract or an agaricus mycelium extract.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a composition for external application for skin, which comprises as an active ingredient, a culture solution obtained from the culture of an extract of Fusarium oxysporum fructus or a fescue mycelium extract or a fescue mycelium.

이하 본 발명의 과제 해결 수단에 대해 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 외용제 조성물은 항산화 효과, 노화 방지 효과, 주름 개선효과, 피부 보습효과, 콜라겐 합성촉진효과, 미백효과, 아토피성 피부염 개선·예방 또는 치료 효과, 피부자극 완화효과, 염증질환 예방 또는 치료효과, 여드름 개선·예방 또는 치료효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 개선효과가 우수한 피부 외용제 조성물을 제공하기 위해, 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다. The composition for external application of the present invention is effective for preventing or treating atopic dermatitis, skin irritation mitigation effect, prevention or treatment of inflammation, antioxidative effect, anti-aging effect, wrinkle improvement effect, skin moisturizing effect, collagen synthesis promotion effect, whitening effect The present invention provides a composition for external application for skin which is excellent in the effect of preventing or treating acne, prevention of hair damage, prevention of hair damage, prevention of hair loss and improvement of hair growth, As a component.

본 발명의 아위버섯 자실체 추출물은 아위버섯 자실체를 추출하여 얻을 수 있는데, 여기서 아위버섯 자실체의 종류에는 특정의 종류에 한정되는 것은 아니며 자연채취된 것 또는 인공배양된 것 모두 사용할 수 있다. The fruiting body extract of the present invention can be obtained by extracting fruiting body fruiting body. Here, the kind of fruiting body fruiting body is not limited to a specific kind, but it can be either natural picked or artificially cultured.

또한, 본 발명의 아위버섯 자실체 추출물의 추출방법은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상 사용하는 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면, 아위버섯 자실체를 동결건조하고 분쇄하여 수득한 자실체 분말에 약 2배 내지 20배, 바람직하게는 약 2배 내지 5배의 물, 메탄올 또는 에탄올 등의 저급(C1-C4)알코올의 극성용매 또는 이들의 혼합용매로 10℃ 내지 30℃ 추출온도에서 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 열수 추출, 초음파 추출, 초고압 추출 등의 추출방법을 이용할 수 있다. In addition, the method of the present invention for extracting Fusarium oxysporum fructus may be a method commonly used in the art to which the present invention belongs. For example, it is preferable to add about 2 to 20 times, preferably about 2 to 5 times, water, lower (C1-C4) alcohol such as methanol or ethanol to the fruity body powder obtained by freeze- A polar solvent, or a mixed solvent thereof at an extraction temperature of 10 ° C to 30 ° C, such as cold extraction, reflux cooling extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction, and ultra-high pressure extraction.

또한, 바람직하게는 이와 같이 수득한 추출액을 여과, 감압농축 또는 동결건조하여 극성용매에 가용할 수 있다. 예를 들면, 수득된 추출액을 여과시킨 후, 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하고, 이렇게 얻어진 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 ~ 70.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출물을 제조할 수 있다. Further, preferably, the thus obtained extract can be filtered, concentrated under reduced pressure, or lyophilized to be soluble in a polar solvent. For example, the obtained extract is filtered and then transferred to a concentration tank and concentrated under reduced pressure at 50 DEG C or below and lyophilized. To obtain 0.001 to 70.0 wt% of the thus obtained reduced pressure concentrate and lyophilized product, purified water, ethanol, , And propylene glycol can be used to prepare an extract.

또한, 본 발명의 아위버섯 자실체 추출물은 이와 같이 얻어진 추출물에 유효성분으로 함유된 다당체 자체를 의미할 수도 있다.In addition, the fructose fructose extract of the present invention may also mean the polysaccharide itself contained as an active ingredient in the thus-obtained extract.

한편, 본 발명의 아위버섯 균사체 추출물은 아위버섯 균사체를 추출하여 얻은 것으로, 그 추출방법은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상 사용하는 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면, 아위버섯 균사체를 동결건조하고 분쇄하여 수득한 균사체 분말의 열수추출물 또는 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출한 유기용매 추출물일 수 있다.On the other hand, the extract of mycelia of mycelia of the present invention is obtained by extracting mycelium of mycelium of mackerel, and the extraction method can be a commonly used method in the technical field to which the present invention belongs. For example, it may be a hot-water extract of mycelial powder obtained by lyophilizing and pulverizing mycelia of mackerel, or an organic solvent extract obtained by using methanol, ethanol, butanol or a mixed solvent thereof.

한편, 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 그대로 사용하거나, 건조(또는 동결건조)하여 분말 형태로 사용할 수 있다. 바람직하게는 배양액을 여과하여 사용할 수도 있다. 구체적으로 아위버섯 균사체를 액체 배양한 후, 균사체를 원심분리를 통해 제거한 다음, 배양 여액을 종이필터로 여과하여 수득된 여과액을 사용할 수 있는 것이다. 이때, 배양은 '발효'를 포함하는 의미이다. On the other hand, the culture broth obtained from the cultivation of mycelium of mycelia may be used as it is, or dried (or lyophilized) to be used in powder form. Preferably, the culture solution may be used by filtration. Specifically, it is possible to use a filtrate obtained by subjecting mycelia to liquid culture, removing the mycelium through centrifugation, and filtering the culture filtrate with a paper filter. At this time, the culture means 'fermentation'.

또한, 본 발명의 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 상기 열수추출물, 상기 유기용매 추출물 또는 상기 여과액에서 추출된 다당체일 수도 있다.The culture solution obtained from the cultivation of the mycelia extract of mycelia or mycelia of the present invention may be a polysaccharide extracted from the hydrothermal extract, the organic solvent extract or the filtrate.

또한, 본 발명의 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 1종 이상의 동물 또는 식물 또는 생약재를 기질로 사용한 아위버섯 균사체의 추출물인 것이 바람직하다. 여기서, 상기 동물 또는 식물 또는 생약재는 특별히 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상 사용되는 동물 또는 식물 또는 생약재를 기질로 사용할 수 있다. In addition, the culture solution obtained from the cultivation of the agaricus mycelium extract or the agaricus mycelium of the present invention is preferably an extract of agaricus mycelium using at least one species of animal, plant or herbal medicine as a substrate. Herein, the animal, plant or herb medicine is not particularly limited, and an animal, a plant or a herbal medicine commonly used in the technical field of the present invention can be used as a substrate.

이와 같이 수득된 본 발명의 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 항산화 효과, 기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해효과, 기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현 억제효과, 프로콜라겐 생합성 촉진효과, 엘라스틴 생성 촉진효과, 미백효과, 염증유발관련 효소(hyaluronidase) 활성 억제효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과, 자외선 조사에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제 효과, 여드름균에 대한 항균효과, 아토피 피부염에 대한 항염증효과, 피부 자극 완화효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과가 매우 우수하여 다기능성 피부 외용제 조성물에 이용될 수 있다. The culture obtained from the thus obtained extract of Fagus fructus Fruit body extract or Fungus mushroom mycelium or the mycelia of Fungus mushroom of the present invention has antioxidant effect, inhibitory effect on substrate metalloproteinase (MMP-1) activity, substrate metal protease (MMP -1) expression suppressing effect, procolagen biosynthesis promoting effect, elastin production promoting effect, whitening effect, hyaluronidase activity inhibiting effect, cytotoxic relaxation effect by ultraviolet irradiation, inhibition of inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation , An antimicrobial effect against acne bacterium, an anti-inflammatory effect against atopic dermatitis, a skin irritation mitigation effect, a hair damaging effect, a hair loss prevention effect and a hair growth effect, Lt; / RTI >

한편, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 조성물 전체에 대해 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 0.001~90.0중량% 함유하는 것이 좋은데, 0.001중량% 미만으로 포함되는 경우에는 피부개선효과 등이 미미하고, 90.0중량%를 초과하는 경우에는 재료 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 못하기 때문이다. On the other hand, the composition for external application for skin of the present invention preferably contains 0.001 to 90.0% by weight of a culture solution obtained from the culture of an extract of Acanthopagaceae Fructus Fruit Body Extract or Acanthopagaceous Mycelium Extract or Astragalus Fructus Mycelium with respect to the whole composition, The skin improvement effect is insignificant, and when it exceeds 90.0% by weight, the efficiency with respect to the amount of the material is inferior, which is not economical.

한편, 본 발명에서 "유효성분으로 포함된다"는 의미는 본 발명의 피부 외용제 조성물로부터 피부질환의 예방 및 억제의 효과를 나타낼 수 있는 정도로, 피부 외용제 조성물에 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation) 되는 것을 포함하는 의미이다.In the present invention, the term "included as an active ingredient" means that the composition of the external preparation for skin of the present invention has an effect of preventing and inhibiting skin diseases, such as an extract of Astragalus Fructus or Astragalus mushroom mycelium Means that a culture solution obtained from culturing the mycelia of avian mushroom is added, and it is meant that various components are formulated into various forms by adding various components for drug delivery and stabilization.

한편, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 바람직하게 화장료 조성물인 것이 좋은데, 화장료 조성물의 제형으로는 일 예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 수중유형 또는 유중수형의 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 이 있다. Examples of the cosmetic composition include cosmetics, gels, water-soluble liquids, creams, essences, oil-in-water (O / W) O) type; A color cosmetic formulation consisting of an underwater type or a water-in-oil type makeup base, a foundation, a skin cover, a lipstick, a lip gloss, a face powder, a two way cake, an eye shadow, a cheek color and an eyebrow pencil; .

한편, 화장료 조성물은 가장 바람직하게 피부 미백용, 노화방지용, 피부자극완화용, 피부 보습용, 주름 개선용, 아토피 피부 개선용, 여드름 개선용, 모발손상 방지용 또는 탈모방지용인 것이 좋다.On the other hand, the cosmetic composition is most preferably used for skin whitening, anti-aging, skin irritation, skin moisturizing, wrinkle improvement, atopic skin improvement, acne improvement, hair damage prevention or hair loss prevention.

한편, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 바람직하게 약학 조성물인 것이 좋은데, 약학 조성물의 제형으로는 일 예로 경고제(PLASTERS), 로션제(LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 첩부제, 서방화제제가 있다. Meanwhile, the external composition for skin of the present invention is preferably a pharmaceutical composition. Examples of the pharmaceutical composition include PLASTERS, LOTIONS, LINIMENTS, LIQUIDS AND SOLUTIONS, AEROSOLS, EXTRACTS, OINTMENTS, FLUIDEXTRACTS, EMULSIONS, SUSPESIONS, CAPSULES, Creams, Soft or Hard Gelatin capsules, pastes, and sustained release preparations.

한편, 본 발명의 약학적 조성물은 약리학적으로 허용되는 기제; 운반제; 부형제; 전분, 트래거캔스 고무, 젤라틴, 당밀, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스를 포함하는 결합제; 한천, 전분, 젤라틴 가루, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨 및 알긴산 나트륨을 포함하는 분쇄제; 스테아린산 마그네슘, 활석 및 수첨 식물유를 포함하는 윤활제; 및 착색제 등을 포함할 수 있고, 상기 운반제 및 부형제로는 젖당, 글루코오스, 수크로오스, 만니톨, 감자녹말, 옥수수녹말, 탄산칼슘, 인산칼슘 및 셀룰로오스 등이 있다. 상기 외에도 안정화제, 용해보조제, 경피흡수 촉진제 등의 보조제 방향제, 방부제 등의 첨가제가 더 첨가될 수 있다.On the other hand, the pharmaceutical composition of the present invention comprises a pharmacologically acceptable base; Carrier; Excipients; Binders comprising starch, tragacanth gum, gelatin, molasses, polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylcellulose, methylcellulose, ethylcellulose and carboxymethylcellulose; A pulverizing agent comprising agar, starch, gelatin powder, carboxymethyl cellulose sodium, carboxymethyl cellulose calcium, crystalline cellulose, calcium carbonate, sodium hydrogen carbonate and sodium alginate; Lubricants including magnesium stearate, talc and hydrogenated vegetable oils; And a coloring agent. Examples of the carrier and excipient include lactose, glucose, sucrose, mannitol, potato starch, cornstarch, calcium carbonate, calcium phosphate, and cellulose. In addition to the above, additives such as stabilizers, solubilizers, perfume fragrances such as transdermal absorption accelerators, and preservatives may be further added.

한편, 많은 환자에게 본 발명인 피부 외용제 조성물에 대한 표준 투여량은 환자의 개별적 특성에 의해 그 양이 변화될 수 있으며, 실질적으로 숙련된 임상 의사는 환자를 위해 본 발명의 피부 외용제 조성물에 대한 이상적인 투여량 및 투여 계획, 예를 들어, 특정 필요 및 환자의 전체적인 조건의 관점에서 가장 적절한 치료 전략을 정할 수 있다. 본 발명의 피부 외용제 조성물에 대하여, 적절한 투여량을 결정하는 데는 수많은 참조 문헌을 참조할 수 있다. The standard dose of the composition for external application for skin of the present invention can be varied depending on the individual characteristics of the patient, and a practitioner skilled in the art will be able to make an ideal administration Amount and dosage regimen, for example, the most appropriate treatment strategy in terms of the particular need and the overall condition of the patient. For the dermal topical composition of the present invention, a number of references can be referred to in determining an appropriate dosage.

또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물의 적절한 투여량은 시험관 내 또는 동물 모델에서 일반적으로 결정될 수도 있다. 예를 들어, 시험관 내에서 표적 세포에 대해 여러 농도의 본 발명 피부 외용제 조성물을 첨가하여 그 적절한 투여량을 결정할 수도 있다. In addition, a suitable dose of the external skin application composition of the present invention may be generally determined in vitro or in an animal model. For example, various concentrations of the inventive skin topical composition may be added to the target cells in vitro to determine their proper dosage.

한편, 약학 조성물은 바람직하게 염증질환 예방 또는 치료용, 아토피 예방 또는 치료용 또는 여드름 예방 또는 치료용인 것이 좋다.On the other hand, the pharmaceutical composition is preferably used for preventing or treating an inflammatory disease, for preventing or treating atopy, or for preventing or treating acne.

본 발명에 의하면, 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 노화 방지, 피부 잔주름 개선, 피부 미백, 피부 보습, 피부자극 완화, 여드름 방지, 아토피 개선 및 항염증의 효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과를 복합적으로 발휘하는 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 수율 좋게 수득할 수 있고, 이를 이용하여 다기능성 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다. According to the present invention, it is possible to provide an anti-inflammatory agent which is effective for preventing oxidation of hair, preventing hair loss, promoting collagen synthesis, promoting collagen synthesis, aging prevention, skin whitening, skin whitening, skin moisturization, skin irritation mitigation, A multifunctional dermal external composition composition can be obtained by using the extract of Fusarium oxysporum fusiformis or the culture of Fusarium avifuscus mycelium in a high yield.

이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail in the following Examples. However, the scope of the present invention is not limited to the following embodiments, and includes modifications of equivalent technical ideas.

실시예 1: 아위버섯 자실체 추출물의 제조Example 1: Preparation of Fruiting Body Extract of Astragalus mushroom

아위버섯(Pleurotus ferulae) 자실체를 동결건조하고 분쇄하여 수득한 자실체 분말을 에탄올이 70%(v/v) 함유된 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조시킨 후, 수득된 동결 건조물을 15중량% 함유되도록 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜의 혼합용매에 용해시킴으로써 추출물(이하, '아위버섯 자실체 추출물'이라 칭함)을 제조하였다.
Pleurotus ferulae fruiting bodies were lyophilized and ground, and the resulting fruing body powder was refluxed for 3 hours in an aqueous solution containing 70% (v / v) ethanol, refluxed for 3 hours, Filtered through filter paper. The filtered extract was concentrated under reduced pressure at a temperature of 50 ° C or less and lyophilized and then dissolved in a mixed solvent of purified water, ethanol, butylene glycol and propylene glycol so that the lyophilized product was contained in an amount of 15% by weight to obtain an extract (hereinafter referred to as "Quot; extract ").

실시예 2: 아위버섯 균사체 추출물의 제조Example 2: Preparation of mycelium extract of Astragalus mushroom

실험에 사용된 아위버섯(Pleurotus ferulae) 균주는 신선한 자실체로부터 직접 분리하였으며, 아위버섯 균사체를 효모-맥아즙 한천배지(효모 추출물 3 g, 맥아즙 3 g, 포도당 10 g, 펩톤 5 g, 한천 20 g, 증류수 1 ℓ)가 든 시험관에 사면배양하여 4℃에 보관하고 1개월마다 계대배양하여 사용하였다. 상기 사면배지에서 자란 균사체를 무균적으로 균질화하고, 이를 포도당 3%, 효모 추출물 1.0%를 함유한 단순 복합 배지로 하며 pH 5.5로 조정한 액체배지에 5%(v/v)되게 접종한 후, 발효조 내에서 온도 27℃, 회전수 150 rpm, 통기량 1.5 vvm의 조건으로 10일간 배양하였다.The Pleurotus ferulae strain was directly isolated from fresh fruiting bodies. The mycelia of the fungus were collected from yeast-malt juice agar medium (3 g yeast extract, 3 g malt juice, 10 g glucose, 5 g peptone, 20 g agar g, 1 liter of distilled water), and stored at 4 ° C. Subsequent cultivation was carried out every month. The mycelia grown on the slope medium were aseptically homogenized and inoculated in a liquid medium adjusted to pH 5.5 to 5% (v / v) as a simple complex medium containing 3% glucose and 1.0% yeast extract, The mixture was incubated in a fermenter at a temperature of 27 ° C, a rotation speed of 150 rpm, and aeration amount of 1.5 vvm for 10 days.

