KR101594519B1 - 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 혼합 추출물은 정액 내 정자 농도를 증가시키고, 정자 활력을 증가시키며, 테스토스테론, 황체형성호르몬 또는 난포자극호르몬과 같은 성호르몬의 분비를 증가시킴으로써 남성의 생식기능을 개선하는데 뛰어난 효과를 나타낸다. 본 발명은 천연물을 소재로 이용함으로써 저렴한 생산비용과 사용의 편이성을 제공한다.

Description

쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물{Composition for Improving Male Reproduction Capability Comprising Extract of Portulaca oleracea. L., Lycium chinense. Mill., Cornus officinalis and Tribulus terrestris L.}

본 발명은 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물에 관한 것이다.

국민들의 소득수준 향상과 소비인식의 변화로 인하여 소비자들도 식품의 생명유지 및 기호적 기능뿐만 아니라 노화방지, 만성질환 및 성인병예방 등 생체조절 기능까지 갖춘 식품에 관심을 갖기 시작하였다. 먹을거리를 생산하는 산업으로 대표되던 생명산업(Life Industry)은 미생물, 동물, 식물 등의 생명자원을 활용하여 인간에게 유익한 고부가가치제품 및 서비스를 창출하는 생명산업으로 변화되고 있다. 의학 및 생명공학기술의 발달로 인간의 평균수명은 10년 뒤 100세를 달할 정도로 증가하고 있는 가운데 경제력이 있는 노인층이 증가하고, 건강에 대한 소비자들의 니즈가 확대되면서 편안한 노후를 위한 예방의학에 대한 관심이 더욱 고조되고 있다. 그러나 심장병, 당뇨병, 비만과 같은 대사성질환이나 만성질환자가 꾸준히 증가하는 것으로 보고되고 있다.

프랑스 남성들의 정자수가 1989년에서 2005년 사이 33% 가량 줄어든 것으로 나타났다. 프랑스 연구팀이 'Human Reproduction' 저널에 밝힌 2만6600명 이상의 남성을 대상으로 한 연구결과에 의하면 지난 16년 동안 프랑스 남성들의 평균 정자수가 32.3% 가량 줄어 연간 1.9% 가량 감소한 것으로 나타났고, 또한 정상 모양의 정자의 비율 역시 33.4% 줄어든 것으로 나타났다(메디컬투데이, 2012. 12. 05). 일본 데이쿄대 의학부(1998)의 보고에 따르면 도쿄근교에 사는 20대 남성 50명(평균 24세)과 37∼53세의 남성 44명(평균 42세)의 정자수를 비교한 결과 40대 남성의 정자수가 평균 8천4백만 마리에 비해 20대 남성은 4천6백만 마리로 55%에 불과하였다. 이와 같은 측정치는 WHO가 지난 1992년 통상의 성교를 통해서 임신시킬 수 있는 정자수의 최저치를 2천만마리로 정한 기준으로 볼 때 40대 전후의 남성은 모두 이 기준을 초과했으나 20대 남성들은 86%만이 기준을 넘어선 것으로 나타났다. 이 밖에 정자의 운동성(sperm motility)을 보여주는 평균 운동률은 20대가 27%, 40대가 28%로 비슷하였으나 정자의 정상형태율(normal morphological ratio)은 40대 전후가 64%인데 비해 20대 남성은 52%로서 다소 낮은 것으로 조사됐다.

정자활력(sperm motility)은 정자의 생존성에 대한 훌륭한 지표(indicator)가 될 수 있으며(Noran 등, 1998), 정액품질을 평가하는 공통의 지표에는 정자농도, 기형정자율, 생사정자비율, 정액량, pH, 정자의 초기활력 및 정자의 집단운동(mass movement)등이 있다(Berndtson과 Pickett, 1980).

지난 2006년 대비 2010년 남성 불임환자는 5년간 24.4%가 증가하였고, 남성 불임의 연평균 증가율은 여성 보다 거의 두 배 높은 것으로 나타났다. 남성 불임환자의 급격한 증가는 과도한 업무와 스트레스, 환경호르몬이 주된 원인이며 가장 큰 원인은 결혼연령의 증가로 알려져 있다.

인간을 포함한 포유동물에 있어서 생식세포인 정자는 남성측 유전정보를 다음 세대에 전달하는 중요한 매개체로서 정자를 생산하는 일련의 복합적인 과정을 포함하는 정자형성과정(spermatogenesis)은 종의 보존과 유전적 다양성에 있어서 필수적인 과정이다.

이같이 복합적이고 생산적인 정자형성과정에 있어서 생식선줄기세포인 정원줄기세포는 남성의 생애전반에 걸쳐서 정자형성과정을 유지시키는 중요한 기본세포로 인식되고 있다. 특히 정자생산에 직접적인 역할을 하는 정원줄기세포는 남성 불임치료 및 생식능력 향상을 위해서도 필수적인 연구부분으로 평가된다.

정원줄기세포(spermatogonial stem cells)는 고환 내에 존재하는 정자생산의 토대가 되는 줄기세포로서 일생동안 증식하면서 그 수를 유지하고 그 가운데 일부가 남성 생식세포로 분화하여 정자를 만든다. 한 개의 정원줄기세포로부터 약 4000개의 정자가 생산된다. 따라서 남성의 경우 정자생산효율이 높고 정원줄기세포에 손상이 없다면 나이가 많아도 정자생산이 가능하다. 정원줄기세포는 유전자 발현조절과 호르몬의 조절에 의해 정자를 형성하는데 조절에 이상이 있는 경우 남성불임과 무정자증(aspermia)이 유발된다.

한편으로는 현대인들의 성에 대한 관심이 증가됨으로서 저하된 남성의 능력을 약물사용으로 만회하려는 경향이 고조되었고, 흔히 정력증진에 효험이 있다고 알려진 의약품들의 비정상적인 반입과 지나친 사용 및 알콜을 이용하여 신경계통의 긴장을 완화시키는 것을 성생활에 이용하는 경우도 있으나 이는 알콜중독에 의한 신경기능 및 성기능 장애로 이어지는 경우가 생길 수 있다.

최근에는 외국에서 개발된 발기기능 강화제가 많은 관심과 우려 속에 우리나라에서도 시판이 허용된 바 있고, 이미 외국에서는 심장질환자 또는 고혈압환자에게서 치명적인 부작용이 발생한 사례가 보고되었다. 국내에서 시판되고 있는 기존의 발기능력 강화 및 지속을 위한 크림제제와 스테미너 증진용 건강보조기구 등은 사용이 불편하고 고가인 동시에 효능면에서도 뚜렷한 만족감을 주지 못하는 것으로 인식되고 있다.

