KR101586466B1 - 면역보조제 및 이를 포함하는 백신 조성물 - Google Patents

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KR101586466B1 KR1020140195268A KR20140195268A KR101586466B1 KR 101586466 B1 KR101586466 B1 KR 101586466B1 KR 1020140195268 A KR1020140195268 A KR 1020140195268A KR 20140195268 A KR20140195268 A KR 20140195268A KR 101586466 B1 KR101586466 B1 KR 101586466B1
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Abstract

톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist)와 히알루론산의 복합체 및 알루미늄염을 포함하는 면역보조제, 이를 포함하는 백신 조성물, 및 상기 백신 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

면역보조제 및 이를 포함하는 백신 조성물{IMMUNOADJUVANT AND VACCINE COMPOSITION INCLUDING THE SAME}
본원은 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist)와 히알루론산의 복합체 및 알루미늄염을 포함하는 면역보조제, 상기 면역보조제를 포함하는 백신 조성물, 및 상기 백신 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
종래 사용되고 있는 면역보조제인 알루미늄염(aluminum salt)은 항체 반응에 기여하는 체액성 면역반응의 향상을 유도하는데, 이러한 반응은 우선적으로 바이러스 표면 당 단백질에 대해 특이적이며, 돌연변이로 인한 항원 변이가 빈번하다. 따라서 빈번한 항원 변화로 인한 새로운 서브타입의 바이러스에 대해 보호되지 않는 것이 백신의 명백한 단점이다. 따라서, 바이러스에 대한 T 세포 반응이 필요하며, 이는 돌연변이에 대한 면역성을 제공하기에 용이하다. 그러므로 알루미늄염이 세포성 면역반응을 유도하는 면역보조제로 알려진 MPLA(Monophosphoryl Lipid A)와 결합한 체계가 연구되었다(The journal of immunology, 183, 10 (2009), Proc Natl Acad Sci USA, 10, 108 (2011)).
이 두 면역보조제의 결합은 기존에 B 형 간염 백신으로 시판되는 Engerix B에 비해 효과가 뛰어나지만 MPLA는 다량의 소수성 잔기들에 의하여 물에 녹지 않는다는 특성을 보이며 이를 해결하기 위해 초음파 분해에 의해 물상에서 재현탁시키는 방안이 개발되었다(영국 특허 번호 제10-0365373호).
그러나, 초음파 분해는 임상에서 바로 적용하기에는 제제화할 때 번거로운 한계를 가지고 있다. 이에, MPLA를 물에 녹여 분산시키기 위해 초음파 분해법이 아닌 다른 대체방안이 필요하다.
본원은, 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist)와 히알루론산의 복합체 및 알루미늄염을 포함하는, 면역보조제, 이를 포함하는 백신 조성물, 및 상기 백신 조성물의 제조 방법을 제공하고자 한다.
그러나, 본원이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 기술한 과제로 제한되지 않으며, 기술되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본원의 제 1 측면은, 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist)와 히알루론산의 복합체 및 알루미늄염을 포함하는 면역보조제를 제공한다.
본원의 제 2 측면은, 상기 본원의 제 1 측면에 따른 면역보조제; 및 항원을 포함하는, 백신 조성물을 제공한다.
본원의 제 3 측면은, 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist) 함유 용액 및 히알루론산 함유 용액을 혼합한 후 동결건조하여 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체를 제조하고, 및 항원 함유 용액과 알루미늄염 함유 용액을 혼합한 후 상기 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체를 첨가하는 것을 포함하는, 백신 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 면역보조제는 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist)와 히알루론산의 복합체, 및 알루미늄염을 포함하는 것으로, 항원 전달 체계로 저장고 작용(depot effect)을 하여 표적세포에 항원을 효과적으로 전달할 수 있는 알루미늄염과 면역반응을 활성화시킬 수 있는 MPLA(Monophosphoryl lipid A)를 함께 사용함으로써 체액성 면역반응뿐만 아니라 세포성 면역반응을 더욱 향상시킬 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 면역보조제에 있어서 난용성인 톨-유사 수용체 아고니스트인 MPLA를 히알루론산과 결합시켜 복합체를 형성함으로써 물에 용이하게 용해되는 특성으로 바꾸어 주어, MPLA와 알루미늄염이 함께 물에서 혼합될 수 있도록 할 수 있다.