배양완료 후, 균사체를 원심분리를 통해 회수한 후, 상기 실시예 1에 기재된 방법으로 추출하여 균사체 추출물(이하, '아위버섯 균사체 추출물'이라 칭함)을 제조하였다.
After completion of the cultivation, the mycelium was recovered by centrifugation, and then extracted with the method described in Example 1 to prepare a mycelial extract (hereinafter referred to as "mackerel mycelium extract").

실시예 3: 아위버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액의 제조Example 3: Preparation of culture liquid from cultivation of mycelium of mackerel

아위버섯(Pleurotus ferulae) 균주는 신선한 자실체로부터 직접 분리하였으며, 아위버섯 균사체를 효모-맥아즙 한천배지(효모 추출물 3 g, 맥아즙 3 g, 포도당 10 g, 펩톤 5 g, 한천 20 g, 증류수 1 ℓ)가 든 시험관에 사면배양하여 4℃에 보관하고 1개월마다 계대배양하여 사용하였다. 상기 사면배지에서 자란 균사체를 무균적으로 균질화하고, 이를 포도당 3%, 효모 추출물 1.0%를 함유한 단순 복합 배지로 하며 pH 5.5로 조정한 액체배지에 5%(v/v)되게 접종한 후, 발효조 내에서 온도 27℃, 회전수 150 rpm, 통기량 1.5 vvm의 조건으로 10일간 배양하였다.The Pleurotus ferulae strain was directly isolated from fresh fruiting bodies and the mycelia of the fungus were transferred to yeast-malt juice agar medium (yeast extract 3 g, malt juice 3 g, glucose 10 g, peptone 5 g, agar 20 g, distilled water 1 ℓ), and stored at 4 ° C, and subcultured every month. The mycelia grown on the slope medium were aseptically homogenized and inoculated in a liquid medium adjusted to pH 5.5 to 5% (v / v) as a simple complex medium containing 3% glucose and 1.0% yeast extract, The mixture was incubated in a fermenter at a temperature of 27 ° C, a rotation speed of 150 rpm, and aeration amount of 1.5 vvm for 10 days.

배양완료 후, 균사체를 원심분리를 통해 제거한 배양여액을 종이필터 (watman no.4)로 여과하여 여과액을(이하, '아위버섯 균사체 배양액'이라 칭함) 수득하였다.
After the completion of the cultivation, the mycelium was removed by centrifugation, and the culture filtrate was filtered with a paper filter (watman no. 4) to obtain a filtrate (hereinafter referred to as a "culture of avium mushroom mycelium").

실험예 1: NBT을 이용한 항산화 효과 측정Experimental Example 1: Measurement of antioxidative effect using NBT

본 실험예에서는 NBT법을 이용하여 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 항산화 효과를 측정하고자 하였다. In this experimental example, the antioxidant activity of the mugwort fruit body extract obtained in Example 1, the mugwort mugwort mugwort extract obtained in Example 2 and the mugwort mugwort culture obtained in Example 3 were measured using the NBT method Respectively.

NBT법은 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시키고, 생성된 활성산소와 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)이 반응하여 생성된 청색을 파장 560 nm에서 측정하는 방법이다. 본 실험예에서는 하기와 같은 방법으로 활성산소 소거율을 측정하였다. 또한, 항산화제로 잘 알려진 BHT를 양성대조군으로 하였다.The NBT method is a method in which active oxygen is produced by xanthine and xanthine oxidase, and blue produced by reacting the produced active oxygen with Nitro Blue Tetrazolium (NBT) is measured at a wavelength of 560 nm. In this Experimental Example, the active oxygen scavenging rate was measured in the following manner. BHT, well known as an antioxidant, was used as a positive control.

바이엘병에 0.05 M의 탄산나트륨(Na2CO3) 2.4 ㎖, 3 mM의 크산틴 용액 0.1 ㎖, 3 mM의 EDTA 용액 0.1 ㎖, BSA 용액 0.1 ㎖, 0.72 mM의 NBT 용액 0.1 ㎖를 가하고 여기에 시료용액을 각각 0.025, 0.05, 0.1, 0.25중량%를 첨가한 후, 25℃에서 10분간 방치하였다. 방치 후, 크산틴옥시다제 용액 0.1 ㎖를 가하여 빠르게 교반한 다음, 25℃에서 20분간 배양 하였고, 여기에 6 mM의 염화구리(CuCl2) 용액 0.1 ㎖를 가하여 반응을 정지시키고 560 nm에서의 흡광도(St)를 측정하였다. 공시험은 시료용액 대신 증류수를 사용한 것으로, 상기와 동일한 방법으로 흡광도(Bt)를 측정하였다. 시료용액의 블랭크(Blank)는 크산틴옥시다제 용액 대신 증류수를 사용해 상기와 동일한 방법으로 흡광도(Bo)를 측정하였다. 또한, 활성산소 소거율(%)은 하기 수학식 1에 의하여 산출하였다.
2.4 ml of sodium carbonate (Na 2 CO 3 ), 0.1 ml of 3 mM xanthine solution, 0.1 ml of 3 mM EDTA solution, 0.1 ml of BSA solution and 0.1 ml of 0.72 mM NBT solution were added to Bayer's disease, 0.025, 0.05, 0.1 and 0.25% by weight, respectively, and left at 25 캜 for 10 minutes. After incubation, 0.1 ml of xanthine oxidase solution was added, and the mixture was rapidly stirred. Then, the mixture was incubated at 25 ° C for 20 minutes, and then 0.1 ml of a 6 mM copper chloride (CuCl 2 ) solution was added to stop the reaction. (St). The blank test was performed using distilled water instead of the sample solution, and the absorbance (Bt) was measured in the same manner as described above. The blank of the sample solution was measured for absorbance (Bo) in the same manner as above using distilled water instead of xanthine oxidase solution. In addition, the active oxygen scavenging ratio (%) was calculated by the following equation (1).

[수학식 1][Equation 1]

활성산소 소거율(%) = [1-(St-So)/(Bt-Bo)] × 100Active oxygen scavenging rate (%) = [1- (St-So) / (Bt-Bo)] 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560 ㎚에서의 흡광도St: Absorbance at 560 nm after enzyme reaction of sample solution

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560 ㎚에서의 흡광도Bt: Absorbance at 560 nm after enzyme reaction of blank test solution

So : 효소 무첨가 시료용액의 효소 반응 전의 560 ㎚에서의 흡광도So: absorbance at 560 nm before enzymatic reaction of enzyme solution-free sample solution

Bo : 효소 무첨가 공시험용액의 효소 반응 전의 560 ㎚에서의 흡광도
Bo: Absorbance at 560 nm before enzymatic reaction of enzyme-free blank test solution

시료명Name of sample 활성산소 소거율(항산화 효과;%)Active oxygen scavenging rate (antioxidant effect;%) 아위버섯 자실체 추출물 0.25중량%0.25 wt% 9595 아위버섯 자실체 추출물 0.1중량%0.1% by weight of Fusarium oxysporum fructus extract 9292 아위버섯 자실체 추출물 0.05중량%0.05% by weight of fusarium oxysporum fructus extract 7878 아위버섯 자실체 추출물 0.025중량%0.025% 4141 BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 8989

시료명Name of sample 활성산소 소거율(항산화 효과;%)Active oxygen scavenging rate (antioxidant effect;%) 아위버섯 균사체 추출물 0.25중량%0.25 wt% 9494 아위버섯 균사체 추출물 0.1중량%0.1% by weight of mycelium extract 9090 아위버섯 균사체 추출물 0.05중량%0.05% by weight of mycelium extract 7676 아위버섯 균사체 추출물 0.025중량%0.025% < tb > 4242 BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 8989

시료명Name of sample 활성산소 소거율(항산화 효과;%)Active oxygen scavenging rate (antioxidant effect;%) 아위버섯 균사체 배양액 0.25중량%0.25 wt% 9494 아위버섯 균사체 배양액 0.1중량%0.1% by weight of a culture of mycelium mycelia, 9191 아위버섯 균사체 배양액 0.05중량%0.0 >% < / RTI > 7575 아위버섯 균사체 배양액 0.025중량%0.025% 3939 BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 8989

NBT법을 이용하여 항산화 효과를 측정한 결과(표 1 내지 표 3), BHT와 같은 농도에서 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 BHT보다 우수한 항산화효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있었다.The antioxidative effect was measured using the NBT method (Table 1 to Table 3), and it was confirmed that the antioxidative effect of the mugwort fruiting body extract, the mugwort mushroom mycelium extract and the mugwort mushroom mycelial body exerts better antioxidative effects than the BHT there was.

상기의 결과로부터 본 발명의 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 항산화효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 피부외용제 조성물의 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it can be confirmed that the antioxidative effect of the extract of Astragalus mushroom Fruit body extract, Astragalus mushroom mycelium extract, and Astragalus mushroom mycelium of the present invention is excellent, and that the excellent antioxidative effect of the composition for external application for skin of the present invention can be confirmed therefrom.

실험예 2: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정Experimental Example 2: Measurement of antioxidative effect by DPPH method

본 실험예에서는 DPPH법을 이용하여 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 항산화 효과를 측정하고자 하였다.In the present Experimental Example, the antioxidative effect of the extract of the mugwort fruiting body obtained in Example 1 above, the mugwort mushroom mycelial extract obtained in Example 2 and the mugwort mushroom culture obtained in Example 3 were measured using the DPPH method Respectively.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 자유라디칼 소거활성을 측정하는 방법이다. 본 실험예에서는 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560 nm에서 자유라디칼 소거율을 측정하였으며, 측정방법은 하기와 같았다. 또한, 항산화제로 잘 알려진 BHT를 양성대조군으로 하였다.The DPPH method is a method of measuring free radical scavenging activity by reducing power using a free radical called DPPH (2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl free radical). In this Experimental Example, the degree of reduction of the absorbance by DPPH reduction by the test substance was compared with the absorbance of the blank test solution, and the free radical scavenging rate was measured at a wavelength of 560 nm. BHT, well known as an antioxidant, was used as a positive control.

0.025, 0.05, 0.1, 0.25중량% 농도의 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 준비한 후, 각각 96-웰 프레이트에 넣었다. 여기에 100 uM 메탄올용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200 ㎕가 되도록 하였다. 이것을 37℃에서 30분간 방치한 후, 560 nm에서 흡광도(St)를 측정하고 하기 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거활성(%)을 산출하였다.
0.025, 0.05, 0.1, and 0.25 wt%, respectively, were prepared and then placed in a 96-well plate, respectively. To this was added DPPH prepared from 100 uM methanol solution so that the total volume of the solution became 200 μl. After standing at 37 캜 for 30 minutes, the absorbance (St) was measured at 560 nm and the free radical scavenging activity (%) was calculated using the following equation (2).

[수학식 2]&Quot; (2) "

자유라디칼 소거활성(%)={100-(B/A)} × 100Free radical scavenging activity (%) = {100- (B / A)} 100

A: 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도A: Absorbance of the control well without treatment of the fruit body extract of Ai mushroom Fruit body extract or Astragalus mushroom mycelial body extract or Astragalus mushroom mycelium

B: 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 처리한 실험군 웰의 흡광도
B: Absorbance of the test group well treated with the extract of Fusarium oxysporum fucus or Fusarium oxysporum f.

시료명Name of sample 자유라디칼 소거율(항산화 효과;%)Free radical scavenging ratio (antioxidant effect;%) 아위버섯 자실체 추출물 0.25중량%0.25 wt% 9595 아위버섯 자실체 추출물 0.1중량%0.1% by weight of Fusarium oxysporum fructus extract 9393 아위버섯 자실체 추출물 0.05중량%0.05% by weight of fusarium oxysporum fructus extract 8888 아위버섯 자실체 추출물 0.025중량%0.025% 6464 BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 8585

시료명Name of sample 자유라디칼 소거율(항산화 효과;%)Free radical scavenging ratio (antioxidant effect;%) 아위버섯 균사체 추출물 0.25중량%0.25 wt% 9494 아위버섯 균사체 추출물 0.1중량%0.1% by weight of mycelium extract 9191 아위버섯 균사체 추출물 0.05중량%0.05% by weight of mycelium extract 8686 아위버섯 균사체 추출물 0.025중량%0.025% < tb > 6161 BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 8585

시료명Name of sample 자유라디칼 소거율(항산화 효과;%)Free radical scavenging ratio (antioxidant effect;%) 아위버섯 균사체 배양액 0.25중량%0.25 wt% 9191 아위버섯 균사체 배양액 0.1중량%0.1% by weight of a culture of mycelium mycelia, 8989 아위버섯 균사체 배양액 0.05중량%0.0 >% < / RTI > 8282 아위버섯 균사체 배양액 0.025중량%0.025% 5959 BHT 0.1중량%BHT 0.1 wt% 8585

DPPH법을 이용하여 항산화 효과를 측정한 결과(표4 내지 표 6), BHT와 같은 농도에서 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 BHT 보다 우수한 항산화 효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있었다.The antioxidative effect was measured using the DPPH method (Tables 4 to 6), and it was confirmed that the extracts of Fusarium oxysporum fructus, Fusarium orientalis and Fusarium oxysporum sp. there was.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm the excellent antioxidative effect of the fungal body extract of Ai mushroom, the mycelium extract of Astragalus mushroom and the culture of mycelium of Astragalus mushroom, and the excellent antioxidative effect of the composition for external application for skin of the present invention can be confirmed therefrom.

실험예 3: 세포 내 활성산소 소거 효과 측정Experimental Example 3: Measurement of reactive oxygen scavenging effect in cells

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 자외선에 의해 세포 내에서 생성되는 활성산소의 소거 효과를 측정하고자 하였다.In this Experimental Example, the extracts of the mushroom fruiting body obtained in Example 1, the mushroom mycelium extract obtained in Example 2 and the mushroom mycelial culture obtained in Example 3 were irradiated with UV The effect of erasure was investigated.

본 실험예에서 사용한 세포주는 독일 암연구센터의 퓌세니그 박사(Dr. Fusenig)로부터 분양받은 인간 각질세포 HaCaT 세포주(Human keratinocytes HaCaT cell line)로서 이를 형광측정용 96-웰 블랙 플레이트(well black plate)에 웰당 2.0 × 104개로 분주하고 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)이 첨가된 DMEM(Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS 10%, Gibco, USA)배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 1일간 배양한 후, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 0.005, 0.01, 0.02중량% 농도로 처리하였다.The cell line used in the present experiment was a human keratinocyte HaCaT cell line, which was purchased from Dr. Fusenig of the German Cancer Research Center and was used as a 96-well black plate for fluorescence measurement ) Were dispensed in 2.0 × 10 4 cells per well and cultured in DMEM (Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS 10%, Gibco, USA) supplemented with penicillin / streptomycin at 37 ° C. in 5% CO 2 , And then treated with 0.005, 0.01 and 0.02% by weight of fungal body extract, fungal mycelia extract and fungal mycelia.

시험시료를 넣고 24시간 배양한 후, HCSS(HEPES-buffered control salt solution)로 세척하여 남아있는 배지를 제거하고 HCSS에 20 μM로 준비된 DCFH-DA (2',7'- dichlorodihydro-fluorescein diacetate, Molecular Probes, USA)를 100 ㎕ 가하고 37℃, 5% CO2 조건에서 20분간 배양한 후, HCSS로 세척하였다. 이후 농도별로 처리된 HCSS를 100 ㎕ 가한 후, 초기에 활성산소로 산화된 DCF(dichlorofluorescein)의 형광도를 형광플레이트리더(Ex;485 nm, Em;530 nm)로 측정하였다. 이후 UVB(20 mJ/cm2)를 조사하고 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 0.005, 0.01, 0.02중량%의 농도로 처리한 후, 형광플레이트 리더(Ex;485 nm, Em;530nm)를 사용하여 형광도를 측정하였다. 이때, 강력한 항산화작용이 있다고 알려진 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG, Epigallocatechin gallate)를 양성대조군으로 하였다.
The test samples were incubated for 24 hours and then washed with HCSS (HEPES-buffered control salt solution) to remove the remaining medium. DCFH-DA (2 ', 7'-dichlorodihydro-fluorescein diacetate, Probes, USA) was added, and the cells were incubated at 37 ° C and 5% CO 2 for 20 minutes, followed by washing with HCSS. After the addition of 100 μl of the treated HCSS, the fluorescence of DCF (dichlorofluorescein) initially oxidized to active oxygen was measured with a fluorescent plate reader (Ex: 485 nm, Em: 530 nm). The cells were treated with UVB (20 mJ / cm 2 ), treated with the concentrations of 0.005, 0.01 and 0.02 wt%, respectively, and the fluorescence plate reader (Ex: 485 nm , Em: 530 nm). At this time, Epigallocatechin gallate (EGCG), which is known to have strong antioxidant activity, was used as a positive control.