지난 90년대부터 국내에서는 성기능 향상을 위해서 생약을 주 원료로 제조되는 기능성 보조제 위주의 연구가 활발히 수행되었다. 농촌진흥청이 개발하여 2001년부터 시판하고 있는 “누에그라”, 종근당이 옥타코사놀을 주성분으로 하여 정력증진용 건강보조식품으로 개발한 “롱타임F", 한국의과학연구소에서 개발한 성기능향상 한방제품 ”천보204“, 한국인삼공사가 홍삼을 주 원료로 개발한 ”레드맥스“ 및 한국식품연구원에서 산업계수탁사업(2000년) 및 특허기술성평가사업(2004년)으로 수행한 바 있는 국내산 더부살이풀과 오리나무 및 오미자추출액을 주원료로 하여 제조된 스태미나 증진효과가 있는 천연차(다미나 909)가 판매되고 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 남성의 생식기능을 개선할 수 있는 천연물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물의 조합이 쇠비름, 구기자, 산수유 또는 질려자 단일 추출물과 비교하여 현저히 증가된 남성의 생식기능 개선 효과를 가짐을 실험적으로 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 남성의 생식기능을 개선할 수 있는 천연물을 개발하고자 노력한 결과, 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물의 조합이 쇠비름, 구기자, 산수유 또는 질려자 단일 추출물과 비교하여 현저히 증가된 남성의 생식기능 개선 효과를 가짐을 실험적으로 규명하였다.

본 발명에 따르면, 본 발명의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 혼합 추출물은 정액 내 정자 농도를 증가시키고, 정자 활력을 증가시키며, 테스토스테론, 황체형성호르몬(luteinizing hormone) 또는 난포자극호르몬(follicle-stimulatin hormone)과 같은 성호르몬의 분비를 증가시킴으로써 남성의 생식기능을 개선하는 데 유효하다.

본 발명의 조성물은 남성의 정자 수 및 정자 운동성의 기전과 관련된 호르몬인 테스토스테론의 분비를 조절하여 저하되는 남성의 성기능을 회복시키며 활력을 촉진한다.

본 발명에서 사용된 쇠비름은 1년생 잡초로서 오행초(五行草), 장명채(長命采), 마치채(馬齒菜) 등으로 불리기도 하는데, 주로 길가, 텃밭 등에서 자생하며, 약 15~30cm 높이의 줄기는 갈적색으로 땅 위로 비스듬히 퍼져 자란다. 쇠비름에 함유된 성분으로 특이한 것은 식물체임에도 불구하고 오메가-3-지방산이나 노르아드레날린(noradrenaline), 도파민(dopamine) 같은 물질이 많이 들어 있다는 것이며, 왁스나 펙틴질을 포함한 수용성 다당류나 각종 비타민류 및 아미노산, 유기산, 배당체 성분 등이 다량 함유되어 있다(U.S. Pat. No. 5,869,060). 이러한 쇠비름은 양념 등에 버무려 식용하거나 약재로도 사용되고 있으며 최근에는 항산화 효과나 항암(dopamine의 역할), 심장병 (K+ 이온의 작용), 항염증(오메가-3-지방산의 역할), 당뇨(오메가-3-지방산에 의한 혈당조절) 등에도 효과가 좋은 것으로 보고 되고 있다.

본 발명에서 사용된 구기자는 구기자란 구기자 나무의 열매(Lycii fructus)를 말하며, 뿌리의 껍질은 지골피, 잎은 구기엽, 어린순은 청정초라고 한다(Lee SR 1983). 동의보감에 의하면 구기자는 자양, 강장, 보혈, 지갈 등에 효능이 있다고 하며(Her J 1999), 본초강목에 의하면 구기자는 독성이 없고 구기자 복용 시근골이 단단해지고 더위와 추위를 타지 않으며 가슴의 염증과 갈증을 수반하는 당뇨병이나 신경이 마비되는 질병에 좋고 폐와 신장의 기능을 촉진시켜 시력이 좋아진다고 기록되어 있다(Lee SJ 1987). 구기자는 비타인(betaine), 콜린(cholin), 피사리엔(physalien), 루틴(rutin), β-시토스테롤(β-sitosterol), 지아잔틴(zeazanthin) 등 다양한 기능성성분을 함유하고 있으며(Lee BY 등 1995), 항산화 효과, 항균 및 항암 효과, 면역증진효과, 간 기능개선 효과, 혈중 콜레스테롤 저하 효과 등 다양한 생리활성을 나타내는 것으로 알려져 있다(Joo IS 등 1997, Chung HK 등2004, Kang KI 등, 2006).

본 발명에서 사용된 산수유는 산수유 나무(Cornus officinalis)의 열매이다. 산수유의 과육에는 코르닌(cornin), 모로니사이드(Morroniside), 로가닌(Loganin), 탄닌(tannin), 사포닌(Saponin) 등의 배당체와 포도주산, 사과산, 주석산 등의 유기산이 함유되어 있고, 종자에는 팔미틴산, 올레인산, 리놀산 등이 함유되어 있다. 한방에서는 산수유를 통증, 요실금, 야뇨증 등의 치료에 사용하고 있다.

본 발명에서 사용된 질려자는 약용식물로, 백질려로도 불리며, 질려과(납가새과; Zygophyllaceae)에 속한 1년생 또는 다년생 초본인 납가새(Tribulus terrestrisL.)의 성숙한 열매를 건조한 것이다. 약리학적 연구 보고로는 질려자의 일정한 강압 및 이뇨작용과 전초의 추출물은 지해(止咳), 거담(祛痰), 평천(平喘)의 작용이 있는데 그 중에서 지해작용이 비교적 좋다는 보고가 있고, 수침액(水浸液), 에탄올, 수침출액 및 30% 에탄올 침출액의 실험에서는 마취동물의 혈압을 강하시키는 작용이 있다는 보고가 있다.

본 발명의 명세서에서 용어 “쇠비름 추출물” 이란 상기 쇠비름으로부터 적합한 용매를 사용하여 추출하여 얻는 추출물을 의미한다.

본 발명의 명세서에서 용어 “구기자 추출물” 이란 상기 구기자로부터 적합한 용매를 사용하여 추출하여 얻는 추출물을 의미한다.

본 발명의 명세서에서 용어 “산수유 추출물” 이란 상기 산수유로부터 적합한 용매를 사용하여 추출하여 얻는 추출물을 의미한다.

