KR101553032B1

KR101553032B1 - 니아졸을 함유하는 피부 미백용 조성물

Info

Publication number: KR101553032B1
Application number: KR1020140005232A
Authority: KR
Inventors: 구창섭; 김민진; 장동일
Original assignee: 주식회사 콧데
Priority date: 2014-01-15
Filing date: 2014-01-15
Publication date: 2015-09-16
Also published as: KR20150085564A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 즉 니아졸을 활성성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 조성물은 멜라닌의 생성을 저해하여 우수한 피부 미백 효과를 나타내며, 세포 독성 또한 없으므로, 의약품, 피부 외용제 또는 화장료 조성물로서 사용 가능하다.
[화학식 1]

Description

니아졸을 함유하는 피부 미백용 조성물{Skin whitening composition containing nyasol}

본 발명은 피부 미백용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 니아졸을 활성성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드, 빌리루빈 (bilirubin) 등의 인체 내외의 색소 함유 유무와 같은 여러 요인에 의해 결정된다. 그 중에서도 멜라노사이트에서 형성되는 멜라닌이라는 색소가 피부색 형성에 가장 중요한 요소로 받아들여지고 있다. 멜라닌은 티로신이 티로시나아제에 의해 3,4-디하이드록시페닐알라닌, 도파퀴논, 류코도파크롬, 도파크롬, 5,6-디하이드록시인돌 및 인돌-5,6-퀴논을 거쳐 최종적으로 멜라닌으로 변환되는 산화 과정의 최종 생성물이다. 그러나 멜라닌 생합성은 매우 복잡한 과정으로 아직까지 멜라닌 합성을 유도하는 정확한 메커니즘이 무엇인지에 대해서는 자세히 밝혀지지 않고 있다. 멜라닌은 유해한 자외선에 대한 자연적 방어 역할을 제공하지만 멜라닌이 과잉생산되는 경우 기미, 주근깨 등의 과다 색소침착을 유발한다.

피부의 색소 침착을 억제하여 미백 효과를 나타내는 알부틴, 데옥시알부틴, 옥타데센다이온산, 공액 리놀레산, 니아신아미드, 하이드로퀴논, 코지산, 글루타치온, 아젤라인산 등의 유효성분들이 알려져 있다. 상기와 같은 물질들은 티로시나아제 저해 활성을 갖는 것으로 알려져 있고, 실제로 미백 제품들에 사용되어 왔다. 그러나 상기 유효 성분들은 불충분한 미백 효과, 피부에 대한 안전성 문제, 제형 제작의 난이성 및 안정성 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.

한편, 대한민국등록특허 제10-0643822호에는 '지모 추출물을 함유하는 여드름 예방 및 치료용 조성물'이 개시되어 있고, 일본출원특허 제05037586호에는 '미백화장료 조성물'이 개시되어 있다. 그러나 본 발명자들의 실험에서는 일본특허출원 제05037586호의 개시 내용과는 달리 지모 추출물에서는 피부 미백 효과가 나타나지 않았다. 그러던 중 피부 미백 효과가 지모 추출물로부터 분리한 니아졸에서 우수하다는 사실을 우연히 발견하였으며 니아졸의 피부 미백 효과에 대해서는 개시된 바가 전혀 없다.

본 발명자들은 지모(Anemarrhena asphodeloides) 추출물이 피부 미백 효과를 나타내지 않음에도 불구하고 지모 추출물에서 분리한 니아졸(nyasol)이 우수한 미백 효과를 나타내는 것을 우연히 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 니아졸(nyasol)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공하는데 있다.

상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명은

하기 화학식 1로 표현되는 화합물을 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 미백용 조성물은 약학적 조성물, 미백용 피부 외용제 또는 피부 미백용 화장료 조성물일 수 있다.

또한 본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 화학식 1로 표현되는 화합물은 전체 조성물 대비 0.0001 내지 10 중량%로 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 니아졸(nyasol)을 함유하는 조성물은 우수한 피부 미백 효과를 나타내며, 또한 세포독성이 없어 부작용없이 의약품, 피부 외용제 또는 화장료에 사용할 수 있다.