시료명Name of sample 활성산소 소거효과(%)Effect of active oxygen scavenging (%) 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%0.02 wt% 5656 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%0.0 >% < / RTI > 4949 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 2323 EGCG 0.01중량%EGCG 0.01 wt% 4545

시료명Name of sample 자유라디칼 소거율(항산화 효과;%)Free radical scavenging ratio (antioxidant effect;%) 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%0.02% by weight of mycelium extract 5555 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%0.01% by weight of mycelium extract 4949 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 2222 EGCG 0.01중량%EGCG 0.01 wt% 4545

시료명Name of sample 자유라디칼 소거율(항산화 효과;%)Free radical scavenging ratio (antioxidant effect;%) 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%0.02 wt% 5555 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%0.01 wt% 4747 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%0.005 wt% 1919 EGCG 0.01중량%EGCG 0.01 wt% 4545

활성산소 소거 효과를 측정한 결과(표 7 내지 표 9), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 EGCG와 동일한 농도에서 EGCG 보다 높은 활성산소 소거율을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.As a result of measurement of the active oxygen scavenging effect (Tables 7 to 9), it was confirmed that both the AE mushroom fruit body extract, the AE mushroom mycelium extract and the AE mushroom mycelium culture solution exhibited higher R O 2 scavenging rates than EGCG at the same concentration as EGCG.

상기의 결과로부터 본 발명의 유효성분인 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 활성산소 소거효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 활성산소 소거 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it can be concluded from the results of the present invention that the active ingredient of the present invention is an extract of Fusarium oxysporum fucicum, an extract of Fusarium orientalis, It was possible to confirm the excellent effect of scavenging the active oxygen of the culture medium, and it was confirmed that the excellent effect of scavenging the active oxygen of the composition for external application for skin of the present invention.

실험예 4: 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해율 측정(Experimental Example 4: Measurement of Inhibitory Activity of Metal Protease (MMP-1) in vitro)in vitro)

본 실험예에서는 형광분석법을 이용하여 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 생체 외(in vitro)에서 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해율을 측정하고자 하였다.In this Experimental Example, the fluorescence analysis was performed to determine the concentration of the fungal body extract obtained in Example 1, the fungal mycelia extract obtained in Example 2, and the fungal mycelia culture obtained in Example 3 in vitro (MMP-1) activity inhibition rate in the rat.

실험에 사용한 기질은 형광물질이 표지된 디큐-콜라겐(DQ-Collagen)을 사용하였고, 효소는 몰레큘러 프로브(Molecular probe, Eugene, OR, USA)에서 시판중인 콜라게나제(collagenase)를 사용하였으며, 반응완충액{0.5 M Tris-HCl, 1.5 M NaCl, 50 mM CaCl2, 2 mM 아지드화나트륨(sodium azide), pH 7.6}은 10배 희석 후 사용하였다. 반응완충액 100 ㎕에 0.25 ㎎/㎖로 반응완충액에 용해한 디큐 콜라겐(DQ collagen) 20 ㎕, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액(0.005, 0.01, 0.02중량%) 40 ㎕를 각각 첨가하고 0.5 unit으로 희석한 콜라게나제(collagenase) 40 ㎕를 첨가하였다. 암소, 실온에서 20분 경과 후, 형광 분광광도계(Perkin Elmer, UK)를 이용하여 흡수파장 495 nm, 방출파장 515 nm로 형광 값을 측정하였다. 또한, 녹차추출물을 양성대조군으로 하였다. 대조군은 효소액 대신 반응완충액을 효소와 동량 첨가한 후, 형광값을 측정하였으며 시료 자체의 형광값도 측정하여 효소활성 계산시 이용하였다.
DQ-Collagen labeled with a fluorescent substance was used as a substrate for the experiment, and commercially available collagenase was used as a enzyme in a molecular probe (Molecular probe, Eugene, OR, USA) The reaction buffer (0.5 M Tris-HCl, 1.5 M NaCl, 50 mM CaCl 2 , 2 mM sodium azide, pH 7.6) was used after 10-fold dilution. 20 μl of DQ collagen dissolved in a reaction buffer at a concentration of 0.25 mg / ml in the reaction buffer solution, 40 μl of a culture solution of Acanthopagaceae Fructus Extract, Acanthopagaceous Mycelium Extract and Astragalus Mycelia (0.005, 0.01, 0.02% by weight) And 40 [mu] l of 0.5 unit diluted collagenase was added. After 20 minutes at room temperature, the cow was measured for fluorescence with an absorption wavelength of 495 nm and an emission wavelength of 515 nm using a fluorescence spectrophotometer (Perkin Elmer, UK). Green tea extract was used as a positive control. In the control group, fluorescence value was measured after addition of enzyme buffer in the same amount as the enzyme buffer, and the fluorescence value of the sample itself was also measured to calculate the enzyme activity.

시료명Name of sample MMP-1 활성 저해율(%)MMP-1 activity inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%0.02 wt% 7373 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%0.0 >% < / RTI > 5959 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 4040 녹차추출물 0.2중량%Green tea extract 0.2 wt% 6868

시료명Name of sample MMP-1 활성 저해율(%)MMP-1 activity inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%0.02% by weight of mycelium extract 7474 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%0.01% by weight of mycelium extract 5656 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 4141 녹차추출물 0.2중량%Green tea extract 0.2 wt% 6868

시료명Name of sample MMP-1 활성 저해율(%)MMP-1 activity inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%0.02 wt% 7171 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%0.01 wt% 5858 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%0.005 wt% 3737 녹차추출물 0.2중량%Green tea extract 0.2 wt% 6868

생체 외(in vitro)에서 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해율을 측정한 결과(표 10 내지 표 12), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 녹차추출물에 비해 낮은 농도에서 금속단백질분해효소(MMP-1)의 활성을 효과적으로 저해하는 것을 확인할 수 있었다.The inhibitory activity of metalloproteinase (MMP-1) activity in vitro was measured (Table 10 to Table 12), and the results are shown in Table 10, (MMP-1) at a concentration of 1 mM or less.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해효과가 우수함을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물은 금속단백질분해효소를 효과적으로 저해함으로써 피부의 탄력 저하 및 주름 형성을 예방할 수 있음을 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the effect of inhibiting the metalloproteinase (MMP-1) activity of the fungal body extract of Ai mushroom, the mycelium extract of Astragalus mushroom and the mycelia culture of Astragalus mushroom was excellent, It was confirmed that the skin elasticity and wrinkle formation can be prevented by effectively inhibiting the degrading enzyme.

실험예 5: 자외선 조사 후 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현억제 정도 측정Experimental Example 5: Measurement of inhibition of metalloproteinase (MMP-1) expression after UV irradiation

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 자외선 조사 후 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현억제 정도를 측정하고자 하였다. In the present experimental example, the ultrafiltration metalloproteinase (MMP-1) of the fungal body extract obtained in Example 1, the fungal mycelia extract obtained in Example 2 and the fungal mycelia culture obtained in Example 3, 1) expression level.

UV 조사 및 시료 첨가(아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액, 레티놀) 후, 금속단백질분해효소(MMP-1) 농도를 측정하기 위해서 효소면역 시험법(ELISA)을 수행하였다.Enzyme immunoassay (ELISA) was performed to measure the concentration of metalloproteinases (MMP-1) after UV irradiation and sample addition (mugwort fruiting body extract or mugwort mushroom mycelium extract or retinol mussel culture, retinol).

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 6.3 J/㎠의 에너지로 조사하였고, 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였고, UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후, 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양한 다음, 배지를 회수하여 96-웰 플레이트에 코팅하였다. 일차항체{MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체}를 처리하고 37℃에서 60분 동안 반응시켰다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1 mg/㎖ ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였고, 양성대조군으로는 레티놀을 사용하였다.
UVA was irradiated to human dermal fibroblasts at an energy of 6.3 J / cm 2 using a UV chamber, and ultraviolet irradiation dose and incubation time were measured by preliminary experiments to determine the maximum amount of metalloproteinase (MMP-1) Respectively. The negative control was wrapped in silver foil and kept in the UVA environment for the same time, and the UVA emission was measured using a UV radiometer. The cells while UVA was irradiated were irradiated with UVA, and then cultured for 24 hours in a medium containing the sample. Then, the medium was recovered and coated on a 96-well plate. The primary antibody {MMP-1 (Ab-5) monoclonal antibody} was treated and reacted at 37 DEG C for 60 minutes. After incubating for 60 minutes with a secondary antibody, anti mouse IgG (alkaline phosphatase conjugated), the alkaline phosphatase substrate solution (1 mg / ml ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer) was reacted at room temperature for 30 minutes, Absorbance was measured at 405 nm with a plate reader. As a control group, no sample was used and retinol was used as a positive control group.

시료명Name of sample MMP-1 발현억제율(%)MMP-1 expression inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%0.02 wt% 6666 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%0.0 >% < / RTI > 3131 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 1919 레티놀 0.02중량%0.02% by weight of retinol 3636

시료명Name of sample MMP-1 발현억제율(%)MMP-1 expression inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%0.02% by weight of mycelium extract 6565 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%0.01% by weight of mycelium extract 3232 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 2222 레티놀 0.02중량%0.02% by weight of retinol 3636

시료명Name of sample MMP-1 발현억제율(%)MMP-1 expression inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%0.02 wt% 6565 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%0.01 wt% 3333 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%0.005 wt% 2121 레티놀 0.02중량%0.02% by weight of retinol 3636

자외선 조사 후 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현억제 정도를 측정한 결과(표 13 내지 표 15), 시료를 처리하지 않은 대조군에 반해 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 우수한 억제율을 보였는데, 이는 양성대조군인 레티놀의 억제율에 비해서도 상당히 우수한 결과였다.(MMP-1) expression levels after UV irradiation (Table 13 to Table 15). As a result, in comparison with the untreated control group, the extracts of Fusarium oxysporum fructus, Fusarium oxysporum fructus and Fusarium oxysporum fusiformis , Which was significantly better than the inhibition rate of retinol, a positive control.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현 억제효과가 우수함을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물은 금속단백질분해효소의 발현을 효과적으로 억제함으로써 피부의 탄력 저하 및 주름 형성을 예방할 수 있음을 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the effect of inhibiting the metalloproteinase (MMP-1) expression inhibition of the Ai mushroom fruit body extract, the Ai mushroom mycelium extract and the Ai mushroom mycelium culture medium was excellent, It was confirmed that the skin elasticity and wrinkle formation can be prevented by effectively inhibiting the expression of the degrading enzyme.

실험예 6: 타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진효과 측정Experimental Example 6: Measurement of promoting effect of type 1 procollagen biosynthesis

본 실험예에서는 프로콜라겐 분석(procollagen assay)을 통하여 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 피부기질 성분인 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 확인하고자 하였다.In this Experimental Example, a procollagen assay was conducted to determine the concentration of the extract of the mussel mugwort flesh obtained in Example 1, the mussel mycelium extract obtained in Example 2, and the skin of the mussel mycelium culture obtained in Example 3 And to promote the biosynthesis of type 1 procollagen as a substrate component.

신생아의 표피조직에서 분리한 사람진피섬유아세포(human dermal fibroblast)는 Modern Tissue Technology(MTT, Korea)로부터 분양받아 DMEM/F-12(3:1) 배지에 10% 우태아혈청(FBS)을 첨가하여 1×104 cell/cm2농도로 배양하였다. 80% 정도 자라면 1:3의 비율로 분주하여 계대 배양하였고, 4차 계대 배양된 세포를 실험에 이용하였다.Human dermal fibroblasts isolated from the epidermal tissue of newborns were purchased from Modern Tissue Technology (MTT, Korea) and supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) in DMEM / F-12 (3: And cultured at a concentration of 1 × 10 4 cells / cm 2 . When 80% of the cells were grown, the cells were subcultured at a ratio of 1: 3, and the fourth subcultured cells were used for the experiment.

프로콜라겐의 양을 측정하는 실험을 위해서 섬유아세포를 48-웰 플레이트(well plate)에 90% 이상 배양한 후, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 0.005, 0.01, 0.02중량% 농도로 각각 가하고, 24시간이 지난 후, 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐타입-1C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit, MK101, Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다. 또한, 양성대조군으로 TGF-β를 사용하였다.
For the experiment for measuring the amount of procollagen, fibroblasts were cultured in a 48-well plate at a concentration of 90% or more, and then 0.005, 0.01, 0.02% by weight of the extract of Fusarium oxysporum fructus, The amount of procollagen liberated in the medium after 24 hours was measured using a procollagen type-1 C-peptide EIA kit (MK101, Takara, Japan) Respectively. In addition, TGF-β was used as a positive control.

시료명Name of sample 프로콜라겐 생합성촉진효과(%)Promoting effect of procollagen biosynthesis (%) 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%0.02 wt% 143143 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%0.0 >% < / RTI > 134134 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 126126 TGF-β 0.001중량%TGF-beta 0.001 wt% 125125

시료명Name of sample 프로콜라겐 생합성촉진효과(%)Promoting effect of procollagen biosynthesis (%) 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%0.02% by weight of mycelium extract 145145 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%0.01% by weight of mycelium extract 136136 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 128128 TGF-β 0.001중량%TGF-beta 0.001 wt% 125125

시료명Name of sample 프로콜라겐 생합성촉진효과(%)Promoting effect of procollagen biosynthesis (%) 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%0.02 wt% 148148 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%0.01 wt% 137137 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%0.005 wt% 129129 TGF-β 0.001중량%TGF-beta 0.001 wt% 125125

프로콜라겐 생합성 촉진효과를 측정한 결과(표 16 내지 표 18), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액은 세포신호전달 물질 TGF-β와 유사한 효과를 나타내었다.As a result of measuring the promoting effect of procollagen biosynthesis (Table 16 to Table 18), the extract of Fusarium oxysporum fructus, the extract of Fusarium oxysporum and the culture of Fusarium sp. Mucus showed similar effects to the cell signaling substance TGF-β.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 프로콜라겐 생합성 촉진효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 피부외용제 조성물의 우수한 피부노화 개선효과를 확인할 수 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the extract of Ai mushroom fruiting body, the extract of Astragalus mushroom mycelium and the culture of Astragalus mushroom mycelium promoted excellent procoagulant biosynthesis, and it was confirmed that the skin external application composition of the present invention has a good skin aging improving effect.

실험예 7: 엘라스타제 활성 억제효과 측정Experimental Example 7: Measurement of inhibitory effect of elastase activity

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 엘라스타제 활성 억제효과를 측정하고자 하였다. In this Experimental Example, the effect of inhibiting the elastase activity of the egg plant mushroom extract obtained in Example 1, the egg mushroom mycelial extract obtained in Example 2 and the egg mushroom mycelial culture obtained in Example 3 was measured .

사람의 섬유 아세포를 배양용 플라스크에 넣고 80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이후, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 1일간 각각 처리한 후, 세포배양액을 채취하여 상업적으로 이용 가능한 엘라스틴 측정기구를 이용하여 엘라스틴 생성 정도를 측정하였다[Bieth J: Biochem med., 11, 350-357(1974), Schwartz DE: J.Invest Dermatol., 86, 63-68(1986)]. 즉, 엘라스타제의 기질인 Suc-(Ala) 3 NA의 NA가 분해되면서 생기는 색의 변화를 흡광도를 이용하여, 엘라스타제의 활성도를 측정하였다. 이때, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다.
Human fibroblasts were placed in a culture flask and cultured until they grew to about 80%. After that, the extracts of Fusarium oxysporum fructus, A. mushroom mycelium extract, and P. falciparum mycelial fluid were treated for 1 day, and the cell culture fluid was collected and the degree of elastin production was measured using a commercially available elastin measuring instrument [Bieth J: Biochem med. , 11, 350-357 (1974), Schwartz DE: J. Invest Dermatol ., 86, 63-68 (1986)]. That is, the activity of elastase was measured using the absorbance of a color change caused by the decomposition of NA of Suc- (Ala) 3 NA which is a substrate of elastase. At this time, a control group was used which was not treated with Fusarium oxysporum fructus extract, Fusarium spp.

