KR101617075B1 - 수화겔형 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법 - Google Patents

수화겔형 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법이 개시된다.
본 발명에 의한 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법은, 1) 정련된 생사(生絲)를 염화칼슘 수용액에 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하는 제1단계; (2) 제1단계를 통하여 제조된 실크 피브로인 수용액으로부터 상기 염화칼슘을 제거하는 제2단계; 및 (3) 제2단계를 통하여 염이 제거된 실크 피브로인 수용액에 방사선을 조사하여 겔화시키는 제3단계를 포함하여 이루어진다.
본 발명에 의할 경우, 실크 피브로인 창상피복재의 구조를 랜덤코일 구조로 유지할 수 있으면서도, 겔화 시간을 종래에 비하여 현저히 단축할 수 있게 된다.

Description

수화겔형 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법{SILK FIBROIN WOUND DRESSING MATERIALS AND MANUFACTURING METHOD THEREOF}
본 발명은 수화겔형 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 실크 피브로인 수용액에 방사선을 조사하여 겔(gel) 형태의 창상피복재를 제조하기 위한 것으로서, 겔화되는 시간을 단축시킬 수 있으면서도 제조되는 겔 형태의 창상피복재가 주로 랜덤구조를 가지는 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법에 관한 것이다.
일반적으로 생물은 몸(생체)에 결손 부위가 발생할 경우, 그 결손 부위를 어느 정도 스스로 방어하고 자가치유를 하려고 하는 성질을 가지고 있다. 특히, 생체의 결손 부위가 피부일 경우에는 사용되는 피복재의 생체적합성이 엄격히 요구되는 등 상당히 민감한 조건을 만족시켜야 한다. 이러한 창상피복재로서의 조건은 여러 가지가 있을 수 있으나, 무엇보다도 생체적합성이 우수하여 결손부위에 있어서의 거부반응이 적고, 창상면과 확실히 밀착할 수 있어야 하며, 또한 결손 부위의 감염을 방지할 수 있어야 하고, 다른 의약품 등과 혼합시 반응성이 적어야 한다.
종래부터 단백질 섬유 유래의 의료재로서 견(명주)이 수술실 등의 용도로 사용되어 왔다. 또한 단백질 섬유 유래의 성분으로 이루어지는 막으로서, 결정질을 포함하는 수불용성의 피브로인으로 이루어지는 투과막(일본 특개소 63-246169호, 일본 특개평 1-118545호) 등이 알려져 있다. 따라서 천연 단백질 섬유인 실크 피브로인은 생체 적합성을 갖는 것으로 이미 알려져 있으며, 이의 다양한 활용에 관한 연구가 계속되고 있다.
실크 피브로인을 창상피복재로 사용하기 위해서는 실크 피브로인을 겔화시키거나 별도의 구조체로 형성시켜야 한다. 실크 피브로인을 겔화시키는 방법은 첫째 실크 피브로인 수용액을 상온 또는 약 80 내지 90℃의 온도에서 자연적으로 겔화시키거나, 실크 피브로인 수용액에 화학적 가교제나 겔화 반응 개시제(겔화제) 등을 첨가하는 것이다. 그러나 상기의 방법들은 겔화 시간이 상당히 오래 걸리고, 또한 실크 피브로인의 구조가 수용성의 랜덤코일에서 수불용성의 β-sheet로 전환된다. 이와 같이 수불용성의 β-sheet로 실크 피브로인의 구조가 전환되면, 피부 및 근육 등에서 배출되는 체액의 흡수가 늦어지고, 상처부위와의 밀착력이 떨어져 세균에 의한 이차 감염이 발생하기 쉽다. 또한 겔화 시간의 단축을 위하여 첨가되는 화학적 가교제나 겔화 반응 개시제로 인하여 인체에 악 영향을 끼칠 우려가 있다.
따라서 겔화 시간을 단축할 수 있으면서도, 수용성의 랜덤코일 구조를 갖는 실크 피브로인 창상피복재의 필요성이 점점 커지고 있는 실정이다.
본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 종래에 비하여 겔화되는 시간을 현저히 단축시킬 수 있으면서도, 제조되는 겔 형태의 창상피복재가 랜덤코일 구조를 가지는 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상술한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법을 제공하는데, 본 발명의 일 측면에 의한 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법은,
(1) 정련된 생사(生絲)를 염화칼슘 수용액에 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하는 제1단계;
(2) 제1단계를 통하여 제조된 실크 피브로인 수용액으로부터 상기 염화칼슘을 제거하는 제2단계; 및
(3) 제2단계를 통하여 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액에 방사선을 조사하여 겔화시키는 제3단계를 포함하여 이루어진다.