이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.

미백 성분이 실제 피부에 적용 시 우수한 효과를 발휘하기 위해서는 저농도에서 고활성의 피부 미백 활성을 나타내고, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 우수하고, 미백 효과를 나타내기에 충분한 시간 동안 머무를 수 있도록 휘발성이 낮고, 조성물이나 피부 상에서 활성 성분이 안정하게 유지되고, 의약이나 화장품으로의 제형화가 용이하며, 또한 피부에 안전한 것이 바람직하다. 그러나 공지의 피부 미백 효과 개선 성분 중 상기 특성을 모두 만족시키는 성분은 흔치 않다. 예를 들어, 몇몇 피부 미백 성분들은 시험관 내 실험 시 저농도에서도 피부 미백 활성은 우수하나, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 떨어져 실제 피부에 적용하기엔 어렵다. 또 다른 피부 미백 성분들은 친수성이 낮아 의약이나 화장품으로 제형화가 어렵다. 또한, 몇몇 미백 성분들은 열, 빛, 또는 산소에 노출되었을 때 성분이 분해되거나 다른 화합물로 변형되어 피부에 적용하기 전에 이미 미백 효과가 사라지는 경우도 있다.

하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 하기 화학식 1로 표시되는 니아졸(nyasol)은 저농도에서 우수한 효과를 나타내므로, 피부 미백을 위한 의약품 또는 화장료 등의 유효성분으로 이용될 수 있다.

따라서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표현되는 화합물을 포함하는 피부 미백을 위한 약학적 조성물 또는 피부 외용제 또는 화장료 조성물을 제공한다 :

[화학식 1]

상기 화학식 1의 화합물은 지모 추출물로부터 분리할 수 있으며, 또한 합성하여 이용하거나, 시판되고 있는 화합물을 이용할 수도 있다.

본 발명에 따른 구체적인 예로, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물을 포함하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 피부 미백용 약학적 조성물은 상기 화학식 1의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함할 수 있다.

상기 화학식 1의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 유기산 또는 무기산을 이용하여 형성된 산 부가염일 수 있으며, 상기 유기산은, 예를 들면 포름산, 아세트산, 프로피온산, 락트산, 부티르산, 이소부티르산, 트리플루오로아세트산, 말산, 말레산, 말론산, 푸마르산, 숙신산, 숙신산 모노아미드, 글루탐산, 타르타르산, 옥살산, 시트르산, 글리콜산, 글루쿠론산, 아스코르브산, 벤조산, 프탈산, 살리실산, 안트라닐산, 디클로로아세트산, 아미노옥시 아세트산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 및 메탄술폰산계 염을 포함하며 무기산은 예를 들면 염산, 브롬산, 황산, 인산, 질산, 탄산 및 붕산계 염을 포함한다.　바람직하게는 염산염 또는 아세트산염 형태일 수 있으며, 보다 바람직하게는 염산염 형태일 수 있다.

상기 언급된 산 부가염은 a) 상기 화학식 1의 화합물 및 산을 직접 혼합하거나, b) 이들 중 한 가지를 용매 또는 함수 용매 중에 용해시키고 혼합시키거나, 또는 c) 화학식 1의 화합물을 용매 또는 수하 용매 중의 산에 위치시키고 이들을 혼합하는 일반적인 염 제조방법으로 제조된다.

위와는 별도로 추가적으로 염이 가능한 형태는 가바염, 가바펜틴염, 프레가발린염, 니코틴산염, 아디페이트염, 헤미말론산염, 시스테인염, 아세틸시스테인염, 메티오닌염, 아르기닌염, 라이신염, 오르니틴염, 아스파르트산염 등이 있다.

또한, 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물을 의약품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 예컨대, 공지의 피부 미백 성분을 포함할 수 있을 것이다. 추가적인 미백 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 미백 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 당업계에 공지된 주름 및 탄력 개선 성분으로서, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물, 당업계에 공지된 미백 성분으로서, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민-C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가된 피부 미백 성분은 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있을 것이며, 상기 함량 범위는 콜라겐 합성 촉진 활성, 피부 안전성, 상기 화학식 1의 화합물의 제형화 시의 용이성 등의 요건에 따라 조절될 수 있을 것이다.