시료명Name of sample 엘라스타제 활성 억제율(%)Elastase activity inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%0.02 wt% 3030 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%0.0 >% < / RTI > 1919 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 1010

시료명Name of sample 엘라스타제 활성 억제율(%)Elastase activity inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%0.02% by weight of mycelium extract 2929 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%0.01% by weight of mycelium extract 1818 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 88

시료명Name of sample 엘라스타제 활성 억제율(%)Elastase activity inhibition rate (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%0.02 wt% 2929 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%0.01 wt% 1616 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%0.005 wt% 99

엘라스타제 활성 억제율을 측정한 결과(표 19 내지 표 21), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 농도의존적으로 엘라스타제의 활성 억제율이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.As a result of measuring the inhibition rate of elastase activity (Table 19 to Table 21), it was confirmed that the inhibition rate of the activity of elastase was increased in a concentration-dependent manner in all of the extracts of Fusarium oxysporum fructus, Fusarium oxysporum fructus, and Fusarium spp.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 엘라스타제 활성 억제효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 노화 방지 및 탄력 증진 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the extract of Ai mushroom fruiting body, the extract of Astragalus mushroom mycelium and the culture of Astragalus mushroom mycelium showed excellent inhibition of elastase activity. Based on these results, it is confirmed that the anti-aging and anti- I could.

실험예 8: 티로시나제 활성 억제효과 측정 Experimental Example 8: Measurement of inhibitory effect of tyrosinase activity

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 티로시나제 활성 억제효과를 측정하고자 하였다.In this Experimental Example, the effect of suppressing the tyrosinase activity inhibitory effect of the extract of mugwort fruiting body obtained in Example 1, the mugwort mushroom mycelial extract obtained in Example 2 and the mugwort mushroom culture obtained in Example 3 was measured.

티로시나제는 생체 내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되도록 하는 효소이다. 티로시나제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마(Sigma) 사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 L-티로신은 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 용해하여 0.1 ㎎/㎖ 용액으로 만들고, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액은 각각 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 0.005, 0.01, 0.02중량%가 되도록 조절하여 용해한 후, 사용하였다. L-티로신 용액 0.5 ㎖를 시험관에 넣고 여기에 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 시료액 0.5 ㎖를 각각 가하고 37℃ 항온기에서 10분간 방치하였다. 그 후, 200 unit/㎖ 티로시나제 0.5 ㎖를 첨가하고 37℃에서 10분간 반응시켰다. 상기 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시킨 후, 분광광도계를 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 대신 완충용액 0.5 ㎖를 넣은 것을 사용하였고, 양성대조군으로는 미백제로 잘 알려진 알부틴을 사용하였다. 또한, 상기 각 시료의 티로시나아제 활성 저해율은 하기 수학식 3에 따라 계산하였다.
Tyrosinase is an enzyme that stimulates the oxidation of tyrosine in vivo to produce melanin. Tyrosinase was isolated and purified from mushrooms and purchased from Sigma. L-tyrosine, a substrate, was dissolved in 0.05 M sodium phosphate buffer solution (pH 6.8) to make a 0.1 mg / ml solution. The extracts of Fusarium oxysporum fucanum, Fusarium oxysporum fructus, and Fusarium oxysporum fusiformis were in 0.05 M sodium phosphate buffer pH 6.8) at concentrations of 0.005, 0.01 and 0.02% by weight, respectively. 0.5 ml of L-tyrosine solution was placed in a test tube, and 0.5 ml of the extract of Fusarium oxysporum fusiformis, A. mushroom mycelium and the culture solution of Fusarium mushroom mycelium was added thereto, and the mixture was allowed to stand in a thermostat at 37 DEG C for 10 minutes. Thereafter, 0.5 ml of 200 units / ml tyrosinase was added, and the mixture was reacted at 37 占 폚 for 10 minutes. The reaction tube was placed on ice to quench the reaction, and the absorbance of the reaction tube was measured with a spectrophotometer at a wavelength of 475 nm. As a control group, 0.5 ml of buffer solution was used in place of the fruiting body extract of Fusarium oxysporum fructus, the extract of Fusarium spp., And the culture of Fusarium spp., And arbutin, well known as a whitening agent, was used as a positive control. The tyrosinase activity inhibition rate of each of the above samples was calculated according to the following equation (3).

[수학식 3]&Quot; (3) "

티로시나제 활성 저해율(%) = 100 - [(비교군흡광도/대조군흡광도)] × 100
Tyrosinase activity inhibition rate (%) = 100 - [(comparative group absorbance / control group absorbance)] x 100

시료명Name of sample 티로시나제 저해율(%)Inhibition rate of tyrosinase (%) 대조군Control group 00 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%0.02 wt% 5656 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%0.0 >% < / RTI > 4444 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 3131 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 5454

시료명Name of sample 티로시나제 저해율(%)Inhibition rate of tyrosinase (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%0.02% by weight of mycelium extract 5555 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%0.01% by weight of mycelium extract 4343 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 3333 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 5454

시료명Name of sample 티로시나제 저해율(%)Inhibition rate of tyrosinase (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%0.02 wt% 5151 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%0.01 wt% 4141 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%0.005 wt% 3535 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 5454

티로시나제의 활성 저해효과를 측정한 결과(표 22 내지 표 24), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 알부틴과 유사한 티로시나제 활성 저해율을 나타내었다. The results of measuring the inhibitory effect of tyrosinase (Table 22 to Table 24) showed that tyrosinase activity inhibition similar to that of arbutin was observed in all of the extracts of Fusarium oxysporum fructus, Fusarium oxysporum f. Mycelium extract and Fusarium sp.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 티로시나제 활성 저해효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 미백효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the extract of Ai mushroom fruit body, the extract of Astragalus mushroom and the culture of Astragalus mushroom mycelium inhibited the excellent tyrosinase activity, and the excellent whitening effect of the skin external composition of the present invention was confirmed.

실험예 9: B16F1 멜라닌 세포를 이용한 멜라닌 합성 억제효과 측정Experimental Example 9: Measurement of inhibitory effect on melanin synthesis using B16F1 melanocytes

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 멜라닌 합성 억제효과를 측정하고자 하였다. In this Experimental Example, the effect of inhibiting melanin synthesis of the mugwort fruiting body extract obtained in Example 1, the mugwort mugwort mugwort extract obtained in Example 2, and the mugwort mugwort culture obtained in Example 3 was measured.

본 실험예에서 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. B16F1 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 억제효과 측정은 다음과 같이 수행하였다. B16F1 멜라닌 세포를 6-웰 플레이트에 각 웰당 2×106 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후, 0.005, 0.01, 0.02중량%의 농도로 각 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후, 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 다음, 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(R Lotan and D Lotan, Cancer Res, 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후, 균질화 완충액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ㎖를 첨가하고, 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후, 마이크로 플레이트 판독기로 405 ㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음, 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. 또한, 대조군으로 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 것으로 하였고, 양성대조군으로 미백제로 알려진 알부틴을 사용하였으며, B16F1 멜라닌 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 4에 의하여 계산하였다.
The B16F1 melanocyte used in this experiment is a mouse-derived cell line and is a cell that secretes melanin, a black pigment. The inhibitory effect of B16F1 melanin on melanin synthesis was measured as follows. B16F1 melanocytes were dispensed in a 6-well plate at a concentration of 2 × 10 6 cells per well. The cells were treated with 0.005, 0.01 and 0.02% by weight of each sample and incubated for 72 hours. After culturing for 72 hours, the cells were detached with trypsin-EDTA, the number of cells was measured, and the cells were recovered by centrifugation. Quantification of intracellular melanin was carried out with a slight modification of the method of Rotan (R Lotan and D Lotan, Cancer Res, 40: 3345-3350, 1980). Cell pellets were washed once with PBS and then 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. After centrifugation (3,000 rpm, 10 min), 1N NaOH (10% DMSO) was added to the cell filtrate to dissolve the extracted melanin, and the absorbance of melanin was measured at 405 nm using a microplate reader. Melanin was quantified The percent inhibition of melanin formation in the sample was measured. In addition, the control group was not treated with the extract of Fusarium oxysporum fucilis or the fructus mycelium extract or the fescue mycelium culture, and arbutin known as a whitening agent was used as a positive control, and the inhibition rate (%) of melanin formation of B16F1 melanocyte was expressed by the following equation 4.

[수학식 4]&Quot; (4) "

멜라닌 합성 저해율(%) = [(A-B)/A] × 100Melanin synthesis inhibition rate (%) = [(A-B) / A] 100

A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Amount of melanin in wells to which no sample was added

B: 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
B: Amount of melanin in the well to which the sample was added

시료명Name of sample 멜라닌 합성 저해율(%)Melanin synthesis inhibition (%) 대조군Control group 00 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%0.02 wt% 6868 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%0.0 >% < / RTI > 5151 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 4242 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 5555

시료명Name of sample 멜라닌 합성 저해율(%)Melanin synthesis inhibition (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%0.02% by weight of mycelium extract 6767 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%0.01% by weight of mycelium extract 5151 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%0.005 wt% 4040 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 5555

시료명Name of sample 멜라닌 합성 저해율(%)Melanin synthesis inhibition (%) 대조군Control group 00 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%0.02 wt% 6666 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%0.01 wt% 5252 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%0.005 wt% 3939 알부틴 0.2중량%Arbutin 0.2 wt% 5555

B16F1 멜라닌 세포를 이용한 멜라닌 합성 억제효과를 측정한 결과(표 25 내지 표 27), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액은 알부틴과 유사한 멜라닌 합성 저해율을 나타내었다.The inhibitory effect on melanin synthesis by B16F1 melanocytes was measured (Table 25 to Table 27). The results showed that melanin synthesis inhibitory rate similar to that of arbutin was shown in the extracts of Fusarium oxysporum fructus, Fusarium spp.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 멜라닌 합성 저해율을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 미백효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the excellent inhibition of melanin synthesis of the fungal body extract of Ai mushroom, Ai mushroom mycelium extract and Ai mushroom culture was excellent, and the excellent whitening effect of the skin external composition of the present invention was confirmed.

실험예 10: 염증유발관련 효소(hyaluronidase) 활성 억제효과 측정Experimental Example 10: Measurement of inhibitory effect of hyaluronidase activity on inflammation-inducing activity

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 제조된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 히아루로니디아제(hyaluronidase) 활성 억제효과를 측정하고자 하였다. In this Experimental Example, the hyaluronidase activity inhibitory effect of the mugwort fruity body extract obtained in Example 1, the mugwort mugwort mugwort extract prepared in Example 2, and the mugwort mugwort culture obtained in Example 3 Respectively.

히아루로니디아제(hyaluronidase)는 히아루론산을 가수분해하는 효소로 염증을 유발하는 효소이다. 본 실험예에서는 히아루로니디아제(hyaluronidase)의 활성을 억제하여 항염증효과를 측정하는 방법(Kakegawa Y: Japanese J. of Inflammation, 4, 437-438, 1984)을 응용해 항염증 효과를 판정하였다. 또한, 양성대조군으로 컴프리 추출물, 시소 추출물, 유용성 감초 추출물을 사용하였다.Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid and causes inflammation. In this experimental example, anti-inflammatory effect was evaluated by the method of inhibiting the activity of hyaluronidase and measuring the anti-inflammatory effect (Kakegawa Y: Japanese J. of Inflammation, 4, 437-438, 1984) . Also, as a positive control, comfrey extract, seiso extract, and useful licorice extract were used.

각각의 시료 100 ㎕와 히아루로니디아제 용액(type Ⅳ-S, Sigma, 400U/㎖) 50 ㎕를 넣고 37℃에서 20분간 반응시킨 후, 효소활성화용액(compound 48/80 CaCl2ㆍ2H2O, Sigma, 0.1 ㎎/㎖)을 100 ㎕ 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 반응시켰다. 히아루론산(hyaluronic acid) 용액(0.4 ㎎/㎖)을 250 ㎕ 넣고 37℃에서 40분간 반응시키고, 0.4N NaOH 100 ㎕를 넣어 반응을 종결시켰다. 포타슘보레이트 용액을 100 ㎕ 첨가하여 95℃에서 3분간 반응시키고 냉각시킨 다음 ρ-디메틸아미노벤즈알데히드 용액을 3 ㎖ 넣고 다시 20분간 37℃에서 반응시킨 후 발색시켰다. 585 ㎚에서 흡광도를 측정하여 히아루로니디아제 활성 저해율을 측정하였다. 히아루로니디아제의 활성 저해율(%)은 하기 수학식 5에 의하여 계산하였으며, IC50 값은 히아루로니디아제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
100 μl of each sample and 50 μl of a solution of type II-S (Sigma, 400 U / ml) were added and reacted at 37 ° C. for 20 minutes. An enzyme activation solution (compound 48/80 CaCl 2 · 2H 2 O , Sigma, 0.1 mg / ml) was added and reacted at 37 캜 for 20 minutes. 250 μl of hyaluronic acid solution (0.4 mg / ml) was added, reacted at 37 ° C for 40 minutes, and 100 μl of 0.4 N NaOH was added to terminate the reaction. 100 μl of potassium borate solution was added, reacted at 95 ° C for 3 minutes, cooled, added with 3 ml of? -Dimethylaminobenzaldehyde solution, reacted at 37 ° C for 20 minutes, and developed. The absorbance was measured at 585 nm to measure the inhibition rate of hyparonidase activity. The activity inhibition rate (%) of the hyaruronidase is calculated by the following equation (5), and the IC 50 value is the concentration of the substance that inhibits the enzyme activity of the hyaruronidase by 50%.

[수학식 5]&Quot; (5) "

히아루로니디아제의 활성 저해율(%) = [(A-B)/A] × 100(%) = [(A-B) / A] x 100

A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소활성A: Enzyme activity of well without addition of sample

B: 시료를 첨가한 웰의 효소 활성
B: Enzyme activity of the well to which the sample was added

시료명Name of sample 히아루로니디아제 활성 저해효과(IC50;%)Inhibitory effect of hyaluronidase (IC 50 ;%) 컴프리 추출물Comfrey extract 0.250.25 시소 추출물Seiso extract 0.500.50 유용성 감초 추출물Usefulness Licorice extract 0.200.20 아위버섯 자실체 추출물Fruit body extract of Ai mushroom 0.250.25

시료명Name of sample 히아루로니디아제 활성 저해효과(IC50;%)Inhibitory effect of hyaluronidase (IC 50 ;%) 컴프리 추출물Comfrey extract 0.250.25 시소 추출물Seiso extract 0.500.50 유용성 감초 추출물Usefulness Licorice extract 0.200.20 아위버섯 균사체 추출물Mycelium extract 0.250.25

시료명Name of sample 히아루로니디아제 활성 저해효과(IC50;%)Inhibitory effect of hyaluronidase (IC 50 ;%) 컴프리 추출물Comfrey extract 0.250.25 시소 추출물Seiso extract 0.500.50 유용성 감초 추출물Usefulness Licorice extract 0.200.20 아위버섯 균사체 배양액Cultured mycelium of agaricus 0.250.25

히아루로니디아제(hyaluronidase)의 활성 저해효과를 측정한 결과(표 28 내지 표 30), 아위버섯 자실체 추출물의 IC50값, 아위버섯 균사체 추출물 IC50값 및 아위버섯 균사체 배양액의 IC50값은 항염증제로 잘 알려진 컴프리 추출물, 시소 추출물 및 유용성 감초 추출물과 유사하거나 뛰어난 효과를 나타내었다.As a result of measuring the hyaluronic ruro inhibitory effect of nidiah claim (hyaluronidase) (Table 28 to Table 30), IC 50 value, IC 50 value of ahwi mushroom mycelium extract IC 50 value and ahwi mushroom mycelium culture of ahwi mushroom fruit body extracts are anti-inflammatory agents The extracts were similar or superior to those of the well known comfrey extract, seiso extract, and oiliness licorice extract.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 항염증 효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 항염증 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm the excellent anti-inflammatory effect of the fungal body extract of Ai mushroom, the mycelium extract of Astragalus mushroom and the culture solution of Astragalus mushroom mycelium, and the excellent anti-inflammatory effect of the skin external composition of the present invention was confirmed based on this.

실험예 11: 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과 측정Experimental Example 11: Measurement of cytotoxicity mitigation effect by ultraviolet irradiation

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화 효과를 측정하고자 하였다. In this Experimental Example, the mitigation effect of ultraviolet irradiation on the cytotoxic effect of the fungal body extract obtained from Example 1, the fungal mycelium extract obtained in Example 2 and the fungal mycelia culture obtained in Example 3 Respectively.

섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1x105개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것) 1 ㎖를 첨가하였다. 여기에 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 0.005, 0.01, 0.02중량%로 처리한 후, 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 500 ㎕와 MTT용액(2.5 ㎎/㎖) 60 ㎕를 넣은 후, 2시간 동안 37℃ CO2 배양기에서 배양하였다. 배양 후, 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04 N)을 500 ㎕씩 넣어주었다. 그리고 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100 ㎕씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 565 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율(%)은 하기 수학식 6에 의해 계산하였고, 자외선에 의한 세포독성 완화율은 하기 수학식 7에 의하여 계산하였다.
Fibroblasts were placed in 24-well test plates at 1 × 10 5 cells and adhered for 24 hours. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. The fibroblasts were irradiated with 10 mJ / cm 2 of ultraviolet light using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki Co., Japan), PBS was removed and the cells were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS Was added thereto. The extracts of Fusarium oxysporum fructus, A. mushroom mycelium extract, and P. falciparum mycelium were treated at 0.005, 0.01 and 0.02% by weight, respectively, and cultured for 24 hours. After 24 hours, the medium was removed, and 500 μl of the cell culture medium and 60 μl of MTT solution (2.5 mg / ml) were added to each well, followed by culturing in a 37 ° C. CO 2 incubator for 2 hours. After the culture, the medium was removed and 500 μl of isopropanol-HCl (0.04 N) was added. After shaking for 5 minutes, the cells were lysed and 100 μl of the supernatant was transferred to a 96-well test plate, and the absorbance was measured at 565 nm using a microplate reader. The cell viability (%) was calculated by the following equation (6), and the cytotoxic relaxation rate by ultraviolet was calculated by the following equation (7).