본 발명의 명세서에서 용어 “질려자 추출물” 이란 상기 질려자로부터 적합한 용매를 사용하여 추출하여 얻는 추출물을 의미한다.

본 발명의 명세서에서 용어 “쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 혼합 추출물” 이란 상기 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물의 혼합물로 바람직하게는 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 50:30:10:10의 비율로 혼합한 것을 의미한다.

본 발명의 조성물에서의 유효성분인 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 분리하는 방법은 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건하에서 통상적인 용매를 사용하여 분리할 수 있다.

본 발명의 조성물에서 이용되는 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자에 추출용매를 처리하여 얻는 경우에는, 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 바람직하게는, 극성 용매 또는 비극성 용매를 이용할 수 있다. 극성 용매로서 적합한 것은, (i) 물, (ii) 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올, 에틸렌글리콜 또는 부틸렌글리콜), (iii) 아세트산, (iv) DMFO(dimethyl-formamide) 및 (v) DMSO(dimethyl sulfoxide)를 포함한다. 비극성 용매로서 적합한 것은, 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 헥산, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소 및 THF를 포함한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 또는 이의 조합을 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자에 처리하여 수득한 것이다.

본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 추출물은 열수를 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자에 처리하여 수득한 것이다.

본 명세서에서 사용되는 용어 “추출물”은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명에서 이용되는 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 명세서에서 용어 ‘유효성분으로 포함하는’이란 하기의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명은 천연식물재료인 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자로부터 추출한 조성물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물이 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다. 본 명세서에서 용어 “약제학적 유효량”은 상술한 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여 방식으로 적용된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 일반적인 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 식품 조성물로 제공될 수 있다. 본 발명의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물뿐 만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 남성 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

본 발명의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물은 기능성 식품 조성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물이 기능성 식품 조성물로 제조되는 경우, 식품 제조 시 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분으로서 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물 이외에 향미제 또는 천연 탄수화물을 추가 성분으로 포함시킬 수 있다. 예를 들어, 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등); 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등); 올리고당; 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등); 및 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)을 포함한다. 향미제로서 천연 향미제(예컨대, 타우마린, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)을 이용할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(ⅰ) 본 발명은 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물을 유효성분으로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물을 제공한다.

(ⅱ) 본 발명의 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 혼합 추출물은 정액 내 정자 농도를 증가시키고, 정자 활력을 증가시키며, 테스토스테론, 황체형성호르몬 또는 난포자극호르몬과 같은 성호르몬의 분비를 증가시킴으로써 남성의 생식기능을 개선하는데 뛰어난 효과를 나타낸다.

(ⅲ) 본 발명은 천연물을 소재로 이용함으로써 저렴한 생산비용과 사용의 편이성을 제공한다.

도 1은 식물 유래 기능성 물질 탐색을 위한 추출 및 분획 과정에 대한 모식도이다.
도 2는 오픈 크로마토그래피 분리과정에 대한 모식도이다.
도 3은 정원줄기세포의 이식 및 산자 생산기법에 대한 모식도이다.
(A-B) 이식기법을 통한 정원줄기세포의 농도 및 활성도를 조사하기 위하여 lac-Z 유전자와 같은 리포터 유전자를 발현하는 형질전환동물의 정소세포를 donor로 사용함. 도면에서 푸른색 정소는 X-gal 염색을 통하여 lac-Z 유전자의 발현이 확인된 상태를 나타냄. 따라서 이식 후 X-gal 염색을 통하여 공여동물 유래 세포들의 관찰이 가능함. 공여동물 정소로부터 효소처리법을 이용하여 정원줄기세포가 함유된 정소세포 회수
(C) 준비된 수여동물의 정소에 미세세포주입술을 이용하여 회수된 정소세포이식.
(D) 이식 3-5개월 후 수여동물의 정소를 회수하여 염색함으로서 이식된 공여동물 유래 정원줄기세포의 활성도를 조사함. 이식된 정소세포들 중 정원줄기세포만이 유일하게 세정관내에서 증식/확장될 수 있으며, 정자형성 과정 중 다양한 단계의 분화된 세포들을 생산할 수 있음. 또한 각각 하나의 정원줄기세포는 각각의 세정관내에서 증식/확장되고 분화된 세포들을 생산하는 특성을 지님에 따라 상기 그림과 같은 이식기법을 이용하여 정원줄기세포의 활성도 및 수적인 분석이 동시에 가능함(D. 푸른색으로 염색된 라인 형태의 세정관은 이식된 한개의 정원줄기세포가 자가재생과 분화된 세포생산에 의하여 형성된 것임. 정소에서 라인 형태를 개수하여 정소에 이식된 세포들 중 정상적인 정원줄기세포의 활성도를 지닌 세포의 수적분석을 실시함).
(E) 분석을 실시하지 않을 경우 암컷과 교미를 통하여 공여동물 정원줄기세포에서 유래된 유전형질을 지닌 산자생산. 삽입그림 (A-D) 이식후 시간 경과에 따른 수여동물 세정관내에서 정원줄기세포의 증식/확장 및 분화된 생식세포의 생산양상.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

재료 및 방법

1. 정원줄기세포 활성 증진 기능조성물의 효능평가

1-1. 토끼실험

1-1-1. 성행동(sexual behavior) 평가

성행동변화 관찰용 숫토끼는 사전에 교미능력을 3회 측정하여 최소 1회 이상 사정한 토끼들을 선발하였다. 교미에 이용되는 암토끼는 실험에 사용하기 최소 2주 전 난소를 적출하고, 교미(mating) 허용을 유도하기 위해 에스트라디올(Estradiol)을 일주일 간격으로 2.5 mg을 주사 후 이용하였다. 숫토끼는 성행동을 조사하기 5분전에 관찰 케이지로 이동시키고 암토끼와 합사시킨 다음 사정 후 승가시간이 10분이 넘을 때 실험을 종료하였다(본 토끼실험에서는 기존 제품과 효능비교를 실시함).

