KR101631728B1 - 본태성 혈소판증가증의 치료를 위한 신규 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아나그렐리드 활성 성분의 비-즉각적 방출을 가져오는 신규한 제제에 관한 것이다. 본 발명자들은 락토스 모노하이드레이트와 함께 아나그렐리드 입자를 포함하고, 여기서 상기 아나그렐리드 입자의 적어도 90%는 직경이 10㎛보다 작은 약학적 조성물이 환자에게 투여시 줄어든 방출 특성을 갖는 제제를 제공함을 보여준다. 선택적으로, 상기 약학적 조성물은 포비돈, 크로스포비돈, 미세결정성 셀룰로스 및/또는 마그네슘 스테아레이트를 추가로 포함할 수 있다.

Description

본태성 혈소판증가증의 치료를 위한 신규 조성물{Novel Composition for Treatment of Essential Thrombocythemia}

본 발명은 락토스 모노하이드레이트와 함께 아나그렐리드 하이드로클로라이드를 포함하는 신규한 약학적 조성물 및 본태성 혈소판증가증의 치료를 위한 이의 용도에 관한 것이다.

원발성 혈소판증가증은 조혈생성 클론성 또는 다중클론성 골수증식질환이며, 혈소판증가증을 가진 12%의 환자에서 진단된다.

본태성 혈소판증가증(Essential Thrombocythemia, ET)은 원발성 혈소판증가증을 가진 45%의 환자에서 진단된다(1). 적혈구 증다증(polycythaemia vera, PV) 및 골수섬유증(myelofibrosis, MF) 으로부터 ET를 분명하게 구별하기 위해서, 진단기준은 적혈구 증가증 연구 그룹(2)에 의해 정의되었고, 후에 세계보건기구(WHO) 진단 가이드라인(3,4)에 의해 개선되었다.

WHO의 진단 가이드라인은 ET를 특발성 골수섬유증(Idiopathic myelofibrosis, IMF)의 조기 전-섬유증단계와 구별하기 위해 골수 조직병리학 및 은친화성 (레티큘린 및 콜라겐)섬유 밀도의 포함에 의하여 ET를 위한 상기 PVSG 진단기준을 개선하였다(5,6,7).

이차 혈소판 증가증을 가진 환자들에서 1.500.000/㎕ 이상의 혈소판 개수는 혈전색전증 및 출혈에 대한 독립적 위험 인자가 있음을 상징한다(8). 추가적인 독립적 위험 인자는 혈전-색전증 또는 출혈 병력, 미세혈관 증상 및 65세 이상의 나이이다(9,10,11,12,13). 임상적 발현(manifestations)은 두통, 어지럼증 및 시력저하와 같은 경미한 증상에서 혈전증, 내출혈 및 뇌졸중과 같은 목숨을 위협하는 합병증에까지 이르고 있다. 혈전증 에피소드에 대한 추측적 위험은 매년 6.6%의 환자이고, 60년에 걸쳐서 15%의 환자가 증가하고 있으며(14) 폐색성 에피소드의 전(previous)병력을 가진 환자에서 가장 높다(10).

고-위험 환자는 혈소판-저하 치료를 받아야 하는 것이 일반적으로 받아들여진다. 약 50%의 환자가 진단시에 혈전증 또는 내출혈의 병력을 보이며, 고-위험 카테고리에 속한다(15). 1.500.000/㎕ 이상의 혈소판 수치, 65세 이상의 나이 및 심혈관 위험 인자와 같은 모든 독립적 위험 인자를 고려하면 ET로 진단받은 50%이상의 환자들은 치료를 필요로 한다. 그외에 혈소판 값 900.000/㎕이하이고 증상을 보이는 환자들은 합병증의 위험이 있고 치료를 필요로 한다(16). 대-혈관 혈전증은 900.000/㎕ 미만의 혈소판 수치를 가지는 어린 환자들에서 발생할 수 있다(17).

혈소판 수치의 감소는 임상적 합병증 위험을 줄이는 것으로 나타났다(18). 따라서 혈소판 수치는 임상적 합병증에 대한 대리 마커로서의 역할을 할 수 있다. 900.000/㎕ 미만의 혈소판 수치를 가지는 환자들 및 어린 환자들이 임상적 합병증 및 진행성 혈관 질환의 위험을 줄임으로서 치료로부터 혜택을 받을 수 있다는 증 거들이 증가하고 있다.

최근 몇 년 두 가지 치료 옵션, 수산화요소(HU) 및 알파-인터페론이 주로 추구된다. 그러나 수산화요소는 단점들을 가지고 있다: 1. HU는 혈소판 수를 저하시키는데 선택적이지 않고, 또한 다른 혈액 인자들에도 영향을 미친다, 2. 증가하는 수의 리포트들이 백혈병을 포함하는, HU에 의해 유발되는 심각한 부작용을 기재한다. 어린 환자들이 오랜 기간 치료를 받는다면 특히 문제가 된다. 3. 일부 환자들은 HU의 치료에 난치성이다.

알파-인터페론은 피하 투여를 필요로 하고, 다른 세포 혈통에 다중 영향을 미치며, 많은 사람들에게 효과적이지 않다(19).