[수학식 6]&Quot; (6) "

세포생존율(%) = [(St-Bo)/(Bt-Bo)] × 100Cell survival rate (%) = [(St-Bo) / (Bt-Bo)] 100

Bo : 세포 배양 배지만을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도Bo: Absorbance at 565 nm of wells reacting with cell culture medium

Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도Bt: Absorbance at 565 nm of a well that underwent chromogenic reaction in a sample not treated with the sample

St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
St: absorbance at 565 nm of wells treated with the sample

[수학식 7]&Quot; (7) "

자외선에 의한 세포독성 완화율(%) = [1-(St-Bo)/(Bt-Bo)] × 100(%) = [1- (St-Bo) / (Bt-Bo)] x 100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율Bo: Cell survival rate of wells not irradiated with ultraviolet light and not treated with sample

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포 생존율Bt: Cell viability of wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포 생존율
St: Cell viability of well treated with ultraviolet light and treated with sample

시료명Name of sample 처리농도(중량%)Treatment concentration (% by weight) 세포독성 완화율(%)Cytotoxic Relaxation Rate (%)
아위버섯 자실체 추출물

Fruit body extract of Ai mushroom
0.020.02 4949
0.010.01 3232 0.0050.005 1818

시료명Name of sample 처리농도(중량%)Treatment concentration (% by weight) 세포독성 완화율(%)Cytotoxic Relaxation Rate (%)
아위버섯 균사체 추출물

Mycelium extract
0.020.02 4848
0.010.01 3131 0.0050.005 1717

시료명Name of sample 처리농도(중량%)Treatment concentration (% by weight) 세포독성 완화율(%)Cytotoxic Relaxation Rate (%)
아위버섯 균사체 배양액

Cultured mycelium of agaricus
0.020.02 4141
0.010.01 3232 0.0050.005 1616

자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과를 측정한 결과(표 31 내지 표 33), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액은 자외선에 의한 세포 독성을 우수하게 완화하여 자외선에 의한 세포독성을 효과적으로 방어함을 알 수 있었다. The cytotoxic relaxation effect by ultraviolet irradiation was measured (Table 31 to Table 33), and the results showed that the extract of Fusarium oxysporum fucanum, the extract of Fusarium oxysporum and the culture of Fusarium sp. Fusiforme excellently mitigated the cytotoxicity by ultraviolet rays, As a result,

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과가 우수함을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 자외선에 의한 피부자극 완화효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the cytotoxic mitigation effect of ultraviolet irradiation of the fungal body extract of Ai mushroom, Ai mushroom mycelium extract and Ai mushroom mycelium was excellent, and based on the results, it was confirmed that excellent skin irritation The mitigation effect was confirmed.

실험예 12: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과 측정EXPERIMENTAL EXAMPLE 12 Measurement of Inflammatory Cytokine Expression Inhibitory Effect by Ultraviolet Irradiation

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 정도를 측정하고자 하였다. In this Experimental Example, the expression of inflammatory cytokine expressed by the ultraviolet irradiation of the fungal body extract obtained in Example 1, the fungal mycelium extract obtained in Example 2, and the fungal mycelia culture obtained in Example 3 And the degree of inhibition.

사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5X104개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. 여기에 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 0.005, 0.01, 0.02중량%로 처리한 후, 5시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양 상층액을 150 ㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로서 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성율은 하기 수학식 8에 의해 계산하였다.
Fibroblasts isolated from human epidermal tissue were placed in a 24-well test plate in an amount of 5 × 10 4 and adhered for 24 hours. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. The fibroblasts were irradiated with ultraviolet rays at 10 mJ / cm 2 using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki Co., Japan), and PBS was removed. Cell culture medium ≪ / RTI > medium). The extracts of Fusarium oxysporum fructus, A. mushroom mycelium and A. fumigatus were treated at 0.005, 0.01 and 0.02% by weight, respectively, and then cultured for 5 hours. After culturing, 150 μl of the culture supernatant was taken to quantitate IL-1α to determine the inhibitory effect of the fungal body extract, the mushroom mycelium extract and the mushroom mycelium culture medium on the inflammatory cytokine expression. The amount of IL-1 alpha was quantitated using an enzyme-linked immunosorbent assay, and the production rate of IL-1 alpha was calculated by the following equation (8).

[수학식 8]&Quot; (8) "

염증성 사이토카인 발현 억제율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%) = [1- (St-Bo) / (Bt-Bo)] 100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량Bo: IL-1? Production in wells without UV irradiation

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량Bt: IL-1? Production in wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α 생성량
St: IL-1α production in wells irradiated with ultraviolet light and treated with the sample

시료명Name of sample 처리농도(중량%)Treatment concentration (% by weight) 염증성 사이토카인 발현 억제율(%)Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%)
아위버섯 자실체 추출물

Fruit body extract of Ai mushroom
0.020.02 3434
0.010.01 2828 0.0050.005 2121

시료명Name of sample 처리농도(중량%)Treatment concentration (% by weight) 염증성 사이토카인 발현 억제율(%)Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%)
아위버섯 균사체 추출물

Mycelium extract
0.020.02 3232
0.010.01 2626 0.0050.005 1818

시료명Name of sample 처리농도(중량%)Treatment concentration (% by weight) 염증성 사이토카인 발현 억제율(%)Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%)
아위버섯 균사체 배양액

Cultured mycelium of agaricus
0.020.02 3232
0.010.01 2525 0.0050.005 1919

자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 측정한 결과(표 34 내지 표 36), 낮은 농도에서도 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액은 자외선에 의한 염증 발생을 효과적으로 방어함을 확인할 수 있었다.The results of measuring the inhibitory effect of inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation (Tables 34 to 36) show that even at low concentrations, the extract of Fusarium oxysporum fuciformis, the extract of Fusarium oxysporum mushroom and the culture of Fusarium sp. Mucus effectively inhibit the development of inflammation caused by ultraviolet rays I could confirm.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과가 우수함을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 항염증 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the effect of suppressing the expression of inflammatory cytokines by ultraviolet irradiation of the fungal body extract of Ai mushroom, the extract of mycelia of mycelium of mycelium and the mycelia of mycelia of fungal culture was excellent, .

실험예 13: 자외선조사에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제효과 측정Experimental Example 13: Measurement of inhibitory effect of prostaglandin biosynthesis by ultraviolet irradiation

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 프로스타글란딘(prostaglandin E2;이하, PGE2로 칭함) 생합성 억제효과를 측정하고자 하였다.In this Experimental Example, prostaglandin E 2 (hereinafter referred to as PGE 2 (hereinafter referred to as " PGE 2 ") in the culture of egg yolk fruity body extract obtained in Example 1, the egg root mushroom mycelial extract obtained in Example 2, ) Was used to measure the inhibitory effect of biosynthesis.

실험을 위하여 사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(Keratinocyte)를 24-웰 시험 플레이트에 5x104개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. FBS가 포함되지 않은 배지로 교체하고, 18시간 동안 배양한 다음, 상기의 각질형성세포에 최종농도가 50 uM이 되도록 아스피린(aspirin)을 처리하여 각질형성세포에 존재하는 프로스타글란딘 생합성 효소(prostaglandin E2 synthetase, 또는 cyclooxygenase, 이하 COX)의 활성을 제거하였다. 아스피린 처리 2시간 후에 각질형성세포가 들어있는 각 웰을 PBS로 2회 세척하고 각 웰에 100 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 각질형성세포에 UVB 램프(Model : F15T8, UV B 15 W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 30 mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액(keratinocyte growth media, Clonetics, Biowhittacker사, MD, USA) 250 ㎕를 첨가하였다. 여기에 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 0.005, 0.01, 0.02중량%로 처리한 후, 16시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 적당량 취하여 16시간 동안 생합성된 PGE2(prostaglandin E2)를 정량함으로서 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 프로스타글란딘 억제효과를 판단하였다. PGE2의 양은 효소면역분석법(enzyme immunoassay)을 이용하여 정량화하였다.
For the experiment, keratinocytes isolated from human epidermal tissue were placed in a 24-well test plate in an amount of 5 × 10 4 and adhered for 24 hours. After replacing the medium with FBS-free medium for 18 hours, the keratinocytes were treated with aspirin to a final concentration of 50 uM to remove prostaglandin biosynthesis enzyme (prostaglandin E 2 synthetase, or cyclooxygenase, hereinafter referred to as COX). Two hours after aspirin treatment, each well containing keratinocytes was washed twice with PBS, and 100 占 퐇 of PBS was added to each well. The keratinocyte was irradiated with ultraviolet rays of 30 mJ / cm 2 using a UVB lamp (Model: F15T8, UVB 15 W, Sankyo Dennki, Japan), PBS was removed, and keratinocyte growth media , Clonetics, Biowhittacker, MD, USA). The extracts of Fusarium oxysporum fructus, A. mushroom mycelium, and P. falciparum mycelia were treated at 0.005, 0.01 and 0.02% by weight, respectively, and then cultured for 16 hours. PGE 2 (prostaglandin E 2 ) was quantitated for 16 hours by taking an appropriate amount of culture supernatant, and the prostaglandin inhibitory effect of the mugwort fruiting body extract, mugwort mushroom mycelial extract and mugwort mushroom culture was evaluated. The amount of PGE 2 was quantitated using enzyme immunoassay.

시료명Name of sample PGE2 억제율(%)PGE 2 inhibition rate (%) (-)UV B(-) UV B controlcontrol (+)UV B(+) UV B -- (+)UV B + 아위버섯 자실체 추출물 0.02중량%(+) UV B + 0.02 wt% 5555 (+)UV B + 아위버섯 자실체 추출물 0.01중량%(+) UV B + 0.01% (w / w) 3131 (+)UV B + 아위버섯 자실체 추출물 0.005중량%(+) UV B + egg yolk fruit body extract 0.005 wt% 1212

시료명Name of sample PGE2 억제율(%)PGE 2 inhibition rate (%) (-)UV B(-) UV B controlcontrol (+)UV B(+) UV B -- (+)UV B + 아위버섯 균사체 추출물 0.02중량%(+) UV B + agaricus mycelium extract 0.02 wt% 5656 (+)UV B + 아위버섯 균사체 추출물 0.01중량%(+) UV B + agaricus mycelium extract 0.01 wt% 3131 (+)UV B + 아위버섯 균사체 추출물 0.005중량%(+) UV B + 0.005 wt% 1313

시료명Name of sample PGE2 억제율(%)PGE 2 inhibition rate (%) (-)UV B(-) UV B controlcontrol (+)UV B(+) UV B -- (+)UV B + 아위버섯 균사체 배양액 0.02중량%(+) UV B + 0.02 wt% 5353 (+)UV B + 아위버섯 균사체 배양액 0.01중량%(+) UV B + 0.01 wt% 2929 (+)UV B + 아위버섯 균사체 배양액 0.005중량%(+) UV B + 0.005 wt% 1111

자외선조사에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제효과를 측정한 결과(표 37 내지 표 39), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 자외선에 의한 프로스타글란딘의 생성을 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다. 특히 생성되는 PGE2는 주로 COX-2 효소에 의해 만들어지는 것으로 알려져 있으므로 상기 실험을 통해 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액이 COX-2 효소의 유도작용 또는 활성을 억제함을 추론할 수 있었다.
As a result of measuring inhibitory effect of prostaglandin biosynthesis by ultraviolet irradiation (Table 37 to Table 39), it was confirmed that both of the fungal body extract of Ai mushroom, the mycelium extract of Astragalus mushroom and the culture of mycelia of Astragali mushroom effectively inhibited the production of prostaglandin by ultraviolet rays. In particular, PGE 2 produced is known to be produced mainly by COX-2 enzyme. Therefore, the above-mentioned experiments show that the extract of Fusarium oxysporum fucicum, the extract of Fusarium oxysporum mushroom and the culture of Fusarium oxysporum fusifera suppress the induction activity or activity of COX-2 enzyme I could reason.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 프로스타글란딘 생합성 억제효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 프로스타글란딘 생합성 억제효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that an excellent inhibitory effect on the biosynthesis of prostaglandins was obtained in the fungal body extract of Ai mushroom, the mycelium extract of Astragalus mushroom, and the culture of mycelia of Astragalus mushroom, and the excellent effect of inhibiting prostaglandin biosynthesis of the external preparation for skin of the present invention was confirmed.

실험예 14: 여드름균에 대한 항균력 측정Experimental Example 14: Measurement of antimicrobial activity against acne bacteria

본 실험예에서는 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)로 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 여드름균에 대한 항균력을 확인하고자 하였다. In this Experimental Example, the paper mushroom mycelium extract obtained in Example 1, the mushroom mycelial extract obtained in Example 2, and the acne mushroom mycelium cultured in Example 3, obtained in the Paper Disc Test, And to confirm the antimicrobial activity against bacteria.

먼저, 여드름 발생원인의 피부 상재균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)를 활성화시키기 위하여 BHI액체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%)에서 48시간 전배양하였다. 이렇게 준비한 균 배양액을 BHI 고체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%;agar1.5%)에 0.1 ㎖씩 도말 한 후, 건조시켰다. 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 95% 에탄올 수용액에 12%(w/v)로 희석하여 직경 8 ㎜의 페이퍼 디스크(paper disc)에 50 ㎕씩 점적한 후, 앞서 준비한 고체 배지 위에 올려놓은 후, 이것을 35℃ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다. 페이퍼 디스크(Paper disc) 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하였다. First, for activation of Propionibacterium acnes, a skin overgrowth caused by acne, 48 hours pre-culture was carried out in a BHI liquid medium (Brain-Heart Infusion Broth; 3.7%). The bacterial culture thus prepared was plated in 0.1 ml of BHI solid medium (Brain-Heart Infusion Broth; 3.7%; agar 1.5%) and dried. The fruity body extract of Adi mushroom, the mycelium extract of Astragalus mushroom and the mycelia of Astragalus mushroom were diluted to 12% (w / v) in a 95% aqueous ethanol solution and 50 μl was dropped on a paper disc having a diameter of 8 mm After placing on the prepared solid medium, it was incubated in a 35 ° C anaerobic incubation tank for 3 days. The antimicrobial activity was evaluated by observing the growth inhibition zone around the paper disc and measuring the size of the inhibition zone.

여드름균에 대한 항균력을 측정한 결과, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 균 성장 저지환의 크기는 16 ㎜인 것으로 나타나, 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 항균력을 확인할 수 있었다.
As a result of measuring the antibacterial activity against acne bacterium, the size of the bacterial growth inhibition of the fungal body extract of Ai mushroom, the extract of Fructus mycelium, and the culture of mycelia of fescue was 16 ㎜, and the excellent antibacterial activity of the composition for external application for skin of the present invention was confirmed .

실험예 15:Experimental Example 15: Compound 48/80에 의한 아토피 피부염 유발 후 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 항염증 효과 측정Anti-inflammatory effects of fungal body extract, mushroom mycelium extract, and mushroom mycelium extracts after inducing atopic dermatitis by Compound 48/80

본 실험예에서는 Compound 48/80에 의한 아토피 피부염 유발 후, 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3의 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 항염증 효과를 측정하고자 하였다.In this Experimental Example, after induction of atopic dermatitis by Compound 48/80, the extract of eggplant mushroom fruit obtained in Example 1, the extract of egg shell mushroom obtained in Example 2, and the culture of egg mushroom mycelium obtained in Example 3 In order to investigate the anti - inflammatory effect of.

BALB/c 마우스(5 wks, male)의 등 쪽 목 부위 피부의 진피 내로 마리당 30 ㎕의 compound 48/80(Sigma, Co.; 1 ㎎/㎖ in saline)을 주사한 후, 케이지에 집어넣고 60분 동안 마우스가 목을 긁는 행동을 관찰하였다. 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 항염 치료 효능을 검정하기 위하여 compound 48/80을 주사하기 5일 전부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 250 ㎕/㎖의 농도로 마리당 100 ㎕씩 각각 마우스의 등 쪽 목 부위에 도포하였다. 도포방법은 5일 동안 하루에 두 번씩 총 10회에 걸쳐 마우스의 등 쪽 목 부위에 도포하여 전처리 한 다음 compound 48/80을 주사한 후, 총 1시간 동안 5분 간격으로 마우스가 뒷발로 목을 긁는 시간을 측정하여 소양증 정도를 측정하였다.
30 μl of compound 48/80 (Sigma, Co .; 1 mg / ml in saline) was injected into the dermis of dorsal skin of BALB / c mice (5 wks, male) The mice were observed to scratch their neck for a minute. To investigate the anti-inflammatory efficacy of the fruiting body extract of Ai mushroom, mycelia extract of Ai mushroom, and mycelia of Ai mushroom, the extract of Ai mushroom Fruit body extract, Ai mushroom mycelium extract and Ai mushroom mycelium was added at 250 μl / Ml < / RTI > per mouse, respectively. After application of compound 48/80, the mouse was applied to the dorsal neck of the mouse for 5 minutes at a rate of 5 minutes for 1 hour. Scratching time was measured and the degree of pruritus was measured.