도 1은, 본원의 일 실시예에 따른 백신 조성물을 (a) 1 회 및 (b) 2 회 접종한 후의 효소면역측정법 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는, 본원의 일 실시예에 따른 조성물의 접종 후 (a) IgG1 및 (b) IgG2c의 효소면역측정법 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3a 및 도 3b는, 본원의 일 실시예에 따른 조성물의 접종 후 Th-유도 사이토카인인 (a) 인터페론-감마(IFN-γ) 및 (b) 인터류킨-4(IL-4) 측정량을 나타낸 것이다.
도 4는, 본원의 일 실시예에 따른 조성물의 접종 후 (a) CD4 T 세포 및 (b) CD8 T 세포의 증식량을 나타낸 것이다.
도 5는, 본원의 일 실시예에 따른 조성물의 접종 후 (a) IgG, (b) IgG1, 및 (c) IgG2c의 효소면역측정법 결과를 나타낸 것이다.
도 6은, 본원의 일 실시예에 따른 조성물의 접종 후 면역보조제의 지속여부를 2 차 주입 후 (a) 3 주, (b) 4 주, (c) 5 주, 및 (d) 6 주에 측정한 결과를 나타낸 것이다.
이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 구현예 및 실시예를 상세히 설명한다.
그러나 본원은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 구현예 및 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 유사한 부분에 대해서는 유사한 도면 부호를 붙였다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부재가 다른 부재 "상에" 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 부재가 다른 부재에 접해 있는 경우뿐 아니라 두 부재 사이에 또 다른 부재가 존재하는 경우도 포함한다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "~(하는) 단계" 또는 "~의 단계"는 "~ 를 위한 단계"를 의미하지 않는다.
본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.
본원 명세서 전체에서, "A 및/또는 B"의 기재는, "A 또는 B, 또는 A 및 B"를 의미한다.
본원의 제 1 측면은, 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist)와 히알루론산의 복합체, 및 알루미늄염을 포함하는, 면역보조제를 제공한다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 알루미늄염은, 예를 들어, 양이온성 알루미늄염(alum, 알룸)을 포함할 수 있으며, 양이온성 B 형 간염 백신의 면역보조제로 널리 사용되는 것으로서, 항원 전달 체계에 저장고 작용(depot effect)을 하여 표적 세포에 항원을 효과적으로 전달할 수 있는 효과를 가진다. 이에, 백신이 항원만을 포함했을 때에 비해, 항체 관여 반응인 체액성 면역반응을 향상시킬 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 알룸(alum)은 수화 포타슘알루미늄설페이트, 황산알루미늄, 황산알루미늄칼륨, 수산화알루미늄, 인산알루미늄, 알루미늄히드록시포스페이트, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 톨-유사 수용체 아고니스트는 MPLA(Monophosphoryl lipid A), 이미퀴모드, 레시퀴모드, 플라젤린(flagellin), 시피지(CpG), 폴리아이시[poly(I:C)], 펩티드 글리칸, Pam3CSK4, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 MPLA는 그람음성균, LPS(lipopolysaccharide)에서 파생된 것으로, 세포 신호 전달 체계인 톨-유사 수용체 4(TLR4)를 통하여 신호전달을 한다. 자극된 TLR4의 신호전달은 면역반응을 활성화시키는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)의 분비를 유도하게 되며, 이 사이토카인은 T 세포와 B 세포의 증식과 분화, 활성을 자극하는 역할을 한다. 이에 따라 활성화된 T 세포는 세포독성 T 세포로 분화를 촉진시키고 인터페론-감마와 같은 사이토카인의 분비로 인해 세포성 면역반응에 관여한다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체는 수용성일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 난용성인 상기 톨-유사 수용체 아고니스트, 특히, MPLA를 히알루론산과 결합시켜 복합체를 형성함으로써, 물에 용해되도록 한다. 