아나그렐리드(이미다조(2,1-b)퀴나졸린-2(3H)-온,6,7-디클로로-1,5-디하이드로모노하이드로클로라이드)는 현재 혈소판증가증을 가진 환자들을 위한 이차적 라인의 치료로서 등록되어 있다. 그의 작용 기전은 거핵세포 및 혈소판에 선택적이다. 이는 경구적으로 투여될 수 있다. 장기 변이원성 및 백혈병유발소에 대한 어떠한 증거도 보고되지 않았다. 아나그렐리드는 1997년 이래 미국에서 허가받았으며, 유럽에서는 2001년 이래 허가받았다. 현재 EU에서 아나그렐리드에 대한 승인된 치료 지침은 "현 치료에 내성을 가지거나 또는 증가된 혈소판 수치가 현 치료법에 의해서 용인 수준까지 감소되지 않는 위험에 처한 본태성 혈소판 증가증 환자들의 증가된 혈소판 수치를 낮추기 위한 용도"이다.

(http://www.emea.eu.int/humandocs/Humans/EPAR/xagrid/Xagrid.htm)

아나그렐리드(anagrelide)는 본래 혈소판 응집 저해제로서 개발되었다. 그의 작용 방식은 혈소판 사이클릭 AMP 포르포디에스터레이스 효소의 작용 저해를 포함한다(20). 그러나, 이 활성은 혈소판 감소를 매개하지 않는다. 상기 선택적 혈소판 감소 활성은 인간에게 한정되고, 훨씬 낮은 투약량에서 발생하고(21) 거대세포의 성숙 저해를 통해 매개된다(22,23). 아나그렐리드는 치료적 농도에서 거대세포 콜로니 형성 및 혈소판 생존에 영향을 미치지 않는다(22). 정확한 작용 기전은 현재까지 알려져 있지 않다. 그러나, 아나그렐리드의 대사물이 강력한 혈소판 저하 활성을 갖는 것으로 보이므로 그 작용에 기여할 가능성이 있다(24, 25, 26).

넓은 환자 인구에서 적절한 치료제 선택으로서 아나그렐리드에 호의적인 많은 환자에서 현재의 증거 및 위험-이익은 균형을 이룬다. 이는 또한 수산화요소와 같은, 잠재적 백혈병유발 위험을 일으킬 수 있는 약제들로 치료를 시작하는 것을 꺼리는 60세 보다 어린 나이의 위험에 처한 환자들을 포함한다.

아나그렐리드는 in vivo에서 광범위하게 대사되고, 5개 이상의 대사체가 HPLC 분석을 통해 소변에서 확인되었다(27). 이들 대사체 중 둘, 즉 생물학적으로 활성인 3-하이드록시아나그렐리드 및 불활성인 2-아미노-5,6-디클로로-3,4-디하이드로퀴나졸론(또한 RL 603라고도 불린다)이 확인되었다(26).

최근의 아나그렐리드의 약리적 면의 전임상 및 임상 연구는 작용 및 안전성 양상의 방식에 관한 중요한 시사점을 제기한다(26,28,29,30,31). 적어도 하나의 이미 확인된 대사체, 즉 3-하이드록시아나그렐리드는 in vivo에서 주된 약리적 작용, 혈소판 감소 및 PDE 3 저해작용에 공헌하는데, 반면 RL603은 이런 활성이 없다(24). 아나그렐리드는 상기 모체 약물(parent drug)과 비교하여 약 45분 뒤에 피크 플라스마 수준에 도달하는 3-하이드록시아나그렐리드로 빠르게 전환된다. 양 화합물은 in vivo에서 약리적 활성에 기여할 확률이 매우 크다. 아나그렐리드 및 3-하이드록시아나그렐리드는 모두 빠르게 혈액으로부터 제거되며, 축척된다는 아무런 증거가 없다. 최적의 혈소판 조절에 도달할 때까지 수일에서 수주(weeks)가 소요된다(29,30). 그러므로 상기 혈소판 감소가 직접적 약리적 활성으로 매개되지 않을 확률이 크다. 거대세포에 대한 상기 오래 지속되는 혈소판 감소 효과를 매개하는 분자적 타겟은 현재 밝혀지지 않았지만, 아마 결과적으로 변화된 트롬보포이에틴(thrombopoetin) 친화성을 야기하는 c-MPL 기능의 조절을 포함할 것이다(28). 이 가설은 혈소판이 전-치료 값으로 돌아가기 위해 아나그렐리드의 중단 후 4 내지 7일이 소요된다는 발견에 의하여 뒷받침된다.