시료명Name of sample Number of scratching (in 5min) Number of scratching (in 5min) 55 1010 1515 2020 2525 3030 3535 4040 4545 5050 5555 6060 아위버섯 자실체 추출물Fruit body extract of Ai mushroom 2222 2424 2828 2727 2929 3434 3636 3838 4141 2323 1414 1212 대조군Control group 3939 4141 5050 6262 8888 9494 9898 7272 5959 5050 4040 3232

시료명Name of sample Number of scratching (in 5min) Number of scratching (in 5min) 55 1010 1515 2020 2525 3030 3535 4040 4545 5050 5555 6060 아위버섯 균사체 추출물Mycelium extract 2121 2323 2626 2727 2929 3333 3535 3838 4040 2121 1111 99 대조군Control group 3939 4141 5050 6262 8888 9494 9898 7272 5959 5050 4040 3232

시료명Name of sample Number of scratching (in 5min) Number of scratching (in 5min) 55 1010 1515 2020 2525 3030 3535 4040 4545 5050 5555 6060 아위버섯 균사체 배양액Cultured mycelium of agaricus 2121 2323 2525 2828 2727 3232 3535 3939 4040 2222 1313 1010 대조군Control group 3939 4141 5050 6262 8888 9494 9898 7272 5959 5050 4040 3232

아토피 피부염 유발 후 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 항염증 효과를 측정한 결과(표 40 내지 표 42), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 compound 48/80에 의한 아토피 피부염(피부 소양증) 유발을 억제하는 것을 확인할 수 있었다.The antiinflammatory effects of the fungal body extract of Ai mushroom, mycelia of mycelia, and mycelia of mycelia were measured (Table 40 to Table 42) after the induction of atopic dermatitis (Table 40 to Table 42) 48/80 inhibition of atopic dermatitis (skin pruritus).

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 아토피 예방 효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 아토피 개선, 예방 또는 치료 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the atopy prevention effect of the fungal body extract of Ai mushroom, A. mushroom mycelium extract and A. mushroom mycelial culture was improved, and the excellent atopy improvement, prevention or therapeutic effect of the external preparation for skin of the present invention was confirmed.

실험예 16: 수분 흡습성 측정Experimental Example 16: Measurement of water hygroscopicity

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 수분 흡습성을 측정하고자 하였다.In this Experimental Example, the water hygroscopicity of the Fruit body extract of mackerel mushroom obtained in Example 1, the mushroom mycelial extract obtained in Example 2 and the mushroom mycelial culture obtained in Example 3 were measured.

사람의 건조 표피세포에 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액과 증류수에 각각 포화 흡수시키고 흡수된 물의 양을 측정한 후, 48시간 건조 후의 질량변화를 측정하였다. 각각의 측정된 질량의 변화로부터 피부 세포 단위 질량당 흡수된 물의 양을 비교하였다. 이러한 실험은 표피세포에 흡습되는 물의 양을 비교하기 위한 방법으로 실제 사람의 피부에 있어서도 그 보습효과를 예상할 수 있는 한가지 방법으로 사용되고 있다.The amount of water absorbed and absorbed by the dried epidermal cells of manure mushroom fruiting body extract, mushroom mycelial body extract and mushroom mycelium culture medium and distilled water were measured respectively, and the mass change after drying for 48 hours was measured. The amount of water absorbed per skin cell unit mass was compared from each measured mass change. This experiment is a method for comparing the amount of water absorbed to the epidermal cells, and is used as one method of predicting the moisturizing effect even in the human skin.

구체적으로, 사람의 표피세포를 건조시켜 단위질량당 함유된 수분의 양을 일정하게 만든 후, 각각의 표피세포 시료의 무게와 함유된 물의 양을 카이저 방법(Kaiser method)을 사용하여 측정하였다. 물의 함량이 측정된 표피세포를 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액, 정제수에 각각 24시간 담지하여 포화 흡수시켜준 뒤, 세포 내에 물이 포화흡수된 표피세포를 꺼내서 무게를 달고, 일부를 채취하여 카이저 수분 측정기로 함유되어 있는 단위질량당 수분의 양을 측정하였다. 이후 다시 48시간 감압건조시키고 무게를 달고난 후, 일부를 채취하여 카이저 방법에 의해 수분량을 측정하여 함유되어 있는 단위질량당 수분의 양을 측정하였다(수분 mg/표피세포 질량 g).
Specifically, human epidermal cells were dried to make the amount of water contained per unit mass constant, and then the weight of each epidermal cell sample and the amount of water contained were measured using the Kaiser method. The epidermal cells in which the water content was measured were carried on each day for 24 hours each by being loaded on the agaricus fruiting body extract, the agaricus mushroom mycelium extract and the agaricus mycelia culture liquid and the purified water for 24 hours, and then the skin cells in which the water was saturated and absorbed were taken out and weighed , And a part thereof was sampled to measure the amount of water per unit mass contained in the Kaiser moisture meter. Then, after drying for 48 hours under reduced pressure, the weight was added, and a part of the weight was measured. The water content was measured by the Kaiser method and the amount of water per unit mass was measured (mg / epidermal cell mass g).

시료명Name of sample 수분함량Moisture content 초기 건조상태Initial dry state 포화상태Saturation 재건조 후After re-drying 아위버섯 자실체 추출물Fruit body extract of Ai mushroom 400400 790790 610610 정제수Purified water 400400 780780 400400

시료명Name of sample 수분함량Moisture content 초기 건조상태Initial dry state 포화상태Saturation 재건조 후After re-drying 아위버섯 균사체 추출물Mycelium extract 400400 800800 620620 정제수Purified water 400400 780780 400400

시료명Name of sample 수분함량Moisture content 초기 건조상태Initial dry state 포화상태Saturation 재건조 후After re-drying 아위버섯 균사체 배양액Cultured mycelium of agaricus 400400 820820 630630 정제수Purified water 400400 780780 400400

수분 흡습성을 측정한 결과(표 43 내지 표 45), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액으로 포화 흡습시킨 표피세포가 정제수에 의하여 포화 흡습된 표피세포보다 재건조 과정에 있어 훨씬 많은 물을 함유하고 있음을 확인할 수 있었다.The results of measurement of water hygroscopicity (Table 43 to Table 45) show that the epidermal cells saturated with hygroscopic extracts of Fusarium oxysporum fructus, A. fructus, It was confirmed that the water contains a lot of water.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 피부 흡습성을 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 우수한 보습 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm superior skin hygroscopicity of the Ai mushroom fruit body extract, Ai mushroom mycelium extract and Ai mushroom mycelium culture medium, and the excellent moisturizing effect of the present invention can be confirmed.

실험예 17: 사람 모발 단백질의 결합 효과Experimental Example 17: Binding Effect of Human Hair Protein

본 실험예에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액의 사람 모발 단백질의 결합 효과를 확인하고자 하였다. In this Experimental Example, the binding effect of the human hair protein of the mugwort fruity body extract obtained in Example 1, the mugwort mugwort mugwort extract obtained in Example 2 and the mugwort mugwort culture obtained in Example 3 was examined .

사람 모발 케라틴 단백질 50 ㎍에 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 0.5, 0.25, 0.1중량%의 시험 농도로 첨가하고 상온에서 30분 동안 반응시킨 후, 6% 과산화수소와 0.5% 암모니아 1:1 혼합 용액으로 처리하여 30분 동안 반응시켰다. 반응액을 10% SDS-폴리아크릴아미드 젤에서 램리(Laemmli)의 방법에 따라 전기영동하고, 젤에 있는 케라틴 단백질을 0.1% 쿠마시 블루(Coomassie brilliant blue R 250), 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합 용액에서 1시간 동안 염색한 후, 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합용액에서 탈색시키고 케라틴 단백질 띠를 확인하였다. 이미지 마스터(Amersham Pharmacia Biotech.) 소프트웨어를 사용하여 50 ㎍의 사람 모발 케라틴 단백질만 전기영동했을 때 나타나는 케라틴 단백질 띠를 100%로 하고, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 군을 대조군으로 비교하여 케라틴 결합 효과를 %로 표시하였다.
To the 50 ㎍ of human hair keratin protein were added 0.5, 0.25, and 0.1 wt% test solution, respectively, and incubated at room temperature for 30 min. Then, 6% hydrogen peroxide and 0.5 % Ammonia 1: 1 mixed solution and reacted for 30 minutes. The reaction solution was electrophoresed on a 10% SDS-polyacrylamide gel according to the method of Laemmli and the keratin protein in the gel was dissolved in 0.1% Coomassie brilliant blue R 250, 10% glacial acetic acid and 40% ethanol For 1 hour, decolorized in a mixed solution of 10% glacial acetic acid and 40% ethanol, and the keratin protein band was identified. Using the image master (Amersham Pharmacia Biotech.) Software, the keratin protein band appeared when the human hair keratin protein alone was electrophoresed at 50 占 퐂 was treated as 100% and the cultured adiocarcinoma fruit body extract, And the keratin binding effect was expressed in% as compared with the control group.

아위버섯 자실체 추출물Fruit body extract of Ai mushroom 대조군Control group 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 모발단백질 결합효과Hair protein binding effect 100100 152152 139139 121121

아위버섯 균사체 추출물Mycelium extract 대조군Control group 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 모발단백질 결합효과Hair protein binding effect 100100 151151 138138 120120

아위버섯 균사체 배양액Cultured mycelium of agaricus 대조군Control group 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 모발단백질 결합효과Hair protein binding effect 100100 148148 136136 119119

실험결과(표 46 내지 표 48), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 함량이 증가함에 따라 모발 단백질 케라틴과의 결합 능력도 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
As a result of the experimental results (Table 46 to Table 48), it was confirmed that the binding capacity of hair follicle keratin increases with increasing content of fructus fructus extract, fructus mycelium extract and mycelia fructus.

실험예 18: 알칼리와 과산화수소 처리에 의한 케라틴 용출에 대한 아위버섯 자실체 추출물과 아위버섯 균사체 배양액의 보호 효과EXPERIMENTAL EXAMPLE 18: Protective effect of keratinocyte fruiting body extract and acinar mushroom mycelium on keratin elution by treatment with alkali and hydrogen peroxide

본 실험예에서는 알칼리와 과산화수소 처리에 의한 케라틴 용출에 대한 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 상기 실시예 3의 아위버섯 균사체 배양액의 보호 효과를 확인하고자 하였다.In this Experimental Example, the extract of the mugwort fruity body obtained in Example 1 for keratin elution by treatment with alkali and hydrogen peroxide, the mugwort mushroom extract obtained in Example 2 The mycelial extract and the culture broth of astringent mushroom of Example 3 described above.

3 g의 모발을 10 ㎖의 과산화수소(6%)와 암모니아(1.68%)의 1:1 혼합용액에 넣고 상기 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 0.5, 0.25, 0.1중량%의 시험 농도로 첨가한 후에 상온에서 30분 동안 처리하였다. 반응액 0.5 ㎖를 래피드-콘 프로테인 컨센트레이션 키트(Rapid-Con protein concentration kit, Elpis Biotech.)를 사용하여 농축시키고 농축액을 10% SDS-폴리아크릴아미드 젤에서 램리(Laemmli)의 방법에 따라 전기영동한 후, 젤에 있는 케라틴 단백질을 0.1% 쿠마시 블루(Coomassie brilliant blue R 250), 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합 용액에서 1시간 동안 염색하고 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합 용액에서 탈색시켜 케라틴 단백질 띠를 확인하였다. 이미지 마스터 소프트웨어(Amersham Pharmacia Biotech.)를 사용하여 50 ㎍의 사람 모발 케라틴 단백질만 전기영동했을 때 나타나는 케라틴 밴드를 100%로 하고, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 군을 대조군으로 비교하여 케라틴 단백질의 결합 효과를 %로 표시하였다.
3 g of hair was placed in a 1: 1 mixed solution of 10 ml of hydrogen peroxide (6%) and ammonia (1.68%), and the above-described fusarium oxysporum extract, fuschelia mycelium extract and fuschia fusiforme cultures were suspended in 0.5, 0.25 and 0.1 weight %, And then treated at room temperature for 30 minutes. 0.5 ml of the reaction solution was concentrated using a Rapid-Con protein concentration kit (Elpis Biotech.), And the concentrate was electrophoresed in 10% SDS-polyacrylamide gel according to the method of Laemmli After that, the keratin protein in the gel was stained in a mixed solution of 0.1% Coomassie brilliant blue R 250, 10% glacial acetic acid and 40% ethanol for 1 hour and discolored in a mixed solution of 10% glacial acetic acid and 40% To identify the keratin protein band. Using the image master software (Amersham Pharmacia Biotech.), The keratin band appeared when the human hair keratin protein alone was electrophoresed at 50 占 퐂 was treated with 100% of the keratinocyte extract, the mushroom mycelium extract or the mushroom mycelium culture And the binding effect of keratin protein was expressed in% as compared with the control group.

아위버섯 자실체 추출물Fruit body extract of Ai mushroom 대조군Control group 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 모발 용출 케라틴 단백질Keratin protein 100100 3939 5151 7676

아위버섯 균사체 추출물Mycelium extract 대조군Control group 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 모발 용출 케라틴 단백질Keratin protein 100100 3737 4949 7575

아위버섯 균사체 배양액Cultured mycelium of agaricus 대조군Control group 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 모발 용출 케라틴 단백질Keratin protein 100100 3333 4949 7272

실험결과(표 49 내지 표 51), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 함량이 증가함에 따라 모발로부터 용출되는 케라틴 단백질 함량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
As a result of the experiment (Table 49 to Table 51), it was confirmed that the content of keratin protein eluted from the hair decreases with increasing content of the fungus body extract, the fungus body extract, and the fungus body culture.

실험예 19: 알칼리와 과산화수소 처리에 의한 모발 인장 강도와 신도에 대한 아위버섯 자실체 추출물과 아위버섯 균사체 배양액의 효과EXPERIMENTAL EXAMPLE 19 Effect of Fruit Fruit Body Extract and Astragalus Fructus Mycelium Culture Medium on Hair Tensile Strength and Elongation by Treatment with Alkali and Hydrogen Peroxide

본 실험예에서는 알칼리와 과산화수소 처리에 의한 모발 인장 강도와 신도에 대한 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 실시예 3의 아위버섯 균사체 배양액의 효과를 확인하고자 하였다.In this Experimental Example, the effects of the extract of egg mushroom fruiting body obtained in Example 1 on the hair tensile strength and elongation by the treatment with alkali and hydrogen peroxide, the extract of the mushroom mycelium obtained in Example 2 and the mushroom mycelial culture in Example 3 .

3 g의 모발을 10 ㎖의 과산화수소(6%)와 암모니아(1.68%)의 1:1 혼합 용액에 넣고 상기 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액을 각각 0.5, 0.25, 0.1중량%의 시험 농도로 첨가하여 상온에서 30분 동안 처리한 후, 물로 씻고 바람에 건조시켜 오토그래프(Autograph) 시험기에서 인장 강도(gf)및 신도(%)를 측정하였다.
3 g of hair was placed in a 1: 1 mixed solution of 10 ml of hydrogen peroxide (6%) and ammonia (1.68%), and the above-described fusarium oxysporum extract, fuschelia mycelium extract and fuschia fusiforme cultures were suspended in 0.5, 0.25 and 0.1 weight %, And the mixture was treated at room temperature for 30 minutes, washed with water, dried in air, and measured for tensile strength (gf) and elongation (%) in an autograph tester.

아위버섯 자실체 추출물Fruit body extract of Ai mushroom 정제수Purified water 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 인장 강도(gf)Tensile strength (gf) 112112 125125 121121 117117 신도(%)Shinto (%) 4646 5151 5050 4848

아위버섯 균사체 추출물Mycelium extract 정제수Purified water 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 인장 강도(gf)Tensile strength (gf) 112112 126126 122122 119119 신도(%)Shinto (%) 4646 5252 5050 4848

아위버섯 균사체 배양액Cultured mycelium of agaricus 정제수Purified water 0.5중량%0.5 wt% 0.25중량%0.25 wt% 0.1중량%0.1 wt% 인장 강도(gf)Tensile strength (gf) 112112 123123 121121 118118 신도(%)Shinto (%) 4646 5252 4949 4747

실험결과(표 52 내지 표 54), 탈색제(상기 과산화수소와 암모니아 혼합 용액)를 30분간 처리한 경우, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 모두 첨가량이 증가함에 따라서 모발의 강도 저하가 억제된 것을 볼 수 있다. 이에 따라 탈색제를 처리한 경우, 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액에 의한 모발 보호 효과를 기대할 수 있을 것으로 판단되었다.
When the decolorizing agent (the hydrogen peroxide and ammonia mixed solution) was treated for 30 minutes, the intensity of the hair decreased as the amount of the extract of the flax seed extract, the extract of the foxtail mushroom mycelium and the culture solution of the foxtail mushroom mycelium increased as the experimental results (Table 52 to Table 54) Is suppressed. Therefore, it could be expected that the treatment of decolorizing agent could be expected to provide hair protection effect by the extract of Fusarium oxysporum fuscorum, the extract of Fusarium oxysporum mushroom and the culture solution of Fusarium oxysporum fusiformis.