여기서, 히알루론산은 수분을 잘 흡수하는 특성이 있으며, 예를 들어, 자기 부피의 약 100 배 정도까지 수분을 흡수할 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 히알루론산 및 톨-유사 수용체 아고니스트는 약 1 내지 약 100 : 약 0.001 내지 약 100의 중량비로서 포함되는 것일 수 있으며, 예를 들어, 약 13.3 : 약 1의 중량비로 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 톨-유사 수용체 아고니스트, 상기 히알루론산의 복합체, 및 상기 알루미늄염은 약 1 내지 약 100 : 약 0.001 내지 약 100 : 약 0.002 내지 약 200의 중량비, 예를 들어, 약 13.3 : 약 1 : 약 2의 중량비로 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 제 2 측면은, 상기 본원의 제 1 측면에 따른 면역보조제 및 항원을 포함하는 백신 조성물을 제공한다. 본 측면에 따른 면역보조제에 대하여, 본원의 제 1 측면에 대하여 기재된 내용이 모두 적용될 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 항원은 단백질, 세포, 바이러스, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 단백질은, 예를 들어, 오버알부민, 재조합 단백질, 서브유닛(subunit), 스플릿(split) 단백질 항원을 포함할 수 있으며, 상기 세포는, 예를 들어, 수지상 세포, T 세포를 포함할 수 있고, 상기 바이러스는, 예를 들어, 인플루엔자, HBV(hepatitis B virus), HAV(hepatitis A virus), HPV(human papilloma virus)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 백신 조성물은 B 형 간염 백신일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 제 3 측면은, 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist) 함유 용액 및 히알루론산 함유 용액을 혼합한 후 동결건조하여 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체를 제조하고, 및 항원 함유 용액과 알루미늄염 함유 용액을 혼합한 후 상기 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체를 첨가하는 것을 포함하는, 백신 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 알루미늄염은, 예를 들어, 양이온성 알루미늄염(alum, 알룸)을 포함할 수 있으며, B 형 간염 백신의 면역보조제로 널리 사용되는 것으로서, 항원 전달 체계에 저장고 작용(depot effect)을 하여 표적 세포에 항원을 효과적으로 전달할 수 있다. 이에, 백신이 항원만을 포함했을 때에 비해, 항체 관여 반응인 체액성 면역반응을 향상시킬 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 알룸(alum)은 수화 포타슘알루미늄설페이트, 황산알루미늄, 황산알루미늄칼륨, 수산화알루미늄, 인산알루미늄, 알루미늄히드록시포스페이트, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 톨-유사 수용체 아고니스트는 MPLA(Monophosphoryl lipid A), 이미퀴모드, 레시퀴모드, 플라젤린(flagellin), 시피지(CpG), 폴리아이시[poly(I:C)], 펩티드 글리칸, Pam3CSK4, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 MPLA는 그람음성균, LPS(lipopolysaccharide)에서 파생된 것으로, 세포 신호 전달 체계인 톨-유사 수용체 4(TLR4)를 통하여 신호전달을 한다. 자극된 TLR4의 신호전달은 면역반응을 활성화시키는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)의 분비를 유도하게 되며, 이 사이토카인은 T 세포와 B 세포의 증식과 분화, 활성을 자극하는 역할을 한다. 이에 따라 활성화된 T 세포는 세포독성 T 세포로 분화를 촉진시키고 인터페론-감마와 같은 사이토카인의 분비로 인해 세포성 면역반응에 관여한다.
본원의 일 구현예에 있어서, 상기 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체는 수용성일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 난용성인 상기 톨-유사 수용체 아고니스트, 특히, MPLA를 히알루론산과 결합시켜 복합체를 형성함으로써, 물에 용해되도록 한다.
이하, 본원의 실시예를 통하여 보다 구체적으로 설명하며, 본 실시예에 의하여 본원의 범위가 제한되는 것은 아니다.
[ 실시예 ]
실시예 1: MPLA/히알루론산(MPLA/HA) 복합체의 제조
MPLA/히알루론산(MPLA/HA) 복합체를 제조하기 위해, MPLA(monophosphoryl Lipid A)를 4 mg/mL의 농도로 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 용해시키고, 히알루론산을 133 ㎍/mL로 증류수(distilled water)에 용해시켰다. 133 ㎍/mL의 히알루론산 용액에 4 mg/mL의 MPLA을 2.5 μL 분취량으로 첨가하여 강하게 교반한 후, 동결건조하였다. 수득된 분말을 5 mL 증류수에 용해시켜 3 일 동안 투석한 후, 동결건조하였다.