반대로, cAMP-의존성 PDE 3는 심혈관계 및 혈소판 응집에 아나그렐리드의 급성 효과를 매개하는 분자적 타겟으로서 확인되었다(20). 두통, 어지럼증 및 심계항진은 치료의 첫 주동안 약 15 내지 44%의 환자에서 발생하는 빈번한 부작용을 대표하고, 이들은 아마도 치료적 투약량 수준에서 아나그렐리드의 경미한 심혈관 및 뇌의 영향에 의해 매개된다. 2 내지 3주 내의 이런 부작용의 개선은, 다른 PDE 3저해제로서 또한 관찰되는(32), 타키필락시스(tachyphylaxis)(29)의 발생과 일치한다. 그러나, 고혈압과 같은 심혈관 부작용의 발생률 및 심각성은 5mg이상의 투약량 증가에 따라 증가하고, 이는 아나그렐리드의 혈장 수준 또는, 보다 중요하게, 3-하이드록시아나그렐리드와 상관관계가 있는 것을 시사한다(29). 가역적 고출력 심부전의 사례들이 아나그렐리드로 치료된 환자들 사이에 보고되었다(33,34). 장기 치료 후의 심부전의 위험은 또한 다른 촉진 수축적 PDE 3 저해제인 밀리논(milrinone)으로 치료받은 환자에서도 관찰된다. 그러나, 3-하이드록시아나그렐리드는 PDE 3의 저해제로서 아나드렐리드보다 상당히 보다 강력하다(26). 3-하이드록시아나그렐리드가 아나그렐리드로 치료된 환자들에서 심혈관 부작용을 주로 매개하는 것이라는 가설이 세워질 수 있다. 특히, 불유쾌한 심계항진, 어지럼증 또는 두통과 같은 심혈관 부작용들은 주로 3-하이드록시아나그렐리드에 의해 야기될 수 있다. 이는 특히 치료 초기에 환자들에게 문제를 일으키고, 28%까지 보고된 중단률에 관련한 것일지 모른다(29,30).

아나그렐리드의 다른 제제를 사용할 때, 부작용의 차이가 보고되었고, 아나그렐리드를 중단한 환자의 비율은 8 내지 28%의 범위로 보고되었다(29,30,31). 다른 약물동태학적(pharmacokinetic) 특성들이 내성 및 혈소판 감소에 대하여 약동학적(pharmacodynamic) 차이와 상관관계가 있을 수 있다. 아나그렐리드의 지연된 흡수는 3-하이드록시아나그렐리드의 상당히 더 낮아진 수준 뿐아니라 전반적인 아나그렐리드의 혈장 수준 및 줄어든 피크과 관계될 수 있다. 그 결과로 PDE 3-의존성 급성 부작용의 현저하게 더 낮은 수준이 생길 것으로 기대될 것이다.

US 6,287,599 및 US 2004/0062800은 지연된 방출 및 감소된 pH 의존성 용출 양상을 가진 약학적 조성물을 기술하고 있다. 정제를 포함하는 다른 것들 중에서 정제를 포함하는 아나드렐리드가 기술되어 있는데, 여기서는 2.44mg/정제 아나그렐리드 HCl이 포함되어 있다.

WO2005/112917A1은 골수증식성 질환의 치료를 위한 선택적 사이토킨 저해적 약물을 포함하는 조성물을 기술하고 있는데 여기서는 아나그렐리드가 이차적 활성 제제로서 존재한다.

US2007/104782A1 및 WO2007/16350A2는 메타크릴산 코폴리모를 포함하는 강화된 기계적 물성을 가진 pH 의존성 방출 정제를 기술하고 있다.

US2005/0249814A1 및 US2005/0008704A1는 생리적 용제와의 접촉시 신속한 용출성을 가지는 적어도 하나의 카르복시산 부분을 가지는 화합물을 포함하는 제제를 기술하고 있다.

본태성 혈소판 증가증과 같은 만성 골수증식성 질환에 관련된 증상의 예방 및 치료용으로 사용될 수 있고, 하지만 주된 대사체, 3-하이드록시아나그렐리드가 원인인 아나그렐리드 치료의 잘 알려진 부작용 중 일부가 없는 비-즉각적 및 고 지속성 방출 특성을 가진 아나그렐리드의 신규한 조성물을 이용 가능하게 하는 것이 본 발명의 목적이다.

상기 목적은 본 출원의 실시양태들의 제공에 의해 달성된다.

본 발명은 아나그렐리드 유효성분의 비-즉각적 방출을 생기게 하고, 여기서 아나그렐리드 HCl이 작은 입자 크기인 아나그렐리드의 신규한 제제에 관한 것이다. 락토스 모노하이드레이트와 함께 아나그렐리드를 포함하는 약학적 조성물이 환자에게 투여될 때 줄어든 방출 특성을 가지는 제제를 제공하는 것으로 밝혀졌다.

선택적으로, 상기 약학적 조성물은 미세결정성 셀룰로스 및 포비돈 및/또는 크로스포비돈과 같은 피롤리돈을 추가로 포함할 수 있다.

도 1: 기존(P) 또는 신규(N)한 아나그렐리드 제제(평균 ±SE)의 섭취 후 혈장의 아나그렐리드 농도. 기존 또는 신규 제제 투여 후 Cmax 혈장 값들은 각각 현저하게 다르다(p<0.001).
도 2: 기존(P) 또는 신규(N) 아나그렐리드 제제(평균 ±SE)의 섭취 후 (혈장 3-하이드록시아나그렐리드(3-OH) 농도. 기존 또는 신규 제제 투여 후 Cmax 혈장 값들이 각각 현저하게 다르다(p<0.001).

본 발명은 아나그렐리드 하이드로클로라이드 입자 및 적어도 60mg의 락토스 모노하이드레이트를 포함하며, 여기서 상기 아나그렐리드 입자의 적어도 90%는 직경이 10 ㎛보다 작은 약학적 조성물을 제공한다.