또한, 본 발명의 피부 미백용 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다.

약학적으로 허용되는 담체는 완충액, 주사용 멸균수, 일반 식염수 또는 인산염 완충 식염수, 슈크로스, 히스티딘, 염 및 폴리솔베이트 등과 같은 여러 성분을 함유할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 일반 의약품 제제의 형태, 예를 들어, 임상투여 시 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다.

단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, '미백 효과'라 함은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 말한다.

본 발명의 약학적 조성물은 유효량의 상기 화학식 1의 화합물을 포함할 때 바람직한 미백 효과를 제공할 수 있다. 본 발명에 있어서, '유효량'이라 함은 멜라닌 생합성량을 감소시켜, 미백 효능을 나타낼 수 있는 화합물의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물에 포함되는 상기 화학식 1의 화합물의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 화합물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 조성물이 기미, 주근깨 등에 따른 피부과적 치료를 위한 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 화학식 1의 화합물을 포함할 수 있을 것이다. 따라서, 일일 투여량은 상기 화학식 1의 화합물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 ∼ 6 회 투여될 수 있다

본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 구체적인 예로, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물을 포함하는 피부 미백용 피부 외용제를 제공한다.

상기 화학식 1의 화합물이 피부 외용제 제형으로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제와 같은 제형을 가질 수 있다.

이에 제한되는 것은 아니나, 본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 상기 화학식 1의 화합물을 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 보다 구체적으로 0.001 중량% 내지 1 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물이 상기 화학식 1의 화합물을 0.0001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 충분한 피부 미백 효과를 기대할 수 없고, 10 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 알러지 등 원치 않는 반응이 발생하거나 피부 안전성에 문제가 있을 수 있으므로 이를 방지하기 위한 것이다.

또한 상기 화학식 1의 화합물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명에 따른 구체적인 예로, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물을 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화학식 1의 화합물을 화장품으로 사용하는 경우, 상기 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 함유하여 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등과 같은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션 등과 같은 유액, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등과 같은 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일과 같은 메이크업 제거제, 클렌징 폼, 비누, 바디 워쉬 등과 같은 세정제 등의 제형을 가질 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 상기 화학식 1의 화합물에 추가로 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 또는 향료 등의 보조제 및 담체를 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

상기 화학식 1의 화합물은 화장품으로 제품화되는 경우에 유효성분이 단기간 내에 피부에 머무르게 되는 메이크업 제거제, 세정제 등과 같은 워시-오프(wash-off) 타입의 화장품의 경우에는 비교적 높은 농도의 상기 화학식 1을 포함할 수 있을 것이다. 반면, 유효성분이 장기간 동안 피부에 머무르게 되는 화장수, 유액, 크림, 에센스 등의 리브-온(leave-on) 타입의 화장품의 경우에는 워시-오프 타입의 화장품에 비해 낮은 농도의 니아졸(nyasol)을 포함해도 무방할 것이다. 이에 제한되는 것은 아니나, 본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 상기 화학식 1의 화합물을 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 보다 구체적으로 0.001 중량% 내지 1 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물이 상기 화학식 1의 화합물을 0.0001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 충분한 미백 효과를 기대할 수 없고, 10 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 알러지 등 원치 않는 반응이 발생하거나 피부 안전성에 문제가 있을 수 있으므로 이를 방지하기 위한 것이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 지모로부터 니아졸(nyasol)의 분리 및 정제

지모(Anemarrhena asphodeloides)를 70% 에탄올수용액으로 추출하여 추출물 6.8 g제조하였다. 추출물 6.8 g을 C18(100 g, 45-60 mm)로 충진한 칼럼(2 × 25 cm)에 로딩한 후 물/메탄올을 혼합용매를 이동상으로 하여 메탄올의 비율을 순차적으로 높여가며 [0-100%, 60 min; 100%, 40 min] 컬럼크로마토그래피를 실시하여 분획물(Fr.1-16)을 얻었다. 유효성분을 함유한 분획물을 recycle LC(ODS column)로 반복적으로 컬럼크로마토그래피를 실시하여 니아졸(nyasol) 230 mg을 정제하였다.