상기 제2단계와 제3단계의 사이에 제2단계를 통하여 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액을 농축시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
제1단계에서 사용되는 염화칼슘 수용액은 염화칼슘을 물 또는 에탄올과 물의 혼합용매에 용해시킨 것임이 바람직하다.
상기 제3단계에서 조사되는 방사선은 감마선인 것이 바람직하다.
또한 본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조되는 실크 피브로인 창상피복재를 제공한다.
상술한 본 발명에 의할 경우, 제조되는 겔 형태의 실크 피브로인 창상피복재의 구조를 랜덤코일 구조로 유지할 수 있으면서도, 겔화 시간을 종래에 비하여 현저히 단축할 수 있게 된다.
도 1은 감마선 조사 전후의 겔화 여부를 관찰하기 위한 사진이다.
도 2는 단백질 이차 구조 변화를 확인하기 위하여 표면적외선분광법을 이용하여 측정한 결과이다.
도 3은 단백질 이차 구조 변화를 확인하기 위하여 핵자기공명분광법을 이용하여 측정한 결과이다.
도 4는 실시예 1 내지 실시예 4의 압축강도 측정결과이다.
도 5는 실시예 1 내지 실시예 4의 단면을 촬영한 SEM 이미지이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 실크 피브로인 창상피복재 및 그 제조방법을 제공하는데, 본 발명의 일 예에 의한 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법은,
(1) 정련된 생사(生絲)를 염화칼슘 수용액에 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하는 제1단계;
(2) 제1단계를 통하여 제조된 실크 피브로인 수용액으로부터 상기 염화칼슘을 제거하는 제2단계; 및
(3) 제2단계를 통하여 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액에 방사선을 조사하여 겔화시키는 제3단계를 포함하여 이루어진다.
제1단계에서 사용되는 정련된 생사(生絲)는 누에고치로부터 빼낸 그대로의 생사(生絲)에서 세리신을 제거한 것을 의미한다. 생사(生絲)로부터 세리신을 제거하는 것은 열탕으로 10 시간 이상 끓이거나, 묽은 알카리성 용액으로 처리하는 등의 방법에 의하여 가능하며, 생사(生絲)로부터 세리신을 제거하여 정련된 생사(生絲)를 얻는 기술 자체는 공지의 것이므로 이의 상세한 설명은 생략한다.
정련된 생사(生絲)는 염화칼슘 수용액에 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하게 되는데, 정련된 생사(生絲)는 물, 묽은 산, 묽은 염기 등에는 용해되지 않는다. 따라서 본 발명에서는 정련된 생사를 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하기 위하여, 염화칼슘을 물 또는 에탄올과 물의 혼합용매에 용해시킨 염화칼슘 수용액을 이용하여 생사(生絲)를 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하게 된다.
다음으로 제2단계에서는 상기 제1단계를 통하여 제조된 실크 피브로인 수용액으로부터 염화칼슘을 제거하게 되는데, 상기 염화칼슘의 제거는 염화칼슘을 제거할 수 있다면 어떤 방법에 의하여도 무방하나, 공정의 예측가능성과 효율 등을 고려할 때 투석에 의하는 것이 바람직하다. 투석은 셀룰로오스 투석막(cut off 12,000 ~ 14,000) 등을 이용하여 수행할 수 있으며, 투석 기술 자체는 공지의 기술이므로 이의 상세한 설명은 생략한다. 투석은 염화칼슘이 완벽히 제거될 수 있을 때까지 충분히 수행하는 것이 바람직하다.
다음으로 제3단계에서는 제2단계를 통하여 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액에 방사선을 조사하여 실크 피브로인 수용액을 겔(gel)화시키게 된다. 이때 방사선은 알파선, 베타선, 전자선 등 어떠한 방사선을 사용하여도 무방하나, 투과력이 가장 강력한 감마선을 사용하는 것이 바람직하다. 방사선의 조사 세기 및 시간은 겔화시키고자 하는 실크 피브로인 수용액의 양 및 목적하는 겔의 강도 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. 본 발명의 완성과정에서의 반복된 실험에 의한 결과로는 감마선을 시간당 20 kGy/h의 선량률로 조사할 경우, 조사 즉시 겔화가 진행되며, 조사 시간이 최대 1 시간이면 실크 피브로인 수용액이 충분히 겔화되는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 본 발명에 의할 경우, 실크 피브로인 수용액이 충분히 겔화되는데 수일 이상 걸리던 종래와 비교하면 겔화 시간이 현저히 단축되었음을 알 수 있었다.