구체적으로, 아나그렐리드는 1mg미만, 바람직하게 0.70mg미만, 바람직하게 0.65mg미만, 바람직하게 0.54 내지 0.60mg, 바람직하게 약 0.57mg의 양으로 아나그렐리드 하이드로클로라리드로서 포함된다. 본 발명에 따른 아나그렐리드 HCl은 15 ㎛미만, 바람직하게 10 ㎛미만의 입자크기를 가지는 미소화(micronized)된 아나그렐리드의 형태로 존재한다. 본 발명의 구체적 실시양태에 따르면 상기 제제에서 상기 아나그렐리드의 평균 입자 크기는 약 5 ㎛이다.

15 ㎛미만, 특히 10 ㎛미만의 아나그렐리드의 작은 입자의 사용은 낮은 농도의 아나그렐리드를 함유하는 약학적 제제에 특히 유리하고, 그 점 때문에 투여시 유효 성분 아나그렐리드의 높은 균등 분포 및/또는 지속적 방출이 제공된다.

상기 용어 "약 5 ㎛의 평균 입자 크기"는 적어도 50%의 입자가 직경이 5 ㎛보다 작고 적어도 90%가 직경이 10 ㎛보다 작은 것으로 본 발명에 따라 정의된다.

상기 용어 아나그렐리드, 아나그렐리드 입자 및 아나그렐리드 HCl은 본 발명에 따른 활성 화합물 이미다조(2,1-b)퀴나졸린-2(3H)-온,6,7-디클로로-1,5-디하이드로모노하이드로클로라이드에 대해 사용되는 용어이다.

미소화(micronzation)는 고형 물질 입자의 평균 직경을 감소하는 과정으로 당해 분야에 알려져있다. 본 발명에 따르면 "미소화"(micronzation)는 예를 들어 Rapid Expansion of Supercritical Solutions method, Supercritical Anti-Solvent method 및 Particles from Gas Saturated Solutions method과 같은 알려진 기술에 의해 수행된다. 락토스 모노하이드레이트는 적어도 60mg, 바람직하게 적어도 90mg, 바람직하게 93.9mg의 양으로 포함될 수 있다.

상기 조성물은 피롤리돈, 예를 들어 4 내지 13mg, 바람직하게 5.5 내지 6.6mg, 바람직하게 6mg의 포비돈, 및 가교결합 피롤리돈, 예를 들어 3.5 내지 13mg, 바람직하게 5 내지 6mg, 바람직하게 5.5mg의 크로스포비돈을 추가로 포함할 수 있다.

선택적으로, 상기 조성물은 또한 미세결정성 셀룰로스를 포함한다. 구체적으로, 상기 피롤리돈, 보다 구체적으로 가교결합 피롤리돈의 존재는 상기 제제의 유리한 비-즉각 방출 물성에 공헌할 수 있다.

상기 미세결정성 셀룰로스는 13 내지 39mg, 바람직하게 20 내지 25mg, 바람직하게 22.5mg의 양으로 포함될 수 있다.

또한 당해 분야에 잘 알려진 약학적으로 허용가능한 물질들이 또한 본 발명에 따른 상기 약학적 조성물에 포함될 수 있다. 예를 들어, 이런 물질들로는 마그네슘 스테아레이트 및 무수(anhydrous) 락토스가 될 수 있다.

구체적 실시양태에 따르면, 본 약학적 조성물은 아나그렐리드 HCl, 락토스 모노하이드레이트, 포비돈, 크로스포비돈, 미세결정성 셀룰로스 및 마그네슘 스테아레이트를 포함한다.

보다 구체적으로 본 약학적 조성물은

0.57mg 아나그렐리드 HCl

93.9mg 락토스 모노하이드레이트

6.0mg 포비돈

5.5mg 크로스포비돈

22.5mg 미세결정성 셀룰로스

1.5mg 마그네슘 스테아레이트를 포함한다.

이 조성물은 상기 약제의 방출 특성의 측면에서 유리한 특징을 보여주는 것으로 나타났다. 현재 사용되는 약제를 포함한 아나그렐리드는 90% 이상의 아나그렐리드가 in vitro 에서 첫 10분 내에 방출되는 즉각 방출성 약제이다. 반면, 아나그렐리드의 신규한 제제는 in vitro에서 첫 10분동안 거의 50%의 아나그렐리드만이 방출되고, in viro에서 거의 90%까지 방출되기까지 30분이 소요된다.

구체적으로, 본 발명에 따른 상기 약학적 조성물은 in vivo에서 경구 투여시 적어도 60분의 플라스마 피크 방출을 가진다.

본 발명 조성물은 경구적으로, 예를 들어 정제 또는 캡슐의 형태로 투여될 수 있다. 본 실시양태에 따르면, 젤라틴 캡슐과 같은 캡슐은 경구 투여를 위한 특이한 약학적 형태이다.

이 조성물은 상기 약제의 방출 특성의 측면에서 유리한 특징을 보여주는 것으로 나타났다. 현재 사용되는 약제를 포함하는 아나그렐리드는 즉각 방출성 약제이고 여기서 아나그렐리드는 경구 투여 후 몇 분 안에 환자의 혈장에서 측정될 수 있다. 특히 장기간의 치료 필요성 뿐만아니라 부작용의 감소 및 더 나은 내성(tolerability)의 측면에서 아나그렐리드의 지연되지만 보다 지속적인 공급을 가져오는 비-즉각 방출성인 약제가 보다 바람직하다. 구체적으로, 본 발명 약학적 조성물을 사용할 때 아나그렐리드는 상기 조성물이 환자에게 투여되고 대략 60분 후, 바람직하게는 90분 후, 보다 바람직하게 120분 후에 플라즈마 피크로서 혈장에서 측정될 수 있다.

