KR101727634B1

KR101727634B1 - 이속사졸을 중심구조로 갖는 신규 화합물 및 이를 함유하는 당뇨병 치료용 약학 조성물

Info

Publication number: KR101727634B1
Application number: KR1020130105411A
Authority: KR
Inventors: 박승범; 고민섭; 구자영
Original assignee: 서울대학교산학협력단
Priority date: 2013-09-03
Filing date: 2013-09-03
Publication date: 2017-04-17
Also published as: KR20150026487A

Abstract

본 발명은 이속사졸을 중심구조로 갖는 신규 화합물 및 이의 제조방법과, 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 PPAR 감마 관련 질병 치료용 약학 조성물을 제공한다.

Description

이속사졸을 중심구조로 갖는 신규 화합물 및 이를 함유하는 당뇨병 치료용 약학 조성물{NOVEL COMPOUND HAVING ISOXAZOLE CORE AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR DIABETES CONTAINING THE SAME MOLECULAR SKELETONS}

본 발명은 이속사졸을 중심구조로 갖는 신규 화합물 및 이를 함유하는 당뇨병 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

PPAR 감마(Peroxisome proliferator activated receptor gamma)는 활성화를 통하여 제2형 당뇨병의 근본적인 병인인 인슐린 저항성을 개선시킬 수 있다. 특히, 지방세포, 간, 근육 등에서 발생한 인슐린 저항성을 개선시켜 혈당은 물론 고인슐린혈증, 혈압, 이상지질혈증 등의 다양한 유익한 효과를 보여준다. 현재 PPAR 감마를 타겟(target)으로 하는 TZD(thioglitazonedione) 계열 약제는 부작용으로 주로 체중증가 (weight gain), 부종 (edema), 체액저류 (fluid retention), 골밀도 감소 (bone loss) 및 심혈관 부작용 (heart problem)을 일으키는 것으로 보고되고 있다. 최근 CDK5 (Cyclin dependant kinase 5)에 의해 PPAR 감마의 Ser273이 인산화 되는 것을 막는 것이 인슐린 저항성을 줄여 당뇨병 치료의 가능성이 있다는 연구가 있었다. 특히 비만성 당뇨와 연관이 있는데 비만이 발생하면 염증 인자인 TNF-α, IL-6 및 유리 지방산(FFAs, free fatty acids)이 증가하여 지방 세포에서 CDK5/p25 복합체에 의해 PPAR 감마의 Ser273의 인산화가 활성화가 되고 아디포넥틴(adiponectin)과 아디프신(adipsin) 같은 인슐린 저항성을 개선할 수 있는 유전자의 발현을 감소시킨다. 따라서 TZD 계열 약물의 부작용을 없애기 위하여 PPAR 감마의 작용제(agonist)가 아닌 Ser273 인산화 저해가 새로운 당뇨병치료제의 타겟이 될 수 있다.

본 발명의 발명자들은 당뇨병 치료제의 중요한 표적단백질인 PPAR 감마의 작용제(agonist) 뿐만 아니라 S273의 인산화 과정을 막는 저분자 물질의 경우 기존의 약물에서 나타나는 부작용 없이 대사성 질환 치료제로서 활용이 가능하도록 하는 신규 화합물을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

대한민국 공개특허 제10-2008-0062981호

상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 본 발명은 PPAR 감마 선택적 리간드로서 이속사졸을 중심구조로 갖는 신규 화합물 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 그 목적으로 한다. 또한, 본 발명은 이 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 PPAR 감마 관련 질병 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 해결하기 위하여 본 발명은 하기 화학식 1 또는 2로 표시되는 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물을 제공한다.

[화학식 1]

[화학식 2]

(상기 화학식 1 및 2에서,

R¹은 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, tert-부틸디메틸실릴(TBDMS) 또는 -CR₂COR' (여기서 R은 수소, 메틸, 에틸, 또는 플루오로이고, R'은 OR'' 또는 NR''₂이며, 여기서 R''은 서로 독립적으로 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C2~C8의 알케닐, C2~C8의 알키닐, C3~C8의 시클로알킬, C6~C20의 아릴 또는 C4~C20의 헤테로아릴)이고,

R²는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C3~C8의 시클로알킬; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐 중 하나 이상으로 치환된 벤질; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐 중 하나 이상으로 치환된 페닐; 페네틸; 메틸렌디옥시페닐; 또는 나프틸이고,

R³는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C3~C8의 시클로알킬; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 벤질; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 페닐; 페네틸; 또는 메틸렌디옥시페닐이고,

R⁴는 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 벤질 또는 RNHCO- (

) (여기서 R은 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C3~C8의 시클로알킬; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 벤질; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 페닐; 페네틸; 또는 메틸렌디옥시페닐)이다.)

또한, 본 발명은 출발물질인 4-하이드록시벤즈알데하이드 또는 메틸 4-하이드록시벤조에이트에, 비치환 또는 O 또는 Si로 치환된 할로겐알킬을 반응시켜 중간체 화합물을 제조하는 제1단계; 및

상기 제1단계에서 제조된 화합물을 하이드록실아민 및 탄산나트륨과 반응시킨 후, 1-펜타인-3올과 반응시킨 다음, 이소시아네이트와 반응시켜 제1목적 화합물을 제조하는 제1a단계; 또는

상기 제1단계에서 제조된 화합물을 소듐하이드라이드 및 아세토나이트릴과 반응시킨 후, 알데하이드, 아릴브로마이드 및 헤테로아릴브로마이드 중 하나 이상과 반응시킨 다음, 이소시아네이트와 반응시켜 제1목적 화합물을 제조하는 제1b단계;를 포함하는 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 PPAR 감마 관련 질병 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 PPAR 감마 관련 질병은 당뇨병, 비만 및 염증성 질환으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.

본 발명에 따른 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물은, 기존의 PPAR 감마의 작용제로 작용하여 당뇨병 치료제로 쓰이던 TZD 계열 화합물의 구조와 완전히 독립적이고 상이한 신규 화합물이면서, PPAR 감마에 높은 선택성을 나타내고 인산화 저해능을 가지는 리간드이므로, TZD 계열 당뇨병 치료제가 가지는 부작용 없이 PPAR 감마 관련 질병, 특히 당뇨병 치료에 효과적인 치료제로 적용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물의 PPAR 감마의 활성 증진 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물의 등온 열량 측정 (Isothermal Titration Calorimetry) 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물의 표면 플라즈몬 공명 (Surface Plasmon Resonance) 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물의 3T3L1 세포를 이용한 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR) 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물의 CDK5에 의한 PPAR 감마의 Serine273을 저해하는 정도를 나타내는 웨스턴 블로팅(Western blotting) 결과이다.

이하에서는, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록 하기 위하여, 본 발명의 바람직한 실시예들에 관하여 상세히 설명하기로 한다.

본 발명은 하기 화학식 1 또는 2로 표시되는 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물을 제공한다.

[화학식 1]

[화학식 2]

(상기 화학식 1 및 2에서,

R⁴는 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 벤질 또는 RNHCO- (

바람직하게, 상기 R²는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 벤질, 시클로펜틸, 시클로헥실, 페네틸, 페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 3,5-디메톡시페닐, 3,4-디메톡시페닐, 3,4-메틸렌디옥시페닐, 1-나프틸 또는 2-나프틸이고, R³는 에틸, 페닐, 벤질, 4-니트로벤질, 4-아미노벤질, 4-아지도벤질, 페네틸, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 3,5-디메톡시페닐, 시클로헥실, 3,4-디메톡시페닐 또는 3,4-메틸렌디옥시페닐이고, R⁴는 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 벤질 또는 RNHCO- (

) (여기서 R은 에틸, 페닐, 벤질, 페네틸, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 4-니트로페닐, 4-아지도페닐, 4-아미노페닐, 3,5-디메톡시페닐, 시클로헥실, 3,4-디메톡시페닐 또는 3,4-메틸렌디옥시페닐)이다.

더욱 바람직하게, 상기 R¹은 수소 또는 -CR₂COR' (여기서 R은 수소, 메틸, 에틸, 또는 플루오로이고, R'은 OR'' 또는 NR''₂이며, 여기서 R''은 서로 독립적으로 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C2~C8의 알케닐, C2~C8의 알키닐, C3~C8의 시클로알킬, C6~C20의 아릴 또는 C4~C20의 헤테로아릴)이고, 상기 R⁴는 수소 또는 RNHCO- (

) (여기서 R은 에틸, 페닐, 벤질, 페네틸, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 4-니트로페닐, 4-아지도페닐, 4-아미노페닐, 3,5-디메톡시페닐, 시클로헥실, 3,4-디메톡시페닐 또는 3,4-메틸렌디옥시페닐)일 수 있다.

상기 화학식 1은 하기 화학식 1-1 또는 1-2로 표시되는 것일 수 있다. 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 탄소를 중심으로 하기 화학식 1-1과 같이 (R) 구조를 가질 수 있고, 하기 화학식 1-2와 같이 (S) 구조를 가질 수 있다.