① 승가허용시간(mounting latency): 암토끼와 합사 후 첫 번째 승가소요시간

② 사정시간(ejaculation latency): 합사 후 사정까지 소요시간

③ 사정 후 승가시간: 사정 후 다음 승가까지 소요시간

④ 승가횟수 및 사정횟수: 성욕과 스테미너 변화를 조사를 위해 성행동 양상 비교 관찰

1-1-2. 정자형성(spermatogenesis) 평가

토끼(New Zealand White)에게 시료를 12주간 투여하고 시험 개시 후 4주 간격으로 도살 또는 생검으로 정소조직을 채취하고, 채취된 정소조직은 유세포분석기(flowcytometer)를 이용하여 세포핵내의 DNA양을 측정하여 정자의 발생단계별 세포분포를 측정하였다. 또한 체내 생식능력의 측정은 정소 내 생식세포의 발생양상을 분석하기 위하여 채취된 정소조직을 대상으로 다양한 분화단계의 생식세포 바이오마커인 PNA(peanut agglutinin lectin)를 이용하여 발현양상을 분석하였다. 혈중 LH와 테스토스테론농도의 측정을 위해 희생 시에 귀 정맥에서 혈청을 분리하여 호르몬 분석시까지 -20℃로 보관하여 이용하였다.

1-1-3. 정액성상(semen characteristics) 평가

인공질법(artificial vagina)으로 15분 간격으로 10회 정액을 채취하여 정액의 성상변화를 평가하였다. 채취된 정액은 정액량, 농도 및 활력 등을 CASA (Computer Assisted Semen Analysis)로 측정하였다.

1-2. 마우스 실험

정원줄기세포 활성증진소재(조성물)의 생식능력평가를 위해 생후 4주령 흰쥐(Wistar rat)를 공시하였다. 실험사료는 AIN-표준식이(semi-purified diet)를 급여하고, 실험기간중 사료는 자유섭취시키고, 사육실 온습도는 22±1℃, 60±10%, 점등시간은 06:00-18:00로 하였다. 분만과 육성능력 및 운동지구력을 평가하기 위하여 웅성(♂)과 동일 품종의 자성(♀) 랫트를 처리군당 10마리씩 배치하였다.

지구력측정을 위해 Jacob과 Michaud(1961) 방법에 따라 랫트가 기진맥진할 때까지의 시간을 측정하였다. 수조는 랫트용으로 36 cm 깊이로 물을 채우고 수온은 20±0.5℃로 하고, 한 번에 랫트 5마리를 수조에 집어넣고 측정하며 기진맥진(exhaustion)하는 시점은 물속에 머리가 7초 정도 잠길 때를 기준으로 하고 이 때 바로 랫트를 회수하였다.

정자지수측정을 위해 원정액을 3% NaCl 용액과 혼합 후(400-500배 희석) 분광광도계로 측정한다. 정자활력 검사는 생정자의 두부의 원형질막은 반투과성으로 에오신 투과가 불가능한 반면 사정자의 두부는 전투과성으로 에오신이 투과되어 염색되는 원리를 이용한 생사염색법(alive-dead stain)으로 염색하여 위상차현미경으로(×400) 활력 90% 이상인 정자의 운동성을 관찰하였다(Hafez, 1993). 또한, 테스토스테론 농도를 측정하였다.

2. 천연식물자원 스크리닝

두릅나무, 헛개나무, 고욤나무 등 식용가능 식물재료를 대상으로 스크리닝을 실시하고 실험결과를 데이터베이스화 하였다. 천연식물자원은 메탄올로 추출하여 감압농축한 후 사용하였다. 천연식물자원의 스크리닝은 본 추출물을 이용하여 정원줄기세포 활성 증진 기능조성물의 효능평가를 실시하였다.

3. 천연식물 유래 기능성물질 탐색

각 시료는 음건한 후 메탄올을 이용해 계통적 추출을 실시하며 3회 이상 실시하여 충분한 메탄올 추출물 양을 확보하였다. 시료의 메탄올 추출물은 극성별 유기용매를 이용하여 크로마토그래피를 실시하고 분획물을 수득하여 초기 추출물과 마찬가지로 가장 약리효과를 보이는 분획물을 선정하여 성분분리를 진행하였다(도 1).

선정된 분획물층은 크로마토그래피를 통해 물질을 분리 정제하여 이 과정은 물질을 수순하게 분리하기 위해 반복 진행하였다(도 2). 또한 recycling prep-HPLC 등의 기계를 이용하여 소량의 물질을 분리하며 전개용매는 TLC를 통해 분리능이 좋은 용매를 선정하여 실험을 진행하였다. 그 외 분획물에서도 신물질 발견과 성분종류의 데이터베이스 구축을 위해 동일하게 물질분리를 실시하였다.

4. 신규물질의 규명

크로마토그래피를 통하여 분리된 순수결정은 HPLC 방법으로 순도를 확인하고 각 분석스펙트럼을 찍었다. 사용하는 분석기기는 IR, ¹H-NMR, ¹³C-NMR, DEPT, COSY, HMQC, HMBC, MS, FAB-MS 등을 이용하며 각 스펙트럼 데이터 분석을 통하여 구조를 결정하며 분리된 단일물질의 구조를 규명하였다.

5. 추출물로부터의 신규물질 순도검증

활성 추출물 및 분획물로부터 분리된 신규물질에 대한 순도검증은 HPLC법으로 하여 확인한다.

6. 정원줄기세포 체외배양

6-1: 정소로부터 정원줄기세포의 고순도 분리 및 체외배양

본 실험에서 사용된 정원줄기세포는 생후 6-7일령의 수컷 생쥐로부터 적출한 정소로부터 회수하였다. 정원줄기세포를 포함하는 세포군을 회수하기 위하여 정소의 백막을 제거한 후 0.25% 트립신(Invitrogen)과 DNaseⅠ 7 mg/ml(Sigma)을 2 : 1 비율로 혼합하여 37℃ 세포 배양기에서 3분간 처리하였다. 이후 물리적인 방법으로 세포를 분리하였고 세포 부유액에 10% FBS(fetal bovine serum; Hyclone)를 첨가하여 효소작용을 중지시켰다. 이 후 나일론 메쉬(pore size, 40 μm; Falcon)를 사용하여 정원줄기세포 외의 조직 등을 제거한 후 30% 퍼콜을 사용하여 정원줄기세포의 순수도를 증진시켰다. 퍼콜을 완전히 제거하기 위해 PBS-S로 2회 세척 과정을 거친 후 4℃에서 15분 동안 CD90.2(Thy-1) 마이크로 비드를 처리하였다. 항-Thy-1-항체(Miltenyi Biotec)가 피복된 마그네틱 마이크로비드를 사용하여 MACS(Magnetic Activated Cell Sorting) 기법으로 최종적으로 정소세포로부터 순수도가 증진된 정원줄기세포군을 회수하였다.