구체적으로, 3-하이드록시아나그렐리드가 원인이 될 부작용의 감소 및 더 나은 내성의 측면에서 아나그렐리드의 지연된 공급을 가져오는 비-즉각 방출성이며 그러므로 3-하이드록시아나그렐리드의 피크 혈장 수준을 낮추는 약제가 바람직하다.

본 발명에 따른 조성물을 포함하는 상기 아나그렐리드 HCl은 상기 아나그렐리드 HCl의 농도가 낮다는 사실 때문에 개선된 내성을 추가로 보여준다. 아나그렐리드의 함량은 1mg미만, 바람직하게 0.70mg미만, 바람직하게 0.65mg미만, 바람직하게 0.54 내지 0.60mg, 바람직하게 0.57mg이다.

본 발명 조성물의 신규한 방출 특성 때문에 이차적 라인의 치료제로 사용될 수 있을 뿐만아니라 본태성 혈소판증가증의 일차적 라인의 치료제로서 특히 유용하다. 본 발명 조성물은, 심계항진, 어지럼증 또는 두통과 같은 불유쾌한 심혈관 부작용이 대게 치료의 첫째주에 발생하고 아나그렐리드 치료의 조기 중단 또는 감소된 환자의 이행을 유도하기 때문에, 새롭게 진단된 환자들의 치료에 특히 바람직하다.

대안적으로, 본 발명 조성물은 또한 그들의 현 치료법에 내성을 가진 또는 증가된 혈소판 수치가 그들의 현 치료법에 의해 용인 수준으로 감소하지 않는 환자들에게 투여될 수 있다.

권고되는 시작투약량은 1주일에 1mg/d, 그리고 상기 투약량은 최적 혈소판 조절이 얻어질 때까지 매주 조정된다. 대게 혈소판 수치의 감소는 1 내지 3mg/d의 투약량에서 얻어진다.

상기 아나그렐리드 HCl을 함유 조성물은 투약량이 혈소판 수치의 감소에 도달할 때까지 하루동안 몇 번에 걸쳐서, 구체적으로 아침 및 저녁에 투여될 수 있다

여기서 설명되는 실시예들은 본 발명을 분명히 예시하는 것이지 이들로 한정하려는 것이 아니다. 본 발명의 다른 실시양태들이 본 발명에 따라 설명되었다. 본 발명의 범위 및 정신으로부터 벗어남 없이, 여기서 설명되고 예시된 상기 기술에 대해 많은 변형 및 변화가 이루어질 수 있다. 따라서, 본 실시예들은 단지 예시적인 것이지 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아닌 것으로 이해되어야 한다.

실시예 :

In vitro 용해 연구:

본 분석은 고체 제형을 37+/-0,5℃, 및 패들의 정의된 작동률에서 적절한 용매(500ml)을 포함하는 장치에 두는 패들법을 통해서 European Pharmacopoeia (method 2.9.3, (36)) "고체 제형을 위한 용해 시험" 에 따라 수행하였다. 기존 및 신규한 제제 각각의 용출 양상을 시험하기 위해서, 용매(아나그렐리드의 용출을 개선하기 위한 0.1%의 SDS를 포함하는 0.1M의 HCl)을 포함하는 장치에 각 실험당 하나의 0.5mg 캡슐을 넣었다. 샘플들은 제제당 6번의 실험으로부터 0, 5, 10, 15, 30 및 60분에 취하여 HPLC로 분석하였다. 그 결과는 상기 캡슐 내에 포함된 공칭 양으로부터 방출된 아나그렐리드의 %+/-SD로서 나타냈고, 용출 양상은 쌍체 비교(paried comparison)를 위한 Student' t-test로 분석하였다.

약물동태학적 연구:

약물동태학적 연구는 기존 및 신규한 아나그렐리드 제제의 생물학적 이용가능성을 비교하기 위해 2mg의 투약량으로(한번 투여시 0.5mg로 제공되서 x 4번) 두 기간의 단일 투여, 이중 맹검 크로스 스터디(7일간 세척한다)를 수행하였다. 임상자원자들은 각각의 가이드라인에 의해 권고되는 대로 포함 및 제외 기준으로 절제한 24세의 건강한 남성 및 여성이었다(37). 임상적 및 실험실적 스크리닝을 수행하였고, 활력 증후를 측정하였고 신체 검사를 수행하였다. 상기 적어도 24개의 피험자의 측정된 샘플 크기는 생물학적 동등성 80-120%의 간격에 대해서 CV <0.235에서 >0.8의 검정력을 가졌다. 임의순서로 상기 임상자원자들을 신규한 및 기존의 제제로 치료를 받게함으로서 생물통계학자가 임의추출 코드를 생성하였다. 치료이행은 양질의 확실한 과정으로 보장되며, 혈액 수집을 위한 시점은 투여 전(0 시간), 및 상기 약의 투여 후 20분, 40분, 1시간, 1시간 20분, 1시간 40분, 2시간 2시간 30분, 3시간, 3시간 30분, 4시간, 5시간, 6시간, 8시간, 12시간 및 24시간이었다. 혈액 샘플들을 +40℃에서 즉시 3000rpm으로 원심분리 시킨다. 부작용은 치료에 맹검인 임상적 개별 조사로 기록했다. 통계 계획서는 모든 주된 요인들 즉 약물동태학적 요인들은 90% CI로 제시되도록 정의했고, 모든 추가적 인자들에 대해서 설명적 통계를 사용하였다. 약물동력학적 인자들(AUC0-∞, Cmax, tmax, and t1/2)은 Kinetica 2000