[화학식 1-1]

[화학식 1-2]

본 발명에 따른 하기 화학식 1 또는 2로 표시되는 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물은 하기의 제조방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물들의 제조방법은 중간체 화합물의 구조에 따라 크게 반응 I과 반응 II의 두 반응으로 구성된다. 본 발명에 따른 반응 I은 하기의 반응식 1, 반응식 1 및 1a, 반응식 1 및 1b의 반응 I-1, I-2 및 I-3으로 구성된다. 반응 II는 하기의 반응식 2, 반응식 2 및 2a, 반응식 2 및 2b의 반응 II-1, II-2, II-3으로 구성된다.

본 발명은 출발물질인 4-하이드록시벤즈알데하이드 또는 메틸 4-하이드록시벤조에이트에, 비치환 또는 O 또는 Si로 치환된 할로겐알킬을 반응시켜 중간체 화합물을 제조하는 제1단계; 및

상기 제1단계에서 제조된 화합물을 하이드록실아민 및 탄산나트륨과 반응시킨 후, 1-펜타인-3-올과 반응시킨 다음, 이소시아네이트와 반응시켜 제1목적 화합물을 제조하는 제1a단계;

또는 상기 제1단계에서 제조된 화합물을 소듐하이드라이드 및 아세토나이트릴과 반응시킨 후, 알데하이드, 아릴브로마이드 및 헤테로아릴브로마이드 중 하나 이상과 반응시킨 다음, 이소시아네이트와 반응시켜 제1목적 화합물을 제조하는 제1b단계; 를 포함하는 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물의 제조방법을 제공한다.

상기 출발물질이 4-하이드록시벤즈알데하이드(1)인 경우, 예를 들어 하기 반응식 1로 표시되는 합성 경로에 따라 제조된다.

[반응식 1]

먼저, 출발물질인 4-하이드록시벤즈알데하이드(1)에 비치환 또는 O 또는 Si로 치환된 할로겐알킬을 반응시켜 하이드록시기의 수소를 치환시킨 중간체 화합물(2a, 2b)을 제조한다. 이 때 할로겐알킬은 tert-부틸-α-브로모아이소부티레이트(a) 또는 tert-부틸디메틸실릴클로라이드(b)인 것이 바람직하나, 특별히 한정되는 것은 아니다. 상기 반응식 1에서 tert-부틸-α-브로모아이소부티레이트를 사용한 경우 중간체 화합물 2a가 생성되고, tert-부틸디메틸실릴클로라이드를 사용한 경우 중간체 화합물 2b가 생성된다.

이후, 제조된 중간체 화합물(2a, 2b 각각)을 하이드록실아민 및 탄산나트륨과 반응시킨 후 추출 및 정제하여 화합물(3a, 3b)을 얻고, 이를 다시 1-펜타인-3올과 반응시켜 추출 및 정제하여 화합물(4a, 4b)을 얻는다. 그 후 이를 다시 이소시아네이트와 반응시켜 제1목적 화합물(5a, 5b)을 제조한다.

본 발명의 제조방법에 따라 제조된 제1목적 화합물(5a, 5b)은 다양한 형태의 이소시아네이트 치환과 추가적인 합성경로를 통하여 다양한 유도체로 합성될 수 있다.

상기 제1목적 화합물(5a, 5b)을 이소시아네이트와 반응시켜 아민의 수소가 치환된 제2목적 화합물(6a-1, 6b-1)을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다. 또는, 상기 제1목적 화합물(5a, 5b)을 벤질브로마이드와 반응시켜 아민의 수소가 치환된 제2목적 화합물(6a-2, 6b-2)을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다.

이에 더하여, 예를 들어 하기 반응식 1a로 표시되는 합성 경로에 따라 추가 합성될 수 있다.

[반응식 1a]

즉, 상기 제1목적 화합물(5a) 또는 제2 목적 화합물(6a)을 트리플루오로아세트산과 반응시켜 제3 목적 화합물(7)을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다. 그리고 상기 제3 목적 화합물을 알킬아민 또는 아릴아민 등의 아민 화합물, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염, 하이드록시벤조트리아졸과 반응시켜 제4목적 화합물(8d)을 제조하는 단계를 더 포함하거나, 상기 제3 목적 화합물을 알킬알코올또는 아릴알코올 등의 알코올 화합물, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염, 4-다이메틸아미노피리딘과 반응시켜 제4목적 화합물(8c)을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 알킬아민은 벤질아민일 수 있고, 상기 알킬알코올은 벤질알코올일 수 있다.

또는, 예를 들어 하기 반응식 1b로 표시되는 합성 경로에 따라 추가 합성될 수 있다. 상기 제1목적 화합물(5b) 또는 제2 목적 화합물(6b)을 플루오르화수소 및 피리딘과 반응시켜 제3 목적 화합물(9)을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다. 그리고 상기 제3목적 화합물을 알킬브로마이드와 더 반응시켜 수소를 알킬기로 치환할 수 있다.

[반응식 1b]

상기 출발물질이 메틸 4-하이드록시벤조에이트(11)인 경우, 예를 들어 하기 반응식 2로 표시되는 합성 경로에 따라 제조된다.

[반응식 2]

먼저, 출발물질인 메틸 4-하이드록시벤조에이트(11)에 비치환 또는 O 또는 Si로 치환된 할로겐알킬을 반응시켜 하이드록시기의 수소를 치환시킨 중간체 화합물(12a, 12b)을 제조한다. 이 때 할로겐알킬은 tert-부틸-α-브로모아이소부티레이트(a) 또는 tert-부틸디메틸실릴클로라이드(b)인 것이 바람직하나, 특별히 한정되는 것은 아니다. 상기 반응식 2에서 tert-부틸-α-브로모아이소부티레이트를 사용한 경우 중간체 화합물 12a가 생성되고, tert-부틸디메틸실릴클로라이드를 사용한 경우 중간체 화합물 12b가 생성된다.

이후, 제조된 중간체 화합물을 소듐하이드라이드 및 아세토나이트릴과 반응시킨 후 추출 및 정제하여 화합물(13a, 13b)을 얻고, 이를 다시 하이드록시아민 하이드로클로라이드(NH₂OH-HCl)와 반응시켜 이속사졸 고리 구조를 가지는 생성물을 수득한다. 이를 알데하이드와 반응시켜 이민을 형성한 후 소듐 보로하이드라이드(NaBH₄)를 넣은 환원 조건에서 교반하거나, 또는 아릴 브로마이드 또는 헤테로아릴 브로마이드와 비스(트리-tert-부틸포스핀)팔라듐, 소듐 t-부톡사이드를 톨루엔에 넣고 교반하여 R² 치환기를 도입하여 화합물(14a, 14b)을 얻는다. 그 후 이를 다시, 이소시아네이트와 반응시켜 제1목적 화합물(15a, 15b)을 제조한다.

본 발명의 제조방법에 따라 제조된 제1목적 화합물(15a, 15b)은 다양한 형태의 이소시아네이트 치환과 추가적인 합성경로를 통하여 다양한 유도체로 합성될 수 있다. 예를 들어, 하기 반응식 2a 및 2b 로 표시되는 합성 경로에 따라 제조될 수 있고, 자세한 내용은 상술한 바와 동일하다.

[반응식 2a]

[반응식 2b]

본 발명에 따른 이속사졸을 중심구조로 갖는 신규 화합물은 PPAR 감마에 높은 선택성을 가지고 인산화 저해능이 우수하므로, PPAR 감마 작용제(agonist)로 작용할 수 있다.

따라서, 본 발명은 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 PPAR 감마 관련 질병 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에서 PPAR 감마 관련 질병은 PPAR 감마와 관련된 것으로 알려진 질병이면 특별히 한정되는 것은 아니다. 구체적으로, 당뇨병, 비만 및 염증성 질환으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있고, 바람직하게 당뇨병일 수 있다. 상기 당뇨병은 특히 제2형 당뇨병일 수 있다.

본 발명에서 약학 조성물은 본 발명의 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물에 통상적으로 사용하는 무독성의 적절한 담체, 부형제 및 보강제 등을 더 첨가하여 약제학적 분야에서 통상적인 제제, 예를 들면 정제, 캅셀제, 트로키제, 액제, 현탁제 등의 경구투여용 제제 또는 비경구투여용 제제로 제제화할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화합물의 인체에 대한 투여용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환정도에 따라 달라질 수 있으며, 성인환자를 기준으로 할 때 일반적으로 0.0001 내지 1000 mg/㎏/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 화합물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

이하의 실시를 통하여 본 발명이 더욱 상세하게 설명된다. 단, 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서 이들만으로 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 4-하이드록시벤즈알데하이드를 출발물질로 한 목적 화합물의 제조

1-1.

상업적으로 구매 가능한 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)사의 4-하이드록시벤즈알데하이드(1) (5g, 40.9 mmol)를 N,N-디메틸포름아마이드 (50 mL)에 용해시킨 후, 포타슘카보네이트(4.0 당량), 마그네슘설페이트(1.0 당량) 및 tert-부틸-α-브로모아이소부티레이트(5.0 당량)(R = -CH₃)를 차례로 첨가하고 100 ℃에서 22시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 2a(R = -CH₃)를 수득하였다.