정제한 니아졸(nyasol)의 구조 동정은 형상, UV, NMR 및 MS 스펙트럼 데이터로부터 확인할 수 있었고 하기 표 1에 나타내었다.

형상	황색의 점성있는 액상
UV λmax (MeOH)	257 nm
HRESIMS (m/z)	251.1072 [M-H]^- (calcd for C17H16O2 252.1150)
¹H NMR	δ_H (multi, J in Hz) : 6.42 (1H, d, J = 11.6 Hz, H-1), 5.63 (1H, dd, J = 10.4, 11.6 Hz, H-2), 4.42 (1H, dd, J = 6.0, 9.2 Hz, H-3), 5.97 (1H, ddd, J = 6.4, 10.4, 16.8 Hz, H-4), 5.08 (1H, m, H-5), 7.10 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2'), 6.74 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-3'), 7.00 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2"), 6.70 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-3")
¹³C NMR	δ_C: 127.5 (C-1), 130.6 (C-2), 46.5 (C-3), 141.3 (C-4), 114.3 (C-5), 128.2 (C-1'), 129.7 (C-2'), 115.2 (C-3'), 156.5 (C-4'), 133.2 (C-1"), 128.3 (C-2"), 115.4 (C-3"), 155.8 (C-4")

실험예 1 : 멜라닌(melanin) 생합성 저해능

Melanoma cell line인 B16F10 cell을 한국 세포주 은행 (Korean Cell Line Bank)으로부터 구입하였으며, 1% antibiotic (Gibco, USA)과 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco, Grand Island, USA)이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ incubator에서 배양하였으며, 4일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.

DMEM 배지로 배양된 B16F10 세포를 24 well plate에 2.0 × 10⁴ cell/well가 되게 분주하고 24시간 배양 후 시료를 농도별로 조제하여 첨가한 후 48시간 후에 인산완충액(pH 7.4)으로 세척하였다. 그 다음 멜라닌에 1N NaOH를 가하여 80℃에서 1시간 반응시킨 후 분광광도계 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 멜라닌 생합성 저해는 시료 용액의 첨가구와 무 첨가구의 흡광도 감소율로 계산하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

시료	멜라닌생합성 저해능 (흡광도 감소율%)
α-MSH(-)	-
α-MSH(+)	100
지모 70%에탄올추출물	101.2 ± 0.4
코직산 (50 μM)	102.7 ± 1.6
알부틴 (100 μM)	51.9 ± 1.4
니아졸 (6.2 μM)	92.4 ± 0.3
니아졸 (12.4 μM)	81.2 ± 0.7
니아졸 (24.8 μM)	71.5 ± 1.7
니아졸 (49.6 μM)	47.8 ± 0.8

표 2의 결과에서 볼 수 있듯이, 지모 추출물은 멜라닌 생합성 저해능을 나타내지 않는 반면, 지모의 정제물인 니아졸은 기존에 알려진 미백 물질인 코직산(kojic acid)과 알부틴 (arbutin)과 비교했을 때, B16F10 멜라노마 세포에 대하여 월등히 우수한 멜라닌 생성 억제능을 나타냈다.

실험예 2 : B16F10 멜라노마 세포에서의 티로시나제(tyrosinase) 저해활성능

B16F10 cell를 배양하여 24 well plate에 각 well 당 세포를 2.0 × 10⁴ cell/well가 되도록 분주하고 시료를 농도별로 조제한 후 처리하여 48 시간 배양한다. 이후 각 well을 PBS로 2회 세척한 다음 1% triton-x100 용액을 넣어 용해하고 e-tube에 옮겨 얼음에 옮겨 3 회 정도 냉동 해동을 반복하여 4℃, 15,000 rpm/15분 원심 분리한 상등액을 tyrosinase 활성 측정용액으로 사용하였다. 96 well plate에 이 효소액을 40 μL 넣고 기질인 L-DOPA 100 μL, PBS 60 μL를 첨가하여 37℃에서 1시간 반응 시킨뒤 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 티로시나제의 활성도는 대조군의 흡광도에 대한 백분율로 계산하였으며, 그 결과를 표 3에 나타내었다.