Version 4.2 (Innaphase Clinical Information Engineering, Philadelphia, PA, USA)로 계산했다. 두 제제의 생물학적 동등성에 대한 통계적 분석은 잔류 오차를 평가하고 기간 또는 순서의 존재 사정을 포함하는 신뢰 구간을 구성하기 위해 타겟 인자들의 값을 편차 분석법(ANOVA)으로 수행했다. 다음의 프로그램을 사용하였다: 통계적 분석용 SAS

Version 8.1 (SAS

Institute, Cary, NC, USA), 계산된 약물동력학적 인자 데이터의 정상분포 시험용 SAS

PROC INSIGHT (Distribution Test), 약물동력학적 인자 데이타의 ANOVA 계산용 SAS

PROC GLM (General Linear Models) 또는 PROC MIXED (Mixed Models) 및 tmax의 비-인자적 분석용 the EQUIV-Test

(Statistical Solutions, Broadway, MA, USA). 생물학적 동등성은 80%의 검정력에서 Cmax 및 AUC0-∞를 위한 CIs 의 시험군/대조군 약물에 대한 선결된 한계인 80 내지 125%로 현 가이드라인에 따라 평가하였다(37). 총 부작용 수는 paired Student' test로 분석했다(표 1).

In vitro에서 0.1M HCl/0.1 SDS 내의 두 아나그렐리드 제제의 용출

	신규한 제제		기존 제제
시간(분)	%	SD	%	SD	P 값*
0	0,0	0,0	0,0	0,0
5	23,6	8,6	89,1	2,4	<0,05
10	57,6	9,3	95,7	0,6	<0,05
15	77,4	8,1	95,9	0,5	<0,05
30	93,6	4,2	95,4	0,5	n.s
60	92,0	2,4	94,9	0,5	n.s

*쌍체 비교를 위한 Student's T Test

신규한 또는 기존 아나그렐리드 제제의 섭취 후 24명의 임상자원자에서 아나그렐리드 혈장 수준을 비교했을 때 양 약물 제제에 대한 다른 양상이 명백해졌다: 최대 혈장 농도(Cmax) 및 곡선-하-면적(AUC0-∞)은 기존 제제와 비교했을 때 신규한 제제가 상당히 더 낮았고(각각 점추정량(PE) 66%, 90% 신뢰구간(CI) 58-76% 및 PE 77%, 90% CI 69-87%), 그러므로 생물학적 생동성(80 내지 120%)(12)를 위한 유럽의 가이드라인에 의해 요구되는 간격 바깥으로 멀리 떨어진다(도 1).

상기 신규한 제제의 섭취 후에 3-하이드록시아나그렐리드의 약물동력학적 양상은 또한 기존 제제와 비교하여 더 낮은 Cmax(PE 80%; 90% CI 67-84%, p<0,001) 및 더 낮은 AUC0-∞ 값(PE 82%; 90% CI 75-87%, p<0,001)을 가진다. 기존 제제에 따른 3-하이드록시아나그렐리드의 피크 수준은 1시간에 도달한다(도 2). 대조적으로 신규 제제의 투여에 따르면, 60분의 지연을 관찰했다.

총 75개의 부작용이 전 연구에서 보고되었다; 기존 제제 그룹에서 발생한 46 대 신규한 제제 그룹에서 29(p=0,05, Student' t-Test). 부작용에서의 차이는 두통(19대9) 및 어지럼증(12대7)이 가장 지배적이었다(표 2).

단일한 2mg의 신규 또는 기존 아나그렐리드 제제 투여 후 24명의 건강한 임상자원자의 부작용

	신규한 제제	기존 제제	총합
부작용 숫자	29	46	75*
부작용이 보고된 임상자원자	16	15	19
두통	9	17	26
어지럼증	7	12	19
심계항진	7	6	13
구역	3	7	10
구토	2	2	4
복부 통증		1	1
월경통	1		1
감기와 같은 증상	1		1
고빌리루빈혈증		1	1
비정상 백혈구 수치	1		1

*p=0,05(Student's T-test)

참고문헌:

1. Griesshammer, M., Bangerter, M., Sauer, T., Wennauer, R., Bergmann, L., Heimpel, H. (1999). Aetiology and clinical significance of thrombocytosis: analysis of 732 patients with an elevated platelet count. Journal of Internal Medicine 245, 295-300

2. Murphy, S., Peterson, P., Iland, H., Laszlo, J. (1997). Experience of the Polycythemia Vera Study Group with essential thrombocythemia: a final report on diagnostic criteria, survival, and leukemic transition by treatment. Semin Hematol 34, 29-39.