상기와 같이 제조된 화합물 2a (8g, 1.0 당량)을 에탄올(150 mL) 및 물(150 mL)에 용해한 용액에 대하여 하이드록시아민 하이드로클로라이드(1.03 당량) 및 소듐 카보네이트(1.03 당량)를 넣고 65 ℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 3a를 수득하였다.

상기와 같이 제조된 화합물 3a (1g, 1.0 당량)와 N-클로로숙신이미드(1.1 당량)을 테트라하이드로퓨란(10 mL)에 용해한 용액에 대하여 피리딘(0.1 당량)을 넣고 60 ℃에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 2~3시간 동안 교반하였다. 상기 혼합 용액에 1-펜타인-3-올 (1.0 당량)(R² = -CH₂CH₃)과 트리에틸아민 (1.2 당량)을 넣고 60 ℃에서 생성물이 생성될 때까지 1~3시간 동안 추가적으로 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 4a(R² = -CH₂CH₃)를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 4a(200 mg, 1.0 당량)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹인 용액에 대하여 피리딘(3.0 당량), 벤질 이소시아네이트(1.5 당량) (R₃ = -CH₂C₆H₅) 및 염화구리(I) (0.1 당량)을 넣고 상온에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 2~3시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 에틸아세테이트로 희석한 후, 포화 염화암모늄 수용액으로 씻어내어 피리딘 염을 제거하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 5a(R³ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

1-2.

(1) 상기 실시예 1-1에서 얻어진 화합물 5a(70 mg, 1.0 당량)을 디클로로메탄(2 mL)에 용해한 용액에 대하여 트리에틸아민(3.0 당량), 에틸 이소시아네이트(10.0 당량) (R = -CH₂CH₃) 및 염화구리(I)(1.0 당량)를 넣고 상온에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 12~24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 6a-1(R⁴ = -CONHCH₂CH₃)를 수득하였다.

(2) 상기 실시예 1-1에서 얻어진 화합물 5a(115 mg, 1.0 당량)을 N,N-디메틸포름아마이드(5 mL)에 용해한 용액에 대하여 세슘카보네이트(3.0 당량)와 테트라부틸암모늄 아이오다이드(3.0 당량)를 첨가하였다. 이 혼합 용액에 벤질브로마이드(3.0 당량)를 넣고 상온에서 12~24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 6a-2(R⁴ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

1-3.

(1) 상기 단계에서 제조한 화합물 5a 또는 5b(50 mg, 1.0 당량)을 디클로로메탄(2 mL)에 용해한 용액에 대하여 트리플루오로아세트산(200 μL)을 넣고 상온에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 3~12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 7(R¹ = -CR₂COOH)을 수득하였다.

1) 상기 단계에서 제조한 화합물 7(50 mg, 1.0 당량), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염(1.5 당량), 4-디메틸아미노피리딘(0.5 당량), 트리에틸아민(3.0 당량)을 디클로로메탄(2 mL) 또는 1,4-디옥산(2 mL)에 녹인 용액에 대하여 벤질알코올(2.0 당량)을 천천히 넣어준다. 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 8c(R₁ = -CR₂COOR', R'= -CH₂C₆H₅)을 수득하였다.

2) 상기 단계에서 제조한 화합물 7(50 mg, 1.0 당량), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염(1.5 당량), 하이드록시벤조트리아졸(1.5 당량), 트리에틸아민(6.0 당량)을 1,4-디옥산(2 mL)에 녹인 용액에 대하여 벤질아민(1.5 당량)을 천천히 넣어준다. 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 12시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 8d(R₁ = -CR₂CONR''₂, R''=-H & -CH₂C₆H₅)을 수득하였다.

[실시예 2] 4-하이드록시벤즈알데하이드를 출발물질로 한 목적 화합물의 제조

2-1.

상업적으로 구매 가능한 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)사의4-하이드록시벤즈알데하이드(1) (5g, 40.9 mmol)을 N,N-디메틸포름아마이드 (50 mL)에 용해시킨 후, 이미다졸(1.5 당량)을 첨가하고 30분간 상온에서 교반하였다. 혼합물에 tert-부틸디메틸실릴클로라이드(1.3 당량)를 첨가하고, 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 2b를 수득하였다.

상기와 같이 제조된 화합물 2a (8g, 1.0 당량)을 에탄올(150 mL) 및 물(150 mL)에 용해한 용액에 대하여 하이드록시아민 하이드로클로라이드(1.03 당량) 및 소듐 카보네이트(1.03 당량)를 넣고 65 ℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 3b를 수득하였다.

상기와 같이 제조된 화합물 3b (1g, 1.0 당량)와 N-클로로숙신이미드(1.1 당량)을 테트라하이드로퓨란(10 mL)에 용해한 용액에 대하여 피리딘(0.1 당량)을 넣고 60 ℃에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 2~3시간 동안 교반하였다. 상기 혼합 용액에 1-펜타인-3-올 (1.0 당량)(R² = -CH₂CH₃)과 트리에틸아민 (1.2 당량)을 넣고 60 ℃에서 생성물이 생성될 때까지 1~3시간 동안 추가적으로 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 4b(R² = -CH₂CH₃)를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 4a(200 mg, 1.0 당량)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹인 용액에 대하여 피리딘(3.0 당량), 벤질 이소시아네이트(1.5 당량) (R₃ = -CH₂C₆H₅) 및 염화구리(I) (0.1 당량)을 넣고 상온에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 2~3시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 에틸아세테이트로 희석한 후, 포화 염화암모늄 수용액으로 씻어내어 피리딘 염을 제거하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 5b(R³ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

2-2.

상기 실시예 1의 1-2에서의 화합물 5a 대신, 상기 화합물 5b 를 사용하는 것을 제외하고는, 동일한 공정을 실시하여 화합물 6b-1(R⁴ = -CONHCH₂CH₃) 및 6b-2(R⁴ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

2-3.

상기 단계에서 제조한 5a 또는 5b(50 mg, 1.0 당량)을 플루오르화수소와 피리딘을 테트라하이드로퓨란에 부피비로 5:5:90의 비율로 녹인 용액을 처리한 후 3~6시간 정도 교반하였다. 교반한 용액을 에톡시트리메틸실란으로 ??칭하고 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 9(R¹ = H)을 수득하였다.

이에 더하여, 상기 단계에서 제조한 화합물 9(50 mg, 1.0 당량)을 N,N-디메틸포름아마이드(5 mL)에 녹인 후 세슘카보네이트(3.0 당량)와 테트라부틸암모늄 아이오다이드(3.0 당량)를 첨가하였다. 이 혼합 용액에 벤질 브로마이드(3.0 당량)를 넣고 상온에서 12~24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 10(R¹ = C₆H₅CH₂-)를 수득하였다.

[실시예 3] 메틸 4-하이드록시벤조에이트를 출발물질로 한 목적 화합물의 제조

3-1.

상업적으로 구매 가능한 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)사의 메틸 4-하이드록시벤조에이트(5g, 40.9 mmol) 를 N,N-디메틸포름아마이드 (50 mL)에 녹인 후 포타슘카보네이트(4.0 당량), 마그네슘설페이트(1.0 당량)와 tert-부틸-α-브로모아이소부티레이트(5.0 당량)(R = -CH₃)를 차례로 첨가하였다. 100 ℃에서 22시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 12a(R = -CH₃)를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 12a(8 g, 1.0 당량)을 테트라하이드로퓨란(100 mL)에 녹인 용액에 대하여 소듐 하이드라이드(NaH, 2.0 당량, 60% dispersion in mineral oil)를 넣고 80℃에서 10분간 교반한 뒤, 추가적으로 아세토나이트릴(5.0 당량)을 테트라하이드로퓨란(50 mL)에 녹여서 천천히 첨가하였다. 80℃에서 18시간 동안 교반한 뒤 필터하여 침전을 제거하고 용매를 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 13a를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 13a(1 g, 1.0 당량)과 수산화소듐 (NaOH, 1.1 당량)을 물 (10 mL)와 에탄올(10 mL)의 혼합 용액에 녹인 후, 하이드록시아민 하이드로클로라이드(NH₂OH-HCl, 1.1 당량)을 넣어주고 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 디클로로메탄으로 희석한 후, 유기 용매층을 얻어서 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류하여 이속사졸 고리 구조를 가지는 생성물을 수득하였다. 수득한 구조를 메탄올(10 mL)에 녹인 후 1.5당량의 벤즈알데하이드와 반응시켜 이민을 형성한 후 소듐 보로하이드라이드(NaBH₄, 1.5당량)을 넣은 환원 조건에서 12 시간 동안 교반한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 14a-1(R² = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다. 또는 이전 수득한 이속사졸 고리 구조에 대하여 페닐 브로마이드(1.5 당량)와 비스(트리-tert-부틸포스핀)팔라듐(0.05 당량), 소듐 t-부톡사이드(3.0 당량)를 톨루엔에 넣고 80℃에서 12시간 동안 교반한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 14a-2(R² = -C₆H₅)를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 14a-1 및 14a-2 각각(200 mg, 1.0 당량)을 디클로로메탄(5 mL) 또는 니트로메테인(5 mL)에 녹인 용액에 대하여 벤질 이소시아네이트(1.5 당량) (R³ = -CH₂C₆H₅)을 넣고 상온에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 12~24시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 다이클로로메테인으로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 15a(R³ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

3-2.