정원줄기세포의 배양에 앞서 0.1% 젤라틴 처리된 24 웰 배양접시(Falcon)에 STO(SIM mouse embryo-derived thioguanine and ouabain resistant) 공배양세포를 준비하였다. 이후 STO 공배양세포가 피복된 상기 배양접시에 배양접시 당 고순도로 분리된 25×10 개의 정원줄기세포를 주입 후 정원줄기세포의 필수 성장인자로서 10 ng/ml 농도의 GNDF(glial-derived neurotrophic factor, R & D Systems)가 첨가된 무혈청 배양액을 이용하여 체외 배양하였다(37℃, 5% CO₂ 세포배양기). 배양과정중 배양액은 2-3일 간격으로 교체해 주며, 7일간의 배양 후 0.25% 트립신의 처리로 세포를 회수하여 계대 배양을 실시하는 방법으로 정원줄기세포를 대량 확보하였다.

7. 천연식물추출물의 정원줄기세포 활성에 미치는 유용성 탐색

정원줄기세포의 배양을 위한 기본조건(대조군)으로서 필수 성장인자인 GDNF (10 ng/ml)가 첨가된 무혈청배지와 STO 공배양세포가 피복된 24웰 플레이트를 사용하고 각각의 식물추출물/분획물/단일물질을 농도별(0.1, 1, 10 ㎍/ml)로 첨가하여 세포증식 효과를 조사하였다. 각각의 처리별로 7일간 체외배양한 후 0.25% 트립신-EDTA 처리와 미세피펫을 사용한 물리적인 방법을 통해 정원줄기세포를 회수하고, 각 처리군 및 대조군으로 부터 회수된 정원줄기세포의 계수를 통하여 증식률을 비교, 분석하였다.

8. 정원줄기세포의 체내 활성 및 기능성 테스트

Brinster 연구팀은 생쥐 정소세포의 이식기법을 개발하여 생쥐의 정소에 정원줄기세포가 존재함을 실증함으로서 정원줄기세포의 기능적 특성을 직접적으로 연구할 수 있는 전기가 마련되었다(Proc Natl Acad Sci, 22; 91(24): 11303-11307, 1994). 이후 정소세포 및 정원줄기세포 이식기법은 정원줄기세포의 체내 활성 및 기능성검증을 위한 필수적이고 가장 핵심적인 기술로 사용되고 있다. 정원줄기세포이식기법은 공여동물(donor)의 정소에서 줄기세포를 회수하여 체외에서 적절히 처리한 후 수여동물(recipient)의 정소에 이식하여 공여 줄기세포와 유전적 형질이 동일한 생식세포인 정자를 생산할 수 있는 획기적인 기술이다.

정원줄기세포의 수여동물 정소의 세정관내로 이식과정은 공여세포를 수여동물 정소의 세정관 내에 이식 후 이식된 공여세포들의 생존율을 높이기 위하여 수여동물의 세정관 내에 존재하는 내생의 생식세포를 제거하는 것은 수여동물의 준비에서 필수적으로 선행되어야하는 과정이다. 효율적인 수여동물 준비를 위하여 생후 4-6주령 수컷 생쥐에 부설판(40mg/㎏)을 복강 주사하여 정소 내 내생의 생식세포들을 제거하고 부설판 처리 6주 후에 공여정원줄기세포를 이식하였다. 공여정원줄기세포를 수여동물의 정소에 이식하기 전에 트립판 블루가 첨가된 배양액으로 희석하여 이식 전까지 4℃에 보관하였다. 준비된 수여동물을 대상으로 외과적인 수술법과 세포미세주입 기법을 이용하여 수여동물 정소 세정관내로 세포부유액을 주입하는 방법으로 공여세포를 이식하였다. 수여동물 정소 내 80% 이상의 세정관이 세포 부유액으로 채워졌을 경우 정상적인 이식이 이루어진 것으로 간주하였다. 공여세포 이식 2-3개월 후 수여동물로부터 정소를 회수하고 현미경적 관찰을 통하여 세정관 내에 공여세포에서 유래된 생식세포군(germ cell colony)의 형성 양상을 분석하고 개수하였다(도 3).

단일 추출물의 실험처리(1차)

Group	소재	추출방법	브릭스(ºBx)
A	상심자	열수	2.2
B	구기자	열수	2.0
C	산약	열수	2.0
D	산사자	열수	2.2
E	토사자	열수	1.8
F	파극	열수	2.0
G	대조군

◆투여수준: 마우스 체중 30g 기준시 0.03% (성인남자 60 kg체중의 0.03%는 18 g)

◆투여농도: 5 g/100 mL 온수증류수 (50 mg/1 mL, 마우스당 0.2 mL로 매일 10 mg

을 7주동안 경구투여함)

단일 추출물의 실험처리(2차)

Group	소재	추출방법	브릭스(ºBx)
A	돌나물	열수	6.4
B	쇠비름(마치현)	열수	3.2
C	속새(목적)	열수	1.9
D	구절초(선모초)	열수	4.5
E	비자	열수	1.3
F	홍삼	Puffinged	4.0
G	대조군

◆투여수준과 투여농도는 표 1과 동일

생식능 조성물의 마우스 실험처리(3차)

Group	소재 구성	구성비	추출 방법	브릭스 (ºBx)	비고
A	돌나물:상심자:산약:복분자	50:30:10:10	열수	4.0	소재의 조성물 (마우스)
B	쇠비름:구기자:산수유:질려자	50:30:10:10	열수	2.4
C	속새:산약:토사자:선모	50:30:10:10	열수	2.0
D	구절초:산사자:피극:구자	50:30:10:10	열수	3.5
E	비자:토사자:상심자:음양곽	50:30:10:10	열수	1.7
F	홍삼(Puffinged)	100	-	4.0
G	대조군	-	-	-

◆투여수준: 마우스 체중 30 g 기준시 0.03% (성인남자 60 kg 체중의 0.03%는 18 g)

◆투여농도: 5 g/100 mL 온수증류수 (50 mg/1 mL, 마우스당 0.2 mL로 매일 10 mg

을 7주 동안 경구투여함)

생식능 조성물의 흰쥐 실험처리(4차)

Group	소재 구성	구성비	추출 방법	브릭스 (ºBx)	비고
A	돌나물:상심자:산약:복분자	50:30:10:10	열수	4.0	소재의 조성물 (흰쥐)
B	쇠비름:구기자:산수유:질려자	50:30:10:10	열수	2.4
C	속새:산약:토사자:선모	50:30:10:10	열수	2.0
D	구절초:산사자:피극:구자	50:30:10:10	열수	3.5
E	비자:토사자:상심자:음양곽	50:30:10:10	열수	1.7
F	홍삼(Puffinged)	100	-	4.0
G	대조군	-	-	-

◆투여수준: 흰쥐체중 300 g 기준시 0.3% (성인남자 60 kg 체중의 0.3%는 180 g)

◆투여농도: 5 g/100 mL 온수증류수 (50 mg/1 mL, 흰쥐당 2.0 mL로 매일 100 mg을

7주 동안 경구투여함)

실험결과

1. 성분정량

쇠비름, 속새, 구절초, 비자의 9종(gallic acid, chlorogenic acid, esculetin, p-coumaric acid, luteolin, quercetin, cinnamic acid, kaemperol, amentoflavon)에 대한 성분함량을 HPLC 시스템(Jasco, 일본)을 이용하여 정량하였다.