3. Imbert, M., Pierre, R., Thiele, J., Vardiman, J. W., Brunning, R. D., Flandrin, G. (2001). Essential thrombocythemia (Lyon: IARC Press).

4. Tefferi A, Thiele J, Orazi A, Kvasnicka HM, Barbui et al. Proposals and rationale for revision of the World Health Organization diagnostic criteria for polycythemia vera, essential thrombocythemia, and primary myelofibrosis. Recommendations from an ad hoc international panel. Blood. 2007; 110:1092-1097.

5. Thiele, J., and Kvasnicka, H. M. (2003). Chronic myeloproliferative disorders with thrombocythemia: a comparative study of two classification systems (PVSG, WHO) on 839 patients. Ann Hematol 82, 148-152. Epub 2003 Feb 2022.

6. Thiele, J., Kvasnicka, H. M., Fischer, R. (1999). Histochemistry and morphometry on bone marrow biopsies in chronic myeloproliferative disorders - aids to diagnosis and classification. Ann Hematol 78, 495-506.

7. Thiele, J., Kvasnicka, H. M., Zankovich, R., Diehl, V. (2000). Relevance of bone marrow features in the differential diagnosis between essential thrombocythemia and early stage idiopathic myelofibrosis. Haematologica 85, 1126-1134.

8. Schafer, A. I. (2004). Thrombocytosis. N Engl J Med 350, 1211-1219.

9. Barbui, T., Barosi, G., Grossi, A., Gugliotta, L., Liberato, L. N., Marchetti, M., Mazzucconi, M. G., Rodeghiero, F., Tura, S. (2004). Practice guidelines for the therapy of essential thrombocythemia. A statement from the Italian Society of Hematology, the Italian Society of Experimental Hematology and the Italian Group for Bone Marrow Transplantation. Haematologica 89, 215-232.

10. Barbui, T., Finazzi, G., Dupuy, E., Kiladjian, J. J., and Briere, J. (1996). Treatment strategies in essential thrombocythemia. A critical appraisal of various experiences in different centers. Leuk Lymphoma 22 Suppl 1:149-60.

11. Cortelazzo, S., Finazzi, G., Ruggeri, M., Vestri, O., Galli, M., Rodeghiero, F., Barbui, T. (1995). Hydroxyurea for Patients with Essential Thrombocythemia and a High Risk of Thrombosis. N Engl J Med 332, 1132.

12. Cortelazzo, S., Viero, P., Finazzi, G., D'Emilio, A., Rodeghiero, F., Barbui, T. (1990). Incidence and risk factors for thrombotic complications in a historical cohort of 100 patients with essential thrombocythemia. J Clin Oncol 8, 556.

13. Harrison , C. N. (2002). Current trends in essential thrombocythaemia. British Journal of Haematology 117, 796-808.

14. Lengfelder, E., Hochhaus, A., Kronawitter, U., Hoche, D., Queisser, W., Jahn-Eder, M., Burkhardt, R., Reiter, A., Ansari, H., Hehlmann, R. (1998). Should a platelet limit of 600x10(9)/l be used as a diagnostic criterion in essential thrombocythaemia? An analysis of the natural course including early stages. British Journal of Haematology 100, 15-23.

15. Harrison, C. N., Gale, R. E., Machin, S. J., Linch, D. C. (1999). A Large Proportion of Patients With a Diagnosis of Essential Thrombocythemia Do Not Have a Clonal Disorder and May Be at Lower Risk of Thrombotic Complications. Blood 93, 417.

16. Millard, F. E., Hunter, C. S., Anderson, M., Edelman, M. J., Kosty, M. P., Luiken, G. A., Marino, G. G. (1990). Clinical manifestations of essential thrombocythemia in young adults. Am J Hematol 33, 27-31.

17. Johnson, M., Gernsheimer, T., Johansen, K. (1995). Essential thrombocytosis: underemphasized cause of large-vessel thrombosis. J Vasc Surg 22, 443-447; discussion 448-449.

18. Lahuerta-Palacios, J. J., Bornstein, R., Fernandez-Debora, F. J., Gutierrez-Rivas, E., Ortiz, M. C., Larregla, S., Calandre, L., Montero-Castillo, J. (1988). Controlled and uncontrolled thrombocytosis. Its clinical role in essential thrombocythemia. Cancer 61, 1207-1212.

19. Lengfelder, E., Griesshammer, M., Hehlmann, R. (1996). Interferon-alpha in the treatment of essential thrombocythemia. Leuk Lymphoma 22 Suppl 1:135-42.

20. Gillespie, E. (1988). Anagrelide: a potent and selective inhibitor of platelet cyclic AMP phosphodiesterase enzyme activity. Biochem Pharmacol 37, 2866-2868.

21. Spencer, C. M., Brogden, R. N. (1994). Anagrelide. A review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic potential in the treatment of thrombocythaemia. Drugs 47, 809-822.

22. Mazur, E., Rosmarin, A., Sohl, P., Newton, J., Narendran, A. (1992). Analysis of the mechanism of anagrelide-induced thrombocytopenia in humans. Blood 79, 1931.