상기 실시예 1의 1-2에서의 화합물 5a 대신, 상기 화합물 15a를 사용하는 것을 제외하고는, 동일한 공정을 실시하여 화합물 16a-1(R⁴ = -CONHCH₂CH₃) 및 16a-2(R⁴ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

3-3.

상기 실시예 1의 1-3에서의 화합물 5a 및 6a 대신, 상기 화합물 15a 및 16a를 사용하는 것을 제외하고는, 동일한 공정을 실시하여 화합물 17(R¹ = -CR₂COOH), 화합물 18c(R¹ = -CR₂COOR', R'= -CH₂C₆H₅) 및 화합물 18d(R¹ = -CR₂CONR''₂, R''=-H & -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

[실시예 4] 메틸 4-하이드록시벤조에이트를 출발물질로 한 목적 화합물의 제조

4-1.

상업적으로 구매 가능한 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)사의 메틸 4-하이드록시벤조에이트 (5 g, 40.9 mmol)을 N,N-디메틸포름아마이드 (50 mL)에 녹인 후 이미다졸(1.5 당량)을 첨가하고 30분간 상온에서 교반하였다. 혼합물에 tert-부틸디메틸실릴클로라이드(1.3 당량)을 첨가하였다. 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 화합물 12b를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 12b(8 g, 1.0 당량)을 테트라하이드로퓨란(100 mL)에 녹인 용액에 대하여 소듐 하이드라이드(NaH, 2.0 당량, 60% dispersion in mineral oil)를 넣고 80℃에서 10분간 교반한 뒤, 추가적으로 아세토나이트릴(5.0 당량)을 테트라하이드로퓨란(50 mL)에 녹여서 천천히 첨가하였다. 80℃에서 18시간 동안 교반한 뒤 필터하여 침전을 제거하고 용매를 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 13b를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 13b(1 g, 1.0 당량)과 수산화소듐 (NaOH, 1.1 당량)을 물 (10 mL)와 에탄올(10 mL)의 혼합 용액에 녹인 후, 하이드록시아민 하이드로클로라이드(NH₂OH-HCl, 1.1 당량)을 넣어주고 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 디클로로메탄으로 희석한 후, 유기 용매층을 얻어서 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류하여 이속사졸 고리 구조를 가지는 생성물을 수득하였다. 수득한 구조를 메탄올(10 mL)에 녹인 후 1.5당량의 벤즈알데하이드와 반응시켜 이민을 형성한 후 소듐 보로하이드라이드(NaBH₄, 1.5당량)을 넣은 환원 조건에서 12 시간 동안 교반한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 14b-1(R² = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다. 또는 이전 수득한 이속사졸 고리 구조에 대하여 페닐 브로마이드(1.5 당량)와 비스(트리-tert-부틸포스핀)팔라듐(0.05 당량), 소듐 t-부톡사이드(3.0 당량)를 톨루엔에 넣고 80℃에서 12시간 동안 교반한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 14b-2(R² = -C₆H₅)를 수득하였다.

상기 단계에서 제조한 화합물 14b-1 및 14b-2 각각(200 mg, 1.0 당량)을 디클로로메탄(5 mL) 또는 니트로메테인(5 mL)에 녹인 용액에 대하여 벤질 이소시아네이트(1.5 당량) (R³ = -CH₂C₆H₅)을 넣고 상온에서 초기 화합물이 모두 소모될 때까지 12~24시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석한 후, 다이클로로메테인으로 추출하였다. 유기 용매층에 무수 소듐설페이트를 가하여 흡습하고, 필터 및 증류한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피로 정제하여 상기 화합물 15b(R³ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

4-2.

상기 실시예 1의 1-2에서의 화합물 5a 대신, 상기 화합물 15b를 사용하는 것을 제외하고는, 동일한 공정을 실시하여 화합물 16b-1(R⁴ = -CONHCH₂CH₃) 및 16b-2(R⁴ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

4-3.

상기 실시예 2의 2-3에서의 화합물 5b 또는 6b 대신, 상기 화합물 15b 또는 16b를 사용하는 것을 제외하고는, 동일한 공정을 실시하여 화합물 19(R¹ = H) 및 20(R¹ = -CH₂C₆H₅)를 수득하였다.

상기 실시예와 동일한 방법으로 합성된 본 발명의 화합물들을 하기 표 1에 정리하여 나타내었다.