실시예 2: 백신 조성물의 제조
동결건조되어 있는 MPLA 및 실시예 1에서와 같이 제조된 MPLA/HA 복합체에 각각 PBS(Phosphate Buffered Saline)를 첨가하여 볼텍싱(vortexing)하여 용해시켰다. 그런 다음, 524 ㎍/mL의 HBsAg(항원)을 50 μL에 0.5 ㎍이 되도록 PBS에 희석시키고, 알룸(alum)으로서 20 mg/mL의 수화 포타슘알루미늄설페이트(이하, 알룸 또는 Alum으로 기재)를 20 ㎍이 되도록 PBS에 희석시켰다. 그런 다음, 먼저 HBsAg과 알룸을 인버팅(inverting)하며 흔들어주며 섞어주고, MPLA와 MPLA/HA 복합체는 MPLA가 50 μL에 10 ㎍이 되도록 PBS에 희석시켜 함께 혼합하였다. 각각의 실험군은 HBsAg, HBsAg와 알룸, HBsAg와 알룸/MPLA/HA 복합체를 혼합한 세가지 그룹이고 이들에 맞춰 백신을 제조하여 20 분 내지 30 분 동안 반응시킨 후, C57BL/6 마우스(암컷, 6 주령)에 주입하였다.
실시예 3: 백신 조성물의 성능 확인
실시예 2에서와 같이 제조한 백신 조성물을 C57BL/6 마우스(암컷, 6 주령)에 접종한 후, 안와채혈을 통해 얻어진 혈액 혈청을 가지고 효소면역측정법으로 분석한 결과(항체가)를 도 1에 나타냈다. 2 회 백신을 접종한 경우, 항원만을 포함하는 백신 및 현재 B 형 간염 백신 면역보조제로 사용되고 있는 알룸을 포함하는 백신에 비해 면역글로불린 G 항체가가 2,000 배 및 800 배 가량 증가함을 확인하였다(도 1). 도 1의 a는 마우스에 항원과 면역보조제를 1 회 접종하였을 때의 항체가를 보여주고 있으며, 도 1의 b는 14 일 간격으로 2 회 접종하였을 때의 항체가를 보여주고 있다. 이는 단 1 회의 접종만으로도 백신 면역보조제로서의 효과가 나타남을 의미한다. 또한, 면역글로불린 G의 서브타입인 IgG1과 IgG2c를 확인하였을 때, Th2 면역반응을 대체로 보여주는 IgG1(도 2a)과 Th1 면역반응을 보여주는 IgG2c(도 2b)의 항체가를 도 2에서 확인해보면, 알룸 및 MPLA/HA 복합체를 포함하는 면역보조제가 접종된 마우스에게서 현저히 높은 항체가를 확인할 수 있다.
실시예 4: 백신 조성물에 의한 면역 사이토카인의 분비와 T 세포 증식 향상 확인
실시예 2에서와 같이 제조한 백신 조성물에 대하여, 알룸(alum)과 MPLA/HA 복합체가 B 형 간염 항원에 대한 T 세포 반응도 항체가와 비슷하게 향상되는지를 확인하기 위해서, 마우스로부터 지라세포(splenocyte)를 추출해 효소 면역 반점 측정법(ELISPOT, Cellular Technology Limited., USA)을 이용하여 평가하였다. 이는 단 한 개의 세포가 분비한 사이토카인도 검출해 낼 수 있는 매우 민감한 면역 측정법으로, 도 3a 및 도 3b는 Th1-유형 사이토카인인 인터페론-감마(IFN-γ)(도 3a)와 Th2-유형 사이토카인인 인터류킨-4(IL-4)(도 3b)를 확인한 결과이다. 본 실시예에 따른 백신 조성물인 HBsAg-Alum-MPLA/HA 복합체의 조합에서 가장 높은 사이토카인 분비량을 보였음을 확인할 수 있다. 사이토카인의 효과뿐만 아니라 T 세포의 활성도 실험을 진행하고자 CFSE를 이용하여 T 세포 증식도를 확인하였다. 이의 결과를 도 4에 나타냈으며, CD4 T 세포의 경우에는 본원에 따른 백신 조성물인 HBsAg-Alum-MPLA/HA 복합체가 알룸과 항원만을 포함한 기존의 백신인 HBsAg-Alum에 비해 4 배 더 많은 T 세포들이 증가하였고(도 4의 a), CD8 T 세포의 경우에는 6 배 가량 증가함(도 4의 b)을 확인할 수 있었다.