실험예 20: 모발 성장 효과 시험Experimental Example 20: Hair Growth Effect Test

본 실험예에서는 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 및 실시예 3의 아위버섯 균사체 배양액의 모발 성장 효과를 확인하고자 하였다.In this Experimental Example, the effect of hair follicle extract obtained from Example 1 on the hair growth effect of the fungal mycelia extract obtained in Example 2, and the fungal mycelial culture obtained in Example 3 was examined.

상기 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액 2중량%를 함유하는 30% 함수 에탄올 용액을 각각 제조하여 모발 성장 효과 시험에 사용하였다. 모발 성장 효과 시험은 마우스(ICR), 생후 47~53일 것을 사용하여 등 부위 털을 제거하고, 등 부위가 깨끗한 것을 골라 물질 군 마다 10마리를 사용하여 다음날부터 매일 시험물질을 개체당 100 ㎖씩 도포하였다. 시간 경과에 따른 모발의 길이 및 모발 성장 정도를 모 제거 후, 복원 정도에 따라 점수를 0에서 2까지 부가하여 각각 비교하였다. 모발성장 정도를 비교하기 위하여, 대조군으로는 30% 알코올 용액을 각 개체에 도포하여 성장 상태를 관찰하였다.The 30% aqueous ethanol solution containing 2% by weight of the above-mentioned fusarium oxysporum fructus extract, fuschia mushroom mycelium extract, and fuschia fusiforme culture was prepared and used for the hair growth effect test. Hair growth test was carried out by using mouse (ICR), 47 ~ 53 days after birth, removing the hairs from the dorsal area, and selecting the back area clean. Using 10 animals per group, 100 ml of test substance per day Respectively. After removing hair length and hair growth degree over time, scores were added from 0 to 2 according to the degree of restoration. In order to compare the degree of hair growth, a 30% alcohol solution was applied to each individual as a control group and the growth state was observed.

또한, 모발성장 촉진 효과 정도를 3등급으로 분류하여 평가하였다(0:전혀 자라지 않음, 1:약간자람, 2:많이자람).
The degree of hair growth promoting effect was classified into three grades (0: no growth, 1: slight growth, 2: much growth).

시료/경과일수Sample / elapsed days 55 1010 1515 아위버섯 자실체 추출물 2중량% 2% by weight of fusarium oxysporum fructus extract 0.140.14 0.630.63 1.39±0.071.39 + 0.07 대조군Control group 0.070.07 0.130.13 0.80±0.240.80 + 0.24

시료/경과일수Sample / elapsed days 55 1010 1515 아위버섯 균사체 추출물 2중량% 2% by weight of mycelium extract 0.150.15 0.680.68 1.39±0.041.39 + 0.04 대조군Control group 0.070.07 0.130.13 0.80±0.240.80 + 0.24

시료/경과일수Sample / elapsed days 55 1010 1515 아위버섯 균사체 배양액 2중량% 2 wt% 0.160.16 0.710.71 1.41±0.081.41 + 0.08 대조군Control group 0.070.07 0.130.13 0.80±0.240.80 + 0.24

실험결과(표 55 내지 표 57), 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액의 우수한 모발성장 촉진 효과를 확인할 수 있었다.
The results of the experiment (Table 55 to Table 57) confirmed that the hair growth promoting effect of the fruiting body extract of Ai mushroom, the mycelium extract of Astragalus mushroom and the culture solution of Astragalus mushroom was excellent.

실시예 4 : 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장료 제조Example 4: Cosmetic preparation containing fruiting body extract of Astragalus mushroom

본 실시예 4에서는 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장료를 제조하고자 하였다.In Example 4, an attempt was made to produce a cosmetic composition containing the extract of Fusarium orientalis Fruit body obtained in Example 1 above.

제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 하기 표 58에 나타낸 바와 같다. The cosmetics thus prepared are in the form of a cream, and the composition thereof is shown in Table 58 below.

우선 하기 표 58에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, 나)상에 가)상을 가하여 예비 유화 후, 호모믹서로 균일하게 유화하고 서서히 냉각하여 크림을 제조하였다.
First, the b) phase recorded in Table 58 below was heated and stored at 70 占 폚, and a) phase was added to b), followed by pre-emulsification, uniform emulsification with a homomixer, and gradually cooling to prepare a cream.

원료Raw material 실시예 4(중량%)Example 4 (% by weight) end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 스테아린산 Stearic acid 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic acid cholesterol 22 스쿠알란Squalane 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mole addition) alcohol ester 33 글리세릴모노스테아린산 아스테르Glyceryl monostearate Aster 22 I 아위버섯 자실체 추출물Fruit body extract of Ai mushroom 1One 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 정제수Purified water 100이 될 때까지Until it is 100

실시예 5 : 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 화장료 제조Example 5: Cosmetic preparation containing mycelium extract of Astragalus mushroom

본 실시예 5에서는 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 화장료를 제조하고자 하였다. In Example 5, a cosmetic composition containing the extract of mycelium of mackerel mushroom obtained in Example 2 was prepared.

제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 하기 표 59에 나타낸 바와 같다. The cosmetics thus prepared are in the form of a cream, and the composition thereof is shown in Table 59 below.

우선 하기 표 59에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, 나)상에 가)상을 가하여 예비 유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 서서히 냉각하여 크림을 제조하였다.
First, the b) phase recorded in Table 59 below was heated and stored at 70 캜. A) phase was added to b), pre-emulsified, uniformly emulsified with a homomixer, and slowly cooled to prepare a cream.

원료Raw material 실시예 5 (중량%)Example 5 (% by weight) end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 스테아린산 Stearic acid 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic acid cholesterol 22 스쿠알란Squalane 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mole addition) alcohol ester 33 글리세릴모노스테아린산 아스테르Glyceryl monostearate Aster 22 I 아위버섯 균사체 추출물Mycelium extract 1One 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 정제수Purified water 100이 될 때까지Until it is 100

실시예 6 : 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료 제조Example 6: Cosmetic preparation containing cultured mycelia of mycelia

본 실시예 6에서는 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료를 제조하고자 하였다. In Example 6, a cosmetic composition containing the cultured aerial mycelia cultured in Example 3 was prepared.

제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 하기 표 60에 나타낸 바와 같다. The cosmetic preparation is in the form of a cream, and its composition is shown in Table 60 below.

우선 하기 표 60에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, 나)상에 가)상을 가하여 예비 유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 서서히 냉각하여 크림을 제조하였다.
First, the b) phase recorded in Table 60 below was heated and stored at 70 占 폚, and a) phase was added to b), the mixture was uniformly emulsified with a homomixer after preliminary emulsification, and slowly cooled to prepare a cream.

원료Raw material 실시예 6 (중량%)Example 6 (% by weight) end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 스테아린산 Stearic acid 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic acid cholesterol 22 스쿠알란Squalane 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mole addition) alcohol ester 33 글리세릴모노스테아린산 아스테르Glyceryl monostearate Aster 22 I 아위버섯 균사체 배양액Cultured mycelium of agaricus 1One 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 정제수Purified water 100이 될 때까지Until it is 100

비교예 1: 일반 화장료 제조Comparative Example 1: General cosmetic preparation

본 비교예에서는 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물 또는 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 또는 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액이 함유되지 않은 일반 화장료를 제조하였다.In this comparative example, the extract of Fusarium oxysulfurum fumarum obtained in Example 1 or the Fusobacterium mycelium extract obtained in Example 2, or the general cosmetics not containing the Fusobacterium mycelium culture obtained in Example 3 was prepared.

제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 하기 표 61에 나타낸 바와 같다. The cosmetic preparation is in the form of a cream, and its composition is as shown in Table 61 below.

우선 하기 표 61에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, 나)상에 가)상을 가하여 예비 유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 서서히 냉각하여 크림을 제조하였다.
First, the b) phase recorded in Table 61 below was heated and stored at 70 占 폚, and a) phase was added to b), pre-emulsified, emulsified uniformly with a homomixer, and gradually cooled to prepare a cream.

원료Raw material 비교예 1(중량%)Comparative Example 1 (% by weight) end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 스테아린산 Stearic acid 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic acid cholesterol 22 스쿠알란Squalane 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mole addition) alcohol ester 33 글리세릴모노스테아린산 아스테르Glyceryl monostearate Aster 22 I 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양액Fruit body extract of Ai mushroom or mycelium extract of Ai mushroom or culture of mycelium of Ai mushroom -- 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 정제수Purified water 100이 될 때까지Until it is 100

실험예 21: 화장료의 피부 탄력 개선효과 측정Experimental Example 21: Measurement of skin elasticity improvement effect of cosmetic material

상기 실시예 4 내지 6 및 비교예 1에서 제조된 화장료의 피부 탄력 개선효과를 측정하기 위해 실험자(20세~35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 4 내지 실시예 6을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.In order to measure the skin elasticity improving effect of the cosmetic preparations prepared in Examples 4 to 6 and Comparative Example 1, 20 patients (20 to 35 years old) In the left part of the face, Comparative Example 1 was applied twice a day for 2 consecutive months.

피부 탄력 개선효과를 확인하기 위해 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 62 내지 표64에 Cutometer SEM 575의 △R7값으로 기재하였는데 R7값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다(n=20, p<0.05).
To evaluate the effect of skin elasticity improvement, the skin elasticity was measured before use and after 2 months of use with a skin elasticity meter (SEM 575, C + K Electronic Co., Germany). The experimental results are shown in the following Tables 62 to 64 as ΔR7 values of Cutometer SEM 575, where R7 values indicate the viscoelasticity properties of the skin (n = 20, p <0.05).

실험제품Experimental product 피부탄력효과(R7)Skin elasticity effect (R7) 실시예 4Example 4 0.250.25 비교예 1Comparative Example 1 0.110.11

실험제품Experimental product 피부탄력효과(R7)Skin elasticity effect (R7) 실시예 5Example 5 0.220.22 비교예 1Comparative Example 1 0.110.11

실험제품Experimental product 피부탄력효과(R7)Skin elasticity effect (R7) 실시예 6Example 6 0.230.23 비교예 1Comparative Example 1 0.110.11

화장료의 피부 탄력 개선효과를 측정한 결과(표 62 내지 표 64), 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 실시예 4, 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 실시예 5, 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 실시예 6을 도포한 실험자의 피부 탄력개선효과가 비교예 1 보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.The results of measuring skin elasticity improving effects of the cosmetic materials (Table 62 to Table 64), Example 4 containing an extract of Fusarium oxysporum fructus, Example 5 containing an extract of Fusarium obtusifolia, Example 6 containing a fusarium aeruginosa culture It was confirmed that the skin elasticity improvement effect of the experiment was better than that of Comparative Example 1.

상기 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 피부 탄력 개선효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the skin external-application composition of the present invention has an excellent skin elasticity-improving effect.

실험예 22: 화장료의 피부 주름 개선효과 측정EXPERIMENTAL EXAMPLE 22 Measurement of Wrinkle Reduction Effect of Cosmetic Cream

상기 실시예 4 내지 6 및 비교예 1에서 제조된 화장료의 피부 주름 개선효과를 측정하기 위해 실험자(20세~35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 4 내지 실시예 6을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. In order to measure the effect of improving the skin wrinkles of the cosmetic preparations prepared in Examples 4 to 6 and Comparative Example 1, 20 patients (20 to 35 years old) , And Comparative Example 1 was applied to the left side of the face twice a day for two consecutive months.

피부의 주름개선효과를 알아보기 위하여 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 실리콘 재질의 모사판(replica)을 제작하여 지정 부위의 주름의 상태를 화상분석기인 비지오 미터(visiometer: SV60, C+K Electronic Co., Germany)로 측정하였다. To evaluate the effect of wrinkles on the skin, a replica of silicone material was prepared before use and after 2 months of use, and the state of the wrinkles at the designated area was measured with a visiometer (SV60, C + K Electronic Co.) using an image analyzer. , Germany).

그 결과를 하기 표 65 내지 표 67에서 나타내었으며, 표 65 내지 표 67는 2개월 후의 각각의 파라미터(parameter) 값에서 2개월 전 파라미터 값을 뺀 것의 평균을 나타낸 것이다. 즉, 값이 음수가 나올수록 주름 개선효과가 높다는 것을 의미한다.
The results are shown in the following Tables 65 to 67, and Tables 65 to 67 show the average of the parameter values after two months, minus the parameter values two months ago. That is, the more negative the value, the higher the effect of wrinkle improvement.

실험제품Experimental product R1R1 R2R2 R3R3 R4R4 R5R5 실시예 4Example 4 -0.22-0.22 -0.18-0.18 -0.12-0.12 -0.09-0.09 -0.07-0.07 비교예 1Comparative Example 1 -0.12-0.12 -0.09-0.09 -0.06-0.06 -0.06-0.06 -0.04-0.04 R1: 주름 등고선의최고치와 최저치의 차이값
R2: 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균
R3: 5개씩 나눈 R1값 중 최고치
R4: 주름 등고선의 기선(baseline)에서 각각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값
R5: 주름 등고선의 기선에서 각각의 주름 윤곽을 뺀 값의 평균값
R1: Difference between the maximum value and the minimum value of the wrinkle contour line
R2: The wrinkle contour line is arbitrarily divided into 5 squares, and the average of R1 values
R3: Maximum value of R1 divided by 5
R4: Mean value of the baseline of the wrinkle contour minus the value of each apex and valley
R5: Mean value of the value obtained by subtracting the outline of each wrinkle from the base line of the wrinkle contour line

실험제품Experimental product R1R1 R2R2 R3R3 R4R4 R5R5 실시예 5Example 5 -0.20-0.20 -0.17-0.17 -0.11-0.11 -0.07-0.07 -0.05-0.05 비교예 1Comparative Example 1 -0.12-0.12 -0.09-0.09 -0.06-0.06 -0.06-0.06 -0.04-0.04 R1: 주름 등고선의최고치와 최저치의 차이값
R2: 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균
R3: 5개씩 나눈 R1값 중 최고치
R4: 주름 등고선의 기선(baseline)에서 각각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값
R5: 주름 등고선의 기선에서 각각의 주름 윤곽을 뺀 값의 평균값
R1: Difference between the maximum value and the minimum value of the wrinkle contour line
R2: The wrinkle contour line is arbitrarily divided into 5 squares, and the average of R1 values
R3: Maximum value of R1 divided by 5
R4: Mean value of the baseline of the wrinkle contour minus the value of each apex and valley
R5: Mean value of the value obtained by subtracting the outline of each wrinkle from the base line of the wrinkle contour line

실험제품Experimental product R1R1 R2R2 R3R3 R4R4 R5R5 실시예 6Example 6 -0.21-0.21 -0.16-0.16 -0.11-0.11 -0.07-0.07 -0.06-0.06 비교예 1Comparative Example 1 -0.11-0.11 -0.09-0.09 -0.06-0.06 -0.05-0.05 -0.03-0.03 R1: 주름 등고선의최고치와 최저치의 차이값
R2: 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균
R3: 5개씩 나눈 R1값 중 최고치
R4: 주름 등고선의 기선(baseline)에서 각각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값
R5: 주름 등고선의 기선에서 각각의 주름 윤곽을 뺀 값의 평균값
R1: Difference between the maximum value and the minimum value of the wrinkle contour line
R2: The wrinkle contour line is arbitrarily divided into 5 squares, and the average of R1 values
R3: Maximum value of R1 divided by 5
R4: Mean value of the baseline of the wrinkle contour minus the value of each apex and valley
R5: Mean value of the value obtained by subtracting the outline of each wrinkle from the base line of the wrinkle contour line

화장료의 피부 주름 개선효과를 측정한 결과(표 65 내지 표 67), 아위버섯 자실체 추출물을 함유한 실시예 4, 아위버섯 균사체 추출물을 함유한 실시예 5, 아위버섯 균사체 배양액을 함유한 실시예 6의 피부 주름 개선효과가 비교예 1 보다 우수함을 확인할 수 있었다.The results of measuring the skin wrinkle-improving effect of the cosmetic material (Table 65 to Table 67), Example 4 containing an extract of Acanthopagaceae fruit body extract, Example 5 containing an extract of Acanthopagaceae mycelia, Example 6 It was confirmed that the effect of improving skin wrinkles was better than that of Comparative Example 1.

상기의 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 주름 개선효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the wrinkle-improving effect of the composition for external application for skin of the present invention is excellent.