화합물의 물성 분석

화합물	화합물 구조	이론질량	질량분석	NMR
1		[M+H]⁺495.25	494.91	¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ7.65(d,J=8.5Hz,2H),7.357.20(m,5H),6.87(d,J=9.0Hz,2H),6.43(s,1H),5.82(t,J=6.6 Hz, 1H), 5.205.11 (m, 1H), 4.434.29 (m, 2H), 2.041.94 (m, 2H), 1.64 (s, 6H), 1.40 (s, 9H), 0.95 (t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(125MHz,CDCl₃)δ173.2,171.0,162.0,157.6,155.7,138.3,128.9,128.0,127.8,127.8,122.3,118.6,100.5,82.2,79.8,69.9,45.4,28.0,26.5,25.6,9.6
2		[M+H]⁺509.26	508.95	¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ7.67(d,J=9.0Hz,2H),7.30(t,J=7.8 Hz, 2H), 7.22 (t, J=7.5Hz,1H),7.18(d,J=8.0Hz,2H),6.90(d,J=9.0Hz,2H),6.43(s,1H),5.80(t,J=6.5Hz,1H),4.83(t,J=5.4Hz,1H),3.46(q,J=6.7Hz,2H),2.82(t,J=7.0Hz,2H),2.071.93(m,2H),1.61(s,6H),1.43(s,9H),0.96(t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(125MHz,CDCl₃)δ173.2,171.1,162.0,157.6,155.5,138.7,129.0,128.9,128.0,126.8,122.3,118.6,100.4,82.2,79.8,69.6,42.4,36.2,28.0,26.5,25.6,9.6
3		[M+H]⁺439.19	439.29	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (t,J=6.0Hz,1H),7.70(d,J=9.0Hz,2H),7.347.20(m,5H),6.93(d,J=7.0Hz,2H),6.92(s,1H),5.73(t,J=7.0 Hz, 1H), 4.264.15 (m, 2H), 2.001.89 (m, 2H), 1.51 (s, 6H), 0.92 (t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ171.1,161.4,157.9,155.6,139.5,128.3,127.5,127.0,126.8,120.3,118.2,100.3,79.7,79.2,68.4,43.9,26.1,25.6,9.4
4		[M+H]⁺453.20	453.32	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (d, J=9.0Hz,2H),7.51(t,J=5.5Hz,1H),7.297.14(m,5H),6.93(d,J=9.0Hz,2H),6.87(s,1H),5.69(t,J=6.8 Hz, 1H), 3.22 (td,J=7.5Hz,J=5.5Hz,2H),2.72(t,J=7.5Hz,2H),1.961.85(m,2H),1.49(s,6H),0.89(t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ176.9,171.2,161.4,158.0,155.2,139.2,128.6,128.3,127.4,126.1,120.1,118.2,100.2,79.9,68.1,41.9,35.2,26.0,25.7,9.4
5		[M+H]⁺510.2235	510.2239	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.49 (t, J=5.4Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,2H),7.357.22(m,5H),6.94(d,J=8.6Hz,2H),6.58(s,1H),5.80(t,J=6.4 Hz, 1H), 4.94 (s,2H), 3.283.20 (m, 2H), 1.951.81 (m, 2H), 1.52 (s, 6H), 1.09 (t,J=7.1Hz,3H),0.71(t,J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ170.1,161.2,157.1,154.4,153.3,138.5,128.4,127.8,127.0,126.8,120.4,118.2,100.1,71.1,46.3,35.2,25.9,25.1,16.3,14.7,8.8
6		[M+H]⁺558.2235	558.2253	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.54 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.6Hz,2H),7.54(d,J=8.6Hz,2H),7.377.22(m,8H),7.147.06(m,1H),6.94(d,J=7.8Hz,2H),6.65(s,1H),5.88(t,J=6.4 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 2.001.87 (m, 2H), 1.48 (s, 6H), 0.75 (t,J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.6,161.5,158.2,154.5,151.3,138.0,137.8,128.9,128.4,127.3,127.2,127.0,123.9,119.9,118.2,100.4,80.1,71.6,46.8,25.9,25.7,8.8
7		[M+H]⁺572.2391	572.2390	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.94 (t, J=5.5Hz,1H),7.66(d,J=8.0Hz,2H),7.367.21(m,10H),6.93(d,J=8.5Hz,2H),6.61(s,1H),5.82(t,J=6.3 Hz, 1H), 4.95 (s,2H), 4.484.37 (m, 2H), 1.951.81 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 0.71 (t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ170.0,161.3,157.5,154.4,153.7,139.0,138.4,128.4,127.7,127.2,127.1,127.0,126.9,120.6,118.2,100.2,79.1,71.2,46.5,43.9,25.9,25.3,8.8
8		[M+H]⁺586.2548	586.2563	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (brs, 1H), 7.65 (d,J=8.3Hz,2H),7.367.14(m,10H),6.94(d,J=8.3Hz,2H),6.54(s,1H),5.79(t,J=6.1 Hz, 1H), 4.984.88 (m, 2H), 3.523.43 (m, 2H), 2.80 (t,J=6.9Hz,2H),1.931.79(m,2H),1.52(s,6H),0.70(t,J=7.1Hz,3H);¹³CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ169.9,161.3,157.7,154.4,153.5,139.1, 138.4, 128.6, 128.3, 127.6, 127.0, 126.8, 126.2, 120.3, 118.2, 100.1, 79.4, 71.1, 46.3, 41.8, 35.1, 25.9, 25.4, 8.8
9		[M+H]⁺524.2391	524.2406	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 (t, J=5.4Hz,1H),7.71(d,J=8.6Hz,2H),7.327.14(m,5H),7.02(s,1H),6.92(d,J=8.6Hz,2H),5.83(t,J=6.4 Hz, 1H), 3.963.83 (m, 2H), 3.223.15 (m, 2H), 2.80 (t,J=7.5Hz,2H),2.071.98(m,2H),1.49(s,6H),1.05(t,J=7.2Hz,3H),0.95(t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz, DMSO-d6) δ 169.8, 161.6, 158.0, 154.3, 152.9, 138.5, 128.6, 128.5, 127.5, 126.4, 120.0, 118.1, 100.6, 79.8, 70.9, 44.9, 35.0, 34.9, 25.9, 25.6, 14.7, 9.1
10		[M+H]⁺572.2391	572.2404	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.46 (s, 1H), 7.69 (d,J=8.6Hz,2H),7.51(d,J=8.5Hz,2H),7.357.26(m,4H),7.247.17(m,3H),7.09(t,J=7.3 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.93 (d, J=8.8Hz,2H),5.92(t,J=6.4 Hz, 1H), 4.023.88 (m, 2H), 2.102.02 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 0.96 (t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.5, 158.2, 154.4, 151.0, 138.4, 137.7, 131.6, 128.9, 128.6, 128.5, 127.4, 126.4, 123.9, 119.9, 119.8, 118.1, 100.8, 80.0, 71.4, 45.4, 34.8, 25.9, 25.7, 9.1
11		[M+H]⁺586.2548	586.2563	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.83 (t, J=5.6 Hz, 1H), 7.74 (d,J=8.6Hz,2H),7.357.13(m,10H),7.04(s,1H),6.92(d,J=8.3Hz,2H),5.85(t,J=6.4 Hz, 1H), 4.434.33 (m, 2H), 3.983.86 (m, 2H), 2.82 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.071.99 (m, 2H), 1.52 (s, 6H), 0.95 (t,J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.8,161.5,157.6,154.3,153.3,139.1,138.4,128.6,128.5,128.3,127.7,127.2,126.9,126.4,120.6,118.2,100.6,79.3,71.0,45.1,43.7,34.9,25.9,25.4,9.1
12		[M+H]⁺600.2704	600.2711	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.45 (brs, 1H), 7.69 (d,J=8.1Hz,2H),7.327.12(m,10H),6.99(s,1H),6.93(d,J=8.3Hz,2H),5.81(t,J=6.1 Hz, 1H), 3.943.83 (m, 2H), 3.443.36 (m, 4H), 2.822.71 (m, 4H), 2.051.94 (m, 2H), 1.48 (s, 6H), 0.93 (t,J=7.0Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.7,161.6,158.2,154.3,153.0,139.1,138.5,128.6,128.5,128.4,127.4,126.4,126.2,119.8,118.2,100.6,80.0,71.0,45.0, 41.7, 35.1, 34.9, 25.9, 25.7, 9.1
13		[M+H]⁺564.2704	564.2714	¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.46 (d, J=7.43Hz,1H),7.737.65(m,2H),7.387.20(m,5H),6.976.89(m,2H),6.62(s,1H),5.83(t,J=6.5 Hz, 1H), 4.94 (s, 2H), 2.51 (quin, J=1.7Hz,1H),1.971.77(m,4H),1.63(brs,2H),1.55(s,6H),1.401.11(m,6H),0.71(t,J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ175.0,170.0,161.3,157.4,154.7,152.6,138.4, 128.4, 127.8, 127.1, 126.9, 120.8, 118.2, 100.3, 78.9, 71.2, 49.1, 46.3, 32.2, 25.9, 25.2, 25.1, 24.2, 8.8
14		[M+H]⁺543.2490	543.2495	¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.717.78 (m, 2H), 7.147.33 (m, 10H), 6.916.94 (m, 3H), 4.404.47 (m, 2H), 3.173.47 (m, 2H), 2.78 (br. s, 2H), 1.851.98 (m, 2H), 1.54 (s, 6H), 0.790.95 (m, 3H); ¹³CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ171.2,161.4,157.4,154.9,154.3, 138.8, 138.2, 137.8, 128.7, 128.5, 128.4, 128.4, 127.7, 127.5, 127.2, 126.3, 126.2, 120.9, 118.2, 100.1, 100.0, 69.5, 69.4, 50.1, 49.0, 48.1, 34.2, 33.5, 26.2, 25.3, 9.2, 9.1
15		[M]⁺587.2268	587.2267	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 1H), 8.16 (d, J=7.6Hz,1H),7.63(d,J=8.8Hz,2H),7.377.21(m,5H),7.037.10(m,2H),6.996.89(m,3H),6.64(s,1H),5.95(t,J=6.4 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 1.991.87 (m, 2H), 1.50 (s, 6H), 0.74 (t, J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(125MHz,DMSO-d6)169.6,161.5,154.8,150.8,148.3,138.1,128.4,127.4,127.2,127.0,126.9,123.9,120.6,119.9, 119.1, 118.1, 110.9, 100.3, 79.8, 71.6, 56.0, 46.3, 25.9, 25.6, 8.8
16		[M]⁺587.2268	587.2261	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.53 (s, 1H), 7.68 (d, J=7.58Hz,2H),7.397.19(m,7H),7.10(d,J=8.1Hz,1H),6.93(d,J=8.7Hz,2H),6.726.65(m,2H),5.89(t,J=6.2 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.001.87 (m, 2H), 1.54 (s, 6H), 0.76 (t, J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ169.8,161.4,159.7,157.4,154.4,151.3,139.0,138.0,129.8,128.4,127.7,127.2,127.0,120.7,118.2,112.0,109.5,105.4,100.4,79.0,71.6,55.1,46.9,25.9,25.3,8.8
17		[M]⁺587.2268	587.2269	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.37 (s, 1H), 7.63 (d, J=8.6Hz,2H),7.44(d,J=9.1 Hz, 2H), 7.377.24 (m, 5H), 6.93 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.91 (d, J=9.1 Hz, 2H), 6.66 (s, 1H), 5.87 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.001.88 (m, 2H), 1.49 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(125MHz,DMSO-d6) δ 169.7, 161.5, 158.2, 155.8, 154.4, 151.4, 138.1, 130.7, 128.4, 127.4, 127.2, 127.0, 121.7, 119.8, 118.1, 114.0, 100.3, 71.5, 55.2, 46.8, 25.9, 25.7, 8.8