또한 본 발명은 제2단계와 제3단계의 사이에 제2단계를 통하여 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액을 농축시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 이는 제조되는 실크 피브로인 창상피복재의 밀도 등을 조절하기 위하여 행하는 것으로서 농축시키는 것은 공지된 다양한 방법에 의하여 수행될 수 있다.
또한 본 발명은 상술한 제조방법에 의하여 제조되는 실크 피브로인 창상피복재를 제공한다.
이하 구체적인 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
실시예 : 감마선 조사에 의한 수화겔형 실크 피브로인 창상피복재의 제조
세리신이 제거된 정련된 생사(生絲) 30g을 염화칼슘, 에탄올, 증류수의 몰비가 1 : 2 : 8이 되도록 혼합한 3성분 용매 450㎖에 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하였다. 제조된 실크 피브로인 수용액을 셀룰로오스 투석막(cut off 12,000 ~ 14,000)을 이용하여 3일 동안 투석하여 염화칼슘을 제거하였다. 다음으로 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액에 감마선을 20 kGy/h의 선량률로 조사하여 실크 피브로인 수용액을 겔화시켜 겔 형태의 실크 피브로인 창상피복재를 제조하였다. 감마선의 조사는 20kGy(실시예 1), 40kGy(실시예 2), 60kGy(실시예 3), 80kGy(실시예 4)로 하였다.
비교예
감마선 조사 대신 자연 겔화를 제외하고는 상기 실시예와 동일한 과정을 통하여 수화겔형 창상피복재를 제조하고 이를 비교예로 선정하였다.
즉, 세리신이 제거된 정련된 생사(生絲) 30g을 염화칼슘, 에탄올, 증류수의 몰비가 1: 2 : 8이 되도록 혼합한 3성분 용매 450㎖에 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하였다. 제조된 실크 피브로인 수용액을 셀룰로오스 투석막(cut off 12,000 ~ 14,000)을 이용하여 3일 동안 투석하여 염화칼슘을 제거하였다. 다음으로 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액을 상온에서 7일간 겔화시켜 창상피복재를 제조하였다.
시험예 1 : 겔화여부 관찰
상기 실시예에 의하여 제조된 실크 피브로인 창상피복재가 충분히 겔화되었는지 여부를 확인하기 위한 시험을 진행하였다.
도 1은 육안관찰 결과를 나타낸 사진이며, (a)의 투명병은 감마선 조사 직전의 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액을 채운 것이며, (b)의 갈색병은 실크 피브로인 수용액이 채워진 투명명에 20 kGy의 감마선을 1시간 조사하여 겔화를 진행한 것이다. 감마선 조사 시 투명병은 갈색으로 변색되었으며, 겔화 완료 후, 또 다른 투명병과 함께 기울여 이를 (b)에 나타내었다.
도 1의 (b)의 결과에서 알 수 있듯이 감마선 조사 후의 갈색병은 겔화가 이루어져 병을 기울여도 투명병과 달리 거동이 보이지 않음을 확인할 수 있었다.
시험예 2 : 표면적외선분광법을 이용한 단백질 구조 변화 확인
상기 실시예에 의하여 제조된 실크 피브로인 창상피복재의 실크 피브로인의 단백질 이차구조 변화를 표면적외선분광법을 이용하여 확인하였고, 이의 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에서 (a)는 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액, (b)는 실시예 1, (c)는 실시예 2, (d)는 실시예 3, (e)는 실시예 4를 의미한다. 도 2의 결과에서 확인할 수 있듯이 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 실크 피브로인 창상피복재는 감마선 조사 세기와 상관없이 실크 피브로인 수용액과 동일한 피크를 나타내었다. 이는 단백질의 이차구조가 β-sheet로 변화하지 않고 랜덤코일 상태로 겔화되었음을 의미한다.