실시예 5: 낮은 농도의 HBsAg 에서 HBsAg - Alum - MPLA / HA 복합체의 면역반응 평가
항원의 농도를 0.05 ㎍/1 마리, 0.1 ㎍/1 마리, 0.25 ㎍/1 마리, 및 0.5 ㎍/1 마리로 실험을 진행하여 항원의 투여량에 의존적인지를 효소면역측정법을 이용하여 실험하고 그 결과를 도 5에 도시하였다. 이는 현재 시판되고 있는 B 형 간염 백신에서 사용하는 항원의 농도에 비해 20 배 가량 낮추어진 농도로 항원 그 자체만을 주입하였을 경우와 알룸을 면역보조제로 주입하였을 경우에는 백신으로서의 효과가 미비한 것으로 보여지나, 알룸과 MPLA/HA 복합체를 함께 주입하였을 경우에는 0.05 ㎍/1 마리까지의 낮은 농도에서도 효과가 나타남을 확인할 수 있었다. 면역글로불린 G(도 5의 a) 뿐만 아니라 서브타입인 IgG1(도 5의 b) 및 IgG2c(도 5의 c)에서도 동일한 효과를 확인하였고, 그 역시 마찬가지의 경향성을 보임을 확인하였다.
실시예 6: HBsAg - Alum - MPLA / HA 복합체의 지속력 평가
형성된 백신 면역보조제가 예방 차원에서 오랜 시간 지속되는지 여부를 확인하였다. 2 회 백신을 접종한 3 주 후에서 길게는 6 주 후까지 혈액 혈청을 통해서 효소면역측정법으로 확인한 결과, 그 수치는 약간씩 떨어지나 HBsAg-Alum-MPLA/HA 복합체를 접종한 마우스에게서는 여전히 큰 수치로 면역글로불린 G의 효과가 지속됨을 확인할 수 있었다. 도 6은, 본 실시예에 따른 조성물의 접종 후 면역보조제의 지속여부를 2 차 주입 후 (a) 3 주, (b) 4 주, (c) 5 주, 및 (d) 6 주에 측정한 결과를 나타낸 것이다. 접종을 받은 후 오랜 시간이 지나도 항체가가 지속됨으로 인하여 간염에 방어적 태세를 취할 수 있으므로 백신으로서의 효과가 뛰어난 것으로 확인된다.
전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위, 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (11)

  1. 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist)와 히알루론산의 복합체; 및 알루미늄염을 포함하는, 면역보조제로서,
    상기 톨-유사 수용체 아고니스트는 MPLA(Monophosphoryl lipid A)를 포함하는 것이고,
    상기 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체는 톨-유사 수용체 아고니스트 함유 용액과 상기 히알루론산 함유 용액을 혼합한 후 동결건조하는 방법에 의해 제조됨으로써 수용성을 나타내는 것인,
    면역보조제.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체에서, 상기 히알루론산 및 톨-유사 수용체 아고니스트는 1 내지 100 : 0.001 내지 100의 중량비의 중량비로 포함되는 것인, 면역보조제.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 톨-유사 수용체 아고니스트, 히알루론산의 복합체 및 상기 알루미늄염은 1 내지 100 : 0.001 내지 100 : 0.002 내지 200의 중량비로서 포함되는 것인, 면역보조제.
  6. 제 1 항, 제 4 항, 및 제 5 항 중 어느 한 항에 따른, 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체 및 알루미늄염을 포함하는 면역보조제; 및 항원을 포함하며,
    상기 톨-유사 수용체 아고니스트는 MPLA(Monophosphoryl lipid A)를 포함하는 것인,
    백신 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 항원은 단백질, 세포, 바이러스, 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함하는 것인, 백신 조성물.
  8. 제 6 항에 있어서,
    상기 백신 조성물은 B 형 간염 백신인 것인, 백신 조성물.
  9. 톨-유사 수용체 아고니스트(toll-like receptor agonist) 함유 용액 및 히알루론산 함유 용액을 혼합한 후 동결건조하여 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 수용성 복합체를 제조하고, 및
    항원 함유 용액과 알루미늄염 함유 용액을 혼합한 후 상기 톨-유사 수용체 아고니스트와 히알루론산의 복합체를 첨가하는 것
    을 포함하며,
    상기 톨-유사 수용체 아고니스트는 MPLA(Monophosphoryl lipid A)를 포함하는 것인,
    백신 조성물의 제조 방법.
  10. 삭제
  11. 삭제
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