18		[M]⁺571.2319	571.2316	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.45 (s, 1H), 7.67 (d,J=8.6Hz,2H),7.42(d,J=8.3Hz,2H),7.377.23(m,5H),7.14(d,J=8.3Hz,2H),6.92(d,J=8.8Hz,2H),6.67(s,1H),5.88(t,J=6.4 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.011.88 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 0.75 (t,J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.8,161.3,157.5,154.4,151.3, 138.0, 135.2, 133.0, 129.3, 128.4, 127.7, 127.2, 127.0, 120.6, 119.9, 118.2, 100.4, 79.1, 71.5, 46.8, 25.9, 25.3, 20.4, 8.8
19		[M+H]⁺626.2109	626.2103	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.78 (s, 1H), 7.77 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.70 (d, J=8.3Hz,2H),7.63(d,J=8.8 Hz, 2H), 7.387.23 (m, 5H), 6.94 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.69 (s, 1H), 5.89 (t, J=6.5 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 2.001.89 (m, 2H), 1.50 (s, 6H), 0.76 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.6,161.5,158.1,154.3, 151.6, 141.5, 137.8, 128.4, 127.4, 127.3, 126.2, 126.2, 126.1, 119.8, 118.1, 110.9, 100.4, 79.9, 71.7, 48.6, 47.1, 25.9, 25.6, 8.8
20		[M]⁺591.1772	591.1775	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.57 (s, 1H), 7.67 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.59 (d, J=9.1Hz,1H),7.39(d,J=8.8 Hz, 1H), 7.367.24 (m, 5H), 6.93 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.68 (s, 1H), 5.88 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 1.991.88 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ169.7,161.4,157.7,154.3,151.4,137.9,136.8,128.8, 128.4, 127.6, 127.6, 127.2, 127.0, 121.6, 120.4, 118.2, 100.4, 79.3, 71.6, 47.0, 25.9, 25.4, 8.8
21		[M]⁺613.2788	613.2790	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.46 (s, 1H), 7.65 (d, J=8.8Hz,2H),7.43(d,J=8.6 Hz, 2H), 7.367.23 (m, 5H), 7.14 (d, J=8.3 Hz, 2H), 6.92 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.66 (s, 1H), 5.88 (t, J=6.5 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 2.562.48 (m, 3H), 1.991.87 (m, 2H), 1.571.46 (m, 8H), 1.321.25 (m, 2H), 0.88 (t, J=7.5Hz,3H),0.75(t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ175.0,169.7,161.4, 157.9, 154.5, 151.3, 138.1, 138.0, 135.4, 128.7, 128.4, 127.6, 127.2, 127.0, 120.2, 120.0, 118.1, 100.4, 79.5, 71.5, 46.8, 34.2, 33.2, 25.9, 25.5, 21.7, 13.8, 8.8
22		[M]⁺617.2373	617.2378	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.40 (s, 1H), 7.62 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.387.23 (m, 5H), 7.19 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.08 (d, J=8.6Hz,1H),6.91(m,3H),6.65(s,1H),5.87(t,J=6.4 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 2.001.87 (m, 2H), 1.48 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.7, 161.5, 158.2, 154.5, 151.3, 148.7, 145.4, 138.1, 131.1, 128.4, 127.4, 127.2, 127.0, 119.7, 117.9, 112.0, 111.9, 105.2, 100.3, 71.5, 55.7, 55.5, 48.6, 46.7, 25.9, 25.7, 8.8
23		[M]⁺617.2373	617.2384	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.51 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.397.22 (m, 5H), 6.92 (d, J=8.6Hz,2H),6.78(d,J=2.2 Hz, 2H), 6.68 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.87 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.97(s, 2H), 3.71 (s, 6H), 1.961.89 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.6,161.5,160.6,154.4,151.2,139.5,138.0,128.4,127.3, 127.2, 127.0, 119.4, 118.0, 100.3, 97.9, 96.0, 80.3, 71.6, 69.8, 55.2, 46.9, 29.0, 25.9, 8.8
24		[M]⁺601.2060	601.2059	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.39 (s, 1H), 7.67 (d, J=8.8Hz,2H),7.377.21(m,6H),6.956.89(m,3H),6.86(t,J=8.3 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.00 (s, 2H), 5.87 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 1.981.87 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ174.8,169.8,161.4,157.5,154.4,151.4,147.3,143.6,138.0,132.0, 128.4, 127.7, 127.2, 127.0, 120.6, 118.2, 113.2, 108.1, 102.4, 101.2, 100.4, 79.1, 71.5, 46.8, 25.9, 25.3, 8.8
25		[M]⁺617.2373	617.2384	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.51 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.397.22 (m, 5H), 6.92 (d, J=8.6Hz,2H),6.78(d,J=2.2 Hz, 2H), 6.68 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.87 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.97(s, 2H), 3.71 (s, 6H), 1.961.89 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.6,161.5,160.6,154.4,151.2,139.5,138.0,128.4,127.3, 127.2, 127.0, 119.4, 118.0, 100.3, 97.9, 96.0, 80.3, 71.6, 69.8, 55.2, 46.9, 29.0, 25.9, 8.8
26		[M]⁺617.2373	617.2384	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.51 (s, 1H), 7.61 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.397.22 (m, 5H), 6.92 (d, J=8.6Hz,2H),6.78(d,J=2.2 Hz, 2H), 6.68 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.87 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.97(s, 2H), 3.71 (s, 6H), 1.961.89 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ169.6,161.5,160.6,154.4,151.2,139.5,138.0,128.4,127.3, 127.2, 127.0, 119.4, 118.0, 100.3, 97.9, 96.0, 80.3, 71.6, 69.8, 55.2, 46.9, 29.0, 25.9, 8.8
27		[M]⁺601.2060	601.2059	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.39 (s, 1H), 7.67 (d, J=8.8Hz,2H),7.377.21(m,6H),6.956.89(m,3H),6.86(t,J=8.3 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.00 (s, 2H), 5.87 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 1.981.87 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ174.8,169.8,161.4,157.5,154.4,151.4,147.3,143.6,138.0,132.0,128.4,127.7,127.2,127.0,120.6,118.2,113.2,108.1,102.4,101.2, 100.4, 79.1, 71.5, 46.8, 25.9, 25.3, 8.8
28		[M]⁺601.2060	601.2059	¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.39 (s, 1H), 7.67 (d, J=8.8Hz,2H),7.377.21(m,6H),6.956.89(m,3H),6.86(t,J=8.3 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.00 (s, 2H), 5.87 (t, J=6.4 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 1.981.87 (m, 2H), 1.53 (s, 6H), 0.75 (t, J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ174.8,169.8,161.4,157.5,154.4,151.4,147.3,143.6,138.0,132.0,128.4,127.7,127.2,127.0,120.6,118.2,113.2, 108.1, 102.4, 101.2, 100.4, 79.1, 71.5, 46.8, 25.9, 25.3, 8.8
29		[M+H]⁺540.23	539.87	¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ8.16(d,J=8.0Hz,2H), 7.66 (d, J=8.4Hz,2H),7.43(d,J=8.4Hz,2H),6.89(d,J=8.8Hz,2H), 6.46 (s, 1H), 5.82 (t, J=6.8 Hz, 1H), 5.48 (brs, 1H), 4.524.38 (m, 2H), 2.081.96 (m, 2H), 1.60 (s, 6H), 1.43 (s, 9H), 0.97 (t,J=7.2Hz,3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃)δ173.2,170.6,162.0,157.6,155.8,147.6,145.9,128.2,127.9,124.1,122.1,118.7,100.6,82.2,79.8,70.1,44.6,28.0,26.5,25.6,9.6
30		[M+H]⁺510.26	509.85	¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ7.66(d,J=8.4Hz,2H),7.05(d,J=8.0Hz,2H),6.89(d,J=8.8Hz,2H),6.61(d,J=8.4Hz,2H),6.44(s,1H),5.82(t,J=8.3 Hz, 1H), 5.12 (brs, 1H), 4.304.17 (m, 2H), 3.68 (brs, 2H), 2.071.94 (m, 2H), 1.60 (s, 6H), 1.43 (s, 9H), 0.96 (t,J=7.6Hz,3H);¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ173.2,171.1,161.9,157.5,155.5,146.2,129.1,128.0,127.9,122.2,118.6,115.3,100.4,82.1,79.7,69.6,45.0,27.9,26.5,25.5,9.5
31		[M+H]⁺536.25	535.98	¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ7.67(d,J=8.8Hz,2H),7.27(d,J=8.0Hz,2H),6.99(d,J=8.4Hz,2H),6.90(d,J=9.2Hz,2H),6.46(s,1H),5.84(t,J=6.8 Hz, 1H), 5.12 (brs, 1H), 4.424.27 (m, 2H), 2.101.95 (m, 2H), 1.61 (s, 6H), 1.43 (s, 9H), 0.98 (t,J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ173.2,170.9,162.0,157.6,155.7,139.6,135.1,129.2,127.9,122.2,119.5,118.6,100.5,82.2,79.8,69.9,44.8,28.0,26.5,25.6,9.6
32		[M+H]⁺480.19	480.06	¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (t,J=6.0Hz,1H),7.69(d,J=8.8Hz,2H),7.28(d,J=8.4Hz,2H),7.06(d,J=8.4Hz,2H),6.92(d,J=8.8Hz,2H),6.91 (s, 1H), 5.72 (t, J=7.0 Hz, 1H), 4.204.16 (m, 2H), 1.981.89 (m, 2H), 1.49 (s, 6H), 0.91 (t,J=7.2Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,DMSO-d6)δ183.8,171.0,161.4,158.0,155.5,137.9,136.5,128.7,127.4,120.2,119.0,118.1,100.2,79.8,68.4,43.3,26.0,25.6,9.3
33		[M+H]⁺517.22	517.11	¹H NMR (500 MHz, CDCl₃)δ7.71(d,J=8.0Hz,2H),7.26(d,J=8.5Hz,2H),7.106.96 (m, 4H), 6.86 (brs,1H),6.47 (s, 1H), 5.84 (t, J=6.8 Hz, 1H), 5.19 (brs,1H),4.404.29 (m, 2H), 4.11 (dd,J=5.0 Hz, J=2.5 Hz, 2H), 2.23 (t,J=2.3 Hz, 1H), 2.071.98 (m, 2H), 1.55 (s, 6H), 0.98 (t,J=7.3Hz,3H);¹³CNMR(75MHz,CDCl₃) δ 174.4, 171.2, 161.8, 156.0, 155.7, 139.7, 135.1, 129.2, 128.2, 124.2, 121.6, 119.5, 100.6, 82.1, 79.4, 72.0, 69.9, 44.8, 29.4, 26.5, 25.2, 9.6