쇠비름, 속새, 구절초, 비자의 물 및 주정추출물의 플라보노이드 함량 (단위: ppm)

소재 (추출물)	갈릭산	클로로제닉산	에스큘레틴	쿼마릭산	루테올린	쿼르세틴	시네믹산	켐페롤	어멘토플라본
비자(물)	1716	-	-	-	148	-	-	-	190
마치현(물)	198	-	-	62	222	-	-	-	-
섬모초(물)	-	42	1070	20	248	-	-	-	-
목적(물)	-	-	-	-	486	832	10	524	276
돌나물(물)	-	296	-	1298	444	720	-	470	236
비자(주정)	808	-	-	52	-	-	-	-	131
마치현(주정)	NA1)
섬모초(주정)	-	1826	1846	589	-	-	-	-	-
목적(주정)	-	-	757	1347	73	-	-	-	-

¹⁾Not analyzed

에탄올추출 CA 생약시료

분양번호	품명(한자명)	라틴 생약명	함량(mg)*
CA01-052	목적(木賊)	Equiseti Herba	22.61±0.12
CA01-063	비자(=배자, 榧子)	Torreyae Semen	21.86±0.13
CA01-075	백질려(白藜, 藜子)	Tribuli Semen	21.83±0.21
CA02-057	선모(仙茅)	Curculiginis Rhizoma	21.80±0.14
CA04-004	구기자(枸杞子, 北)	Lycii Fructus	19.69±0.22
CA04-023	산약(山藥, 植)	Dioscoreae Rhizoma	23.20±0.15
CA04-027	상심자(桑甚子)	Mori Fructus	33.50±0.22

*함량(Mean±SD), 추출용매(ethanol 95.0∼95.5 v/v%)

물추출 CW 생약시료*

분양번호	품명(한자명)	라틴생약명	함량(mg)**
CW01-024	구기자(枸杞子, 土)	Lycii Fructus	21.30±0.09
CW01-066	목적(木賊)	Equiseti Herba	21.03±0.07
CW01-090	비자(=배자, 榧子)	Torreyae Semen	22.01±0.16
CW02-048	산사(山査, 土)	Crataegi Fructus	22.78±0.18
CW02-089	음양곽(淫羊藿)	Epimedii Herba	20.28±0.16
CW02-100	토사자(兎絲子, 生)	Cuscutae Semen crudus	21.51±0.14
CW03-015	마치현(馬齒현)	Portulacae Herba	22.04±0.04
CW03-019	백질려(白藜, 藜子)	Tribuli Semen	23.98±0.24
CW04-011	산약(山藥, 植)	Dioscoreae Rhizoma	22.64±0.25
CW04-016	선모(仙茅)	Curculiginis Rhizoma	23.73±0.13

*전통적인 생약추출방법(약탕기)으로 추출한 후 최대한 여과하여 동결건조시켰다.

**함량(Mean±SD),

2. 동물실험

2-1. 1차 마우스실험

상심자, 구기자, 산약, 산사자, 토사자, 파극의 열수추출물에 대한 실험결과, 성호르몬 중 테스토스테론(T2) 농도를 제외한 LH, FSH 농도 및 정자활력은 차이가 없었다. 혈중 T2 농도는 대조군 보다 상기 소재 투여군에서 통계적으로 유의적으로 높았고, 정자농도는 구기자, 산약, 산사자 투여군이 대조군 보다 통계적으로 낮았다(p<0.05).

생식능 소재를 7주 동안 마우스에게 급여했을 때 총 증체량, 식이섭취량에 미치는 영향

Group	개시체중 (g)	종료체중 (g)	총증체량 (g)	식이섭취량(g/day)
A(상심자)	30.48±1.39	37.58±2.29	7.66±1.65b	4.82±0.29ab
B(구기자)	30.26±1.52	40.03±2.78	9.75±3.18ab	5.39±0.29a
C(산 약)	30.10±1.63	37.65±3.24	7.56±2.70b	4.76±0.22ab
D(산사자)	30.60±1.64	39.21±2.29	8.87±1.91ab	4.95±0.30ab
E(토사자)	30.04±1.70	38.70±2.59	8.64±1.13ab	4.72±0.62ab
F(파 극)	30.43±1.78	37.20±3.18	6.74±2.15c	4.51±0.14b
G(대조군)	30.71±1.24	42.03±2.04	10.39±2.55a	5.34±0.85a

Values are mean±SD(n=10).

생식능 소재가 마우스의 장기무게와 유영지구력에 미치는 영향

Group	정소무게 (g)		간무게 (g)	유영지구력 (sec)
	좌측(Lt.)	우측(Rt.)
A(상심자)	0.116±0.02ns	0.122±0.01ns	2.01±0.29ns	16644±3043ab
B(구기자)	0.124±0.02	0.124±0.01	2.02±0.29	14725±2512b
C(산 약)	0.114±0.02	0.12±0.02	2.10±0.35	19975±2043a
D(산사자)	0.115±0.03	0.123±0.02	1.76±0.33	17943±126.6ab
E(토사자)	0.119±0.02	0.12±0.03	2.08±0.49	14927±519.0b
F(파 극)	0.110±0.01	0.109±0.01	1.99±0.50	14307±1529b
G(대조군)	0.121±0.01	0.125±0.02	1.98±0.23	15014±1278b