시험예 3 : 핵자기공명분광법을 이용한 단백질 구조 변화 확인
상기 실시예 및 비교예에 의하여 제조된 실크 피브로인 창상피복재의 실크 피브로인의 단백질 이차구조 변화를 핵자기공명분광법을 이용하여 확인하였고, 이의 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3에서 (a)는 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액, (b)는 비교예, (c)는 실시예 1을 의미한다.
실크 피브로인의 β-sheet 구조는 실크 피브로인 내의 아미노산인 Gly(glycine), Ser(Serine), Ala(Alanine)의 13C 화학적 이동에 의해 확인된다. 실크 피브로인의 NMR 스펙트럼에서 16.3ppm 부근의 피크는 Ala의 Cβ 의 피크를 의미한다. 실크 피브로인 수용액(a)과 실시예 1(c)은 유사한 피크 형태를 나타냈고, 비교예(b)의 경우 실크 피브로인 수용액(a) 및 실시예 1(c)과 달리 20.4ppm 부근에서 숄더가 나타났다. 또한 173ppm 부근에서도 β-sheet의 형성에 의한 170.3ppm 부근에서의 피크 변화를 확인할 수 있었다. 이것을 통해 비교예의 경우 실크 피브로인의 단백질 이차구조가 β-sheet로 전환되었음을 확인할 수 있었다. 반면 실시예 1(c) 의 경우 비교예와 달리 실크 피브로인의 단백질 이차 구조가 β-sheet로 전환되지 않았음을 확인할 수 있었다.
시험예 4 : 감마선 조사 세기 변화에 따른 강도변화
감마선 조사 세기를 달리한 상기 실시예 1 및 실시예 4를 대상으로 감마선 조사 세기가 강도에 미치는 영향을 알아보기 위하여 상기 실시예 1 및 실시예 4에 의하여 제조된 창상피복재의 압축강도를 Texturemeter를 이용하여 측정하였고, 이의 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4의 결과에서 확인할 수 있듯이 감마선의 조사 세기가 증가함에 따라 압축강도도 증가함을 확인할 수 있었다.
시험예 5 : 단면 형태 분석
감마선 조사 세기를 달리한 상기 실시예 1 및 실시예 4의 단면을 주사전자현미경(SEM)으로 촬영하고, 이의 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서 (a)는 실시예 1, (b)는 실시예 2, (c)는 실시예 3, (d)는 실시예 4를 의미한다.
도 5의 결과에서 확인할 수 있듯이 감마선의 조사 세기가 증가할수록 기공의 크기가 감소하였음을 확인할 수 있었다. 이는 감마선의 조사 세기가 증가할수록 라디칼이나 이온에 의한 가교반응의 증가로 인해 가교 밀도가 증가하여 기공의 크기가 감소한 것으로 판단된다. 또한 가교 밀도가 증가함에 따라 압축강도도 증가한 것으로 판단된다.
본 발명은 상기한 실시예를 참조하여 설명되었지만, 본 발명의 개념 및 범위 내에서 상이한 실시예를 구성할 수도 있다. 따라서 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위 및 이와 균등한 것들에 의해 정해지며, 본 명세서에 기재된 특정 실시예에 의해 한정되지는 않는다.

Claims (6)

  1. (1) 정련된 생사(生絲)를 염화칼슘 수용액에 용해시켜 실크 피브로인 수용액을 제조하는 제1단계;
    (2) 제1단계를 통하여 제조된 실크 피브로인 수용액으로부터 상기 염화칼슘을 제거하는 제2단계; 및
    (3) 제2단계를 통하여 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액에 방사선을 조사하여 겔화시키는 제3단계를 포함하여 이루어지는 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    제2단계와 제3단계의 사이에 제2단계를 통하여 염화칼슘이 제거된 실크 피브로인 수용액을 농축시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서,
    제1단계에서 사용되는 염화칼슘 수용액은 염화칼슘을 에탄올과 물의 혼합용매에 용해시킨 것임을 특징으로 하는 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 제2단계는, 상기 제1단계를 통하여 제조된 실크 피브로인 수용액을 투석하여 염화칼슘을 제거하는 것을 특징으로 하는 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 제3단계에서 조사되는 방사선은 감마선인 것을 특징으로 하는 실크 피브로인 창상피복재의 제조방법.
  6. 제1항 내지 제5항의 어느 한 항의 제조방법에 의하여 제조되는 것을 특징으로 하는 실크 피브로인 창상피복재.
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