23. Tefferi, A., Silverstein, M. N., Petitt, R. M., Mesa, R. A., Solberg, L. A. J. (1997). Anagrelide as a new platelet-lowering agent in essential thrombocythemia: mechanism of actin, efficacy, toxicity, current indications. Semin Thromb Hemost 23, 379-383.

24. Erusalimsky, J. D., Hong, Y., Franklin, R. (2002). Is the platelet lowering activity of anagrelide mediated by its major metabolite 2-amino-5,6-dichloro-3,4-dihydroquinazoline (RL603)? Exp Hematol 30, 625-626; author reply 626-627.

25. Lane, W. J., Hattori, K., Dias, S., Peerschke, E. I., Moore, M. A., Blanset, D. L., Lang, P. C., Petrone, M., Rafii, S. (2001). Anagrelide metabolite induces thrombocytopenia in mice by inhibiting megakaryocyte maturation without inducing platelet aggregation. Exp Hematol 29, 1417-1424.

26. Wang, G., Franklin, R., Hong, Y., Erusalimsky, J. D. (2005). Comparison of the biological activities of anagrelide and its major metabolites in haematopoietic cell cultures. Br J Pharmacol.

27. GAVER RC, DEEB G, PITTMANi KA, SMYTH RD. Disposition of anagrelide, an inhibitor of platelet aggregation. Clin Pharmacol Ther. 1981; 29:381 - 6

28. McCARTY JM, MELONE PD, SIMANIS JP, KANAMORI D, DESSYPRIS EN, WARSHAMANA, GREENE GS. A preliminary investigation into the action of anagrelide: thrombopoietin-c-Mpl receptor interactions. Exp Hematol. 2006 34:87-96

29. STEURER M, GASTL G, JEDRZEJCZAK WW, PYTLIK R, LIN W, SCHLOGL E et al. Anagrelide for thrombocytosis in myeloproliferative disorders: a prospective study to assess efficacy and adverse event profile. Cancer. 2004; 101:2239 - 46

30. BIRGEGARD G, BJORKHOLM M, KUTTI J, LARFARS G, LOFVENBERG E, MARKEVAN B et al. Adverse effects and benefits of two years of anagrelide treatment for thrombocythemia in chronic myeloproliferative disorders. Haematologica. 2004; 89:520- 7

31. HARRISON CN, CAMPBELL PJ, BUCK G, WHEATLEY K, EAST CL, BAREFORD D et al. United Kingdom Medical Research Council Primary Thrombocythemia 1 Study. Hydroxyurea compared with anagrelide in high-risk essential thrombocythemia. N Engl J Med. 2005; 353:33 - 45

32. BEAVO JA. cGMP inhibition of heart phosphodiesterase: is it clinically relevant J Clin Invest. 1995; 95:445

33. JAMES CW. Anagrelide-induced cardiomyopathy. Pharmacotherapy. 2000; 20:1224-7

34. ENGEL PJ, JOHNSON H, BAUGHAM RP, RICHARDS AI. High-output heart failure associated with anagrelide therapy for essential thrombocytosis. Ann Intern Med. 2005; 143:311-3

35. PACKER M, CARVER JR, RODEHEFFER RJ, IVANHOE RJ, DiBIANCO R, ZELDIS SM et al. Effect of oral milrinone on mortality in severe chronic heart failure. The PROMISE Study Research Group. N Engl J Med. 1991; 325: 1468-75

36. European Pharmacopea, 6th edition, 2008, Chapter 2.9.3, 267, Apparatus 2

37. Note for Guidance for the Investigation of Bioavailability and Bioequivalence (CPMP/EWP/QWP/1401/98 (July 2001), http://www.emea.eu.int/pdfs/human/ewp/140198en.pdf

Claims (14)

1. 미소화된(micronized) 아나그렐리드 입자,
   포비돈,
   크로스포비돈,
   미세결정성 셀룰로스(microcrystalline cellulose),
   마그네슘 스테아레이트, 및
   적어도 60mg의 락토스 모노하이드레이트를 포함하는, 정제(tablet) 또는 캡슐(capsule) 형태의 약학적 조성물로서,
   상기 아나그렐리드 입자의 적어도 90%는 직경이 10㎛보다 작은 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 0.54mg 내지 1mg의 양으로 아나그렐리드를 포함하는 약학적 조성물.
   
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 90mg의 락토스 모노하이드레이트를 포함하는 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 아나그렐리드는 약 5㎛의 평균 입자 크기를 가지는 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서, 4 내지 13mg의 양으로 포비돈을 포함하는 약학적 조성물.
   
6. 제1항에 있어서, 3.5 내지 13mg의 양으로 크로스포비돈을 포함하는 약학적 조성물.
   
7. 삭제
8. 제1항에 있어서, 적어도 15mg의 미세결정성 셀룰로스를 포함하는 약학적 조성물.
   
9. 삭제
10. 제1항에 있어서, 경구 투여시 적어도 60분의 플라스마 피크 방출을 가지는 약학적 조성물.
    
11. 제1항에 있어서, 0.57mg의 아나그렐리드 HCl, 93.9mg의 락토스 모노하이드레이트, 6mg의 포비돈, 5.5mg의 크로스포비돈, 22.5mg의 미세결정성 셀룰로스 및 1.5mg의 마그네슘 스테아레이트를 포함하는 약학적 조성물.
    
12. 삭제
13. 삭제
14. 삭제

Images