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05

^ns not significant

생식능 소재의 급여가 마우스의 혈중 성호르몬농도 및 정자활력과 정자농도에 미치는 영향

Group	LH (ng/mL)	FSH (ng/mL)	T2 (ng/mL)	정자활력 (%)	정자농도 (millions/mL)
A(상심자)	2.65±0.51ab	2.12±0.98ns	2.67±0.91ab	78.2±2.24ns	319.8±26.6a
B(구기자)	2.95±0.60a	1.79±0.54	2.61±0.63ab	78.0±2.27	245.6±40.6b
C(산 약)	2.44±0.58ab	1.54±0.61	4.22±2.41a	77.9±2.52	255.0±35.6b
D(산사자)	2.30±0.18b	1.44±0.28	3.92±1.58a	80.2±1.65	228.1±33.6b
E(토사자)	2.62±0.14ab	1.80±0.24	3.97±1.23a	79.8±3.90	308.5±23.7a
F(파 극)	2.78±0.37ab	1.68±0.75	3.17±0.98ab	80.1±3.54	300.5±18.9a
G(대조군)	2.15±0.33b	1.47±1.02	2.04±0.83c	79.5±6.10	296.6±36.0a

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05. ^ns not significant

LH: 황체자극호르몬(luteinizing hormone), FSH: 난포자극호르몬(follicl stimulating hormone), T2: 남성호르몬(testosterone)

2-2. 2차 마우스실험

쇠비름, 속새, 구절초, 비자 및 돌나물의 열수추출물에 대한 실험결과, 성호르몬중 테스토스테론(T2) 농도를 제외한 LH, FSH 농도 및 정자활력은 차이가 없었다. 혈중 T2 농도는 대조군 보다 상기 소재투여군에서 통계적으로 유의적으로 높았고, 정자농도는 두 대조군(홍삼, 일반대조군) 보다 돌나물, 쇠비름, 속새, 구절초 및 비자투여군이 통계적으로 낮았다(p<0.05).

생식능 소재를 7주 동안 마우스에게 급여했을 때 총 증체량, 식이섭취량 및 식이효율에 미치는 영향

Group	개시체중 (g)	종료체중 (g)	총증체량 (g)	식이섭취량(g/day)	식이효율 (FER)
A(돌나물)	30.55±1.39	40.04±3.67	8.42±2.70ab	5.08±0.37ab	0.037±0.028ns
B(쇠비름)	30.33±1.11	38.21±1.82	7.73±0.96b	4.70±0.34b	0.032±0.031
C(속 새)	30.53±1.58	39.70±2.04	8.49±2.13ab	5.05±0.62ab	0.029±0.039
D(구절초)	30.59±1.39	40.80±1.74	9.60±1.38a	5.45±0.81a	0.040±0.036
E(비 자)	30.02±1.34	38.23±3.71	8.09±3.48b	4.57±0.50b	0.042±0.035
F(홍 삼)	30.11±0.67	39.28±3.80	8.90±2.23ab	4.83±0.40ab	0.036±0.037
G(대조군)	30.71±1.30	42.03±2.04	10.4±2.55a	5.34±0.85a	0.041±0.034

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05.

^ns not significant

생식능 소재가 마우스의 장기무게와 유영지구력에 미치는 영향

Group	정소무게 (g)		간무게 (g)	유영지구력 (sec)
	좌측(Lt.)	우측(Rt.)
A(돌나물)	0.122±0.004ns	0.124±0.005ns	2.013±0.29ns	10578±2086b
B(쇠비름)	0.128±0.018	0.128±0.030	2.020±0.29	7001±407.0c
C(속 새)	0.116±0.017	0.118±0.015	2.096±0.35	10607±2039b
D(구절초)	0.116±0.011	0.126±0.015	1.756±0.33	10990±2046b
E(비 자)	0.106±0.015	0.112±0.018	2.077±0.49	13328±2021ab
F(홍 삼)	0.126±0.015	0.126±0.011	1.992±0.50	10930±885.0b
G(대조군)	0.121±0.01	0.125±0.02	1.980±0.23	15014±1278a

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05

^ns not significant

생식능 소재가 마우스의 혈중 성호르몬농도 및 정자활력과 정자농도에 미치는 영향

Group	LH (ng/mL)	FSH (ng/mL)	T2 (ng/mL)	정자활력 (%)	정자농도 (millions/mL)
A(돌나물)	3.10±1.13ns	2.02±1.17ns	3.86±2.10ab	77.8±2.30ns	206.2±20.8b
B(쇠비름)	2.12±0.53	1.70±0.89	2.37±1.04c	76.4±2.23	220.2±22.4b
C(속 새)	2.06±0.28	1.62±1.22	3.36±1.37b	78.8±1.44	206.1±17.9b
D(구절초)	2.40±0.45	1.36±0.38	3.53±1.87b	80.8±2.66	212.5±24.7b
E(비 자)	2.23±0.46	1.44±0.85	4.22±2.08ab	76.6±3.00	206.4±24.4b
F(홍 삼)	3.40±1.25	1.89±0.45	5.18±1.73a	74.9±1.29	311.4±38.4a
G(대조군)	2.15±0.33	1.47±1.02	2.04±0.83c	75.4±2.24	296.6±36.0a

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05.

^ns not significant

LH: 황체자극호르몬(luteinizing hormone),

FSH: 난포자극호르몬(follicl stimulating hormone),

T2: 남성호르몬(testosterone)

2-3. 3차 마우스실험

정자활력(sperm motility)은 정자의 생존성에 대한 좋은 지표가 될 수 있고, 정액품질의 평가인자에는 정자농도(sperm count), 기형정자율, 생사정자비율, 정액량, pH, 정자의 초기활력 및 정자의 집단운동 등이 있다. 상기 몇 가지 소재 조성추출물에 대한 실험결과 성호르몬중 LH, FSH 농도는 일반대조군에 비해 다소 높았고, 혈중 T2 농도는 두 대조군(홍삼, 일반대조군) 보다 조성물 투여군에서 통계적으로 높았고(p<0.05), 정자활력 역시 조성물 투여군이 다소 높았다. 한편, 정자농도는 돌나물:상심자:산약:복분자 조성물, 쇠비름:구기자:산수유:질려자 조성물 및 비자:토사자:상심자:음양곽 조성물 투여군이 단일 소재투여군 보다 월등하게 높은 것으로 나타났다.

생식능 조성물 식이를 7주 동안 마우스에게 급여했을 때 총 증체량, 식이섭취량 및 식이효율에 미치는 영향

Group*	개시체중 (g)	종료체중 (g)	총증체량 (g)	식이섭취량(g/day)	식이효율 (FER)
A(돌+상)	38.08±3.22	44.18±3.66	4.70±0.16	6.32±0.20	0.026±0.024
B(쇠+구)	38.46±4.42	42.19±6.27	4.41±0.13	5.73±0.12	0.027±0.021
C(속+산)	38.50±4.25	42.87±4.34	2.49±0.18	5.58±0.21	0.017±0.029
D(구+산)	38.07±5.69	41.17±6.01	3.40±0.11	5.87±0.07	0.022±0.018
E(비+토)	38.04±3.70	42.70±5.92	3.34±0.13	6.27±0.62	0.018±0.018
F(홍 삼)	38.43±5.78	42.72±8.31	3.34±0.15	6.16±0.14	0.019±0.026
G(대조군)	38.41±3.24	42.74±3.21	3.58±0.18	5.92±0.25	0.022±0.031

Values are mean±SD(n=10). * 표 3 참조

Significant at p<0.05.