[실험예 1] PPAR 감마 활성 증진 효과 확인 실험

인간 배아 신장 세포주 (293T)를 웰(well)당 5000개의 세포로 96 웰플레이트(well plate)에 분주하였다. 하루 배양 후 일시적 유전자 전달 기법을 통하여 pRXRα, pDR-1-luciferase reporter, pRL-TK는 공통적으로 세포에 주입하고 pSV-PPARα, pSV-PPARδ, pSV-PPARγ 는 각각 alpha, delta, gamma의 유전자 분석법을 위하여 주입하였다. 유전자 전달은 인산화칼슘을 플라스미드 DNA와 섞어서 세포에 넣는 방법으로 진행하였다. 유전자 전달 24시간 후 상기 표 1의 3~24번 화합물들을 정해진 농도로 처리하였다. 대조군으로 WY14643, GW501516 및 로지글리타존(Rosiglitazone)도 처리하였다. 루시퍼라아제의 활성 정도는 화합물 처리 후 24시간 후에 Bio-Tek microplate reader [ELx800TM, Bio-Tek Instruments Inc.]로 읽은 후 Renilla 루시퍼라아제 활성을 이용하여 정상화 하였다. 모든 실험은 삼반복으로 진행하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

시험물질	EC50 (nM), *IC50 (nM)
시험물질	alpha	delta	gamma
3	>20000	IA	1510
4	IA	IA	1730
5	IA	IA	201
6	IA	IA	6.01
7	364	IA	51.6
8	3830*	>10000	42.2
9	IA	479*	>10000
10	IA	IA	180
11	IA	IA	>10000
12	7160*	383*	382
13	>10000	163*	26.6
14	>10000	IA	>10000
15	IA	17.2*	421
16	IA	IA	3.9
17	4290*	IA	12.6
18	IA	IA	9.2
19	1710*	IA	41.7
20	IA	IA	78.7
21	266*	IA	7.8
22	IA	IA	23.8
23	IA	IA	3.3
24	IA	IA	3.8
WY14643	669	IA	>10000
GW501516	>10000	1.4	>10000
Rosiglitazone	>10000	>10000	22

표 2에 나타난 바와 같이 본 발명의 화합물은 수 nM 농도에서 PPAR 감마 의 유전자 발현을 촉진시키는 것으로 나타났으며, 대부분의 화합물이 PPAR 감마 선택적인 작용제 역할을 함을 확인할 수 있었다. ('*' 표시는 역작용 효과를 의미함)

[실험예 2] PPAR 감마의 활성 증진 효과 확인 실험

상기 표 1의 23번 화합물의 R 이성질체(화합물 25) 및 S 이성질체(화합물 26)와, 24번 화합물의 R 이성질체(화합물 27) 및 S 이성질체(화합물 28) 각각에 대하여 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 PPAR 감마의 활성 증진 효과를 검증하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에서 볼 수 있듯이, 23번 화합물의 R 이성질체(화합물 25)의 EC50 값이 0.38 nM, 23번 화합물의 S 이성질체(화합물 26)는 183 nM을 나타내었다. 또한, 24번 화합물의 R 이성질체(화합물 27)는 0.75 nM, 24번 화합물의 S 이성질체(화합물 28)는 553 nM을 나타내었다. 대조군으로 사용한 로지글리타존(rosiglitazone)은 22 nM의 활성도를 보였다.

[실험예 3] PPAR 감마와의 결합능 측정

상기 표 1의 3번 및 23번 화합물의 R 및 S 이성질체 각각에 대하여 PPAR 감마의 결합능 측정을 실시하였고, 등온 열량 측정법 (Isothermal Titration Calorimetry, ITC) 및 표면 플라즈몬 공명 (Surface Plasmon Resonance, SPR) 방법을 사용하여 독립적으로 수행하였다.

3-1. 등온 열량 측정 (Isothermal Titration Calorimetry, ITC)

ITC 실험을 하기 위하여 마우스의 PPAR 감마 리간드 결합 부위 단백질(m-PPARγ-LBD) 및 인간 PPAR 감마 리간드 결합 부위 단백질(h-PPARγ-LBD)의 용액을 젤 여과식 크로마토그래피 또는 원심분리형 필터를 사용하여 pH 8로 맞추어 놓은 20 mM HEPES [4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid], 1mM TCEP [tris-(2-carboxyehtyl)phosphine]을 함유하는 수용액으로 교체하여 준비하여 실험 직전에 1.5% DMSO (Dimethylsulfoxide)를 첨가하였다. 리간드 시료 (300μM) 는 단백질 시료(30 μM)와 동일한 조성으로 준비하였으며 적정 실험은 섭씨 25℃, 310 rpm 조건에서 VP-ITC (GE healthcare)를 사용하여 진행하였다. 총 주사 횟수는 29회이며 열역학적 값의 분석은 Origin 7.0 프로그램을 사용하여 진행하였다. 화합물 25, 26, 3의 ITC 실험 결과를 도 2에 나타내었다.

3-2. 표면 플라즈몬 공명 (Surface Plasmon Resonance, SPR)

SPR 분광 측정 실험은 Biacore T100 장비(GE Healthcare)를 사용하여 진행하였다. 먼저 CM5 센서칩 위의 카르복시기를 EDC[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide]와 NHS[N-hydroxysuccinimide]를 사용하여 숙신산에스터로 활성화 시켰다. 그 다음 마우스와 인간의 PPAR 감마 리간드 결합 부위 단백질(m-PPARγ-LBD 및 h-PPARγ-LBD)을 흘려주어 센서칩 위에 고정화 시켰다. 남아있는 숙신산에스터는 1 M 에탄올아민을 흘려주어 불활성화하였다. 단백질을 센서칩 위에 고정화시킨 후 50nM에서 10μM까지의 리간드를 1분간 흘려주어 센서그램을 모니터 하였다. 실험에 사용된 버퍼는 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 5% DMSO, 0.005% P20을 함유한 수용액이고 pH는 8로 유지하였다. 모든 실험은 섭씨 25℃에서 진행하였다. 실험 결과의 분석은 Biacore T100 evaluation software 를 통하여 진행하였고 분리 상수(K_D)를 결정하였다. 화합물 25, 26 및 대조군인 로지글리타존(rosiglitazone)의 SPR 실험 결과를 도 3에 나타내었다.

[실험예 4] 지방세포 (3T3L1) 내 PPAR 감마 관련 유전자 발현 정도 분석

상기 표 1의 23번 화합물의 R 및 S 이성질체 각각에 대한 지방세포(3T3L1) 내 유전자 발현 패턴을 분석하기 위하여 시험물질을 분화된 지방세포(3T3L1)에 처리하고 24시간 후에 TRIzol 용액(Invitrogen)으로 용해하여 전체 RNA를 수득하였다. 전체 RNA에 대한 상보적 DNA의 합성은 몰로니 뮤린 루케미아 바이러스의 역전사 효소를 사용하여 진행하였다. 상보적 DNA를 이용하여 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR)을 진행하였고, KAPA SYBR FAST qPCR kit master mix(Kapa biosystems)를 사용하여 시료를 준비하였으며, ABI9300 PCR 장비를 사용하여 Adiponectin, Adipsin, Rybp, Selenbp1, aP2, CD36, ACO, PPAR 감마의 유전자 발현 정도를 분석하였다. 데이터의 분석은 ΔΔCt 방법을 사용하였고 GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase levels)를 기준으로 정상화 하였다. 대조군으로 로지글리타존(rosiglitazone)을 사용하였다. 3T3L1 세포를 이용한 qPCR 결과를 도 4에 나타내었다.