시료	티로시나제 저해능 (%)
α-MSH(-)	-
α-MSH(+)	100
지모 70%에탄올추출물	99.2 ± 0.8
코직산 (50 μM)	84.9 ± 1.9
알부틴 (100 μM)	98.7 ± 0.9
니아졸 (12.4 μM)	86.3 ± 0.7
니아졸 (24.8 μM)	60.8 ± 0.7
니아졸 (49.6 μM)	47.5 ± 0.8

표 3의 결과에서 볼 수 있듯이, 지모 추출물은 B16F10 멜라노마 세포 내의 티로시나제 저해능을 나타내지 않는 반면, 지모의 정제물인 니아졸은 기존에 알려진 미백 물질인 코직산(kojic acid)과 알부틴 (arbutin)과 비교했을 때, B16F10 멜라노마 세포 내의 티로시나제에 대하여 월등히 우수한 저해능을 나타냈다.

제제예 1: 약학적 제제의 제조

1. 산제의 제조

화학식 1의 화합물 0.001g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

화학식 1의 화합물 0.2㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

화학식 1의 화합물 0.2㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

4. 환의 제조

화학식 1의 화합물 0.003 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

5. 과립의 제조

화학식 1의 화합물 2 ㎎

대두 추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

제제예 2: 화장품의 제조

1. 유연화장수(스킨로션)의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.1 중량％

베타-1,3-글루칸 1.0 중량％

부틸렌글리콜 2.0 중량％

프로필렌글리콜 2.0 중량％

카르복시비닐폴리머 0.1 중량％

피이지-12 노닐페닐에테르 0.2 중량％

폴리솔베이트80 0.4 중량％

에탄올 10.0 중량％

트리에탄올아민 0.1 중량％

방부제 0.05 중량％

색소 0.05 중량％

향료 0.05 중량％

정제수 to 100 중량％

2. 영양화장수(밀크로션)의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.1 중량％

베타-1,3-글루칸 1.0 중량％

밀납 4.0 중량％

폴리솔베이트60 1.5 중량％

솔비탄세스퀴올레이트 1.5 중량％

유동파라핀 0.5 중량％

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량％

글리세린 3.0 중량％

부틸렌글리콜 3.0 중량％

프로필렌글리콜 3.0 중량％

카르복시비닐폴리머 0.1 중량％

트리에탄올아민 0.2 중량％

방부제 0.05 중량％

색소 0.05 중량％

향료 0.05 중량％

정제수 to 100 중량％

3. 영양크림의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.2 중량％

베타-1,3-글루칸 5.0 중량％

밀납 10.0 중량％

폴리솔베이트60 1.5 중량％

피이지 60 경화피마자유 2.0 중량％

솔비탄세스퀴올레이트 0.5 중량％

유동파라핀 10.0 중량％

스쿠알란 5.0 중량％

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량％

글리세린 5.0 중량％

부틸렌글리콜 3.0 중량％

프로필렌글리콜 3.0 중량％

트리에탄올아민 0.2 중량％

방부제 0.05 중량％

색소 0.05 중량％

향료 0.05 중량％

정제수 to 100 중량％

4. 마사지크림의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.1 중량％

베타-1,3-글루칸 3.0 중량％

밀납 10.0 중량％

폴리솔베이트60 1.5 중량％

피이지 60 경화피마자유 2.0 중량％

솔비탄세스퀴올레이트 0.8 중량％

유동파라핀 40.0 중량％

스쿠알란 5.0 중량％

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0 중량％

글리세린 5.0 중량％

부틸렌글리콜 3.0 중량％

프로필렌글리콜 3.0 중량％

트리에탄올아민 0.2 중량％

방부제 0.05 중량％

색소 0.05 중량％

향료 0.05 중량％

정제수 to 100 중량％

5. 팩의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.2 중량％

베타-1,3-글루칸 1.0 중량％

폴리비닐알콜 13.0 중량％

소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2 중량％

글리세린 5.0 중량％