^ns not significant

생식능 조성물 식이가 마우스의 혈중 성호르몬농도 및 정자활력과 정자농도에 미치는 영향

Group	LH (ng/mL)	FSH (ng/mL)	T2 (ng/mL)	정자활력 (%)	정자농도 (millions/mL)
A(돌+상)	2.88±0.82ns	1.62±0.65ns	4.86±1.85ab	86.2±7.00ns	371.6±31.3a
B(쇠+구)	2.54±0.58	1.59±0.85	4.50±3.69ab	90.7±2.40	305.2±34.0ab
C(속+산)	2.25±0.43	1.58±0.34	5.72±2.60a	92.8±1.75	274.2±15.1bc
D(구+산)	2.35±0.32	1.40±0.87	4.03±1.54b	92.1±1.99	257.9±29.8bc
E(비+토)	2.66±0.80	1.61±0.58	3.88±1.09bc	84.2±3.93	378.0±27.6a
F(홍 삼)	2.76±0.89	1.76±0.74	4.58±1.96ab	91.8±2.72	288.9±29.8bc
G(대조군)	2.23±0.46	1.42±0.92	3.31±0.86bc	85.4±2.17	194.8±23.7c

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05.

^ns not significant

LH: 황체자극호르몬(luteinizing hormone),

FSH: 난포자극호르몬(follicl stimulating hormone),

T2: 남성호르몬(testosterone)

2-4. 4차 흰쥐실험

상기 3차 실험조성물에 대한 흰쥐의 CASA(computer-aided sperm analysis) 분석치는 현미경상의 배율과 CASA에 내장된 분석 프로그램상 분석배율의 불일치로 정확한 분석이 어려워서, 유영지구력 수행결과만 분석하였다.

생식능 조성물식이를 7주 동안 흰쥐에게 급여했을 때 총 증체량, 식이섭취량 및 식이효율에 미치는 영향

Group	개시체중 (g)	종료체중 (g)	일당증체량 (g/day)	식이섭취량(g/day)	식이효율 (FER)
A(돌+상)	284±10.0	443±34.9	3.27±0.76ns	22.98±1.33c	0.15±0.021ns
B(쇠+구)	284±13.1	445±35.4	3.31±0.83	23.53±1.17bc	0.14±0.023
C(속+산)	284±11.3	444±24.7	3.26±0.78	23.29±1.23bc	0.14±0.024
D(구+산)	284±13.4	458±26.5	3.56±0.77	24.03±0.73ab	0.15±0.021
E(비+토)	284±13.1	462±34.7	3.63±0.75	27.40±1.81a	0.15±0.019
F(홍 삼)	284±13.4	445±24.0	3.28±0.67	23.17±0.78bc	0.14±0.018
G(대조군)	284±10.2	462±35.0	3.64±0.86	24.80±1.17ab	0.15±0.014

Values are mean±SD(n=10). *표 3참조

Significant at p<0.05.

^ns not significant

생식능 조성물식이가 흰쥐의 장기무게에 미치는 영향

Group	간	신장	비장	정소
A(돌+상)	14.23±1.95ab	2.75±0.31ab	0.90±0.17ns	3.46±0.17a
B(쇠+구)	12.92±1.48bc	2.95±0.35a	0.77±0.21	3.55±0.31a
C(속+산)	14.28±1.53ab	2.95±0.33a	0.82±0.20	3.34±0.29ab
D(구+산)	14.64±0.91ab	3.08±0.34a	0.95±0.17	3.68±0.45a
E(비+토)	14.04±1.75ab	2.60±0.39b	0.78±0.13	2.92±0.48b
F(홍 삼)	15.13±1.75a	2.91±0.35a	0.85±0.21	3.58±0.21a
G(대조군)	13.58±0.23bc	2.99±0.29a	0.83±0.20	3.48±0.11a

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05.

^ns not significant

생식능 조성물 식이가 흰쥐의 유영지구력과 젖산농도에 미치는 영향

Name	유영지구력(sec)	젖산 (mg/dL)	Inorganic P (mg/dL)	LDH (U/L)	ALP (U/L)
A(돌+상)	7724.8± 1430.9ns	134.63± 34.79ns	14.22± 1.97ab	824.17± 355.7ns	164.50± 25.51ns
B(쇠+구)	8589.9± 2656.5	128.85± 23.78	16.43± 1.64a	942.67± 202.7	156.50± 27.49
C(속+산)	8463.9± 2279.4	176.60± 28.25	15.55± 4.44ab	800.67± 372.1	159.33± 23.70
D(구+산)	7831.0± 2016.2	184.95± 22.80	13.52± 2.78ab	844.20± 376.4	180.80± 53.95
E(비+토)	11481.0± 3218.4	149.03± 40.23	16.96± 2.22a	735.20± 325.0	195.40± 37.56
F(홍 삼)	7876.2± 6280.1	136.25± 23.21	12.34± 1.60b	917.80± 391.7	164.80± 22.60
G(대조군)	8823.8± 2958.0	135.38± 28.25	16.33± 2.00a	712.17± 257.1	174.33± 43.24

Values are mean±SD(n=10).

Significant at p<0.05.

^ns not significant

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 쇠비름(Portulaca oleracea. L.), 구기자(Lycium chinense. Mill.), 산수유(Cornus officinalis) 및 질려자(Tribulus terrestris L.) 추출물을 50:30:10:10의 중량비율로 포함하는 남성의 생식기능 개선용 조성물.
   
2. 제 1 항에 있어서, 상기 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자 추출물은 물, 메탄올, 에탄올 또는 이의 조합을 쇠비름, 구기자, 산수유 및 질려자에 처리하여 수득한 것을 특징으로 하는 조성물.
   
3. 삭제
4. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 정액 내 정자 농도를 증가시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
   
5. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 정자 활력을 증가시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
   
6. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 성호르몬 분비를 증가시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
   
7. 제 6 항에 있어서, 상기 성호르몬은 테스토스테론, 황체형성호르몬(luteinizing hormone) 또는 난포자극호르몬(follicle-stimulating hormone)인 것을 특징으로 하는 조성물.

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