[실험예 5] 지방세포 (3T3L1) 내 PPAR 감마의 Serine273 의 인산화 저해능 검증

상기 표 1의 23, 24번 화합물의 R 및 S 이성질체 각각에 대한 PPAR 감마의 Serine273의 CDK5에 의한 인산화 저해 정도를 알아보기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. PPAR 감마 (Cayman Chemical에서 구입)를 Cdk5/p35 복합체와 섞은 후 적정 버퍼 조성(25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 5 mM, β-glycerophosphate, 2 mM dithiothreitol (DTT), 0.1 mM Na₃VO₄, 10 mM MgCl₂, 20 mM ATP) 하 30℃에서 15분 간 반응시켰다. Rb 단백질 (Cell Signaling Technology에서 구입)과 MRL24 화합물은 각각 음성 대조군과 양성 대조군으로 사용하였다. 이 때 각각의 화합물은 실험 수행 이전에 PPAR 감마 또는 Rb 단백질과 30분 동안 섞어서 배양하였다. 각 기질의 인산화 정도는 웨스턴 블랏(Western blot) 실험을 통하여 확인하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

Claims

하기 화학식 1 또는 2로 표시되는 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물.
[화학식 1]

[화학식 2]

(상기 화학식 1 및 2에서,
R¹은 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, tert-부틸디메틸실릴(TBDMS) 또는 -CR₂COR' (여기서 R은 수소, 메틸, 에틸, 또는 플루오로이고, R'은 OR'' 또는 NR''₂이며, 여기서 R''은 서로 독립적으로 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C2~C8의 알케닐, C2~C8의 알키닐, C3~C8의 시클로알킬, C6~C20의 아릴 또는 C4~C20의 헤테로아릴)이고,
R²는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C3~C8의 시클로알킬; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐 중 하나 이상으로 치환된 벤질; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐 중 하나 이상으로 치환된 페닐; 페네틸; 메틸렌디옥시페닐; 또는 나프틸이고 ,
R³는 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C3~C8의 시클로알킬; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 벤질; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 페닐; 페네틸; 또는 메틸렌디옥시페닐이고,
R⁴는 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 벤질 또는 RNHCO- (
) (여기서 R은 C1~C3의 직쇄 또는 측쇄 알킬; C3~C8의 시클로알킬; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시, 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 벤질; 비치환 또는 C1~C4의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 할로겐화알킬, C1~C3의 알콕시 및 할로겐, 니트로, 아미노 및 아지도 중 하나 이상으로 치환된 페닐; 페네틸; 또는 메틸렌디옥시페닐)이다.)
제 1항에 있어서,
상기 화학식 1은 하기 화학식 1-1 또는 1-2로 표시되는 것인 화합물.
[화학식 1-1]

[화학식 1-2]
제 1항에 있어서,
상기 R²는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 벤질, 시클로펜틸, 시클로헥실, 페네틸, 페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 3,5-디메톡시페닐, 3,4-디메톡시페닐, 3,4-메틸렌디옥시페닐, 1-나프틸 또는 2-나프틸이고,
상기 R³는 에틸, 페닐, 벤질, 4-니트로벤질, 4-아미노벤질, 4-아지도벤질, 페네틸, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 3,5-디메톡시페닐, 시클로헥실, 3,4-디메톡시페닐 또는 3,4-메틸렌디옥시페닐이고,
상기 R⁴는 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 벤질 또는 RNHCO- (
) (여기서 R은 에틸, 페닐, 벤질, 페네틸, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 4-니트로페닐, 4-아지도페닐, 4-아미노페닐, 3,5-디메톡시페닐, 시클로헥실, 3,4-디메톡시페닐 또는 3,4-메틸렌디옥시페닐)인 화합물.
제 1항에 있어서,
상기 R¹은 수소 또는 -CR₂COR' (여기서 R은 수소, 메틸, 에틸, 또는 플루오로이고, R'은 OR'' 또는 NR''₂이며, 여기서 R''은 서로 독립적으로 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C2~C8의 알케닐, C2~C8의 알키닐, C3~C8의 시클로알킬, C6~C20의 아릴 또는 C4~C20의 헤테로아릴)이고,
상기 R⁴는 수소 또는 RNHCO- (
) (여기서 R은 에틸, 페닐, 벤질, 페네틸, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 4-니트로페닐, 4-아지도페닐, 4-아미노페닐, 3,5-디메톡시페닐, 시클로헥실, 3,4-디메톡시페닐 또는 3,4-메틸렌디옥시페닐)인 화합물.
제1항에 있어서,
상기 화합물은 PPAR 감마 선택적 작용제인 화합물.
제1항에 따른 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물의 제조방법으로,
출발물질인 4-하이드록시벤즈알데하이드 또는 메틸 4-하이드록시벤조에이트에, 비치환 또는 O 또는 Si로 치환된 할로겐알킬을 반응시켜 하기 화학식 3-1 또는 화학식 3-2의 중간체 화합물을 제조하는 제1단계; 및
[화학식 3-1]

[화학식 3-2]

상기 제1단계에서 제조된 화학식 3-1 화합물을 하이드록실아민 및 탄산나트륨과 반응시킨 후, 1-펜타인-3올과 반응시킨 다음, 이소시아네이트와 반응시켜 하기 화학식 4-1의 제1목적 화합물을 제조하는 제1a단계; 또는
상기 제1단계에서 제조된 화학식 3-2 화합물을 소듐하이드라이드 및 아세토나이트릴과 반응시킨 후, 알데하이드, 아릴브로마이드 및 헤테로아릴브로마이드 중 하나 이상과 반응시킨 다음, 이소시아네이트와 반응시켜 화학식 4-2의 제1목적 화합물을 제조하는 제1b단계;
[화학식 4-1]

[화학식 4-2]

를 포함하는 화합물의 제조방법.
제 6항에 있어서,
상기 제조방법은 상기 제1a단계 또는 제1b단계에서 제조된 화학식 4-1 또는 화학식 4-2의 제1목적 화합물을 이소시아네이트 또는 벤질브로마이드와 반응시켜 화학식 1 또는 화학식 2의 제2목적 화합물을 제조하는 단계를 더 포함하며,
상기 제2 목적 화합물은 화학식 1 또는 화학식 2에서 R⁴ 가 C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 벤질 또는 RNHCO- (
) (여기서 R은 에틸, 페닐, 벤질, 페네틸, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 4-트리플루오로메틸페닐, 4-클로로페닐, 4-n-부틸페닐, 4-니트로페닐, 4-아지도페닐, 4-아미노페닐, 3,5-디메톡시페닐, 시클로헥실, 3,4-디메톡시페닐 또는 3,4-메틸렌디옥시페닐)인 화합물의 제조방법.
제6항 또는 제7항에 있어서,
상기 제1목적 화합물 및 상기 제2목적 화합물에서 R¹은 CR₂COOC(CH₃)₃이고,
상기 제조방법은 상기 제1목적 화합물 또는 상기 제2 목적 화합물을 트리플루오로아세트산과 반응시켜 화학식 1 또는 화학식 2의 제3 목적 화합물을 제조하는 단계를 더 포함하며,
상기 제3 목적 화합물은 화학식 1 또는 화학식 2에서 R¹ = -CR₂COOH, R은 수소, 메틸, 에틸, 또는 플루오로인 화합물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 제조방법은 상기 제3 목적 화합물을 아민 화합물, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염, 하이드록시벤조트리아졸과 반응시켜 화학식 1 또는 화학식 2의 제4목적 화합물을 제조하는 단계를 더 포함하며,
상기 제4 목적 화합물은 화학식 1 또는 화학식 2에서 R¹ = -CR₂CONR''₂, R은 수소, 메틸, 에틸, 또는 플루오로이고, R''은 서로 독립적으로 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C2~C8의 알케닐, C2~C8의 알키닐, C3~C8의 시클로알킬, C6~C20의 아릴 또는 C4~C20의 헤테로아릴인 화합물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 제조방법은 상기 제3 목적 화합물을 알코올 화합물, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염, 4-다이메틸아미노피리딘과 반응시켜 화학식 1 또는 화학식 2의 제4목적 화합물을 제조하는 단계를 더 포함하며,
상기 제4 목적 화합물은 화학식 1 또는 화학식 2에서 R₁ = -CR₂COOR'', R은 수소, 메틸, 에틸, 또는 플루오로이고, R''은 서로 독립적으로 수소, C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C2~C8의 알케닐, C2~C8의 알키닐, C3~C8의 시클로알킬, C6~C20의 아릴 또는 C4~C20의 헤테로아릴인 화합물의 제조방법.
제6항 또는 제7항에 있어서,
상기 제1목적 화합물 및 상기 제2목적 화합물에서 R¹은 tert-부틸디메틸실릴(TBDMS)이고,
상기 제조방법은 상기 제1목적 화합물 또는 상기 제2 목적 화합물을 플루오르화수소 및 피리딘과 반응시켜 화학식 1 또는 화학식 2의 제3 목적 화합물을 제조하는 단계를 더 포함하며,
상기 제3 목적 화합물은 화학식 1 또는 화학식 2에서 R¹ = H인 화합물의 제조방법.
제11항에 있어서,
상기 제조방법은 상기 제 3 목적 화합물을 알킬 브로마이드와 반응 시켜 상기 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물을 제조하는 단계를 더 포함하며,
상기 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물은 화학식 1 또는 화학식 2에서 R¹ 이 C1~C8의 직쇄 또는 측쇄 알킬인 화합물의 제조방법.
제 6항에 있어서,
상기 할로겐알킬은 tert-부틸-α-브로모아이소부티레이트 또는 tert-부틸디메틸실릴클로라이드인 제조방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 이속사졸을 중심구조로 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 당뇨병, 비만 및 염증성 질환으로 이루어진 군에서 선택되는 PPAR 감마 관련 질병 치료용 약학 조성물.