알란토인 0.1 중량％

에탄올 6.0 중량％

피이지-12 노닐페닐에테르 0.3 중량％

폴리솔베이트 60 0.3 중량％

방부제 0.05 중량％

색소 0.05 중량％

향료 0.05 중량％

정제수 to 100 중량％

제제예 3: 피부외용제의 제조

1. 젤의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 젤을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.1 중량％

베타-1,3-글루칸 0.1 중량％

에틸렌디아민초산나트륨 0.05 중량％

글리세린 5.0 중량％

카르복시비닐폴리머 0.3 중량％

에탄올 5.0 중량％

피이지-60 경화피마자유 0.5 중량％

트리에탄올아민 0.3 중량％

방부제 0.05 중량％

색소 0.05 중량％

향료 0.05 중량％

정제수 to 100 중량％

2. 연고의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 연고를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.5 중량％

베타-1,3-글루칸 10.0 중량%

밀납 10.0 중량%

폴리솔베이트60 5.0 중량%

피이지 60 경화피마자유 2.0 중량%

솔비탄세스퀴올레이트 0.5 중량%

바셀린 5.0 중량%

유동파라핀 10.0 중량%

스쿠알란 5.0 중량%

쉐어버터 3.0 중량%

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량%

글리세린 10.0 중량%

프로필렌글리콜 10.2 중량%

트리에탄올아민 0.2 중량%

방부제 0.05 중량％

색소 0.05 중량％

향료 0.05 중량％

정제수 to 100 중량%

3. 국소투여용 약제(겔 연고제) 의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 겔 연고제를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.5 중량％

베타-1,3-글루칸 10.0 중량%

폴리아크릴산(Carbopol 940) 1.5 중량%

이소프로판올 5.0 중량%

헥실렌글리콜 25.0 중량%

트리에탄올아민 1.7 중량%

탈이온수 to 100 중량%

4. 국소 투여용 약제(패취제)의 제조

하기 조성과 같이, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 패취제를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

화학식 1의 화합물 0.5 중량%

베타-1,3-글루칸 3.0 중량%

헥실렌글리콜 20.0 중량%

디에틸아민 0.7 중량%

폴리아크릴산(Carbopol 934P) 1.0 중량%

아황산나트륨 0.1 중량%

폴리옥시에틸렌라우릴에테르(E.O=9) 1.0 중량%

폴리히드록시에틸렌세틸스테아릴에테르(Cetomacrogol 1000) 1.0 중량%

점성의 파라핀 오일 2.5 중량%

카프릴산에스테르/카프르산에스테르(Cetiol LC) 2.5 중량%

폴리에틸렌글리콜400 3.0 중량%

탈이온수 to 100 중량%

Claims

하기 화학식 1로 표현되는 화합물을 포함하는 피부 미백용 약학적 조성물.
[화학식 1]
제 1항에 있어서,
상기 화학식 1로 표현되는 화합물은 전체 조성물 대비 0.0001 내지 10 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
하기 화학식 1로 표현되는 화합물을 포함하는 미백용 피부 외용제.
[화학식 1]
제 3항에 있어서,
상기 외용제는 연고, 패취, 겔, 크림 및 분무제 제형으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 미백용 피부 외용제.
제 3항 또는 4항에 있어서,
상기 화학식 1로 표현되는 화합물은 전체 피부 외용제 대비 0.0001 내지 10 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 피부 외용제.
하기 화학식 1로 표현되는 화합물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
[화학식 1]
제 6항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 파우더, 파운데이션 및 세정제 제형으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제 6항 또는 7항에 있어서,
상기 화학식 1로 표현되는 화합물은 전체 조성물 대비 0.0001 내지 10 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.