실험예 23: 화장료의 미백효과 측정Experimental Example 23: Measurement of whitening effect of cosmetics

본 실험예에서는 상기 실시예 4 내지 6 및 비교예 1에서 제조된 화장료의 미백효과를 측정하고자 하였다.In this Experimental Example, the whitening effect of the cosmetic compositions prepared in Examples 4 to 6 and Comparative Example 1 was measured.

실험자(20세~35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 4 내지 실시예 6을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. Twenty patients (20 to 35 years old female) were applied to the right side of the face in Examples 4 to 6 and the left side of the face in Comparative Example 1 twice a day for two consecutive months.

2개월 후, 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타(Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 68 내지 표 70에 나타내었고, 미백효능 정도를 7등급으로 분류하여 평가하였다(-3: 매우 악화, -2: 악화, -1: 약간 악화, 0: 변화 없음, 1: 약간 개선, 2: 개선, 3: 매우 개선).
Two months later, the color of the applied area of both sides of the face was analyzed with an image analyzer and color change (ΔL) of the color was measured using a Minolta CR300, and visual observation by a plurality of experts and observation And the effects were measured according to the following classification. The results are shown in the following Tables 68 to 70 and the degree of whitening efficacy was classified into seven grades (-3: very bad, -2: worse, -1: slightly worse, 0: Improvement, 2: improvement, 3: very improvement).

피부색의 밝기 변화(△L)Change in skin color brightness (ΔL) 숙련자의 객관적 평가Objective evaluation of expert 피검자의 주관적 평가Subjective evaluation of the subject 실시예 4Example 4 비교예 1Comparative Example 1 실시예 4Example 4 비교예 1Comparative Example 1 실시예 4Example 4 비교예 1Comparative Example 1 평균값medium 3.33.3 1.81.8 2.92.9 1.91.9 2.62.6 1.3`1.3`

피부색의 밝기 변화(△L)Change in skin color brightness (ΔL) 숙련자의 객관적 평가Objective evaluation of expert 피검자의 주관적 평가Subjective evaluation of the subject 실시예 5Example 5 비교예 1Comparative Example 1 실시예 5Example 5 비교예 1Comparative Example 1 실시예 5Example 5 비교예 1Comparative Example 1 평균값medium 3.23.2 1.81.8 2.82.8 2.02.0 2.52.5 1.41.4

피부색의 밝기 변화(△L)Change in skin color brightness (ΔL) 숙련자의 객관적 평가Objective evaluation of expert 피검자의 주관적 평가Subjective evaluation of the subject 실시예 6Example 6 비교예 1Comparative Example 1 실시예 5Example 5 비교예 1Comparative Example 1 실시예 5Example 5 비교예 1Comparative Example 1 평균값medium 3.23.2 1.71.7 2.82.8 2.02.0 2.42.4 1.41.4

화장료의 미백효과를 측정한 결과(표 68 내지 표 70), 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 실시예 4, 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 실시예 5, 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 실시예 6은 비교예 1 보다 미백효과가 우수함을 확인할 수 있었다.The results of measuring the whitening effect of the cosmetics (Table 68 to Table 70), Example 4 containing an extract of Acanthopagaceae fruit body extract, Example 5 containing an extract of Astragalus mushroom mycelium, It was confirmed that the whitening effect was superior to that of Example 1.

상기의 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 미백효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the skin whitening agent composition of the present invention has excellent whitening effect.

실험예 24: 화장료의 아토피성 피부염에 대한 개선효과 측정EXPERIMENTAL EXAMPLE 24 Measurement of Improvement Effect of Cosmetic Dermatitis on Atopic Dermatitis

본 실험예에서는 상기 실시예 4 내지 6 및 비교예 1에서 제조된 화장료의 아토피성 피부염에 대한 개선효과를 측정하고자 하였다.To evaluate the effect of the cosmetic preparation prepared in Examples 4 to 6 and Comparative Example 1 on atopic dermatitis in this Experimental Example.

5~30세의 아토피 환자로서, 2년 이상 아토피성 피부염을 앓고 있는 환자 30명에 대하여 아토피성 피부염 개선효과를 조사하였다. 동일인에게 왼쪽 손에는 실시예 4 또는 실시예 6을, 오른쪽 손에는 비교예 1을 매일 저녁 세정 후, 피부에 1일 1회 60일간 도포하고 아토피성 피부염 상태 개선 정도를 측정하였다. 측정은 설문조사에 의한 관능평가로 실시하였다.
We evaluated the improvement of atopic dermatitis in 30 patients with atopic dermatitis for 2 years or more as atopic patients aged 5 to 30 years. The same person applied Example 4 or Example 6 on the left hand and Comparative Example 1 on the right hand every day after washing the skin every evening for 60 days once a day to measure the degree of improvement of the atopic dermatitis condition. Measurements were carried out by sensory evaluation by questionnaire.

매우 좋다very good 좋다good 그저 그렇다so so 실시예 4Example 4 80% (24명)80% (24 people) 20% (6명)20% (6 people) 0%0% 비교예 1Comparative Example 1 10% (3명)10% (3 people) 20% (6명)20% (6 people) 70% (21명)70% (21 people)

매우 좋다very good 좋다good 그저 그렇다so so 실시예 5Example 5 70% (21명)70% (21 people) 30% (9명)30% (9 people) 0%0% 비교예 1Comparative Example 1 10% (3명)10% (3 people) 20% (6명)20% (6 people) 70% (21명)70% (21 people)

매우 좋다very good 좋다good 그저 그렇다so so 실시예 6Example 6 70% (21명)70% (21 people) 30% (9명)30% (9 people) 0%0% 비교예 1Comparative Example 1 10% (3명)10% (3 people) 20% (6명)20% (6 people) 70% (21명)70% (21 people)

화장료 아토피성 피부염에 대한 개선효과를 측정한 결과(표 71 내지 표 73), 아위버섯 자실체 추출물이 함유된 실시예 4, 아위버섯 균사체 추출물이 함유된 실시예 5, 아위버섯 균사체 배양액이 함유된 실시예 6이 비교예 1 보다 아토피성 피부개선효과가 우수하다는 사실을 확인할 수 있었다.(Table 71 to Table 73), the results of measuring the improvement effect on cosmetic atopic dermatitis (Table 71 to Table 73), Example 4 containing an extract of Fusarium oxysporum fructus, Example 5 containing an extract of fescue mycelium, It was confirmed that Example 6 was superior to Comparative Example 1 in improving atopic skin.

상기의 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 아토피성 피부염 개선효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the composition for external application for skin of the present invention is excellent in improving atopic dermatitis.

실험예 25: SLS에 의한 피부 자극 완화효과 측정Experimental Example 25: Measurement of skin irritation mitigation effect by SLS

본 실험예에서는 상기 실시예 4 내지 6에서 제조된 화장료의 자극 완화 효과를 인체 첩포 실험으로 평가하였다.In this Experimental Example, the effect of reducing the irritation of the cosmetic materials prepared in Examples 4 to 6 was evaluated by a human skin patch test.

일반적 화장품 처방(크림, 로션, 스킨, 에센스)에 자극을 일으키는 SLS(sodium lauryl sulfate) 1%와 실시예 4 또는 실시예 6의 화장료를 혼용하여 24시간, 48시간, 72시간 동안 첩포한 후, 자극 유발지수를 바탕으로 자극완화 효과를 평가한 것이다.1% of SLS (sodium lauryl sulfate) which causes irritation to general cosmetic formulations (cream, lotion, skin, essence) was mixed with the cosmetic materials of Example 4 or Example 6 for 24 hours, 48 hours and 72 hours, Based on the stimulation index, the effect of stimulation relaxation was evaluated.

20~50세의 건강한 남녀 50명의 팔 상박 부위에 FINN CHAMBER(FINLAND)를 이용하여 제품을 0.3 mg씩 첩포하고, 24시간 후 급성 자극 지수를 평가하였다. 평가 후 재차 동일한 부위에 동량의 제품을 첩포하고 48시간 및 72시간 후의 지연성 자극 지수를 평가하였다.Fifty milliliters of healthy men and women aged 20 to 50 years were exposed to FINN CHAMBER (FINLAND) using 0.3 mg of the product, and the acute irritation index was evaluated after 24 hours. After the evaluation, the same amount of product was applied again to the same site again, and the delayed irritation index after 48 hours and 72 hours was evaluated.

SLS에 의한 피부 자극 완화효과를 측정한 결과, SLS를 단독으로 첩포한 부분은 24시간 후부터 피부에 붉게 자극이 나타났으나, 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 실시예 4, 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 실시예 5 및 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 실시예 6은 첩포하고 24시간, 48시간, 72시간 경과 후에도 아무런 피부 발작을 일으키지 않았다.As a result of measuring the skin irritation mitigation effect by SLS, the area where SLS was applied alone showed irritation to the skin from 24 hours afterwards, but it was found that the skin of Example 4 containing the extract of Astragalus mellifera fruit body, Example 6, which contained Example 5 and cultured mycelium of mycelia, did not cause any skin seizures after 24 hours, 48 hours, and 72 hours.

상기의 결과로부터 아위버섯 자실체 추출물, 아위버섯 균사체 추출물 및 아위버섯 균사체 배양액이 화장료에 혼용되었을 때 자극을 유발시키는 기재(계면 활성제, 향, 알콜)에 의한 피부 자극을 감소시킬 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the skin irritation caused by the stimulant-causing substrate (surfactant, fragrance, alcohol) can be reduced when the culture of the fungal body extract of Aiura mushroom, the extract of Fagus crenata, there was.

실시예 7: 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장수 제조Example 7 Production of Lotion Containing Extract of Astragalus Fructus Fruit

95% 에탄올 8 g에 폴리피로리돈 0.05 g, 올레일알콜 0.1 g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2 g, 향료 0.2 g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1 g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물 0.05 g, 글리세린 5 g을 정제수 85.33 g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장수를 제조하였다.
0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of perfume, 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant and a small amount of dye were mixed and dissolved in 8 g of 95% Respectively. 0.05 g of the mugwort fruity body extract obtained in Example 1 and 5 g of glycerin were dissolved in 85.33 g of purified water. The mixture was added to the mixture, which was then stirred to prepare a lotion containing the extract of Fusarium oxysporum fructus.

실시예 8: 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 화장수 제조Example 8: Production of lotion containing an extract of mycelium of mackerel mushroom

95% 에탄올 8 g에 폴리피로리돈 0.05 g, 올레일알콜 0.1 g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2 g, 향료 0.2 g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1 g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 0.05 g, 글리세린 5 g을 정제수 85.33 g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장수를 제조하였다.
0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of perfume, 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant and a small amount of dye were mixed and dissolved in 8 g of 95% Respectively. 0.05 g of mycelium extract obtained in Example 2 and 5 g of glycerin were dissolved in 85.33 g of purified water. The mixture was added to the mixture, which was then stirred to prepare a lotion containing an extract of Acanthopanax senticosus fruit body.

실시예 9: 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장수 제조Example 9 Production of Lotion Containing Culture Medium of Astragalus mushroom Mycelia

95% 에탄올 8 g에 폴리피로리돈 0.05 g, 올레일알콜 0.1 g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2 g, 향료 0.2 g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1 g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액 0.05 g, 글리세린 5 g을 정제수 85.33 g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장수를 제조하였다.
0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of perfume, 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant and a small amount of dye were mixed and dissolved in 8 g of 95% Respectively. 0.05 g of the cultured aerial mycelium cultured in Example 3 and 5 g of glycerin were dissolved in 85.33 g of purified water. The mixture was added to the mixture, followed by stirring to produce a lotion containing the culture of mycelia.

실시예 10: 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 유액 제조Example 10: Preparation of an emulsion containing an extract of Fusarium oxysporum fructus

세틸알콜 1.2 g, 스쿠알란 10 g, 바세린 2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2 g, 글리세린모노에스테아레이드 1 g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1 g 및 향료 0.1 g을 70℃에서 가열 혼합 용해하고, 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물 0.5 g, 디프로필렌글리콜 5 g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2 g, 트리에탄올아민 0.2 g, 정제수 76.2 g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 제조하였다.
1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of vaseline, 0.2 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoestearaide, 1 g of polyoxyethylene (20 mols) monooleate and 0.1 g of perfume were mixed at 70 캜 And the mixture was heated and mixed to dissolve. Then, 0.5 g of the mugwort fruity body extract obtained in Example 1, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1,500, 0.2 g of triethanolamine and 76.2 g of purified water were dissolved by heating at 75 占 폚. The mixture was emulsified by mixing them and then cooled to prepare oil-in-water (O / W) type emulsion.

실시예 11: 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 유액 제조Example 11: Preparation of emulsion containing mycelium extract of Astragalus mushroom

세틸알콜 1.2 g, 스쿠알란 10 g, 바세린 2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2 g, 글리세린모노에스테아레이드 1 g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1 g 및 향료 0.1 g을 70℃에서 가열 혼합 용해하고, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 0.5 g, 디프로필렌글리콜 5 g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2 g, 트리에탄올아민 0.2 g, 정제수 76.2 g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 제조하였다.
1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of vaseline, 0.2 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoestearaide, 1 g of polyoxyethylene (20 mols) monooleate and 0.1 g of perfume were mixed at 70 캜 The mixture was heated and mixed to dissolve 0.5 g of the mushroom mycelium extract obtained in Example 2, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1,500, 0.2 g of triethanolamine and 76.2 g of purified water at 75 캜. The mixture was emulsified by mixing them and then cooled to prepare oil-in-water (O / W) type emulsion.

실시예 12: 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 유액 제조Example 12: Preparation of emulsion containing cultured mycelia of mycelia

세틸알콜 1.2 g, 스쿠알란 10 g, 바세린 2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2 g, 글리세린모노에스테아레이드 1 g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1 g 및 향료 0.1 g을 70℃에서 가열 혼합 용해하고, 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액 0.5 g, 디프로필렌글리콜 5 g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2 g, 트리에탄올아민 0.2 g, 정제수 76.2 g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 제조하였다.
1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of vaseline, 0.2 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoestearaide, 1 g of polyoxyethylene (20 mols) monooleate and 0.1 g of perfume were mixed at 70 캜 The mixture was heated and mixed to dissolve 0.5 g of the cultured mycelia of the mash mushroom obtained in Example 3, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1,500, 0.2 g of triethanolamine and 76.2 g of purified water at 75 캜. The mixture was emulsified by mixing them and then cooled to prepare oil-in-water (O / W) type emulsion.

실시예 13: 아위버섯 자실체 추출물을 함유하는 미용액 제조Example 13: Preparation of a serum containing a fruiting body extract of Astragalus mushroom

95% 에틸알콜 5 g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2 g, 키툴로오즈 0.3 g, 히아론산나트륨 0.2 g, 비타민 E-아세테이트 0.2 g, 감초산 나트륨 0.2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1 g, 상기 실시예 1에서 수득된 아위버섯 자실체 추출물 1 g 및 적량의 색소를 혼합하여 미용액을 제조하였다.
To 5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of chitoolose, 0.2 g of sodium hypalonite, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium permanganate and 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester , 1 g of the mugwort fruity body extract obtained in Example 1, and an appropriate amount of pigment were mixed to prepare a serum.

실시예 14: 아위버섯 균사체 추출물을 함유하는 미용액 제조Example 14: Preparation of a serum containing an extract of mycelium of mackerel mushroom

95% 에틸알콜 5 g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2 g, 키툴로오즈 0.3 g, 히아론산나트륨 0.2 g, 비타민 E-아세테이트 0.2 g, 감초산 나트륨 0.2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1 g, 상기 실시예 2에서 수득된 아위버섯 균사체 추출물 1 g 및 적량의 색소를 혼합하여 미용액을 제조하였다.
To 5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of chitoolose, 0.2 g of sodium hypalonite, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium permanganate and 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester , 1 g of the mushroom mycelium extract obtained in Example 2 and an appropriate amount of pigment were mixed to prepare a serum.

실시예 15: 아위버섯 균사체 배양액을 함유하는 미용액 제조Example 15: Preparation of a serum containing a cultured mycelium of mycelia

95% 에틸알콜 5 g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2 g, 키툴로오즈 0.3 g, 히아론산나트륨 0.2 g, 비타민 E-아세테이트 0.2 g, 감초산 나트륨 0.2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1 g, 상기 실시예 3에서 수득된 아위버섯 균사체 배양액 1 g 및 적량의 색소를 혼합하여 미용액을 제조하였다.To 5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of chitoolose, 0.2 g of sodium hypalonite, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium permanganate and 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester , 1 g of the cultured mycelia of mackerel mushroom obtained in Example 3 and an appropriate amount of pigment were mixed to prepare a serum.

Claims (6)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 아위버섯 자실체 추출물 또는 아위버섯 균사체 추출물 또는 아위버섯 균사체 배양으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 여드름, 아토피 및 자외선 조사에 의해 유발된 피부염증 개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for improving skin inflammation induced by irradiation with acne, atopy and ultraviolet radiation, which comprises as an active ingredient, a culture solution obtained from a fruiting body extract of avium mushroom or an extract of avocado mushroom or a culture of avocado mushroom mycelium.
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